FR2600077A1 - Procede de production de l'enzyme ligninolytique par culture du champignon phanerochaete chrysosporium - Google Patents
Procede de production de l'enzyme ligninolytique par culture du champignon phanerochaete chrysosporium Download PDFInfo
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Abstract
L'INVENTION CONCERNE L'OBTENTION D'ENZYME LIGNINOLYTIQUE PAR CULTURE DE PHANEROCHAETE CHRYSOSPORIUM. CE PROCEDE CONSISTE A CULTIVER LEDIT CHAMPIGNON SUR UN MILIEU DE CULTURE DE BASE CONTENANT UNE SOURCE D'AZOTE, DE CARBONE ET DE SELS MINERAUX ASSIMILABLES, LEDIT MILIEU DE CULTURE ETANT SUPPLEMENTE AVEC UN AGENT STIMULANT CHOISI PARMI LES ACIDES GRAS INSATURES ET LES ACIDES AMINES NATURELS ET A ISOLER L'ENZYME CONTENUE DANS LE SURNAGEANT DE CULTURE.
Description
Procédé de production de l'enzyme ligninolytique par culture du champignon Phanerochaete chrysosporium
La présente invention concerne l'obtention de l'enzyme ligninolytique, qui convient pour la délignification par voie biologique des sous-produits lignocellulosiques agricoles et forestiers.
La présente invention concerne l'obtention de l'enzyme ligninolytique, qui convient pour la délignification par voie biologique des sous-produits lignocellulosiques agricoles et forestiers.
Par "enzyme ligninolytique", on désigne dans la presente description l'enzyme appelée "ligninase" par
TIEN et KIRK (Proc. Nath. Acad. Sci., 81, 2290, 1984) ou "lignine-peroxydase" par d'autres auteurs.
TIEN et KIRK (Proc. Nath. Acad. Sci., 81, 2290, 1984) ou "lignine-peroxydase" par d'autres auteurs.
La présence de lignine incrustant les polyosides de la paroi végétale est le principal facteur limitant l'hydrolyse enzymatique en sucres simples de ces polymères.
Certains traitements physiques ou chimiques modifiant l'organisation des polymeres de la paroi végétale permettent une amélioration des rendements- d?hydrolyse enzyma- tique, cependant leur coût reste élevé. L'utilisation de microorganismes ou d'enzymes dégradant la lignine est actuellement étudiée dans plusieurs laboratoires en vue de la délignification des sous-produits lignocellulosiques agricoles ou forestiers préalablement a l'hydrolyse enzymatique de la cellulose et des hémicelluloses.
Les microorganismes capables de dégrader la lignine et susceptibles d'être utilisés pour la délignification de sous-produits agricoles lignocellulosiques sont des champignons basidiomycetes.
Les enzymes responsables de la dépolymérisation de la lignine chez ces champignons sont encore mai connues.
En 1983, une ligninase a été découverte par des chercheurs américains chez le champignon Phanerochaete chrysosporium.
Cette enzyme catalyse plusieurs réactions d'attaque oxydative de modèles moléculaires de type lignine ou de lignine macromoléculaire d'Epicéa ou de Bouleau. A cet effet, on peut se référer à l'article de TIEN et KIRK dans Science, 221, p. 661-663 (1983).
La possibilité- d'utiliser les enzymes ligninolytiques produites par cette souche implique de pouvoir les produire a grande échelle. Actuellement, les rendements de production de ces enzymes sont très faibles (quelques mg/l).
Une des raisons de ces faibles rendements réside dans les
particularités de la régulation du système ligninolytique
chez le champignon Phanerochaete chrysosporium. Il a été
montré, en effet ce le système ligninolytique de ce
champignon n'est as produit pendant la phase primaire
de croissance, mais après l'arrêt de la croissance, lors
que le champignon est en carence nutritionnelle.
particularités de la régulation du système ligninolytique
chez le champignon Phanerochaete chrysosporium. Il a été
montré, en effet ce le système ligninolytique de ce
champignon n'est as produit pendant la phase primaire
de croissance, mais après l'arrêt de la croissance, lors
que le champignon est en carence nutritionnelle.
Afin d'augmenter la production d'enzyme ligninoly
tique, on a déjà proposé d'ajouter au milieu de culture
du champignon un détergent, par exemple du "Tween 80"
(polyoxyethylène monooléate de sorbitan) du "Tween 20" ou
du 3-/(3-colamidopropyl) diméthylammonio 7 1-propanesulfonate
ou "CHAPES. Une telle addition de détergent aux cultures
submergées et agitées permet de favoriser le développe
ment d'une activité ligninase comparable a celle qui est
couramment obtenue en culture stationnaire. (JAGER et al.
tique, on a déjà proposé d'ajouter au milieu de culture
du champignon un détergent, par exemple du "Tween 80"
(polyoxyethylène monooléate de sorbitan) du "Tween 20" ou
du 3-/(3-colamidopropyl) diméthylammonio 7 1-propanesulfonate
ou "CHAPES. Une telle addition de détergent aux cultures
submergées et agitées permet de favoriser le développe
ment d'une activité ligninase comparable a celle qui est
couramment obtenue en culture stationnaire. (JAGER et al.
Applied and Environmental Microbiology Nov. 85, p. 1274
1278).
1278).
D'autres travaux ont permis l'isolement de souches
de Phanerochaete chrssosporium altérées dans la régulation
du système ligninolytique par comparaison aux souches pré
cédemment décrites, a savoir les souches ME-446 (ATCC
34541) et BKM-F-1767 (ATCC 24 725). Ces nouvelles souches
sont les souches déposées a la Collection Nationale de
Culture deMicroorganismes (C.N.C.M.) sous les numéros
I-398 et I-399 et décrites dans la demande de brevet français
84 19 028 au nom de la demanderesse. Ces souches produisent
une activité ligninase considérablement plus éle
vée que la souche de référence BKM-F-1767 chez laquelle
l'enzyme a été découverte.Par ailleurs, l'enzyme est pro
duite dans des conditions où ni l'azote ni le carbone ne sont limitants contraitement a la souche NE-446pour laquelle la lignase n'est produite que lorsque le champignon se trouve en carence nutritionnelle.
de Phanerochaete chrssosporium altérées dans la régulation
du système ligninolytique par comparaison aux souches pré
cédemment décrites, a savoir les souches ME-446 (ATCC
34541) et BKM-F-1767 (ATCC 24 725). Ces nouvelles souches
sont les souches déposées a la Collection Nationale de
Culture deMicroorganismes (C.N.C.M.) sous les numéros
I-398 et I-399 et décrites dans la demande de brevet français
84 19 028 au nom de la demanderesse. Ces souches produisent
une activité ligninase considérablement plus éle
vée que la souche de référence BKM-F-1767 chez laquelle
l'enzyme a été découverte.Par ailleurs, l'enzyme est pro
duite dans des conditions où ni l'azote ni le carbone ne sont limitants contraitement a la souche NE-446pour laquelle la lignase n'est produite que lorsque le champignon se trouve en carence nutritionnelle.
Bien que l'enzyme soit produite avec ces nouvelles souches dans des conditions non limitantes en azote et en carbone, les rendements obtenus sont assez faibles aussi bien sur milieu de culture de base que sur milieu de milieu additionné de détergent.
On a maintenant trouvé de fa,on surprenante que lton pouvait obtenir l'enzyme lig-inolytique avec des rendements élevés en cultivant le champignon Phanerochaete chrysosporium sur un milieu de culture de base supplémenté avec un agent stimulant choisi parmi les acides gras insaturés, les acides aminés naturels et leurs mélanges.
Par milieu de culture de base on désigne dans la présente description les milieux de culture contenant une source d'azote, de carbone, et de sels minéraux assimilables. Ces milieux peuvent être carencés ou non en source d'azote ou de carbone selon la nature de la souche utilisée.
Comme source de carbone assimilable, on utilise par exemple le glucose, le mannose, l'amidon, le melibiose, le mannitol, le xylose, le maltose, l'adonitol, l'arabitol, le fructose, le sorbitol, le raffinose, le xylitol, le D(+)trehalose ou le glycérol.
La source d'azote assimilable peut être par exemple l'asparagine, le nitrate d'ammonium ou le tartrate d'ammonium.
Quant aux sels minéraux ceux-ci peuvent être par exemple le citrate de fer, KH2P04,ZnS04, Mins04, CaCl2,
CuSO4, NaCl, FeS04, CoCO4, ZnS04, AlK(S04)2,
H3B03, Na2MoO4, MgS04
Le glycérol constitue la source de carbone préférée selon l'invention.
CuSO4, NaCl, FeS04, CoCO4, ZnS04, AlK(S04)2,
H3B03, Na2MoO4, MgS04
Le glycérol constitue la source de carbone préférée selon l'invention.
L'agent stimulant mis en oeuvre selon 1' invention est soit un acide gras insaturé soit un acide aminé. On
a en effet trouvé que l'addition d'un tel agent stimulant
au milieu de culture de base permet d'accroître considé
rablement la production en enzyme ligninolytique.
a en effet trouvé que l'addition d'un tel agent stimulant
au milieu de culture de base permet d'accroître considé
rablement la production en enzyme ligninolytique.
Des exemples d'acides gras insaturés qui conviennent
aux fins de l'invention sont l'acide oléique, l'acide
linoléique, l'acide palmitoléique, l'acide arachidonique.
aux fins de l'invention sont l'acide oléique, l'acide
linoléique, l'acide palmitoléique, l'acide arachidonique.
Parmi les acides aminés naturels, la sérine, la
thréonine, l'isoleucine, la glycine, la valine et la
tyrosine conviennent aux fins de l'invention. Les acides
aminés particulièrement préférés sont l'isoleucine, la
sérine, la thréonine, là glycine.
thréonine, l'isoleucine, la glycine, la valine et la
tyrosine conviennent aux fins de l'invention. Les acides
aminés particulièrement préférés sont l'isoleucine, la
sérine, la thréonine, là glycine.
Il est avantageux d'Emulsifier les acides gras
insaturés pour permettre leur meilleure répartition au
sein du milieu de culture.
insaturés pour permettre leur meilleure répartition au
sein du milieu de culture.
La quantité d'agent stimulant à mettre en oeuvre
varie en fonction de la nature de celui-ci et doit être
de préférence au voisinage de la concentration produisant
le maximum d'enzyme.
varie en fonction de la nature de celui-ci et doit être
de préférence au voisinage de la concentration produisant
le maximum d'enzyme.
La détermination de cette concentration maximale
peut être aisément effectuée par le test qui consiste
à suivre la production d'enzyme ligninolytique dans le
milieu extracellulaire de culture de Phanerochaete
chrysosporium en fonction du temps et à différentes con
centrations de l'agent stimulant.
peut être aisément effectuée par le test qui consiste
à suivre la production d'enzyme ligninolytique dans le
milieu extracellulaire de culture de Phanerochaete
chrysosporium en fonction du temps et à différentes con
centrations de l'agent stimulant.
Par ce test, on a déterminé que la concentration
maximale était d'environ 400 mg/l pour l'acide oléique
émulsifié, d'environ 800 mg/l pour l'acide oléique seul
et d'environ 6,5 mg/l pour l'isoleucine.
maximale était d'environ 400 mg/l pour l'acide oléique
émulsifié, d'environ 800 mg/l pour l'acide oléique seul
et d'environ 6,5 mg/l pour l'isoleucine.
Les conditions de culture sont les mêmes que celles
décrites dans le brevet FR 84 19 028.
décrites dans le brevet FR 84 19 028.
On prépare d'abord un inoculum végétatif en ense
mençant une petite quantité du milieu de culture avec
une suspension conidiale du champignon.
mençant une petite quantité du milieu de culture avec
une suspension conidiale du champignon.
On cultive alors ce champignon sous conditions d' aérobiose ou de préférence sous conditions d'oxygène, à une température comprise entre 280C et 400C de préférence à 37 C et sur différents milieux nutritifs contenant une source d'azote, une source de carbone et des sels minéraux. Les cultures peuvent être agitées ou statiques.
Avant l'inoculation par le microorganisme, il est
souhaitable d'ajuster le pH du milieu de culture à 4,5-5.
souhaitable d'ajuster le pH du milieu de culture à 4,5-5.
On utilise, à cet effet un tampon diméthyl-2,2' succinate de sodium ajusté avec un hydroxyde de métal alcalin par exemple l'hydroxyde de potassium.
En général, une production significative d'enzyme ligninolytique au sein du surnageant a lieu du 3ème au 8ème jour avec un maximum au 3ème ou 7ème jour.
L'enzyme ligninolytique contenue dans les surnageants des cultures des microorganismes de l'invention peut être isolée notamment par centrifugation, dialyse et chromatographie par exemple sur colonne de gel d'aragose.
L'enzyme ainsi obtenue peut être alors conservée après lyophilisation.
L'invention va être maintenant décrite en détail par les exemples non limitatifs ci-après
EXEMPLE 1 Preparation de l'enzyme ligninolytique ,Dar culture de
Phanerochaete chrysosporium sur milleu supplémenté en
acide oléigue a) Surnageant de culture contenant ltenzyme ligninolytique
On a maintenu P. chrysosporium C.N.C.M. 1-398 à 40C sur des plaques d'agar à 2% de malt.
EXEMPLE 1 Preparation de l'enzyme ligninolytique ,Dar culture de
Phanerochaete chrysosporium sur milleu supplémenté en
acide oléigue a) Surnageant de culture contenant ltenzyme ligninolytique
On a maintenu P. chrysosporium C.N.C.M. 1-398 à 40C sur des plaques d'agar à 2% de malt.
D'autre part, on a préparé un inoculum, consistant en suspensions conidiales filtrées sur laine de verre, en utilisant le milieu de sporulation décrit dans Applied and Environmental Microbiology, Vol. 35, No.6 Dp. 1223
1225 (1978).
1225 (1978).
On a réalisé ensuite des cultures (1% de glycérol et 26 mM en azote) dans des flacons Erlenmeyer de 150 ml contenant 10 ml du milieu de base ayant la composition ci-après
gil
Source de carbone
Glycérol 10
Source d'azote
Asparagine 1 4 0,5
Sels minéraux WH2P04 0,2
MgS04, 7H20 0,05
CaCl2, 2H2 O 0,0132
MnS04, H20 0,035
Citrate de fer - 0,084 ZnSO4, 2 0,0462
CuSO4, 5H20 0,007
CoCl2, 6H20 0,007
Vitamine
Thiamine 0,0025
Extrait de levure 0,2
Tampon
Diméthyl-2,2' succinate de sodium 1,46
Alcool veratrylique 0,4 mmole/l et on a ajusté à pH 4,5-5 avec de l'hydroxyde de potassium.
gil
Source de carbone
Glycérol 10
Source d'azote
Asparagine 1 4 0,5
Sels minéraux WH2P04 0,2
MgS04, 7H20 0,05
CaCl2, 2H2 O 0,0132
MnS04, H20 0,035
Citrate de fer - 0,084 ZnSO4, 2 0,0462
CuSO4, 5H20 0,007
CoCl2, 6H20 0,007
Vitamine
Thiamine 0,0025
Extrait de levure 0,2
Tampon
Diméthyl-2,2' succinate de sodium 1,46
Alcool veratrylique 0,4 mmole/l et on a ajusté à pH 4,5-5 avec de l'hydroxyde de potassium.
Ce milieu a été supplémenté avec des quantités variables d'acide oléique émulsifié avec un détergent
(Tween 80). L'émulsification de l'acide oléique a été réalisée en mélangeant sous agitation 0,003 g/l d'acide oléique dans 3ml d'eau distillée avec 0,001 g/l de Tween 80.
(Tween 80). L'émulsification de l'acide oléique a été réalisée en mélangeant sous agitation 0,003 g/l d'acide oléique dans 3ml d'eau distillée avec 0,001 g/l de Tween 80.
On a inoculé les cultures avec approximativement 2,3.10 spores, on a balayé avec de l'oxygène pendant 2 min. Après inoculation-et on a bouché les flacons hermétiquement.
Les cultures ont ensuite été incubées à 370Cet on a obtenu 3 à.4 jours après inoculation un surnageant contenant l'enzyme ligninolytique, l'activité enzymatique maximale se situant vers 4 à 5 jours.
b) Mesure de l'activite enzymatigue dans les surnageants de culture
On a déterminé l'activité ligninase des surnageants de cultures obtenus ci-dessus en mesurant à 35"C l'augmentation de l'absorbance à 310 nm due à l'oxydation de l'alcool vératrylique (ou diméthyoxy-3,4 benzylique) en vératraldéhyde, selon la méthode décrite dans Proc. Natl.
On a déterminé l'activité ligninase des surnageants de cultures obtenus ci-dessus en mesurant à 35"C l'augmentation de l'absorbance à 310 nm due à l'oxydation de l'alcool vératrylique (ou diméthyoxy-3,4 benzylique) en vératraldéhyde, selon la méthode décrite dans Proc. Natl.
Acad. Sci. U.S.A. , Vol. 81, pp. 2280-2284 (1984).
A cet effet, on a employé le même mélange reactionnel que celui de la référence en question à ltexception du peroxyde d'hydrogène que 1 on a utilisé à raison de 0,27mM.
On a défini l'activité enzymatique en unités katal
(kat.) (correspondant à 1 mole de veratraldéhyde formé par
seconde).
(kat.) (correspondant à 1 mole de veratraldéhyde formé par
seconde).
Les rés.ultats obtenus avec l'acide oléique émulsifié sont reportés sur la figure 1 annexée sur laquelle on a porté en ordonnées l'activité ligninase en nkat./ml et en abscisses la concentration en acide oléique (courbe 1).
On a repété le même essai en utilisant de l'acide oléique seul à la place de l'acide oléique émulsifié. Les résultats obtenus sont reportés sur la figure 1 (courbe 2).
A titre de comparaison, on a effectué le même essai en utilisant du "Tween 80" à la place de l'acide oléique.
On notera que le Tween 80 est un détergent qui contient 99 mg/l d'acide oléique. Les résultats obtenus sont également reportés sur la figure 1 (courbe 3).
Ces résultats montrent que la supplémentation du milieu de culture en acide oléique éventuellement émulsifié permet d'obtenir une production importante d'enzyme.
On notera par contre que l'addition de détergent au milieu de culture produit des rendements moins élevés, et qu'à des concentrations supérieures à 700 mg/l le Tween 80 a un effet inhibiteur sur la production d'enzyme.
Bien que le Tween 80 soit un composé contenant une forte proportion d'acide oléique, les résultats reportés sur la figure ! - re que la supplémentation en acide oléique seul n'était pas évidente compte tenu des résultats obtenus avec le Tween 80.
EXEMPLE 2
Production d'enzyme ligninolytigue par culture de
Phanerochaete chrysosporium sur milieu de base supplementé en acide linoléique
On a répété le mode opératoire de l'exemple 1 en supplémentant le milieu de base avec de l'acide linoléique à la place de l'acide oléique. On a obtenu une production de 18,2 nkat/ml pour une concentration en acide linoléique de 400 mg/l.
Production d'enzyme ligninolytigue par culture de
Phanerochaete chrysosporium sur milieu de base supplementé en acide linoléique
On a répété le mode opératoire de l'exemple 1 en supplémentant le milieu de base avec de l'acide linoléique à la place de l'acide oléique. On a obtenu une production de 18,2 nkat/ml pour une concentration en acide linoléique de 400 mg/l.
EXEMPLE 3
Production d'enzyme ligninolytigue par culture de
Phanerochaete chrysosporium sur milieu de base supplementé en acide aminé
On a répété le mode opératoire décrit à l'exemple 1 en utilisant le milieu de culture ci-après et en le supplé- mentant avec un acide aminé choisi parmi l'isoleucine, la sérine, la thréonine ou la glycine.
Production d'enzyme ligninolytigue par culture de
Phanerochaete chrysosporium sur milieu de base supplementé en acide aminé
On a répété le mode opératoire décrit à l'exemple 1 en utilisant le milieu de culture ci-après et en le supplé- mentant avec un acide aminé choisi parmi l'isoleucine, la sérine, la thréonine ou la glycine.
Composition du milieu de culture gil
Source de carbone
Glycérol 10
Source d'azote
Asparagine 1 NH4N03 0,5
Sels minéraux
KH2P04 0,2
MgS04, 7H20 0,05
CaCl2, 2H20 0,0132
MnS04, H20 0,005
Citrate de fer 0,012
ZnSO4, 7H20 0,0066 CuS04, 5H20 0,001 CoC12, 5H20 0,001
Vitamine
Thiamine 0,0025
Tampon
Diméthyl-2,2' succinate de sodium 1,46
L'activité ligninase a été déterminée selon le mode opératoire décrit à l'exemple 1 en fonction du temps en jours.
Source de carbone
Glycérol 10
Source d'azote
Asparagine 1 NH4N03 0,5
Sels minéraux
KH2P04 0,2
MgS04, 7H20 0,05
CaCl2, 2H20 0,0132
MnS04, H20 0,005
Citrate de fer 0,012
ZnSO4, 7H20 0,0066 CuS04, 5H20 0,001 CoC12, 5H20 0,001
Vitamine
Thiamine 0,0025
Tampon
Diméthyl-2,2' succinate de sodium 1,46
L'activité ligninase a été déterminée selon le mode opératoire décrit à l'exemple 1 en fonction du temps en jours.
Les résultats obtenus sont reportés sur les figures 2a, 2b, 2c, 2d, sur lesquelles on a porté en ordonnées l'activité ligninase par mg de mycelium (nkat/mg) et en abscisses le nombres de jours de culture.
Les figures 2a à2d correspondent respectivement aux cultures sur milieu de base supplémenté en
isoleucine figure 2a
sérine figure 2b
thréonine figure 2c
glycine figure 2d.
isoleucine figure 2a
sérine figure 2b
thréonine figure 2c
glycine figure 2d.
Pour chaque figure, les courbes 1 à 4 sont spécifiques des concentrations ci-après
courbe 1 10 lu M
courbe 2 50 M M
courbe 3 200 lu M
courbe 4 1 mM
Comme le montrent ces résultats, on obtient une augmentation de la production d'enzyme ligninolytique pour des concentrations spécifiques en un acide aminé donné, la production ayant lieu en général au bout de a jours de culture.
A titre de comparaison on a effectué la culture de la souche CNCM I-398 sur le même milieu sans addition d'acide aminé. Les résultats obtenus sont reportés sur la figure 2e. La comparaison des courbes 2a à 2d et 2e montrent que la production d'enzyme ligninolytique sur un milieu de culture supplémenté en acide aminé est considérablement augmentée. L'isoleucine est l'acide aminé qui donne la meilleure production.
courbe 1 10 lu M
courbe 2 50 M M
courbe 3 200 lu M
courbe 4 1 mM
Comme le montrent ces résultats, on obtient une augmentation de la production d'enzyme ligninolytique pour des concentrations spécifiques en un acide aminé donné, la production ayant lieu en général au bout de a jours de culture.
A titre de comparaison on a effectué la culture de la souche CNCM I-398 sur le même milieu sans addition d'acide aminé. Les résultats obtenus sont reportés sur la figure 2e. La comparaison des courbes 2a à 2d et 2e montrent que la production d'enzyme ligninolytique sur un milieu de culture supplémenté en acide aminé est considérablement augmentée. L'isoleucine est l'acide aminé qui donne la meilleure production.
Claims (6)
1. Procédé pour la production d'enzyme ligninolytique par culture de Phanerochaete chrysosporium, caractérisé en ce qu'il consiste à cultiver ledit champignon sur un milieu de culture de base contenant une source d'azote, de carbone et de sels minéraux assimilables, ledit milieu de culture étant supplémenté avec un agent stimulant choisi parmi les acides gras insaturés et les acides aminé nés naturels et à isoler l'enzyme contenue dans le surnageant de culture.
2. Procédé selon la revendicatoon 1, caractérisé en
ce que la souche Phanerochaete crsosporium est l'une
des souches Phanerochaete chrvsosnorium d-éposées sous
les N0 1-398 et I-399 à la Collection Nationale de Culture
des Microorganismes.
3. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2,
caractérisé en ce que l'agent stimulant est l'acide
oléique, l'acide linoléique, l'acide arachidonique,
l'acide pal-Icoléique.
400 mg/l.
sa concentration dans le milieu de culture est d'environ
ce que l'agent stimulant est l'acide oléiqu-e et en ce que
4. PrOcédé selon la revendication 3, caractérisé en
5. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2,
caractérisé en ce que l'agent stimulant est un acide
aminé choisi parmi l'isoleucine, la sérine, la thréonine,
la glycine.
6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en
ce que l'agent stimulant est l'isoleucine et en ce que
sa concentration dans le milieu de culture est d'environ
6,5 mg/l.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8608595A FR2600077B1 (fr) | 1986-06-13 | 1986-06-13 | Procede de production de l'enzyme ligninolytique par culture du champignon phanerochaete chrysosporium |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8608595A FR2600077B1 (fr) | 1986-06-13 | 1986-06-13 | Procede de production de l'enzyme ligninolytique par culture du champignon phanerochaete chrysosporium |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2600077A1 true FR2600077A1 (fr) | 1987-12-18 |
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Cited By (3)
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-
1986
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Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
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| US5153121A (en) * | 1988-10-03 | 1992-10-06 | Institut Nationale De La Recherche Agronomique-Inra | Microbial method for producing lignin peroxidase |
| WO1993008272A1 (fr) * | 1991-10-21 | 1993-04-29 | Lignozym Gesellschaft Zur Herstellung Und Zum Vertrieb Von Enzymen Mbh | Procede de fabrication d'enzymes lignolytiques au moyen de champignons de pourriture blanche |
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| CN114437525A (zh) * | 2022-03-07 | 2022-05-06 | 深圳金质科技有限公司 | 一种可降解的低毒性文具及其制备方法 |
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| Publication number | Publication date |
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| FR2600077B1 (fr) | 1988-10-28 |
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