JPH1128084A - 微生物の酵素生成促進剤及び促進方法 - Google Patents
微生物の酵素生成促進剤及び促進方法Info
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- JPH1128084A JPH1128084A JP18820997A JP18820997A JPH1128084A JP H1128084 A JPH1128084 A JP H1128084A JP 18820997 A JP18820997 A JP 18820997A JP 18820997 A JP18820997 A JP 18820997A JP H1128084 A JPH1128084 A JP H1128084A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 ５−アミノレブリン酸又は５−アミノレ
ブリン酸のエステル、アミド若しくは塩を有効成分とす
る微生物の酵素生成促進剤及び促進方法。 【効果】 微生物の培養液に添加することにより、当該
微生物による酵素の生成を著しく促進させることができ
る。
ブリン酸のエステル、アミド若しくは塩を有効成分とす
る微生物の酵素生成促進剤及び促進方法。 【効果】 微生物の培養液に添加することにより、当該
微生物による酵素の生成を著しく促進させることができ
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、微生物による酵素
の生成を大幅に増大させることができる微生物の酵素生
成促進剤に関する。
の生成を大幅に増大させることができる微生物の酵素生
成促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】化学反応プロセスは、天然に存在しない
多くの化合物を生み出し、そこから排出される化学物質
を除去するために多くのコストを必要とする。このた
め、化学物質の放出を極力抑えた新規なプロセスや放出
される化学物質処理の効率化が切望されている。化学物
質の過剰な放出を出来るだけ抑制するために、これまで
化学触媒を用いてなされているプロセスを生体機能、す
なわち酵素等の触媒機能に代替することを目指した研究
開発が盛んに行われている。例えば、パルプ製造におい
て木材チップのパルプ化やその漂白工程を微生物やそれ
が作る特定の酵素を用いて行おうとする研究（バイオサ
イエンスとインダストリー，Vol.50、No.9、(1992)）が
行われている。また、酵素を用いた化学物質の処理方法
も数多く検討されている。例えば、繊維の漂白、数の子
やコンタクトレンズ等の殺菌工程で大量に用いられ、過
剰となった過酸化水素をカタラーゼによって分解する方
法（酵素利用ハンドブック、地人書館、404-410)などが
検討されている。
多くの化合物を生み出し、そこから排出される化学物質
を除去するために多くのコストを必要とする。このた
め、化学物質の放出を極力抑えた新規なプロセスや放出
される化学物質処理の効率化が切望されている。化学物
質の過剰な放出を出来るだけ抑制するために、これまで
化学触媒を用いてなされているプロセスを生体機能、す
なわち酵素等の触媒機能に代替することを目指した研究
開発が盛んに行われている。例えば、パルプ製造におい
て木材チップのパルプ化やその漂白工程を微生物やそれ
が作る特定の酵素を用いて行おうとする研究（バイオサ
イエンスとインダストリー，Vol.50、No.9、(1992)）が
行われている。また、酵素を用いた化学物質の処理方法
も数多く検討されている。例えば、繊維の漂白、数の子
やコンタクトレンズ等の殺菌工程で大量に用いられ、過
剰となった過酸化水素をカタラーゼによって分解する方
法（酵素利用ハンドブック、地人書館、404-410)などが
検討されている。
【０００３】しかしながら、このような酵素は、微生物
や動植物からの採取によっているため、生産性が低く、
コスト高となり、応用局面が限られるなどの問題があっ
た。
や動植物からの採取によっているため、生産性が低く、
コスト高となり、応用局面が限られるなどの問題があっ
た。
【０００４】
【発明が解決しようすとる課題】従って、本発明の目的
は、微生物による酵素の生成を大幅に増大させることが
でき、該酵素を効率良く採取することができる方法を提
供することにある。
は、微生物による酵素の生成を大幅に増大させることが
でき、該酵素を効率良く採取することができる方法を提
供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】かかる実情において、本
発明者らは鋭意研究を行った結果、微生物の培養液に５
−アミノレブリン酸等を用いれば、微生物による酵素の
生成が大幅に促進されることを見出し、本発明を完成し
た。
発明者らは鋭意研究を行った結果、微生物の培養液に５
−アミノレブリン酸等を用いれば、微生物による酵素の
生成が大幅に促進されることを見出し、本発明を完成し
た。
【０００６】すなわち、本発明は、５−アミノレブリン
酸又は５−アミノレブリン酸のエステル、アミド若しく
は塩を有効成分とする微生物の酵素生成促進剤を提供す
るものである。
酸又は５−アミノレブリン酸のエステル、アミド若しく
は塩を有効成分とする微生物の酵素生成促進剤を提供す
るものである。
【０００７】また、本発明は、５−アミノレブリン酸又
は５−アミノレブリン酸のエステル、アミド若しくは塩
を、微生物の培養液に添加することを特徴とする、該微
生物の酵素生成促進方法を提供するものである。
は５−アミノレブリン酸のエステル、アミド若しくは塩
を、微生物の培養液に添加することを特徴とする、該微
生物の酵素生成促進方法を提供するものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明においては、有効成分とし
て５−アミノレブリン酸、５−アミノレブリン酸のエス
テル、アミド又は塩を用いる。このうち、エステル又は
アミドとしては具体的には、例えば、５−アミノレブリ
ン酸メチルエステル、５−アミノレブリン酸エチルエス
テル、５−アミノレブリン酸プロピルエステル、５−ア
ミノレブリン酸ブチルエステル、５−アミノレブリン酸
ペンチルエステル、５−アミノレブリン酸ヘキシルエス
テル、５−アミノレブリン酸ヘプチルエステル、５−ア
ミノレブリン酸オクチルエステル、５−アミノレブリン
酸ノニルエステル、５−アミノレブリン酸ドデシルエス
テル、５−アミノレブリン酸ヘキサデシルエステル、５
−アミノレブリン酸イソプロピルエステル、５−アミノ
レブリン酸シクロヘキシルエステル、５−アミノレブリ
ン酸ベンジルエステル、５−アミノレブリン酸フェネチ
ルエステル、５−アミノレブリン酸−３−フェニルプロ
ピルエステル、５−アミノレブリン酸エトキシエチルエ
ステル、５−アミノレブリン酸−２−（ヒドロキシメチ
ル）テトラフラニルエステル、５−アミノレブリン酸−
２−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロピラニルエステ
ル、５−アミノレブリン酸アセトアミド、５−アミノレ
ブリン酸−ｎ−ヘキサノイックアミド、５−アミノレブ
リン酸−ｎ−ノナノイックアミド等が挙げられる。また
塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、
ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、リン酸塩等の無機
酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、マレイン
酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、酪酸
塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンス
ルホン酸塩等の有機酸塩、アルカリ金属塩、アルカリ土
類金属塩、アンモニウムあるいはアルキルアンモニウム
塩等が挙げられる。更に、これらの５−アミノレブリン
酸、そのエステル、アミド又は塩は、水和物又は溶媒和
物を形成していてもよい。これらの化合物及びその合成
方法は特開平４−９３６０号公報に記載されている。
て５−アミノレブリン酸、５−アミノレブリン酸のエス
テル、アミド又は塩を用いる。このうち、エステル又は
アミドとしては具体的には、例えば、５−アミノレブリ
ン酸メチルエステル、５−アミノレブリン酸エチルエス
テル、５−アミノレブリン酸プロピルエステル、５−ア
ミノレブリン酸ブチルエステル、５−アミノレブリン酸
ペンチルエステル、５−アミノレブリン酸ヘキシルエス
テル、５−アミノレブリン酸ヘプチルエステル、５−ア
ミノレブリン酸オクチルエステル、５−アミノレブリン
酸ノニルエステル、５−アミノレブリン酸ドデシルエス
テル、５−アミノレブリン酸ヘキサデシルエステル、５
−アミノレブリン酸イソプロピルエステル、５−アミノ
レブリン酸シクロヘキシルエステル、５−アミノレブリ
ン酸ベンジルエステル、５−アミノレブリン酸フェネチ
ルエステル、５−アミノレブリン酸−３−フェニルプロ
ピルエステル、５−アミノレブリン酸エトキシエチルエ
ステル、５−アミノレブリン酸−２−（ヒドロキシメチ
ル）テトラフラニルエステル、５−アミノレブリン酸−
２−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロピラニルエステ
ル、５−アミノレブリン酸アセトアミド、５−アミノレ
ブリン酸−ｎ−ヘキサノイックアミド、５−アミノレブ
リン酸−ｎ−ノナノイックアミド等が挙げられる。また
塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、
ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、リン酸塩等の無機
酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、マレイン
酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、酪酸
塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンス
ルホン酸塩等の有機酸塩、アルカリ金属塩、アルカリ土
類金属塩、アンモニウムあるいはアルキルアンモニウム
塩等が挙げられる。更に、これらの５−アミノレブリン
酸、そのエステル、アミド又は塩は、水和物又は溶媒和
物を形成していてもよい。これらの化合物及びその合成
方法は特開平４−９３６０号公報に記載されている。
【０００９】また、これらの５−アミノレブリン酸等
は、５−アミノレブリン酸を含有する５−アミノレブリ
ン酸生産菌の発酵液であってもよい。５−アミノレブリ
ン酸生産微生物としては、例えばロドバクター セファ
ロイデス（Rhodobacter Sphaeroides)CR-0072009 (FERM
P-16217)、ロドバクター セファロイデス（Rhodobact
er Spheroises)IFO12203、ロドバクター セファロイデ
ス（Rhodobacter Sphaeroides)CR-17(FERM P-11752)、
ロドバクター セファロイデス（Rhodobacter Sphaeroi
des)CR-286(FERM P-12542)、ロドバクター セファロイ
デス（RhodobacterSphaeroides)CR-2S5(FERM P-1254
3)、ロドバクター セファロイデス（Rhodobacter Spha
eroides)CR-386(FERM P-13159)、ロドバクター セファ
ロイデス（Rhodobacter Sphaeroides)CR-450(FERM P-14
085)、ロドバクター セファロイデス（Rhodobacter Sp
haeroides)CR-520(FERM BP-5255)、ロドバクター セフ
ァロイデス（Rhodobacter Sphaeroides)CR-649-B(FERM
P-15974)、ロドバクター セファロイデス（Rhodobacte
r Sphaeroides)CR-002(FERM P-15312)等が挙げられる。
発酵液は、５−アミノレブリン酸を含有するものであれ
ば特に制限されずに使用することができる。
は、５−アミノレブリン酸を含有する５−アミノレブリ
ン酸生産菌の発酵液であってもよい。５−アミノレブリ
ン酸生産微生物としては、例えばロドバクター セファ
ロイデス（Rhodobacter Sphaeroides)CR-0072009 (FERM
P-16217)、ロドバクター セファロイデス（Rhodobact
er Spheroises)IFO12203、ロドバクター セファロイデ
ス（Rhodobacter Sphaeroides)CR-17(FERM P-11752)、
ロドバクター セファロイデス（Rhodobacter Sphaeroi
des)CR-286(FERM P-12542)、ロドバクター セファロイ
デス（RhodobacterSphaeroides)CR-2S5(FERM P-1254
3)、ロドバクター セファロイデス（Rhodobacter Spha
eroides)CR-386(FERM P-13159)、ロドバクター セファ
ロイデス（Rhodobacter Sphaeroides)CR-450(FERM P-14
085)、ロドバクター セファロイデス（Rhodobacter Sp
haeroides)CR-520(FERM BP-5255)、ロドバクター セフ
ァロイデス（Rhodobacter Sphaeroides)CR-649-B(FERM
P-15974)、ロドバクター セファロイデス（Rhodobacte
r Sphaeroides)CR-002(FERM P-15312)等が挙げられる。
発酵液は、５−アミノレブリン酸を含有するものであれ
ば特に制限されずに使用することができる。
【００１０】本発明の微生物の酵素生成促進剤が適用さ
れる微生物としては、例えばコリオラス属（Coriolu
s）、ファネロカエテ属（Phanerochaete）、アスペルギ
ルス属（Aspergillus）、ルートロータス属（Pleutrotu
s）、ブジェルカンデラ属（Bjerkandera）、コプリヌス
属（Coprinus）、キャンディダ属（Candida）又はピク
ノポーラス属（Pycnoporus）等に属するものが挙げられ
る。より具体的には、コリオラス ベルジカラー（Cori
olus versicolor）、ファネロカエテ クリソスポリウ
ム（Phanerochaete chrysosporium）、アスペルギルス
ニガー（Aspergillus niger）、ルートロータス オ
ストレータス（Pleutrotus ostreatus）、ブジェルカン
デラ アダスタ（Bjerkandera adusta）、コプリヌス
シネレウス（Coprinus cinereus)、キャンディダ ボン
ビコラ（Candida bombicola）、キャンディダ トロピ
カリス（Candida tropicalis）、キャンディダ ボイジ
ニイ（Candida boidinii）、ピクノポーラス コッシネ
ウス（Pycnoporus coccineus）等が挙げられる。
れる微生物としては、例えばコリオラス属（Coriolu
s）、ファネロカエテ属（Phanerochaete）、アスペルギ
ルス属（Aspergillus）、ルートロータス属（Pleutrotu
s）、ブジェルカンデラ属（Bjerkandera）、コプリヌス
属（Coprinus）、キャンディダ属（Candida）又はピク
ノポーラス属（Pycnoporus）等に属するものが挙げられ
る。より具体的には、コリオラス ベルジカラー（Cori
olus versicolor）、ファネロカエテ クリソスポリウ
ム（Phanerochaete chrysosporium）、アスペルギルス
ニガー（Aspergillus niger）、ルートロータス オ
ストレータス（Pleutrotus ostreatus）、ブジェルカン
デラ アダスタ（Bjerkandera adusta）、コプリヌス
シネレウス（Coprinus cinereus)、キャンディダ ボン
ビコラ（Candida bombicola）、キャンディダ トロピ
カリス（Candida tropicalis）、キャンディダ ボイジ
ニイ（Candida boidinii）、ピクノポーラス コッシネ
ウス（Pycnoporus coccineus）等が挙げられる。
【００１１】また、生成する酵素は、ポルフィリン構造
を有するもの、例えばカタラーゼや、マンガンペルオキ
シダーゼ、リグニンペルオキシダーゼ等のペルオキシダ
ーゼなどの場合に、特に好適である。なお、本発明の有
効成分である５−アミノレブリン酸は、ポルフィリンの
前駆体であるが、ポルフィリン構造を有する酵素の生成
の反応に寄与する原料の１つを添加しても、他の条件に
変化がなければ最終的な生成量は増加しないから、本発
明の微生物の酵素生成促進剤は、単に原料の１つを添加
したものとは異なり、当業者が容易に想到し得るもので
はない。
を有するもの、例えばカタラーゼや、マンガンペルオキ
シダーゼ、リグニンペルオキシダーゼ等のペルオキシダ
ーゼなどの場合に、特に好適である。なお、本発明の有
効成分である５−アミノレブリン酸は、ポルフィリンの
前駆体であるが、ポルフィリン構造を有する酵素の生成
の反応に寄与する原料の１つを添加しても、他の条件に
変化がなければ最終的な生成量は増加しないから、本発
明の微生物の酵素生成促進剤は、単に原料の１つを添加
したものとは異なり、当業者が容易に想到し得るもので
はない。
【００１２】本発明において、酵素を生成する微生物の
培養方法は、特に制限されず、微生物の種類、目的とす
る酵素等によって、培地組成、培養温度、培養期間など
それぞれの最適値に設定すればよい。また、微生物の培
養液に添加する５−アミノレブリン酸等は、目的の酵素
と微生物によって適宜最適な添加量と添加濃度を設定す
ることができるが、通常、培養液中の濃度が０．１〜１
０mM、特に１〜５mMとなるように添加するのが好まし
い。また、５−アミノレブリン酸生産菌の発酵液を用い
る場合も、５−アミノレブリン酸濃度が前記範囲内にな
るように添加するのが好ましい。５−アミノレブリン酸
等の添加時期は、目的の酵素と微生物によって適宜最適
な添加時期を選択することができるが、通常、目的とす
る酵素が生成する１時間から５日前であるのが好まし
い。
培養方法は、特に制限されず、微生物の種類、目的とす
る酵素等によって、培地組成、培養温度、培養期間など
それぞれの最適値に設定すればよい。また、微生物の培
養液に添加する５−アミノレブリン酸等は、目的の酵素
と微生物によって適宜最適な添加量と添加濃度を設定す
ることができるが、通常、培養液中の濃度が０．１〜１
０mM、特に１〜５mMとなるように添加するのが好まし
い。また、５−アミノレブリン酸生産菌の発酵液を用い
る場合も、５−アミノレブリン酸濃度が前記範囲内にな
るように添加するのが好ましい。５−アミノレブリン酸
等の添加時期は、目的の酵素と微生物によって適宜最適
な添加時期を選択することができるが、通常、目的とす
る酵素が生成する１時間から５日前であるのが好まし
い。
【００１３】例えば、微生物がファネロカエテ クリソ
スポリウムであり、酵素がマンガンペルオキシダーゼで
ある場合、実施例１に示したような液体培地でファネロ
カエテ クリソスポリウムを３０℃で静置培養し、培養
２〜７日目に１〜５mMの５−アミノレブリン酸を添加す
ると、５−アミノレブリン酸添加から３〜２０日後に通
常の２倍から１０倍のマンガンペルオキシダーゼが得ら
れる。また、微生物がアスペルギルス ニガーであり、
酵素がカタラーゼである場合、実施例２に示した培地３
でアスペルギルス ニガーを静置培養し、培養１〜７日
目に１〜５mMの５−アミノレブリン酸を添加すると、５
−アミノレブリン酸添加から１〜１０日後に通常の２倍
から１０倍のカタラーゼが得られる。
スポリウムであり、酵素がマンガンペルオキシダーゼで
ある場合、実施例１に示したような液体培地でファネロ
カエテ クリソスポリウムを３０℃で静置培養し、培養
２〜７日目に１〜５mMの５−アミノレブリン酸を添加す
ると、５−アミノレブリン酸添加から３〜２０日後に通
常の２倍から１０倍のマンガンペルオキシダーゼが得ら
れる。また、微生物がアスペルギルス ニガーであり、
酵素がカタラーゼである場合、実施例２に示した培地３
でアスペルギルス ニガーを静置培養し、培養１〜７日
目に１〜５mMの５−アミノレブリン酸を添加すると、５
−アミノレブリン酸添加から１〜１０日後に通常の２倍
から１０倍のカタラーゼが得られる。
【００１４】
【発明の効果】本発明によれば、微生物による酵素の生
成を大幅に増大させることができ、該酵素を効率良く採
取することが可能である。
成を大幅に増大させることができ、該酵素を効率良く採
取することが可能である。
【００１５】
【実施例】次に、実施例を挙げて本発明を更に説明する
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００１６】参考例１ 表１に示す組成の培地１を２００ml調製して５００ml容
の浸透フラスコに加え、これにロドバクター セファロ
イデスCR-0072009株を植菌し、暗所、３２℃で４８時間
往復振とう培養した。培養後、５０００ｇで１０分間遠
心して菌体を集め、湿菌体重量が０．５ｇ／１０mlとな
るように培地２（表２）に懸濁させ、２１mmの試験管に
３mlずつ分注した。このようにして得られた試験管を暗
所、３２℃で往復振とう培養し、２０時間後の培養液中
の５−アミノレブリン酸を岡山らの方法（CLINICAL CHE
MISTRY, Vol.36, No.8, p-1494, 1990）で測定した。そ
の結果、５−アミノレブリン酸は、３１．０mMであっ
た。これを、０．２２μｍのポアサイズのフィルターに
通し、５−アミノレブリン酸発酵液を得た。
の浸透フラスコに加え、これにロドバクター セファロ
イデスCR-0072009株を植菌し、暗所、３２℃で４８時間
往復振とう培養した。培養後、５０００ｇで１０分間遠
心して菌体を集め、湿菌体重量が０．５ｇ／１０mlとな
るように培地２（表２）に懸濁させ、２１mmの試験管に
３mlずつ分注した。このようにして得られた試験管を暗
所、３２℃で往復振とう培養し、２０時間後の培養液中
の５−アミノレブリン酸を岡山らの方法（CLINICAL CHE
MISTRY, Vol.36, No.8, p-1494, 1990）で測定した。そ
の結果、５−アミノレブリン酸は、３１．０mMであっ
た。これを、０．２２μｍのポアサイズのフィルターに
通し、５−アミノレブリン酸発酵液を得た。
【００１７】
【表１】
【００１８】
【表２】
【００１９】実施例１ （１）９０mm平板寒天培地（グルコース１％、寒天１．
５％、Salt液Ａ（表３）１００ml／Ｌ、酢酸ナトリウム
緩衝液５．０mM、酒石酸アンモニウム１２mM）で７日間
生育したファネロカエテ クリソスポリウム（Phaneroc
haete chrysosporium:ATCC-24275）菌糸を５０mlの滅菌
水とともにホモジナイズし、菌糸懸濁液を調製した。次
に、５本の５０ml容三角フラスコにそれぞれ液体培地
（グルコース１％、Salt液Ａ（表３）１００ml／Ｌ、酢
酸ナトリウム緩衝液５．０mM、酒石酸アンモニウム１．
２mM、ジメチルコハク酸２０mM、pH６．０）１０mlを調
製し、上記菌糸懸濁液２mlを添加した。３０℃で４日間
静置培養し、菌体がマット状になったところで、５本の
三角フラスコのうちの４本に、２０mMの濃度で調製し
０．２２μｍのポアサイズのフィルターを通して滅菌し
た５−アミノレブリン酸塩酸塩の溶液を、それぞれ３．
０、１．３、０．６５ml添加し（培養液中の濃度はそれ
ぞれ４mM、２mM、１mM）、培養を続けた。培養液中のマ
ンガンペルオキシダーゼ活性を経時的に測定した。マン
ガンペルオキシダーゼ活性の測定は、５０mMのマロン酸
緩衝液（pH４．５）に、０．５mMの硫酸マンガン、０．
１mMの過酸化水素を含む反応液２mlに、上記の遠心分離
により除菌した培養液１０μｌを加え、３０℃で１０分
間反応させた後のＭｎ3+−マロン酸複合体に由来する２
７０nmの吸光度（吸光係数＝１１．６mM-1）を測定し
た。結果を図１に示す。
５％、Salt液Ａ（表３）１００ml／Ｌ、酢酸ナトリウム
緩衝液５．０mM、酒石酸アンモニウム１２mM）で７日間
生育したファネロカエテ クリソスポリウム（Phaneroc
haete chrysosporium:ATCC-24275）菌糸を５０mlの滅菌
水とともにホモジナイズし、菌糸懸濁液を調製した。次
に、５本の５０ml容三角フラスコにそれぞれ液体培地
（グルコース１％、Salt液Ａ（表３）１００ml／Ｌ、酢
酸ナトリウム緩衝液５．０mM、酒石酸アンモニウム１．
２mM、ジメチルコハク酸２０mM、pH６．０）１０mlを調
製し、上記菌糸懸濁液２mlを添加した。３０℃で４日間
静置培養し、菌体がマット状になったところで、５本の
三角フラスコのうちの４本に、２０mMの濃度で調製し
０．２２μｍのポアサイズのフィルターを通して滅菌し
た５−アミノレブリン酸塩酸塩の溶液を、それぞれ３．
０、１．３、０．６５ml添加し（培養液中の濃度はそれ
ぞれ４mM、２mM、１mM）、培養を続けた。培養液中のマ
ンガンペルオキシダーゼ活性を経時的に測定した。マン
ガンペルオキシダーゼ活性の測定は、５０mMのマロン酸
緩衝液（pH４．５）に、０．５mMの硫酸マンガン、０．
１mMの過酸化水素を含む反応液２mlに、上記の遠心分離
により除菌した培養液１０μｌを加え、３０℃で１０分
間反応させた後のＭｎ3+−マロン酸複合体に由来する２
７０nmの吸光度（吸光係数＝１１．６mM-1）を測定し
た。結果を図１に示す。
【００２０】
【表３】
【００２１】
【表４】
【００２２】（２）また、（１）と同様にファネロカエ
テ クリソスポリウム（Phanerochaete chrysosporium:
ATCC-24275）を５０ml容三角フラスコにて、３０℃で４
日間静置培養し、菌体がマット状になったところに、参
考例１で得られた５−アミノレブリン酸発酵液０．５ml
添加した。同様にして、培養液中のマンガンペルオキシ
ダーゼ活性を経時的に測定した。結果を図１に示す。
テ クリソスポリウム（Phanerochaete chrysosporium:
ATCC-24275）を５０ml容三角フラスコにて、３０℃で４
日間静置培養し、菌体がマット状になったところに、参
考例１で得られた５−アミノレブリン酸発酵液０．５ml
添加した。同様にして、培養液中のマンガンペルオキシ
ダーゼ活性を経時的に測定した。結果を図１に示す。
【００２３】図１の結果から明らかなように、５−アミ
ノレブリン酸塩酸塩又は５−アミノレブリン酸発酵液を
添加すると、ファネロカエテ クリソスポリウムによる
マンガンペルオキシダーゼの活性が著しく向上した。通
常、単位当たりの酵素の分子活性は一定と考えられるか
ら、図１に示す酵素活性の上昇は酵素の生成量の増加を
示すものと言える。
ノレブリン酸塩酸塩又は５−アミノレブリン酸発酵液を
添加すると、ファネロカエテ クリソスポリウムによる
マンガンペルオキシダーゼの活性が著しく向上した。通
常、単位当たりの酵素の分子活性は一定と考えられるか
ら、図１に示す酵素活性の上昇は酵素の生成量の増加を
示すものと言える。
【００２４】実施例２ ９０mmの平板寒天培地（培地３（表５）に１．５％の寒
天を加えたもの）で３日間生育したアスペルギルス ニ
ガー（Aspergillus niger:ATCC 16888）菌糸を５０mlの
滅菌水とともにホモジナイズし、菌糸懸濁液を調製し
た。次に、２つの５０ml容三角フラスコにそれぞれ培地
３を１０ml調製し、上記菌糸懸濁液２mlを添加した。３
０℃で２日間静置培養し、菌体がマット状になったとこ
ろで、２つの三角フラスコの一方に、２０mMの濃度で調
製し０．２２μｍのポアサイズのフィルターを通して滅
菌した５−アミノレブリン酸塩酸塩の溶液を０．６５ml
添加した。５−アミノレブリン酸添加後１５日後に、菌
糸を集め、菌糸湿重量１ｇ当たり、海砂１ｇを加え乳鉢
で菌糸を破砕し無細胞抽出液を調製し、カタラーゼ活性
を調べた。カタラーゼ活性の測定は定法（酵素利用ハン
ドブック、地人書館、404-410)により行った。結果を表
６に示す。
天を加えたもの）で３日間生育したアスペルギルス ニ
ガー（Aspergillus niger:ATCC 16888）菌糸を５０mlの
滅菌水とともにホモジナイズし、菌糸懸濁液を調製し
た。次に、２つの５０ml容三角フラスコにそれぞれ培地
３を１０ml調製し、上記菌糸懸濁液２mlを添加した。３
０℃で２日間静置培養し、菌体がマット状になったとこ
ろで、２つの三角フラスコの一方に、２０mMの濃度で調
製し０．２２μｍのポアサイズのフィルターを通して滅
菌した５−アミノレブリン酸塩酸塩の溶液を０．６５ml
添加した。５−アミノレブリン酸添加後１５日後に、菌
糸を集め、菌糸湿重量１ｇ当たり、海砂１ｇを加え乳鉢
で菌糸を破砕し無細胞抽出液を調製し、カタラーゼ活性
を調べた。カタラーゼ活性の測定は定法（酵素利用ハン
ドブック、地人書館、404-410)により行った。結果を表
６に示す。
【００２５】
【表５】
【００２６】
【表６】
【００２７】表６の結果から明らかなように、５−アミ
ノレブリン酸を添加すると、カタラーゼの活性が著しく
向上し、カタラーゼの生成量が増加したものと認められ
た。
ノレブリン酸を添加すると、カタラーゼの活性が著しく
向上し、カタラーゼの生成量が増加したものと認められ
た。
【００２８】実施例３ （１） ９０mm平板寒天培地（グルコース１％、寒天
１．５％、Salt液Ａ（表３）１００ml／ｌ、酢酸ナトリ
ウム緩衝液５．０mM、酒石酸アンモニウム１２mM）で７
日間生育したファネロカエテ クリソスポリウム（Phan
erochaete chrysosporium:ATCC-24275）菌糸を５０mlの
滅菌水とともにホモジナイズし、菌糸懸濁液を調製し
た。次に、５本の５０ml容三角フラスコにそれぞれ液体
培地（グルコース１％、Salt液Ａ（表３）１００ml／
Ｌ、酢酸ナトリウム緩衝液５．０mM、酒石酸アンモニウ
ム１．２mM、ジメチルコハク酸２０mM、pH６．０）１０
mlを調製し、上記菌糸懸濁液２mlを添加した。３０℃で
５日間静置培養し、菌体がマット状になったところで、
５本の三角フラスコに１mMになるようにベラトリルアル
コールを添加し、そのうち４本に、２０mMの濃度で調製
し０．２２μｍのポアサイズのフィルターを通して滅菌
した５−アミノレブリン酸塩酸塩の溶液をそれぞれ３．
０、１．３、０．６５ml（培養液中の濃度は、それぞれ
４mM、２mM、１mM）添加し、培養を続けた。培養液中の
リグニンペルオキシダーゼ活性を経時的に測定した。リ
グニンペルオキシダーゼ活性の測定は、２０mMのコハク
酸緩衝液（pH３．０）に０．５mMのベラトリルアルコー
ルと０．１mM過酸化水素を含む反応液２mlに、上記の遠
心分離により除菌した培養液１０μｌを加え、３０℃で
１０分間反応させ反応後のベラトリルアルデヒドに由来
する３１０nmの吸光度（吸光係数＝９．３mM-1）を測定
した。結果を図２に示す。
１．５％、Salt液Ａ（表３）１００ml／ｌ、酢酸ナトリ
ウム緩衝液５．０mM、酒石酸アンモニウム１２mM）で７
日間生育したファネロカエテ クリソスポリウム（Phan
erochaete chrysosporium:ATCC-24275）菌糸を５０mlの
滅菌水とともにホモジナイズし、菌糸懸濁液を調製し
た。次に、５本の５０ml容三角フラスコにそれぞれ液体
培地（グルコース１％、Salt液Ａ（表３）１００ml／
Ｌ、酢酸ナトリウム緩衝液５．０mM、酒石酸アンモニウ
ム１．２mM、ジメチルコハク酸２０mM、pH６．０）１０
mlを調製し、上記菌糸懸濁液２mlを添加した。３０℃で
５日間静置培養し、菌体がマット状になったところで、
５本の三角フラスコに１mMになるようにベラトリルアル
コールを添加し、そのうち４本に、２０mMの濃度で調製
し０．２２μｍのポアサイズのフィルターを通して滅菌
した５−アミノレブリン酸塩酸塩の溶液をそれぞれ３．
０、１．３、０．６５ml（培養液中の濃度は、それぞれ
４mM、２mM、１mM）添加し、培養を続けた。培養液中の
リグニンペルオキシダーゼ活性を経時的に測定した。リ
グニンペルオキシダーゼ活性の測定は、２０mMのコハク
酸緩衝液（pH３．０）に０．５mMのベラトリルアルコー
ルと０．１mM過酸化水素を含む反応液２mlに、上記の遠
心分離により除菌した培養液１０μｌを加え、３０℃で
１０分間反応させ反応後のベラトリルアルデヒドに由来
する３１０nmの吸光度（吸光係数＝９．３mM-1）を測定
した。結果を図２に示す。
【００２９】（２）用いる微生物をコリオラス ベルジ
カラー（Coriolus versicolor:IFO-30340)とし、三角フ
ラスコの液体培地組成が（グルコース１％、Salt液Ａ
（表３）１００ml／ｌ、酢酸ナトリウム緩衝液５．０m
M、酒石酸アンモニウム１２mM、ジメチルコハク酸２０m
M、pH６．０）とする以外は（１）と同様に行った。結
果を図３に示す。
カラー（Coriolus versicolor:IFO-30340)とし、三角フ
ラスコの液体培地組成が（グルコース１％、Salt液Ａ
（表３）１００ml／ｌ、酢酸ナトリウム緩衝液５．０m
M、酒石酸アンモニウム１２mM、ジメチルコハク酸２０m
M、pH６．０）とする以外は（１）と同様に行った。結
果を図３に示す。
【００３０】図２及び図３の結果から明らかなように５
−アミノレブリン酸を添加すると、リグニンペルオキシ
ダーゼの活性が著しく向上し、リグニンペルオキシダー
ゼの生成量が増加したものと認められた。
−アミノレブリン酸を添加すると、リグニンペルオキシ
ダーゼの活性が著しく向上し、リグニンペルオキシダー
ゼの生成量が増加したものと認められた。
【図１】実施例１において、ファネロカエテ クリソス
ポリウムの培養液中のマンガンペルオキシダーゼ活性を
経時的に測定した結果を示す図である。
ポリウムの培養液中のマンガンペルオキシダーゼ活性を
経時的に測定した結果を示す図である。
【図２】実施例３（１）において、ファネロカエテ ク
リソスポリウムの培養液中のリグニンペルオキシダーゼ
活性を経時的に測定した結果を示す図である。
リソスポリウムの培養液中のリグニンペルオキシダーゼ
活性を経時的に測定した結果を示す図である。
【図３】実施例３（２）において、コリオラス ベルジ
カラーの培養液中のリグニンペルオキシダーゼ活性を経
時的に測定した結果を示す図である。
カラーの培養液中のリグニンペルオキシダーゼ活性を経
時的に測定した結果を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 西川 誠司 埼玉県幸手市権現堂1134−２ 株式会社コ スモ総合研究所研究開発センター内 (72)発明者 堀田 康司 埼玉県幸手市権現堂1134−２ 株式会社コ スモ総合研究所研究開発センター内
Claims (10)
- 【請求項１】 ５−アミノレブリン酸又は５−アミノレ
ブリン酸のエステル、アミド若しくは塩を有効成分とす
る微生物の酵素生成促進剤。 - 【請求項２】 有効成分が、５−アミノレブリン酸を含
有する５−アミノレブリン酸生産菌の発酵液である請求
項１記載の微生物の酵素生成促進剤。 - 【請求項３】 微生物が、コリオラス属（Coriolus）、
ファネロカエテ属（Phanerochaete）、アスペルギルス
属（Aspergillus）、ルートロータス属（Pleutrotu
s）、ブジェルカンデラ属（Bjerkandera）、コプリヌス
属（Coprinus）、キャンディダ属（Candida）又はピク
ノポーラス属（Pycnoporus）に属するものである請求項
１又は２記載の微生物の酵素生成促進剤。 - 【請求項４】 生成する酵素が、ポルフィリン構造を有
するものである請求項１又は２記載の微生物の酵素生成
促進剤。 - 【請求項５】 生成する酵素が、カタラーゼ又はペルオ
キシダーゼである請求項１又は２記載の微生物の酵素生
成促進剤。 - 【請求項６】 ５−アミノレブリン酸又は５−アミノレ
ブリン酸のエステル、アミド若しくは塩を、微生物の培
養液に添加することを特徴とする、該微生物の酵素生成
促進方法。 - 【請求項７】 ５−アミノレブリン酸生産菌の発酵液
を、微生物の培養液に添加することを特徴とする、該微
生物の酵素生成促進方法。 - 【請求項８】 微生物が、コリオラス属（Coriolus）、
ファネロカエテ属（Phanerochaete）、アスペルギルス
属（Aspergillus）、ルートロータス属（Pleutrotu
s）、ブジェルカンデラ属（Bjerkandera）、コプリヌス
属（Coprinus）、キャンディダ属（Candida）又はピク
ノポーラス属（Pycnoporus）に属するものである請求項
６又は７記載の微生物の酵素生成促進方法。 - 【請求項９】 生成する酵素が、ポルフィリン構造を有
するものである請求項６又は７記載の微生物の酵素生成
促進方法。 - 【請求項１０】 生成する酵素が、カタラーゼ又はペル
オキシダーゼである請求項６又は７記載の微生物の酵素
生成促進方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18820997A JP3999848B2 (ja) | 1997-07-14 | 1997-07-14 | 微生物の酵素生成促進剤及び促進方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18820997A JP3999848B2 (ja) | 1997-07-14 | 1997-07-14 | 微生物の酵素生成促進剤及び促進方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1128084A true JPH1128084A (ja) | 1999-02-02 |
| JP3999848B2 JP3999848B2 (ja) | 2007-10-31 |
Family
ID=16219686
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18820997A Expired - Fee Related JP3999848B2 (ja) | 1997-07-14 | 1997-07-14 | 微生物の酵素生成促進剤及び促進方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3999848B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7247655B2 (en) | 1995-03-10 | 2007-07-24 | Photocure Asa | Esters of 5-aminolevulinic acid as photosensitizing agents in photochemotherapy |
| US7287646B2 (en) | 1995-03-10 | 2007-10-30 | Photocure Asa | Esters of 5-aminolevulinic acid and their use as photosensitizing compounds in photochemotherapy |
| JP2007319113A (ja) * | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Kyushu Univ | マンガンペルオキシダーゼの製造法 |
| US7530461B2 (en) | 1995-03-10 | 2009-05-12 | Photocure Asa | Esters of 5-aminolevulinic acid as photosensitizing agents in photochemotherapy |
| JP2018070579A (ja) * | 2016-10-25 | 2018-05-10 | 曹 榮華 | 皮膚の美白効果を有する酸素供給材料 |
-
1997
- 1997-07-14 JP JP18820997A patent/JP3999848B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7247655B2 (en) | 1995-03-10 | 2007-07-24 | Photocure Asa | Esters of 5-aminolevulinic acid as photosensitizing agents in photochemotherapy |
| US7287646B2 (en) | 1995-03-10 | 2007-10-30 | Photocure Asa | Esters of 5-aminolevulinic acid and their use as photosensitizing compounds in photochemotherapy |
| US7530461B2 (en) | 1995-03-10 | 2009-05-12 | Photocure Asa | Esters of 5-aminolevulinic acid as photosensitizing agents in photochemotherapy |
| US7850008B2 (en) | 1995-03-10 | 2010-12-14 | Photocure Asa | Esters of 5-aminolevulinic acid as photosensitizing agents in photochemotherapy |
| US8410172B2 (en) | 1995-03-10 | 2013-04-02 | Photocure Asa | Esters of 5-aminolevulinic acid as photosensitizing agents in photochemotherapy |
| JP2007319113A (ja) * | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Kyushu Univ | マンガンペルオキシダーゼの製造法 |
| JP2018070579A (ja) * | 2016-10-25 | 2018-05-10 | 曹 榮華 | 皮膚の美白効果を有する酸素供給材料 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3999848B2 (ja) | 2007-10-31 |
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