JPH11243993A - 生体成分の測定におけるビリルビンの干渉を回避する方法 - Google Patents
生体成分の測定におけるビリルビンの干渉を回避する方法Info
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- JPH11243993A JPH11243993A JP5511998A JP5511998A JPH11243993A JP H11243993 A JPH11243993 A JP H11243993A JP 5511998 A JP5511998 A JP 5511998A JP 5511998 A JP5511998 A JP 5511998A JP H11243993 A JPH11243993 A JP H11243993A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ビリルビンの干渉を回避した生体成分の測定
法を提供することを目的とする。 【解決手段】 酸化酵素−ペルオキシダーゼ−発色剤系
の測定原理に基づいて生体試料中の生体成分を測定する
場合に、発色反応系に鉄錯体とステロイド骨格を有する
アルキル基を含む界面活性剤を共存させることによっ
て、生体試料中のビリルビンの干渉を回避して目的とす
る生体成分を正確に測定することができる。
法を提供することを目的とする。 【解決手段】 酸化酵素−ペルオキシダーゼ−発色剤系
の測定原理に基づいて生体試料中の生体成分を測定する
場合に、発色反応系に鉄錯体とステロイド骨格を有する
アルキル基を含む界面活性剤を共存させることによっ
て、生体試料中のビリルビンの干渉を回避して目的とす
る生体成分を正確に測定することができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ビリルビンの干渉
を回避することのできる生体成分の測定方法、及びビリ
ルビンの干渉を回避するための生体成分測定用キットに
関する。さらに詳しくは、酸化酵素−ペルオキシダーゼ
−発色剤系の測定原理に基づいて血清などの生体試料中
の生体成分の測定方法において、ビリルビンの干渉を回
避することのできる測定方法、及びそれに用いるための
測定用キットに関する。
を回避することのできる生体成分の測定方法、及びビリ
ルビンの干渉を回避するための生体成分測定用キットに
関する。さらに詳しくは、酸化酵素−ペルオキシダーゼ
−発色剤系の測定原理に基づいて血清などの生体試料中
の生体成分の測定方法において、ビリルビンの干渉を回
避することのできる測定方法、及びそれに用いるための
測定用キットに関する。
【０００２】
【従来の技術】臨床検査分野において、酵素法による血
清成分の分析が広く行われており、なかでも酸化酵素−
ペルオキシダーゼ−発色剤系の測定方法が、その大半を
占めている。これらの測定方法は、試料中の目的とする
成分を酸化酵素で反応させることにより過酸化水素を発
生させ、生じた過酸化水素とペルオキシダーゼの作用で
発色剤を酸化的に色素へ導き、これを比色定量するとい
う原理に基づいている。従って試料中に還元性を有する
物質、あるいは生成する色素の吸収帯近傍に吸収を有す
る物質が存在する場合、測定値に誤差を生じる。つまり
約４５０ｎｍに吸収極大を持ち還元性も有するビリルビ
ンが病的に上昇した試料中の生体成分を測定する場合に
は、これらの測定方法に妨害を与え測定値に著しい誤差
を生じるため大きな問題となっている。
清成分の分析が広く行われており、なかでも酸化酵素−
ペルオキシダーゼ−発色剤系の測定方法が、その大半を
占めている。これらの測定方法は、試料中の目的とする
成分を酸化酵素で反応させることにより過酸化水素を発
生させ、生じた過酸化水素とペルオキシダーゼの作用で
発色剤を酸化的に色素へ導き、これを比色定量するとい
う原理に基づいている。従って試料中に還元性を有する
物質、あるいは生成する色素の吸収帯近傍に吸収を有す
る物質が存在する場合、測定値に誤差を生じる。つまり
約４５０ｎｍに吸収極大を持ち還元性も有するビリルビ
ンが病的に上昇した試料中の生体成分を測定する場合に
は、これらの測定方法に妨害を与え測定値に著しい誤差
を生じるため大きな問題となっている。
【０００３】ビリルビンの干渉回避法としては、フェロ
シアン化物イオンを用いる方法（特開昭５５−２５８４
０号公報）、ビリルビン特異性菌性酵素またはビリルビ
ン酸化酵素を反応系に添加してビリルビンを消去する方
法（特開昭５７−７１３９８号公報）、主反応の前に多
量の過酸化水素を発生させペルオキシダーゼの酸化反応
を利用してビリルビンを消去する方法（特開平２−４９
６００、特開平６−３３９３９７号公報）が報告されて
いる。また界面活性剤を利用したものとして、陽イオン
系または両性イオン系界面活性剤を使用したビリルビン
およびヘモグロビンの干渉回避方法（特開平３−１０６
９６号公報）、アルキル置換されたアリール糖類、これ
らの糖類を含む界面活性剤を使用した妨害物質の干渉回
避法（特公平７−１１５１９）、アルキル置換された２
糖以上の多糖を含む非イオン系界面活性剤とフェロシア
ン化合物イオンの組合せによりビリルビンの干渉を回避
する方法（特開平９−２２４６９７）などが報告されて
いる。しかし、これらの方法は測定試薬の保存安定性を
低下させたり、測定系への阻害性を有するなどの問題が
あるため、多くの場合、臨床上の測定おいては不十分で
あった。
シアン化物イオンを用いる方法（特開昭５５−２５８４
０号公報）、ビリルビン特異性菌性酵素またはビリルビ
ン酸化酵素を反応系に添加してビリルビンを消去する方
法（特開昭５７−７１３９８号公報）、主反応の前に多
量の過酸化水素を発生させペルオキシダーゼの酸化反応
を利用してビリルビンを消去する方法（特開平２−４９
６００、特開平６−３３９３９７号公報）が報告されて
いる。また界面活性剤を利用したものとして、陽イオン
系または両性イオン系界面活性剤を使用したビリルビン
およびヘモグロビンの干渉回避方法（特開平３−１０６
９６号公報）、アルキル置換されたアリール糖類、これ
らの糖類を含む界面活性剤を使用した妨害物質の干渉回
避法（特公平７−１１５１９）、アルキル置換された２
糖以上の多糖を含む非イオン系界面活性剤とフェロシア
ン化合物イオンの組合せによりビリルビンの干渉を回避
する方法（特開平９−２２４６９７）などが報告されて
いる。しかし、これらの方法は測定試薬の保存安定性を
低下させたり、測定系への阻害性を有するなどの問題が
あるため、多くの場合、臨床上の測定おいては不十分で
あった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記のように、臨床検
査における血清などの生体試料中の生体成分の測定にお
いて、ビリルビンの干渉を回避する方法が数多く報告さ
れている。しかし、これらの方法では、ある程度のビリ
ルビンの干渉を回避することは可能でも、高濃度のビリ
ルビンが共存していたり、あるいは測定対象物質の濃度
が非常に低い場合に無視できるレベルにビリルビンの干
渉を抑えることは不可能である。
査における血清などの生体試料中の生体成分の測定にお
いて、ビリルビンの干渉を回避する方法が数多く報告さ
れている。しかし、これらの方法では、ある程度のビリ
ルビンの干渉を回避することは可能でも、高濃度のビリ
ルビンが共存していたり、あるいは測定対象物質の濃度
が非常に低い場合に無視できるレベルにビリルビンの干
渉を抑えることは不可能である。
【０００５】そのため、高濃度のビリルビンが共存して
いたり、あるいは測定対象物質の濃度が非常に低い血清
などの試料においても、ビリルビンの干渉を回避した正
確な測定値が得られるような生体成分の測定法が望まれ
ている。
いたり、あるいは測定対象物質の濃度が非常に低い血清
などの試料においても、ビリルビンの干渉を回避した正
確な測定値が得られるような生体成分の測定法が望まれ
ている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記問題点に鑑み、本発
明者らは鋭意検討した結果、生体試料中の生体成分を、
酸化酵素−ペルオキシダーゼ−発色剤系の原理に基づく
比色定量法により測定する方法において、鉄錯体とステ
ロイド骨格を有するアルキル基及びポリオキシアルキレ
ン基を含む界面活性剤とを存在させることにより、ビリ
ルビンが高濃度で共存するような試料においても、その
干渉による測定値への誤差を最小限に抑えられることを
見出し本発明を完成させた。
明者らは鋭意検討した結果、生体試料中の生体成分を、
酸化酵素−ペルオキシダーゼ−発色剤系の原理に基づく
比色定量法により測定する方法において、鉄錯体とステ
ロイド骨格を有するアルキル基及びポリオキシアルキレ
ン基を含む界面活性剤とを存在させることにより、ビリ
ルビンが高濃度で共存するような試料においても、その
干渉による測定値への誤差を最小限に抑えられることを
見出し本発明を完成させた。
【０００７】即ち、本発明は、酸化酵素−ペルオキシダ
ーゼ−発色剤系の測定原理に基づいて生体試料中の生体
成分を測定する方法において、反応系に鉄錯体と一般式
（Ｉ） Ｒ−Ｏ−（ＸＯ）ｎ−Ｙ （Ｉ） （式中、Ｒはステロイド骨格を有するアルキル基を示
し、Ｘはエチレン基またはプロピレン基を示し、Ｙは水
素原子または−ＳＯ3 Ｎａを示し、ｎは１〜２００の整
数を示す）で表わされる界面活性剤を存在させ、試料中
に存在するビリルビンの干渉を回避することを特徴とす
る生体成分の測定方法に関する。更に本発明は、ビリル
ビンの干渉を回避するための生体成分測定用キットであ
って、酸化酵素、ペルオキシダーゼおよび発色剤ととも
に、更に鉄錯体および一般式（Ｉ）で表わされる界面活
性剤を含む、上記生体成分測定用キットに関する。
ーゼ−発色剤系の測定原理に基づいて生体試料中の生体
成分を測定する方法において、反応系に鉄錯体と一般式
（Ｉ） Ｒ−Ｏ−（ＸＯ）ｎ−Ｙ （Ｉ） （式中、Ｒはステロイド骨格を有するアルキル基を示
し、Ｘはエチレン基またはプロピレン基を示し、Ｙは水
素原子または−ＳＯ3 Ｎａを示し、ｎは１〜２００の整
数を示す）で表わされる界面活性剤を存在させ、試料中
に存在するビリルビンの干渉を回避することを特徴とす
る生体成分の測定方法に関する。更に本発明は、ビリル
ビンの干渉を回避するための生体成分測定用キットであ
って、酸化酵素、ペルオキシダーゼおよび発色剤ととも
に、更に鉄錯体および一般式（Ｉ）で表わされる界面活
性剤を含む、上記生体成分測定用キットに関する。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明で用いる鉄錯体としては、
ＥＤＴＡ−鉄（ＩＩＩ）、塩化第一鉄−ＥＤＴＡ、フェ
ロシアン化カリウムをはじめとしたフェロシアン化物イ
オンなどが挙げられる。これらは通常単独で用いられる
が、場合によっては複数種を適宜組み合わせて使用でき
る。本発明では鉄錯体とともに一般式（Ｉ）で表わされ
る界面活性剤を用いる。一般式（Ｉ）においてＲは、ス
テロイド骨格を有するアルキル基であればいずれでも構
わないが、ステロール残基が好ましい。ステロール残基
としては、フィトステロール（植物由来ステロール）、
ズーステロール（動物由来ステロール）、マイコステロ
ール（菌類由来ステロール）由来のステロール残基、そ
れらの水素添加残基（例えば、フィトスタノール残基）
等が挙げられるが、フィトステロール残基、その水素添
加残基であるフィトスタノール残基がさらに好ましい。
ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレンの重合度ｎ
は１〜２００であるが、５〜１００が好ましく、１５〜
５０がさらに好ましい。本発明に用いる界面活性剤とし
ては、ポリオキシエチレンフィトステロール（例えば、
ニッコールＢＰＳ−３０ 日光ケミカル社製）、ポリオ
キシエチレンフィトスタノール（例えば、ニッコールＢ
ＰＳＨ−２５ 日光ケミカル社製）などの非イオン系界
面活性剤が具体的に例示できる。
ＥＤＴＡ−鉄（ＩＩＩ）、塩化第一鉄−ＥＤＴＡ、フェ
ロシアン化カリウムをはじめとしたフェロシアン化物イ
オンなどが挙げられる。これらは通常単独で用いられる
が、場合によっては複数種を適宜組み合わせて使用でき
る。本発明では鉄錯体とともに一般式（Ｉ）で表わされ
る界面活性剤を用いる。一般式（Ｉ）においてＲは、ス
テロイド骨格を有するアルキル基であればいずれでも構
わないが、ステロール残基が好ましい。ステロール残基
としては、フィトステロール（植物由来ステロール）、
ズーステロール（動物由来ステロール）、マイコステロ
ール（菌類由来ステロール）由来のステロール残基、そ
れらの水素添加残基（例えば、フィトスタノール残基）
等が挙げられるが、フィトステロール残基、その水素添
加残基であるフィトスタノール残基がさらに好ましい。
ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレンの重合度ｎ
は１〜２００であるが、５〜１００が好ましく、１５〜
５０がさらに好ましい。本発明に用いる界面活性剤とし
ては、ポリオキシエチレンフィトステロール（例えば、
ニッコールＢＰＳ−３０ 日光ケミカル社製）、ポリオ
キシエチレンフィトスタノール（例えば、ニッコールＢ
ＰＳＨ−２５ 日光ケミカル社製）などの非イオン系界
面活性剤が具体的に例示できる。
【０００９】これらの鉄錯体および界面活性剤は、生体
試料中の生体成分から酸化酵素により過酸化水素を発生
させ、生じた過酸化水素とペルオキシダーゼの作用で発
色剤を酸化的に色素へ導く際の発色反応系に存在させて
用いる。鉄錯体および界面活性剤を発色反応系に共存さ
せることによって、過酸化水素とペルオキシダーゼの作
用により発色剤の酸化カップリング反応によって色素を
生成することにより生体成分を測定する際のビリルビン
の干渉を回避することができる。
試料中の生体成分から酸化酵素により過酸化水素を発生
させ、生じた過酸化水素とペルオキシダーゼの作用で発
色剤を酸化的に色素へ導く際の発色反応系に存在させて
用いる。鉄錯体および界面活性剤を発色反応系に共存さ
せることによって、過酸化水素とペルオキシダーゼの作
用により発色剤の酸化カップリング反応によって色素を
生成することにより生体成分を測定する際のビリルビン
の干渉を回避することができる。
【００１０】発色反応系への、鉄錯体および界面活性剤
の添加量としては、ビリルビンの干渉を回避するに十分
な量であり、測定に支障を来さない濃度範囲であれば特
に限定されないが、例えば鉄錯体の発色反応における濃
度が１〜２０００μＭ、好ましくは５〜２００μＭとな
る量が望ましい。界面活性剤の場合には発色反応におけ
る濃度が０．０１〜１０．０％、より好ましくは０．１
〜５．０％となる量が望ましい。また複数種を組み合わ
せて使用する場合でも、それぞれの総量が上述の濃度範
囲であればよい。
の添加量としては、ビリルビンの干渉を回避するに十分
な量であり、測定に支障を来さない濃度範囲であれば特
に限定されないが、例えば鉄錯体の発色反応における濃
度が１〜２０００μＭ、好ましくは５〜２００μＭとな
る量が望ましい。界面活性剤の場合には発色反応におけ
る濃度が０．０１〜１０．０％、より好ましくは０．１
〜５．０％となる量が望ましい。また複数種を組み合わ
せて使用する場合でも、それぞれの総量が上述の濃度範
囲であればよい。
【００１１】上記した発色反応系並びに発色反応系に用
いる発色剤は周知であり、かかる発色剤としては、過酸
化水素とペルオキシダーゼの存在により色素を形成する
ものであればよく、水素供与体とそのカプラーの組合わ
せが通常用いられる。かかる組合わせとしては、例えば
フェノールもしくはその誘導体あるいはアニリン誘導体
と、４−アミノアンチピリンの組合わせが挙げられる。
ここで用いるフェノール誘導体としては、例えば２，６
−ジクロロフェノール、３，５−ジクロロ−２−ヒドロ
キシベンゼンスルホン酸、３−ヒドロキシ−２，４，６
−トリクロロ安息香酸、３−ヒドロキシ−２，４，６−
トリブロモ安息香酸などが挙げられ、アニリン誘導体と
しては、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−
（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メトキ
シアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−
スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−
エチル−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３
−メチルアニリンなどが挙げられる。カプラーとして
は、４−アミノアンチピリン以外に、３−メチル−２−
ベンゾチアゾリンヒドラゾン、ジアミノアンチピリンな
どを用いることができる。
いる発色剤は周知であり、かかる発色剤としては、過酸
化水素とペルオキシダーゼの存在により色素を形成する
ものであればよく、水素供与体とそのカプラーの組合わ
せが通常用いられる。かかる組合わせとしては、例えば
フェノールもしくはその誘導体あるいはアニリン誘導体
と、４−アミノアンチピリンの組合わせが挙げられる。
ここで用いるフェノール誘導体としては、例えば２，６
−ジクロロフェノール、３，５−ジクロロ−２−ヒドロ
キシベンゼンスルホン酸、３−ヒドロキシ−２，４，６
−トリクロロ安息香酸、３−ヒドロキシ−２，４，６−
トリブロモ安息香酸などが挙げられ、アニリン誘導体と
しては、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−
（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メトキ
シアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−
スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−
エチル−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３
−メチルアニリンなどが挙げられる。カプラーとして
は、４−アミノアンチピリン以外に、３−メチル−２−
ベンゾチアゾリンヒドラゾン、ジアミノアンチピリンな
どを用いることができる。
【００１２】上記した本発明のビリルビンの干渉を回避
する測定法は、酸化酵素−ペルオキシダーゼ−発色剤系
の測定原理に基づく測定方法であれば特に限定されずい
ずれの生体成分の測定法にも適用できる。例えば、グル
コース、総コレステロール、各コレステロール分画、ト
リグリセリド、尿酸、尿素窒素、無機リン、リン脂質、
ピルビン酸、クレアチニンおよび乳酸などの生体成分測
定系に組み込むことが可能である。
する測定法は、酸化酵素−ペルオキシダーゼ−発色剤系
の測定原理に基づく測定方法であれば特に限定されずい
ずれの生体成分の測定法にも適用できる。例えば、グル
コース、総コレステロール、各コレステロール分画、ト
リグリセリド、尿酸、尿素窒素、無機リン、リン脂質、
ピルビン酸、クレアチニンおよび乳酸などの生体成分測
定系に組み込むことが可能である。
【００１３】本発明のビリルビンを回避するための生体
成分測定用キットは、以上の説明から明らかなように、
酸化酵素、ペルオキシダーゼおよび発色剤とともに、更
に鉄錯体および一般式（Ｉ）の非イオン系界面活性剤か
ら構成される。ここで用いられる酸化酵素は、生体成分
を酸化させて過酸化水素を発生させる酵素または酵素群
であり、例えば生体成分としてグルコースを測定する場
合には、グルコースオキシダーゼ、尿酸の場合にはウリ
カーゼ、クレアチニンの場合にはクレアチニナーゼ、ク
レアチナーゼ及びザルコシンオキシダーゼの酵素群、乳
酸の場合には乳酸オキシダーゼが用いられる。ペルオキ
シダーゼとしては、例えばホースラディシュ由来のペル
オキシダーゼが用いられ、発色剤としては前記した、フ
ェノールもしくはその誘導体あるいはアニリン誘導体
と、４−アミノアンチピリンの組合わせなどが用いられ
る。
成分測定用キットは、以上の説明から明らかなように、
酸化酵素、ペルオキシダーゼおよび発色剤とともに、更
に鉄錯体および一般式（Ｉ）の非イオン系界面活性剤か
ら構成される。ここで用いられる酸化酵素は、生体成分
を酸化させて過酸化水素を発生させる酵素または酵素群
であり、例えば生体成分としてグルコースを測定する場
合には、グルコースオキシダーゼ、尿酸の場合にはウリ
カーゼ、クレアチニンの場合にはクレアチニナーゼ、ク
レアチナーゼ及びザルコシンオキシダーゼの酵素群、乳
酸の場合には乳酸オキシダーゼが用いられる。ペルオキ
シダーゼとしては、例えばホースラディシュ由来のペル
オキシダーゼが用いられ、発色剤としては前記した、フ
ェノールもしくはその誘導体あるいはアニリン誘導体
と、４−アミノアンチピリンの組合わせなどが用いられ
る。
【００１４】
【実施例】以下に、クレアチニンおよび乳酸測定の２つ
の実施例により、さらに詳しく本発明を説明するが、本
発明はこれら実施例により何ら限定されるものではな
い。
の実施例により、さらに詳しく本発明を説明するが、本
発明はこれら実施例により何ら限定されるものではな
い。
【００１５】実施例１ 以下のように試薬及び試料液を調製した。なお、試薬中
の界面活性剤としてはポリオキシエチレンフィトスタノ
ール、鉄錯体としてはフェロシアン化カリウムを用い
た。 第一試薬（ｐＨ８．３）： グッド緩衡剤 ２０ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ− ３−スルホプロピル） −３−メチルアニリン ２ｍＭ ポリオキシエチレンフィトスタノール（重合度２５） １．０％ クレアチナーゼ ４５ＫＵ／ｌ ザルコシンオキシダーゼ ９ＫＵ／ｌ 第二試薬（ｐＨ７．０）： グッド緩衡剤 ２００ｍＭ ４−アミノアンチピリン ６ｍＭ アジ化ナトリウム ０．１％ フェロシアン化カリウム ０．５ｍＭ クレアチニナーゼ ３４０ＫＵ／ｌ ペルオキシダーゼ ３ＫＵ／ｌ また、以下の比較例に示すように対照としてポリオキシ
エチレンフィトスタノール無添加の第一試薬、フェロシ
アン化カリウム無添加の第二試薬についても、同様に調
製した。
の界面活性剤としてはポリオキシエチレンフィトスタノ
ール、鉄錯体としてはフェロシアン化カリウムを用い
た。 第一試薬（ｐＨ８．３）： グッド緩衡剤 ２０ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ− ３−スルホプロピル） −３−メチルアニリン ２ｍＭ ポリオキシエチレンフィトスタノール（重合度２５） １．０％ クレアチナーゼ ４５ＫＵ／ｌ ザルコシンオキシダーゼ ９ＫＵ／ｌ 第二試薬（ｐＨ７．０）： グッド緩衡剤 ２００ｍＭ ４−アミノアンチピリン ６ｍＭ アジ化ナトリウム ０．１％ フェロシアン化カリウム ０．５ｍＭ クレアチニナーゼ ３４０ＫＵ／ｌ ペルオキシダーゼ ３ＫＵ／ｌ また、以下の比較例に示すように対照としてポリオキシ
エチレンフィトスタノール無添加の第一試薬、フェロシ
アン化カリウム無添加の第二試薬についても、同様に調
製した。
【００１６】試料液 結合型ビリルビン添加液 プール血清に、ジタウロビリルビンを４０ｍｇ／ｄｌに
なるように添加した。 遊離型ビリルビン添加液 プール血清に、遊離型ビリルビンを４０ｍｇ／ｄｌにな
るように添加した。また、対照としてビリルビン無添加
の試料液も用意した。
なるように添加した。 遊離型ビリルビン添加液 プール血清に、遊離型ビリルビンを４０ｍｇ／ｄｌにな
るように添加した。また、対照としてビリルビン無添加
の試料液も用意した。
【００１７】測定操作は、以下の通り行った。 測定方法：各試料液１５μｌに第一試薬２５０μｌを加
え、３７℃で５分間加温後、反応液中の５４６ｎｍにお
ける吸光度（Ａ１）を測定する。次いで第二試薬５０μ
ｌを加え、３７℃で５分間放置した後，再び反応液中の
５４６ｎｍにおける吸光度（Ａ２）を測定する。得られ
たＡ１及びＡ２に液量補正を施した後（各々Ａ１’、Ａ
２’とする）、Ａ２’よりＡ１’を差し引いて反応前後
での吸光度変化量（ΔＡ）を求める。一方、生理食塩水
及びクレアチニン標準液（クレアチニン５．０ｍｇ／ｄ
ｌ含有）を試料液として用いて同様の操作を行い、盲検
値ＡＢ及び標準液吸光度ＡＳを求める。
え、３７℃で５分間加温後、反応液中の５４６ｎｍにお
ける吸光度（Ａ１）を測定する。次いで第二試薬５０μ
ｌを加え、３７℃で５分間放置した後，再び反応液中の
５４６ｎｍにおける吸光度（Ａ２）を測定する。得られ
たＡ１及びＡ２に液量補正を施した後（各々Ａ１’、Ａ
２’とする）、Ａ２’よりＡ１’を差し引いて反応前後
での吸光度変化量（ΔＡ）を求める。一方、生理食塩水
及びクレアチニン標準液（クレアチニン５．０ｍｇ／ｄ
ｌ含有）を試料液として用いて同様の操作を行い、盲検
値ＡＢ及び標準液吸光度ＡＳを求める。
【００１８】ここで得られたΔＡ、ＡＢ及びＡＳから、
次式（１）に従って試料液中のクレアチニン濃度を算出
した。
次式（１）に従って試料液中のクレアチニン濃度を算出
した。
【００１９】
【００２０】比較例１ 実施例１において第一試薬より、ポリオキシエチレンフ
ィトスタノールを除いた以外、実施例１と全く同様の測
定を行い、実施例１と全く同様にして試料中のクレアチ
ニン濃度を求めた。
ィトスタノールを除いた以外、実施例１と全く同様の測
定を行い、実施例１と全く同様にして試料中のクレアチ
ニン濃度を求めた。
【００２１】比較例２ 実施例１において第二試薬より、フェロシアン化カリウ
ムを除いた以外、実施例１と全く同様の測定を行い、実
施例１と全く同様にして試料中のクレアチニン濃度を求
めた。
ムを除いた以外、実施例１と全く同様の測定を行い、実
施例１と全く同様にして試料中のクレアチニン濃度を求
めた。
【００２２】比較例３ 実施例１において第一試薬よりポリオキシエチレンフィ
トスタノールを、そして第二試薬よりフェロシアン化カ
リウムを除いた以外、実施例１と全く同様の測定を行
い、実施例１と全く同様にして試料中のクレアチニン濃
度を求めた。
トスタノールを、そして第二試薬よりフェロシアン化カ
リウムを除いた以外、実施例１と全く同様の測定を行
い、実施例１と全く同様にして試料中のクレアチニン濃
度を求めた。
【００２３】実施例、比較例１、比較例２及び比較例３
の測定結果を表１に示す。表中の数値は、ビリルビン無
添加の試料を測定したときの測定値を１００％として表
した。
の測定結果を表１に示す。表中の数値は、ビリルビン無
添加の試料を測定したときの測定値を１００％として表
した。
【００２４】
【表１】
【００２５】表１の結果から、フェロシアン化カリウム
とポリオキシエチレンフィトスタノールを添加すると、
ビリルビンの干渉はほとんど無視できるレベルにまで達
することを見出した。
とポリオキシエチレンフィトスタノールを添加すると、
ビリルビンの干渉はほとんど無視できるレベルにまで達
することを見出した。
【００２６】実施例２ 以下のように試薬及び試料液を調製した。なお、実施例
１のときと同様に試薬中の界面活性剤としてはポリオキ
シエチレンフィトスタノール、鉄錯体としてはフェロシ
アン化カリウムを用いた。 第一試薬（ｐＨ７．５）： グッド緩衡剤 ５０ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル） −３−メチルアニリン ２ｍＭ ポリオキシエチレンフィトスタノール １．０％ ペルオキシダーゼ ４５００Ｕ／ｌ 第二試薬（ｐＨ７．５）： グッド緩衡剤 ５０ｍＭ ４−アミノアンチピリン ４ｍＭ フェロシアン化カリウム ０．１ｍＭ 乳酸オキシダーゼ ３５００Ｕ／ｌ また、以下の比較例に示すように対照としてポリオキシ
エチレンフィトスタノール無添加の第一試薬、フェロシ
アン化カリウム無添加の第二試薬についても、同様に調
製した。
１のときと同様に試薬中の界面活性剤としてはポリオキ
シエチレンフィトスタノール、鉄錯体としてはフェロシ
アン化カリウムを用いた。 第一試薬（ｐＨ７．５）： グッド緩衡剤 ５０ｍＭ Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル） −３−メチルアニリン ２ｍＭ ポリオキシエチレンフィトスタノール １．０％ ペルオキシダーゼ ４５００Ｕ／ｌ 第二試薬（ｐＨ７．５）： グッド緩衡剤 ５０ｍＭ ４−アミノアンチピリン ４ｍＭ フェロシアン化カリウム ０．１ｍＭ 乳酸オキシダーゼ ３５００Ｕ／ｌ また、以下の比較例に示すように対照としてポリオキシ
エチレンフィトスタノール無添加の第一試薬、フェロシ
アン化カリウム無添加の第二試薬についても、同様に調
製した。
【００２７】試料液 結合型ビリルビン添加液 プール血清に、ジタウロビリルビンを２０ｍｇ／ｄｌに
なるように添加した。 遊離型ビリルビン添加液 プール血清に、遊離型ビリルビンを２０ｍｇ／ｄｌにな
るように添加した。また、対照としてビリルビン無添加
の試料液も用意した。
なるように添加した。 遊離型ビリルビン添加液 プール血清に、遊離型ビリルビンを２０ｍｇ／ｄｌにな
るように添加した。また、対照としてビリルビン無添加
の試料液も用意した。
【００２８】測定操作は、以下の通り行った。 測定方法：各試料液２．５μｌに第一試薬２００μｌを
加え、３７℃で５分間加温後、反応液中の６００ｎｍに
おける吸光度（Ａ１）を測定する。次いで第二試薬５０
μｌを加え、３７℃で５分間放置した後，再び反応液中
の６００ｎｍにおける吸光度（Ａ２）を測定する。得ら
れたＡ１及びＡ２に液量補正を施した後（各々Ａ１’、
Ａ２’とする）、Ａ２’よりＡ１’を差し引いて反応前
後での吸光度変化量（ΔＡ）を求める。一方、生理食塩
水及び乳酸標準液（乳酸４０．０ｍｇ／ｄｌ含有）を試
料液として用いて同様の操作を行い、盲検値ＡＢ及び標
準液吸光度ＡＳを求める。
加え、３７℃で５分間加温後、反応液中の６００ｎｍに
おける吸光度（Ａ１）を測定する。次いで第二試薬５０
μｌを加え、３７℃で５分間放置した後，再び反応液中
の６００ｎｍにおける吸光度（Ａ２）を測定する。得ら
れたＡ１及びＡ２に液量補正を施した後（各々Ａ１’、
Ａ２’とする）、Ａ２’よりＡ１’を差し引いて反応前
後での吸光度変化量（ΔＡ）を求める。一方、生理食塩
水及び乳酸標準液（乳酸４０．０ｍｇ／ｄｌ含有）を試
料液として用いて同様の操作を行い、盲検値ＡＢ及び標
準液吸光度ＡＳを求める。
【００２９】ここで得られたΔＡ、ＡＢ及びＡＳから、
次式（２）に従って試料液中の乳酸濃度を算出した。
次式（２）に従って試料液中の乳酸濃度を算出した。
【００３０】
【００３１】比較例４ 実施例２において第一試薬より、ポリオキシエチレンフ
ィトスタノールを除いた以外、実施例２と全く同様の測
定を行い、実施例２と全く同様にして試料中の乳酸濃度
を求めた。
ィトスタノールを除いた以外、実施例２と全く同様の測
定を行い、実施例２と全く同様にして試料中の乳酸濃度
を求めた。
【００３２】比較例５ 実施例２において第二試薬より、フェロシアン化カリウ
ムを除いた以外、実施例２と全く同様の測定を行い、実
施例２と全く同様にして試料中の乳酸濃度を求めた。
ムを除いた以外、実施例２と全く同様の測定を行い、実
施例２と全く同様にして試料中の乳酸濃度を求めた。
【００３３】比較例６ 実施例２において第一試薬よりポリオキシエチレンフィ
トスタノールを、そして第二試薬よりフェロシアン化カ
リウムを除いた以外、実施例２と全く同様の測定を行
い、実施例２と全く同様にして試料中の乳酸濃度を求め
た。
トスタノールを、そして第二試薬よりフェロシアン化カ
リウムを除いた以外、実施例２と全く同様の測定を行
い、実施例２と全く同様にして試料中の乳酸濃度を求め
た。
【００３４】実施例２、比較例４、比較例５及び比較例
６の測定結果を表２に示す。表中の数値は、ビリルビン
無添加の試料を測定したときの測定値を１００％として
表した。
６の測定結果を表２に示す。表中の数値は、ビリルビン
無添加の試料を測定したときの測定値を１００％として
表した。
【００３５】
【表２】
【００３６】表２の結果から、フェロシアン化カリウム
とポリオキシエチレンフィトスタノールを添加すると、
ビリルビンの干渉はほとんど無視できるレベルにまで達
することを見出した。
とポリオキシエチレンフィトスタノールを添加すると、
ビリルビンの干渉はほとんど無視できるレベルにまで達
することを見出した。
【００３７】
【発明の効果】本発明によれば、酸化酵素−ペルオキシ
ダーゼ−発色剤系に基づく生体成分の測定方法におい
て、ステロイド骨格を有するアルキル基及びポリオキシ
アルキレン基を含む界面活性剤と、鉄錯体を存在させる
ことにより、検体試料中のビリルビンの干渉をほとんど
受けずに生体成分を測定することが可能になる。
ダーゼ−発色剤系に基づく生体成分の測定方法におい
て、ステロイド骨格を有するアルキル基及びポリオキシ
アルキレン基を含む界面活性剤と、鉄錯体を存在させる
ことにより、検体試料中のビリルビンの干渉をほとんど
受けずに生体成分を測定することが可能になる。
Claims (5)
- 【請求項１】 酸化酵素−ペルオキシダーゼ−発色剤系
の測定原理に基づいて生体試料中の生体成分を測定する
方法において、反応系に鉄錯体と一般式（Ｉ） Ｒ−Ｏ−（ＸＯ）ｎ−Ｙ （Ｉ） （式中、Ｒはステロイド骨格を有するアルキル基を示
し、Ｘはエチレン基またはプロピレン基を示し、Ｙは水
素原子または−ＳＯ3 Ｎａを示し、ｎは１〜２００の整
数を示す）で表わされる界面活性剤を存在させ、試料中
に存在するビリルビンの干渉を回避することを特徴とす
る生体成分の測定方法。 - 【請求項２】 鉄錯体が、ＥＤＴＡ−鉄（ＩＩＩ）、塩
化第一鉄−ＥＤＴＡまたはフェロシアン化物イオンであ
る、請求項１記載の生体成分の測定方法。 - 【請求項３】 界面活性剤として、一般式（Ｉ）におい
てＲが植物由来のステロール残基またはその水素添加ス
テロール残基である界面活性剤を用いる、請求項１また
は２記載の生体成分の測定方法。 - 【請求項４】 界面活性剤が、ポリオキシエチレンフィ
トステロールまたはポリオキシエチレンフィトスタノー
ルである請求項１から３のいずれかに記載の生体成分の
測定方法。 - 【請求項５】 ビリルビンの干渉を回避するための生体
成分測定用キットであって、酸化酵素、ペルオキシダー
ゼおよび発色剤とともに、更に鉄錯体および請求項１記
載の一般式（Ｉ）で表わされる界面活性剤を含む、上記
生体成分測定用キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05511998A JP3714512B2 (ja) | 1998-03-06 | 1998-03-06 | 生体成分の測定におけるビリルビンの干渉を回避する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05511998A JP3714512B2 (ja) | 1998-03-06 | 1998-03-06 | 生体成分の測定におけるビリルビンの干渉を回避する方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11243993A true JPH11243993A (ja) | 1999-09-14 |
| JP3714512B2 JP3714512B2 (ja) | 2005-11-09 |
Family
ID=12989877
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP05511998A Expired - Lifetime JP3714512B2 (ja) | 1998-03-06 | 1998-03-06 | 生体成分の測定におけるビリルビンの干渉を回避する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3714512B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013161677A1 (ja) | 2012-04-27 | 2013-10-31 | 協和メデックス株式会社 | 検体中の測定対象成分の測定方法 |
| WO2019216408A1 (ja) * | 2018-05-10 | 2019-11-14 | 東洋紡株式会社 | 生体成分測定試薬キットの感度低下抑制方法 |
| WO2019216407A1 (ja) * | 2018-05-10 | 2019-11-14 | 東洋紡株式会社 | 生体成分測定試薬キットの感度低下抑制方法 |
-
1998
- 1998-03-06 JP JP05511998A patent/JP3714512B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013161677A1 (ja) | 2012-04-27 | 2013-10-31 | 協和メデックス株式会社 | 検体中の測定対象成分の測定方法 |
| KR20150003739A (ko) | 2012-04-27 | 2015-01-09 | 교와 메덱스 가부시키가이샤 | 검체 중의 측정 대상 성분의 측정 방법 |
| US9663816B2 (en) | 2012-04-27 | 2017-05-30 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for measuring a component of a biological fluid and reducing the effect of interfering substances |
| WO2019216408A1 (ja) * | 2018-05-10 | 2019-11-14 | 東洋紡株式会社 | 生体成分測定試薬キットの感度低下抑制方法 |
| WO2019216407A1 (ja) * | 2018-05-10 | 2019-11-14 | 東洋紡株式会社 | 生体成分測定試薬キットの感度低下抑制方法 |
| CN112074609A (zh) * | 2018-05-10 | 2020-12-11 | 东洋纺株式会社 | 生物成分测定试剂盒的灵敏度降低抑制方法 |
| JPWO2019216407A1 (ja) * | 2018-05-10 | 2021-05-13 | 東洋紡株式会社 | 生体成分測定試薬キットの感度低下抑制方法 |
| JPWO2019216408A1 (ja) * | 2018-05-10 | 2021-05-13 | 東洋紡株式会社 | 生体成分測定試薬キットの感度低下抑制方法 |
| CN112074609B (zh) * | 2018-05-10 | 2024-02-09 | 东洋纺株式会社 | 生物成分测定试剂盒的灵敏度降低抑制方法 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3714512B2 (ja) | 2005-11-09 |
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