JPH1132693A - トウモロコシ蛋白質の酵素分解物およびその製造方法 - Google Patents
トウモロコシ蛋白質の酵素分解物およびその製造方法Info
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- JPH1132693A JPH1132693A JP9211215A JP21121597A JPH1132693A JP H1132693 A JPH1132693 A JP H1132693A JP 9211215 A JP9211215 A JP 9211215A JP 21121597 A JP21121597 A JP 21121597A JP H1132693 A JPH1132693 A JP H1132693A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 高血圧予防効果を有し、かつ、脳卒中に対し
ても十分な予防効果を有し、回収率が高いペプチドを提
供する。 【解決手段】 トウモロコシ蛋白質ゼインを、酸エタノ
ール溶液を用いて脱アミド処理して溶解性を高め、プロ
テアーゼにより限定分解すると、高回収率で酵素分解物
が得られ、高血圧予防効果に加え脳卒中予防効果が認め
られた。
ても十分な予防効果を有し、回収率が高いペプチドを提
供する。 【解決手段】 トウモロコシ蛋白質ゼインを、酸エタノ
ール溶液を用いて脱アミド処理して溶解性を高め、プロ
テアーゼにより限定分解すると、高回収率で酵素分解物
が得られ、高血圧予防効果に加え脳卒中予防効果が認め
られた。
Description
【０００１】
【０００２】本発明は、食品および健康食品に利用でき
るトウモロコシ蛋白質の蛋白質分解酵素による分解物お
よびその製造方法に関し、詳細には高血圧症および脳卒
中予防効果を有するトウモロコシ蛋白質分解物およびそ
の製造方法に関する。
るトウモロコシ蛋白質の蛋白質分解酵素による分解物お
よびその製造方法に関し、詳細には高血圧症および脳卒
中予防効果を有するトウモロコシ蛋白質分解物およびそ
の製造方法に関する。
【０００３】
【０００４】動物性および植物性蛋白質を分解して得ら
れるペプチドには、高血圧予防効果のあることが多数報
告されている。トウモロコシ蛋白質であるゼインの酵素
分解物にもアンギオテンシン１変換酵素を阻害し、血圧
上昇を抑制する効果があることがよく知られている。ゼ
インは、疎水性アミノ酸が豊富な蛋白質であり、従って
中性付近の水には溶解し難く、含水エタノールもしくは
酸性およびアルカリ性の水溶液にのみ溶解する。このた
め、従来、ゼインから高血圧予防ペプチドを得るために
は、ゼインを水に懸濁ないし分散して酸性もしくはアル
カリ性条件下で加熱処理もしくは酵素処理することによ
っていたが、懸濁や分散状態での化学反応や酵素反応で
は、ゼインに対するペプチドの回収率が低く、よって製
造コストも高いものとなっていた。そこで、特開平８−
２４５６９４号公報に記載されているように、ゼインを
尿素−アンモニア溶液に溶解して変性させ酵素分解を受
けやすい状態にしてゲルろ過により尿素除去したのち酵
素分解することにより、高血圧予防ペプチドの回収率を
上げ得る方法が提案されている。しかし、該特開平８−
２４５６９４号公報に記載されている方法により得られ
たペプチドでは、高血圧症の患者が最も恐れている脳卒
中に対する予防効果が低く十分でない。脳卒中は、発症
すると半身不随もしくは死亡することも多く、三大生活
習慣病（成人病）のひとつとされている。従って、高血
圧予防効果を有し、かつ、脳卒中に対しても十分な予防
効果を有し、回収率が高いペプチドを得ることが望まれ
ていた。
れるペプチドには、高血圧予防効果のあることが多数報
告されている。トウモロコシ蛋白質であるゼインの酵素
分解物にもアンギオテンシン１変換酵素を阻害し、血圧
上昇を抑制する効果があることがよく知られている。ゼ
インは、疎水性アミノ酸が豊富な蛋白質であり、従って
中性付近の水には溶解し難く、含水エタノールもしくは
酸性およびアルカリ性の水溶液にのみ溶解する。このた
め、従来、ゼインから高血圧予防ペプチドを得るために
は、ゼインを水に懸濁ないし分散して酸性もしくはアル
カリ性条件下で加熱処理もしくは酵素処理することによ
っていたが、懸濁や分散状態での化学反応や酵素反応で
は、ゼインに対するペプチドの回収率が低く、よって製
造コストも高いものとなっていた。そこで、特開平８−
２４５６９４号公報に記載されているように、ゼインを
尿素−アンモニア溶液に溶解して変性させ酵素分解を受
けやすい状態にしてゲルろ過により尿素除去したのち酵
素分解することにより、高血圧予防ペプチドの回収率を
上げ得る方法が提案されている。しかし、該特開平８−
２４５６９４号公報に記載されている方法により得られ
たペプチドでは、高血圧症の患者が最も恐れている脳卒
中に対する予防効果が低く十分でない。脳卒中は、発症
すると半身不随もしくは死亡することも多く、三大生活
習慣病（成人病）のひとつとされている。従って、高血
圧予防効果を有し、かつ、脳卒中に対しても十分な予防
効果を有し、回収率が高いペプチドを得ることが望まれ
ていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
【０００６】本発明者らは、これら問題点を解決するた
めに鋭意検討した結果、食品や健康食品に利用可能な高
血圧予防および脳卒中予防効果も合わせもつペプチドを
高回収率で得られる方法を見いだした。
めに鋭意検討した結果、食品や健康食品に利用可能な高
血圧予防および脳卒中予防効果も合わせもつペプチドを
高回収率で得られる方法を見いだした。
【０００７】即ち、本発明の課題を解決するための手段
は、下記のとおりである。第１に、トウモロコシ蛋白質
ゼインを、酸エタノール溶液を用いて脱アミド処理して
溶解性を高め、プロテアーゼにより限定分解して得られ
る、高血圧症および脳卒中予防効果を有する、トウモロ
コシ蛋白質の酵素分解物。第２に、トウモロコシ蛋白質
ゼインを、酸エタノール溶液を用いて脱アミド処理して
溶解性を高め、プロテアーゼにより限定分解することで
製造する、高血圧症および脳卒中予防効果を有する、ト
ウモロコシ蛋白質の酵素分解物の製造方法。
は、下記のとおりである。第１に、トウモロコシ蛋白質
ゼインを、酸エタノール溶液を用いて脱アミド処理して
溶解性を高め、プロテアーゼにより限定分解して得られ
る、高血圧症および脳卒中予防効果を有する、トウモロ
コシ蛋白質の酵素分解物。第２に、トウモロコシ蛋白質
ゼインを、酸エタノール溶液を用いて脱アミド処理して
溶解性を高め、プロテアーゼにより限定分解することで
製造する、高血圧症および脳卒中予防効果を有する、ト
ウモロコシ蛋白質の酵素分解物の製造方法。
【０００８】
【０００９】次に、本発明を詳細に説明する。
【００１０】本発明に使用するトウモロコシ蛋白質は、
市販の試薬ゼインを用いてもよいが、コーンスターチ製
造工程副産物として得られるコーングルテンミールから
含水エタノールにより抽出して得たゼインを使用するこ
ともできる。トウモロコシ蛋白質ゼインを酸エタノール
溶液で脱アミド処理する場合には、ゼインもしくは脱脂
ゼイン１Ｋｇに対してエタノールを５〜８０リットル加
えて分散させ、更に水を１０リットル加えて完全に溶解
するこにより実施するが、この場合エタノール量は１５
〜２５リットルが好ましい。トウモロコシ蛋白質を含水
エタノールで完全に溶解した後、酸で脱アミド処理する
が、終濃度で０．０１〜３．２Ｖ／Ｖ％の塩酸を用いる
ことが好ましく、０．２〜０．７Ｖ／Ｖ％の塩酸濃度の
ものがより好ましい。脱アミド処理の温度条件は、４０
〜８０℃、好ましくは５０〜６０℃とする。また、処理
時間は、４〜２４時間、好ましくは４〜６時間とする。
脱アミド処理を終了するには、酸で脱アミド処理した溶
液をイオン交換樹脂を用いて脱酸処理したのち噴霧乾燥
してもよいが、酸で脱アミド処理した溶液を水に投入し
てエタノールおよび酸濃度を下げて行うこともできる。
水への投入は、脱アミド処理後すぐにでもよいが、好ま
しくは室温に冷却したのち、脱アミド処理液の２〜５倍
容量の常温水に攪拌しながら投入して沈殿させる。沈殿
を完了させてのち沈殿の水洗を行うが、水洗は遠心分
離、ろ過、フィルタープレスなどにより行うことができ
る。
市販の試薬ゼインを用いてもよいが、コーンスターチ製
造工程副産物として得られるコーングルテンミールから
含水エタノールにより抽出して得たゼインを使用するこ
ともできる。トウモロコシ蛋白質ゼインを酸エタノール
溶液で脱アミド処理する場合には、ゼインもしくは脱脂
ゼイン１Ｋｇに対してエタノールを５〜８０リットル加
えて分散させ、更に水を１０リットル加えて完全に溶解
するこにより実施するが、この場合エタノール量は１５
〜２５リットルが好ましい。トウモロコシ蛋白質を含水
エタノールで完全に溶解した後、酸で脱アミド処理する
が、終濃度で０．０１〜３．２Ｖ／Ｖ％の塩酸を用いる
ことが好ましく、０．２〜０．７Ｖ／Ｖ％の塩酸濃度の
ものがより好ましい。脱アミド処理の温度条件は、４０
〜８０℃、好ましくは５０〜６０℃とする。また、処理
時間は、４〜２４時間、好ましくは４〜６時間とする。
脱アミド処理を終了するには、酸で脱アミド処理した溶
液をイオン交換樹脂を用いて脱酸処理したのち噴霧乾燥
してもよいが、酸で脱アミド処理した溶液を水に投入し
てエタノールおよび酸濃度を下げて行うこともできる。
水への投入は、脱アミド処理後すぐにでもよいが、好ま
しくは室温に冷却したのち、脱アミド処理液の２〜５倍
容量の常温水に攪拌しながら投入して沈殿させる。沈殿
を完了させてのち沈殿の水洗を行うが、水洗は遠心分
離、ろ過、フィルタープレスなどにより行うことができ
る。
【００１１】得られた沈殿もしくは噴霧乾燥品１００ｇ
に対して水２リットルを加えて懸濁し、アルカリ溶液を
用いてｐＨ７〜９に調整し、アルカリプロテアーゼを用
いて酵素反応を行い、限定分解する。この場合、沈殿も
しくは噴霧乾燥品１００ｇに対して加える水は２〜３リ
ットルが好ましい。アルカリプロテアーゼとしては、プ
ロレザー（商品名、天野製薬株式会社製、Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ ｓｐ．が起源のプロテアーゼ）の使用が好まし
く、基質に対して１／５０〜１／１００量用いる。限定
分解の際の反応温度は、４０〜６０℃が好ましい。反応
時間は、２時間以上が好ましい。反応の停止は、酵素反
応液を９０℃以上に加熱して行う。また、塩の除去には
イオン交換樹脂、透析なども用いることができるが、ｐ
Ｈ調整にアンモニア水を用いると後の工程で減圧濃縮な
どにより容易に除去できるので好ましい。
に対して水２リットルを加えて懸濁し、アルカリ溶液を
用いてｐＨ７〜９に調整し、アルカリプロテアーゼを用
いて酵素反応を行い、限定分解する。この場合、沈殿も
しくは噴霧乾燥品１００ｇに対して加える水は２〜３リ
ットルが好ましい。アルカリプロテアーゼとしては、プ
ロレザー（商品名、天野製薬株式会社製、Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ ｓｐ．が起源のプロテアーゼ）の使用が好まし
く、基質に対して１／５０〜１／１００量用いる。限定
分解の際の反応温度は、４０〜６０℃が好ましい。反応
時間は、２時間以上が好ましい。反応の停止は、酵素反
応液を９０℃以上に加熱して行う。また、塩の除去には
イオン交換樹脂、透析なども用いることができるが、ｐ
Ｈ調整にアンモニア水を用いると後の工程で減圧濃縮な
どにより容易に除去できるので好ましい。
【００１２】含有する塩を除去した後に行う酵素反応液
の乾燥は、凍結乾燥、噴霧乾燥、ドラムドライ、温風乾
燥、風乾などにより行うことができる。本発明により得
られたトウモロコシ蛋白質の酵素分解物は、試験管を用
いたインビトロ試験によりアンギオテンシン１ 変換酵
素阻害活性を有するばかりでなく、脳卒中易発症性自然
高血圧発症（ＳＨＲＳＰ）ラットの試験において脳卒中
を予防し、延命効果を有することがわかった。
の乾燥は、凍結乾燥、噴霧乾燥、ドラムドライ、温風乾
燥、風乾などにより行うことができる。本発明により得
られたトウモロコシ蛋白質の酵素分解物は、試験管を用
いたインビトロ試験によりアンギオテンシン１ 変換酵
素阻害活性を有するばかりでなく、脳卒中易発症性自然
高血圧発症（ＳＨＲＳＰ）ラットの試験において脳卒中
を予防し、延命効果を有することがわかった。
【００１３】
【００１４】以下に実施例、試験例を示すことにより本
発明をより明確に説明する。実施例１，２のようにして
本発明に係るトウモロコシ蛋白質の酵素分解物を得た。
発明をより明確に説明する。実施例１，２のようにして
本発明に係るトウモロコシ蛋白質の酵素分解物を得た。
【００１５】
【実施例１】
【００１６】コーングルテンミールをヘキサン：エタノ
ール（１：１）で脱脂操作３回実施したのち風乾したも
の９．１Ｋｇに、５４．６リットルの７０％エタノール
を加えて、時々攪拌しながら６０℃で６時間インキュベ
ートした。この溶液を室温に冷却したのち遠心分離によ
り抽出残渣を除去し、４４リットル（固形分３０６０ｇ
含む）のゼイン抽出液を得た。該ゼイン抽出液に、濃塩
酸２．７リットルおよび水４．４リットルを混合した塩
酸溶液（塩酸濃度１３％）を加え、５５℃で５時間とき
どき攪拌しながら脱アミド処理をおこなった。脱アミド
処理後のゼイン抽出液を、強塩基性イオン交換樹脂ＭＳ
Ａ−１（ダウエックス）ＯＨ- 型を詰めたイオン交換カ
ラムに通し、ｐＨ約７以上の分画を採取し、噴霧乾燥し
て脱アミドゼインサンプル（ＤＡＺ）を２５３０ｇ得
た。このうち２２５０ｇのＤＡＺを、水６７．５リット
ルに分散させ、濃アンモニア水でｐＨ９に調整した。こ
の溶液中へ、水５００ｍｌに溶解したプロレザー（商品
名、天野製薬株式会社製、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．が
起源のプロテアーゼ）２２．５ｇを加え、濃アンモニア
水でｐＨ９を維持しながら５０℃で２時間酵素反応させ
たのち、蒸気を吹き込み９０℃以上で３０分間加温し酵
素失活させたのち、エバポレーターで減圧濃縮してアン
モニアを除去しｐＨ約７とした。この溶液を凍結乾燥し
て本発明品１（ＤＡプロレザー１）を得た。ここで、コ
ーングルテンミールに対する固形分回収率は１２．４％
であった。
ール（１：１）で脱脂操作３回実施したのち風乾したも
の９．１Ｋｇに、５４．６リットルの７０％エタノール
を加えて、時々攪拌しながら６０℃で６時間インキュベ
ートした。この溶液を室温に冷却したのち遠心分離によ
り抽出残渣を除去し、４４リットル（固形分３０６０ｇ
含む）のゼイン抽出液を得た。該ゼイン抽出液に、濃塩
酸２．７リットルおよび水４．４リットルを混合した塩
酸溶液（塩酸濃度１３％）を加え、５５℃で５時間とき
どき攪拌しながら脱アミド処理をおこなった。脱アミド
処理後のゼイン抽出液を、強塩基性イオン交換樹脂ＭＳ
Ａ−１（ダウエックス）ＯＨ- 型を詰めたイオン交換カ
ラムに通し、ｐＨ約７以上の分画を採取し、噴霧乾燥し
て脱アミドゼインサンプル（ＤＡＺ）を２５３０ｇ得
た。このうち２２５０ｇのＤＡＺを、水６７．５リット
ルに分散させ、濃アンモニア水でｐＨ９に調整した。こ
の溶液中へ、水５００ｍｌに溶解したプロレザー（商品
名、天野製薬株式会社製、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．が
起源のプロテアーゼ）２２．５ｇを加え、濃アンモニア
水でｐＨ９を維持しながら５０℃で２時間酵素反応させ
たのち、蒸気を吹き込み９０℃以上で３０分間加温し酵
素失活させたのち、エバポレーターで減圧濃縮してアン
モニアを除去しｐＨ約７とした。この溶液を凍結乾燥し
て本発明品１（ＤＡプロレザー１）を得た。ここで、コ
ーングルテンミールに対する固形分回収率は１２．４％
であった。
【００１７】
【実施例２】
【００１８】コーングルテンミール３００ｇに３リット
ルの７０％エタノール溶液を加え、６０℃で６時間イン
キュベートしてゼイン抽出液を得た。ゼイン抽出液を室
温に冷却したのち、このゼイン抽出溶液をろ布でろ過
し、固形分濃度３．５Ｗ／Ｖ％の溶液２．６リットルを
得た。得られた溶液に２６０ｍｌの２０Ｖ／Ｖ％塩酸溶
液を加え、５５℃で５時間ときどき攪拌しながら脱アミ
ド処理をおこなった。この脱アミド処理溶液を氷水で冷
却したのち、激しく攪拌した倍容量（５．６リットル
）の氷水中に投入し白濁溶液を得た。この白濁溶液を
一晩４℃に放置して十分沈殿を生成させたのち、ヌッチ
ェを用いて減圧ろ過により沈殿を得た。この沈殿を２リ
ットルの水に懸濁し、濃アンモニア水を用いてｐＨ９に
調整したのち２．２ｇのプロレザー（商品名、天野製薬
株式会社製、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．が起源のプロテア
ーゼ）を少量の水に溶解して添加し、５時間の酵素反応
をさせた後に、弱酸性カチオン交換樹脂アンバーライト
ＩＲＣ−５０（オルガノ株式会社製）Ｈ+ 型１６３ｇ
（湿重量）を加えてアンモニウムイオンを除去し、９０
℃以上で３０分間加温後、減圧ろ過により沈殿除去した
のち上清を噴霧乾燥して本発明品２（ＤＡプロレザー
２）を得た。ここで、コーングルテンミールに対する固
形分回収率は２７％であった。
ルの７０％エタノール溶液を加え、６０℃で６時間イン
キュベートしてゼイン抽出液を得た。ゼイン抽出液を室
温に冷却したのち、このゼイン抽出溶液をろ布でろ過
し、固形分濃度３．５Ｗ／Ｖ％の溶液２．６リットルを
得た。得られた溶液に２６０ｍｌの２０Ｖ／Ｖ％塩酸溶
液を加え、５５℃で５時間ときどき攪拌しながら脱アミ
ド処理をおこなった。この脱アミド処理溶液を氷水で冷
却したのち、激しく攪拌した倍容量（５．６リットル
）の氷水中に投入し白濁溶液を得た。この白濁溶液を
一晩４℃に放置して十分沈殿を生成させたのち、ヌッチ
ェを用いて減圧ろ過により沈殿を得た。この沈殿を２リ
ットルの水に懸濁し、濃アンモニア水を用いてｐＨ９に
調整したのち２．２ｇのプロレザー（商品名、天野製薬
株式会社製、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．が起源のプロテア
ーゼ）を少量の水に溶解して添加し、５時間の酵素反応
をさせた後に、弱酸性カチオン交換樹脂アンバーライト
ＩＲＣ−５０（オルガノ株式会社製）Ｈ+ 型１６３ｇ
（湿重量）を加えてアンモニウムイオンを除去し、９０
℃以上で３０分間加温後、減圧ろ過により沈殿除去した
のち上清を噴霧乾燥して本発明品２（ＤＡプロレザー
２）を得た。ここで、コーングルテンミールに対する固
形分回収率は２７％であった。
【００１９】
【試験例１】
【００２０】実施例１で得られた脱アミド処理済みのサ
ンプル（ＤＡＺ）について、脱アミド率を測定した。２
００ｍｇの脱アミド処理済みのＤＡＺおよびゼインを、
各々１００ｍｌのメスフラスコにとり、２規定塩酸及び
３０％酢酸混合溶液に懸濁したのち同溶液でメスアップ
した。この懸濁液を一定量だけアンプルにとり、減圧下
密封し、１０７℃で２時間加水分解した。この加水分解
液１ｍｌを、コンウェイ型拡散ユニットの側室に入れ、
デシケーター中で減圧乾固した。ここで、側室にはホウ
酸緩衝液（１５ｇのホウ酸／１００ｍｌの２規定水酸化
カリウム）１ｍｌおよび４０％水酸化カリウム溶液２ｍ
ｌを入れ、内室には０．０２規定硫酸溶液１ｍｌを入
れ、蓋をして２時間放置した。放置後、硫酸溶液中に吸
収されたアンモニア量をインドフェノール比色法により
定量した。すなわち、１０ｍｌ試験管に内室中の硫酸溶
液０．５ｍｌ，Ｎ基準液（２ｍＭ硫酸アンモニウム溶
液）０．５ｍｌをそれぞれとり、各々に５％フェノール
溶液２ｍｌ、１０％炭酸水素ナトリウム溶液１ｍｌ、次
亜塩素酸ナトリウム溶液（アンチフォルミン２容＋１
０．６ｇ／１００ｍｌ炭酸ナトリウム溶液１容混液）１
ｍｌを順に加え、３０分間放置後、水で全量１０ｍｌと
してλ＝６２０ｎｍで吸光度を測定した。そして、次の
式により脱アミド率を算出した。 ・脱アミド率（％）＝（ゼイン加水分解によるアンモニ
ア量−脱アミド処理サンプル加水分解によるアンモニア
量）×１００／ゼイン加水分解によるアンモニア量 その結果、ＤＡＺの脱アミド率は、３３％であった。
ンプル（ＤＡＺ）について、脱アミド率を測定した。２
００ｍｇの脱アミド処理済みのＤＡＺおよびゼインを、
各々１００ｍｌのメスフラスコにとり、２規定塩酸及び
３０％酢酸混合溶液に懸濁したのち同溶液でメスアップ
した。この懸濁液を一定量だけアンプルにとり、減圧下
密封し、１０７℃で２時間加水分解した。この加水分解
液１ｍｌを、コンウェイ型拡散ユニットの側室に入れ、
デシケーター中で減圧乾固した。ここで、側室にはホウ
酸緩衝液（１５ｇのホウ酸／１００ｍｌの２規定水酸化
カリウム）１ｍｌおよび４０％水酸化カリウム溶液２ｍ
ｌを入れ、内室には０．０２規定硫酸溶液１ｍｌを入
れ、蓋をして２時間放置した。放置後、硫酸溶液中に吸
収されたアンモニア量をインドフェノール比色法により
定量した。すなわち、１０ｍｌ試験管に内室中の硫酸溶
液０．５ｍｌ，Ｎ基準液（２ｍＭ硫酸アンモニウム溶
液）０．５ｍｌをそれぞれとり、各々に５％フェノール
溶液２ｍｌ、１０％炭酸水素ナトリウム溶液１ｍｌ、次
亜塩素酸ナトリウム溶液（アンチフォルミン２容＋１
０．６ｇ／１００ｍｌ炭酸ナトリウム溶液１容混液）１
ｍｌを順に加え、３０分間放置後、水で全量１０ｍｌと
してλ＝６２０ｎｍで吸光度を測定した。そして、次の
式により脱アミド率を算出した。 ・脱アミド率（％）＝（ゼイン加水分解によるアンモニ
ア量−脱アミド処理サンプル加水分解によるアンモニア
量）×１００／ゼイン加水分解によるアンモニア量 その結果、ＤＡＺの脱アミド率は、３３％であった。
【００２１】
【試験例２】
【００２２】実施例１で得られた本発明品１（ＤＡプロ
レザー１）及び実施例２で得られた本発明品２（ＤＡプ
ロレザー２）の高血圧予防効果を、血圧上昇に関与する
酵素として知られているアンギオテンシン１変換酵素の
阻害活性に関するＩＣ50値をＡＣＥキット（シグマ社）
を用いて各々測定し、指標とすることで調べた。測定
は、次のように行った。まず、本発明品（ＤＡプロレザ
ー）の溶液（１ｍｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌ）２５μｌ
に、ＡＣＥ溶液（ＡＣＥキャリブレータ１バイヤルを水
１ｍｌで溶解したもの）５０μｌを加え、３７℃で１０
分間プレインキュベーションした後に、基質溶液［１
２．５ｍＭのＨＩＰＰＵＲＹＬ−ＨＩＳ−ＬＥＵのホウ
酸緩衝液（Ｍ／２０ホウ酸ナトリウムとＭ／５ホウ酸を
混合しｐＨ８．３としたもので１Ｍ塩化ナトリウムを含
むもの）溶液］５０μｌを加えて、３７℃で１時間イン
キュベートした。そして、インキュベート後の溶液に、
０．５規定塩酸１２５μｌ加えて５分間放置し、酵素反
応を停止させた後に、酢酸エチル７５０μｌ加えてボル
テックスミキサーで攪拌した後に遠心分離し、上清２５
０μｌを別の容器にとり減圧乾固した。これに、１Ｍ塩
化ナトリウム溶液１．５ｍｌ加えて、λ＝２２８ｎｍで
吸光度を測定し、次式により阻害率（％）を計算し、５
０％阻害する本発明品濃度をＩＣ50として求めた。 ・阻害率（％）＝｛（対照の吸光度−ブランクの吸光
度）−（本発明品の吸光度−ブランクの吸光度）｝×１
００／（対照の吸光度−ブランクの吸光度） ここで、対照は本発明品の代わりに水を入れて操作した
ものを示し、ブランクは本発明品の代わりに水を入れる
と共に、ＡＣＥ溶液と同時に塩酸溶液を加えて操作した
ものを示している。その結果、本発明品１（ＤＡプロレ
ザー１）のＩＣ50値（μｇ/ｍｌ）は３５０であり、本
発明品２（ＤＡプロレザー２）のＩＣ50値（μｇ/ｍ
ｌ）は２６５であった。従って、本発明品は、インビト
ロ試験において十分な高血圧予防効果を有することが確
認された。
レザー１）及び実施例２で得られた本発明品２（ＤＡプ
ロレザー２）の高血圧予防効果を、血圧上昇に関与する
酵素として知られているアンギオテンシン１変換酵素の
阻害活性に関するＩＣ50値をＡＣＥキット（シグマ社）
を用いて各々測定し、指標とすることで調べた。測定
は、次のように行った。まず、本発明品（ＤＡプロレザ
ー）の溶液（１ｍｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌ）２５μｌ
に、ＡＣＥ溶液（ＡＣＥキャリブレータ１バイヤルを水
１ｍｌで溶解したもの）５０μｌを加え、３７℃で１０
分間プレインキュベーションした後に、基質溶液［１
２．５ｍＭのＨＩＰＰＵＲＹＬ−ＨＩＳ−ＬＥＵのホウ
酸緩衝液（Ｍ／２０ホウ酸ナトリウムとＭ／５ホウ酸を
混合しｐＨ８．３としたもので１Ｍ塩化ナトリウムを含
むもの）溶液］５０μｌを加えて、３７℃で１時間イン
キュベートした。そして、インキュベート後の溶液に、
０．５規定塩酸１２５μｌ加えて５分間放置し、酵素反
応を停止させた後に、酢酸エチル７５０μｌ加えてボル
テックスミキサーで攪拌した後に遠心分離し、上清２５
０μｌを別の容器にとり減圧乾固した。これに、１Ｍ塩
化ナトリウム溶液１．５ｍｌ加えて、λ＝２２８ｎｍで
吸光度を測定し、次式により阻害率（％）を計算し、５
０％阻害する本発明品濃度をＩＣ50として求めた。 ・阻害率（％）＝｛（対照の吸光度−ブランクの吸光
度）−（本発明品の吸光度−ブランクの吸光度）｝×１
００／（対照の吸光度−ブランクの吸光度） ここで、対照は本発明品の代わりに水を入れて操作した
ものを示し、ブランクは本発明品の代わりに水を入れる
と共に、ＡＣＥ溶液と同時に塩酸溶液を加えて操作した
ものを示している。その結果、本発明品１（ＤＡプロレ
ザー１）のＩＣ50値（μｇ/ｍｌ）は３５０であり、本
発明品２（ＤＡプロレザー２）のＩＣ50値（μｇ/ｍ
ｌ）は２６５であった。従って、本発明品は、インビト
ロ試験において十分な高血圧予防効果を有することが確
認された。
【００２３】
【試験例３】
【００２４】実施例１で得られた本発明品１（ＤＡプロ
レザー１）を、ＳＨＲＳＰ（脳卒中易発症性高血圧自然
発症）ラットに３０日間経口摂取させ、血圧に及ぼす影
響を検討した。すなわち、試験区として、実施例１で得
られた本発明品１（ＤＡプロレザー１）０．２５ｋｇ
を、高血圧を発病させる市販の飼料であるＳＰ飼料粉末
４．７５ｋｇと混合して５ｋｇとし、ＳＨＲＳＰ（脳卒
中易発症性高血圧自然発症）ラットに３０日間経口摂取
した。また、対照区として、ＳＰ飼料粉末５ｋｇを試験
区と同様に３０日間経口摂取した。各区は、９週齢の雄
性ＳＨＲＳＰラットを１群５匹に分けて、個別ケージに
て飼育し、飲料水および飼料は自由摂取とし、ラットの
体重・飼料摂取量・血圧を毎日測定し、各区毎に平均値
を求めた。なお、血圧測定はＴａｉｌ−Ｃｕｆｆ法によ
って実施した。その結果、試験区は、試験開始時の体重
が２５６．４ｇ、試験終了時の体重が２３９．８ｇであ
り、飼料摂取量は１６８ｇ／ｋｇ体重であった。これに
対し、対照区は、試験開始時の体重が２５４．８ｇ、試
験終了時の体重が２５３．３ｇであり、飼料摂取量は１
５７ｇ／ｋｇ体重であった。また、試験区及び対照区に
おける投与日数に対する血圧の変化を表すグラフを図１
に示した。図１によると、本発明品１（ＤＡプロレザー
１）による試験区は、投与２０日過ぎに、血圧の上昇が
抑制されていることが確認できる。
レザー１）を、ＳＨＲＳＰ（脳卒中易発症性高血圧自然
発症）ラットに３０日間経口摂取させ、血圧に及ぼす影
響を検討した。すなわち、試験区として、実施例１で得
られた本発明品１（ＤＡプロレザー１）０．２５ｋｇ
を、高血圧を発病させる市販の飼料であるＳＰ飼料粉末
４．７５ｋｇと混合して５ｋｇとし、ＳＨＲＳＰ（脳卒
中易発症性高血圧自然発症）ラットに３０日間経口摂取
した。また、対照区として、ＳＰ飼料粉末５ｋｇを試験
区と同様に３０日間経口摂取した。各区は、９週齢の雄
性ＳＨＲＳＰラットを１群５匹に分けて、個別ケージに
て飼育し、飲料水および飼料は自由摂取とし、ラットの
体重・飼料摂取量・血圧を毎日測定し、各区毎に平均値
を求めた。なお、血圧測定はＴａｉｌ−Ｃｕｆｆ法によ
って実施した。その結果、試験区は、試験開始時の体重
が２５６．４ｇ、試験終了時の体重が２３９．８ｇであ
り、飼料摂取量は１６８ｇ／ｋｇ体重であった。これに
対し、対照区は、試験開始時の体重が２５４．８ｇ、試
験終了時の体重が２５３．３ｇであり、飼料摂取量は１
５７ｇ／ｋｇ体重であった。また、試験区及び対照区に
おける投与日数に対する血圧の変化を表すグラフを図１
に示した。図１によると、本発明品１（ＤＡプロレザー
１）による試験区は、投与２０日過ぎに、血圧の上昇が
抑制されていることが確認できる。
【００２５】
【試験例４】
【００２６】実施例１で得られた本発明品１（ＤＡプロ
レザー１）を、ＳＨＲＳＰラットに１２０日間経口摂取
させ、延命効果を検討した。すなわち、試験区として、
実施例１で得られた本発明品１（ＤＡプロレザー１）
０．２５ｋｇを、高血圧を発病させる市販の飼料である
ＳＰ飼料粉末４．７５ｋｇと混合して５ｋｇとし、ＳＨ
ＲＳＰ（脳卒中易発症性高血圧自然発症）ラットに１２
０日間経口摂取した。また、対照区１として、ＳＰ飼料
粉末５ｋｇを試験区と同様に１２０日間経口摂取した。
さらに、対照区２として、特開平８−２４５６９４号公
報に記載されているように、ゼインを尿素−アンモニア
溶液に溶解変性させて、ゲルろ過したのち酵素分解する
ことで製造したペプチド（以下、ＦＺ−０５と略称す
る）０．２５ｋｇを、ＳＰ飼料粉末４．７５ｋｇと混合
して５ｋｇとし、試験区と同様に１２０日間経口摂取し
た。各区は、８週齢の雄性ＳＨＲＳＰラットを１群５匹
に分けて、個別ケージにて飼育し、飲料水および飼料は
自由摂取とし、飼料摂取量・動物の体重・動物の観察を
実施した。そして、各区における投与日数に対する生存
率の変化を表すグラフを、図２に示した。その結果、本
発明品１（ＤＡプロレザー１）投与の試験区では、試験
開始後１００日でも５匹中３匹が生存し、１２０日で５
匹とも死亡したが、ＳＰ飼料粉末投与の対照区１では試
験開始後８５日で５匹とも死亡し、ＦＺ−０５投与の対
照区２では、試験開始後９０日で５匹とも死亡したま
た、死亡した動物の脳を含む主要臓器を病理組織学的観
察を行なうことで、死亡時における脳出血の有無を観察
し、延命効果が脳卒中予防によるものか検討した。その
結果、病理組織学的観察では、対照区に脳出血が認めら
れたが、試験区では脳出血が有意に低かった。従って、
本発明品１（ＤＡプロレザー１）による試験区は、脳卒
中に対しても十分な予防効果を有し、延命効果を有する
ことが確認された。
レザー１）を、ＳＨＲＳＰラットに１２０日間経口摂取
させ、延命効果を検討した。すなわち、試験区として、
実施例１で得られた本発明品１（ＤＡプロレザー１）
０．２５ｋｇを、高血圧を発病させる市販の飼料である
ＳＰ飼料粉末４．７５ｋｇと混合して５ｋｇとし、ＳＨ
ＲＳＰ（脳卒中易発症性高血圧自然発症）ラットに１２
０日間経口摂取した。また、対照区１として、ＳＰ飼料
粉末５ｋｇを試験区と同様に１２０日間経口摂取した。
さらに、対照区２として、特開平８−２４５６９４号公
報に記載されているように、ゼインを尿素−アンモニア
溶液に溶解変性させて、ゲルろ過したのち酵素分解する
ことで製造したペプチド（以下、ＦＺ−０５と略称す
る）０．２５ｋｇを、ＳＰ飼料粉末４．７５ｋｇと混合
して５ｋｇとし、試験区と同様に１２０日間経口摂取し
た。各区は、８週齢の雄性ＳＨＲＳＰラットを１群５匹
に分けて、個別ケージにて飼育し、飲料水および飼料は
自由摂取とし、飼料摂取量・動物の体重・動物の観察を
実施した。そして、各区における投与日数に対する生存
率の変化を表すグラフを、図２に示した。その結果、本
発明品１（ＤＡプロレザー１）投与の試験区では、試験
開始後１００日でも５匹中３匹が生存し、１２０日で５
匹とも死亡したが、ＳＰ飼料粉末投与の対照区１では試
験開始後８５日で５匹とも死亡し、ＦＺ−０５投与の対
照区２では、試験開始後９０日で５匹とも死亡したま
た、死亡した動物の脳を含む主要臓器を病理組織学的観
察を行なうことで、死亡時における脳出血の有無を観察
し、延命効果が脳卒中予防によるものか検討した。その
結果、病理組織学的観察では、対照区に脳出血が認めら
れたが、試験区では脳出血が有意に低かった。従って、
本発明品１（ＤＡプロレザー１）による試験区は、脳卒
中に対しても十分な予防効果を有し、延命効果を有する
ことが確認された。
【００２７】
【００２８】本発明によれば、高血圧予防効果を有し、
かつ、脳卒中に対しても十分な予防効果を有し、回収率
が高いペプチドを得ることができる。さらに、本発明に
係るトウモロコシ蛋白質の酵素分解物は、高血圧症患者
およびその予備軍の人々の高血圧発症予防のためだけで
なく、日本人の三大生活習慣病（成人病）のひとつであ
る脳卒中予防に十分な効果を有する健康食品としての可
能性を見いだすことができる。
かつ、脳卒中に対しても十分な予防効果を有し、回収率
が高いペプチドを得ることができる。さらに、本発明に
係るトウモロコシ蛋白質の酵素分解物は、高血圧症患者
およびその予備軍の人々の高血圧発症予防のためだけで
なく、日本人の三大生活習慣病（成人病）のひとつであ
る脳卒中予防に十分な効果を有する健康食品としての可
能性を見いだすことができる。
【図１】投与日数に対する血圧の変化を表すグラフ
【図２】投与日数に対する生存率の変化を表すグラフ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ // Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＢＮ Ａ６１Ｋ 37/18 ＡＢＮ ＡＢＵ ＡＢＵ
Claims (2)
- 【請求項１】 トウモロコシ蛋白質ゼインを、酸エタノ
ール溶液を用いて脱アミド処理して溶解性を高め、プロ
テアーゼにより限定分解して得られる、高血圧症および
脳卒中予防効果を有する、トウモロコシ蛋白質の酵素分
解物。 - 【請求項２】 トウモロコシ蛋白質ゼインを、酸エタノ
ール溶液を用いて脱アミド処理して溶解性を高め、プロ
テアーゼにより限定分解することで製造する、高血圧症
および脳卒中予防効果を有する、トウモロコシ蛋白質の
酵素分解物の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9211215A JPH1132693A (ja) | 1997-07-23 | 1997-07-23 | トウモロコシ蛋白質の酵素分解物およびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9211215A JPH1132693A (ja) | 1997-07-23 | 1997-07-23 | トウモロコシ蛋白質の酵素分解物およびその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1132693A true JPH1132693A (ja) | 1999-02-09 |
Family
ID=16602219
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9211215A Pending JPH1132693A (ja) | 1997-07-23 | 1997-07-23 | トウモロコシ蛋白質の酵素分解物およびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1132693A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7887868B2 (en) | 2004-11-12 | 2011-02-15 | Kao Corporation | Liquid seasoning |
| JP2011045342A (ja) * | 2009-08-28 | 2011-03-10 | Cosmo Shokuhin Kk | ポテトペプチド混合物の製造方法 |
| US7939121B2 (en) | 2005-02-10 | 2011-05-10 | Sabritas, S. De R.L. De C.V. | Instant masa |
| CN105029371A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-11-11 | 方莉 | 一种风味玉米酱的制备方法 |
-
1997
- 1997-07-23 JP JP9211215A patent/JPH1132693A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7887868B2 (en) | 2004-11-12 | 2011-02-15 | Kao Corporation | Liquid seasoning |
| US7939121B2 (en) | 2005-02-10 | 2011-05-10 | Sabritas, S. De R.L. De C.V. | Instant masa |
| JP2011045342A (ja) * | 2009-08-28 | 2011-03-10 | Cosmo Shokuhin Kk | ポテトペプチド混合物の製造方法 |
| CN105029371A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-11-11 | 方莉 | 一种风味玉米酱的制备方法 |
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