JPH11507838A - 突然変異体を単離する方法、およびその相補的遺伝子をクローン化する新しい方法 - Google Patents
突然変異体を単離する方法、およびその相補的遺伝子をクローン化する新しい方法Info
- Publication number
- JPH11507838A JPH11507838A JP9503751A JP50375197A JPH11507838A JP H11507838 A JPH11507838 A JP H11507838A JP 9503751 A JP9503751 A JP 9503751A JP 50375197 A JP50375197 A JP 50375197A JP H11507838 A JPH11507838 A JP H11507838A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- gene
- acid sequence
- expression
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/635—Externally inducible repressor mediated regulation of gene expression, e.g. tetR inducible by tetracyline
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
- C07K14/38—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from Aspergillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4705—Regulators; Modulating activity stimulating, promoting or activating activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
- C12N15/1027—Mutagenizing nucleic acids by DNA shuffling, e.g. RSR, STEP, RPR
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/65—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression using markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
- C12N9/248—Xylanases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01003—Glucan 1,4-alpha-glucosidase (3.2.1.3), i.e. glucoamylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01015—Polygalacturonase (3.2.1.15)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01037—Xylan 1,4-beta-xylosidase (3.2.1.37)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01055—Alpha-N-arabinofuranosidase (3.2.1.55)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01099—Arabinan endo-1,5-alpha-L-arabinosidase (3.2.1.99)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Mycology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.二方向性マーカーをコードする核酸配列を含む核酸カセットであって、該 核酸カセットはさらに該二方向性マーカーをコードする核酸配列に作動可能に連 結した基本転写ユニットを含むことと、該核酸カセットは、さらに、前記基本転 写ユニットに連結した該エンハンサーまたはアクチベーター配列を含み、該誘導 性エンハンサーまたはアクチベーター配列は、その誘導に際して、該二方向性マ ーカーをコードする核酸配列が発現されるように、該誘導性エンハンサーまたは アクチベーター配列は代謝の一部の活性に関連した遺伝子に由来することと、該 誘導性エンハンサーまたはアクチベーター配列は好ましくは酵素カスケードまた はフィードバックループもしくは複数のフィードバックループに関する代謝の一 部に関連する遺伝子に由来することとを特徴とする該核酸カセット。 2.該二方向性マーカーがfacB、NiaD、AmdS、Can1、Ura 3、Ura4およびPyrA遺伝子およびその相同体よりなる群から選択される 請求項1記載の核酸カセット。 3.該二方向性マーカーがアスペルギルス・ニドゥランス(Aspergillus nidul ans )のfacB遺伝子、アスペルギルス・ニゲール(Aspergillus niger)のNi aD遺伝子、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)のNiaD遺伝子 、アスペルギルス・ニドゥランスのAmdS遺伝子、シゾサッカロミセス・ポン ベ(Schizosaccharomyces pombe)のCcaI遺伝子、サッカロミセス・セレビシ エ(Saccharomyces cerevisiae)のUra3遺伝子、サッカロミセス・ポンベ(Sac charomyces pombe)のUra4遺伝子およびアスペルギルス属、トルコデルマ(Tr ichoderma )属、ペニシリウム(Penicillium)フサリウム(Fusarium)属、サッカロ ミセス属およびクルベロミセス(Kluvveromyces)属のPyrA遺伝子よりなる群 から選択される請求項2記載の核酸カセット。 4.該誘導性エンハンサーまたはアクチベーター配列が正常に酵素カスケード の調節に関与している前記請求項1から3のいずれか1項に記載の核酸カセット 。 5.該誘導性エンハンサーまたはアクチベーター配列が以下の核酸の断片: −各々、アラビノフラノシダーゼA、アラビノフラノシダーゼBおよびエンドア ラビナーゼをコードするabfA、abfBおよびabnA遺伝子のプロモータ ーに由来する 断片、 −グルコアミラーゼをコードするglaA遺伝子に由来する断片、 −alcRおよびalcAプロモーター上のごときalcR結合性部位を含有す る断片、 −CUP1遺伝子に由来する断片、 −PHO5遺伝子に由来する断片、 −GAL1、GAL7またはGAL10遺伝子に由来する断片、 −xlnA遺伝子に由来する断片、 −pgaII遺伝子に由来する断片 のいずれかに含まれる上流活性化配列(UAS)である前記請求項1から4のい ずれか1項に記載の核酸カセット。 6.誘導性エンハンサーまたはアクチベーター配列が、以下の核酸の断片; −各々、アスペルギルス・ニゲールのアラビノフラノシダーゼA、アラビノフラ ノシダーゼBおよびエンドアラビナーゼをコードするabfA、abfBおよび abnA遺伝子のプロモーターに由来する断片、 −アスペルギルス・ニゲールのグルコアミラーゼをコードするglaA遺伝子に 由来する断片、 −アスペルギルス・ニドゥランスのalcRプロモーター上のごときalcR結 合性部位を含有する断片、 −サッカロミセス・セレビシエのCUP1遺伝子に由来する断片、 −サッカロミセス・セレビシエのPHO5遺伝子に由来する断片、 −サッカロミセス・セレビシエのGAL1、GAL7またはGAL10遺伝子に 由来する断片、 −アスペルギルス・ニドゥランスのxlnA、xlnB、xlnCまたはxln D遺伝子に由来する断片、 −アスペルギルス・ニゲールのxlnB、xlnCまたはxlnD遺伝子に由来 する断片、 −アスペルギルス・トゥービゲンシスのxlnAまたはxlnD遺伝子に由来す る断片、 −アスペルギルス・ニゲールのpgaII遺伝子に由来する断片 のいずれかに含まれる上流活性化配列(UAS)である前記請求項1から5のい ずれか1項記載の核酸カセット。 7.該誘導性エンハンサーまたはアクチベーター配列が正常に炭素代謝に関与 している前記請求項1から6のいずれか1項に記載の核酸カセット。 8.突然変異によって非突然変異体株と比較して代謝の所定の一部が増強され た、微生物の突然変異体株を調製し選択する方法であって、該方法は、 −前記請求項1から7のいずれか1項に記載の核酸カセットをホストに導入する こと(該ホストは該核酸カセットを導入する前には、該二方向性マーカーの発現 に関連する表現型を呈さない)と、 −得られた微生物を、該核酸カセットに含まれるエンハンサーまたはアクチベー ター配列が正常に活性である条件下で且つ該二方向性マーカーが発現される条件 下において、培養することと、 −前記の培養条件下で、二方向性マーカー遺伝子の発現に対応した表現型を呈す る形質転換体を選択することと、 −選択した形質転換体を公知の突然変異誘発に付すことと、 −得られた株を、該二方向性マーカーの発現に対応する表現型を有する株に許容 される条件下で且つ、該核酸カセットを含む非突然変異親では該二方向性マーカ ーが発現しない条件下において、代謝の所定の部分のための代謝可能な基質の存 在下で、培養することと、 −核酸カセットを含む非突然変異親については、該二方向性マーカーが発現しな い選択条件下において、突然変異誘発後の培養工程から得られた、該二方向性マ ーカー遺伝子の発現に対応した表現型を呈する、株を選択することと を含む該方法。 9.請求項8に記載の方法であって、 −該誘導性エンハンサーまたはアクチベーター配列が遺伝子xlnRに由来する 上流活性化配列(UAS)であり、 −代謝の所定の一部が炭素代謝のキシラン分解部分であり、 −得られた微生物を、エンハンサーまたはアクチベーター配列が正常に活性であ り且つ 二方向性マーカーが発現される条件下において培養する培養工程が、UASのイ ンデューサーの存在下で且つUASのリプレッサーおよび炭素の代謝源の不存在 下での培養であり、 −二方向性マーカー遺伝子の発現に対応した表現型を呈する形質転換体の選択が 、上記の培養条件下で行われ、 −選択された形質転換体の突然変異誘発後の培養工程が、二方向性マーカーの発 現に対応した表現型を有する株に許容される条件下で、且つ亜該核酸カセットを 含む非突然変異親においては該二方向性マーカーが発現しない条件下において、 すなわち、UASのリプレッサーの存在下で且つ炭素の代謝源の存在下(所望に よりUASのインデューサーの存在下における条件下)において行われ、 −突然変異誘発後の培養工程から得られた株の選択(該株は、二方向性マーカー 遺伝子の発現に対応する表現型を呈する)は、核酸カセットを含む非突然変異親 については二方向性マーカーが発現しない条件下で行われる方法。 10.請求項9に記載の方法であって、 −該核酸カセットが二方向性マーカーpyrAをコードする核酸配列を含み、 −該ホストは、該核酸カセットの導入の前には、二方向性マーカーの発現に関連 するpyrA+表現型を呈さず、 −得られた微生物を、エンハンサーまたはアクチベーター配列が正常に活性であ り且つ二方向性マーカーが発現される条件下で培養する培養工程が、エンハンサ ーまたはアクチベーターが正常に活性である条件、すなわち、エンハンサーまた はアクチベーターのインデューサーの存在下で且つエンハンサーまたはアクチベ ーターのリプレッサーの不存在下の条件下で、また二方向性マーカーが発現され る条件下での培養であり、 −二方向性マーカー遺伝子の発現に対応する表現型を呈する形質転換体の選択は 、上記の培養条件下で行われ、 −選択した形質転換体の突然変異誘発後における培養工程は、二方向性マーカー の発現に対応する表現型を持つ株に許容される条件下で且つ、核酸カセットを含 む非突然変異親については二方向性マーカーが発現されない条件下、すなわち、 エンハンサー若しくはアクチベーターのインデューサーの不存在下またはエンハ ンサーまたはアクチベーターのリプレッサーの存在下で且つ、代謝の所定の一部 についての代謝基質の存在下にお いて行われ、 −突然変異誘発に続く培養工程から得られた、二方向性マーカー遺伝子の発現に 対応する表現型を呈する株の選択が、核酸カセットを含む非突然変異親について 二方向性マーカーが発現されない条件下、すなわち、エンハンサー若しくはアク チベーターのインデューサーの不存在下、またはエンハンサー若しくはアクチベ ーターのリプレッサーの存在下において行なわれる方法。 11.請求項9または10の何れか一項に記載の方法であって、 −核酸カセットが二方向性マーカーpyrAをコードする核酸配列を含み、 −ホストは核酸カセットの導入の前には、二方向性マーカーの発現に関連するp yrA+表現型を呈さず、 −誘導性エンハンサーまたはアクチベーター配列が遺伝子xlnAに由来するU ASであり、 −得られた微生物を、エンハンサーまたはアクチベーター配列が正常に活性で且 つ二方向性マーカーが発現される条件下で培養する培養工程が、UASが正常に 活性である条件下、すなわち、キシロース若しくはキシランのごときUASのイ ンデューサーの存在下で且つUASのリプレッサーの不存在下、すなわち、グル コースの不存在下であって、更に二方向性マーカーが発現される条件下で培養す ることを含み、 −二方向性マーカー遺伝子の発現に対応する表現型を呈する形質転換体の選択が 前記した培養条件下で行われ、 −選択した形質転換体の突然変異誘発後における培養工程が、二方向性マーカー の発現に対応する表現型を有する株に許容される条件下で且つ、核酸カセットを 含む非突然変異親については二方向性マーカーが発現しない条件下、すなわち、 キシロースまたはキシランのごときUASのインデューサーの不存在下またはU ASのリプレッサーの存在下、すなわち、グルコースの存在下で且つ、炭素の代 謝可能源の存在下において行われ、 −突然変異誘発に続く培養工程から得られた二方向性マーカー遺伝子の発現に対 応する表現型を呈する株の選択が、核酸カセットを含む非突然変異親については 二方向性マーカーが発現されない選択条件下、すなわち、キシロース若しくはキ シランのごときUASのインデューサーの不存在下またはUASのリプレッサー の存在下、すなわちグルコ ースの存在下において行われる方法。 12.微生物の非組換え突然変異体株(該突然変異は非突然変異株と比較して 代謝の所定の一部を増強する)を調製し選択する方法であって、、該方法が、前 記請求項1から11のいずれか1項に記載の方法の工程を行い、続いて導入され た核酸カセットの核酸を公知の方法で交差させることを含む該方法。 13.微生物の突然変異株(該突然変異は非突然変異株と比較して代謝の所定 の一部を阻害する)を調製し選択する方法であって、該方法は、 −請求項1ないし7のいずれか1項に記載の核酸カセットをホストに導入するこ と(該ホストは該核酸カセットの導入前には二方向性マーカーの発現に関連する 表現型を呈さず、かつ該ホストは低下または阻害すべき代謝の所定の一部を特徴 付けるタイプの活性を呈さない)と、 −得られた微生物を、エンハンサーまたはアクチベーター配列が正常に活性な条 件下で、且つ二方向性マーカーの非発現は、得られた微生物の増殖および検出の 検出をもたらすと共に、二方向性マーカーの発現は好ましくは致死的であるかま たは増殖を強力に阻害するような条件下培養することと、 −前記した培養条件下で二方向性マーカー遺伝子の発現に対応する表現型を呈す る形質転換体を選択することと、 −選択した形質転換体を公知の突然変異誘発に付すことと、 −突然変異誘発に由来する株を、二方向性マーカーの非発現に対応した表現型を 有する株の増殖に許容され、代謝可能基質が存在し、且つ核酸カセットを含みま たは含まない非突然変異ホストと比較して代謝の所定の一部の低下または阻害さ れた活性を示す条件下で培養することと、 −代謝の所定の一部の低下したまたは阻害された活性に対応する表現型を呈する 突然変異誘発後における培養工程に由来する株を、当該活性が低下または阻害さ れるべき代謝の一部についての基質として働く基質上での増殖する際の清澄化の ゾーンの減少のように、核酸カセットを含みまたは含まない非突然変異ホストと 比較して、代謝の所定の一部の低下または阻害された活性を示す選択条件下で、 選択することとを含む該方法。 14.請求項13に記載の方法であって、 −誘導性エンハンサーまたはアクチベーター配列が遺伝子xlnAに由来する上 流活性 化配列(UAS)であり、 −代謝の所定の一部が炭素代謝のキシラン分解の一部であり、 −得られた微生物を、エンハンサーまたはアクチベーター配列が正常に活性で且 つ、二方向性マーカーが発現される条件下で、培養する培養工程が、UASのリ プレッサーの不存在下で且つ、炭素の代謝源の不存在下において、また好ましく はUASのインデューサーの不存在下において培養することを含み、 −二方向性マーカー遺伝子の発現に対応した表現型を呈する突然変異体の選択が 、上記の培養条件下で起こり、 −選択された形質転換体の突然変異誘発後における培養工程が、二方向性マーカ ーの非発現に対応した表現型を有する株の増殖および検出に許容される条件下、 二方向性マーカーの発現に対応する表現型を持つ株の増殖および検出に許容され ない条件下(すなわち、ウリジンおよびフルオロ−オロチン酸の存在下)、かつ核 酸カセットを含む非突然変異親については、炭素代謝の所定の一部の活性をもた らす条件下(すなわち、UASのインデューサーおよび代謝可能炭素源の存在下 であって、UASのリプレッサーの不存在下、例えば、インデューサー様キシラ ンまたはD−キシロースと組み合わせたD−キシロースまたは別の非抑制性炭素 源の存在下)において行われ、 −突然変異誘発に続く培養工程から得られた、炭素代謝の所定の一部の低下した または阻害された活性に対応する表現型を示す株の選択が、キシラン上での増殖 における清澄化のゾーンの減少のような、核酸カセットを含むかまたは含まない 非突然変異のホストと比較して、炭素代謝の所定の一部の活性の低下または阻害 を示す選択条件下で行われる方法。 15.請求項142記載の方法であって、 −核酸カセットが二方向性マーカーpyrAをコードする核酸配列を含み、 −ホストは、核酸カセットの導入の前には、二方向性マーカーの発現に関連する pyrA+表現型を呈さず、 −得られた微生物を、エンハンサーまたはアクチベーター配列が正常に活性で且 つ二方向性マーカーpyrAが発現される条件下で培養する培養工程が、エンハ ンサー若しくはアクチベーターのインデューサーの存在下で且つ、エンハンサー またはアクチベーターのリプレッサーの不存在下において、更に二方向性マーカ ーpyrAが発現される条 件下で培養することを含み、 −二方向性マーカー遺伝子pyrAの発現に対応した表現型を呈する形質転換体 の選択が、前記培養条件下で起こり、 −選択した形質転換体の突然変異誘発後の培養工程が、二方向性マーカー、すな わち、pvrA-表現型の非発現に対応した表現型を有する株の増殖および検出 に許容される条件下、pyrA+表現型を持つ株の増殖および検出につき許容さ れない条件下(このような表現型は、二方向性マーカーの発現に対応する、すな わち、このような条件はウリジンおよびフルオロ−オチロン酸の存在を含む)、 かつ核酸カセットを含む非突然変異親においては、代謝の所定の一部の活性をも たらす条件下(すなわち、エンハンサーまたはアクチベーターのインデューサー ならびに代謝可能基質の存在下であって、アクチベーターまたはエンハンサーの リプレッサーまたはインデューサーと組み合わせた別の非抑制基質の不存在下) において行われる方法。 16.請求項14または15の何れか1項に記載の方法であって、 −核酸カセットが二方向性マーカーpyrAをコードする核酸配列よりなり、 −ホストが、核酸カセットの導入の前には二方向性マーカーの発現に関連するp yrA+表現型を呈さず、 −誘導性エンハンサーまたはアクチベーター配列が遺伝子xlnAに由来するU ASであり、 −得られた微生物を、エンハンサーまたはアクチベーター配列が正常に活性且つ 二方向性マーカーpyrAが発現される条件下で培養する培養工程が、UASが 正常に活性である条件下(すなわち、キシロースまたはキシランのごときUAS のインデューサーの存在下であって、UASのリプレッサーの不存在下、すなわ ち、グロコースの不存在下)で、且つ二方向性マーカーpyrAが発現される条 件下において培養することを含み、 −二方向性マーカー遺伝子pyrAの発現に対応する表現型を呈する形質転換の 選択が、前記した培養条件下で行われ、 −選択した形質転換体の突然変異誘発後における培養工程が、二方向性マーカー 、非発現に対応した表現型(すなわちpyrA−表現型)を有する株の増殖およ び検出に許容される条件下、二方向性マーカーの発現に対応した表現型のような 、pyrA+表現型 を有する株の増殖および検出に許容されない条件下(すなわち、このような条件 はウリジンおよびフルオロ−オロチン酸の存在を含む)、且つ核酸カセットを含 む非突然変異親においては、炭素代謝の所定の一部の活性をもたらす条件下(す なわちUASのインデューサーおよび代謝可能炭素源の存在下であって、UAS のリプレッサーの不存在下、例えば、D−シキロースまたはインデューサー様キ シランと組み合わせた別の非発現炭素源の存在下)において行われ、 −突然変異誘発後の培養工程から得られた炭素代謝の所定の一部の低下または阻 害された活性に対応した発現型を呈する株の選択が、核酸カセットを含むまたは 含まない非突然変異ホストと比較して、キシラン上での増殖に際しての清澄化の ゾーンの低下のごとき炭素代謝の所定の一部の低下したまたは阻害された活性を 示す選択条件下で行われる方法。 17.微生物の非組換え突然変異株を調製し選択する方法であって、該突然変 異が非突然変異株と比較して代謝の所定の一部を阻害し、該方法が、請求項13 −16いずれか1項記載の方法の工程を行い、引き続いて導入された核酸カセッ トの核酸を自体公知の方法で交差することを含む該方法。 18.−自体公知の方法で相補性テストを行い、ここに、核酸カセット配列を 含まない非突然変異親株のゲノムの一部での、請求項13−16いずれか1項記 載により得られたホストの形質転換が、自体公知の方法で起こり、続いて −二方向性マーカーの発現をベースとしてアクチベーターの陽性形質転換体を選 択し、次いで −アクチベーター陽性形質転換体からの核酸を自体公知の方法にて請求項13− 16いずれか1項記載の方法で得られた突然変異体の核酸とを比較し、次いで、 アクチベーター陽性形質転換体に存在し、かつ自体公知の方法によりアクチベー ター陰性突然変異体において突然変異した核酸を同定し単離する ことよりなる誘導性エンハンサーまたはアクチベーターの活性化レギュレーター の同一性および核酸配列を測定する方法。 19.核酸カセットの導入に先立つホストが二方向性マーカーをコードする核 酸配列に少なくとも一部分対応する核酸よりなり、該対応が核酸カセットに含ま れる二方向性マーカーをコードする核酸の染色体において相同組換えを可能とす るのに十分な程度で ある請求項8−18いずれか1項記載の方法。 20.1)誘導性エンハンサーまたはアクチベーター配列の活性化レギュレー ターの標的遺伝子に正常に関連するプロモーター、 2)さらなるプロモーターに作動可能に連結したレギュレーターをコードする 核酸配列、 3)同種または異種蛋白質またはペプチドをコードする同種または異種配列よ りなり、 該プロモーター(1)は同種または異種暗号配列に作動可能に連結しており、 かかる活性化レギュレーターは代謝に関与し、より具体的にはかかる活性化レギ ュレーターは酵素カスケードまたはフィードバックループまたは複数フィードバ ックループを持つ代謝の一部に関与しており、かつかかる標的遺伝子はレギュレ ーター遺伝子の発現産物に対する結合性部位であることを特徴とする組合せ核酸 カセット。 21.レギュレーターをコードする核酸配列に作動可能に連結したさらなるプ ロモーターが、レギュレーターをコードする核酸配列とは負に関連するプロモー ターである請求項20記載の組合せ核酸カセット。 22.レギュレーターをコードする核酸配列がキシラン分解レギュレーターを コードし、好ましくは、核酸配列がxlnRをコードする請求項20または21 記載の組合せ核酸カセット。 23.レギュレーターをコードする核酸配列を請求項41−46いずれか1項 記載の核酸配列であるか、あるいは請求項47−56いずれか1項記載のポリペ プチドまたは蛋白質をコードする核酸配列である請求項21−22いずれか1項 記載の組合せ核酸カセット。 24.該プロモーター(1)が標的遺伝子xlnA、xlnB、xlnC、x lnDおよびaxeAに関連するプロモーターから選択される請求項20−23 いずれか1項記載の組合せ核酸カセット。 25.該プロモーター(1)が標的遺伝子xlnDに関連するプロモーターで ある請求項20−24いずれか1項記載の組合せ核酸カセット。 26.同種または異種配列が酵素をコードする請求項20−25いずれか1項 記載の組合せ核酸カセット。 27.同種または異種配列がキシラナーゼ、グルカナーゼ、α−グルクロニタ ーゼ、リパーゼ、エステラーゼ、フェルラ酸エステラーゼ、プロテアーゼまたは ヘキソースオキシダーゼのごときオキシドレダクターゼをコードする請求項20 −26いずれか1項記載の組合せ核酸カセット。 28.請求項20−27いずれか1項記載の組合せ核酸カセットを含むベクタ ー。 29.請求項20−27いずれか1項記載の組合せ核酸カセットおよび/また は請求項28記載のベクターを含むホスト細胞。 30.請求項20記載の成分を含むホスト細胞であって、該ホスト細胞が天然 にまたは組換えDNA技術によりレギュレーターの標的遺伝子を含み、但し、標 的遺伝子およびレギュレーターがホスト細胞に対して天然のものである場合、レ ギュレーターが複数コピーで存在する該ホスト細胞。 31.請求項20で定義したレギュレーターをコードする核酸配列または請求 項41−46いずれか1項記載の核酸配列の複数コピーを含むホスト細胞。 32.請求項20で定義したレギュレーターをコードする核酸配列または請求 項41−46いずれか1項記載の核酸配列および請求項20で定義したプロモー ター(1)を含み、該プロモーターが標的遺伝子xlnDに関連する請求項29 −31いずれか1項記載のホスト細胞。 33.微生物および植物細胞よりなる群から選択される請求項29−32いず れか1項記載のホスト細胞。 34.真菌細胞、好ましくは糸状菌細胞から選択される請求項29−33いず れか1項記載のホスト細胞。 35.該ホスト細胞が属アスペルギルス(Aspergillus)、トリコデルマ(Tricho derma )、ペニシリウム(Penicillium)およびフサリウム(Fusarium)から選択され る請求項29−24いずれか1項記載のホスト細胞。 36.該ホスト細胞がアスペルギルス・ニゲール(Aspergillus niger)、アス ペルギルス・テュービゲネシス(Aspergillus tubigenesis)、アスペルギルス・ アクレトゥス(Aspergillus aculeatus)、アスペルギルス・アワモリ(Aspergillu s awamori )、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)、アスペルギルス・ ニドゥランス(Aspergillus nidulans)、アスペルギルス・フェティダス(Aspergi llus foetidus )、アスペルギルス ・テレウス(Aspergillus terreus)、アスペルギルス・シドウィー(Aspergillus sydowii )、アスペルギルス・カワチィー(Aspergillus kawachii)、アスペルギル ス・カルボナリウス(Aspergillus carbonarius)およびアスペルギルス・ヤポニ カス(Aspergillus japonicas)から選択される株である請求項29−35いずれ か1項記載のホスト細胞。 37.該ホスト細胞がサッカロミセス(Saccharomyces)、クルベロミセス(Kl uvveromyces )およびラクトバチルス(Lactobacillus)から選択される属に属する 株である請求項29−35いずれか1項記載のホスト細胞。 38.該ホスト細胞がサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisia e )またはサッカロミセス・ポンベ(Saccharomyces pombe)から選択される株であ る請求項37記載のホスト細胞。 39.該標的遺伝子がホスト細胞に対して内因性のものである請求項29−3 8いずれか1項記載のホスト細胞。 40.該標的細胞が複数コピーで存在する請求項29−39いずれか1項記載 のホスト細胞。 41.配列番号9の暗号核酸配列にわる発現産物xlnRをコードする核酸配 列xlnRおよびその同等核酸配列。 42.請求項41記載の核酸配列であって、該配列が実施例に定義した特異的 最小ストリンジェンシィー条件下で核酸配列番号9に由来するプライマーまたは プローブにハイブリダイズでき、該プライマーまたはプローブが非zincフィ ンガー結合領域に由来し、かつ該プライマーまたはプローブが長さが少なくとも 20個のヌクレオチドである該核酸配列。 43.請求項41または42記載の核酸配列であって、該配列が実施例で定義 した特異的最小ストリンジェンシィー条件下で暗号核酸配列番号9にハイブリダ イズできる該核酸配列。 44.配列番号9によるxlnRの、あるいは配列番号9のxlnRをードす る核酸配列によってコードされたアミノ酸配列と80%ないし100%同一性を 呈する発現産物をコードする核酸配列。 45.配列番号9のアミノ酸配列に関する請求項41−44いずれか1項記載 の核酸配列。 46.該配列が、配列番号9の暗号核酸配列と比較して、配列の1以上の断片 においで欠失および/または置換を含む請求項41−45いずれか1項記載の核 酸配列。 47.請求項41−46による核酸配列によってコードされたアミノ酸配列ま たはその同等体。 48.該アミノ酸配列が配列番号9のアミノ酸配列またはその同等体である請 求項47記載のアミノ酸配列。 49.該同等体の同一性が、配列番号9のアミノ酸配列と比較して、80−1 00%、好ましくは85−100%、より好ましくは90−100%、最も好ま しくは95−100%である請求項47または48記載のアミノ酸配列。 50.同等体発現産物がDNA結合性活性を有すべきものであり、好ましくは 、かかるDNA結合性活性は、配列番号9で供されるアミノ酸配列を持つ発現産 物が標的遺伝子の核酸配列に結合するのと同等またはそれ以上に、発現産物が標 的遺伝子の核酸配列に結合するべきものである請求項47−49いずれか1項記 載のアミノ酸配列。 51.該配列が配列番号9のアミノ酸配列と比較して配列の1以上の断片にお いて欠失および/または置換を含む請求項47−50いずれか1項記載のアミノ 酸配列。 52.zincフィンガー結合性領域からのアミノ酸配列の少なくともC末端 側の半分を含む請求項47−51いずれか1項記載のアミノ酸配列。 53.該アミノ酸配列がZnフィンガー結合性領域に対応する断片を含む請求 項47−52いずれか1項記載のアミノ酸配列。 54.該アミノ酸配列がRRRLWWモチーフに対応するアミノ酸配列を含む 請求項47−53いずれか1項記載のアミノ酸配列。 55.配列番号9における1110ないし1260位におけるヌクレオチドに よってコードされたアミノ酸配列に対応するzincフィンガー領域に突然変異 が存在しない請求項47−54いずれか1項記載のアミノ酸配列。 56.配列番号9のアミノ酸配列に存在するモチーフRRRLWWに対応する RRRLWWモチーフに突然変異が存在しない請求項47−55いずれか1項記 載のアミノ酸配列。 57.レギュレーターが発現されないか、あるいはレギュレーターとして不活 性であるような、請求項20で定義されたレギュレーターをコードする配列が存 在しないかそ の突然変異を含む、いわわるノックアウトホスト細胞と呼ばれる突然変異ホスト 細胞。 58.キシラン分解副活性を含まず得ることができる蛋白質またはペプチドを コードする同種または異種配列をさらに含む請求項57記載の突然変異ホスト細 胞。 59.自体公知の方法で請求項57または58記載のノックアウト突然変異体 を培養し、その結果としての異種または同種蛋白質を得ることを特徴とするキシ ラン分解副活性の無い異種または同種蛋白質またはポリペプチドを生産する方法 。 60.蛋白質またはペプチドをコードする核酸配列から蛋白質またはペプチド を生産するための自体公知の方法による同種または異種蛋白質またはペプチドの 生産のための請求項20−27いずれか1項記載の組合せ核酸カセットの使用。 61.請求項41−46いずれか1項記載の核酸配列によってコードされる誘 導性エンハンサーまたはアクチベーター配列の活性化レギュレーターの標的遺伝 子と正常に関連するプロモーターに作動可能に連結した標的遺伝子を含むホスト 細胞において核酸配列を発現させることによる標的遺伝子の過剰生産のための請 求項41−46いずれか1項記載の核酸配列の使用であって、標的遺伝子および 請求項41−46いずれか1項記載の核酸配列がホスト細胞に対して天然のもの である場合、請求項41−46いずれか1項記載の配列が野生型ホスト細胞と比 較して複数コピーで存在する該使用。 62.蛋白質またはペプチドをコードする核酸配列から蛋白質またはペプチド を生産するための自体公知の方法による同種または異種蛋白質またはペプチドの 生産のための請求項29−40いずれか1項記載のホスト細胞の使用。 63.プライマーまたはプローブとして使用されるべき核酸断片であって、該 断片が核酸配列番号9であり、該プライマーまたはプローブが非zincフィン ガー結合性領域に由来し、該プライマーまたはプローブが長さが少なくとも20 個のヌクレオチドである該核酸断片。 64.該断片がzincフィンガー結合性領域からの配列番号9のC−末端側 暗号の半分に由来する請求項63記載の核酸断片。 65.配列番号9の同等配列を検出するおよび/または単離するためのキット における請求項63または64記載の2以上の断片の組合せ。 66.1の断片がzincフィンガードメインを形成する核酸配列の一部を含 まない請求項65記載の組合せ。 67.増大したDNA結合を呈するzincフィンガー結合性ドメインにおい て突然変異を持つ配列番号9によるアミノ酸配列の突然変異。 68.減少したDNA結合を呈する突然変異を持つ配列番号9によるアミノ酸 配列の突然変異。 69.zincフィンガー結合性ドメインにおいて突然変異を持つ配列番号9 によるアミノ酸配列の突然変異であって、該突然変異が減少したDNA結合を呈 する該突然変異。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP95201707 | 1995-06-23 | ||
EP95201707.7 | 1995-06-23 | ||
EP95202346 | 1995-08-30 | ||
EP95202346.3 | 1995-08-30 | ||
PCT/NL1996/000259 WO1997000962A1 (en) | 1995-06-23 | 1996-06-24 | A novel method to isolate mutants and to clone the complementing gene |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007097402A Division JP4339901B2 (ja) | 1995-06-23 | 2007-04-03 | 突然変異体を単離する方法、およびその相補的遺伝子をクローン化する新しい方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH11507838A true JPH11507838A (ja) | 1999-07-13 |
JP4339400B2 JP4339400B2 (ja) | 2009-10-07 |
Family
ID=26139424
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP50375197A Expired - Lifetime JP4339400B2 (ja) | 1995-06-23 | 1996-06-24 | 突然変異体を単離する方法、およびその相補的遺伝子をクローン化する新しい方法 |
JP2007097402A Expired - Lifetime JP4339901B2 (ja) | 1995-06-23 | 2007-04-03 | 突然変異体を単離する方法、およびその相補的遺伝子をクローン化する新しい方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007097402A Expired - Lifetime JP4339901B2 (ja) | 1995-06-23 | 2007-04-03 | 突然変異体を単離する方法、およびその相補的遺伝子をクローン化する新しい方法 |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US6177261B1 (ja) |
EP (2) | EP1514936B1 (ja) |
JP (2) | JP4339400B2 (ja) |
CN (2) | CN1192106C (ja) |
AT (2) | ATE429499T1 (ja) |
AU (1) | AU714511B2 (ja) |
BR (1) | BR9608910A (ja) |
CA (2) | CA2672126C (ja) |
DE (2) | DE69637359T2 (ja) |
DK (2) | DK1514936T3 (ja) |
NZ (1) | NZ311181A (ja) |
PL (2) | PL184463B1 (ja) |
PT (1) | PT833922E (ja) |
WO (1) | WO1997000962A1 (ja) |
Families Citing this family (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ311181A (en) * | 1995-06-23 | 2000-02-28 | Danisco Ingredients As | Obtaining metabolic mutants involving random mutations and specific selection not having recombinant DNA and a nucleic acid cassette encoding a bidirectional marker, and inducible enhancer and a basic transcription unit |
US6391583B1 (en) * | 1998-12-18 | 2002-05-21 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method of producing antihypercholesterolemic agents |
AU2001278496A1 (en) * | 2000-07-21 | 2002-02-05 | Syngenta Participations Ag | Zinc finger domain recognition code and uses thereof |
KR100428998B1 (ko) * | 2001-09-10 | 2004-04-28 | 한국과학기술원 | 모체 단백질과는 크기와 서열이 다른 단백질의 변이집단을생산하는 방법 |
WO2006036678A2 (en) * | 2004-09-22 | 2006-04-06 | Bioworks, Inc. | Transgenic strains of trichoderma and their use in biocontrol |
GB0424940D0 (en) | 2004-11-11 | 2004-12-15 | Danisco | Transcription factors |
KR100801960B1 (ko) | 2006-11-14 | 2008-02-12 | 건국대학교 산학협력단 | mRNA 결합 단백질 XaiF, 이를 부착하는 유전자구조물 그리고 이들을 이용한 외래 유전자의 과발현 방법 |
CN102292438A (zh) * | 2008-11-03 | 2011-12-21 | 艾欧基能源公司 | 用于生产纤维素酶的宿主和发酵方法 |
US9012186B2 (en) | 2009-04-27 | 2015-04-21 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Hemicellulose-degrading enzymes |
KR101814588B1 (ko) * | 2009-12-05 | 2018-01-04 | 아마노 엔자임 가부시키가이샤 | 변이 효소 및 그 용도 |
US8624082B2 (en) | 2010-08-30 | 2014-01-07 | Novozymes A/S | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
US9303074B2 (en) | 2010-08-30 | 2016-04-05 | Novoyzmes A/S | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and polynucleotides encoding same |
WO2012030811A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having cellobiohydrolase activity and polynucleotides encoding same |
US8629325B2 (en) | 2010-08-30 | 2014-01-14 | Novozymes A/S | Polypeptides having beta-glucosidase activity and polynucleotides encoding same |
WO2012030844A1 (en) | 2010-08-30 | 2012-03-08 | Novozymes A/S | Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same |
WO2013159710A1 (zh) * | 2012-04-25 | 2013-10-31 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 一种提高拜氏梭菌木糖消耗率的方法 |
EP3438263A4 (en) | 2016-03-31 | 2019-09-11 | Toray Industries, Inc. | TRICKODERMAPILT WITH MUTANT BXL1 GENE AND PROCESS FOR PREPARING XYLOOLIGOSACCHARIDE AND GLUCOSE THEREWITH |
CN108315313A (zh) * | 2018-03-21 | 2018-07-24 | 中国农业科学院饲料研究所 | 多聚半乳糖醛酸酶及其突变体TePG28b_N85E/S86W和应用 |
CN112673016A (zh) * | 2018-08-31 | 2021-04-16 | 基因组股份公司 | 用于改善的木糖利用或改善的葡萄糖和木糖共利用的xylr突变体 |
CN116355881B (zh) * | 2023-03-10 | 2024-02-23 | 云南师范大学 | 酸耐受性提高的β-木糖苷酶突变体D395G及其应用 |
CN116515841B (zh) * | 2023-06-21 | 2023-09-05 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种真菌来源的启动子元件及其应用 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5028530A (en) * | 1985-01-28 | 1991-07-02 | Xoma Corporation | AraB promoters and method of producing polypeptides, including cecropins, by microbiological techniques |
DK160947C (da) * | 1986-04-17 | 1991-10-21 | Novo Industri As | Gen-udtrykkelsessystem |
US5264350A (en) | 1986-08-18 | 1993-11-23 | Institut Pasteur | DNA sequence performing a function which is expressed in an over-production of extracellular proteins by various strains of bacillus, and vectors containing this sequence |
GB8807939D0 (en) * | 1988-04-05 | 1988-05-05 | Univ Brunel | Regulatory cassette for expression vectors |
US5650298A (en) | 1993-06-14 | 1997-07-22 | Basf Aktiengesellschaft | Tight control of gene expression in eucaryotic cells by tetracycline-responsive promoters |
US5464758A (en) * | 1993-06-14 | 1995-11-07 | Gossen; Manfred | Tight control of gene expression in eucaryotic cells by tetracycline-responsive promoters |
ES2198410T3 (es) * | 1993-07-23 | 2004-02-01 | Dsm Ip Assets B.V. | Cepas recombinantes de hongos filamentosos libres de gen marcador de seleccion: un metodo para obtener dichas cepas y su utilizacion. |
NZ311181A (en) | 1995-06-23 | 2000-02-28 | Danisco Ingredients As | Obtaining metabolic mutants involving random mutations and specific selection not having recombinant DNA and a nucleic acid cassette encoding a bidirectional marker, and inducible enhancer and a basic transcription unit |
-
1996
- 1996-06-24 NZ NZ311181A patent/NZ311181A/en not_active IP Right Cessation
- 1996-06-24 US US08/981,729 patent/US6177261B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-24 WO PCT/NL1996/000259 patent/WO1997000962A1/en active Application Filing
- 1996-06-24 AT AT96921151T patent/ATE429499T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-06-24 PL PL96324186A patent/PL184463B1/pl unknown
- 1996-06-24 BR BR9608910A patent/BR9608910A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-06-24 AU AU62443/96A patent/AU714511B2/en not_active Expired
- 1996-06-24 DK DK04028288T patent/DK1514936T3/da active
- 1996-06-24 DK DK96921151T patent/DK0833922T3/da active
- 1996-06-24 AT AT04028288T patent/ATE380242T1/de active
- 1996-06-24 PL PL96351185A patent/PL185052B1/pl unknown
- 1996-06-24 CA CA2672126A patent/CA2672126C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-24 EP EP04028288A patent/EP1514936B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-24 CN CN96196200.3A patent/CN1192106C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-24 CA CA2224626A patent/CA2224626C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-24 PT PT96921151T patent/PT833922E/pt unknown
- 1996-06-24 DE DE69637359T patent/DE69637359T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-24 JP JP50375197A patent/JP4339400B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-24 CN CN200410012059.9A patent/CN1661014B/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-24 DE DE69637908T patent/DE69637908D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-24 EP EP96921151A patent/EP0833922B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-07-11 US US09/613,811 patent/US6599745B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-04-22 US US10/419,969 patent/US8461320B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-04-03 JP JP2007097402A patent/JP4339901B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4339901B2 (ja) | 突然変異体を単離する方法、およびその相補的遺伝子をクローン化する新しい方法 | |
Santos et al. | CHS5, a gene involved in chitin synthesis and mating in Saccharomyces cerevisiae | |
Rollins et al. | pH signaling in Sclerotinia sclerotiorum: identification of a pacC/RIM1 homolog | |
Van Peij et al. | Isolation and analysis of xlnR, encoding a transcriptional activator co‐ordinating xylanolytic expression in Aspergillus niger | |
EP2631295A2 (en) | A recombinant host cell for the production of a compound of interest | |
Miyara et al. | Multi‐factor regulation of pectate lyase secretion by Colletotrichum gloeosporioides pathogenic on avocado fruits | |
JPH10500024A (ja) | 無毒、非毒素原性、非病原性の発現系、並びにその中で利用するためのプロモーター及びターミネーター | |
JP2003526374A (ja) | ポリペプチドの生成方法において有用な菌類転写活性化因子 | |
Arnaise et al. | pah1: a homeobox gene involved in hyphal morphology and microconidiogenesis in the filamentous ascomycete Podospora anserina | |
JP2002515253A (ja) | トリコテセン−欠失糸状菌変異体細胞において異種ポリベプチドを生成するための方法 | |
JP2002526112A (ja) | ポリペプチドの生成方法において有用な菌類転写活性化因子 | |
JPH11507837A (ja) | 新規β−キシロシダーゼ、それをコードするヌクレオチド配列、およびそれらの使用 | |
KR20190117511A (ko) | 환형 펩티드 화합물 합성 관련 유전자, 이를 이용한 환형 펩티드 화합물의 제조방법 및 그것을 가지는 형질전환체 | |
Bussink et al. | Characterization of polygalacturonase-overproducing Aspergillus niger transformants | |
JP2002535990A (ja) | 真菌細胞においてポリペプチドを生産する方法 | |
JPH11512930A (ja) | グルコース抑制の修飾法 | |
DK2981546T3 (en) | Filamentous fungal cell with inactivated component of the selective autophagy signaling pathway and method of use thereof | |
US7307158B2 (en) | Selection marker gene | |
AU747607B2 (en) | A nucleic acid cassette & method to isolate mutants and to clone the complementing gene | |
Goldman et al. | Filamentous fungi | |
Wang | Cloning and functional characterization of the WdSTUA and WdPACC genes of Wangiella dermatitidis | |
JPH03262486A (ja) | ベクターによる糸状菌類の形質転換方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20061003 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20061219 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20070219 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070403 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20070925 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20071212 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20080128 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080325 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20090602 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20090702 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120710 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120710 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130710 Year of fee payment: 4 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |