JPH11169A - 核酸の細胞特異的移行用の多機能性リガンド系 - Google Patents
核酸の細胞特異的移行用の多機能性リガンド系Info
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- JPH11169A JPH11169A JP9330508A JP33050897A JPH11169A JP H11169 A JPH11169 A JP H11169A JP 9330508 A JP9330508 A JP 9330508A JP 33050897 A JP33050897 A JP 33050897A JP H11169 A JPH11169 A JP H11169A
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 免疫原性でなく、ヌクレオチド配列の細胞特
異的移行を行える、多機能性リガンド系を提供する。 【解決手段】 少くとも１つの標的細胞特異的リガンド
と、少くとも１つのリンカーと、少くとも１つの遺伝子
構築物特異的リガンドとを含んでなり、遺伝子構築物特
異的リガンドは、有利には、その遺伝子構築物と直接ま
たは間接的に結合する抗体またはその一部からなる多機
能性リガンド系。皮膚、粘膜、神経系、内臓、血液凝
固、造血系、免疫系、筋肉組織、支持組織または関節の
疾患の治療または予防用の医薬品またはワクチンを製造
するためのリガンド系も提供される。
異的移行を行える、多機能性リガンド系を提供する。 【解決手段】 少くとも１つの標的細胞特異的リガンド
と、少くとも１つのリンカーと、少くとも１つの遺伝子
構築物特異的リガンドとを含んでなり、遺伝子構築物特
異的リガンドは、有利には、その遺伝子構築物と直接ま
たは間接的に結合する抗体またはその一部からなる多機
能性リガンド系。皮膚、粘膜、神経系、内臓、血液凝
固、造血系、免疫系、筋肉組織、支持組織または関節の
疾患の治療または予防用の医薬品またはワクチンを製造
するためのリガンド系も提供される。
Description
【０００１】
【発明の背景】発明の分野 本発明は、細胞中にポリヌクレオチドを移行するため
の、改善された操作および構築物に関する。
の、改善された操作および構築物に関する。
【０００２】背景技術 細胞表面への遺伝子構築物（gene construct）の結合
は、遺伝子を細胞中に移す上で、たとえ十分でなくと
も、必要な前提条件である。これが強く結合するほど、
遺伝子構築物が細胞にうまく取込まれて、細胞中で転写
される可能性は大きくなる。この結合が細胞特異的であ
るほど、遺伝子構築物は主にまたは唯一標的細胞と結合
して、この細胞に取込まれるやすくなる。標的細胞への
遺伝子構築物の結合の特異性は、遺伝子構築物および標
的細胞に加えてもう１つのタイプの細胞が存在するとき
特に重要であるが、それにもかかわらず遺伝子構築物は
優先的にまたは排他的に標的細胞に取込まれねばならな
い。
は、遺伝子を細胞中に移す上で、たとえ十分でなくと
も、必要な前提条件である。これが強く結合するほど、
遺伝子構築物が細胞にうまく取込まれて、細胞中で転写
される可能性は大きくなる。この結合が細胞特異的であ
るほど、遺伝子構築物は主にまたは唯一標的細胞と結合
して、この細胞に取込まれるやすくなる。標的細胞への
遺伝子構築物の結合の特異性は、遺伝子構築物および標
的細胞に加えてもう１つのタイプの細胞が存在するとき
特に重要であるが、それにもかかわらず遺伝子構築物は
優先的にまたは排他的に標的細胞に取込まれねばならな
い。
【０００３】遺伝子構築物を細胞特異的に結合させるこ
とができる様々な技術が開発されてきた。それらが
（１）細胞膜上で発現されたレセプターへのリガンドの
結合、または（２）細胞膜上に暴露された抗原またはハ
プテンへの抗体の結合を利用していることは、これらす
べての技術に共通である。このような技術の例には、リ
ガンド、例えばヘレグリン（Han et al.,PNAS 92,9747
(1995)）、エリトロポエチン（Kasahara et al.,Scienc
e 266,1373 (1994) ）、抗体断片、例えば一本鎖Ｆｖ
（Marin et al.,J.Virol.70,2957 (1996) ）またはレセ
プター、例えばＦｃレセプターの細胞外部分（Doughert
y et al.,Transfusion Science 17,121 (1996)）をレト
ロウイルスベクターのコート糖タンパク質中に組み込ん
で、標的細胞特異的をこうして生じさせる組換え法があ
る。
とができる様々な技術が開発されてきた。それらが
（１）細胞膜上で発現されたレセプターへのリガンドの
結合、または（２）細胞膜上に暴露された抗原またはハ
プテンへの抗体の結合を利用していることは、これらす
べての技術に共通である。このような技術の例には、リ
ガンド、例えばヘレグリン（Han et al.,PNAS 92,9747
(1995)）、エリトロポエチン（Kasahara et al.,Scienc
e 266,1373 (1994) ）、抗体断片、例えば一本鎖Ｆｖ
（Marin et al.,J.Virol.70,2957 (1996) ）またはレセ
プター、例えばＦｃレセプターの細胞外部分（Doughert
y et al.,Transfusion Science 17,121 (1996)）をレト
ロウイルスベクターのコート糖タンパク質中に組み込ん
で、標的細胞特異的をこうして生じさせる組換え法があ
る。
【０００４】化学的方法も、アシアロ糖タンパク質（Wu
et al.,J.Biol.Chem.269,1152 (1994) ）またはこのタ
ンパク質の合成誘導体（Marwin et al.,Bioconjugate C
hem.5,612 (1994)）のようなリガンドをポリリジンに結
合させて、後者を遺伝子構築物と複合化させるか、また
はそれを化学的にアデノウイルスベクターのコートタン
パク質に結合させるために用いられた。もう１つの方法
は、リガンドをストレプトアビジンと結合させ、その後
でリポソームのリン脂質ヘッドグループと複合化された
ビオチンに結合させることであり、そのときにリポソー
ムは遺伝子構築物と複合化されている（Redelmeir et a
l.,Drug Deliv.J.Deliv.Targeting Therap.Agents 2,98
(1995) ）。第一のリガンド系はFominaya et al.,J.Bi
ol.Chem.271,10560,1996により発表された。このリガン
ド系は、腫瘍細胞上のＥｒｂ Ｂ２レセプターに特異的
な抗体断片、Pseudomonas 融合誘導ペプチド外毒素Ａ、
およびトランスジーンを含むプラスミド中に挿入された
対応Ｇａｌ４結合配列と結合する酵母Ｇａｌ４タンパク
質のＤＮＡ結合ドメインからできている。このリガンド
系は標的細胞特異的トランスフェクションを起こすが、
酵母Ｇａｌ４タンパク質の免疫原性に欠点をもつ。
et al.,J.Biol.Chem.269,1152 (1994) ）またはこのタ
ンパク質の合成誘導体（Marwin et al.,Bioconjugate C
hem.5,612 (1994)）のようなリガンドをポリリジンに結
合させて、後者を遺伝子構築物と複合化させるか、また
はそれを化学的にアデノウイルスベクターのコートタン
パク質に結合させるために用いられた。もう１つの方法
は、リガンドをストレプトアビジンと結合させ、その後
でリポソームのリン脂質ヘッドグループと複合化された
ビオチンに結合させることであり、そのときにリポソー
ムは遺伝子構築物と複合化されている（Redelmeir et a
l.,Drug Deliv.J.Deliv.Targeting Therap.Agents 2,98
(1995) ）。第一のリガンド系はFominaya et al.,J.Bi
ol.Chem.271,10560,1996により発表された。このリガン
ド系は、腫瘍細胞上のＥｒｂ Ｂ２レセプターに特異的
な抗体断片、Pseudomonas 融合誘導ペプチド外毒素Ａ、
およびトランスジーンを含むプラスミド中に挿入された
対応Ｇａｌ４結合配列と結合する酵母Ｇａｌ４タンパク
質のＤＮＡ結合ドメインからできている。このリガンド
系は標的細胞特異的トランスフェクションを起こすが、
酵母Ｇａｌ４タンパク質の免疫原性に欠点をもつ。
【０００５】これらの公表されたいずれの方法も、標的
細胞特異的にベクターを結合させる問題について適切に
は解決していなかった。この特異性欠如の主な理由に
は、（１）修飾ウイルスベクターの機能の欠陥；（２）
かなりの複雑度と用いられるリガンド系のサイズ；
（３）用いられる異種もしくは修飾タンパク質、または
ストレプトアビジン‐ビオチンカップリング系の免疫原
性および適合性；および（４）細胞の標的細胞特異的ト
ランスダクションを行う上で結合遺伝子構築物の不適当
な能力がある。
細胞特異的にベクターを結合させる問題について適切に
は解決していなかった。この特異性欠如の主な理由に
は、（１）修飾ウイルスベクターの機能の欠陥；（２）
かなりの複雑度と用いられるリガンド系のサイズ；
（３）用いられる異種もしくは修飾タンパク質、または
ストレプトアビジン‐ビオチンカップリング系の免疫原
性および適合性；および（４）細胞の標的細胞特異的ト
ランスダクションを行う上で結合遺伝子構築物の不適当
な能力がある。
【０００６】これらの制限の結果として、ウイルスおよ
び非ウイルスベクターを標的細胞に結合させる上で有用
な、簡単に作製される、機能的に有能なリガンドについ
て、大きな必要性が残されている。
び非ウイルスベクターを標的細胞に結合させる上で有用
な、簡単に作製される、機能的に有能なリガンドについ
て、大きな必要性が残されている。
【０００７】
【発明の概要】したがって、本発明は、免疫原性ではな
く、既知系よりも簡単に作製および使用しうる、ヌクレ
オチド配列の標的細胞特異的移行用のリガンド系を提供
することを、その目的である。本発明は、また、ベクタ
ーを標的細胞に結合させる特異性を増加させて、それに
より核酸を標的細胞中に移す効力および選択性を改善す
ることをその目的とする。
く、既知系よりも簡単に作製および使用しうる、ヌクレ
オチド配列の標的細胞特異的移行用のリガンド系を提供
することを、その目的である。本発明は、また、ベクタ
ーを標的細胞に結合させる特異性を増加させて、それに
より核酸を標的細胞中に移す効力および選択性を改善す
ることをその目的とする。
【０００８】これらおよび他の目的を実現する上で、本
発明の１つの面では、少くとも１つの標的細胞特異的リ
ガンドと、抗体または抗体部分を含んだ少くとも１つの
遺伝子構築物特異的リガンドと、２つのリガンドを結合
させるリンカーとを含んでなる、ヌクレオチド配列の標
的細胞特異的移行用の多機能性リガンド系を提供する
が、その系は免疫原性でない。有利な態様において、少
くとも１つのリガンドはヒト化抗体または抗体断片であ
る。もう１つの有利な態様において、少くとも１つの標
的細胞特異的リガンドと、抗体または抗体タンパク質を
含んだ少くとも１つの遺伝子構築物特異性リガンドと、
２つのリガンドを結合させるリンカーとを含んでなる、
ヌクレオチド配列の標的細胞特異的移行用の多機能性リ
ガンド系（その系は免疫原性でない）を含んでなる組成
物が病気を治癒させるために提供され、患者への投与に
適したキャリア中で提供される。
発明の１つの面では、少くとも１つの標的細胞特異的リ
ガンドと、抗体または抗体部分を含んだ少くとも１つの
遺伝子構築物特異的リガンドと、２つのリガンドを結合
させるリンカーとを含んでなる、ヌクレオチド配列の標
的細胞特異的移行用の多機能性リガンド系を提供する
が、その系は免疫原性でない。有利な態様において、少
くとも１つのリガンドはヒト化抗体または抗体断片であ
る。もう１つの有利な態様において、少くとも１つの標
的細胞特異的リガンドと、抗体または抗体タンパク質を
含んだ少くとも１つの遺伝子構築物特異性リガンドと、
２つのリガンドを結合させるリンカーとを含んでなる、
ヌクレオチド配列の標的細胞特異的移行用の多機能性リ
ガンド系（その系は免疫原性でない）を含んでなる組成
物が病気を治癒させるために提供され、患者への投与に
適したキャリア中で提供される。
【０００９】もう１つの有利な態様において、リガンド
系は２つのリガンドを一緒に連結させるコネクターを含
み、そのコネクターは２つのリンカーからなる。もう１
つの有利な態様では、（ａ）抗ＮＣＡＭ組換え一本鎖Ｆ
ｖ断片からなるＴＳリガンド（Ｆｖ断片の可変重鎖およ
び軽鎖は短ペプチド配列で共有結合されている）；
（ｂ）配列ＧＬＦＥＡＬＬＥＬＬＥＳＬＷＥＬＬＬＥＡ
（配列番号：１）を有する融合誘導ペプチドからなるリ
ンカー；および（ｃ）Ｎ６‐メチルアデニン用の組換え
抗体からなるＧＳリガンドを含んでなるリガンド系が提
供される。
系は２つのリガンドを一緒に連結させるコネクターを含
み、そのコネクターは２つのリンカーからなる。もう１
つの有利な態様では、（ａ）抗ＮＣＡＭ組換え一本鎖Ｆ
ｖ断片からなるＴＳリガンド（Ｆｖ断片の可変重鎖およ
び軽鎖は短ペプチド配列で共有結合されている）；
（ｂ）配列ＧＬＦＥＡＬＬＥＬＬＥＳＬＷＥＬＬＬＥＡ
（配列番号：１）を有する融合誘導ペプチドからなるリ
ンカー；および（ｃ）Ｎ６‐メチルアデニン用の組換え
抗体からなるＧＳリガンドを含んでなるリガンド系が提
供される。
【００１０】もう１つの有利な態様において、本発明は
皮膚疾患、粘膜疾患、神経系疾患、内臓疾患、血液凝固
疾患、造血系疾患、免疫系疾患、筋肉組織疾患と、支持
組織または関節疾患を予防または治療する医薬品の製造
のための、本発明によるリガンド系の用途に関する。リ
ガンド系は、皮膚、粘膜、神経系、内臓、血液凝固、造
血系、免疫系、筋肉組織、支持組織および関節からなる
群のうち１以上に係わる疾患をワクチンとして予防する
か、または治療するために、患者に、または代わりに患
者から得られた細胞に局所投与または注入される。
皮膚疾患、粘膜疾患、神経系疾患、内臓疾患、血液凝固
疾患、造血系疾患、免疫系疾患、筋肉組織疾患と、支持
組織または関節疾患を予防または治療する医薬品の製造
のための、本発明によるリガンド系の用途に関する。リ
ガンド系は、皮膚、粘膜、神経系、内臓、血液凝固、造
血系、免疫系、筋肉組織、支持組織および関節からなる
群のうち１以上に係わる疾患をワクチンとして予防する
か、または治療するために、患者に、または代わりに患
者から得られた細胞に局所投与または注入される。
【００１１】これらの利点は、本発明に従い細胞特異的
リガンドを遺伝子構築物に結合させることにより可能と
なる。
リガンドを遺伝子構築物に結合させることにより可能と
なる。
【００１２】本発明の他の目的、特徴および利点は、以
下の詳細な記載から明らかになる。しかしながら、詳細
な記載および具体例は、本発明の好ましい態様を示して
いるが、説明だけのために与えられたものであり、本発
明の精神および範囲内で様々な変更および修正がこの詳
細な記載からより明らかとなることは、当業者に理解さ
れるであろう。
下の詳細な記載から明らかになる。しかしながら、詳細
な記載および具体例は、本発明の好ましい態様を示して
いるが、説明だけのために与えられたものであり、本発
明の精神および範囲内で様々な変更および修正がこの詳
細な記載からより明らかとなることは、当業者に理解さ
れるであろう。
【００１３】
【発明の具体的説明】本発明者らは、図１で示されたよ
うなリンカーにより、免疫原性複合体を形成することな
く、標的細胞特異的リガンドおよび遺伝子構築物特異的
リガンドが互いに連結させうることを発見した。更に、
図１ｃと図２および３で示されたような“コネクター
（connector）”を特に用いることにより、リガンド系
は形質導入された細胞の免疫原性、乏しい特異性および
効力といった従来の制限を克服できるように構築するこ
とができた。
うなリンカーにより、免疫原性複合体を形成することな
く、標的細胞特異的リガンドおよび遺伝子構築物特異的
リガンドが互いに連結させうることを発見した。更に、
図１ｃと図２および３で示されたような“コネクター
（connector）”を特に用いることにより、リガンド系
は形質導入された細胞の免疫原性、乏しい特異性および
効力といった従来の制限を克服できるように構築するこ
とができた。
【００１４】本明細書で用いられる“標的細胞特異的リ
ガンド”（ＴＳリガンド）とは、標的細胞の表面にある
決定基、即ち標的細胞特異的リガンドの結合パートナ
ー、例えばレセプターまたは接着性分子と結合する分子
のことである。
ガンド”（ＴＳリガンド）とは、標的細胞の表面にある
決定基、即ち標的細胞特異的リガンドの結合パートナ
ー、例えばレセプターまたは接着性分子と結合する分子
のことである。
【００１５】“リンカー”とは、最も簡単な場合におい
て、標的細胞特異的リガンドを遺伝子構築物特異的リガ
ンドと結合させ、有利には融合誘導性質、即ち新規リガ
ンド系を細胞膜および／またはリソソーム膜から、即ち
リソソームから細胞質中に浸透させる性質を有した分子
のことである。本発明の有利な態様において、リンカー
は融合誘導性質も有している。
て、標的細胞特異的リガンドを遺伝子構築物特異的リガ
ンドと結合させ、有利には融合誘導性質、即ち新規リガ
ンド系を細胞膜および／またはリソソーム膜から、即ち
リソソームから細胞質中に浸透させる性質を有した分子
のことである。本発明の有利な態様において、リンカー
は融合誘導性質も有している。
【００１６】“遺伝子構築物特異的リガンド”（ＧＳリ
ガンド）とは、抗体またはその一部により直接または間
接的に遺伝子構築物と結合する分子のことである。
ガンド）とは、抗体またはその一部により直接または間
接的に遺伝子構築物と結合する分子のことである。
【００１７】本発明の適切な態様において、ＴＳリガン
ドおよびＧＳリガンドは“コネクター”により結合され
る。加えて、片方または双方のリガンドが別々のリンカ
ーを有している。コネクターを利用する態様には、用い
られる特異的ＧＳリガンドおよびＴＳリガンドに応じ
て、異なる形を想定することができる（例えば、１×リ
ンカー、２×ＴＳリガンド、１×ＧＳリガンドまたは１
×リンカー、１×ＴＳリガンド、２×ＧＳリガンド）。
ドおよびＧＳリガンドは“コネクター”により結合され
る。加えて、片方または双方のリガンドが別々のリンカ
ーを有している。コネクターを利用する態様には、用い
られる特異的ＧＳリガンドおよびＴＳリガンドに応じ
て、異なる形を想定することができる（例えば、１×リ
ンカー、２×ＴＳリガンド、１×ＧＳリガンドまたは１
×リンカー、１×ＴＳリガンド、２×ＧＳリガンド）。
【００１８】ＴＳリガンド、リンカーおよびＧＳリガン
ド間のカップリングは、共有結合（Sedlacek et al.Con
trib.to Oncol.32,42-49および81-85,Karger Verlag Mu
nich(1988)を参照）または異なる電荷に基づくような非
共有手段（イオン結合）により行える。しかしながら、
リガンド系は、ＥＰ‐Ａ１‐０４６４５３３で既に記載
されたように、組換え技術を用いた融合タンパク質とし
て作製することもできる。
ド間のカップリングは、共有結合（Sedlacek et al.Con
trib.to Oncol.32,42-49および81-85,Karger Verlag Mu
nich(1988)を参照）または異なる電荷に基づくような非
共有手段（イオン結合）により行える。しかしながら、
リガンド系は、ＥＰ‐Ａ１‐０４６４５３３で既に記載
されたように、組換え技術を用いた融合タンパク質とし
て作製することもできる。
【００１９】本発明リガンド系により標的細胞中に導入
される核酸配列には、むき出しの状態（naked）のＲＮ
ＡまたはＤＮＡ、非ウイルスキャリアまたはウイルスと
混合されたむき出しの状態のＲＮＡまたはむき出しの状
態のＤＮＡがある。使用中に、本発明のリガンド系は遺
伝子構築物と混合されて、得られた複合体が形質導入す
べき細胞に加えられるか、またはその複合体は患者に投
与される。
される核酸配列には、むき出しの状態（naked）のＲＮ
ＡまたはＤＮＡ、非ウイルスキャリアまたはウイルスと
混合されたむき出しの状態のＲＮＡまたはむき出しの状
態のＤＮＡがある。使用中に、本発明のリガンド系は遺
伝子構築物と混合されて、得られた複合体が形質導入す
べき細胞に加えられるか、またはその複合体は患者に投
与される。
【００２０】本発明にとり有用な標的細胞特異的リガン
ド、遺伝子構築物特異性リガンド、リンカーおよびコネ
クターの例を、本発明者らにより考えられた可能な組合
せのうち一部を説明するために、以下に示す。
ド、遺伝子構築物特異性リガンド、リンカーおよびコネ
クターの例を、本発明者らにより考えられた可能な組合
せのうち一部を説明するために、以下に示す。
【００２１】ＴＳリガンド 本発明において、ＴＳリガンドには、標的細胞上のレセ
プターと結合する活性化合物、活性化合物の一部または
活性化合物のアナログがある。内在物質、内在物質の一
部と、内在物質の１以上のエピトープと似た他の物質
は、体中に導入されたときに、ほとんどの外来物質と比
較して、それらの低い免疫原性のため有利である。
プターと結合する活性化合物、活性化合物の一部または
活性化合物のアナログがある。内在物質、内在物質の一
部と、内在物質の１以上のエピトープと似た他の物質
は、体中に導入されたときに、ほとんどの外来物質と比
較して、それらの低い免疫原性のため有利である。
【００２２】このような活性化合物の例は：ＶＥＧＦ、
ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＴＧＦβ、ＫＧＦ、ＳＤ
ＧＦ、ＦＧＦ、ＩＧＦ、ＨＧＦ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ニ
ュートロフィン、ＢＭＦ、ボンベシン、Ｍ‐ＣＳＦ、ト
ロンボポエチン、エリトロポエチン、ＳＣＦ、ＳＤＧ
Ｆ、オンコスタチン、ＰＤＥＧＦおよびエンドセリン１
のような成長因子；ＩＬ‐１、ＩＬ‐２、ＩＬ‐３、Ｉ
Ｌ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐６、ＩＬ‐７、ＩＬ‐８、Ｉ
Ｌ‐９、ＩＬ‐１０、ＩＬ‐１１、ＩＬ‐１２、ＩＬ‐
１３、ＩＬ‐１４およびＩＬ‐１５のようなサイトカイ
ン；インターフェロンα、βおよびγ；腫瘍壊死因子Ｔ
ＮＦαおよびＴＮＦβ；ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＡＦ、ＭＩ
Ｐ‐１α、ＭＩＰ‐１β、ＮＡＰおよびβ‐トロンボグ
ロブリンのようなケモカイン；ＳＲＨ、ＳＩＨ、ＳＴ
Ｈ、ＭＲＨ、ＭＳＨ、ＰＲＨ、ＰＩＨ、プロラクチン、
ＬＨ‐ＲＨ、ＦＳＨ‐ＲＨ、ＬＨ／ＩＣＳＨ、ＦＳＨ、
ＴＲＨ、ＴＳＨ、ＣＲＨ、ＡＣＴＨのようなペプチドホ
ルモン；アンギオテンシン、キニンまたはヒスタミン、
あるいはそれらのホモログまたはアナログ；エストロゲ
ン、ゲスタゲン、アンドロゲン、グルココルチコイドま
たはミネラルコルチコイド、あるいはそれらのホモログ
またはアナログのようなステロイドホルモン；葉酸のよ
うなビタミンである。
ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＴＧＦβ、ＫＧＦ、ＳＤ
ＧＦ、ＦＧＦ、ＩＧＦ、ＨＧＦ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ニ
ュートロフィン、ＢＭＦ、ボンベシン、Ｍ‐ＣＳＦ、ト
ロンボポエチン、エリトロポエチン、ＳＣＦ、ＳＤＧ
Ｆ、オンコスタチン、ＰＤＥＧＦおよびエンドセリン１
のような成長因子；ＩＬ‐１、ＩＬ‐２、ＩＬ‐３、Ｉ
Ｌ‐４、ＩＬ‐５、ＩＬ‐６、ＩＬ‐７、ＩＬ‐８、Ｉ
Ｌ‐９、ＩＬ‐１０、ＩＬ‐１１、ＩＬ‐１２、ＩＬ‐
１３、ＩＬ‐１４およびＩＬ‐１５のようなサイトカイ
ン；インターフェロンα、βおよびγ；腫瘍壊死因子Ｔ
ＮＦαおよびＴＮＦβ；ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＡＦ、ＭＩ
Ｐ‐１α、ＭＩＰ‐１β、ＮＡＰおよびβ‐トロンボグ
ロブリンのようなケモカイン；ＳＲＨ、ＳＩＨ、ＳＴ
Ｈ、ＭＲＨ、ＭＳＨ、ＰＲＨ、ＰＩＨ、プロラクチン、
ＬＨ‐ＲＨ、ＦＳＨ‐ＲＨ、ＬＨ／ＩＣＳＨ、ＦＳＨ、
ＴＲＨ、ＴＳＨ、ＣＲＨ、ＡＣＴＨのようなペプチドホ
ルモン；アンギオテンシン、キニンまたはヒスタミン、
あるいはそれらのホモログまたはアナログ；エストロゲ
ン、ゲスタゲン、アンドロゲン、グルココルチコイドま
たはミネラルコルチコイド、あるいはそれらのホモログ
またはアナログのようなステロイドホルモン；葉酸のよ
うなビタミンである。
【００２３】本発明において、ＴＳリガンドには、細胞
膜に存在する対応接着性分子、または接着性分子と特異
的に結合する標的細胞のもう１つの構造と結合する接着
性分子、接着性分子の一部または接着性分子のアナログ
もある。
膜に存在する対応接着性分子、または接着性分子と特異
的に結合する標的細胞のもう１つの構造と結合する接着
性分子、接着性分子の一部または接着性分子のアナログ
もある。
【００２４】ＴＳリガンドとして機能できるこのような
接着性分子の例は、Lewis Ｘ（ＧＭＰ‐１４０の場
合）、Ｓ‐Lewis Ｘ（ＥＬＡＭ‐１の場合）、ＬＦＡ‐
１（ＩＣＡＭ‐１およびＩＣＡＭ‐２の場合）、ＭＡＣ
‐１（ＩＣＡＭ‐１の場合）、ＶＬＡ‐４（ＶＣＡＭ‐
１の場合）、ＰＥＣＡＭ（ＰＥＣＡＭの場合）、ビトロ
ネクチン（ビトロネクチンレセプターの場合）、ＧＭＰ
‐１４０（Lewis Ｘの場合）、Ｓ‐Lewis Ｘ（ＥＬＡＭ
‐１の場合）、ＩＣＡＭ‐１、ＩＣＡＭ‐２（ＬＦＡ‐
１、ＭＡＣ‐１の場合）、ＶＣＡＭ‐１（またはＶＬＡ
‐４）、フィブロネクチン（ＶＬＡ‐４の場合）、ラミ
ニン（ＶＬＡ‐６の場合）、フィブロネクチン、ラミニ
ン（ＶＬＡ‐１、ＶＬＡ‐２、ＶＬＡ‐３の場合）、フ
ィブロネクチン（ＶＬＡ‐４の場合）、フィブリノーゲ
ン（ＧＰIIｂ-IIIａの場合）、Ｂ７（ＣＤ２８の場
合）、ＣＤ２８（Ｂ７の場合）、ＣＤ４０（ＣＤ４０Ｌ
の場合）およびＣＤ４０Ｌ（ＣＤ４０の場合）である。
接着性分子の例は、Lewis Ｘ（ＧＭＰ‐１４０の場
合）、Ｓ‐Lewis Ｘ（ＥＬＡＭ‐１の場合）、ＬＦＡ‐
１（ＩＣＡＭ‐１およびＩＣＡＭ‐２の場合）、ＭＡＣ
‐１（ＩＣＡＭ‐１の場合）、ＶＬＡ‐４（ＶＣＡＭ‐
１の場合）、ＰＥＣＡＭ（ＰＥＣＡＭの場合）、ビトロ
ネクチン（ビトロネクチンレセプターの場合）、ＧＭＰ
‐１４０（Lewis Ｘの場合）、Ｓ‐Lewis Ｘ（ＥＬＡＭ
‐１の場合）、ＩＣＡＭ‐１、ＩＣＡＭ‐２（ＬＦＡ‐
１、ＭＡＣ‐１の場合）、ＶＣＡＭ‐１（またはＶＬＡ
‐４）、フィブロネクチン（ＶＬＡ‐４の場合）、ラミ
ニン（ＶＬＡ‐６の場合）、フィブロネクチン、ラミニ
ン（ＶＬＡ‐１、ＶＬＡ‐２、ＶＬＡ‐３の場合）、フ
ィブロネクチン（ＶＬＡ‐４の場合）、フィブリノーゲ
ン（ＧＰIIｂ-IIIａの場合）、Ｂ７（ＣＤ２８の場
合）、ＣＤ２８（Ｂ７の場合）、ＣＤ４０（ＣＤ４０Ｌ
の場合）およびＣＤ４０Ｌ（ＣＤ４０の場合）である。
【００２５】本発明において、ＴＳリガンドにはＦｃレ
セプターの細胞外部分（Doughertyet al.,Transfusion
Science 17,121 (1996)）もあり、それには標的細胞に
特異的な抗体がＦｃ部分により結合されている。
セプターの細胞外部分（Doughertyet al.,Transfusion
Science 17,121 (1996)）もあり、それには標的細胞に
特異的な抗体がＦｃ部分により結合されている。
【００２６】本発明において、ＴＳリガンドには、ＶＤ
ＬレセプターまたはＬＤＬレセプター〔例えば、ＬＤＬ
レセプター、ＬＤＬ関連レセプタータンパク質、ＩｇＧ
（例えば、Ｆｃγ ＲII‐Ｂ２、Ｆｃγ ＲＩ）のＦＣ
レセプター；８８ｋＤａ糖タンパク質レセプター、アセ
チル化ＬＤＬレセプター、酸化ＬＤＬレセプターまたは
メガリン〕用のリガンドもある。この性質のリガンドは
既に文献で詳細に記載されており、例えばアポリポタン
パク質Ｂ‐１００またはカルボキシ末端部分を含んだそ
の断片、アポリポタンパク質Ｅ、プロテアーゼ／インヒ
ビター複合体、例えばｔＰＡ／ＰＡＩ‐１複合体、２‐
マクログロブリン、トロンボスポンジンまたはそのヘパ
リン結合アミノ末端ドメイン（例えば、アミノ酸１‐２
１４）、酸化ＬＤＬ、アセチル化ＬＤＬまたはアセトア
セチル化ＬＤＬ、アセチル化リジン、デシアリル化ＬＤ
Ｌ、マロンジアルデヒド複合化ＬＤＬ、ホルムアルデヒ
ド処理またはグルタルアルデヒド処理アルブミン、マレ
イル化アルブミン、３９ｋＤａレセプター関連タンパク
質またはその断片、例えばアミノ酸１８‐１１２、１１
３‐２１８および２１９‐３２３か、アミノ酸１‐１１
４および１１４‐３１９を含むもの、ラクトフェリン、
アプロチニン、リポタンパク質リパーゼ、アミロイド前
駆タンパク質（プロテアーゼネキシン２）およびPseudo
monas 外毒素である。
ＬレセプターまたはＬＤＬレセプター〔例えば、ＬＤＬ
レセプター、ＬＤＬ関連レセプタータンパク質、ＩｇＧ
（例えば、Ｆｃγ ＲII‐Ｂ２、Ｆｃγ ＲＩ）のＦＣ
レセプター；８８ｋＤａ糖タンパク質レセプター、アセ
チル化ＬＤＬレセプター、酸化ＬＤＬレセプターまたは
メガリン〕用のリガンドもある。この性質のリガンドは
既に文献で詳細に記載されており、例えばアポリポタン
パク質Ｂ‐１００またはカルボキシ末端部分を含んだそ
の断片、アポリポタンパク質Ｅ、プロテアーゼ／インヒ
ビター複合体、例えばｔＰＡ／ＰＡＩ‐１複合体、２‐
マクログロブリン、トロンボスポンジンまたはそのヘパ
リン結合アミノ末端ドメイン（例えば、アミノ酸１‐２
１４）、酸化ＬＤＬ、アセチル化ＬＤＬまたはアセトア
セチル化ＬＤＬ、アセチル化リジン、デシアリル化ＬＤ
Ｌ、マロンジアルデヒド複合化ＬＤＬ、ホルムアルデヒ
ド処理またはグルタルアルデヒド処理アルブミン、マレ
イル化アルブミン、３９ｋＤａレセプター関連タンパク
質またはその断片、例えばアミノ酸１８‐１１２、１１
３‐２１８および２１９‐３２３か、アミノ酸１‐１１
４および１１４‐３１９を含むもの、ラクトフェリン、
アプロチニン、リポタンパク質リパーゼ、アミロイド前
駆タンパク質（プロテアーゼネキシン２）およびPseudo
monas 外毒素である。
【００２７】本発明において、ＴＳリガンドには抗体分
子または抗体分子のエピトープ結合部分もある。
子または抗体分子のエピトープ結合部分もある。
【００２８】マウスモノクローナル抗体は、もし用いら
れるならば、その免疫原性を制限するためにヒト化形で
用いられる。ヒト化は Winter et al.（Nature 349,293
(1991) ）および Hoogenboom et al.（Rev.Tr.Transfu
s.Hemobiol.36,19 (1993) ）に記載された手法で行え
る。抗体断片は、例えばWinter et al.,Nature 349,293
(1991) 、Hoogenboom et al.,Rev.Tr.Transfus.Hemobio
l.36,19 (1993) 、Girol.Mol.Immunol.28,1379 (1991)
またはHuston et al.,Int.Rev.Immunol.10,195 (1993)
に記載された手法で、業界水準に従い生産される。
れるならば、その免疫原性を制限するためにヒト化形で
用いられる。ヒト化は Winter et al.（Nature 349,293
(1991) ）および Hoogenboom et al.（Rev.Tr.Transfu
s.Hemobiol.36,19 (1993) ）に記載された手法で行え
る。抗体断片は、例えばWinter et al.,Nature 349,293
(1991) 、Hoogenboom et al.,Rev.Tr.Transfus.Hemobio
l.36,19 (1993) 、Girol.Mol.Immunol.28,1379 (1991)
またはHuston et al.,Int.Rev.Immunol.10,195 (1993)
に記載された手法で、業界水準に従い生産される。
【００２９】組換え抗体断片は現存するハイブリドーマ
から直接作製しても、またはファージディスプレー技術
（Smith,Science 228,1315 (1985) ；Winter et al.,An
nu.Rev.Immunol.12,433 (1994)を用いてマウスまたはヒ
ト抗体断片のライブラリーから単離してもよい。次い
で、これらの抗体断片は更に操作（例えば、他のタンパ
ク質との融合）のために遺伝子レベルで直接用いられ
る。
から直接作製しても、またはファージディスプレー技術
（Smith,Science 228,1315 (1985) ；Winter et al.,An
nu.Rev.Immunol.12,433 (1994)を用いてマウスまたはヒ
ト抗体断片のライブラリーから単離してもよい。次い
で、これらの抗体断片は更に操作（例えば、他のタンパ
ク質との融合）のために遺伝子レベルで直接用いられ
る。
【００３０】ハイブリドーマから組換え抗体断片を作製
するために、抗体の抗原結合ドメイン（ＶＨ、ＶＬ）を
エンコードする遺伝子情報は、ｍＲＮＡの単離、ｃＤＮ
ＡでＲＮＡの逆転写、その後でポリメラーゼ連鎖反応
（Saiki et al.,Science 230,1350 (1985)）と、可変断
片（Orlandi et al.,PNAS-USA 86,3833 (1989)）の各々
５′および３′末端に相補的なオリゴヌクレオチドを用
いた増幅により得られる。次いで、ＶＨおよびＶＬ断片
は、例えばＦｖ断片（Skerra & Pluckthun,Science 24
0,1038 (1988)）、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃ‐Ｆｃ）（Bir
d et al.,Science242,423 (1988)；Huston et al.,PNAS
-USA 85,5879 (1988) ）またはＦａｂ断片（Better et
al.,Science 240,1041 (1988) ）として、細菌発現ベク
ター中にクローニングされる。
するために、抗体の抗原結合ドメイン（ＶＨ、ＶＬ）を
エンコードする遺伝子情報は、ｍＲＮＡの単離、ｃＤＮ
ＡでＲＮＡの逆転写、その後でポリメラーゼ連鎖反応
（Saiki et al.,Science 230,1350 (1985)）と、可変断
片（Orlandi et al.,PNAS-USA 86,3833 (1989)）の各々
５′および３′末端に相補的なオリゴヌクレオチドを用
いた増幅により得られる。次いで、ＶＨおよびＶＬ断片
は、例えばＦｖ断片（Skerra & Pluckthun,Science 24
0,1038 (1988)）、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃ‐Ｆｃ）（Bir
d et al.,Science242,423 (1988)；Huston et al.,PNAS
-USA 85,5879 (1988) ）またはＦａｂ断片（Better et
al.,Science 240,1041 (1988) ）として、細菌発現ベク
ター中にクローニングされる。
【００３１】新たな抗体断片は、ファージディスプレー
技術を用いて、マウスまたはヒト源の抗体ライブラリー
（免疫ライブラリー、ナイーブライブラリー）から直接
単離することもできる。抗体断片のファージディスプレ
ーにおいて、抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ断片（McCa
fferty et al.Nature 348,552 (1990)）またはＦａｂ断
片（Hoogenboom et al.,Nucl.Acid Res.19,4133 (199
1)；Barbas et al.,PNAS-USA 88,7978 (1991) ）の形
で、ファージゲノム（McCafferty et al.Nature 348,55
2 (1990)）またはファージミドベクター（Breitling et
al.Gene 104,147 (1991) ）中に、繊維状バクテリオフ
ァージのｇ３ｐコートタンパク質との融合タンパク質と
してクローニングされる。抗原結合ファージは、抗原担
持プラスチック容器（パンニング）上で（Marks et a
l.,J.Mol.Biol.222,581 (1991)）、抗原複合化常磁性ビ
ーズ上で（Hawkins et al.,J.Mol.Biol.226,889 (199
2)）、または細胞表面に結合させる（Marks et al.,Bio
/Technol.11,1145 (1993) ）ことにより選択される。
技術を用いて、マウスまたはヒト源の抗体ライブラリー
（免疫ライブラリー、ナイーブライブラリー）から直接
単離することもできる。抗体断片のファージディスプレ
ーにおいて、抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ断片（McCa
fferty et al.Nature 348,552 (1990)）またはＦａｂ断
片（Hoogenboom et al.,Nucl.Acid Res.19,4133 (199
1)；Barbas et al.,PNAS-USA 88,7978 (1991) ）の形
で、ファージゲノム（McCafferty et al.Nature 348,55
2 (1990)）またはファージミドベクター（Breitling et
al.Gene 104,147 (1991) ）中に、繊維状バクテリオフ
ァージのｇ３ｐコートタンパク質との融合タンパク質と
してクローニングされる。抗原結合ファージは、抗原担
持プラスチック容器（パンニング）上で（Marks et a
l.,J.Mol.Biol.222,581 (1991)）、抗原複合化常磁性ビ
ーズ上で（Hawkins et al.,J.Mol.Biol.226,889 (199
2)）、または細胞表面に結合させる（Marks et al.,Bio
/Technol.11,1145 (1993) ）ことにより選択される。
【００３２】免疫ライブラリーは、免疫動物（Sastry e
t al.,PNAS-USA 86,5728 (1989) ；Ward et al.Nature
341,544 (1989)；Clackson et al.Nature 352,624 (199
1)）または患者（Mullinax et al.,PNAS-USA 87,8095
(1990) ；Barbas et al.,PNAS-USA 88,7978 (1991) ）
のＢリンパ球からの可変抗体断片のＰＣＲ増幅により作
製することができる。この場合には、マウス（Orlandi
et al.,PNAS-USA 86,3833 (1989)；Sastry et al.,PNAS
-USA 86,5728 (1989) ）、ヒト免疫グロブリン遺伝子
（Larrick et al.,BBRC 160,1250 (1989) ）またはヒト
免疫グロブリン遺伝子ファミリー（Marks et al.,Eur.
J.Immunol.21,985 (1991)）に特異的なオリゴヌクレオ
チドの組合せが用いられる。
t al.,PNAS-USA 86,5728 (1989) ；Ward et al.Nature
341,544 (1989)；Clackson et al.Nature 352,624 (199
1)）または患者（Mullinax et al.,PNAS-USA 87,8095
(1990) ；Barbas et al.,PNAS-USA 88,7978 (1991) ）
のＢリンパ球からの可変抗体断片のＰＣＲ増幅により作
製することができる。この場合には、マウス（Orlandi
et al.,PNAS-USA 86,3833 (1989)；Sastry et al.,PNAS
-USA 86,5728 (1989) ）、ヒト免疫グロブリン遺伝子
（Larrick et al.,BBRC 160,1250 (1989) ）またはヒト
免疫グロブリン遺伝子ファミリー（Marks et al.,Eur.
J.Immunol.21,985 (1991)）に特異的なオリゴヌクレオ
チドの組合せが用いられる。
【００３３】天然遺伝子ライブラリーは、免疫グロブリ
ン遺伝子源として非免疫化ドナーを用いることにより作
製することができる（Marks et al.,J.Mol.Biol.222,58
1 (1991)）。一方、免疫グロブリン生殖系列遺伝子は半
合成抗体レパートリーを作製するために使用でき、可変
断片の相補性決定領域は縮重プライマーを用いてＰＣＲ
により増幅される（Hoogenboom & Winter,J.Mol.Biol.2
27,381 (1992) ；Barbas et al.,PNAS-USA 89,4457 (19
92) ；Nissim et al.,EMBO J.13,692 (1994)；Griffith
s et al.,EMBO J.13,3245 (1994)）。これらのいわゆる
シングルポット（single-pot）ライブラリーは、免疫ラ
イブラリーと比較して、多数の抗原に対する抗体断片が
１つのシングルライブラリーから単離できるという利点
を有している（Nissim et al.,EMBO J.13,692 (199
4)）。
ン遺伝子源として非免疫化ドナーを用いることにより作
製することができる（Marks et al.,J.Mol.Biol.222,58
1 (1991)）。一方、免疫グロブリン生殖系列遺伝子は半
合成抗体レパートリーを作製するために使用でき、可変
断片の相補性決定領域は縮重プライマーを用いてＰＣＲ
により増幅される（Hoogenboom & Winter,J.Mol.Biol.2
27,381 (1992) ；Barbas et al.,PNAS-USA 89,4457 (19
92) ；Nissim et al.,EMBO J.13,692 (1994)；Griffith
s et al.,EMBO J.13,3245 (1994)）。これらのいわゆる
シングルポット（single-pot）ライブラリーは、免疫ラ
イブラリーと比較して、多数の抗原に対する抗体断片が
１つのシングルライブラリーから単離できるという利点
を有している（Nissim et al.,EMBO J.13,692 (199
4)）。
【００３４】抗体断片の親和性はファージディスプレー
技術を用いることで更に増加させることができ、新たな
ライブラリーは、ランダム（Hawkins et al.,J.Mol.Bio
l.226,889 (1992)；Gram et al.,PNAS-USA 89,3576 (19
92) ）、コドンベース（Glaser et al.,J.Immunol,149,
3903 (1992) ）または部位特異性変異誘発（Balint &La
rrick,Gene 137,109 (1993)）、ナイーブレパートリー
からの断片を用いた個別ドメインの鎖シャフリング（ch
ain-shuffling ）（Marks et al.,Bio/Technol．11,779
(1992)）によるか、または細菌変異誘発株（Low et a
l.,J.Mol.Biol.260,359 (1996)）を用いて、既に現存す
る抗体断片から作製され、改良された性質を有する抗体
断片は厳格な条件下で再選択により単離される（Hawkin
s et al.,J.Mol.Biol.226,889 (1992)）。加えて、マウ
ス抗体断片は可変ドメインの１つをヒトレパートリーで
段階的に置き換え、その後オリジナル抗原で選択（ガイ
ド選択）することによりヒト化できる（Jespers et a
l.,Bio/Technol.12,889 (1994)）。一方、マウス抗体は
オリジナルマウス抗体の対応領域でのヒト抗体の超可変
領域の特異的置換によりヒト化してもよい（Jones et a
l.,Nature 321,522 (1987)）。
技術を用いることで更に増加させることができ、新たな
ライブラリーは、ランダム（Hawkins et al.,J.Mol.Bio
l.226,889 (1992)；Gram et al.,PNAS-USA 89,3576 (19
92) ）、コドンベース（Glaser et al.,J.Immunol,149,
3903 (1992) ）または部位特異性変異誘発（Balint &La
rrick,Gene 137,109 (1993)）、ナイーブレパートリー
からの断片を用いた個別ドメインの鎖シャフリング（ch
ain-shuffling ）（Marks et al.,Bio/Technol．11,779
(1992)）によるか、または細菌変異誘発株（Low et a
l.,J.Mol.Biol.260,359 (1996)）を用いて、既に現存す
る抗体断片から作製され、改良された性質を有する抗体
断片は厳格な条件下で再選択により単離される（Hawkin
s et al.,J.Mol.Biol.226,889 (1992)）。加えて、マウ
ス抗体断片は可変ドメインの１つをヒトレパートリーで
段階的に置き換え、その後オリジナル抗原で選択（ガイ
ド選択）することによりヒト化できる（Jespers et a
l.,Bio/Technol.12,889 (1994)）。一方、マウス抗体は
オリジナルマウス抗体の対応領域でのヒト抗体の超可変
領域の特異的置換によりヒト化してもよい（Jones et a
l.,Nature 321,522 (1987)）。
【００３５】本発明において、ＴＳリガンドは、エンベ
ロープタンパク質により選択細胞と特異的に結合するウ
イルスのエンベロープタンパク質またはエンベロープタ
ンパク質の一部でもよい。ＴＳリガンドの選択は、遺伝
子構築物で形質導入される標的細胞に依存している。
ロープタンパク質により選択細胞と特異的に結合するウ
イルスのエンベロープタンパク質またはエンベロープタ
ンパク質の一部でもよい。ＴＳリガンドの選択は、遺伝
子構築物で形質導入される標的細胞に依存している。
【００３６】本発明で有用なリガンドの例には、内皮細
胞、マクロファージおよびリンパ球を活性化する；筋肉
細胞、造血細胞、滑膜細胞および炎症細胞に結合する；
ウイルスに感染した細胞に結合する；肝臓細胞のような
組織細胞に結合する；グリア細胞に結合する；白血病細
胞に結合する物質がある。これらリガンドの一部代表メ
ンバーはここでまとめられている。
胞、マクロファージおよびリンパ球を活性化する；筋肉
細胞、造血細胞、滑膜細胞および炎症細胞に結合する；
ウイルスに感染した細胞に結合する；肝臓細胞のような
組織細胞に結合する；グリア細胞に結合する；白血病細
胞に結合する物質がある。これらリガンドの一部代表メ
ンバーはここでまとめられている。
【００３７】活性化内皮細胞のＴＳリガンド 本発明の意味内において、これらのリガンドには、例え
ばBurrows et al.（Pharmac.Ther.64,155 (1994)）、 H
ughes et al.（Cancer Res.49,6214 (1989) ）および M
aruyama et al.（PNAS-USA 87,5744 (1990) ）に記載さ
れたように、内皮細胞の膜構造に対する抗体または抗体
断片がある。特に、これらのリガンドにはＶＥＧＦレセ
プターに対する抗体がある。
ばBurrows et al.（Pharmac.Ther.64,155 (1994)）、 H
ughes et al.（Cancer Res.49,6214 (1989) ）および M
aruyama et al.（PNAS-USA 87,5744 (1990) ）に記載さ
れたように、内皮細胞の膜構造に対する抗体または抗体
断片がある。特に、これらのリガンドにはＶＥＧＦレセ
プターに対する抗体がある。
【００３８】ＴＳリガンドには、内皮細胞の膜構造また
は膜レセプターと結合するすべての活性化合物も含む。
例えば、これらのリガンドには、末端部位にマンノース
を含む物質、更にはＩＬ‐１または成長因子、あるいは
それらの断片またはその部分物質があり、それらはＰＤ
ＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦまたはＴＧＦβのような内皮
細胞により発現されるレセプターと結合する（Pusztain
et al.,J.Pathol.169，191 (1993)）。
は膜レセプターと結合するすべての活性化合物も含む。
例えば、これらのリガンドには、末端部位にマンノース
を含む物質、更にはＩＬ‐１または成長因子、あるいは
それらの断片またはその部分物質があり、それらはＰＤ
ＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦまたはＴＧＦβのような内皮
細胞により発現されるレセプターと結合する（Pusztain
et al.,J.Pathol.169，191 (1993)）。
【００３９】ＴＳリガンドには、ＬＤＬレセプター、例
えばアセチル化ＬＤＬレセプター、酸化ＬＤＬレセプタ
ー、ＬＤＬ関連レセプタータンパク質（ＬＲＰ）、８８
ｋＤａ糖タンパク質レセプターおよびＩｇＧのＦｃレセ
プターに対するリガンドも含む。この性質のリガンド
は、既に文献で詳細に記載されている。
えばアセチル化ＬＤＬレセプター、酸化ＬＤＬレセプタ
ー、ＬＤＬ関連レセプタータンパク質（ＬＲＰ）、８８
ｋＤａ糖タンパク質レセプターおよびＩｇＧのＦｃレセ
プターに対するリガンドも含む。この性質のリガンド
は、既に文献で詳細に記載されている。
【００４０】ＴＳリガンドには、活性化および／または
増殖内皮細胞と結合する接着性分子を更に含む。Ｓｌｅ
ｘ、ＬＦＡ‐１、ＭＡＣ‐１、ＬＥＣＡＭ‐１、ＶＬＡ
‐４またはビトロネクチンのようなこの性質の接着性分
子は、既に記載されている（Augustin-Voss et al.,J.C
ell Biol.119,483 (1992) ；Pauli et al.Cancer Metas
t.Rev.9,175 (1990)；Honn et al.Cancer Metast.Rev.1
1,353 (1992)に概要あり）。本発明に意味内において、
ＴＳリガンドには、内皮細胞に向性を有するウイルスコ
ート糖タンパク質を特に含む。これらウイルスの例は、
フィロウイルス、例えばＧＰ（糖タンパク質）およびｓ
ＧＰ（第二糖タンパク質）コートタンパク質をもつMarb
urg ウイルス、各場合にＧＰおよびｓＧＰコートタンパ
ク質をもつEbola ウイルス、特にｇＢタンパク質をもつ
サイトメガロウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ型、Ｈ
ＩＶ‐１ウイルス、麻疹ウイルス、Hantaan ウイルス、
アルファウイルス、例えばSemliki Forestウイルス、流
行性出血熱ウイルス、ポリオウイルスと腸内ウイルス、
例えばＥＣＨＯ９、ＥＣＨＯ１２またはCoxsackieＢ３
である。
増殖内皮細胞と結合する接着性分子を更に含む。Ｓｌｅ
ｘ、ＬＦＡ‐１、ＭＡＣ‐１、ＬＥＣＡＭ‐１、ＶＬＡ
‐４またはビトロネクチンのようなこの性質の接着性分
子は、既に記載されている（Augustin-Voss et al.,J.C
ell Biol.119,483 (1992) ；Pauli et al.Cancer Metas
t.Rev.9,175 (1990)；Honn et al.Cancer Metast.Rev.1
1,353 (1992)に概要あり）。本発明に意味内において、
ＴＳリガンドには、内皮細胞に向性を有するウイルスコ
ート糖タンパク質を特に含む。これらウイルスの例は、
フィロウイルス、例えばＧＰ（糖タンパク質）およびｓ
ＧＰ（第二糖タンパク質）コートタンパク質をもつMarb
urg ウイルス、各場合にＧＰおよびｓＧＰコートタンパ
ク質をもつEbola ウイルス、特にｇＢタンパク質をもつ
サイトメガロウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ型、Ｈ
ＩＶ‐１ウイルス、麻疹ウイルス、Hantaan ウイルス、
アルファウイルス、例えばSemliki Forestウイルス、流
行性出血熱ウイルス、ポリオウイルスと腸内ウイルス、
例えばＥＣＨＯ９、ＥＣＨＯ１２またはCoxsackieＢ３
である。
【００４１】活性化マクロファージおよび／または活性
化リンパ球向けＴＳリガンド 本発明の意味内において、リガンドには免疫細胞の表面
と特異的に結合する物質がある。このような物質には、
例えばPowelson et al.,Biotech.Adv.11,725 (1993) に
記載されたように、免疫細胞の膜構造に対する抗体また
は抗体断片がある。
化リンパ球向けＴＳリガンド 本発明の意味内において、リガンドには免疫細胞の表面
と特異的に結合する物質がある。このような物質には、
例えばPowelson et al.,Biotech.Adv.11,725 (1993) に
記載されたように、免疫細胞の膜構造に対する抗体また
は抗体断片がある。
【００４２】ＴＳリガンドには、既に前記されたよう
な、ＬＤＬレセプターに対するすべてのリガンドも更に
含む。ＴＳリガンドには、更に、免疫細胞上のＦｃ‐
γ、Ｆｃ‐εまたはＦｃ‐μレセプターと抗原結合可変
部分によって結合する、モノクローナルまたはポリクロ
ーナル抗体または抗体断片もある（Rojanasakul et a
l.,Pharm.Res.11,1731 (1994) ）。
な、ＬＤＬレセプターに対するすべてのリガンドも更に
含む。ＴＳリガンドには、更に、免疫細胞上のＦｃ‐
γ、Ｆｃ‐εまたはＦｃ‐μレセプターと抗原結合可変
部分によって結合する、モノクローナルまたはポリクロ
ーナル抗体または抗体断片もある（Rojanasakul et a
l.,Pharm.Res.11,1731 (1994) ）。
【００４３】これらのリガンドには、ヒトモノクローナ
ルまたはポリクローナル免疫グロブリンのＦｃ断片もあ
る。この性質のＦｃ断片は、例えば組換えＤＮＡを用い
た遺伝子操作によるか、またはHaupt et al.,Klin.Wsch
r.47,270 (1969) ；Kranz etal.,Dev.Biol.Standard 4
4,19 (1979) ；Fehr et al.,Adv.Clin.Pharmac.6,64(19
74)；Menninger et al.,Immunochem.13,633 (1976) の
方法に従い作られる。
ルまたはポリクローナル免疫グロブリンのＦｃ断片もあ
る。この性質のＦｃ断片は、例えば組換えＤＮＡを用い
た遺伝子操作によるか、またはHaupt et al.,Klin.Wsch
r.47,270 (1969) ；Kranz etal.,Dev.Biol.Standard 4
4,19 (1979) ；Fehr et al.,Adv.Clin.Pharmac.6,64(19
74)；Menninger et al.,Immunochem.13,633 (1976) の
方法に従い作られる。
【００４４】ＴＳリガンドには、免疫細胞の表面上にあ
る膜レセプターと結合するすべての物質を含む。これら
のリガンドには、免疫細胞により発現されるレセプター
と結合するサイトカイン、例えばＩＬ‐１、ＩＬ‐２、
ＩＬ‐３、ＩＬ‐４、ＩＬ‐６、ＩＬ‐１０、ＴＮＦ
α、ＧＭ‐ＣＳＦおよびＭ‐ＣＳＦと、更に成長因子、
例えばＥＧＦ、ＴＧＦ、ＦＧＦ、ＩＧＦまたはＰＤＧ
Ｆ、あるいはそれらの断片またはその部分配列がある。
る膜レセプターと結合するすべての物質を含む。これら
のリガンドには、免疫細胞により発現されるレセプター
と結合するサイトカイン、例えばＩＬ‐１、ＩＬ‐２、
ＩＬ‐３、ＩＬ‐４、ＩＬ‐６、ＩＬ‐１０、ＴＮＦ
α、ＧＭ‐ＣＳＦおよびＭ‐ＣＳＦと、更に成長因子、
例えばＥＧＦ、ＴＧＦ、ＦＧＦ、ＩＧＦまたはＰＤＧ
Ｆ、あるいはそれらの断片またはその部分配列がある。
【００４５】ＴＳリガンドには、脾臓、肝臓、肺臓およ
び他組織のマクロファージ上にある細胞膜構造、例えば
マンノース‐６‐リン酸レセプターと結合する、接着性
分子および他のリガンドが更にある。これらリガンドお
よび膜構造の選択は、Perales et al.,Eur.J.Biochem.2
26,255 (1994) で概説されている。
び他組織のマクロファージ上にある細胞膜構造、例えば
マンノース‐６‐リン酸レセプターと結合する、接着性
分子および他のリガンドが更にある。これらリガンドお
よび膜構造の選択は、Perales et al.,Eur.J.Biochem.2
26,255 (1994) で概説されている。
【００４６】本発明に意味内において、ＴＳリガンドに
は、リンパ球および／またはマクロファージに向性を有
するウイルスからのエンベロープ糖タンパク質もある。
マクロファージに感染するこれらウイルスの例は、ＨＩ
Ｖ‐１、特にマクロファージとの結合性を増加させる変
異をｇｐ１２０のＶ３領域に有する株、ＨＩＶ‐２、Ha
nta ウイルス、例えばPunmala ウイルス、サイトメガロ
ウイルス、呼吸シンシチアルウイルス、単純ヘルペスウ
イルスおよびフィロウイルスである。
は、リンパ球および／またはマクロファージに向性を有
するウイルスからのエンベロープ糖タンパク質もある。
マクロファージに感染するこれらウイルスの例は、ＨＩ
Ｖ‐１、特にマクロファージとの結合性を増加させる変
異をｇｐ１２０のＶ３領域に有する株、ＨＩＶ‐２、Ha
nta ウイルス、例えばPunmala ウイルス、サイトメガロ
ウイルス、呼吸シンシチアルウイルス、単純ヘルペスウ
イルスおよびフィロウイルスである。
【００４７】リンパ球に感染するウイルスの例は、水痘
‐帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ヘルペスウイルス６
（ＨＨＶ‐６）、狂犬病ウイルス、ＨＩＶ‐Ｉ、ＨＴＬ
Ｖ‐II、ＨＴＬＶ‐Ｉ、インフルエンザＣウイルス〔イ
ンフルエンザＣウイルスは、Ｂリンパ球上で優先的に生
じて、Ｔリンパ球上ではそれより少い程度で生じるか、
または全く生じない、Ｎ‐アセチル‐β‐アセチルノイ
ラミン酸（Ｎｅｕ５，９Ａｃ）と、ヘマグルチニン‐エ
ステラーゼ融合（ＨＥＦ）タンパク質によって結合する
ためである；インフルエンザＣウイルスはヌクレオチド
８７２位（ＨＥＦアミノ酸配列の２８４位をエンコード
している）に変異、例えばトレオニンからイソロイシン
への置換を有していて、この変異を有したＨＥＦ表面タ
ンパク質は、野生型ウイルスよりも著しく強い親和性を
Ｎ‐アセチル‐９‐Ｏ‐アセチルノイラミン酸レセプタ
ーに対して有しているためである〕、Ｎ‐アセチル‐９
‐β‐アセチルノイラミン酸と結合するための構造を含
んだインフルエンザＣウイルスＨＥＦ開裂産物（この結
合構造は触媒三位置セリン７１、ヒスチジン３６８また
は３６９とアスパラギン酸２６１により定められるため
である）、Epstein-Barrウイルス（ＥＢＶはＢ細胞に感
染するためである）、単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳ
Ｖ‐２はＴ細胞に感染するためである）および麻疹ウイ
ルスである。
‐帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ヘルペスウイルス６
（ＨＨＶ‐６）、狂犬病ウイルス、ＨＩＶ‐Ｉ、ＨＴＬ
Ｖ‐II、ＨＴＬＶ‐Ｉ、インフルエンザＣウイルス〔イ
ンフルエンザＣウイルスは、Ｂリンパ球上で優先的に生
じて、Ｔリンパ球上ではそれより少い程度で生じるか、
または全く生じない、Ｎ‐アセチル‐β‐アセチルノイ
ラミン酸（Ｎｅｕ５，９Ａｃ）と、ヘマグルチニン‐エ
ステラーゼ融合（ＨＥＦ）タンパク質によって結合する
ためである；インフルエンザＣウイルスはヌクレオチド
８７２位（ＨＥＦアミノ酸配列の２８４位をエンコード
している）に変異、例えばトレオニンからイソロイシン
への置換を有していて、この変異を有したＨＥＦ表面タ
ンパク質は、野生型ウイルスよりも著しく強い親和性を
Ｎ‐アセチル‐９‐Ｏ‐アセチルノイラミン酸レセプタ
ーに対して有しているためである〕、Ｎ‐アセチル‐９
‐β‐アセチルノイラミン酸と結合するための構造を含
んだインフルエンザＣウイルスＨＥＦ開裂産物（この結
合構造は触媒三位置セリン７１、ヒスチジン３６８また
は３６９とアスパラギン酸２６１により定められるため
である）、Epstein-Barrウイルス（ＥＢＶはＢ細胞に感
染するためである）、単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳ
Ｖ‐２はＴ細胞に感染するためである）および麻疹ウイ
ルスである。
【００４８】筋肉細胞向けＴＳリガンド 筋肉細胞表面に結合するリガンドには、例えば筋肉細
胞、特に平滑筋細胞の膜構造に対する抗体または抗体断
片がある。この性質の抗体の例は、抗体１０Ｆ３、アク
チンに対する抗体、アンギオテンシンIIレセプターに対
する抗体、成長因子のレセプターに対する抗体、例えば
ＥＧＦレセプター、ＰＤＧＦレセプターまたはＦＧＦレ
セプターに対する抗体、あるいはエンドセリンＡレセプ
ターに対する抗体である。
胞、特に平滑筋細胞の膜構造に対する抗体または抗体断
片がある。この性質の抗体の例は、抗体１０Ｆ３、アク
チンに対する抗体、アンギオテンシンIIレセプターに対
する抗体、成長因子のレセプターに対する抗体、例えば
ＥＧＦレセプター、ＰＤＧＦレセプターまたはＦＧＦレ
セプターに対する抗体、あるいはエンドセリンＡレセプ
ターに対する抗体である。
【００４９】ＴＳリガンドには、筋肉細胞上の膜構造ま
たは膜レセプターと結合する、すべての活性物質を含
む。これらのリガンドには、平滑筋細胞により発現され
るレセプターと結合する、例えば成長因子あるいはそれ
らの断片またはその部分配列、例えばＰＤＧＦ、ＥＧ
Ｆ、ＴＧＦβ、ＴＧＦα、ＦＧＦおよびエンドセリンＡ
がある。
たは膜レセプターと結合する、すべての活性物質を含
む。これらのリガンドには、平滑筋細胞により発現され
るレセプターと結合する、例えば成長因子あるいはそれ
らの断片またはその部分配列、例えばＰＤＧＦ、ＥＧ
Ｆ、ＴＧＦβ、ＴＧＦα、ＦＧＦおよびエンドセリンＡ
がある。
【００５０】本発明の意味内において、ＴＳリガンドに
は、筋肉細胞に向性を有するウイルスからのエンベロー
プ糖タンパク質も含む。これらのウイルスには、例えば
サイトメガロウイルスがある。
は、筋肉細胞に向性を有するウイルスからのエンベロー
プ糖タンパク質も含む。これらのウイルスには、例えば
サイトメガロウイルスがある。
【００５１】造血細胞向けＴＳリガンド ＴＳリガンドには、比較的未分化の血液細胞上で発現さ
れるレセプターに対する抗体または抗体断片がある。こ
の性質の抗体は、例えば下記レセプター：幹細胞因子レ
セプター、ＩＬ‐１レセプター（Ｉ型）、ＩＬ‐１レセ
プター（II型）、ＩＬ‐３レセプターα、ＩＬ‐３レセ
プターβ、ＩＬ‐６レセプターおよびＧＭ‐ＣＳＦレセ
プターについて記載されている。
れるレセプターに対する抗体または抗体断片がある。こ
の性質の抗体は、例えば下記レセプター：幹細胞因子レ
セプター、ＩＬ‐１レセプター（Ｉ型）、ＩＬ‐１レセ
プター（II型）、ＩＬ‐３レセプターα、ＩＬ‐３レセ
プターβ、ＩＬ‐６レセプターおよびＧＭ‐ＣＳＦレセ
プターについて記載されている。
【００５２】ＴＳリガンドには、更に、免疫細胞上のＦ
ｃ‐γレセプターと不変ドメインにより結合する、モノ
クローナルまたはポリクローナル抗体または抗体断片も
ある。ＴＳリガンドには、比較的未分化の血液細胞の表
面上にある膜構造または膜レセプターと結合する、すべ
ての活性物質を含む。これらのリガンドには、血液細胞
により発現されるレセプターと結合する、例えばＳＣ
Ｆ、ＩＬ‐１、ＩＬ‐３、ＩＬ‐６およびＧＭ‐ＣＳＦ
のような成長因子、あるいはそれらの断片またはその部
分配列がある。
ｃ‐γレセプターと不変ドメインにより結合する、モノ
クローナルまたはポリクローナル抗体または抗体断片も
ある。ＴＳリガンドには、比較的未分化の血液細胞の表
面上にある膜構造または膜レセプターと結合する、すべ
ての活性物質を含む。これらのリガンドには、血液細胞
により発現されるレセプターと結合する、例えばＳＣ
Ｆ、ＩＬ‐１、ＩＬ‐３、ＩＬ‐６およびＧＭ‐ＣＳＦ
のような成長因子、あるいはそれらの断片またはその部
分配列がある。
【００５３】滑膜細胞および炎症細胞向けＴＳリガンド これらのリガンドには、滑膜細胞および炎症細胞の膜構
造と可変ドメインにより結合する、モノクローナルまた
はポリクローナル抗体または抗体断片もある。このよう
な膜構造の例は、ビメンチン、フィブロネクチンおよび
Ｆｃレセプターである。
造と可変ドメインにより結合する、モノクローナルまた
はポリクローナル抗体または抗体断片もある。このよう
な膜構造の例は、ビメンチン、フィブロネクチンおよび
Ｆｃレセプターである。
【００５４】これらのリガンドには、Ｆｃレセプターと
不変ドメインにより結合する、モノクローナルまたはポ
リクローナル抗体または抗体断片もある。これらのリガ
ンドには、更に、滑膜細胞上にある膜構造または膜レセ
プターと結合する、すべての活性化合物を含む。これら
には、滑膜細胞により発現されるレセプターと結合す
る、例えばサイトカインまたは成長因子、あるいはそれ
らの断片またはその部分配列、例えばＩＬ‐１‐ＲＡ、
ＴＮＦα、ＩＬ‐４、ＩＬ‐６、ＩＬ‐１０、ＩＧＦお
よびＴＧＦβがある。これらのリガンドには、マクロフ
ァージ上にあるマンノース‐６‐リン酸レセプターと結
合する、必須要素が末端マンノースであるＴＳリガンド
を更に含む。
不変ドメインにより結合する、モノクローナルまたはポ
リクローナル抗体または抗体断片もある。これらのリガ
ンドには、更に、滑膜細胞上にある膜構造または膜レセ
プターと結合する、すべての活性化合物を含む。これら
には、滑膜細胞により発現されるレセプターと結合す
る、例えばサイトカインまたは成長因子、あるいはそれ
らの断片またはその部分配列、例えばＩＬ‐１‐ＲＡ、
ＴＮＦα、ＩＬ‐４、ＩＬ‐６、ＩＬ‐１０、ＩＧＦお
よびＴＧＦβがある。これらのリガンドには、マクロフ
ァージ上にあるマンノース‐６‐リン酸レセプターと結
合する、必須要素が末端マンノースであるＴＳリガンド
を更に含む。
【００５５】ウイルスに感染した細胞向けのＴＳリガン
ド ＴＳリガンドは、ウイルス感染細胞の細胞膜上で発現さ
れるウイルス抗原に対する抗体または抗体断片であって
もよい。この性質の抗体は、例えばＨＢＶ、ＨＣＶ、Ｈ
ＳＶ、ＨＰＶ、ＨＩＶ、ＥＢＶおよびＨＴＬＶウイルス
で感染された細胞について記載されている。
ド ＴＳリガンドは、ウイルス感染細胞の細胞膜上で発現さ
れるウイルス抗原に対する抗体または抗体断片であって
もよい。この性質の抗体は、例えばＨＢＶ、ＨＣＶ、Ｈ
ＳＶ、ＨＰＶ、ＨＩＶ、ＥＢＶおよびＨＴＬＶウイルス
で感染された細胞について記載されている。
【００５６】肝臓細胞および他の組織細胞向けのＴＳリ
ガンド ＴＳリガンドには、肝臓細胞の表面上にある膜構造また
は膜レセプターと結合する、すべての物質を含む。これ
らのリガンドには、この性質の細胞により発現されるレ
セプターと結合する、例えばサイトカイン、ＥＧＦ、Ｔ
ＧＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦのような成長因子、あるい
はそれらの断片またはその部分配列がある。これらのリ
ガンドには、特定組織に選択的な細胞膜構造と結合する
ＴＳリガンドが更にある。例は以下である： 表１： 膜構造 ＴＳリガンド 組織細胞 アシアロ糖タンパク質 アシアロオロソムコイド 肝臓細胞 レセプター ネオ糖タンパク質 ガラクトース トランスフェリンレセプター トランスフェリン 肝臓および他組織細胞 インシュリンレセプター インシュリン 肝臓および他組織細胞 マンノース‐６‐リン酸 マンノース 脾臓、肝臓、肺臓および レセプター 他組織のマクロファージ Ｆｃ‐γレセプター 免疫グロブリンＧ 細網内皮系および他組織 これらのリガンドおよび膜構造はPerales et al.,Eur.
J.Biochem.226,255 (1994) で概説されている。
ガンド ＴＳリガンドには、肝臓細胞の表面上にある膜構造また
は膜レセプターと結合する、すべての物質を含む。これ
らのリガンドには、この性質の細胞により発現されるレ
セプターと結合する、例えばサイトカイン、ＥＧＦ、Ｔ
ＧＦ、ＦＧＦまたはＰＤＧＦのような成長因子、あるい
はそれらの断片またはその部分配列がある。これらのリ
ガンドには、特定組織に選択的な細胞膜構造と結合する
ＴＳリガンドが更にある。例は以下である： 表１： 膜構造 ＴＳリガンド 組織細胞 アシアロ糖タンパク質 アシアロオロソムコイド 肝臓細胞 レセプター ネオ糖タンパク質 ガラクトース トランスフェリンレセプター トランスフェリン 肝臓および他組織細胞 インシュリンレセプター インシュリン 肝臓および他組織細胞 マンノース‐６‐リン酸 マンノース 脾臓、肝臓、肺臓および レセプター 他組織のマクロファージ Ｆｃ‐γレセプター 免疫グロブリンＧ 細網内皮系および他組織 これらのリガンドおよび膜構造はPerales et al.,Eur.
J.Biochem.226,255 (1994) で概説されている。
【００５７】本発明に意味内において、ＴＳリガンドに
は、特に選択細胞に向性を有するウイルスからのエンベ
ロープ糖タンパク質、例えば気管支上皮細胞に対する呼
吸シンシチアルウイルスからの糖タンパク質、肝臓細胞
に対するＣ型肝炎ウイルス、フィロウイルス、Ｂ型肝炎
ウイルスおよびＤ型肝炎ウイルスからの糖タンパク質が
ある。例えば、肝臓細胞はアシアロ糖タンパク質レセプ
ターによりMarburg ウイルスと結合するか、または肝臓
細胞は優先的にアシアロ糖タンパク質レセプターにより
ＨＢＶのｐｒｅＳ２およびｐｒｅＳ１ドメインと結合す
る。もう１つの例は、肝臓洞様細胞に対するＢ型肝炎ウ
イルスからの糖タンパク質であり、ＨＢＶはフィブロネ
クチンにより結合されるからである。
は、特に選択細胞に向性を有するウイルスからのエンベ
ロープ糖タンパク質、例えば気管支上皮細胞に対する呼
吸シンシチアルウイルスからの糖タンパク質、肝臓細胞
に対するＣ型肝炎ウイルス、フィロウイルス、Ｂ型肝炎
ウイルスおよびＤ型肝炎ウイルスからの糖タンパク質が
ある。例えば、肝臓細胞はアシアロ糖タンパク質レセプ
ターによりMarburg ウイルスと結合するか、または肝臓
細胞は優先的にアシアロ糖タンパク質レセプターにより
ＨＢＶのｐｒｅＳ２およびｐｒｅＳ１ドメインと結合す
る。もう１つの例は、肝臓洞様細胞に対するＢ型肝炎ウ
イルスからの糖タンパク質であり、ＨＢＶはフィブロネ
クチンにより結合されるからである。
【００５８】グリア細胞向けＴＳリガンド これらのリガンドには、例えばMirsky et al.,Coakham
et al.およびMcKeeveret al. により報告されたよう
な、グリア細胞の膜構造に対する抗体または抗体断片が
ある。これらの膜構造には、Ｎ‐ＣＡＭのような神経接
着性分子、特にそのポリペプチドＣ鎖が更にある。
et al.およびMcKeeveret al. により報告されたよう
な、グリア細胞の膜構造に対する抗体または抗体断片が
ある。これらの膜構造には、Ｎ‐ＣＡＭのような神経接
着性分子、特にそのポリペプチドＣ鎖が更にある。
【００５９】これらのリガンドには、グリア細胞上の膜
構造または膜レセプターと結合する、すべての活性化合
物も含む。例えば、これらのリガンドには、末端位置に
マンノースを有してマンノース‐６‐リン酸レセプター
と結合する物質、インシュリン、インシュリン様成長因
子およびＰＤＧＦと、関連膜レセプターと結合するこれ
ら成長因子の断片がある本発明の意味内において、ＴＳ
リガンドには、特にグリア細胞に向性を有するウイルス
からのエンベロープ糖タンパク質がある。これらウイル
スの例は、ＨＩＶ‐１サブタイプＪＲＦ１および単純ヘ
ルペスウイルスＩである。
構造または膜レセプターと結合する、すべての活性化合
物も含む。例えば、これらのリガンドには、末端位置に
マンノースを有してマンノース‐６‐リン酸レセプター
と結合する物質、インシュリン、インシュリン様成長因
子およびＰＤＧＦと、関連膜レセプターと結合するこれ
ら成長因子の断片がある本発明の意味内において、ＴＳ
リガンドには、特にグリア細胞に向性を有するウイルス
からのエンベロープ糖タンパク質がある。これらウイル
スの例は、ＨＩＶ‐１サブタイプＪＲＦ１および単純ヘ
ルペスウイルスＩである。
【００６０】白血病細胞向けＴＳリガンド これらのリガンドには、白血病細胞上の膜構造に対する
抗体または抗体断片がある。この性質の多数のモノクロ
ーナル抗体が、診断および治療法について既に記載され
ている（Kristensen,Danish Medical Bulletin 41,52
(1994) ；Schranz,Therapia Hungarica 38,3 (1990)；D
rexler et al.,Leuk,Res.10,279 (1986)；Naeim,Dis.Ma
rkers 7,1 (1989)；Stickney et al.,Curr.Opin.Oncol,
4,847 (1992)；Drexler et al.,Blut 57,327 (1988) ；
Freedman et al.,Cancer Invest.9,69 (1991) に概要あ
り）。下記モノクローナル抗体またはそれらの抗原結合
抗体断片は、白血病のタイプに応じて、（１）ＡＭＬ細
胞、膜抗原ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ３３、
ＣＡＭＡＬ、シアロシル‐Ｌｅ；（２）Ｂ‐ＣＬＬ膜抗
原ＣＤ５、ＣＤ１ｃ、ＣＤ２３、膜免疫グロブリンのイ
ディオタイプおよびイソタイプ；（３）Ｔ‐ＣＬＬ膜抗
原ＣＤ３３、Ｍ３８、ＩＬ‐２レセプター、Ｔ細胞レセ
プター；（４）ＡＬＬ膜抗原ＣＡＬＬＡ、ＣＤ１９非Ho
dgkin's リンパ腫に対するリガンドとしての使用に適し
ている。
抗体または抗体断片がある。この性質の多数のモノクロ
ーナル抗体が、診断および治療法について既に記載され
ている（Kristensen,Danish Medical Bulletin 41,52
(1994) ；Schranz,Therapia Hungarica 38,3 (1990)；D
rexler et al.,Leuk,Res.10,279 (1986)；Naeim,Dis.Ma
rkers 7,1 (1989)；Stickney et al.,Curr.Opin.Oncol,
4,847 (1992)；Drexler et al.,Blut 57,327 (1988) ；
Freedman et al.,Cancer Invest.9,69 (1991) に概要あ
り）。下記モノクローナル抗体またはそれらの抗原結合
抗体断片は、白血病のタイプに応じて、（１）ＡＭＬ細
胞、膜抗原ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ３３、
ＣＡＭＡＬ、シアロシル‐Ｌｅ；（２）Ｂ‐ＣＬＬ膜抗
原ＣＤ５、ＣＤ１ｃ、ＣＤ２３、膜免疫グロブリンのイ
ディオタイプおよびイソタイプ；（３）Ｔ‐ＣＬＬ膜抗
原ＣＤ３３、Ｍ３８、ＩＬ‐２レセプター、Ｔ細胞レセ
プター；（４）ＡＬＬ膜抗原ＣＡＬＬＡ、ＣＤ１９非Ho
dgkin's リンパ腫に対するリガンドとしての使用に適し
ている。
【００６１】ＴＳリガンドには、白血病細胞の膜構造ま
たは膜レセプターと結合する、すべての活性化合物も更
に含む。これらのリガンドには、白血病細胞により発現
されるレセプターと結合する、例えば成長因子、あるい
はそれらの断片またはその部分配列がある。
たは膜レセプターと結合する、すべての活性化合物も更
に含む。これらのリガンドには、白血病細胞により発現
されるレセプターと結合する、例えば成長因子、あるい
はそれらの断片またはその部分配列がある。
【００６２】この性質の成長因子は既に記載されている
（Cross et al.,Cell 64,271 (1991) ；Aulitzky et a
l.,Drugs 48,667 (1994) ；Moore,Clin.Cancer Res.1,3
(1995)；Van Kooten et al.,Leuk.Lymph.12,27 (1993)
に概要あり）。例は、非Hodgkin's リンパ腫の場合に
ＩＦＮα；特にＴ細胞白血病の場合にＩＬ‐２；Ｔ細
胞、単球性、骨髄性、赤芽球性および巨核芽球性白血病
の場合にＦＧＦ；白血病の場合にＴＧＦβ；急性前骨髄
球性白血病の場合にレチノイド、例えばレチノイン酸で
ある。
（Cross et al.,Cell 64,271 (1991) ；Aulitzky et a
l.,Drugs 48,667 (1994) ；Moore,Clin.Cancer Res.1,3
(1995)；Van Kooten et al.,Leuk.Lymph.12,27 (1993)
に概要あり）。例は、非Hodgkin's リンパ腫の場合に
ＩＦＮα；特にＴ細胞白血病の場合にＩＬ‐２；Ｔ細
胞、単球性、骨髄性、赤芽球性および巨核芽球性白血病
の場合にＦＧＦ；白血病の場合にＴＧＦβ；急性前骨髄
球性白血病の場合にレチノイド、例えばレチノイン酸で
ある。
【００６３】腫瘍細胞向けＴＳリガンド これらのリガンドには、腫瘍細胞上の膜構造に対する抗
体およびこれら抗体の断片がある。この性質の抗体は、
例えばSedlacek et al.,Contrib.to Oncol.32,Karger V
erlag,Munich (1988) およびContrib.to Oncol.43,Karg
er Verlag,Munich (1992) により概説されている。
体およびこれら抗体の断片がある。この性質の抗体は、
例えばSedlacek et al.,Contrib.to Oncol.32,Karger V
erlag,Munich (1988) およびContrib.to Oncol.43,Karg
er Verlag,Munich (1992) により概説されている。
【００６４】他の例は、シアリルLewis 、Ｔ細胞により
認識される腫瘍上のペプチド、がん遺伝子により発現さ
れるタンパク質、ＧＤ３、ＧＤ２、ＧＭ２、９‐Ｏ‐ア
セチルＧＤ３およびフコシルＧＭ１のようなガングリオ
シド、血液型抗原およびそれらの前駆体、多形上皮ムチ
ン上の抗原と、熱ショックタンパク質上の抗原に対する
抗体である。
認識される腫瘍上のペプチド、がん遺伝子により発現さ
れるタンパク質、ＧＤ３、ＧＤ２、ＧＭ２、９‐Ｏ‐ア
セチルＧＤ３およびフコシルＧＭ１のようなガングリオ
シド、血液型抗原およびそれらの前駆体、多形上皮ムチ
ン上の抗原と、熱ショックタンパク質上の抗原に対する
抗体である。
【００６５】リンカー リンカーの選択は、ＴＳリガンドおよびＧＳリガンドの
化学的性質と、リンカーによりＴＳリガンドおよびＧＳ
リガンドを互いに連結させるために用いられる方法とに
依存している。リガンドがペプチドまたはタンパク質で
あるならば、ペプチドまたはタンパク質が好ましくはリ
ンカーとして用いられ、リンカーは好ましくはペプチド
結合によりＴＳリガンドおよびＧＳリガンドと連結され
る。この性質のＴＳリガンド‐リンカー‐ＧＳリガンド
またはＴＳリガンド‐ＧＳリガンド‐リンカー分子は、
組換えＤＮＡ技術を用いて、融合タンパク質として作ら
れることが好ましい。通常、有利なリンカーは内在物質
であるか、またはその免疫原性を制限するように内在物
質と類似させる。
化学的性質と、リンカーによりＴＳリガンドおよびＧＳ
リガンドを互いに連結させるために用いられる方法とに
依存している。リガンドがペプチドまたはタンパク質で
あるならば、ペプチドまたはタンパク質が好ましくはリ
ンカーとして用いられ、リンカーは好ましくはペプチド
結合によりＴＳリガンドおよびＧＳリガンドと連結され
る。この性質のＴＳリガンド‐リンカー‐ＧＳリガンド
またはＴＳリガンド‐ＧＳリガンド‐リンカー分子は、
組換えＤＮＡ技術を用いて、融合タンパク質として作ら
れることが好ましい。通常、有利なリンカーは内在物質
であるか、またはその免疫原性を制限するように内在物
質と類似させる。
【００６６】ＴＳリガンドがペプチドまたはタンパク質
でないならば、リンカーは、その最も簡単な形のとき、
ＴＳリガンドおよびＧＳリガンドを連結させる構造であ
る。この性質の構造は、タンパク質中のアミノ基、ヒド
ロキシル基、ＳＨ基、カルボキシル基またはアルデヒド
基に分子を結合させるために用いられる、異なる化学的
接合法に基づく（その方法の概要については、Sedlacek
et al.,Contrib.to Oncol.32,42-49 および81-85,Karg
er Verlag,Munich (1988) 参照）。
でないならば、リンカーは、その最も簡単な形のとき、
ＴＳリガンドおよびＧＳリガンドを連結させる構造であ
る。この性質の構造は、タンパク質中のアミノ基、ヒド
ロキシル基、ＳＨ基、カルボキシル基またはアルデヒド
基に分子を結合させるために用いられる、異なる化学的
接合法に基づく（その方法の概要については、Sedlacek
et al.,Contrib.to Oncol.32,42-49 および81-85,Karg
er Verlag,Munich (1988) 参照）。
【００６７】リンカーおよびＧＳリガンドは、それ自体
が各場合において、ペプチドまたはタンパク質であって
もよい。この場合において、二者間の連結は、化学的接
合法の１つを用いたリンカーへの連結およびペプチド結
合により行われることが好ましい。これは、特に本発明
の態様ｃ）の場合に該当する。
が各場合において、ペプチドまたはタンパク質であって
もよい。この場合において、二者間の連結は、化学的接
合法の１つを用いたリンカーへの連結およびペプチド結
合により行われることが好ましい。これは、特に本発明
の態様ｃ）の場合に該当する。
【００６８】リンカーの選択は、ＧＳリガンドにより結
合される遺伝子構築物の性質にも依存している。遺伝子
構築物がむき出しの状態のＲＮＡまたはむき出しの状態
のＤＮＡ単独であるか、または非ウイルスキャリアとの
複合体であるならば、リンカーは融合誘導性質を有する
分子であることが好ましい。これらの融合誘導性質は、
細胞膜からリソソームを経て細胞質中に至る遺伝子構築
物の通過を促進させる。
合される遺伝子構築物の性質にも依存している。遺伝子
構築物がむき出しの状態のＲＮＡまたはむき出しの状態
のＤＮＡ単独であるか、または非ウイルスキャリアとの
複合体であるならば、リンカーは融合誘導性質を有する
分子であることが好ましい。これらの融合誘導性質は、
細胞膜からリソソームを経て細胞質中に至る遺伝子構築
物の通過を促進させる。
【００６９】遺伝子構築物がウイルスであるならば、融
合誘導性質を有する分子がリンカーとして選択できる。
本発明の意味内において、融合誘導性質を有するリンカ
ーを用いることが好ましい。リンカーの融合誘導性質
は、ＧＳリガンドがウイルスに結合されるおかげで、ウ
イルスのコートタンパク質の融合誘導性質の欠陥を補う
か、あるいはウイルスのコートタンパク質の融合誘導性
質を補強する。
合誘導性質を有する分子がリンカーとして選択できる。
本発明の意味内において、融合誘導性質を有するリンカ
ーを用いることが好ましい。リンカーの融合誘導性質
は、ＧＳリガンドがウイルスに結合されるおかげで、ウ
イルスのコートタンパク質の融合誘導性質の欠陥を補う
か、あるいはウイルスのコートタンパク質の融合誘導性
質を補強する。
【００７０】本発明の意味内において、ウイルスまたは
細菌ペプチドまたはタンパク質と、合成ペプチド（例え
ば、エンドソームの酸環境下でα‐ヘリックスを形成す
るもの）が、融合誘導性質を有するリンカーとして用い
られる。融合誘導性質を有する分子の例は、Pseudomona
s 外毒素Ａのトランスロケーションドメイン（ドメイン
III ）を含むペプチド（Wels et al.,Cancer Res.52,63
10 (1992) ；Fominagaet al.,J.Biol.Chem.271,10560
(1996)）、ペプチドＧＬＦＥＡＬＬＥＬＬＥＳＬＷＥＬ
ＬＬＥＡ（配列番号：１）を含むペプチド（Gottschalk
et al.,Gene Ther.3,448 (1996)）、ペプチドＡＡＬＡ
ＥＡ［ＬＡＥＡ］４ＬＡＡＡＡＧＣ（配列番号：２）を
含むペプチド（Wang et al.,Technol. Advances in Vec
tor Syst.For Gene Ther.,May 6-7,1996,Coronado,IBC
Conference）、麻疹ウイルス融合タンパク質のペプチド
ＦＡＧＶＶＬＡＧＡＡＬＧＶＡＡＡＡＱＩ（配列番号：
３）を含むペプチド（Yeagle et al.,Biochem.Biophys.
Acta 1065,49 (1991) ）、インフルエンザＡ ＨＡ２タ
ンパク質のペプチドＧＬＦＧＡＩＡＧＦＩＥＧＧＷＷＧ
ＭＩＤＧ（配列番号：４）を含むペプチド（Luneberg e
t al.,J.Biol.Chem.270,27606 (1995)）、ペプチドＧＬ
ＦＧＡＩＡＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＤＧＧＬＦＧＡＩＡ
ＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＤＧ（配列番号５）（Burger e
t al.,Biochem.30,11173 (1991) またはペプチドＧＬＦ
ＧＡＩＡＧＦＩＥ（配列番号：６）、ＡＬＦＧＡＩＡＧ
ＦＩＥ（配列番号：７）、ＬＦＬＧＡＩＡＧＦＩＥ（配
列番号：８）、ＬＬＬＧＡＩＡＧＦＩＥ（配列番号：
９）、ＬＩＬＧＡＩＡＧＦＩＥ（配列番号：１０）、Ｇ
ＩＦＧＡＩＡＧＦＩＥ（配列番号：１１）、ＧＬＬＧＡ
ＩＡＧＦＩＥ（配列番号：１２）、ＧＬＦＡＡＩＡＧＦ
ＩＥ（配列番号：１３）、ＧＬＦＥＡＩＡＧＦＩＥ（配
列番号：１４）、ＧＬＦＧＡＭＡＧＦＩＥ（配列番号：
１５）、ＧＬＦＧＡＩＡＧＬＩＥ（配列番号：１６）、
ペプチドＧＬＦＧＡＩＡＧＦＩＶ（配列番号：１７）
（Steinhauer et al.,J.Virol.69,6643 (1995)）、ペプ
チドＧＬＦＥＡＩＡＥＦＩＥＧＧＷＥＧＬＩＥＧ（配列
番号：１８）またはペプチドＧＬＬＥＡＬＡＥＬＬＥＧ
ＧＷＥＧＬＬＥＧ（配列番号：１９）（Ishiguro et a
l.,Biochem.32,9792 (1993)を含むペプチドである。
細菌ペプチドまたはタンパク質と、合成ペプチド（例え
ば、エンドソームの酸環境下でα‐ヘリックスを形成す
るもの）が、融合誘導性質を有するリンカーとして用い
られる。融合誘導性質を有する分子の例は、Pseudomona
s 外毒素Ａのトランスロケーションドメイン（ドメイン
III ）を含むペプチド（Wels et al.,Cancer Res.52,63
10 (1992) ；Fominagaet al.,J.Biol.Chem.271,10560
(1996)）、ペプチドＧＬＦＥＡＬＬＥＬＬＥＳＬＷＥＬ
ＬＬＥＡ（配列番号：１）を含むペプチド（Gottschalk
et al.,Gene Ther.3,448 (1996)）、ペプチドＡＡＬＡ
ＥＡ［ＬＡＥＡ］４ＬＡＡＡＡＧＣ（配列番号：２）を
含むペプチド（Wang et al.,Technol. Advances in Vec
tor Syst.For Gene Ther.,May 6-7,1996,Coronado,IBC
Conference）、麻疹ウイルス融合タンパク質のペプチド
ＦＡＧＶＶＬＡＧＡＡＬＧＶＡＡＡＡＱＩ（配列番号：
３）を含むペプチド（Yeagle et al.,Biochem.Biophys.
Acta 1065,49 (1991) ）、インフルエンザＡ ＨＡ２タ
ンパク質のペプチドＧＬＦＧＡＩＡＧＦＩＥＧＧＷＷＧ
ＭＩＤＧ（配列番号：４）を含むペプチド（Luneberg e
t al.,J.Biol.Chem.270,27606 (1995)）、ペプチドＧＬ
ＦＧＡＩＡＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＤＧＧＬＦＧＡＩＡ
ＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＤＧ（配列番号５）（Burger e
t al.,Biochem.30,11173 (1991) またはペプチドＧＬＦ
ＧＡＩＡＧＦＩＥ（配列番号：６）、ＡＬＦＧＡＩＡＧ
ＦＩＥ（配列番号：７）、ＬＦＬＧＡＩＡＧＦＩＥ（配
列番号：８）、ＬＬＬＧＡＩＡＧＦＩＥ（配列番号：
９）、ＬＩＬＧＡＩＡＧＦＩＥ（配列番号：１０）、Ｇ
ＩＦＧＡＩＡＧＦＩＥ（配列番号：１１）、ＧＬＬＧＡ
ＩＡＧＦＩＥ（配列番号：１２）、ＧＬＦＡＡＩＡＧＦ
ＩＥ（配列番号：１３）、ＧＬＦＥＡＩＡＧＦＩＥ（配
列番号：１４）、ＧＬＦＧＡＭＡＧＦＩＥ（配列番号：
１５）、ＧＬＦＧＡＩＡＧＬＩＥ（配列番号：１６）、
ペプチドＧＬＦＧＡＩＡＧＦＩＶ（配列番号：１７）
（Steinhauer et al.,J.Virol.69,6643 (1995)）、ペプ
チドＧＬＦＥＡＩＡＥＦＩＥＧＧＷＥＧＬＩＥＧ（配列
番号：１８）またはペプチドＧＬＬＥＡＬＡＥＬＬＥＧ
ＧＷＥＧＬＬＥＧ（配列番号：１９）（Ishiguro et a
l.,Biochem.32,9792 (1993)を含むペプチドである。
【００７１】本発明では、融合誘導性質を有するウイル
スからのタンパク質が更に利用される。いくつかのウイ
ルスは融合誘導コートタンパク質を有し、その例はパラ
ミクソウイルス、レトロウイルスおよびヘルペスウイル
スである（Gaudin et al.,J.Gen.Virol.76,1541 (199
5)）。いくつかのウイルスは、ウイルス接着とその後で
細胞膜融合の双方に関与する糖タンパク質も有している
（Gaudin et al.,J.Gen.Virol.76,1541 (1995)）。この
性質のタンパク質は、例えばアルファウイルス、ラブド
ウイルスおよびオルトミクソウイルスにより形成され
る。
スからのタンパク質が更に利用される。いくつかのウイ
ルスは融合誘導コートタンパク質を有し、その例はパラ
ミクソウイルス、レトロウイルスおよびヘルペスウイル
スである（Gaudin et al.,J.Gen.Virol.76,1541 (199
5)）。いくつかのウイルスは、ウイルス接着とその後で
細胞膜融合の双方に関与する糖タンパク質も有している
（Gaudin et al.,J.Gen.Virol.76,1541 (1995)）。この
性質のタンパク質は、例えばアルファウイルス、ラブド
ウイルスおよびオルトミクソウイルスにより形成され
る。
【００７２】本発明の意味内におけるウイルス融合誘導
タンパク質は、Hughson,Curr.Biol.5,265 (1995)；Hoek
stra,J.Bioenergetics Biomembranes 22,675 (1990) ；
White,Ann.Rev.Physiol.52,675 (1990) により概説され
ている。本発明の意味内における融合誘導タンパク質の
例は、インフルエンザＡまたはインフルエンザＢウイル
スのヘマグルチニン、特に、単独で、あるいは酵素活性
を欠くにもかかわらず赤血球凝集反応を起こすインフル
エンザＡノイラミニダーゼの変異体またはインフルエン
ザヘマグルチニンと組み合わせて（Ohuchi et al.,J.Vi
rol.68,920 (1994) ）用いられるＨＡ２成分、インフル
エンザＡウイルスのＭ２タンパク質、インフルエンザウ
イルスヘマグルチニンのペプチドアナログ、インフルエ
ンザＣウイルスのＨＥＦタンパク質（ＨＥＦタンパク質
の融合活性は、ＨＥＦ０からサブユニットＨＥＦ１およ
びＨＥＦ２への開裂により活性化される）、フィロウイ
ルス、例えばMarburg ウイルスおよびEbola ウイルスの
膜貫通糖タンパク質、狂犬病ウイルスの膜貫通糖タンパ
ク質、水疱性口内炎ウイルスの膜貫通糖タンパク質
（Ｇ）、ＨＩＶウイルスの融合タンパク質、特にｇｐ４
１成分およびその融合誘導成分、Sendaiウイルスの融合
タンパク質、特にＦ１成分の３３アミノ末端アミノ酸、
Semliki Forestウイルスの膜貫通糖タンパク質、特にＥ
１成分、ダニ媒介性脳炎ウイルスの膜貫通糖タンパク
質、ヒト呼吸シンシチアルウイルス（ＲＳＶ）の融合タ
ンパク質（特に、ｇｐ３７成分）、Ｂ型肝炎ウイルスの
融合タンパク質（Ｓタンパク質）、麻疹ウイルスの融合
タンパク質、Newcastle 病ウイルスの融合タンパク質、
ビスナウイルスの融合タンパク質、マウス白血病ウイル
スの融合タンパク質（特に、ｐ１５Ｅ）、ＨＴＬウイル
スの融合タンパク質（特に、ｇｐ２１）およびサル免疫
不全ウイルス（ＳＩＶ）の融合タンパク質である。
タンパク質は、Hughson,Curr.Biol.5,265 (1995)；Hoek
stra,J.Bioenergetics Biomembranes 22,675 (1990) ；
White,Ann.Rev.Physiol.52,675 (1990) により概説され
ている。本発明の意味内における融合誘導タンパク質の
例は、インフルエンザＡまたはインフルエンザＢウイル
スのヘマグルチニン、特に、単独で、あるいは酵素活性
を欠くにもかかわらず赤血球凝集反応を起こすインフル
エンザＡノイラミニダーゼの変異体またはインフルエン
ザヘマグルチニンと組み合わせて（Ohuchi et al.,J.Vi
rol.68,920 (1994) ）用いられるＨＡ２成分、インフル
エンザＡウイルスのＭ２タンパク質、インフルエンザウ
イルスヘマグルチニンのペプチドアナログ、インフルエ
ンザＣウイルスのＨＥＦタンパク質（ＨＥＦタンパク質
の融合活性は、ＨＥＦ０からサブユニットＨＥＦ１およ
びＨＥＦ２への開裂により活性化される）、フィロウイ
ルス、例えばMarburg ウイルスおよびEbola ウイルスの
膜貫通糖タンパク質、狂犬病ウイルスの膜貫通糖タンパ
ク質、水疱性口内炎ウイルスの膜貫通糖タンパク質
（Ｇ）、ＨＩＶウイルスの融合タンパク質、特にｇｐ４
１成分およびその融合誘導成分、Sendaiウイルスの融合
タンパク質、特にＦ１成分の３３アミノ末端アミノ酸、
Semliki Forestウイルスの膜貫通糖タンパク質、特にＥ
１成分、ダニ媒介性脳炎ウイルスの膜貫通糖タンパク
質、ヒト呼吸シンシチアルウイルス（ＲＳＶ）の融合タ
ンパク質（特に、ｇｐ３７成分）、Ｂ型肝炎ウイルスの
融合タンパク質（Ｓタンパク質）、麻疹ウイルスの融合
タンパク質、Newcastle 病ウイルスの融合タンパク質、
ビスナウイルスの融合タンパク質、マウス白血病ウイル
スの融合タンパク質（特に、ｐ１５Ｅ）、ＨＴＬウイル
スの融合タンパク質（特に、ｇｐ２１）およびサル免疫
不全ウイルス（ＳＩＶ）の融合タンパク質である。
【００７３】ウイルス融合誘導タンパク質は、界面活性
剤（例えば、β‐Ｄ‐オクチルグルコピラノシド）の補
助でウイルスエンリッチメント（viral enrichment）か
らのコートタンパク質を溶解させ、Mannio et al.,BioT
echniques 6,682 (1988)に概説されたように遠心で、ま
たは熟練者に知られている分子生物学的方法でそれらを
分離することにより得られる。融合誘導タンパク質の作
製例は、例えばインフルエンザヘマグルチニン、インフ
ルエンザヘマグルチニンの融合誘導断片、インフルエン
ザＢのＭ２タンパク質、インフルエンザＣのＨＥＦタン
パク質、フィロウイルス、例えばMarburg ウイルスおよ
びEbola ウイルスの貫膜糖タンパク質、狂犬病ウイルス
の貫膜糖タンパク質、水疱性口内炎ウイルスの貫膜糖タ
ンパク質、Semliki Forestウイルスの貫膜糖タンパク
質、ダニ媒介性脳炎ウイルスの貫膜糖タンパク質、およ
びＨＩＶ‐１ウイルスの融合タンパク質について記載さ
れている。
剤（例えば、β‐Ｄ‐オクチルグルコピラノシド）の補
助でウイルスエンリッチメント（viral enrichment）か
らのコートタンパク質を溶解させ、Mannio et al.,BioT
echniques 6,682 (1988)に概説されたように遠心で、ま
たは熟練者に知られている分子生物学的方法でそれらを
分離することにより得られる。融合誘導タンパク質の作
製例は、例えばインフルエンザヘマグルチニン、インフ
ルエンザヘマグルチニンの融合誘導断片、インフルエン
ザＢのＭ２タンパク質、インフルエンザＣのＨＥＦタン
パク質、フィロウイルス、例えばMarburg ウイルスおよ
びEbola ウイルスの貫膜糖タンパク質、狂犬病ウイルス
の貫膜糖タンパク質、水疱性口内炎ウイルスの貫膜糖タ
ンパク質、Semliki Forestウイルスの貫膜糖タンパク
質、ダニ媒介性脳炎ウイルスの貫膜糖タンパク質、およ
びＨＩＶ‐１ウイルスの融合タンパク質について記載さ
れている。
【００７４】遺伝子構築物特異的リガンド 本発明において、ＧＳリガンドは、遺伝子構築物と直接
または間接的に結合する、全抗体分子または抗体のエピ
トープ結合断片を含んだ構造である。マウスモノクロー
ナル抗体は、それらの免疫原性を制限するために、好ま
しくはヒト化形で用いられる。このヒト化は、 Winter
et al.（Nature 349,293 (1991) ）および Hoogenboom
et al.（Rev.Tr.Transfus.Hemobiol.36,19 (1993) ）に
記載された手法で、“ＴＳリガンドの説明”と題された
セクションで既に記載されたように行う。抗体断片およ
び組換えＦｖ断片は、当業界水準に従い、“ＴＳリガン
ドの説明”と題されたセクションで既に記載されたよう
に作製する。
または間接的に結合する、全抗体分子または抗体のエピ
トープ結合断片を含んだ構造である。マウスモノクロー
ナル抗体は、それらの免疫原性を制限するために、好ま
しくはヒト化形で用いられる。このヒト化は、 Winter
et al.（Nature 349,293 (1991) ）および Hoogenboom
et al.（Rev.Tr.Transfus.Hemobiol.36,19 (1993) ）に
記載された手法で、“ＴＳリガンドの説明”と題された
セクションで既に記載されたように行う。抗体断片およ
び組換えＦｖ断片は、当業界水準に従い、“ＴＳリガン
ドの説明”と題されたセクションで既に記載されたよう
に作製する。
【００７５】二価または一価断片が用いられるかどうか
は、抗体特異的および遺伝子構築物の選択に依存してい
る。一価抗体断片は、選択される抗体が（例えば、Ubol
etal.,J.Virol.69,1990 (1995)に記載されたように）
ウイルス遺伝子構築物のコートタンパク質の融合活性を
損なうならば好ましい。
は、抗体特異的および遺伝子構築物の選択に依存してい
る。一価抗体断片は、選択される抗体が（例えば、Ubol
etal.,J.Virol.69,1990 (1995)に記載されたように）
ウイルス遺伝子構築物のコートタンパク質の融合活性を
損なうならば好ましい。
【００７６】抗体の特異性は、用いられる遺伝子構築物
の性質に依存している。遺伝子構築物がむき出しの状態
のＲＮＡまたはむき出しの状態のＤＮＡ単独であるか、
または非ウイルスキャリアとの複合体であるならば、本
発明の新規態様の１つは、抗体の特異性がＤＮＡ中に導
入されたエピトープに対するものである場合である。こ
の性質のエピトープは、外来グループ（異種間物質：xe
nogenic substance）の導入でまたはそれなしに、ＤＮ
Ａの１以上の修飾により作ることができる。この例に
は、シスプラチンでＤＮＡを架橋すること、ナイトロジ
ェンマスタード、メルファランまたはクロラムブシルの
ようなアルキル化剤でグアニンのＮ７をアルキル化する
こと、ドキソルビシンまたはダウノマイシンのようなア
ントラサイクリンをＤＮＡの二重ヘリックス中に挿入す
ることがある。
の性質に依存している。遺伝子構築物がむき出しの状態
のＲＮＡまたはむき出しの状態のＤＮＡ単独であるか、
または非ウイルスキャリアとの複合体であるならば、本
発明の新規態様の１つは、抗体の特異性がＤＮＡ中に導
入されたエピトープに対するものである場合である。こ
の性質のエピトープは、外来グループ（異種間物質：xe
nogenic substance）の導入でまたはそれなしに、ＤＮ
Ａの１以上の修飾により作ることができる。この例に
は、シスプラチンでＤＮＡを架橋すること、ナイトロジ
ェンマスタード、メルファランまたはクロラムブシルの
ようなアルキル化剤でグアニンのＮ７をアルキル化する
こと、ドキソルビシンまたはダウノマイシンのようなア
ントラサイクリンをＤＮＡの二重ヘリックス中に挿入す
ることがある。
【００７７】修飾ＤＮＡエピトープに対する結合特異性
を有したモノクローナル抗体の例には、メチル化ＤＮ
Ａ、Ｏ６‐エチルデオキシグアノシン（エチルニトロソ
尿素でＤＮＡを処理した後）、Ｎ７‐エチルグアニン、
Ｎ５‐メチル‐Ｎ５‐ホルミル‐２，５，６‐トリアミ
ノ‐４‐ヒドロキシピリミジン、Ｏ６‐メチル‐２′‐
デオキシグアノシン、Ｏ６‐エチル‐２′‐デオキシグ
アノシン、Ｏ６‐ｎ‐ブチル‐２′‐デオキシグアノシ
ン、Ｏ６‐イソプロピル‐２′‐デオキシグアノシン、
Ｏ４‐メチル‐２′‐デオキシチミジン、Ｏ４‐エチル
‐２′‐デオキシチミジンと、メルファランおよびＤＮ
Ａおよびアントラサイクリンの付加産物に対する抗体が
ある。この関係で有用な一部のエピトープは、ＤＮＡ代
謝中にＤＮＡのメチル化によって、ＤＮＡ中に作成され
るものである。
を有したモノクローナル抗体の例には、メチル化ＤＮ
Ａ、Ｏ６‐エチルデオキシグアノシン（エチルニトロソ
尿素でＤＮＡを処理した後）、Ｎ７‐エチルグアニン、
Ｎ５‐メチル‐Ｎ５‐ホルミル‐２，５，６‐トリアミ
ノ‐４‐ヒドロキシピリミジン、Ｏ６‐メチル‐２′‐
デオキシグアノシン、Ｏ６‐エチル‐２′‐デオキシグ
アノシン、Ｏ６‐ｎ‐ブチル‐２′‐デオキシグアノシ
ン、Ｏ６‐イソプロピル‐２′‐デオキシグアノシン、
Ｏ４‐メチル‐２′‐デオキシチミジン、Ｏ４‐エチル
‐２′‐デオキシチミジンと、メルファランおよびＤＮ
Ａおよびアントラサイクリンの付加産物に対する抗体が
ある。この関係で有用な一部のエピトープは、ＤＮＡ代
謝中にＤＮＡのメチル化によって、ＤＮＡ中に作成され
るものである。
【００７８】E.coli株は、細菌中に導入されたプラスミ
ドＤＮＡをメチル化することが知られている。メチル化
はアデニンのＮ６位で生じる（Winnacker,From Genes t
o Clones,page 18/19,VCH Publisher,Weinheim (1987)
）。細菌は酵素ＤＮＡアデニンメチラーゼを有してい
て、複製中にＮ６位でアデニンを特異的にメチル化する
（Hattman et al.,J.Mol.Biol.126,367 (1978)）。その
結果として、本発明は、新規リガンド系で、特にメチル
化ＤＮＡに対する、更に具体的にはアデニンのメチル化
Ｎ６位に対するモノクローナル抗体の使用に関する。
ドＤＮＡをメチル化することが知られている。メチル化
はアデニンのＮ６位で生じる（Winnacker,From Genes t
o Clones,page 18/19,VCH Publisher,Weinheim (1987)
）。細菌は酵素ＤＮＡアデニンメチラーゼを有してい
て、複製中にＮ６位でアデニンを特異的にメチル化する
（Hattman et al.,J.Mol.Biol.126,367 (1978)）。その
結果として、本発明は、新規リガンド系で、特にメチル
化ＤＮＡに対する、更に具体的にはアデニンのメチル化
Ｎ６位に対するモノクローナル抗体の使用に関する。
【００７９】遺伝子構築物が非ウイルスキャリアと複合
化されるとすれば、本発明のもう１つの具体的態様は、
抗体の特異性がキャリア上のエピトープに対するもので
ある場合である。これらのキャリアには、カチオン性ポ
リマー、ペプチド、タンパク質、ポリアミンまたはカチ
オン性脂質、例えばカチオン性脂質およびリン脂質があ
る。この性質のキャリアに対する抗体の例は、スペルミ
ジン、スペルミン、プトレッシン、ポリリジン、アルブ
ミンおよびリン脂質に対する抗体である。
化されるとすれば、本発明のもう１つの具体的態様は、
抗体の特異性がキャリア上のエピトープに対するもので
ある場合である。これらのキャリアには、カチオン性ポ
リマー、ペプチド、タンパク質、ポリアミンまたはカチ
オン性脂質、例えばカチオン性脂質およびリン脂質があ
る。この性質のキャリアに対する抗体の例は、スペルミ
ジン、スペルミン、プトレッシン、ポリリジン、アルブ
ミンおよびリン脂質に対する抗体である。
【００８０】遺伝子構築物がウイルスであるならば、抗
体の特異性はウイルスコートタンパク質の１以上の同一
または異なるエピトープに対するものである。用いられ
るリガンド系中のリンカーが好ましいことに融合誘導ペ
プチドまたはタンパク質であることから、コートタンパ
ク質と結合することでウイルスの細胞付着性および／ま
たは融合誘導活性を損なう抗体も用いることができる。
ベクターとして使用できるウイルスのコートタンパク質
に対する抗体の例は、マウス白血病ウイルス、特にコー
トタンパク質ｇｐ７０およびｐ１５、ＨＩＶウイルス、
アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、特にこのウイ
ルスの糖タンパク質Ｂ、糖タンパク質Ｈ、糖タンパク質
Ｌおよび糖タンパク質Ｄ、サイトメガロウイルス、特に
糖タンパク質Ｂ（ｇｐＢ）、マウスの微小ウイルス、ア
デノ関連ウイルス、特にｃａｐおよびｒｅｐタンパク
質、Sindbis ウイルス、特にエンベロープタンパク質Ｅ
２またはＥと、ワクシニアウイルスに対する抗体であ
る。
体の特異性はウイルスコートタンパク質の１以上の同一
または異なるエピトープに対するものである。用いられ
るリガンド系中のリンカーが好ましいことに融合誘導ペ
プチドまたはタンパク質であることから、コートタンパ
ク質と結合することでウイルスの細胞付着性および／ま
たは融合誘導活性を損なう抗体も用いることができる。
ベクターとして使用できるウイルスのコートタンパク質
に対する抗体の例は、マウス白血病ウイルス、特にコー
トタンパク質ｇｐ７０およびｐ１５、ＨＩＶウイルス、
アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、特にこのウイ
ルスの糖タンパク質Ｂ、糖タンパク質Ｈ、糖タンパク質
Ｌおよび糖タンパク質Ｄ、サイトメガロウイルス、特に
糖タンパク質Ｂ（ｇｐＢ）、マウスの微小ウイルス、ア
デノ関連ウイルス、特にｃａｐおよびｒｅｐタンパク
質、Sindbis ウイルス、特にエンベロープタンパク質Ｅ
２またはＥと、ワクシニアウイルスに対する抗体であ
る。
【００８１】本発明のもう１つの有利な態様において、
ＧＳリガンドは細胞外にあるＦｃレセプターの一部であ
る。遺伝子構築物と抗原結合部分によって直接または間
接的に結合する、既に記載された抗体の１つは、このＦ
ｃレセプターとそのＦｃ部分によって結合する。
ＧＳリガンドは細胞外にあるＦｃレセプターの一部であ
る。遺伝子構築物と抗原結合部分によって直接または間
接的に結合する、既に記載された抗体の１つは、このＦ
ｃレセプターとそのＦｃ部分によって結合する。
【００８２】もう１つの有利な態様において、ＧＳリガ
ンドはカチオン性アミノ酸、カチオン性ペプチドまたは
タンパク質、あるいは生物アミンのようなカチオン性構
造単位であって、遺伝子構築物と複合化することができ
る。これらカチオン性構造単位の例には、リジン、ポリ
リジン、アルギニン、ポリアルギニン、ヒスチジン、ポ
リヒスチジン、少くとも１つのリジン、１つのアルギニ
ンおよび／または１つのヒスチジンを含むペプチドと、
カダベリン、スペルミジン、スペルミン、アグマチンま
たはプトレッシンのようなポリアミンがある。
ンドはカチオン性アミノ酸、カチオン性ペプチドまたは
タンパク質、あるいは生物アミンのようなカチオン性構
造単位であって、遺伝子構築物と複合化することができ
る。これらカチオン性構造単位の例には、リジン、ポリ
リジン、アルギニン、ポリアルギニン、ヒスチジン、ポ
リヒスチジン、少くとも１つのリジン、１つのアルギニ
ンおよび／または１つのヒスチジンを含むペプチドと、
カダベリン、スペルミジン、スペルミン、アグマチンま
たはプトレッシンのようなポリアミンがある。
【００８３】もう１つの有利な態様において、ＧＳリガ
ンドはトランスジーンをもつウイルスのコートタンパク
質についてのレセプターである。この性質のレセプター
は、例えば下記ウイルス：ＣＤ４分子（可溶性または天
然）とガラクトシルセラミドに関するＨＩＶ、ＩＬ‐６
レセプターおよびアネキシンまたはアポリポタンパク質
に関するＨＢＶ、ＩＬ‐２レセプター（βおよびγ鎖）
に関するＨＴＬＶ、ＣＤ４６分子に関する麻疹ウイル
ス、エリトロポエチンレセプターに関するFriend白血病
ウイルス、ヒト免疫グロブリンＧのＦｃ断片に関する水
痘‐帯状疱疹ウイルス、グリコホリンに関するSendaiウ
イルス、Ｎ‐アセチル‐９‐アセトアミド‐９‐デオキ
シノイラミン酸および９‐Ｏ‐アセチル‐Ｎ‐アセチル
ノイラミン酸に関するインフルエンザＣウイルス、イン
テグリンαＶβ３に関する口蹄疫ウイルス、補体レセプ
ター２（ＣＤ２１）に関するＥＢＶと、２７５ｋＤａマ
ンノース‐６‐リン酸レセプターまたは４６ｋＤａマン
ノース‐６‐リン酸レセプターに関する単純ヘルペスウ
イルスについて記載されている。
ンドはトランスジーンをもつウイルスのコートタンパク
質についてのレセプターである。この性質のレセプター
は、例えば下記ウイルス：ＣＤ４分子（可溶性または天
然）とガラクトシルセラミドに関するＨＩＶ、ＩＬ‐６
レセプターおよびアネキシンまたはアポリポタンパク質
に関するＨＢＶ、ＩＬ‐２レセプター（βおよびγ鎖）
に関するＨＴＬＶ、ＣＤ４６分子に関する麻疹ウイル
ス、エリトロポエチンレセプターに関するFriend白血病
ウイルス、ヒト免疫グロブリンＧのＦｃ断片に関する水
痘‐帯状疱疹ウイルス、グリコホリンに関するSendaiウ
イルス、Ｎ‐アセチル‐９‐アセトアミド‐９‐デオキ
シノイラミン酸および９‐Ｏ‐アセチル‐Ｎ‐アセチル
ノイラミン酸に関するインフルエンザＣウイルス、イン
テグリンαＶβ３に関する口蹄疫ウイルス、補体レセプ
ター２（ＣＤ２１）に関するＥＢＶと、２７５ｋＤａマ
ンノース‐６‐リン酸レセプターまたは４６ｋＤａマン
ノース‐６‐リン酸レセプターに関する単純ヘルペスウ
イルスについて記載されている。
【００８４】少くとも２つの分子の複合体（“コネクタ
ー”）としてのリンカー 本発明の特定態様ｃ）の意味内において、コネクターは
少くとも２つの分子または成分からなる特別な種類のリ
ンカーである。コネクターの分子または成分の１つは少
くとも１つの遺伝子構築物特異的リガンドと結合して、
コネクターのもう１つの分子または成分は少くとも１つ
の標的細胞特異的リガンドと結合する。その複合体は、
少くとも１つの他の“任意リンカー”を更に含むことが
有利である。任意リンカーは融合誘導ペプチドでもよ
い。２以上のリンカーの場合には、任意リンカーは化学
的に同一でもまたは異なっていてもよい。融合誘導ペプ
チドは、標的細胞中への核酸の侵入を促進する。この関
係において、もう１つの任意リンカーは、細胞に入った
複合体の定量を行える放射性同位元素のようなシグナル
発生物質であってもよい。
ー”）としてのリンカー 本発明の特定態様ｃ）の意味内において、コネクターは
少くとも２つの分子または成分からなる特別な種類のリ
ンカーである。コネクターの分子または成分の１つは少
くとも１つの遺伝子構築物特異的リガンドと結合して、
コネクターのもう１つの分子または成分は少くとも１つ
の標的細胞特異的リガンドと結合する。その複合体は、
少くとも１つの他の“任意リンカー”を更に含むことが
有利である。任意リンカーは融合誘導ペプチドでもよ
い。２以上のリンカーの場合には、任意リンカーは化学
的に同一でもまたは異なっていてもよい。融合誘導ペプ
チドは、標的細胞中への核酸の侵入を促進する。この関
係において、もう１つの任意リンカーは、細胞に入った
複合体の定量を行える放射性同位元素のようなシグナル
発生物質であってもよい。
【００８５】コネクターの有利な例は抗体のヒンジ領域
であり、それにより抗体の２つの重鎖が互いに連結され
る（Burbon,TIBS 15,64 (1990)；Oi et al.,Nature 30
7,136(1984)；Alt et al.,Science 238,1079 (1987)；L
orenz,degree dissertation:Konstruktion und Express
ion von rek. Antikorper-Enzym-Hybridmolekulen fur
die Tumortherapie [Construction and expression of
rec.antibody/enzymehybrid molecules for tumor ther
apyl],Faculty of Human Medicine,Marburg University
(1991)）。
であり、それにより抗体の２つの重鎖が互いに連結され
る（Burbon,TIBS 15,64 (1990)；Oi et al.,Nature 30
7,136(1984)；Alt et al.,Science 238,1079 (1987)；L
orenz,degree dissertation:Konstruktion und Express
ion von rek. Antikorper-Enzym-Hybridmolekulen fur
die Tumortherapie [Construction and expression of
rec.antibody/enzymehybrid molecules for tumor ther
apyl],Faculty of Human Medicine,Marburg University
(1991)）。
【００８６】ヒンジ領域の新規配置は、例えば図２のｃ
１）に示されている。ヒンジ領域は、融合タンパク質の
形で、ペプチド結合によりＧＳおよびＴＳリガンドとリ
ンカーに連結されることが好ましく、融合タンパク質は
組換えＤＮＡ技術を用いて作製される。
１）に示されている。ヒンジ領域は、融合タンパク質の
形で、ペプチド結合によりＧＳおよびＴＳリガンドとリ
ンカーに連結されることが好ましく、融合タンパク質は
組換えＤＮＡ技術を用いて作製される。
【００８７】コネクターのもう１つの例は、図３のｃ
２）に従い、Ｇａｌ４のＧａｌ８０結合ドメイン（Leut
her et al.,Science 256,1333 (1992)）と組み合わされ
たＧａｌ８０タンパク質（Leuther et al.,Science 25
6,1333 (1992)）である。
２）に従い、Ｇａｌ４のＧａｌ８０結合ドメイン（Leut
her et al.,Science 256,1333 (1992)）と組み合わされ
たＧａｌ８０タンパク質（Leuther et al.,Science 25
6,1333 (1992)）である。
【００８８】
【実施例】下記実施例は本発明を説明するために記載さ
れたものであり、本発明を制限するものではない。図４
で示されたような多機能系の構築が示される。
れたものであり、本発明を制限するものではない。図４
で示されたような多機能系の構築が示される。
【００８９】実施例１ ＴＳリガンドの作製 抗ＮＣＡＭモノクローナル抗体５７５／１００／２のハ
イブリドーマを、ＴＳリガンドのための出発物質として
用いる（Jaques et al.,Cancer 72,418 (1993)）。約１
０７細胞のこのハイブリドーマを遠心により分離し、ｍ
ＲＮＡはPharmacia ｍＲＮＡ抽出キットを用いてこれら
の細胞から抽出する。次いで、このｍＲＮＡはｃＤＮＡ
合成キットとランダムヘキサオリゴヌクレオチド（Phar
macia 製）を用いて逆転写によりｃＤＮＡ中に転写す
る。このｃＤＮＡは、特定のプライマー（Clackson et
al.Nature 352,624 (1991)）を用いたポリメラーゼ連鎖
反応（Saiki et al.,Science 230,1350 (1985)）によ
り、免疫グロブリンの可変重鎖または可変軽鎖を増幅さ
せるための出発物質として働く。同時に、そのプライマ
ーは細菌発現ベクターｐＨＥＮＩＳ（ｐＨＥＮ１から得
られる；Hoogenboom etal.,Nucl.Acid Res.19,4133 (19
91)；図５参照）中に断片をクローニングするための制
限開裂部位も導入する。このベクターは、ペリプラズム
分泌用のｐｅｌＢシグナル配列、モノクローナル抗体９
Ｅ１０で検出用のｍｙｃ標識、固定金属アフィニティク
ロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）による精製用のヒスチジ
ン標識、ならびに、１４アミノ酸鎖長グリシン‐セリン
リンカーをエンコードする短鎖配列と重および軽鎖用の
クローニング領域を含んでいる。加えて、ｇ３βタンパ
ク質との融合は、バクテリアファージの表面上で示す目
的のために行う。重および軽鎖は適切な制限酵素で（Ｖ
ＨはＳｆｉＩおよびＳｈｏＩで；ＶＬはＡｐａＬＩおよ
びＮｏｔＩで）切断し、ベクター中に続けてクローニン
グする。こうして、短ペプチド配列により共有結合され
た可変重鎖および軽鎖からなる組換え一本鎖Ｆｖ断片を
得る。
イブリドーマを、ＴＳリガンドのための出発物質として
用いる（Jaques et al.,Cancer 72,418 (1993)）。約１
０７細胞のこのハイブリドーマを遠心により分離し、ｍ
ＲＮＡはPharmacia ｍＲＮＡ抽出キットを用いてこれら
の細胞から抽出する。次いで、このｍＲＮＡはｃＤＮＡ
合成キットとランダムヘキサオリゴヌクレオチド（Phar
macia 製）を用いて逆転写によりｃＤＮＡ中に転写す
る。このｃＤＮＡは、特定のプライマー（Clackson et
al.Nature 352,624 (1991)）を用いたポリメラーゼ連鎖
反応（Saiki et al.,Science 230,1350 (1985)）によ
り、免疫グロブリンの可変重鎖または可変軽鎖を増幅さ
せるための出発物質として働く。同時に、そのプライマ
ーは細菌発現ベクターｐＨＥＮＩＳ（ｐＨＥＮ１から得
られる；Hoogenboom etal.,Nucl.Acid Res.19,4133 (19
91)；図５参照）中に断片をクローニングするための制
限開裂部位も導入する。このベクターは、ペリプラズム
分泌用のｐｅｌＢシグナル配列、モノクローナル抗体９
Ｅ１０で検出用のｍｙｃ標識、固定金属アフィニティク
ロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）による精製用のヒスチジ
ン標識、ならびに、１４アミノ酸鎖長グリシン‐セリン
リンカーをエンコードする短鎖配列と重および軽鎖用の
クローニング領域を含んでいる。加えて、ｇ３βタンパ
ク質との融合は、バクテリアファージの表面上で示す目
的のために行う。重および軽鎖は適切な制限酵素で（Ｖ
ＨはＳｆｉＩおよびＳｈｏＩで；ＶＬはＡｐａＬＩおよ
びＮｏｔＩで）切断し、ベクター中に続けてクローニン
グする。こうして、短ペプチド配列により共有結合され
た可変重鎖および軽鎖からなる組換え一本鎖Ｆｖ断片を
得る。
【００９０】実施例２ ＧＳリガンドの作製 Ｎ６‐メチルアデニン（Sigma 製）に特異性を有する組
換え抗体は、記載されたように、Ｎ６‐メチルアデニン
‐ＢＳＡまたはＮ６‐メチルアデニン‐チログロブリン
複合体（Beiser et al.,Methods Enzymol.XII,889 (196
8)）上でバイオパンニング（biopanning）することによ
り、天然または半合成抗体ライブラリー（Nissim et a
l.,EMBO.J.13,692 (1994)）から選択する。陽性抗体断
片は抗原コート微量滴定プレートでＥＬＩＳＡにより同
定する（Nissim et al.,EMBO.J.13,692 (1994)）。これ
らライブラリーからの抗体は望ましい一本鎖Ｆｖフォー
マットに既にあり、その後のクローニングに直接用いら
れる。
換え抗体は、記載されたように、Ｎ６‐メチルアデニン
‐ＢＳＡまたはＮ６‐メチルアデニン‐チログロブリン
複合体（Beiser et al.,Methods Enzymol.XII,889 (196
8)）上でバイオパンニング（biopanning）することによ
り、天然または半合成抗体ライブラリー（Nissim et a
l.,EMBO.J.13,692 (1994)）から選択する。陽性抗体断
片は抗原コート微量滴定プレートでＥＬＩＳＡにより同
定する（Nissim et al.,EMBO.J.13,692 (1994)）。これ
らライブラリーからの抗体は望ましい一本鎖Ｆｖフォー
マットに既にあり、その後のクローニングに直接用いら
れる。
【００９１】実施例３ リンカーの作製 アミノ酸配列ＧＬＦＥＡＬＬＥＬＬＥＳＬＷＥＬＬＬＥ
Ａ（配列番号：１，Gottschalk et al.,1996）を有する
融合誘導ペプチドをリンカーとして用いる。このペプチ
ドをエンコードするＤＮＡは二本鎖合成オリゴヌクレオ
チドとして作製し、適切な制限開裂部位（ＡｓｃＩおよ
びＸｂａＩ）は末端上でカップリングさせる。この場合
に、２つの合成オリゴヌクレオチドＯ１（５′ＧＧＣＣ
ＧＣＡＧＧＣＴＴＡＴＴＴＧＡＧＧＣＣＣＴＴＣＴＧＧ
ＡＡＴＴＧＣＴＡＧＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＧＡＡＴＴ
ＧＣＴＴＣＴＧＧＡＧＧＣＡＴ，配列番号：２０）およ
びＯ２（５′ＣＴＡＧＡＴＧＣＣＴＣＣＡＧＡＡＧＣＡ
ＡＴＴＣＣＣＡＧＡＧＧＣＴＣＴＣＴＡＧＣＡＡＴＴＣ
ＣＡＧＡＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＡＴＡＡＧＣＣＴＧ，配
列番号：２１）は製造業者の説明に従いＴ４ポリヌクレ
オチドキナーゼ（Gibco 製）を用いてリン酸化し、８０
℃で５分間加熱し、その後室温までゆっくり冷却させ
る。この二本鎖ＤＮＡ断片は、その後のクローニングに
直接用いられる。
Ａ（配列番号：１，Gottschalk et al.,1996）を有する
融合誘導ペプチドをリンカーとして用いる。このペプチ
ドをエンコードするＤＮＡは二本鎖合成オリゴヌクレオ
チドとして作製し、適切な制限開裂部位（ＡｓｃＩおよ
びＸｂａＩ）は末端上でカップリングさせる。この場合
に、２つの合成オリゴヌクレオチドＯ１（５′ＧＧＣＣ
ＧＣＡＧＧＣＴＴＡＴＴＴＧＡＧＧＣＣＣＴＴＣＴＧＧ
ＡＡＴＴＧＣＴＡＧＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＧＧＡＡＴＴ
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びＯ２（５′ＣＴＡＧＡＴＧＣＣＴＣＣＡＧＡＡＧＣＡ
ＡＴＴＣＣＣＡＧＡＧＧＣＴＣＴＣＴＡＧＣＡＡＴＴＣ
ＣＡＧＡＡＧＧＧＣＣＴＣＡＡＡＴＡＡＧＣＣＴＧ，配
列番号：２１）は製造業者の説明に従いＴ４ポリヌクレ
オチドキナーゼ（Gibco 製）を用いてリン酸化し、８０
℃で５分間加熱し、その後室温までゆっくり冷却させ
る。この二本鎖ＤＮＡ断片は、その後のクローニングに
直接用いられる。
【００９２】実施例４ 多機能性リガンドの作製 完全リガンド系は、３断片クローニングの形で、発現ベ
クターｐＡＢ１（ｐＨＥＮＩＳと同様にして構築された
が、ｇ３ｐとの融合を含まない；図５参照）で作製す
る。制限酵素ＳｆｉＩおよびＮｏｔＩで切断された抗Ｎ
ＣＡＭ一本鎖Ｆｖ断片（ＴＳリガンド）、クローニング
部位ＮｏｔＩおよびＸｂａＩを含んだリンカーと、抗Ｎ
６‐メチルアデニン一本鎖Ｆｖ断片（ＧＳリガンド）を
出発物質として用いる。クローニングの場合、ＧＳ断片
はＮ末端およびＣ末端に制限開裂部位ＸｂａＩおよびＡ
ｓｃＩを各々挿入するプライマーを用いて再増幅させ
る。これらの断片は、制限酵素ＳｆｉＩおよびＡｓｃＩ
で切断されたｐＡＢ１ベクター中にクローニングする。
その構築物は細菌株ＴＧ１中に組み込んで形質転換させ
る。リガンド系の発現は細菌ｌａｃＺプロモーターによ
り調節して、（McCafferty et al.Appl.Biochem.Biotec
h.47,157 (1994) に記載されたように）イソプロピル‐
β‐Ｄ‐チオガラクトシド（ＩＰＴＧ）を加えることに
より誘導する。発現タンパク質は、Griffiths et al.,E
MBO.J.13,3245 (1994)の方法に従い、ＩＭＡＣによりペ
リプラズム調製物から精製する。全タンパク質は約５
５，０００ドルトンの分子量を有して、モノマーとして
存在している。
クターｐＡＢ１（ｐＨＥＮＩＳと同様にして構築された
が、ｇ３ｐとの融合を含まない；図５参照）で作製す
る。制限酵素ＳｆｉＩおよびＮｏｔＩで切断された抗Ｎ
ＣＡＭ一本鎖Ｆｖ断片（ＴＳリガンド）、クローニング
部位ＮｏｔＩおよびＸｂａＩを含んだリンカーと、抗Ｎ
６‐メチルアデニン一本鎖Ｆｖ断片（ＧＳリガンド）を
出発物質として用いる。クローニングの場合、ＧＳ断片
はＮ末端およびＣ末端に制限開裂部位ＸｂａＩおよびＡ
ｓｃＩを各々挿入するプライマーを用いて再増幅させ
る。これらの断片は、制限酵素ＳｆｉＩおよびＡｓｃＩ
で切断されたｐＡＢ１ベクター中にクローニングする。
その構築物は細菌株ＴＧ１中に組み込んで形質転換させ
る。リガンド系の発現は細菌ｌａｃＺプロモーターによ
り調節して、（McCafferty et al.Appl.Biochem.Biotec
h.47,157 (1994) に記載されたように）イソプロピル‐
β‐Ｄ‐チオガラクトシド（ＩＰＴＧ）を加えることに
より誘導する。発現タンパク質は、Griffiths et al.,E
MBO.J.13,3245 (1994)の方法に従い、ＩＭＡＣによりペ
リプラズム調製物から精製する。全タンパク質は約５
５，０００ドルトンの分子量を有して、モノマーとして
存在している。
【００９３】実施例５ 多機能性リガンドの作動試験 ＮＣＡＭ発現腫瘍細胞（小細胞気管支がん腫）は、当業
者に知られる細胞培養技術を用いて細胞培養で増殖さ
せ、単離する。アデニンのＮ６位でメチル化されたＤＮ
Ａは、E.coliでプラスミド（β‐グルクロニダーゼの構
造遺伝子を含んでいる；特許出願ＷＯ９６／０６９４０
参照）を増殖させることにより作製する。
者に知られる細胞培養技術を用いて細胞培養で増殖さ
せ、単離する。アデニンのＮ６位でメチル化されたＤＮ
Ａは、E.coliでプラスミド（β‐グルクロニダーゼの構
造遺伝子を含んでいる；特許出願ＷＯ９６／０６９４０
参照）を増殖させることにより作製する。
【００９４】多機能性リガンド系を２０：１のモル比で
プラスミドＤＮＡと混合し、その混合物を３７℃で３０
分間インキュベートする。プラスミドＤＮＡへの結合は
ＥＬＩＳＡによりチェックする。多機能性リガンドとプ
ラスミドからなる複合体を１０：１の比率で腫瘍細胞と
混合し、全体を３７℃で１時間インキュベートする。腫
瘍細胞の一部を洗浄する。これら腫瘍細胞への複合体の
結合は免疫蛍光法によりチェックする。得られた腫瘍細
胞を更に２４時間インキュベートする。細胞中への複合
体の取込み、エンドソームからのリンカー媒介放出と、
エフェクター遺伝子の転写および発現がうまくいくかど
うかは、基質として４‐メチルウンベリフェリル‐β‐
グルクロニドを用いて、培地でβ‐グルクロニダーゼの
酵素活性を検出することにより調べる。
プラスミドＤＮＡと混合し、その混合物を３７℃で３０
分間インキュベートする。プラスミドＤＮＡへの結合は
ＥＬＩＳＡによりチェックする。多機能性リガンドとプ
ラスミドからなる複合体を１０：１の比率で腫瘍細胞と
混合し、全体を３７℃で１時間インキュベートする。腫
瘍細胞の一部を洗浄する。これら腫瘍細胞への複合体の
結合は免疫蛍光法によりチェックする。得られた腫瘍細
胞を更に２４時間インキュベートする。細胞中への複合
体の取込み、エンドソームからのリンカー媒介放出と、
エフェクター遺伝子の転写および発現がうまくいくかど
うかは、基質として４‐メチルウンベリフェリル‐β‐
グルクロニドを用いて、培地でβ‐グルクロニダーゼの
酵素活性を検出することにより調べる。
【００９５】
配列番号：１ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Leu Phe Glu Ala Leu Leu Glu Leu Leu Glu Ser Leu Trp Glu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Glu Ala 20
【００９６】配列番号：２ 配列の長さ：２９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド 配列 Ala Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala 1 5 10 15 Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Ala Ala Ala Gly Cys 20 25
【００９７】配列番号：３ 配列の長さ：１９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Phe Ala Gly Val Val Leu Ala Gly Ala Ala Leu Gly Val Ala Ala Ala 1 5 10 15 Ala Gln Ile
【００９８】配列番号：４ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp Trp Gly 1 5 10 15 Met Ile Asp Gly 20
【００９９】配列番号：５ 配列の長さ：４０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly 1 5 10 15 Met Ile Asp Gly Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn 20 25 30 Gly Trp Glu Gly Met Ile Asp Gly 35 40
【０１００】配列番号：６ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 1 5 10
【０１０１】配列番号：７ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ala Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 1 5 10
【０１０２】配列番号：８ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Leu Phe Leu Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 1 5 10
【０１０３】配列番号：９ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Leu Leu Leu Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 1 5 10
【０１０４】配列番号：１０ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Leu Ile Leu Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 1 5 10
【０１０５】配列番号：１１ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Ile Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 1 5 10
【０１０６】配列番号：１２ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Leu Leu Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 1 5 10
【０１０７】配列番号：１３ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Leu Phe Ala Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 1 5 10
【０１０８】配列番号：１４ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Leu Phe Glu Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu 1 5 10
【０１０９】配列番号：１５ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Leu Phe Gly Ala Met Ala Gly Phe Ile Glu 1 5 10
【０１１０】配列番号：１６ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Leu Ile Glu 1 5 10
【０１１１】配列番号：１７ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Val 1 5 10
【０１１２】配列番号：１８ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Leu Phe Glu Ala Ile Ala Glu Phe Ile Glu Gly Gly Trp Glu Gly 1 5 10 15 Leu Ile Glu Gly 20
【０１１３】配列番号：１９ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Gly Leu Leu Glu Ala Leu Ala Glu Leu Leu Glu Gly Gly Trp Glu Gly 1 5 10 15 Leu Leu Glu Gly 20
【０１１４】配列番号：２０ 配列の長さ：６８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 配列の特徴 特徴を表す記号：exon 存在位置：１．．６８ 配列 GGCCGCAGGC TTATTTGAGG CCCTTCTGGA ATTGCTAGAG AGCCTCTGGG AATTGCTTCT 60 GGAGGCAT 68
【０１１５】配列番号：２１ 配列の長さ：６７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 配列の特徴 特徴を表す記号：exon 存在位置：１．．６７ 配列 CTAGATGCCT CCAGAAGCAA TTCCCAGAGG CTCTCTAGCA ATTCCAGAAG GGCCTCAAAT 50 AAGCCTG 67
【図１】リガンドがリンカー（図１ａおよび１ｂ）また
は“コネクター”（図１ｃ）により結合される、標的細
胞特異的リガンドおよび遺伝子構築物特異性リガンドか
ら構成された３つの代替リガンド系を示す。
は“コネクター”（図１ｃ）により結合される、標的細
胞特異的リガンドおよび遺伝子構築物特異性リガンドか
ら構成された３つの代替リガンド系を示す。
【図２】“コネクター”が抗体のヒンジ領域からなる、
図１ｃのリガンド系の態様を示す。
図１ｃのリガンド系の態様を示す。
【図３】“コネクター”がＧａｌ８０タンパク質とＧａ
ｌ４のＧａｌ８０結合ドメインからなる、図１ｃのリガ
ンド系のもう１つの態様を示す。
ｌ４のＧａｌ８０結合ドメインからなる、図１ｃのリガ
ンド系のもう１つの態様を示す。
【図４】融合誘導ペプチドを用いて２つの抗体断片を結
合させる態様を示す。
合させる態様を示す。
【図５】発現ベクターｐＨＥＮＩＳおよびｐＡＢ１を概
略的に示した図である。
略的に示した図である。
Claims (26)
- 【請求項１】少くとも１つの標的細胞特異的リガンド
と、抗体または抗体部分を含む少くとも１つの遺伝子構
築物特異的リガンドと、２つのリガンドを結合させるリ
ンカーとを含んでなる、ヌクレオチド配列の標的細胞特
異的移行用多機能性リガンド系であって、免疫原性では
ない多機能性リガンド系。 - 【請求項２】２つのリガンドを一緒に連結させるコネク
ターを更に含んでいて、そのコネクターが２つのリンカ
ーからなる、請求項１に記載のリガンド系。 - 【請求項３】標的細胞特異的リガンドが標的細胞の表面
と結合する、請求項１または２に記載のリガンド系。 - 【請求項４】標的細胞特異的リガンドが、成長因子、サ
イトカイン、インターフェロン、腫瘍壊死因子、ケモカ
イン、ペプチドホルモン、アンギオテンシン、キニン、
ヒスタミン、ステロイドホルモン、接着性分子、ＶＤＬ
レセプターリガンド、ＬＤＬレセプターリガンド、酸化
ＬＤＬレセプターリガンド、ＬＤＬ関連レセプタータン
パク質リガンド、ＩｇＧ Ｆｃレセプターリガンド、８
８ｋＤａ糖タンパク質レセプターリガンド、アセチル化
ＬＤＬレセプターリガンド、メガリンリガンドおよびビ
タミンからなる群より選択される、請求項１〜３のいず
れか一項に記載のリガンド系。 - 【請求項５】標的細胞特異的リガンドが標的細胞と結合
する抗体または抗体断片である、請求項１〜３のいずれ
か一項に記載のリガンド系。 - 【請求項６】抗体断片がＦ（ａｂ）２断片、Ｆａｂ断
片、二本鎖Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ断片およびＦｃ断片か
らなる群より選択される、請求項５に記載のリガンド
系。 - 【請求項７】標的細胞特異的リガンドが、抗体Ｆｃ断片
により認識されるＦｃレセプターの細胞外領域である、
請求項１〜３のいずれか一項に記載のリガンド系。 - 【請求項８】抗体または抗体断片が少くとも部分的にヒ
ト起源である、請求項５〜７のいずれか一項に記載のリ
ガンド系。 - 【請求項９】遺伝子構築物特異的リガンドが、抗体、抗
体断片、カチオン性構造単位、およびウイルスのコート
タンパク質のレセプターからなる群より選択される、請
求項１〜８のいずれか一項に記載のリガンド系。 - 【請求項１０】抗体断片がＦ（ａｂ）２断片、Ｆａｂ断
片、二本鎖Ｆｖ断片および一本鎖Ｆｖ断片からなる群よ
り選択される、請求項９に記載のリガンド系。 - 【請求項１１】遺伝子構築物特異的リガンドが、抗体Ｆ
ｃ断片により認識されるＦｃレセプターの細胞外領域で
ある、請求項１〜８のいずれか一項に記載のリガンド
系。 - 【請求項１２】抗体または抗体断片が少くとも部分的に
ヒト起源である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載
のリガンド系。 - 【請求項１３】抗体または抗体断片が、異種間（xenoge
nic）物質を核酸に結合させるか、核酸をメチル化する
か、または核酸をアルキル化させることにより導入され
た、核酸のエピトープと特異的に結合する、請求項１〜
１２のいずれか一項に記載のリガンド系。 - 【請求項１４】抗体または抗体断片が非ウイルスキャリ
ア上のエピトープと結合する、請求項１〜１３のいずれ
か一項に記載のリガンド系。 - 【請求項１５】非ウイルスキャリアがカチオン性ポリマ
ー、ペプチド、タンパク質、生物アミン、ポリアミン、
脂質およびリン脂質からなる群より選択される、請求項
１４に記載のリガンド系。 - 【請求項１６】抗体または抗体断片がウイルスコートタ
ンパク質のエピトープと結合する、請求項１〜１５のい
ずれか一項に記載のリガンド系。 - 【請求項１７】ウイルスがマウス白血病ウイルス、ＨＩ
Ｖ、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、サイトメ
ガロウイルス、マウスの微小ウイルス、アデノ関連ウイ
ルス、Sindbis ウイルスおよびワクシニアウイルスから
なる群より選択される、請求項１６に記載のリガンド
系。 - 【請求項１８】カチオン性構造単位が、少くとも１つの
リジン残基、少くとも１つのアルギニン残基、少くとも
１つのヒスチジン残基および少くとも１つのポリアミン
を単独でまたは組合せて含む、請求項９に記載のリガン
ド系。 - 【請求項１９】コネクターが官能基との共有結合による
部分からなり、官能基がアミノ残基、ヒドロキシル残
基、ＳＨ残基、カルボキシル残基およびアルデヒド残基
からなる群より選択される、請求項２〜１８のいずれか
一項に記載のリガンド系。 - 【請求項２０】少くとも１つのリンカーが融合誘導物質
である、請求項２〜１９のいずれか一項に記載のリガン
ド系。 - 【請求項２１】融合誘導物質が合成融合誘導ペプチド、
細菌融合誘導ペプチドまたはタンパク質、およびペプチ
ドまたはタンパク質とウイルスとの間の融合産物からな
る群より選択される、請求項２０に記載のリガンド系。 - 【請求項２２】コネクターが、抗体のヒンジ領域、また
はＧａｌ４タンパク質と組み合わされたＧａｌ８０タン
パク質からなる、請求項２〜２１のいずれか一項に記載
のリガンド系。 - 【請求項２３】（ａ）抗ＮＣＡＭ組換え一本鎖Ｆｖ断片
からなる標的細胞特異的リガンド（Ｆｖ断片の可変重鎖
および軽鎖は短ペプチド配列で共有結合されている）； （ｂ）配列ＧＬＦＥＡＬＬＥＬＬＥＳＬＷＥＬＬＬＥＡ
（配列番号：１）を有する融合誘導ペプチドからなるリ
ンカー；および （ｃ）Ｎ６‐メチルアデニンに対する組換え抗体からな
る遺伝子構築物特異的リガンドを含んでなる、請求項１
に記載のリガンド系。 - 【請求項２４】遺伝子構築物を更に含んでいる、請求項
２３に記載のリガンド系。 - 【請求項２５】遺伝子構築物が、そのままのＲＮＡ、プ
ラスミド、そのままの核酸、またはカチオン性ポリマ
ー、ペプチド、タンパク質または脂質と組み合わされた
プラスミド、およびウイルスからなる群より選択され
る、請求項２４に記載のリガンド系。 - 【請求項２６】皮膚疾患、粘膜疾患、神経系疾患、内臓
疾患、血液凝固疾患、造血系疾患、免疫系疾患、筋肉組
織疾患と、支持組織または関節疾患を予防または治療す
る医薬品の製造に関する、請求項１〜２５のいずれか一
項に記載されたリガンド系の使用。
Applications Claiming Priority (2)
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|---|---|---|---|
| DE19649645.4 | 1996-11-29 | ||
| DE19649645A DE19649645A1 (de) | 1996-11-29 | 1996-11-29 | Mehrfach funktionelles Ligandensystem zur zielzellspezifischen Übertragung von Nukleotidsequenzen |
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|---|---|
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| JP (1) | JPH11169A (ja) |
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| AU (1) | AU729798B2 (ja) |
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| CZ (1) | CZ377697A3 (ja) |
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| JPWO2004096720A1 (ja) * | 2003-03-31 | 2006-07-13 | 株式会社荏原製作所 | 硫黄化合物含有廃水のメタン発酵処理方法及び装置 |
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-
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-
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- 1997-12-01 JP JP9330508A patent/JPH11169A/ja active Pending
- 1997-12-01 BR BR9706032A patent/BR9706032A/pt unknown
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