JPH111497A - 新規膜タンパク質およびそのｄｎａ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】ヒト樹状細胞由来の新規膜タンパク質の提供。 【解決手段】ヒト樹状細胞由来の膜タンパク質，その部
分ペプチドまたはそれらの塩、該膜タンパク質をコード
するＤＮＡ、該ＤＮＡを含有する組換えベクター、該組
換えベクターで形質転換された形質転換体、該膜タンパ
ク質の製造法、該膜タンパク質に対する抗体、該膜タン
パク質に対するリガンドの決定方法、リガンドと該膜タ
ンパク質との結合性を変化させる化合物のスクリーニン
グ方法／スクリーニング用キット、該スクリーニングで
得られる化合物、該化合物を含有する医薬など。 【効果】本発明の膜タンパク質、その部分ペプチドまた
はそれらの塩は、リガンド，アゴニスト，アンタゴニス
トなどをスクリーニングするための試薬として有用であ
る。本発明の抗体は、被検液中の本発明の膜タンパク質
の濃度を定量するための試薬として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト樹状細胞由来
の新規膜タンパク質およびその用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】樹状細胞（dendritic cell）は、骨髄に
存在するＣＤ３４陽性の前駆細胞より成熟、分化し、他
の単球系の細胞とは形態、運動性、貪食能の程度により
区別されている細胞である。本細胞は、末梢血中に遊走
していたり、皮膚組織や心、肺などの非リンパ組織、お
よびリンパ節、胸腺などのリンパ組織に広く分布し、生
体防御の最前線で主として皮膚感作物質、ウイルス抗
原、腫瘍関連抗原などのＴ細胞への抗原提示細胞として
重要な役割を果たしている。例えば、この樹状細胞ファ
ミリーに属する細胞の一種のランゲルハンス細胞は、皮
膚組織、特に表皮細胞層に広く分布し、アレルギー性の
炎症性皮膚疾患（例えばアレルギー性接触皮膚炎、アト
ピー性皮膚炎）の発症にエフェクターとして深く関与し
ていることが知られている〔臨床免疫、27巻、1013-101
8（1995）〕。また、その抗原提示能の強さから、抗腫
瘍免疫療法や各種感染症における免疫賦活療法を適用す
る際のマクロファージに代わる新しい材料として近年注
目されている〔イムノロジー・トゥデイ（Immunology T
oday）、18巻、102-104（1997）〕。現在のところ、樹
状細胞の成熟は、いわゆる２ステップモデルで考えられ
ており、微生物などの外来抗原やサイトカイン（例、Ｉ
Ｌ−１β，ＧＭ−ＣＳＦ，ＴＮＦ−αなど）からのシグ
ナルを介したイニシャル・マチュレーション（Initial
Maturation）と細胞表層分子（例、ＣＤ４０Ｌなど）や
新たなサイトカインシグナルを介したターミナル・マチ
ュレーション（Terminal Maturation）で進行するとさ
れている〔イムノロジー・トゥデイ（Immunology Toda
y）、18巻、102-104（1997）〕。また、前述のランゲル
ハンス細胞が抗原提示細胞としてヘルパーＴ細胞を活性
化する際、Class II抗原とＴ細胞レセプターを介するシ
グナルと、Ｂ７−１，Ｂ７−２などのいわゆるCostimul
atory moleculeによる２つのシグナルが必要であること
も報告されている〔イムノロジー・トゥデイ（Immunolo
gyToday）、15巻、464-469（1994）〕。

【０００３】また、樹状細胞の抗原処理能に関与する分
子としては、最近、同細胞表面に発現している膜タンパ
ク質ＤＥＣ−２０５が報告されている〔ネーチャー（Na
ture）、375巻、151-155（1995）〕。本タンパク質は、
当初モノクローナル抗体ＮＬＤＣ−１４５によって認識
される分子量２０５キロダルトンの表面抗原として報告
された〔ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メデ
ィスン（Journal of Experimental Medicine）、163
巻、981-997（1986）〕が、遺伝子解析の結果、システ
イン残基に富んだ領域に続いて、II型フィブロネクチン
領域と１０個のＣ−タイプレクチン様領域を細胞外領域
として持つ膜タンパク質であることが判明した。Ｃ−タ
イプレクチンは、一般にレクチンが特定の糖鎖構造に対
して選択的に結合能を有するタンパク質として定義され
る中、その結合にカルシウムイオンを必須とし、構造上
共通性のある認識ドメインＣＲＤ（ＣＯＯＨ-terminal
carbohydrate-recognition domain）を有する点からさ
らに分類される動物レクチンの一種である〔ジャーナル
・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Journal of B
iological Chemistry）、263巻、9557-9560（198
8）〕。通常、Ｃ−タイプレクチンファミリーに属する
タンパク質は細胞の表層部分に局在し、細胞外マトリッ
クスやある種の細胞群に対して特異的な結合能を示すこ
とにより細胞内へ何らかのシグナルを伝達しているもの
と考えられている。該ファミリーに属するタンパク質の
大半が典型的なII型膜タンパク質であり、例えばＣＤ２
３、ＮＫレセプター〔サイエンス（Science）、249巻、
1298-1300（1990）〕、あるいはマクロファージＣ−タ
イプレクチン（ジャーナル・オブ・イムノロジー（Jour
nal of Immunology）、156巻、128-135（1996）〕とい
った細胞表層膜タンパク質が知られているが、一方でＬ
−セレクチン、Ｅ−セレクチンあるいはＰ−セレクチン
といったＩ型膜タンパク質である接着分子もＣ−タイプ
レクチン構造を有しており、このＤＥＣ−２０５もまた
Ｉ型膜タンパク質に分類される。樹状細胞におけるＤＥ
Ｃ−２０５タンパク質の生理機能としては、このレクチ
ン様領域を介してある種の外来抗原を捕捉し、抗原の細
胞内取り込みとその処理を促進することで最終的に同細
胞の抗原提示能を向上させ、惹いてはＴ細胞の活性化を
促進することが考えられている。しかし、実際にはこの
タンパク質だけであらゆる抗原に対する樹状細胞の強力
な抗原提示能を説明できるものではなく、また抗体を用
いた発現分布を調べた実験から、本タンパク質はランゲ
ルハンス細胞や脾臓内樹状細胞の他に、骨髄前駆細胞や
脾臓内Ｂ細胞などにも発現していることが明らかになっ
ていることから〔セルラー・イムノロジー（Cellular I
mmunology）、163巻、148-156（1995）〕、そうした樹
状細胞以外の他の細胞での生理機能やＤＥＣ−２０５に
認識される抗原の実体など依然不明なことも多い。

【０００４】樹状細胞に関してはごく最近まで、その細
胞機能や各種生物活性を詳細に検討する上で必須であ
る、該細胞の大量単離精製を行う技術上の困難さがあっ
たため、上述のような樹状細胞の生理機能に関与すると
考えられる遺伝子に関する研究は、マクロファージなど
他の類縁関係にある免疫担当細胞に比べて大きく立ち遅
れた。したがって既存の遺伝子の機能と樹状細胞の成熟
・分化、抗原の処理、抗原提示、Ｔ細胞の活性化機構等
に関する現状のモデルだけで樹状細胞が担っている重要
な生理機能、ひいては各種疾患との関わりが十分に説明
されているとは言い難い。そこで、抗原提示細胞として
の樹状細胞の機能を分子レベルで詳細に明らかにしてい
くのは勿論のこと、今後樹状細胞を標的にした各種疾患
の治療・予防薬の開発、あるいは樹状細胞を用いた免疫
療法を効果的に行う上で、樹状細胞に由来する新しい細
胞機能調節遺伝子の単離とその生理機能の解明が望まれ
ていた。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、ヒト樹状細
胞由来の新規膜タンパク質，その部分ペプチドまたはそ
れらの塩、該タンパク質をコードするＤＮＡ、該ＤＮＡ
を含有する組換えベクター、該組換えベクターで形質転
換された形質転換体、該タンパク質またはその塩の製造
法、該タンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩
に対する抗体、該タンパク質に対するリガンドの決定方
法、該リガンドと該タンパク質との結合性を変化させる
化合物のスクリーニング方法、該スクリーニング用キッ
ト、該スクリーニング方法もしくはスクリーニング用キ
ットを用いて得られるリガンドと該タンパク質との結合
性を変化させる化合物、およびリガンドと該タンパク質
との結合性を変化させる化合物を含有してなる医薬など
を提供する。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題に鑑み、鋭意研究を重ねた結果、ヒト樹状細胞由来の
新規膜タンパク質をコードするｃＤＮＡを単離し、その
全塩基配列およびそれにコードされる該膜タンパク質の
全アミノ酸配列を解析することに成功した。本発明者ら
は、これらの知見に基づいて、さらに研究を重ねた結
果、本発明を完成するに至った。

【０００７】すなわち、本発明は、（１）配列番号：１
もしくは配列番号：２で表わされるアミノ酸配列と同一
もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを
特徴とするタンパク質またはその塩、（２）Ｃ−タイプ
レクチンファミリーに属する樹状細胞由来の膜タンパク
質である第（１）項記載のタンパク質、（３）第（１）
項記載のタンパク質の部分ペプチドまたはその塩、
（４）配列番号：２で表わされるアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク
質をコードする塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮ
Ａ、（５）配列番号：５で表わされる塩基配列を有する
第（４）項記載のＤＮＡ、（６）第（４）項記載のＤＮ
Ａを含有する組換えベクター、（７）第（６）項記載の
組換えベクターで形質転換させた形質転換体、（８）第
（１）項記載のタンパク質をコードするＤＮＡを含有す
るＤＮＡを含有する組換えベクターで形質転換された形
質転換体を培養し、該タンパク質を生成、蓄積せしめ、
これを採取することを特徴とする第（１）項記載のタン
パク質またはその塩の製造法、

【０００８】（９）第（１）項記載のタンパク質、第
（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩に対する
抗体、（１０）第（１）項記載のタンパク質、第（３）
項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩を用いることを
特徴とする第（１）項記載のタンパク質またはその塩に
対するリガンドの決定方法、（１１）第（１）項記載の
タンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれ
らの塩を用いることを特徴とするリガンドと第（１）項
記載のタンパク質との結合性を変化させる化合物または
その塩をスクリーニングする方法、（１２）第（１）項
記載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまた
はそれらの塩を含有することを特徴とするリガンドと第
（１）項記載のタンパク質またはその塩との結合性を変
化させる化合物またはその塩のスクリーニング用キッ
ト、（１３）第（１１）項記載のスクリーニング方法ま
たは第（１２）項記載のスクリーニング用キットを用い
て得られる、リガンドと第（１）項記載のタンパク質ま
たはその塩との結合性を変化させる化合物またはその
塩、および（１４）第（１１）項記載のスクリーニング
方法または第（１２）項記載のスクリーニング用キット
を用いて得られる、リガンドと第（１）項記載のタンパ
ク質またはその塩との結合性を変化させる化合物または
その塩を含有してなる医薬を提供する。

【０００９】さらに、本発明は、（１５）配列番号：１
もしくは配列番号：２で表わされるアミノ酸配列と実質
的に同一のアミノ酸配列が、配列番号：１もしくは配列
番号：２で表わされるアミノ酸配列と約４０％以上の相
同性を有するアミノ酸配列である第（１）項記載のタン
パク質、（１６）配列番号：１もしくは配列番号：２で
表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列
が、配列番号：１もしくは配列番号：２で表わされる
アミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜
３０個程度）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配
列番号：１もしくは配列番号：２で表わされるアミノ酸
配列に１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程
度）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、配列番号：
１もしくは配列番号：２で表わされるアミノ酸配列中の
１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度）のア
ミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、また
はそれらを組み合わせたアミノ酸配列である第（１）
項記載のタンパク質またはその塩、（１７）配列番号：
３または配列番号：４で表わされるアミノ酸配列と同一
もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有する第（３）
項記載の部分ペプチド、（１８）可溶性である第（１
３）項記載の部分ペプチド、

【００１０】（１９）配列番号：１で表わされるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するタンパク質をコードする塩基配列を有するＤＮＡ
を含有するＤＮＡ、（２０）配列番号：５で表わされる
塩基配列を有する第（１９）項記載のＤＮＡ、（２１）
第（１９）項記載のＤＮＡを含有する組換えベクター、
（２２）第（２１）項記載の組換えベクターで形質転換
させた形質転換体、（２３）配列番号：５または配列番
号６で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条
件下でハイブリダイズする塩基配列を有するＤＮＡを含
有するＤＮＡ、（２４）第（２３）項記載のＤＮＡを含
有する組換えベクター、（２５）第（２４）項記載の組
換えベクターで形質転換させた形質転換体、（２６）第
（２５）項記載の形質転換体を培養し、第（１９）項記
載のＤＮＡにコードされるタンパク質を生成し、蓄積せ
しめることを特徴とする第（１９）項記載のＤＮＡでコ
ードされるタンパク質またはその塩の製造法、（２７）
第（２６）項記載の製造法で製造されるタンパク質また
はその塩、（２８）第（３）項または第（１７）項記載
の部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有するＤＮＡ、
（２９）配列番号：７または配列番号：８で表わされる
塩基配列を有する第（２８）項記載のＤＮＡ、（３０）
第（２８）項記載のＤＮＡを含有する組換えベクター、
（３１）第（３０）項記載の組換えベクターで形質転換
させた形質転換体、（３２）第（３１）項記載の形質転
換体を培養し、ペプチドを生成、蓄積せしめ、これを採
取することを特徴とする第（３）項または第（１７）項
記載の部分ペプチドまたはその塩の製造法、

【００１１】（３３）第（１）項記載のタンパク質、第
（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩と、試験
化合物とを接触させることを特徴とする第（１０）項記
載のリガンドの決定方法、（３４）第（１０）項または
第（３３）項記載のリガンドの決定方法で得られるリガ
ンド、（３５）（ｉ）第（１）項記載のタンパク質、第
（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩と、リガ
ンドとを接触させた場合と、（ii）第（１）項記載のタ
ンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれら
の塩と、リガンドおよび試験化合物とを接触させた場合
との比較を行なうことを特徴とする第（７）項記載のス
クリーニング方法、（３６）（ｉ）標識したリガンドを
第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペ
プチドまたはそれらの塩に接触させた場合と、（ii）標
識したリガンドおよび試験化合物を第（１）項記載のタ
ンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれら
の塩に接触させた場合における、標識したリガンドの第
（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプ
チドまたはそれらの塩に対する結合量を測定し、比較す
ることを特徴とするリガンドと第（１）項記載のタンパ
ク質またはその塩との結合性を変化させる化合物または
その塩のスクリーニング方法、（３７）（ｉ）標識した
リガンドを第（１）項記載のタンパク質を含有する細胞
に接触させた場合と、（ii）標識したリガンドおよび試
験化合物を第（１）項記載のタンパク質を含有する細胞
に接触させた場合における、標識したリガンドの該細胞
に対する結合量を測定し、比較することを特徴とするリ
ガンドと第（１）項記載のタンパク質またはその塩との
結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニン
グ方法、（３８）（ｉ）標識したリガンドを第（１）項
記載のタンパク質を含有する細胞の膜画分に接触させた
場合と、（ii）標識したリガンドおよび試験化合物を第
（１）項記載のタンパク質を含有する細胞の膜画分に接
触させた場合における、標識したリガンドの該細胞膜画
分に対する結合量を測定し、比較することを特徴とする
リガンドと第（１）項記載のタンパク質またはその塩と
の結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニ
ング方法、

【００１２】（３９）（ｉ）標識したリガンドを第
（７）項または第（２２）項記載の形質転換体を培養す
ることによって該形質転換体の細胞膜に発現した第
（１）項記載のタンパク質に接触させた場合と、（ii）
標識したリガンドおよび試験化合物を第（７）項または
第（２２）項記載の形質転換体を培養することによって
該形質転換体の細胞膜に発現した第（１）項記載のタン
パク質に接触させた場合における、標識したリガンドの
第（１）項記載のタンパク質に対する結合量を測定し、
比較することを特徴とするリガンドと第（１）項記載の
タンパク質またはその塩との結合性を変化させる化合物
またはその塩のスクリーニング方法、（４０）（ｉ）第
（１）項記載のタンパク質またはその塩を活性化する物
質を第（１）項記載のタンパク質を含有する細胞に接触
させた場合と、（ii）第（１）項記載のタンパク質また
はその塩を活性化する物質および試験化合物を第（１）
項記載のタンパク質を含有する細胞に接触させた場合に
おける、第（１）項記載のタンパク質を介した細胞刺激
活性を測定し、比較することを特徴とするリガンドと第
（１）項記載のタンパク質またはその塩との結合性を変
化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（４１）第（１）項記載のタンパク質またはその塩を活
性化する物質を第（７）項または第（２２）項記載の形
質転換体を培養することによって該形質転換体の細胞膜
に発現した第（１）項記載のタンパク質に接触させた場
合と、第（１）項記載のタンパク質またはその塩を活性
化する物質および試験化合物を第（７）項または第（２
２）項記載の形質転換体を培養することによって該形質
転換体の細胞膜に発現した第（１）項記載のタンパク質
に接触させた場合における、第（１）項記載のタンパク
質を介する細胞刺激活性を測定し、比較することを特徴
とするリガンドと第（１）項記載のタンパク質またはそ
の塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスク
リーニング方法、

【００１３】（４２）第（３５）項〜第（４１）項記載
のいずれかのスクリーニング方法で得られる、リガンド
と第（１）項記載のタンパク質またはその塩との結合性
を変化させる化合物またはその塩、（４３）第（３５）
項〜第（４１）項記載のいずれかのスクリーニング方法
で得られる、リガンドと第（１）項記載のタンパク質ま
たはその塩との結合性を変化させる化合物またはその塩
を含有することを特徴とする医薬、（４４）第（１）項
記載のタンパク質を含有する細胞を含有することを特徴
とする第（１２）項記載のスクリーニング用キット、
（４５）第（１）項記載のタンパク質を含有する細胞の
膜画分を含有することを特徴とする第（１２）項記載の
スクリーニング用キット、（４６）第（７）項または第
（２２）項記載の形質転換体を培養することによって該
形質転換体の細胞膜に発現した第（１）項記載のタンパ
ク質を含有することを特徴とする第（１２）項記載のス
クリーニング用キット、（４７）第（１２）項および第
（４４）項〜第（４６）項記載のいずれかのスクリーニ
ング用キットを用いて得られる、リガンドと第（１）項
記載のタンパク質またはその塩との結合性を変化させる
化合物またはその塩、（４８）第（１２）項および第
（４４）項〜第（４６）項記載のいずれかのスクリーニ
ング用キットを用いて得られる、リガンドと第（１）項
記載のタンパク質またはその塩との結合性を変化させる
化合物またはその塩を含有することを特徴とする医薬、

【００１４】（４９）第（１１）項および第（３５）項
〜第（４１）のいずれかのスクリーニング方法、または
第（１２）項および第（４４）項〜第（４６）項記載の
いずれかのスクリーニング用キットを用いて得られる、
第（１）項記載のタンパク質またはその塩に対するアゴ
ニストを含有することを特徴とする医薬、（５０）癌
（例、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、ろ胞性リンパ球腫、ｐ
５３変異を伴う癌、脳腫瘍、膀胱癌、子宮頸部癌、大腸
癌（結腸／直腸癌）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、胃癌
など）、エイズ、感染症（例、ヘルペスウイルス感染
症、アデノウイルス感染症、ボックスウイルス感染症、
ヘリコバクター・ピロリ感染症、水痘-帯状疱疹ウイル
ス感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、侵襲性ブド
ウ状球菌感染症、インフルエンザ感染症、重症全身性真
菌感染症など）、急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス
脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、慢性リン
パ性白血病、慢性骨髄性白血病、インシュリン依存性糖
尿病（Ｉ型）、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、非ホジキン
性リンパ腫、消化性潰瘍、敗血症、敗血症ショック、結
核などの治療・予防剤である第（４９）項記載の医薬、
（５１）第（１１）項および第（３５）項〜第（４１）
のいずれかのスクリーニング方法、または第（１２）項
もしくは第（４４）項〜第（４６）項記載のいずれかの
スクリーニング用キットを用いて得られる、第（１）項
記載のタンパク質またはその塩に対するアンタゴニスト
を含有することを特徴とする医薬、（５２）アレルギー
性免疫疾患（例、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、ア
レルギー性鼻炎、花粉症など）、炎症（例、関節炎、肝
炎など）、自己免疫疾患（例、リウマチ関節炎、全身性
エリテマトーデス、シェーグレン病など）、エイズ、糸
球体腎炎、気管支喘息、動脈硬化症などの治療・予防剤
である第（５１）項記載の医薬、

【００１５】（５３）第（９）項記載の抗体と、第
（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプ
チドまたはそれらの塩とを接触させることを特徴とする
第（１）項のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチ
ドまたはそれらの塩の定量法、（５４）第（９）項記載
の抗体と、被検液および標識化された第（１）項記載の
タンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれ
らの塩とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識化
された第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の
部分ペプチドまたはそれらの塩の割合を測定することを
特徴とする被検液中の第（１）項記載のタンパク質、第
（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の定量
法、（５５）被検液と担体上に不溶化した第（９）項記
載の抗体および標識化された別の第（９）項記載の抗体
とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化担体
上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検液中
の第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部分
ペプチドまたはそれらの塩の定量法、（５６）第（９）
項記載の抗体を含有してなる医薬、（５７）アゴニスト
様活性を有する第（９）項記載の抗体を含有してなる医
薬、（５８）癌（例、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、ろ胞性
リンパ球腫、ｐ５３変異を伴う癌、脳腫瘍、膀胱癌、子
宮頸部癌、大腸癌（結腸／直腸癌）、非小細胞肺癌、小
細胞肺癌、胃癌など）、エイズ、感染症（例、ヘルペス
ウイルス感染症、アデノウイルス感染症、ボックスウイ
ルス感染症、ヘリコバクター・ピロリ感染症、水痘-帯
状疱疹ウイルス感染症、ヒトパピローマウイルス感染
症、侵襲性ブドウ状球菌感染症、インフルエンザ感染
症、重症全身性真菌感染症など）、急性バクテリア髄膜
炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリ
ア肺炎、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、イン
シュリン依存性糖尿病（Ｉ型）、悪性黒色腫、多発性骨
髄腫、非ホジキン性リンパ腫、消化性潰瘍、敗血症、敗
血症ショック、結核などの治療・予防剤である第（５
７）項記載の医薬、

【００１６】（５９）アンタゴニスト様活性を有する第
（９）項記載の抗体を含有してなる医薬、（６０）アレ
ルギー性免疫疾患（例、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚
炎、アレルギー性鼻炎、花粉症など）、炎症（例、関節
炎、肝炎など）、自己免疫疾患（例、リウマチ関節炎、
全身性エリテマトーデス、シェーグレン病など）、エイ
ズ、糸球体腎炎、気管支喘息、動脈硬化症などの治療・
予防剤である第（５９）項記載の医薬、（６１）第（１
８）項記載の可溶性部分ペプチドを含有する医薬、（６
２）アレルギー性免疫疾患（例、アトピー性皮膚炎、接
触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症など）、炎症
（例、関節炎、肝炎など）、自己免疫疾患（例、リウマ
チ関節炎、全身性エリテマトーデス、シェーグレン病な
ど）、エイズ、糸球体腎炎、気管支喘息、動脈硬化症な
どの治療・予防剤である第（６１）項記載の医薬、（６
３）第（４）項または第（１９）項記載のＤＮＡに相補
的または実質的に相補的な塩基配列を有し、該ＤＮＡの
発現を抑制し得る作用を有するアンチセンスＤＮＡ、
（６４）第（４）項または第（１９）項記載のＤＮＡに
実質的に相補的な塩基配列が、該ＤＮＡに相補的な塩基
配列の全塩基配列あるいは部分塩基配列と約７０％以上
（好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以
上、最も好ましくは約９５％以上）の相同性を有する塩
基配列である第（６３）項記載のアンチセンスＤＮＡ、
および（６５）第（６３）項記載のアンチセンスＤＮＡ
を含有してなる医薬、（６６）アレルギー性免疫疾患
（例、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、アレルギー性
鼻炎、花粉症など）、炎症（例、関節炎、肝炎など）、
自己免疫疾患（例、リウマチ関節炎、全身性エリテマト
ーデス、シェーグレン病など）、エイズ、糸球体腎炎、
気管支喘息、動脈硬化症などの治療・予防剤である第
（６５）項記載の医薬、

【００１７】（６７）（ｉ）第（１）項記載のタンパク
質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩と
Ｔ細胞とを接触させた場合と、（ii）第（１）項記載の
タンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれ
らの塩および試験化合物とＴ細胞とを接触させた場合と
の比較を行なうことを特徴とする、第（１）項記載のタ
ンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれら
の塩のＴ細胞活性化作用を促進もしくは阻害する化合物
またはその塩のスクリーニング方法、（６８）（ｉ）標
識した第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の
部分ペプチドまたはそれらの塩とＴ細胞とを接触させた
場合と、（ii）標識した第（１）項記載のタンパク質、
第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩および
試験化合物とＴ細胞とを接触させた場合における、標識
した第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部
分ペプチドまたはそれらの塩のＴ細胞に対する結合量を
測定し、比較することを特徴とする、第（１）項記載の
タンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれ
らの塩のＴ細胞活性化作用を促進もしくは阻害する化合
物またはその塩のスクリーニング方法、（６９）（ｉ）
第（１）項記載のタンパク質を含有する細胞とＴ細胞と
を接触させた場合と、（ii）第（１）項記載のタンパク
質を含有する細胞および試験化合物とＴ細胞とを接触さ
せた場合における、Ｔ細胞の活性化を測定し、比較する
ことを特徴とする、第（１）項記載のタンパク質、第
（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩のＴ細胞
活性化作用を促進もしくは阻害する化合物またはその塩
のスクリーニング方法、（７０）（ｉ）第（７）項また
は第（２２）項記載の形質転換体を培養することによっ
て該形質転換体の細胞膜に発現した第（１）項記載のタ
ンパク質とＴ細胞とを接触させた場合と、（ii）第
（７）項または第（２２）項記載の形質転換体を培養す
ることによって該形質転換体の細胞膜に発現した第
（１）項記載のタンパク質および試験化合物とＴ細胞と
を接触させた場合における、Ｔ細胞の活性化を測定し、
比較することを特徴とする、第（１）項記載のタンパク
質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の
Ｔ細胞活性化作用を促進もしくは阻害する化合物または
その塩のスクリーニング方法、

【００１８】（７１）第（１）項記載のタンパク質、第
（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩を含有す
ることを特徴とする、第（１）項記載のタンパク質、第
（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩のＴ細胞
活性化作用を促進もしくは阻害する化合物またはその塩
のスクリーニング用キット、（７２）第（１）項記載の
タンパク質を含有する細胞を含有することを特徴とす
る、第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部
分ペプチドまたはそれらの塩のＴ細胞活性化作用を促進
もしくは阻害する化合物またはその塩のスクリーニング
用キット、（７３）第（１）項記載のタンパク質を含有
する細胞の膜画分を含有することを特徴とする、第
（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプ
チドまたはそれらの塩のＴ細胞活性化作用を促進もしく
は阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キッ
ト、（７４）第（７）項または第（２２）項記載の形質
転換体を培養することによって該形質転換体の細胞膜に
発現した第（１）項記載のタンパク質を含有することを
特徴とする、第（１）項記載のタンパク質、第（３）項
記載の部分ペプチドまたはそれらの塩のＴ細胞活性化作
用を促進もしくは阻害する化合物またはその塩のスクリ
ーニング用キット、

【００１９】（７５）第（６７）項〜第（７０）項記載
のいずれかのスクリーニング方法または第（７１）項〜
第（７４）項記載のいずれかのスクリーニング用キット
を用いて得られる、第（１）項記載のタンパク質、第
（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩のＴ細胞
活性化作用を促進もしくは阻害する化合物またはその
塩、（７６）第（６７）項〜第（７０）項記載のいずれ
かのスクリーニング方法または第（７１）項〜第（７
４）項記載のいずれかのスクリーニング用キットを用い
て得られる、第（１）項記載のタンパク質、第（３）項
記載の部分ペプチドまたはそれらの塩のＴ細胞活性化作
用を促進する化合物またはその塩を含有することを特徴
とする医薬、（７７）癌（例、乳癌、前立腺癌、卵巣
癌、ろ胞性リンパ球腫、ｐ５３変異を伴う癌、脳腫瘍、
膀胱癌、子宮頸部癌、大腸癌（結腸／直腸癌）、非小細
胞肺癌、小細胞肺癌、胃癌など）、エイズ、感染症
（例、ヘルペスウイルス感染症、アデノウイルス感染
症、ボックスウイルス感染症、ヘリコバクター・ピロリ
感染症、水痘-帯状疱疹ウイルス感染症、ヒトパピロー
マウイルス感染症、侵襲性ブドウ状球菌感染症、インフ
ルエンザ感染症、重症全身性真菌感染症など）、急性バ
クテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候
群、バクテリア肺炎、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性
白血病、インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型）、悪性黒色
腫、多発性骨髄腫、非ホジキン性リンパ腫、消化性潰
瘍、敗血症、敗血症ショック、結核などの治療・予防剤
である第（７６）項記載の医薬、（７８）第（６７）項
〜第（７０）項記載のいずれかのスクリーニング方法ま
たは第（７１）項〜第（７４）項記載のいずれかのスク
リーニング用キットを用いて得られる、第（１）項記載
のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそ
れらの塩のＴ細胞活性化作用を阻害する化合物またはそ
の塩を含有することを特徴とする医薬、および（７９）
アレルギー性免疫疾患（例、アトピー性皮膚炎、接触性
皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症など）、炎症（例、
関節炎、肝炎など）、自己免疫疾患（例、リウマチ関節
炎、全身性エリテマトーデス、シェーグレン病など）、
エイズ、糸球体腎炎、気管支喘息、動脈硬化症などの治
療・予防剤である第（７８）項記載の医薬を提供する。

【００２０】

【発明の実施の形態】本発明の膜タンパク質は、配列番
号：１で表わされるアミノ酸配列〔図１〕または配列番
号：２で表わされるアミノ酸配列〔図２〕と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有する。ここで、配
列番号：２で表わされるアミノ酸配列は、配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列の第６７番目のＭｅｔと第６
８番目のＧｌｙとの間に、配列番号：２で表わされるア
ミノ酸配列の第６８番目のＡｌａから第１１８番目のＴ
ｈｒまでの４６個のアミノ酸が挿入されたものである。
本発明の膜タンパク質は、例えば、ヒトや哺乳動物（例
えば、モルモット、ラット、マウス、ウサギ、ブタ、ヒ
ツジ、ウマ、ウシ、サルなど）のあらゆる細胞（例え
ば、樹状細胞（例、ランゲルハンス細胞）、脾細胞、神
経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギ
ウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、
内皮細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、
免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチ
ュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸
球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨
芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細
胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン
細胞など、好ましくは、樹状細胞）や血球系の細胞（例
えば、ＭＥＬ，Ｍ１，ＣＴＬＬ−２，ＨＴ−２，ＷＥＨ
Ｉ−３，ＨＬ−６０，ＪＯＳＫ−１，Ｋ５６２，ＭＬ−
１，ＭＯＬＴ−３，ＭＯＬＴ−４，ＭＯＬＴ−１０，Ｃ
ＣＲＦ−ＣＥＭ，ＴＡＬＬ−１，Ｊｕｒｋａｔ，ＣＣＲ
Ｔ−ＨＳＢ−２，ＫＥ−３７，ＳＫＷ−３，ＨＵＴ−７
８，ＨＵＴ−１０２，Ｈ９，Ｕ９３７，ＴＨＰ−１，Ｈ
ＥＬ，ＪＫ−１，ＣＭＫ，ＫＯ−８１２，ＭＥＧ−０１
など）、またはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、
例えば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁頭核、大脳基底
球、海馬、視床、視床下部、視床下核、大脳皮質、延
髄、小脳、後頭葉、前頭葉、側頭葉、被殻、尾状核、脳
染、黒質）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生
殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、
消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、
顎下腺、末梢血、末梢血球、前立腺、睾丸、精巣、卵
巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋など（特に、脳や脳
の各部位）に由来するタンパク質であってもよく、また
合成タンパク質であってもよい。

【００２１】配列番号：１または配列番号：２で表わさ
れるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列として
は、例えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と
約４０％以上、好ましくは約５０％以上、より好ましく
は約７０％以上、さらに好ましくは約８０％以上、さら
に好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以
上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。配
列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一の
アミノ酸配列の具体例としては、例えば、配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列の第７１番目〜第２０１番目
のアミノ酸配列を有し、かつ、配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列と約４０％以上、好ましくは約５０％以
上、より好ましくは約７０％以上、さらに好ましくは約
８０％以上、さらに好ましくは約９０％以上、最も好ま
しくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列など
が好ましい。配列番号：２で表わされるアミノ酸配列と
実質的に同一のアミノ酸配列の具体例としては、例え
ば、配列番号：２で表わされるアミノ酸配列の第７０番
目〜第２４７番目のアミノ酸配列を有し、かつ、配列番
号：２で表わされるアミノ酸配列と約４０％以上、好ま
しくは約５０％以上、より好ましくは約７０％以上、さ
らに好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは約９０
％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有する
アミノ酸配列などが好ましい。本発明の配列番号：１ま
たは配列番号；２で表わされるアミノ酸配列と実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質としては、例
えば、前記した配列番号：１または配列番号：２で表わ
されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有
し、配列番号：１または配列番号：２で表わされるアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を
有する膜タンパク質などが好ましい。実質的に同質の活
性としては、例えば、リガンド結合能、シグナル伝達作
用、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ細胞の活性化、細胞接着
分子様活性などが挙げられる。実質的に同質とは、それ
らの活性が性質的に（例、生理化学的に、または薬理学
的に）同質であることを示す。したがって、リガンド結
合能、シグナル伝達作用、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ細
胞の活性化、細胞接着分子様活性などの活性が同等
（例、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．５〜２
０倍、より好ましくは約０．５〜２倍）であることが好
ましいが、これらの活性の程度やタンパク質の分子量な
どの量的要素は異なっていてもよい。リガンド結合能、
シグナル伝達作用、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ細胞の活
性化、細胞接着分子様活性などの活性の測定は、自体公
知の方法に準じて行なうことができるが、例えば、後述
するリガンドの決定方法や各スクリーニング方法に従っ
て測定することができる。

【００２２】また、本発明の膜タンパク質としては、
配列番号：１または配列番号：２で表わされるアミノ酸
配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程
度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは
数個（例、１〜５個））のアミノ酸が欠失したアミノ酸
配列、配列番号：１または配列番号：２配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列に１または２個以上（好まし
くは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程
度、さらに好ましくは数個（例、１〜５個））のアミノ
酸が付加したアミノ酸配列、配列番号：１または配列
番号：２で表わされるアミノ酸配列中の１または２個以
上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜
１０個程度、さらに好ましくは数個（例、１〜５個））
のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、
またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含有する
蛋白質なども用いられる。上記のようにアミノ酸配列が
欠失、付加または置換されている場合、その欠失、付加
または置換の位置としては、特に限定されないが、例え
ば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第７１番
目〜第２０１番目のアミノ酸配列以外の位置、配列番
号：２で表わされるアミノ酸配列の第７０番目〜第２１
４番目のアミノ酸配列以外の位置などが挙げられる。な
お、この配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第７
１番目〜第２０１番目のアミノ酸配列（すなわち、配列
番号：３で表わされるアミノ酸配列）および配列番号：
２で表わされるアミノ酸配列の第７０番目〜第２４７番
目のアミノ酸配列（すなわち、配列番号：４で表わされ
るアミノ酸配列）は、それぞれ配列番号：１または配列
番号：２で表わされるアミノ酸配列を含有する本発明の
膜タンパク質の細胞外領域のアミノ酸配列を示し、好ま
しくはリガンド結合部位を示す。

【００２３】本明細書におけるタンパク質は、ペプチド
標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端
がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：１ま
たは配列番号：２で表わされるアミノ酸配列を含有する
タンパク質をはじめとする本発明の膜タンパク質は、Ｃ
末端が通常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボ
キシレート(−ＣＯＯ^-）であるが、Ｃ末端がアミド（−
ＣＯＮＨ₂）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であっても
よい。ここでエステルにおけるＲとしては、例えば、メ
チル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルもしくはｎ
−ブチルなどのＣ_1-6アルキル基、例えば、シクロペン
チル、シクロヘキシルなどのＣ_3-8シクロアルキル基、
例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ_6-12アリール
基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ
_1-2アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−
ナフチル−Ｃ_1-2アルキル基などのＣ_7-14アラルキル基
のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロイルオ
キシメチル基などが用いられる。本発明の膜タンパク質
がＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレー
ト）を有している場合、カルボキシル基がアミド化また
はエステル化されているものも本発明の膜タンパク質に
含まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記し
たＣ末端のエステルなどが用いられる。さらに、本発明
の膜タンパク質には、上記したタンパク質において、Ｎ
末端のメチオニン残基のアミノ基が保護基（例えば、ホ
ルミル基、アセチル基などのＣ_1-6アルカノイル基など
のＣ_1-6アシル基など）で保護されているもの、Ｎ端側
が生体内で切断され生成したグルタミル基がピログルタ
ミル化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基
（例えば、−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール
基、インドール基、グアニジノ基など）が適当な保護基
（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ_1-6アルカ
ノイル基などのＣ_1-6アシル基など）で保護されている
もの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖タンパク質な
どの複合タンパク質なども含まれる。本発明の膜タンパ
ク質の具体例としては、例えば、配列番号：１で表わ
されるアミノ酸配列〔図１〕を含有するヒト樹状細胞由
来の膜タンパク質（以下、ＤＣ３と略記する場合があ
る）、配列番号：２で表わされるアミノ酸配列を含有
するヒト樹状細胞由来の膜タンパク質（以下、ＤＣ３'
と略記する場合がある）などが用いられる。

【００２４】本発明の膜タンパク質の部分ペプチド（以
下、本発明の部分ペプチドと略記する場合がある）とし
ては、前記した本発明の膜タンパク質の部分ペプチドで
あれば何れのものであってもよいが、例えば、本発明の
膜タンパク質分子のうち、細胞膜の外に露出している部
位であって、好ましくは、リガンド結合能を有するもの
などが用いられる。さらに、本発明の部分ペプチドは、
可溶性であることが好ましい。具体的には、配列番号：
１で表わされるアミノ酸配列を有するタンパク質の部分
ペプチドとしては、親水性プロット解析〔図３〕におい
て細胞外領域（＋領域；親水性（Hydrophilic）部位）
であると分析された部分を含むペプチドなどが、配列番
号：２で表わされるアミノ酸配列を有するタンパク質の
部分ペプチドとしては、親水性プロット解析〔図４〕に
おいて細胞外領域（＋領域；親水性（Hydrophilic）部
位）であると分析された部分を含むペプチドなどが用い
られる。また、該細胞外領域に疎水性（Hydrophobic）
部位を一部に含むペプチドも同様に用いることができ
る。個々のドメインを個別に含むペプチドも用い得る
が、複数のドメインを同時に含む部分のペプチドでも良
い。本発明の部分ペプチドのアミノ酸の数は、前記した
本発明の膜タンパク質の構成アミノ酸配列のうち、少な
くとも約２０個以上、好ましくは約５０個以上、より好
ましくは約１００個以上、さらに好ましくは約１５０個
以上で、約２００個以下のアミノ酸配列を有するペプチ
ドなどが好ましい。具体的には、例えば、配列番号：３
または配列番号：４で表わされるアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を有し、好ましく
は、本発明の膜タンパク質と実質的に同質の活性を有す
るペプチドなどが好ましく、さらには可溶性であるペプ
チドが好適である。配列番号：３または配列番号：４で
表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列
とは、配列番号：３または配列番号：４で表わされるア
ミノ酸配列と約４０％以上、好ましくは約５０％以上、
より好ましくは約７０％以上、さらに好ましくは約８０
％以上、さらに好ましくは約９０％以上、最も好ましく
は約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列を示す。
ここで、「実質的に同質の活性」とは、前記と同意義を
示す。「実質的に同質の活性」の測定は、後述するリガ
ンドの決定方法や各スクリーニング方法に従って測定す
ることができる。

【００２５】また、本発明の部分ペプチドは、上記アミ
ノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０
個程度、さらに好ましくは数個（例、１〜５個））のア
ミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１または
２個以上（好ましくは、１〜２０個程度、より好ましく
は１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（例、１〜５
個））のアミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列
中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、
より好ましくは数個（例、１〜５個））のアミノ酸が他
のアミノ酸で置換されていてもよい。また、本発明の部
分ペプチドはＣ末端が通常カルボキシル基（−ＣＯＯ
Ｈ）またはカルボキシレート（−ＣＯＯ^-）であるが、
前記した本発明の膜タンパク質のごとく、Ｃ末端がアミ
ド（−ＣＯＮＨ₂ ）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であ
ってもよい。さらに、本発明の部分ペプチドには、前記
した本発明の膜タンパク質と同様に、Ｎ末端のメチオニ
ン残基のアミノ基が保護基で保護されているもの、Ｎ端
側が生体内で切断され生成したグルタミル基がピログル
タミル化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基
が適当な保護基で保護されているもの、あるいは糖鎖が
結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドなども
含まれる。また、本発明の部分ペプチドはＣ末端が通常
カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレート
(−ＣＯＯ^-）であるが、前記した本発明の膜タンパク質
のごとく、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮＨ₂）またはエス
テル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。本発明の部分ペプ
チドは抗体作成のための抗原として用いることができる
ので、必ずしもリガンド結合能、シグナル伝達作用、Ｔ
細胞への抗原提示能、Ｔ細胞の活性化、細胞接着分子様
活性などの活性を有する必要はない。

【００２６】本発明の膜タンパク質または部分ペプチド
の塩としては、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩
が好ましい。この様な塩としては、例えば無機酸（例え
ば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるい
は有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル
酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ
酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスル
ホン酸）との塩などが用いられる。本発明の膜タンパク
質、部分ペプチド、またはそれらの塩は、前述したヒト
や哺乳動物の細胞または組織から自体公知のタンパク質
またはペプチドの精製方法に従って製造することもでき
るし、後述する本発明の膜タンパク質または部分ペプチ
ドをコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養する
ことによっても製造することができる。また、後述のペ
プチド合成法あるいはそれに準じる方法に従って製造す
ることもできる。これら膜タンパク質またはペプチドを
ヒトや哺乳動物の組織または細胞から製造する場合、ヒ
トや哺乳動物の組織または細胞をホモジナイズした後、
酸などで抽出を行ない、該抽出液を逆相クロマトグラフ
ィー、イオン交換クロマトグラフィーなどのクロマトグ
ラフィー、ゲル濾過、塩析、透析などを組み合わせるこ
とにより精製単離することもできる。

【００２７】本発明の膜タンパク質、部分ペプチドもし
くはそれらの塩、またはそれらのアミド体の合成には、
通常市販のタンパク質合成用樹脂を用いることができ
る。そのような樹脂としては、例えば、クロロメチル樹
脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹
脂、アミノメチル樹脂、４−ベンジルオキシベンジルア
ルコール樹脂、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、
PAM樹脂、４−ヒドロキシメチルメチルフェニルアセト
アミドメチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、４−
（2',4'-ジメトキシフェニル−ヒドロキシメチル）フェ
ノキシ樹脂、４−（2',4'-ジメトキシフェニル−Fmocア
ミノエチル）フェノキシ樹脂などを挙げることができ
る。このような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基
を適当に保護したアミノ酸を、目的とするタンパク質の
配列通りに、自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で
縮合させる。反応の最後に樹脂からタンパク質を切り出
すとともに各種保護基を除去し、さらに高希釈溶液中で
分子内ジスルフィド結合形成反応を実施し、目的のタン
パク質、その部分ペプチドまたはそれらのアミド体を取
得する。上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、タン
パク質合成に使用できる各種活性化試薬を用いることが
できるが、特に、カルボジイミド類がよい。カルボジイ
ミド類としては、DCC、N,N'-ジイソプロピルカルボジイ
ミド、N-エチル-N'-(3-ジメチルアミノプロリル）カル
ボジイミドなどが用いられる。これらによる活性化には
ラセミ化抑制添加剤（例えば、HOBt, HOOBt)とともに保
護アミノ酸を直接樹脂に添加するか、または、対称酸無
水物またはHOBtエステルあるいはHOOBtエステルとして
あらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なった後に、樹脂
に添加することができる。

【００２８】保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用
いられる溶媒としては、タンパク質縮合反応に使用しう
ることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例え
ば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，Ｎ，Ｎ−ジメチル
アセトアミド，Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド
類、塩化メチレン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化
水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、
ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジ
ン，ジオキサン，テトラヒドロフランなどのエーテル
類、アセトニトリル，プロピオニトリルなどのニトリル
類、酢酸メチル，酢酸エチルなどのエステル類あるいは
これらの適宜の混合物などが用いられる。反応温度はタ
ンパク質結合形成反応に使用され得ることが知られてい
る範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範
囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体
は、樹脂上のアミノ基に対して、通常１.５〜４倍過剰
で用いられる。ニンヒドリン反応を用いたテストの結
果、縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行なうこと
なく縮合反応を繰り返すことにより十分な縮合を行なう
ことができる。反応を繰り返しても十分な縮合が得られ
ないときには、無水酢酸またはアセチルイミダゾールを
用いて未反応アミノ酸をアセチル化して、後の反応に影
響を及ぼさないようにすることができる。

【００２９】原料のアミノ基の保護基としては、例え
ば、Ｚ、Boc、ｔ−ペンチルオキシカルボニル、イソボ
ルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシ
カルボニル、Cl-Z、Br-Z、アダマンチルオキシカルボニ
ル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、２
−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノ
チオイル、Fmocなどが用いられる。カルボキシル基は、
例えば、アルキルエステル化（例えば、メチル、エチ
ル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シクロペンチル、
シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、２
−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状もしくは環状アル
キルエステル化）、アラルキルエステル化（例えば、ベ
ンジルエステル、４−ニトロベンジルエステル、４−メ
トキシベンジルエステル、４−クロロベンジルエステ
ル、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシルエステル
化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド化、ｔ−ブト
キシカルボニルヒドラジド化、トリチルヒドラジド化な
どによって保護することができる。セリンの水酸基は、
例えば、エステル化またはエーテル化によって保護する
ことができる。このエステル化に適する基としては、例
えば、アセチル基などの低級アルカノイル基、ベンゾイ
ル基などのアロイル基、ベンジルオキシカルボニル基、
エトキシカルボニル基などの炭酸から誘導される基など
が用いられる。また、エーテル化に適する基としては、
例えば、ベンジル基、テトラヒドロピラニル基、t-ブチ
ル基などである。チロシンのフェノール性水酸基の保護
基としては、例えば、Bzl、Cl₂-Bzl、２−ニトロベンジ
ル、Br-Z、ｔ−ブチルなどが用いられる。ヒスチジンの
イミダゾールの保護基としては、例えば、Tos、４-メト
キシ-2,3,6-トリメチルベンゼンスルホニル、DNP、ベン
ジルオキシメチル、Bum、Boc、Trt、Fmocなどが用いら
れる。

【００３０】原料のカルボキシル基の活性化されたもの
としては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノー
ル、2,4,5-トリクロロフェノール、2,4-ジニトロフェノ
ール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノー
ル、HONB、N-ヒドロキシスクシミド、N-ヒドロキシフタ
ルイミド、HOBt）とのエステル〕などが用いられる。原
料のアミノ基の活性化されたものとしては、例えば、対
応するリン酸アミドが用いられる。保護基の除去（脱
離）方法としては、例えば、Ｐｄ黒あるいはＰｄ-炭素
などの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、ま
た、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロ
メタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれらの
混合液などによる酸処理や、ジイソプロピルエチルアミ
ン、トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジンなどに
よる塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによる
還元なども用いられる。上記酸処理による脱離反応は、
一般に約−２０℃〜４０℃の温度で行なわれるが、酸処
理においては、例えば、アニソール、フェノール、チオ
アニソール、メタクレゾール、パラクレゾール、ジメチ
ルスルフィド、1,4-ブタンジチオール、1,2-エタンジチ
オールなどのようなカチオン捕捉剤の添加が有効であ
る。また、ヒスチジンのイミダゾール保護基として用い
られる2,4-ジニトロフェニル基はチオフェノール処理に
より除去され、トリプトファンのインドール保護基とし
て用いられるホルミル基は上記の1,2-エタンジチオー
ル、1,4-ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による
脱保護以外に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニア
などによるアルカリ処理によっても除去される。

【００３１】原料の反応に関与すべきでない官能基の保
護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関
与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段
から適宜選択しうる。本発明の膜タンパク質またはその
部分ペプチドのアミド体を得る別の方法としては、例え
ば、まず、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル
基をアミド化して保護した後、アミノ基側にペプチド鎖
（タンパク質鎖）を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプ
チド鎖のＮ末端のα−アミノ基の保護基のみを除いたタ
ンパク質とＣ末端のカルボキシル基の保護基のみを除去
したタンパク質とを製造し、この両タンパク質を上記し
たような混合溶媒中で縮合させる。縮合反応の詳細につ
いては上記と同様である。縮合により得られた保護タン
パク質を精製した後、上記方法によりすべての保護基を
除去し、所望の粗タンパク質を得ることができる。この
粗タンパク質または粗ペプチドは既知の各種精製手段を
駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥することで所望の
タンパク質またはその部分ペプチドのアミド体を得るこ
とができる。本発明の膜タンパク質またはその部分ペプ
チドのエステル体を得るには、例えば、カルボキシ末端
アミノ酸のα−カルボキシル基を所望のアルコール類と
縮合しアミノ酸エステルとした後、膜タンパク質のアミ
ド体と同様にして、所望の膜タンパク質またはその部分
ペプチドのエステル体を得ることができる。

【００３２】本発明の部分ペプチドまたはその塩は、自
体公知のペプチドの合成法に従って、あるいは本発明の
膜タンパク質を適当なペプチダーゼで切断することによ
って製造することができる。ペプチドの合成法として
は、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによって
も良い。すなわち、目的とするペプチドを構成し得る部
分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、
生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することに
より目的のペプチドを製造することができる。公知の縮
合方法や保護基の脱離としては、例えば、以下の〜
に記載された方法が挙げられる。 M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド・シン
セシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年) SchroederおよびLuebke、ザ・ペプチド(The Peptid
e), Academic Press, NewYork (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年） 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タン
パク質の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド合
成、広川書店 また、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留
・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー
・再結晶などを組み合わせて、目的のペプチドを精製単
離することができる。上記方法で得られるペプチドが遊
離体である場合は、公知の方法あるいはそれに準じる方
法によって適当な塩に変換することができるし、逆に塩
で得られた場合は、公知の方法あるいはそれに準じる方
法によって遊離体または他の塩に変換することができ
る。

【００３３】本発明の膜タンパク質をコードするＤＮＡ
としては、前述した本発明の膜タンパク質をコードする
塩基配列を含有するものであればいかなるものであって
もよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリ
ー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞
・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいず
れでもよい。ライブラリーに使用するベクターは、バク
テリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミド
などいずれであってもよい。また、前記した細胞・組織
よりtotalＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分を調製したものを
用いて直接Reverse Transcriptase Polymerase Chain R
eaction（以下、ＲＴ-ＰＣＲ法と略称する）によって増
幅することもできる。具体的には、本発明の膜タンパク
質をコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：
５で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列
番号：５で表わされる塩基配列とハイストリンジェント
な条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明
の膜タンパク質と実質的に同質の活性（例、リガンド結
合能、シグナル伝達作用、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ細
胞の活性化、細胞接着分子様活性など）を有するタンパ
ク質をコードするＤＮＡ、配列番号：６で表わされる
塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：６で表わ
される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイ
ブリダイズする塩基配列を有し、本発明の膜タンパク質
と実質的に同質の活性（例、リガンド結合能、シグナル
伝達作用、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ細胞の活性化、細
胞接着分子様活性など）を有するタンパク質をコードす
るＤＮＡであれば何れのものでもよい。配列番号：５ま
たは配列番号：６で表わされる塩基配列とハイブリダイ
ズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：５または
配列番号：６で表わされる塩基配列と約７０％以上、好
ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、
最も好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列
を含有するＤＮＡなどが用いられる。

【００３４】ハイブリダイゼーションは、自体公知の方
法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・
クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook
etal., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記
載の方法などに従って行なうことができる。また、市販
のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記
載の方法に従って行なうことができる。より好ましく
は、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことが
できる。ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナ
トリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜
２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０
〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９
ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。より具体
的には、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を含有
するタンパク質をコードするＤＮＡとしては、配列番
号：５で表わされる塩基配列を有するＤＮＡなどが用い
られ、配列番号：２で表わされるアミノ酸配列を含有す
るタンパク質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：
６で表わされる塩基配列を有するＤＮＡなどが用いられ
る。

【００３５】本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡ
としては、前述した本発明の部分ペプチドをコードする
塩基配列を含有するものであればいかなるものであって
もよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリ
ー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞
・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいず
れでもよい。ライブラリーに使用するベクターは、バク
テリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミド
などいずれであってもよい。また、前記した細胞・組織
よりｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接ＲＴ-Ｐ
ＣＲ法によって増幅することもできる。具体的には、本
発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例え
ば、配列番号：５で表わされる塩基配列を有するＤＮ
Ａの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または配列番号：
５で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件
下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明の膜タ
ンパク質ペプチドと実質的に同質の活性（例、リガンド
結合能、シグナル伝達作用、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ
細胞の活性化、細胞接着分子様活性など）を有するタン
パク質をコードするＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮ
Ａなど、配列番号：６で表わされる塩基配列を有する
ＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または配列番
号：６で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな
条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明の
膜タンパク質ペプチドと実質的に同質の活性（例、リガ
ンド結合能、シグナル伝達作用、Ｔ細胞への抗原提示
能、Ｔ細胞の活性化、細胞接着分子様活性など）を有す
るタンパク質をコードするＤＮＡの部分塩基配列を有す
るＤＮＡなどが用いられる。配列番号：５または配列番
号：６で表わされる塩基配列とハイブリダイズできるＤ
ＮＡとしては、例えば、配列番号：５または配列番号：
６で表わされる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約
８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好まし
くは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有する
ＤＮＡなどが用いられる。

【００３６】より具体的には、配列番号：３で表わされ
るアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコードするＤＮ
Ａとしては、配列番号：７で表わされる塩基配列または
それとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズ
する塩基配列を有するＤＮＡなどが用いられる。配列番
号：７で表わされる塩基配列とハイブリダイズできるＤ
ＮＡとしては、例えば、配列番号：５で表わされる塩基
配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好
ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の
相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いら
れる。配列番号：４で表わされるアミノ酸配列を有する
部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：
８で表わされる塩基配列またはそれとハイストリンジェ
ントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有するＤ
ＮＡなどが用いられる。配列番号：８で表わされる塩基
配列とハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、
配列番号：８で表わされる塩基配列と約７０％以上、好
ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、
最も好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列
を含有するＤＮＡなどが用いられる。ハイブリダイゼー
ションの方法およびハイストリンジェントな条件は前記
と同様のものが用いられる。

【００３７】本発明の膜タンパク質またはその部分ペプ
チド（以下、本発明の膜タンパク質等と略記する場合が
ある）を完全にコードするＤＮＡのクローニングの手段
としては、（１）本発明の膜タンパク質等の部分塩基配
列を有する合成ＤＮＡプライマーを用いてＰＣＲ法によ
って増幅するか、または（２）適当なベクターに組み込
んだＤＮＡと、本発明の膜タンパク質等の一部あるいは
全領域をコードするＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを標
識したものとのハイブリダイゼーションによって選別す
ること、などが挙げられる。ハイブリダイゼーションの
方法は、例えば、モレキュラー・クローニング（Molecu
lar Cloning）２nd（J. Sambrook et al., Cold Spring
Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って
行なうことができる。また、市販のライブラリーを使用
する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行な
うことができる。ＤＮＡの塩基配列の変換（欠失・付加
・置換）は、公知のキット、例えば、Mutan^TM-G（宝酒
造（株））、Mutan^TM-K（宝酒造（株））などを用い
て、Gapped duplex法やKunkel法などの自体公知の方法
あるいはそれらに準じる方法に従って行なうことができ
る。クローン化された膜タンパク質等をコードするＤＮ
Ａは、目的によりそのまま、または所望により制限酵素
で消化したり、リンカーを付加したりして使用すること
ができる。該ＤＮＡはその５’末端側に翻訳開始コドン
としてのＡＴＧを有し、また３’末端側には翻訳終止コ
ドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有していて
もよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは、
適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて付加することもで
きる。本発明の膜タンパク質等の発現ベクターは、例え
ば、（イ）本発明の膜タンパク質等をコードするＤＮＡ
から目的とするＤＮＡ断片を切り出し、（ロ）該ＤＮＡ
断片を適当な発現ベクター中のプロモーターの下流に連
結することにより製造することができる。

【００３８】ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミ
ド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐ
ＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１
０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐ
Ａ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳ
Ｖ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。本発明で
用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用い
る宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなる
ものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場
合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、Ｌ
ＴＲプロモーター、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プ
ロモーター、ＨＳＶ-ＴＫプロモーターなどが挙げられ
る。これらのうち、ＣＭＶプロモーター、ＳＲαプロモ
ーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエシェリヒア
属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモ
ーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰ_Lプロモーター、
ｌｐｐプロモーターなどが、宿主がバチルス属菌である
場合は、ＳＰＯ１プロモーター、ＳＰＯ２プロモータ
ー、ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主が酵母である場合
は、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡ
Ｐプロモーター、ＡＤＨプロモーターなどが好ましい。
宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘドリンプロモータ
ー、Ｐ１０プロモーターなどが好ましい。

【００３９】発現ベクターには、以上の他に、所望によ
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有
しているものを用いることができる。選択マーカーとし
ては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒ
と略称する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（Ｍ
ＴＸ）耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐ
^rと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子
（以下、Ｎｅｏと略称する場合がある、Ｇ４１８耐性）
等が挙げられる。特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニー
ズハムスター細胞ＣＨＯを用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択
マーカーとして使用する場合、目的遺伝子で形質転換さ
れた細胞をチミジンを含まない培地によっても選択でき
る。また、必要に応じて、宿主に合ったシグナル配列
を、本発明の膜タンパク質等のアミノ末端側に付加す
る。宿主がエシェリヒア属菌である場合は、PhoＡ・シ
グナル配列、OmpＡ・シグナル配列などが、宿主がバチ
ルス属菌である場合は、α−アミラーゼ・シグナル配
列、サブチリシン・シグナル配列などが、宿主が酵母で
ある場合は、ＭＦα・シグナル配列、ＳＵＣ２・シグナ
ル配列など、宿主が動物細胞である場合には、インシュ
リン・シグナル配列、α−インターフェロン・シグナル
配列、抗体分子・シグナル配列などがそれぞれ利用でき
る。このようにして構築された本発明の膜タンパク質等
をコードするＤＮＡを含有するベクターを用いて、形質
転換体を製造することができる。

【００４０】宿主としては、例えば、エシェリヒア属
菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞な
どが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例としては、
エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２・ＤＨ
１〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６０巻，１６０
(１９６８)〕，ＪＭ１０３〔ヌクレイック・アシッズ・
リサーチ，（Nucleic Acids Research），９巻，３０９
(１９８１)〕，ＪＡ２２１〔ジャーナル・オブ・モレキ
ュラー・バイオロジー（Journal of Molecular Biolog
y）〕，１２０巻，５１７(１９７８)〕，ＨＢ１０１
〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー，４
１巻，４５９(１９６９)〕，Ｃ６００〔ジェネティック
ス（Genetics），３９巻，４４０(１９５４)〕などが用
いられる。バチルス属菌としては、例えば、バチルス・
サチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４〔ジーン（G
ene），２４巻，２５５(１９８３)〕，２０７−２１
〔ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Journal of
Biochemistry），９５巻，８７(１９８４)〕などが用
いられる。酵母としては、例えば、サッカロマイセス・
セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２，Ａ
Ｈ２２Ｒ^-，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ
−１２、シゾサッカロマイセス・ポンベ（Schizosaccha
romyces pombe）ＮＣＹＣ１９１３，ＮＣＹＣ２０３
６、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）などが用
いられる。

【００４１】昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡ
ｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Spodop
tera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia ni
の中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来のH
igh Five^TM細胞、Mamestra brassicae由来の細胞または
Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイル
スがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来株化細胞（Bombyx mor
i N；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ細胞とし
ては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC CRL1711）、Ｓｆ２１
細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イン・ヴィボ（In Viv
o）,13, 213-217,(1977)）などが用いられる。昆虫とし
ては、例えば、カイコの幼虫などが用いられる〔前田
ら、ネイチャー（Nature），３１５巻，５９２(１９８
５)〕。動物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ−
７，Ｖero，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以
下、ＣＨＯ細胞と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニ
ーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆ
ｒ^-）細胞と略記），マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２
０，マウスミエローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細
胞、２９３細胞、Ｃ１２７細胞、ＢＡＬＢ３Ｔ３細胞、
Ｓｐ−２細胞などが用いられる。これらの中でも、ＣＨ
Ｏ細胞、ＣＨＯ（ｄｈｆｒ^-）細胞、２９３細胞などが
好ましい。

【００４２】エシェリヒア属菌を形質転換するには、例
えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンジイズ・オブ・ザ・ユーエスエ
ー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６９巻，２１
１０(１９７２)やジーン（Gene），１７巻，１０７(１
９８２)などに記載の方法に従って行なうことができ
る。 バチルス属菌を形質転換するには、例えば、モレ
キュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティックス（Mo
lecular ＆ General Genetics），１６８巻，１１１(１
９７９)などに記載の方法に従って行なうことができ
る。酵母を形質転換するには、例えば、メソッズ・イン
・エンザイモロジー（Methods in Enzymology），１９
４巻，１８２−１８７（１９９１）、プロシージングズ
・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエン
シイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad.
Sci. ＵＳＡ），７５巻，１９２９(１９７８）などに記
載の方法に従って行なうことができる。昆虫細胞または
昆虫を形質転換するには、例えば、バイオ／テクノロジ
ー（Bio/Technology）,6, 47-55(1988)）などに記載の
方法に従って行なうことができる。動物細胞を形質転換
するには、例えば、細胞工学別冊８ 新細胞工学実験プ
ロトコール．２６３−２６７（１９９５）（秀潤社発
行）、ヴィロロジー（Virology），５２巻，４５６(１
９７３)に記載の方法に従って行なうことができる。発
現ベクターの細胞への導入方法としては、例えば、リン
酸カルシウム法〔Graham, F. L. and van der Eb, A.
J.ヴィロロジー（Virology） 52, 456-467（1973）〕、
電気穿孔法〔Neumann, E. et al. エンボ・ジャーナル
（EMBO J.） 1,841-845（1982）〕等が挙げられる。こ
のようにして、本発明の膜タンパク質等をコードするＤ
ＮＡを含有する発現ベクターで形質転換された形質転換
体が得られる。

【００４３】なお、動物細胞を用いて、本発明の膜タン
パク質等を安定に発現させる方法としては、上記の動物
細胞に導入された発現ベクターが染色体に組み込まれた
細胞をクローン選択によって選択する方法がある。具体
的には、上記の選択マーカーを指標にして形質転換体を
選択する。さらに、このように選択マーカーを用いて得
られた動物細胞に対して、繰り返しクローン選択を行な
うことにより本発明の膜タンパク質等の高発現能を有す
る安定な動物細胞株を得ることができる。また、ｄｈｆ
ｒ遺伝子を選択マーカーとして用いた場合、ＭＴＸ濃度
を徐々に上げて培養し、耐性株を選択することにより、
ｄｈｆｒ遺伝子とともに、本発明の膜タンパク質等をコ
ードするＤＮＡを細胞内で増幅させて、さらに高発現の
動物細胞株を得ることもできる。上記の形質転換体を本
発明の膜タンパク質等をコードするＤＮＡが発現可能な
条件下で培養し、本発明の膜タンパク質等を生成、蓄積
せしめることによって、本発明の膜タンパク質等を製造
することができる。宿主がエシェリヒア属菌、バチルス
属菌である形質転換体を培養する際、培養に使用される
培地としては液体培地が適当であり、その中には該形質
転換体の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が
含有せしめられる。炭素源としては、例えば、グルコー
ス、デキストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源と
しては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、コーン
スチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大
豆粕、バレイショ抽出液などの無機または有機物質、無
機物としては、例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素
ナトリウム、塩化マグネシウムなどが挙げられる。ま
た、酵母抽出液、ビタミン類、生長促進因子などを添加
してもよい。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。

【００４４】エシェリヒア属菌を培養する際の培地とし
ては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地
〔ミラー（Miller），ジャーナル・オブ・エクスペリメ
ンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journa
l of Experiments in Molecular Genetics），４３１−
４３３，Cold Spring Harbor Laboratory, New York１
９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを
効率よく働かせるために、例えば、３β−インドリルア
クリル酸のような薬剤を加えることができる。宿主がエ
シェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約
３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加える
こともできる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常
約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通
気や撹拌を加えることもできる。宿主が酵母である形質
転換体を培養する際、培地としては、例えば、バークホ
ールダー（Burkholder）最小培地〔Bostian, K. L.
ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），７７巻，４５０
５(１９８０)〕や０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ培
地〔Bitter, G. A. ら、プロシージングズ・オブ・ザ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ
・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳ
Ａ），８１巻，５３３０（１９８４）〕が挙げられる。
培地のｐＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は
通常約２０〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要に
応じて通気や撹拌を加える。

【００４５】宿主が昆虫細胞または昆虫である形質転換
体を培養する際、培地としては、Grace's Insect Mediu
m（Grace, T.C.C.,ネイチャー（Nature）,195,788(196
2)）に非動化した１０％ウシ血清等の添加物を適宜加え
たものなどが用いられる。培地のｐＨは約６．２〜６．
４に調整するのが好ましい。培養は通常約２７℃で約３
〜５日間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。宿
主が動物細胞である形質転換体を培養する際、培地とし
ては、例えば、約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ
培地〔サイエンス（Science），１２２巻，５０１(１９
５２)〕，ＤＭＥＭ培地〔ヴィロロジー（Virology），
８巻，３９６(１９５９)〕，ＲＰＭＩ １６４０培地
〔ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・メディカル・ア
ソシエーション（The Journal of the American Medica
l Association）１９９巻，５１９(１９６７)〕，１９
９培地〔プロシージング・オブ・ザ・ソサイエティ・フ
ォー・ザ・バイオロジカル・メディスン（Proceeding o
fthe Society for the Biological Medicine），７３
巻，１(１９５０)〕などが用いられる。ｐＨは約６〜８
であるのが好ましい。培養は通常約３０〜４０℃で約１
５〜７０時間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加え
る。特に、ＣＨＯ（ｄｈｆｒ^-）細胞およびｄｈｆｒ遺
伝子を選択マーカーとして用いる場合、チミジンをほと
んど含まない透析ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地を用
いるのが好ましい。以上のようにして、形質転換体に本
発明の膜タンパク質等を生成せしめることができる。

【００４６】上記培養物から本発明の膜タンパク質等を
分離精製するには、例えば、下記の方法により行なうこ
とができる。本発明の膜タンパク質等を培養菌体、昆虫
あるいは細胞から抽出するに際しては、培養後、公知の
方法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩衝液に
懸濁し、超音波、リゾチームおよび／または凍結融解な
どによって、菌体、昆虫あるいは細胞を破壊したのち、
遠心分離やろ過により膜タンパク質等の粗抽出液を得る
方法などが適宜用いられる。緩衝液の中に尿素や塩酸グ
アニジンなどのタンパク質変性剤や、トリトンＸ−１０
０^TMなどの界面活性剤が含まれていてもよい。培養液中
に膜タンパク質等が分泌される場合には、培養終了後、
それ自体公知の方法で菌体あるいは細胞と上清とを分離
し、上清を集める。このようにして得られた培養上清、
あるいは抽出液中に含まれる膜タンパク質等の精製は、
自体公知の分離・精製法を適切に組み合わせて行なうこ
とができる。これらの公知の分離、精製法としては、塩
析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方法、透析法、
限外ろ過法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ−ポリアクリル
アミドゲル電気泳動法などの主として分子量の差を利用
する方法、イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の
差を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィー
などの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロ
マトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電
点電気泳動法などの等電点の差を利用する方法などが用
いられる。かくして得られる膜タンパク質等が遊離体で
得られた場合には、自体公知の方法あるいはそれに準じ
る方法によって塩に変換することができ、逆に塩で得ら
れた場合には自体公知の方法あるいはそれに準じる方法
により、遊離体または他の塩に変換することができる。
なお、組換え体が産生する膜タンパク質等を、精製前ま
たは精製後に適当なタンパク質修飾酵素を作用させるこ
とにより、任意に修飾を加えたり、ポリペプチドを部分
的に除去することもできる。タンパク質修飾酵素として
は、例えば、トリプシン、キモトリプシン、アルギニル
エンドペプチダーゼ、プロテインキナーゼ、グリコシダ
ーゼなどが用いられる。かくして生成する本発明の膜タ
ンパク質等またはその塩の存在または活性は、標識した
リガンドとの結合実験および特異抗体を用いたエンザイ
ムイムノアッセイなどにより測定することができる。

【００４７】本発明の膜タンパク質、その部分ペプチド
またはそれらの塩（本発明の膜タンパク質等）に対する
抗体は、本発明の膜タンパク質等を認識し得る抗体であ
れば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れ
であってもよい。さらには、本発明の膜タンパク質等に
対する抗体は、本発明の膜タンパク質等と結合して、該
膜タンパク質等のレセプター活性を中和する活性（アン
タゴニスト様活性）を有するものであってもよく、ある
いは、本発明の膜タンパク質等と結合して、該膜タンパ
ク質等のレセプター活性を惹起する活性（アゴニスト様
活性）を有するものであってもよい。本発明の膜タンパ
ク質等に対する抗体は、本発明の膜タンパク質等を抗原
として用い、自体公知の抗体または抗血清の製造法に従
って製造することができる。

【００４８】〔モノクローナル抗体の作製〕 （ａ）モノクロナール抗体産生細胞の作製 本発明の膜タンパク質等は、哺乳動物に対して投与によ
り抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈
剤とともに投与される。投与に際して抗体産生能を高め
るため、完全フロイントアジュバントや不完全フロイン
トアジュバントを投与してもよい。投与は通常２〜６週
毎に１回ずつ、計２〜１０回程度行なわれる。哺乳動物
としては、例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモット、
マウス、ラット、ヒツジ、ヤギなどが用いられ、マウス
およびラットが好ましく用いられる。モノクローナル抗
体産生細胞の作製に際しては、抗原で免疫された温血動
物、例えば、マウスから抗体価の認められた個体を選択
し最終免疫の２〜５日後に脾臓またはリンパ節を採取
し、それらに含まれる抗体産生細胞を同種または異種動
物の骨髄腫細胞と融合させることにより、モノクローナ
ル抗体産生ハイブリドーマを調製することができる。抗
血清中の抗体価の測定は、例えば、後記の標識化膜タン
パク質等と抗血清とを反応させたのち、抗体に結合した
標識剤の活性を測定することにより行なうことができ
る。融合操作は既知の方法、例えば、ケーラーとミルス
タインの方法〔ネイチャー（Nature)、２５６巻、４９
５頁（１９７５年）〕に従い実施することができる。融
合促進剤としては、例えば、ポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）やセンダイウィルスなどが用いられ、好まし
くはＰＥＧが用いられる。骨髄腫細胞としては、例え
ば、ＮＳ−１、Ｐ３Ｕ１、ＳＰ２／０、ＡＰ−ａなどの
温血動物の骨髄腫細胞などが用いられるが、Ｐ３Ｕ１が
好ましく用いられる。用いられる抗体産生細胞（脾臓細
胞）数と骨髄腫細胞数との好ましい比率は１：１〜２
０：１程度であり、ＰＥＧ（好ましくは、ＰＥＧ１００
０〜ＰＥＧ６０００）が１０〜８０％程度の濃度で添加
され、約２０〜４０℃、好ましくは約３０〜３７℃で約
１〜１０分間インキュベートすることにより効率よく細
胞融合を実施できる。

【００４９】モノクローナル抗体産生ハイブリドーマの
スクリーニングには種々の方法が使用できるが、例え
ば、本発明の膜タンパク質等の抗原を直接あるいは担体
とともに吸着させた固相（例、マイクロプレート）にハ
イブリドーマ培養上清を添加し、次に放射性物質や酵素
などで標識した抗免疫グロブリン抗体（細胞融合に用い
られる細胞がマウスの場合、抗マウス免疫グロブリン抗
体が用いられる）またはプロテインＡを加え、固相に結
合したモノクローナル抗体を検出する方法、抗免疫グロ
ブリン抗体またはプロテインＡを吸着させた固相にハイ
ブリドーマ培養上清を添加し、放射性物質や酵素などで
標識した本発明の膜タンパク質等を加え、固相に結合し
たモノクローナル抗体を検出する方法などが用いられ
る。モノクローナル抗体の選別は、自体公知あるいはそ
れに準じる方法に従って行なうことができるが、通常は
ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）
を添加した動物細胞用培地などで行なうことができる。
選別および育種用培地としては、ハイブリドーマが生育
できるものならばどのような培地を用いても良い。例え
ば、１〜２０％、好ましくは１０〜２０％の牛胎児血清
を含むＲＰＭＩ １６４０培地、１〜１０％の牛胎児血
清を含むＧＩＴ培地（和光純薬工業（株））またはハイ
ブリドーマ培養用無血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製
薬（株））などを用いることができる。培養温度は、通
常２０〜４０℃、好ましくは約３７℃である。培養時間
は、通常５日〜３週間、好ましくは１〜２週間である。
培養は、通常５％炭酸ガス下で行なうことができる。ハ
イブリドーマ培養上清の抗体価は、上記の抗血清中の抗
体価の測定と同様にして測定できる。

【００５０】（ｂ）モノクロナール抗体の精製 モノクローナル抗体の分離精製は、通常のポリクローナ
ル抗体の分離精製と同様に免疫グロブリンの分離精製法
〔例、塩析法、アルコール沈殿法、等電点沈殿法、電気
泳動法、イオン交換体（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着
法、超遠心法、ゲルろ過法、抗原結合固相またはプロテ
インＡあるいはプロテインＧなどの活性吸着剤により抗
体のみを採取し、結合を解離させて抗体を得る特異的精
製法〕に従って行なうことができる。

【００５１】〔ポリクローナル抗体の作製〕本発明のポ
リクローナル抗体は、それ自体公知あるいはそれに準じ
る方法にしたがって製造することができる。例えば、免
疫抗原（本発明の膜タンパク質等）自体、あるいはそれ
とキャリアー蛋白質との複合体をつくり、上記のモノク
ローナル抗体の製造法と同様に哺乳動物に免疫を行な
い、該免疫動物から本発明の膜タンパク質等に対する抗
体含有物を採取して、抗体の分離精製を行なうことによ
り製造できる。哺乳動物を免疫するために用いられる免
疫抗原とキャリアー蛋白質との複合体に関し、キャリア
ー蛋白質の種類およびキャリアーとハプテンとの混合比
は、キャリアーに架橋させて免疫したハプテンに対して
抗体が効率良くできれば、どの様なものをどの様な比率
で架橋させてもよいが、例えば、ウシ血清アルブミン、
ウシサイログロブリン、キーホール・リンペット・ヘモ
シアニン等を重量比でハプテン１に対し、約０.１〜２
０、好ましくは約１〜５の割合でカップルさせる方法が
用いられる。また、ハプテンとキャリアーのカプリング
には、種々の縮合剤を用いることができるが、グルタル
アルデヒドやカルボジイミド、マレイミド活性エステ
ル、チオール基、ジチオビリジル基を含有する活性エス
テル試薬等が用いられる。縮合生成物は、哺乳動物に対
して、抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、
希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産生能を
高めるため、完全フロイントアジュバントや不完全フロ
イントアジュバントを投与してもよい。投与は、通常約
２〜６週毎に１回ずつ、計約３〜１０回程度行なうこと
ができる。ポリクローナル抗体は、上記の方法で免疫さ
れた哺乳動物の血液、腹水など、好ましくは血液から採
取することができる。抗血清中のポリクローナル抗体価
の測定は、上記の血清中の抗体価の測定と同様にして測
定できる。ポリクローナル抗体の分離精製は、上記のモ
ノクローナル抗体の分離精製と同様の免疫グロブリンの
分離精製法に従って行なうことができる。

【００５２】本発明の膜タンパク質または部分ペプチド
をコードするＤＮＡ（以下、本発明のＤＮＡと略記する
場合がある）に相補的な、または実質的に相補的な塩基
配列を有するアンチセンスＤＮＡとしては、本発明のＤ
ＮＡに相補的、または実質的に相補的な塩基配列を有
し、該ＤＮＡの発現を抑制し得る作用を有するものであ
れば、いずれのアンチセンスＤＮＡであってもよい。本
発明のＤＮＡに実質的に相補的な塩基配列としては、例
えば、本発明のＤＮＡに相補的な塩基配列（すなわち、
本発明のＤＮＡの相補鎖）の全塩基配列あるいは部分塩
基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より
好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上
の相同性を有する塩基配列などが挙げられる。特に、本
発明のＤＮＡの相補鎖の全塩基配列うち、本発明の膜タ
ンパク質またはその部分ペプチドのＮ末端部位をコード
する部分の塩基配列（例えば、開始コドン付近の塩基配
列など）の相補鎖と約７０％以上、好ましくは約８０％
以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約
９５％以上の相同性を有するアンチセンスＤＮＡが好適
である。これらのアンチセンスＤＮＡは、公知のＤＮＡ
合成装置などを用いて製造することができる。

【００５３】本発明の膜タンパク質は、その構造上の特
徴からはＣ−タイプレクチンファミリーに属する。本発
明の膜タンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩
は、例えば、レセプター活性、シグナル情報伝達作用、
Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ細胞の活性化、細胞接着分子
様活性などの活性を有している。本発明の膜タンパク質
等またはそれをコードするＤＮＡは、本発明の膜タン
パク質に対するリガンドの決定、抗体および抗血清の
調製、組換え型膜タンパク質の発現系の構築、同発
現系を用いたレセプター結合アッセイ系の開発と医薬品
候補化合物のスクリーニング、構造的に類似したリガ
ンド・レセプターとの比較にもとづいたドラッグデザイ
ンの実施、遺伝子診断におけるプローブやＰＣＲプラ
イマーの作成、トランスジェニック動物の作製および
遺伝子予防・治療剤などに用いることができる。特
に、本発明の組換え型膜タンパク質の発現系を用いたレ
セプター結合アッセイ系を用いることによって、ヒトや
哺乳動物に特異的なレセプターに対するリガンドの結合
性を変化させる化合物（例、アゴニスト、アンタゴニス
トなど）をスクリーニングすることができ、該アゴニス
トまたはアンタゴニストを各種疾病の予防・治療剤など
として使用することができる。さらには、本発明の組換
え型膜タンパク質の発現系を用いることによって、本発
明の膜タンパク質のＴ細胞活性化作用を促進または阻害
する化合物をスクリーニングすることができる。本発明
の膜タンパク質等、本発明のＤＮＡおよび本発明の膜タ
ンパク質等に対する抗体（以下、本発明の抗体と略記す
る場合がある）の用途について、以下に具体的に説明す
る。

【００５４】（１）本発明の膜タンパク質に対するリガ
ンドの決定方法 本発明の膜タンパク質等は、本発明の膜タンパク質に対
するリガンド（アゴニスト）を決定または探索するため
の試薬として有用である。すなわち、本発明は、本発明
の膜タンパク質等と試験化合物とを接触させることを特
徴とする本発明の膜タンパク質に対するリガンドの決定
方法を提供する。具体的には、本発明のリガンド決定方
法は、本発明の膜タンパク質等を用いるか、または組換
え型膜タンパク質等の発現系を構築し、該発現系を用い
たレセプター結合アッセイ系を用いることによって、本
発明の膜タンパク質に結合して、細胞刺激活性（例え
ば、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ細胞の活性化、細胞増殖
刺激活性、抗原貧食能、遊走能、アラキドン酸遊離、ア
セチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ
生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、
細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓ
活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する
活性）を有する化合物（例えば、ペプチド、蛋白質、非
ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物など）また
はその塩を決定する方法である。本発明のリガンド決定
方法においては、本発明の膜タンパク質等と試験化合物
とを接触させた場合の、例えば、該膜タンパク質等に対
する試験化合物の結合量や、該膜タンパク質等を含有す
る細胞に対する細胞刺激活性などを測定することを特徴
とする。

【００５５】より具体的には、本発明は、 標識した試験化合物を、本発明の膜タンパク質等に接
触させた場合における、標識した試験化合物の該膜タン
パク質等に対する結合量を測定することを特徴とする本
発明の膜タンパク質またはその塩に対するリガンドの決
定方法、 標識した試験化合物を、本発明の膜タンパク質等を含
有する細胞またはその膜画分に接触させた場合におけ
る、標識した試験化合物の該細胞またはその膜画分に対
する結合量を測定することを特徴とする本発明の膜タン
パク質またはその塩に対するリガンドの決定方法、 標識した試験化合物を、本発明の膜タンパク質をコー
ドするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによ
って細胞膜上に発現した膜タンパク質に接触させた場合
における、標識した試験化合物の該膜タンパク質または
その塩に対する結合量を測定することを特徴とする本発
明の膜タンパク質に対するリガンドの決定方法、 試験化合物を、本発明の膜タンパク質を含有する細胞
に接触させた場合における、膜タンパク質を介した細胞
刺激活性（例えば、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ細胞の活
性化、細胞増殖刺激活性、抗原貧食能、遊走能、アラキ
ドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、
細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトー
ルリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸
化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活
性または抑制する活性など）を測定することを特徴とす
る本発明の膜タンパク質またはその塩に対するリガンド
の決定方法、および 試験化合物を、本発明の膜タンパク質をコードするＤ
ＮＡを含有する形質転換体を培養することによって細胞
膜上に発現した膜タンパク質に接触させた場合におけ
る、膜タンパク質を介する細胞刺激活性（例えば、Ｔ細
胞への抗原提示能、Ｔ細胞の活性化、細胞増殖刺激活
性、抗原貧食能、遊走能、アラキドン酸遊離、アセチル
コリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、
細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜
電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性
化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性
など）を測定することを特徴とする本発明の膜タンパク
質またはその塩に対するリガンドの決定方法を提供す
る。 特に、上記〜の試験を行ない、試験化合物が本発明
の膜タンパク質に結合することを確認した後に、上記
〜の試験を行なうことが好ましい。

【００５６】まず、リガンド決定方法に用いる膜タンパ
ク質標品としては、前記した本発明の膜タンパク質等ま
たは本発明の膜タンパク質等を含有する細胞（例、樹状
細胞など）であれば何れのものであってもよいが、動物
細胞を用いて大量発現させた膜タンパク質が適してい
る。本発明の膜タンパク質等を製造するには、前述の発
現方法が用いられるが、該膜タンパク質をコードするＤ
ＮＡを哺乳動物細胞や昆虫細胞で発現することにより行
なうことが好ましい。目的とする膜タンパク質部分をコ
ードするＤＮＡ断片には、通常、ｃＤＮＡが用いられる
が、必ずしもこれに制約されるものではない。例えば、
遺伝子断片や合成ＤＮＡを用いてもよい。本発明の膜タ
ンパク質等をコードするＤＮＡ断片を宿主動物細胞に導
入し、それらを効率よく発現させるためには、該ＤＮＡ
断片を昆虫を宿主とするバキュロウイルスに属する核多
角体病ウイルス（nuclear polyhedrosis virus；ＮＰ
Ｖ）のポリヘドリンプロモーター、ＳＶ４０由来のプロ
モーター、レトロウイルスのプロモーター、メタロチオ
ネインプロモーター、ヒトヒートショックプロモータ
ー、サイトメガロウイルスプロモーター、ＳＲαプロモ
ーターなどの下流に組み込むのが好ましい。発現したレ
セプターの量と質の検査はそれ自体公知の方法で行うこ
とができる。例えば、文献〔Nambi，P．ら、ザ・ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol.
Chem.）,267巻,19555〜19559頁,1992年〕に記載の方法
に従って行なうことができる。

【００５７】したがって、本発明のリガンド決定方法に
用いる本発明の膜タンパク質等としては、それ自体公知
の方法に従って精製した膜タンパク質等であってもよい
し、該膜タンパク質等を含有する細胞またはその膜画分
を用いてもよい。本発明のリガンド決定方法において、
本発明の膜タンパク質等を含有する細胞を用いる場合、
該細胞をグルタルアルデヒド、ホルマリンなどで固定化
してもよい。固定化方法はそれ自体公知の方法に従って
行なうことができる。本発明の膜タンパク質等を含有す
る細胞としては、本発明の膜タンパク質等を発現した宿
主細胞をいうが、該宿主細胞としては、大腸菌、枯草
菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが用いられる。細胞
膜画分としては、細胞を破砕した後、それ自体公知の方
法で得られる細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。
細胞の破砕方法としては、Potter−Elvehjem型ホモジナ
イザーで細胞を押し潰す方法、ワーリングブレンダーや
ポリトロン（Kinematica社製）による破砕、超音波によ
る破砕、フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細い
ノズルから噴出させることによる破砕などが挙げられ
る。細胞膜の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心
分離法などの遠心力による分画法が主として用いられ
る。例えば、細胞破砕液を低速（５００ｒｐｍ〜３００
０ｒｐｍ）で短時間（通常、約１分〜１０分）遠心し、
上清をさらに高速（１５０００ｒｐｍ〜３００００ｒｐ
ｍ）で通常３０分〜２時間遠心し、得られる沈澱を膜画
分とする。該膜画分中には、発現した膜タンパク質等と
細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含ま
れる。該膜タンパク質等を含有する細胞やその膜画分中
の膜タンパク質等の量は、１細胞当たり１０³〜１０⁸分
子であるのが好ましく、１０⁵〜１０⁷分子であるのが好
適である。なお、発現量が多いほど膜画分当たりのリガ
ンド結合能（比活性）が高くなり、高感度なスクリーニ
ング系の構築が可能になるばかりでなく、同一ロットで
大量の試料を測定できるようになる。

【００５８】本発明の膜タンパク質に対するリガンドを
決定する前記の〜の方法を実施するためには、適当
な膜タンパク質画分と、標識した試験化合物が必要であ
る。膜タンパク質画分としては、天然型の膜タンパク質
画分か、またはそれと同等の活性を有する組換え型レセ
プター画分などが望ましい。ここで、同等の活性とは、
同等（例、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．５
〜２０倍、より好ましくは約０．５〜２倍）のリガンド
結合能、シグナル伝達作用などを示す。試験化合物とし
ては、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、マウス、
ラット、ブタ、ウシ、ヒツジ、サルなど）の組織抽出
物、細胞培養上清、血漿などが用いられる。例えば、該
組織抽出物、細胞培養上清、血漿などを本発明の膜タン
パク質等またはそれを含有する細胞に添加し、リガンド
結合能、細胞刺激活性などを測定しながら分画し、最終
的に単一のリガンドを得ることができる。試験化合物の
標識には、〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕な
どの放射性物質が用いられる。

【００５９】具体的には、本発明の膜タンパク質または
その塩に対するリガンドの決定方法〜を行なうに
は、例えば、本発明の膜タンパク質等を含有する細胞ま
たはその膜画分を、決定方法に適したバッファーに懸濁
することによりレセプター標品を調製する。バッファー
には、ｐＨ約４〜１０（望ましくはｐＨ約６〜８）のリ
ン酸バッファー、トリス−塩酸バッファーなどのリガン
ドと本発明の膜タンパク質等との結合を阻害しないバッ
ファーであればいずれでもよい。また、非特異的結合を
低減させる目的で、ＣＨＡＰＳ、Ｔｗｅｅｎ−８０
^TM（花王−アトラス社）、ジギトニン、デオキシコレー
トなどの界面活性剤やウシ血清アルブミンやゼラチンな
どの各種蛋白質をバッファーに加えることもできる。さ
らに、プロテアーゼによる本発明の膜タンパク質やリガ
ンドの分解を抑える目的で、ＰＭＳＦ、ロイペプチン、
Ｅ−６４（ペプチド研究所製）、ペプスタチンなどのプ
ロテアーゼ阻害剤を添加することもできる。そして、
０.０１ｍｌ〜１０ｍlの該レセプター溶液に、一定量
（５０００ｃｐｍ〜５０００００ｃｐｍ）の〔³Ｈ〕、
〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などで標識した試験化
合物を共存させる。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知るた
めに大過剰の未標識の試験化合物を加えた反応チューブ
も用意する。反応は、約０〜５０℃、望ましくは約４〜
３７℃で、約２０分〜２４時間、望ましくは約３０分〜
３時間行なう。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適
量の同バッファーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存
する放射活性を液体シンチレーションカウンターあるい
はγ−カウンターで計測する。全結合量（Ｂ）から非特
異的結合量（ＮＳＢ）を引いたカウント（Ｂ−ＮＳＢ）
が０ｃｐｍを越える試験化合物を本発明の膜タンパク質
またはその塩に対するリガンド（アゴニスト）として選
択することができる。

【００６０】本発明の膜タンパク質またはその塩に対す
るリガンドを決定する前記の〜の方法を実施するた
めには、該膜タンパク質を介する細胞刺激活性（例え
ば、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ細胞の活性化、細胞増殖
刺激活性、抗原貧食能、遊走能、アラキドン酸遊離、ア
セチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ
生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、
細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓ
の活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑制す
る活性など）を公知の方法または市販の測定用キットを
用いて測定することができる。具体的には、まず、本発
明の膜タンパク質等を含有する細胞をマルチウェルプレ
ート等に培養する。リガンド決定を行なうにあたっては
前もって新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示さない適当
なバッファーに交換し、試験化合物などを添加して一定
時間インキュベートした後、細胞を抽出あるいは上清液
を回収して、生成した産物をそれぞれの方法に従って定
量する。細胞刺激活性の指標とする物質（例えば、アラ
キドン酸など）の生成が、細胞が含有する分解酵素によ
って検定困難な場合は、該分解酵素に対する阻害剤を添
加してアッセイを行なってもよい。また、Ｔ細胞活性化
作用は、例えば、本発明の膜タンパク質発現細胞とＴ細
胞（株化細胞であってもよい）を混合培養し、両者の結
合やサイトカイン（例、ＩＬ−２など）産生誘導活性な
どを自体公知の方法に従って測定することによって、測
定することができる。ＩＬ−２産生誘導活性は、ＩＬ−
２産生量を指標にして測定することができる。ＩＬ−２
産生量の測定としては、例えば、抗ＩＬ−２抗体を用い
るＥＩＡ法、ＩＬ−２依存性細胞の増殖を調べるバイオ
アッセイ法などが知られている。種々の試験化合物が混
在する場合には、それが細胞に作用する場合があるの
で、ＥＩＡ法での定量が好ましい。ＥＩＡ法によるＩＬ
−２の定量には「免疫実験操作II、819頁、南江堂」に
記載されている公知の方法を用いることもできるし、市
販のＥＩＡ法を用いたＩＬ−２測定キットを利用するこ
ともできる。

【００６１】本発明の膜タンパク質に対するリガンドを
決定するためのキットとしては、本発明の膜タンパク質
等、本発明の膜タンパク質等を含有する細胞またはその
膜画分などを含有するものが用いられる。本発明のリガ
ンド決定用キットの例としては、次のものが挙げられ
る。 １．リガンド決定用試薬 (ｉ)測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 Hanks' Balanced Salt Solution（ギブコ社製）に、０.
０５％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたも
の。孔径０.４５μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃
で保存するか、あるいは用時調製しても良い。 (ii)膜タンパク質標品 本発明の膜タンパク質を発現させたＣＨＯ細胞を、１２
穴プレートに５×１０⁵個／穴で継代し、３７℃、５％
ＣＯ₂で２日間培養したもの。 (iii)標識試験化合物 市販の〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などで
標識した化合物、または適当な方法で標識化したもの 水溶液の状態のものを４℃あるいは−２０℃にて保存
し、用時に測定用緩衝液にて１μＭに希釈する。水に難
溶性を示す試験化合物については、ジメチルホルムアミ
ド、ＤＭＳＯ、メタノール等に溶解する。 (iv)非標識試験化合物 標識化合物と同じものを１００〜１０００倍濃い濃度に
調製する。

【００６２】２．測定法 (ｉ)１２穴組織培養用プレートにて培養した本発明の膜
タンパク質発現ＣＨＯ細胞を、測定用緩衝液１ｍｌで２
回洗浄した後、４９０μｌの測定用緩衝液を各穴に加え
る。 (ii)標識試験化合物を５μｌ加え、室温にて１時間反応
させる。非特異的結合量を知るためには、さらに非標識
試験化合物を５μｌ加えておく。 (iii)反応液を除去し、１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗
浄する。細胞に結合した標識試験化合物を０.２Ｎ Ｎ
ａＯＨ−１％ＳＤＳで溶解し、４ｍｌの液体シンチレー
ターＡ（和光純薬製）と混合する。 (iv)液体シンチレーションカウンター（ベックマン社
製）を用いて放射活性を測定する。 (ｖ)非標識試験化合物を添加した時の放射活性が減少し
た場合、該試験化合物をリガンド候補化合物として選択
することができる。 (vi)さらに、本発明の膜タンパク質に対する該試験化合
物の親和性等の特異性を調べるなどして、リガンド候補
化合物であるかどうかを確認する。 (vii)このリガンド候補化合物を用いて、前記した〜
のスクリーニング方法を実施し、細胞刺激活性を有す
るものをリガンド（アゴニスト）として選択することが
できる。 該決定方法で得られたリガンドは塩を形成していてもよ
く、該リガンドの塩としては、とりわけ生理学的に許容
される酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例え
ば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫
酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プ
ロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石
酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスル
ホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられ
る。

【００６３】（２）本発明の膜タンパク質の欠乏症の治
療・予防剤 本発明の膜タンパク質またはその部分ペプチドをコード
するＤＮＡ（本発明のＤＮＡ）は、本発明の膜タンパク
質の欠乏症の治療・予防剤などの医薬として使用するこ
とができる。例えば、生体内において本発明の膜タンパ
ク質が減少しているためにリガンドの生理作用が期待で
きない患者がいる場合に、（イ）本発明のＤＮＡを該患
者に投与し発現させることによって、あるいは（ロ）対
象となる細胞に本発明のＤＮＡを挿入し発現させた後
に、該細胞を該患者に移植することなどによって、患者
の体内における膜タンパク質の量を増加させ、リガンド
の作用を充分に発揮させることができる。したがって、
本発明のＤＮＡは、安全で低毒性であり、本発明の膜タ
ンパク質欠乏症、例えば、癌（例、乳癌、前立腺癌、卵
巣癌、ろ胞性リンパ球腫、ｐ５３変異を伴う癌、脳腫
瘍、膀胱癌、子宮頸部癌、大腸癌（結腸／直腸癌）、非
小細胞肺癌、小細胞肺癌、胃癌など）、エイズ、感染症
（例、ヘルペスウイルス感染症、アデノウイルス感染
症、ボックスウイルス感染症、ヘリコバクター・ピロリ
感染症、水痘-帯状疱疹ウイルス感染症、ヒトパピロー
マウイルス感染症、侵襲性ブドウ状球菌感染症、インフ
ルエンザ感染症、重症全身性真菌感染症など）、急性バ
クテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候
群、バクテリア肺炎、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性
白血病、インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型）、悪性黒色
腫、多発性骨髄腫、非ホジキン性リンパ腫、消化性潰
瘍、敗血症、敗血症ショック、結核などの治療・予防剤
などの医薬として有用である。

【００６４】本発明のＤＮＡを上記した疾患の治療・予
防剤として使用する場合は、本発明のＤＮＡを単独ある
いはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクタ
ー、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクター
などの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従って
ヒトまたは温血動物に投与することができる。本発明の
ＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のための補助
剤などの生理学的に認められる担体とともに、遺伝子銃
やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって
投与できる。本発明のＤＮＡを含有するベクターは、例
えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エ
リキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、
あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液と
の無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経
口的に使用できる。例えば、本発明のＤＮＡを含有する
ベクターを生理学的に認められる担体、香味剤、賦形
剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一
般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混
和することによって製造することができる。これら製剤
における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得
られるようにするものである。

【００６５】錠剤、カプセル剤などに混和することがで
きる添加剤としては、例えばゼラチン、コーンスター
チ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性
セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチ
ン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグ
ネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリ
ンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチ
ェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態
がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。注射の
ための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性
物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油など
を溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って
処方することができる。注射用の水性液としては、例え
ば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張
液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩
化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助
剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアル
コール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート
８０^TM、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液
としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶
解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール
などと併用してもよい。また、上記の治療・予防剤に
は、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナ
トリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコ
ニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト
血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存
剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、
酸化防止剤などを配合してもよい。調製された注射液な
どの医薬組成物は、通常、適当なアンプルに充填され
る。

【００６６】このようにして得られる製剤は安全で低毒
性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラッ
ト、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルな
ど）に対して投与することができる。本発明のＤＮＡの
投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより
差異はあるが、例えば、癌治療の目的で本発明のＤＮＡ
を経口投与する場合、一般的に成人（６０ｋｇとして）
においては、一日につき該ＤＮＡを約０.１ｍｇ〜１０
０ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましく
は約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場
合は、該ＤＮＡの１回投与量は投与対象、対象疾患など
によっても異なるが、例えば、癌治療の目的で本発明の
ＤＮＡを注射剤の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投
与する場合は、一日につき該ＤＮＡを約０．０１〜３０
ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好
ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与
するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当
たりに換算した量を投与することができる。

【００６７】（３）遺伝子診断剤 本発明のＤＮＡは、プローブとして使用することによ
り、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、ウサギ、ヒ
ツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）における本
発明の膜タンパク質等をコードするＤＮＡまたはｍＲＮ
Ａの異常（遺伝子異常）を検出することができるので、
例えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異ある
いは発現低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるい
は発現過多などを検出するための遺伝子診断剤として有
用である。本発明のＤＮＡを用いる上記の遺伝子診断
は、例えば、自体公知のノーザンハイブリダイゼーショ
ンやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（ゲノミックス（Genomics），
第５巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、プロシージ
ングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サ
イエンシイズ・オブ・ユーエスエー（Proceedings ofth
e Natinal Academy of Sciences of the United States
of America），第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１
９８９年））などにより実施することができる。例え
ば、ノーザンハイブリダイゼーションにより本発明の膜
タンパク質等をコードするｍＲＮＡの発現低下が検出さ
れた場合は、例えば、癌（例、乳癌、前立腺癌、卵巣
癌、ろ胞性リンパ球腫、ｐ５３変異を伴う癌、脳腫瘍、
膀胱癌、子宮頸部癌、大腸癌（結腸／直腸癌）、非小細
胞肺癌、小細胞肺癌、胃癌など）、エイズ、感染症
（例、ヘルペスウイルス感染症、アデノウイルス感染
症、ボックスウイルス感染症、ヘリコバクター・ピロリ
感染症、水痘-帯状疱疹ウイルス感染症、ヒトパピロー
マウイルス感染症、侵襲性ブドウ状球菌感染症、インフ
ルエンザ感染症、重症全身性真菌感染症など）、急性バ
クテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人呼吸促迫症候
群、バクテリア肺炎、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性
白血病、インシュリン依存性糖尿病（Ｉ型）、悪性黒色
腫、多発性骨髄腫、非ホジキン性リンパ腫、消化性潰
瘍、敗血症、敗血症ショック、結核などの疾患である、
または将来罹患する可能性が高いと診断することができ
る。

【００６８】一方、ハイブリダイゼーションにより該ｍ
ＲＮＡの発現過多が検出された場合は、例えば、アレル
ギー性免疫疾患（例、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚
炎、アレルギー性鼻炎、花粉症など）、炎症（例、関節
炎、肝炎など）、自己免疫疾患（例、リウマチ関節炎、
全身性エリテマトーデス、シェーグレン病など）、エイ
ズ、糸球体腎炎、気管支喘息、動脈硬化症などの疾患で
ある、または将来罹患する可能性が高いと診断すること
ができる。また、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ法によりＤＮＡの突
然変異が検出された場合は、例えば、癌（例、乳癌、前
立腺癌、卵巣癌、ろ胞性リンパ球腫、ｐ５３変異を伴う
癌、脳腫瘍、膀胱癌、子宮頸部癌、大腸癌（結腸／直腸
癌）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、胃癌など）、エイ
ズ、感染症（例、ヘルペスウイルス感染症、アデノウイ
ルス感染症、ボックスウイルス感染症、ヘリコバクター
・ピロリ感染症、水痘-帯状疱疹ウイルス感染症、ヒト
パピローマウイルス感染症、侵襲性ブドウ状球菌感染
症、インフルエンザ感染症、重症全身性真菌感染症な
ど）、急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人
呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、慢性リンパ性白血
病、慢性骨髄性白血病、インシュリン依存性糖尿病（Ｉ
型）、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、非ホジキン性リンパ
腫、消化性潰瘍、敗血症、敗血症ショック、結核、アレ
ルギー性免疫疾患（例、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚
炎、アレルギー性鼻炎、花粉症など）、炎症（例、関節
炎、肝炎など）、自己免疫疾患（例、リウマチ関節炎、
全身性エリテマトーデス、シェーグレン病など）、エイ
ズ、糸球体腎炎、気管支喘息、動脈硬化症などの疾患で
ある、または将来罹患する可能性が高いと診断すること
ができる。

【００６９】（４）本発明の膜タンパク質に対するリガ
ンドの定量法 本発明の膜タンパク質等は、リガンドに対して結合性を
有しているので、生体内におけるリガンド濃度を感度良
く定量することができる。本発明の定量法は、例えば、
競合法と組み合わせることによって用いることができ
る。すなわち、被検体を本発明の膜タンパク質等と接触
させることによって被検体中のリガンド濃度を測定する
ことができる。具体的には、例えば、以下のまたは
などに記載の方法あるいはそれに準じる方法に従って用
いることができる。 入江寛編「ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和４
９年発行） 入江寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和
５４年発行）

【００７０】（５）本発明の膜タンパク質とリガンドと
の結合性を変化させる化合物のスクリーニング方法 本発明の膜タンパク質等を用いるか、または組換え型膜
タンパク質等の発現系を構築し、該発現系を用いたレセ
プター結合アッセイ系を用いることによって、リガンド
と本発明の膜タンパク質との結合性を変化させる化合物
（例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性化合物、合
成化合物、発酵生産物など）またはその塩を効率よくス
クリーニングすることができる。このような化合物に
は、（イ）本発明の膜タンパク質を介して細胞刺激活性
（例えば、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ細胞の活性化、細
胞増殖刺激活性、抗原貧食能、遊走能、アラキドン酸遊
離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃ
ＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸
産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−
ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または
抑制する活性など）を有する化合物（いわゆる、本発明
の膜タンパク質に対するアゴニスト）、（ロ）該細胞刺
激活性を有しない化合物（いわゆる、本発明の膜タンパ
ク質に対するアンタゴニスト）、（ハ）リガンドと本発
明の膜タンパク質との結合力を増強する化合物、あるい
は（ニ）リガンドと本発明の膜タンパク質との結合力を
減少させる化合物などが含まれる（なお、上記（イ）の
化合物は、前記したリガンド決定方法によってスクリー
ニングすることが好ましい）。すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明の膜タンパク質等とリガンドとを接触させ
た場合と（ii）本発明の膜タンパク質等とリガンドおよ
び試験化合物とを接触させた場合との比較を行なうこと
を特徴とするリガンドと本発明の膜タンパク質との結合
性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング方
法を提供する。本発明のスクリーニング方法において
は、（ｉ）と（ii）の場合における、例えば、本発明の
膜タンパク質等に対するリガンドの結合量、本発明の膜
タンパク質等を含有する細胞に対する細胞刺激活性など
を測定して、比較することを特徴とする。

【００７１】より具体的には、本発明は、 （ｉ）標識したリガンドを、本発明の膜タンパク質等
に接触させた場合と、（ii）標識したリガンドおよび試
験化合物を本発明の膜タンパク質等に接触させた場合に
おける、標識したリガンドの該膜タンパク質等に対する
結合量を測定し、比較することを特徴とするリガンドと
本発明の膜タンパク質との結合性を変化させる化合物ま
たはその塩のスクリーニング方法、 （ｉ）標識したリガンドを、本発明の膜タンパク質等
を含有する細胞またはその膜画分に接触させた場合と、
（ii）標識したリガンドおよび試験化合物を本発明の膜
タンパク質等を含有する細胞またはその膜画分に接触さ
せた場合における、標識したリガンドの該細胞またはそ
の膜画分に対する結合量を測定し、比較することを特徴
とするリガンドと本発明の膜タンパク質との結合性を変
化させる化合物またはその塩のスクリーニング方法、 （ｉ）標識したリガンドを、本発明のＤＮＡを含有す
る形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現し
た膜タンパク質等に接触させた場合と、（ii）標識した
リガンドおよび試験化合物を本発明のＤＮＡを含有する
形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現した
本発明の膜タンパク質等に接触させた場合における、標
識したリガンドの該膜タンパク質等に対する結合量を測
定し、比較することを特徴とするリガンドと本発明の膜
タンパク質との結合性を変化させる化合物またはその塩
のスクリーニング方法、

【００７２】（ｉ）本発明の膜タンパク質等を活性化
する物質（例えば、本発明の膜タンパク質等に対するリ
ガンドなど）を本発明の膜タンパク質等を含有する細胞
に接触させた場合と、（ii）本発明の膜タンパク質等を
活性化する物質および試験化合物を本発明の膜タンパク
質等を含有する細胞に接触させた場合における、本発明
の膜タンパク質を介した細胞刺激活性（例えば、Ｔ細胞
への抗原提示能、Ｔ細胞の活性化、細胞増殖刺激活性、
抗原貧食能、遊走能、アラキドン酸遊離、アセチルコリ
ン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞
内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位
変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、
ｐＨの低下などを促進する活性または抑制する活性な
ど）を測定し、比較することを特徴とするリガンドと本
発明の膜タンパク質との結合性を変化させる化合物また
はその塩のスクリーニング方法、および （ｉ）本発明の膜タンパク質等を活性化する物質（例
えば、本発明の膜タンパク質等に対するリガンドなど）
を本発明のＤＮＡを含有する形質転換体を培養すること
によって細胞膜上に発現した本発明の膜タンパク質等に
接触させた場合と、（ii）本発明の膜タンパク質等を活
性化する物質および試験化合物を本発明のＤＮＡを含有
する形質転換体を培養することによって細胞膜上に発現
した本発明の膜タンパク質等に接触させた場合におけ
る、本発明の膜タンパク質を介する細胞刺激活性（例え
ば、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ細胞の活性化、細胞増殖
刺激活性、抗原貧食能、遊走能、アセチルコリン遊離、
細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭ
Ｐ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細
胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低
下などを促進する活性または抑制する活性など）を測定
し、比較することを特徴とするリガンドと本発明の膜タ
ンパク質との結合性を変化させる化合物またはその塩の
スクリーニング方法を提供する。

【００７３】特に、本発明のヒト由来膜タンパク質等が
得られる以前は、アゴニストまたはアンタゴニストをス
クリーニングする場合、まずラットなどの膜タンパク質
を含む細胞、組織またはその細胞膜画分を用いて候補化
合物を得て（一次スクリーニング）、その後に該候補化
合物が実際にヒトの膜タンパク質とリガンドとの結合を
阻害するか否かを確認する試験（二次スクリーニング）
が必要であった。細胞、組織または細胞膜画分をそのま
ま用いれば他の膜タンパク質も混在するために、目的と
する膜タンパク質に対するアゴニストまたはアンタゴニ
ストを実際にスクリーニングすることは困難であった。
しかしながら、例えば、本発明のヒト由来膜タンパク質
を用いることによって、一次スクリーニングの必要がな
くなり、リガンドと膜タンパク質との結合を阻害する化
合物を効率良くスクリーニングすることができる。さら
に、スクリーニングされた化合物がアゴニストかアンタ
ゴニストかを簡便に評価することができる。

【００７４】本発明のスクリーニング方法に用いる本発
明の膜タンパク質標品としては、前記した本発明の膜タ
ンパク質等またはそれを含有する細胞であれば何れのも
のであってもよいが、本発明の膜タンパク質等を含有す
る哺乳動物の臓器の細胞膜画分が好適である。しかし、
ヒト由来の臓器は入手が極めて困難なことから、スクリ
ーニングに用いられるものとしては、組換え体を用いて
大量発現させたヒト由来の膜タンパク質等などが適して
いる。本発明の膜タンパク質等を製造するには、前述の
方法が用いられるが、本発明のＤＮＡを哺乳細胞や昆虫
細胞で発現することにより行なうことが好ましい。目的
とする蛋白質部分をコードするＤＮＡ断片にはｃＤＮＡ
が用いられるが、必ずしもこれに制約されるものではな
い。例えば、遺伝子断片や合成ＤＮＡを用いてもよい。
本発明の膜タンパク質等をコードするＤＮＡ断片を宿主
動物細胞に導入し、それらを効率よく発現させるために
は、該ＤＮＡ断片を昆虫を宿主とするバキュロウイルス
に属する核多角体病ウイルス（nuclear polyhedrosis v
irus；ＮＰＶ）のポリヘドリンプロモーター、ＳＶ４０
由来のプロモーター、レトロウイルスのプロモーター、
メタロチオネインプロモーター、ヒトヒートショックプ
ロモーター、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プロモー
ター、ＳＲαプロモーターなどの下流に組み込むのが好
ましい。発現した膜タンパク質の量と質の検査はそれ自
体公知の方法で行うことができる。例えば、文献〔Namb
i，P．ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー（J. Biol. Chem.）,267巻,19555〜19559頁,
1992年〕に記載の方法に従って行なうことができる。し
たがって、本発明のスクリーニング方法に用いる本発明
の膜タンパク質標品としては、それ自体公知の方法に従
って精製した膜タンパク質等であってもよいし、該膜タ
ンパク質等を含有する細胞を用いてもよく、また該膜タ
ンパク質等を含有する細胞の膜画分を用いてもよい。

【００７５】本発明のスクリーニング方法において、本
発明の膜タンパク質等を含有する細胞を用いる場合、該
細胞をグルタルアルデヒド、ホルマリンなどで固定化し
てもよい。固定化方法はそれ自体公知の方法に従って行
なうことができる。本発明の膜タンパク質等を含有する
細胞としては、該膜タンパク質等を発現した宿主細胞を
いうが、該宿主細胞としては、大腸菌、枯草菌、酵母、
昆虫細胞、動物細胞などが好ましい。細胞膜画分として
は、細胞を破砕した後、それ自体公知の方法で得られる
細胞膜が多く含まれる画分のことをいう。細胞の破砕方
法としては、Potter−Elvehjem型ホモジナイザーで細胞
を押し潰す方法、ワーリングブレンダーやポリトロン
（キネマティカ社製）のよる破砕、超音波による破砕、
フレンチプレスなどで加圧しながら細胞を細いノズルか
ら噴出させることによる破砕などが挙げられる。細胞膜
の分画には、分画遠心分離法や密度勾配遠心分離法など
の遠心力による分画法が主として用いられる。例えば、
細胞破砕液を低速（約５００ｒｐｍ〜約３０００ｒｐ
ｍ）で短時間（通常、約１分〜約１０分）遠心し、上清
をさらに高速（約１５０００ｒｐｍ〜約３００００ｒｐ
ｍ）で通常約３０分〜約２時間遠心し、得られる沈澱を
膜画分とする。該膜画分中には、発現した膜タンパク質
等と細胞由来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く
含まれる。該膜タンパク質等を含有する細胞やその膜画
分中の膜タンパク質の量は、１細胞当たり約１０³〜約
１０⁸分子であるのが好ましく、特に、約１０⁵〜約１０
⁷分子であるのが好適である。なお、発現量が多いほど
膜画分当たりのリガンド結合能（比活性）が高くなり、
高感度なスクリーニング系の構築が可能になるばかりで
なく、同一ロットで大量の試料を測定できるようにな
る。

【００７６】リガンドと本発明の膜タンパク質等との結
合性を変化させる化合物をスクリーニングする前記の
〜を実施するためには、例えば、適当な膜タンパク質
画分と、標識したリガンドが必要である。膜タンパク質
画分としては、天然型の膜タンパク質画分か、またはそ
れと同等の活性を有する組換え型膜タンパク質画分など
が望ましい。ここで、同等の活性とは、同等のリガンド
結合能、シグナル伝達作用などを示す。リガンドとして
は、前記のリガンドの決定方法を用いて得られたリガン
ドや、そのアナログ化合物が用いられる。標識したリガ
ンドとしては、例えば〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、
〔³⁵Ｓ〕などの放射性物質で標識された上記リガンドな
どが用いられる。具体的には、リガンドと本発明の膜タ
ンパク質との結合性を変化させる化合物のスクリーニン
グを行なうには、まず本発明の膜タンパク質を含有する
細胞またはその細胞膜画分を、スクリーニングに適した
バッファーに懸濁することにより膜タンパク質標品を調
製する。バッファーには、約ｐＨ４〜１０（望ましくは
約ｐＨ６〜８）のリン酸バッファー、トリス−塩酸バッ
ファーなどのリガンドと膜タンパク質との結合を阻害し
ないバッファーであればいずれでもよい。また、非特異
的結合を低減させる目的で、ＣＨＡＰＳ、Ｔｗｅｅｎ−
８０^TM（花王−アトラス社）、ジギトニン、デオキシコ
レートなどの界面活性剤をバッファーに加えることもで
きる。さらに、プロテアーゼによる膜タンパク質やリガ
ンドの分解を抑える目的でＰＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ
−６４（ペプチド研究所製）、ペプスタチンなどのプロ
テアーゼ阻害剤を添加することもできる。約０.０１ｍ
ｌ〜１０ｍｌの該膜タンパク質溶液に、一定量（約５０
００ｃｐｍ〜約５０００００ｃｐｍ）の標識したリガン
ドを添加し、同時に約１０^-4Ｍ〜約１０^-10 Ｍの試験化
合物を共存させる。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知るた
めに大過剰の未標識のリガンドを加えた反応チューブも
用意する。反応は約０〜約５０℃、望ましくは約４〜約
３７℃で、約２０分〜約２４時間、望ましくは約３０分
〜約３時間行なう。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過
し、適量の同バッファーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙
に残存する放射活性を液体シンチレーションカウンター
またはγ−カウンターで計測する。拮抗する物質がない
場合のカウント(Ｂ₀）から非特異的結合量（ＮＳＢ）を
引いたカウント（Ｂ₀−ＮＳＢ）を１００％とした時、
特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）が、例えば、約８０％以
下、好ましくは７０％以下、より好ましくは約５０％以
下になる試験化合物を拮抗阻害活性を有する候補物質と
して選択することができる。

【００７７】リガンドと本発明の膜タンパク質との結合
性を変化させる化合物スクリーニングする前記の〜
の方法を実施するためには、例えば、膜タンパク質を介
する細胞刺激活性（例えば、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ
細胞の活性化、細胞増殖刺激活性、抗原貧食能、遊走
能、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃ
ａ遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イ
ノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質
のリン酸化、ｃ−ｆｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促
進する活性または抑制する活性など）を公知の方法また
は市販の測定用キットを用いて測定することができる。
具体的には、まず、本発明の膜タンパク質を含有する細
胞をマルチウェルプレート等に培養する。スクリーニン
グを行なうにあたっては、前もって新鮮な培地あるいは
細胞に毒性を示さない適当なバッファーに交換し、試験
化合物などを添加して一定時間インキュベートした後、
細胞を抽出あるいは上清液を回収して、生成した産物を
それぞれの方法に従って定量する。細胞刺激活性の指標
とする物質（例えば、アラキドン酸など）の生成が、細
胞が含有する分解酵素によって検定困難な場合は、該分
解酵素に対する阻害剤を添加してアッセイを行なっても
よい。細胞刺激活性を測定してスクリーニングを行なう
には、適当な膜タンパク質を発現した細胞が必要であ
る。本発明の膜タンパク質を発現した細胞としては、天
然型の本発明の膜タンパク質を有する細胞株、前述の組
換え型膜タンパク質を発現した細胞株などが望ましい。
本発明のスクリーニング方法に用いられる試験化合物と
しては、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化
合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出
液、動物組織抽出液、血漿などが用いられ、これら化合
物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であ
ってもよい。

【００７８】リガンドと本発明の膜タンパク質との結合
性を変化させる化合物またはその塩のスクリーニング用
キットは、本発明の膜タンパク質等、本発明の膜タンパ
ク質を含有する細胞またはその細胞膜画分などを含有す
るものである。本発明のスクリーニング用キットの例と
しては、次のものが挙げられる。 １．スクリーニング用試薬 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 Hanks' Balanced Salt Solution（ギブコ社製）に、０.
０５％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたも
の。孔径０.４５μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃
で保存するか、あるいは用時調製しても良い。 膜タンパク質標品 本発明の膜タンパク質を発現させたＣＨＯ細胞を、１２
穴プレートに５×１０⁵個／穴で継代し、３７℃、５％
ＣＯ₂で２日間培養したもの。 標識リガンド 市販の〔³Ｈ〕、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などで
標識したリガンド水溶液の状態のものを４℃あるいは−
２０℃にて保存し、用時に測定用緩衝液にて１μＭに希
釈する。 リガンド標準液 リガンドを０.１％ウシ血清アルブミン（シグマ社製）
を含むＰＢＳで１ｍＭとなるように溶解し、−２０℃で
保存する。

【００７９】２．測定法 １２穴組織培養用プレートにて培養した本発明の膜タ
ンパク質発現ＣＨＯ細胞を、測定用緩衝液１ｍｌで２回
洗浄した後、４９０μｌの測定用緩衝液を各穴に加え
る。 １０^-3〜１０^-10Ｍの試験化合物溶液を５μｌ加えた
後、標識リガンドを５μｌ加え、室温にて１時間反応さ
せる。非特異的結合量を知るためには試験化合物の代わ
りに１０^-3Ｍのリガンドを５μｌ加えておく。 反応液を除去し、１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄す
る。細胞に結合した標識リガンドを０.２Ｎ ＮａＯＨ
−１％ＳＤＳで溶解し、４ｍｌの液体シンチレーターＡ
（和光純薬製）と混合する。 液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）
を用いて放射活性を測定し、Percent Maximum Binding
（ＰＭＢ）を次の式〔数１〕で求める。

【００８０】

【数１】 ＰＭＢ：Percent Maximum Binding Ｂ ：検体を加えた時の値 ＮＳＢ：Non-specific Binding（非特異的結合量） Ｂ₀ ：最大結合量

【００８１】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
は、リガンドと本発明の膜タンパク質等との結合性を変
化させる作用を有する化合物であり、具体的には、
（イ）本発明の膜タンパク質を介して細胞刺激活性（例
えば、Ｔ細胞への抗原提示能、Ｔ細胞の活性化、細胞増
殖刺激活性、抗原貧食能、遊走能、アラキドン酸遊離、
アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ²⁺遊離、細胞内ｃＡＭ
Ｐ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産
生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆ
ｏｓの活性化、ｐＨの低下などを促進する活性または抑
制する活性など）を有する化合物（いわゆる、本発明の
膜タンパク質等に対するアゴニスト）、（ロ）該細胞刺
激活性を有しない化合物（いわゆる、本発明の膜タンパ
ク質等に対するアンタゴニスト）、（ハ）リガンドと本
発明の膜タンパク質等との結合力を増強する化合物、あ
るいは（ニ）リガンドと本発明の膜タンパク質等との結
合力を減少させる化合物である。該化合物は、前述した
試験化合物から得られるものであり、ペプチド、タンパ
ク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物など
が挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよ
いし、公知の化合物であってもよい。本発明の膜タンパ
ク質等に対するアゴニストは、本発明の膜タンパク質に
対するリガンドが有する生理活性と同様の作用を有して
いるので、該リガンド活性に応じて安全で低毒性な医薬
として有用である。該アゴニストは、癌（例、乳癌、前
立腺癌、卵巣癌、ろ胞性リンパ球腫、ｐ５３変異を伴う
癌、脳腫瘍、膀胱癌、子宮頸部癌、大腸癌（結腸／直腸
癌）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、胃癌など）、エイ
ズ、感染症（例、ヘルペスウイルス感染症、アデノウイ
ルス感染症、ボックスウイルス感染症、ヘリコバクター
・ピロリ感染症、水痘-帯状疱疹ウイルス感染症、ヒト
パピローマウイルス感染症、侵襲性ブドウ状球菌感染
症、インフルエンザ感染症、重症全身性真菌感染症な
ど）、急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人
呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、慢性リンパ性白血
病、慢性骨髄性白血病、インシュリン依存性糖尿病（Ｉ
型）、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、非ホジキン性リンパ
腫、消化性潰瘍、敗血症、敗血症ショック、結核などの
治療・予防剤などの医薬として有用である。

【００８２】本発明の膜タンパク質等に対するアンタゴ
ニストは、本発明の膜タンパク質に対するリガンドが有
する生理活性を抑制することができるので、該リガンド
活性を抑制する安全で低毒性な医薬として有用である。
該アンタゴニストは、例えば、アレルギー性免疫疾患
（例、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、アレルギー性
鼻炎、花粉症など）、炎症（例、関節炎、肝炎など）、
自己免疫疾患（例、リウマチ関節炎、全身性エリテマト
ーデス、シェーグレン病など）、エイズ、糸球体腎炎、
気管支喘息、動脈硬化症などの治療・予防剤などの医薬
として有用である。リガンドと本発明の膜タンパク質等
との結合力を増強する化合物は、本発明の膜タンパク質
等に対するリガンドが有する生理活性を増強するための
安全で低毒性な医薬として有用である。該化合物は、例
えば、癌（例、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、ろ胞性リンパ
球腫、ｐ５３変異を伴う癌、脳腫瘍、膀胱癌、子宮頸部
癌、大腸癌（結腸／直腸癌）、非小細胞肺癌、小細胞肺
癌、胃癌など）、エイズ、感染症（例、ヘルペスウイル
ス感染症、アデノウイルス感染症、ボックスウイルス感
染症、ヘリコバクター・ピロリ感染症、水痘-帯状疱疹
ウイルス感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、侵襲
性ブドウ状球菌感染症、インフルエンザ感染症、重症全
身性真菌感染症など）、急性バクテリア髄膜炎、急性ウ
イルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、慢
性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、インシュリン依
存性糖尿病（Ｉ型）、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、非ホ
ジキン性リンパ腫、消化性潰瘍、敗血症、敗血症ショッ
ク、結核などの治療・予防剤などの医薬として有用であ
る。リガンドと本発明の膜タンパク質等との結合力を減
少させる化合物は、本発明の膜タンパク質等に対するリ
ガンドが有する生理活性を減少させるための安全で低毒
性な医薬として有用である。該化合物は、例えば、アレ
ルギー性免疫疾患（例、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚
炎、アレルギー性鼻炎、花粉症など）、炎症（例、関節
炎、肝炎など）、自己免疫疾患（例、リウマチ関節炎、
全身性エリテマトーデス、シェーグレン病など）、エイ
ズ、糸球体腎炎、気管支喘息、動脈硬化症などの治療・
予防剤などの医薬として有用である。上記スクリーニン
グ方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、該
化合物の塩としては、とりわけ生理学的に許容される酸
付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機
酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との
塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン
酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン
酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベ
ンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。

【００８３】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
を上述の医薬として使用する場合、常套手段に従って実
施することができる。例えば、前記した本発明のＤＮＡ
を含有する医薬と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリ
キシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤
などとすることができる。このようにして得られる製剤
は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物
（例えば、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネ
コ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対
象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、癌治
療の目的で本発明の膜タンパク質等に対するアゴニスト
を経口投与する場合、一般的に成人（６０ｋｇとして）
においては、一日につき該アンタゴニストを約０.１ｍ
ｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より
好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投
与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象
疾患などによっても異なるが、例えば、癌治療の目的で
本発明の膜タンパク質等に対するアゴニストを注射剤の
形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与する場合は、一
日につき該アゴニストを約０．０１〜３０ｍｇ程度、好
ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約
０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好
都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算
した量を投与することができる。また、例えば、アレル
ギー性免疫疾患治療の目的で本発明の膜タンパク質等に
対するアンタゴニストを経口投与する場合、一般的に成
人（６０ｋｇとして）においては、一日につき該アンタ
ゴニストを約０.１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約
１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ
投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回
投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、
例えば、アレルギー性免疫疾患治療の目的で本発明の膜
タンパク質等に対するアンタゴニストを注射剤の形で通
常成人（６０ｋｇとして）に投与する場合は、一日につ
き該アンタゴニストを約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ま
しくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．
１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合
である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した
量を投与することができる。

【００８４】（６）本発明の膜タンパク質のＴ細胞活性
化作用を促進または阻害する化合物のスクリーニング方
法 本発明の膜タンパク質等を用いるか、または組換え型膜
タンパク質等の発現系を構築し、該発現系を用いたレセ
プター結合アッセイ系を用いることによって、本発明の
膜タンパク質等のＴ細胞活性化作用を促進もしくは阻害
する化合物（例えば、ペプチド、蛋白質、非ペプチド性
化合物、合成化合物、発酵生産物など）またはその塩を
効率よくスクリーニングすることができる。すなわち、
本発明は、（ｉ）本発明の膜タンパク質等とＴ細胞とを
接触させた場合と（ii）本発明の膜タンパク質等および
試験化合物とＴ細胞とを接触させた場合との比較を行な
うことを特徴とする、本発明のタンパク質等のＴ細胞の
活性化作用を促進もしくは阻害する化合物またはその塩
のスクリーニング方法を提供する。本発明のスクリーニ
ング方法においては、（ｉ）と（ii）の場合における、
例えば、本発明の膜タンパク質等のＴ細胞活性化作用な
どを測定して、比較することを特徴とする。

【００８５】より具体的には、本発明は、 （ｉ）本発明の膜タンパク質等とＴ細胞とを接触させ
た場合と、（ii）本発明の膜タンパク質等および試験化
合物とＴ細胞とを接触させた場合との比較を行なうこと
を特徴とする、本発明の膜タンパク質等のＴ細胞活性化
作用を促進もしくは阻害する化合物またはその塩のスク
リーニング方法、 （ｉ）標識した本発明の膜タンパク質等とＴ細胞とを
接触させた場合と、（ii）標識した本発明の膜タンパク
質等および試験化合物とＴ細胞とを接触させた場合にお
ける、標識した本発明の膜タンパク質等のＴ細胞に対す
る結合量を測定し、比較することを特徴とする、本発明
の膜タンパク質等のＴ細胞活性化作用を促進もしくは阻
害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、 （ｉ）本発明の膜タンパク質を含有する細胞とＴ細胞
とを接触させた場合と、（ii）本発明の膜タンパク質等
を含有する細胞および試験化合物とＴ細胞とを接触させ
た場合における、本発明の膜タンパク質等によるＴ細胞
の活性化を測定し、比較することを特徴とする、本発明
の膜タンパク質等のＴ細胞活性化作用を促進もしくは阻
害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、およ
び （ｉ）本発明の膜タンパク質をコードするＤＮＡを含
有する組換えベクターで形質転換された形質転換体を培
養することによって該形質転換体の細胞膜に発現した本
発明の膜タンパク質等とＴ細胞とを接触させた場合と、
（ii）該形質転換体の細胞膜に発現した本発明の膜タン
パク質等および試験化合物とＴ細胞とを接触させた場合
における、本発明の膜タンパク質等によるＴ細胞の活性
化を測定し、比較することを特徴とする、本発明の膜タ
ンパク質等のＴ細胞活性化作用を促進もしくは阻害する
化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。

【００８６】本発明のスクリーニング方法に用いる本発
明の膜タンパク質標品としては、前記（５）のスクリー
ニング方法に用いられるものと同様のものを使用するこ
とができる。本発明のスクリーニング方法において、本
発明の膜タンパク質等を含有する細胞またはその細胞膜
画分は、前記（５）のスクリーニング方法で用いられる
ものと同様のものを使用することができる。試験化合物
としては、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性
化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽
出液、動物組織抽出液、血漿などが用いられ、これら化
合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物で
あってもよい。Ｔ細胞としては、ヒトまたは哺乳動物
（例えば、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネ
コ、イヌ、サルなど）から採取したＴ細胞集団や、株化
細胞などを用いることができる。また、ＩＬ−２産生能
を有するヒトＴ細胞株を用いることもできる。Ｔ細胞の
分取には、例えば、採血した末梢血をリンフォサイトセ
パレーションメディウム（Organon Teknika co.）等に
重層して遠心分離を行い単核球画分を得る。単核球画分
からＴ細胞を分離するには、それ自体公知のナイロンウ
ールカラムを使う方法、抗体を使う方法、フローサイト
メトリーを使う方法、マグネティックセルソーターを使
う方法等があるが、マグネティックセルソーターを使う
方法が簡便で好適である。単核球画分をＴ細胞特異的マ
イクロ磁気ビーズ抗体である標識後、マグネティックセ
ルソーターの磁場内に設置した分離カラムにアプライ
し、標識Ｔ細胞群をカラム内に保持、濃縮する。次に、
カラムを磁場外にはずすことにより、該細胞を溶出する
ことで高純度のＴ細胞が分離調製できる。ＩＬ−２産生
能力を有するヒトＴ細胞株としては、例えば、Jurkat細
胞等を用いることができる。Ｔ細胞はマルチウェルプレ
ート等に培養することができる。スクリーニングを行な
うにあたっては、前もって新鮮な培地あるいは細胞に毒
性を示さない適当なバッファーに交換する。試験化合物
を添加する場合は、該試験化合物を前以て添加して一定
時間インキュベートした後、使用することができる。

【００８７】上記またはのスクリーニング方法を実
施するためには、標識した適当な膜タンパク質画分が必
要である。標識試薬としては、例えば〔³Ｈ〕、
〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹⁴Ｃ〕、〔³⁵Ｓ〕などが用いられる。標
識の程度は、通常、約５,０００ｃｐｍ〜約５００,００
０ｃｐｍである。本スクリーニングを行なうには、まず
標識した本発明の膜タンパク質等を、スクリーニングに
適したバッファーに懸濁することにより膜タンパク質標
品を調製する。バッファーには、約ｐＨ４〜１０（望ま
しくは約ｐＨ６〜８）のリン酸バッファー、トリス−塩
酸バッファーなどの該膜タンパク質とＴ細胞との結合を
阻害しないバッファーであればいずれでもよい。また、
非特異的結合を低減させる目的で、ＣＨＡＰＳ、Ｔｗｅ
ｅｎ−８０^TM（花王−アトラス社）、ジギトニン、デオ
キシコレートなどの界面活性剤をバッファーに加えるこ
ともできる。さらに、プロテアーゼによる該膜タンパク
質の分解を抑える目的でＰＭＳＦ、ロイペプチン、Ｅ−
６４（ペプチド研究所製）、ペプスタチンなどのプロテ
アーゼ阻害剤を添加することもできる。約０.０１ｍｌ
〜１０ｍｌの該膜タンパク質溶液を前記のＴ細胞培養液
に添加する。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知るために大
過剰の未標識のリガンドを加えた反応チューブも用意す
る。反応は、通常、約０〜約５０℃、望ましくは約４〜
約３７℃で、約２０分〜約２４時間、望ましくは約３０
分〜約３時間行なう。反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過
し、適量の同バッファーで洗浄した後、ガラス繊維濾紙
に残存する放射活性を液体シンチレーションカウンター
またはγ−カウンターで計測する。試験化合物を添加し
た場合のカウント(Ｂ₀）から非特異的結合量（ＮＳＢ）
を引いたカウント（Ｂ₀−ＮＳＢ）を１００％とした
時、特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）が、例えば、約２０％
以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％
以上になる試験化合物をＴ細胞活性化作用を促進する候
補物質として選択することができる。一方、試験化合物
を添加した場合のカウント(Ｂ₀）から非特異的結合量
（ＮＳＢ）を引いたカウント（Ｂ₀−ＮＳＢ）を１００
％とした時、特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）が、例えば、
約２０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは
約５０％以下になる試験化合物をＴ細胞活性化作用を阻
害する候補物質として選択することができる。

【００８８】上記またはのスクリーニング方法は、
本発明の膜タンパク質を含有する細胞とＴ細胞とを混合
培養するか、あるいは、Ｔ細胞の培養液に本発明の膜タ
ンパク質を含有する細胞の細胞膜画分を添加し、両細胞
の結合や本発明の膜タンパク質等によるＴ細胞活性化作
用（例、ＩＬ−２などのサイトカイン産生誘導活性な
ど）を公知の方法または市販の測定用キットを用いて測
定する。ＩＬ−２産生誘導活性は、ＩＬ−２産生量を指
標にして測定することができる。ＩＬ−２産生量の測定
としては、例えば、抗ＩＬ−２抗体を用いるＥＩＡ法、
ＩＬ−２依存性細胞の増殖を調べるバイオアッセイ法な
どが知られている。種々の試験化合物が混在する場合に
は、それが細胞に作用する場合があるので、ＥＩＡ法で
の定量が好ましい。ＥＩＡ法によるＩＬ−２の定量には
「免疫実験操作II、819頁、南江堂」に記載されている
公知の方法を用いることもできるし、市販のＥＩＡ法を
用いたＩＬ−２測定キットを利用することもできる。

【００８９】本発明の膜タンパク質のＴ細胞活性化作用
を促進もしくは阻害する化合物またはその塩のスクリー
ニング用キットは、本発明の膜タンパク質等、本発明の
膜タンパク質を含有する細胞またはその細胞膜画分など
を含有するものである。本発明のスクリーニング用キッ
トの例としては、次のものが挙げられる。 １．スクリーニング用試薬 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 Hanks' Balanced Salt Solution（ギブコ社製）に、０.
０５％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を加えたも
の。孔径０.４５μｍのフィルターで濾過滅菌し、４℃
で保存するか、あるいは用時調製しても良い。 膜タンパク質標品 本発明の膜タンパク質を発現させたＣＨＯ細胞を、１２
穴プレートに５×１０⁵個／穴で継代し、３７℃、５％
ＣＯ₂で２日間培養したもの。 Ｔ細胞標品 Jurkat細胞を１２穴プレートに５×１０⁵個／穴で継代
し、３７℃、５％ＣＯ₂で２日間培養したもの。

【００９０】２．測定法 １２穴組織培養用プレートにて培養した本発明の膜タ
ンパク質発現ＣＨＯ細胞およびＴ細胞を、測定用緩衝液
１ｍｌで２回洗浄した後、４９０μｌの測定用緩衝液を
各穴に加える。 １０^-3〜１０^-10Ｍの試験化合物溶液を５μｌ加えた
後、室温にて１時間反応させる。 ＩＬ−２産生量を抗ＩＬ−２抗体を用いるＥＩＡ法で
定量する。ＩＬ−２産生量を約２０％以上、好ましくは
約３０％以上、より好ましくは約５０％以上増加させる
化合物を本発明の膜タンパク質等のＴ細胞活性化作用を
促進する化合物として、一方、ＩＬ−２産生量を約２０
％以上、好ましくは約３０％以上、より好ましくは約５
０％以上減少させる化合物を本発明の膜タンパク質等の
Ｔ細胞活性化作用を阻害する化合物として選択すること
ができる。

【００９１】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
は、本発明の膜タンパク質等のＴ細胞活性化作用を促進
もしくは阻害する化合物である。該化合物は、前述した
試験化合物から得られるものであり、ペプチド、タンパ
ク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物など
が挙げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよ
いし、公知の化合物であってもよい。該スクリーニング
方法またはスクリーニング用キットを用いて得られた化
合物は塩を形成していてもよく、該化合物の塩として
は、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好まし
い。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩
酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機
酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マ
レイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚
酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン
酸）との塩などが用いられる。本発明の膜タンパク質等
のＴ細胞活性化作用を促進する化合物またはその塩は、
癌（例、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、ろ胞性リンパ球腫、
ｐ５３変異を伴う癌、脳腫瘍、膀胱癌、子宮頸部癌、大
腸癌（結腸／直腸癌）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、胃
癌など）、エイズ、感染症（例、ヘルペスウイルス感染
症、アデノウイルス感染症、ボックスウイルス感染症、
ヘリコバクター・ピロリ感染症、水痘-帯状疱疹ウイル
ス感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、侵襲性ブド
ウ状球菌感染症、インフルエンザ感染症、重症全身性真
菌感染症など）、急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス
脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、慢性リン
パ性白血病、慢性骨髄性白血病、インシュリン依存性糖
尿病（Ｉ型）、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、非ホジキン
性リンパ腫、消化性潰瘍、敗血症、敗血症ショック、結
核などの治療・予防剤などの安全で低毒性な医薬として
有用である。本発明の膜タンパク質等のＴ細胞活性化作
用を阻害する化合物またはその塩は、例えば、アレルギ
ー性免疫疾患（例、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、
アレルギー性鼻炎、花粉症など）、炎症（例、関節炎、
肝炎など）、自己免疫疾患（例、リウマチ関節炎、全身
性エリテマトーデス、シェーグレン病など）、エイズ、
糸球体腎炎、気管支喘息、動脈硬化症などの治療・予防
剤などの安全で低毒性な医薬として有用である。

【００９２】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
を上述の医薬として使用する場合、常套手段に従って実
施することができる。例えば、本発明のＤＮＡを含有す
る医薬と同様にして、錠剤、カプセル剤、エリキシル
剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤などと
することができる。このようにして得られる製剤は安全
で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例え
ば、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イ
ヌ、サルなど）に対して投与することができる。該化合
物またはその塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与
ルートなどにより差異はあるが、例えば、癌治療の目的
で本発明の膜タンパク質等のＴ細胞活性化作用を促進す
る化合物を経口投与する場合、一般的に成人（６０ｋｇ
として）においては、一日につき該化合物を約０.１ｍ
ｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より
好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投
与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象
疾患などによっても異なるが、例えば、癌治療の目的で
本発明の膜タンパク質等のＴ細胞活性化作用を促進する
化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投
与する場合は、一日につき該アゴニストを約０．０１〜
３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、よ
り好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により
投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋ
ｇ当たりに換算した量を投与することができる。また、
例えば、アレルギー性免疫疾患治療の目的で本発明の膜
タンパク質等のＴ細胞活性化作用を阻害する化合物を経
口投与する場合、一般的に成人（６０ｋｇとして）にお
いては、一日につき該化合物を約０.１ｍｇ〜１００ｍ
ｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約
１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合
は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などに
よっても異なるが、例えば、アレルギー性免疫疾患治療
の目的で本発明の膜タンパク質等のＴ細胞活性化作用を
阻害する化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇとし
て）に投与する場合は、一日につき該化合物を約０．０
１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程
度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射
により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、
６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。

【００９３】（７）本発明の膜タンパク質、その部分ペ
プチドまたはそれらの塩の定量 本発明の抗体は、本発明の膜タンパク質等を特異的に認
識することができるので、被検液中の本発明の膜タンパ
ク質等の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定量
などに使用することができる。すなわち、本発明は、例
えば、（ｉ）本発明の抗体と、被検液および標識化膜タ
ンパク質等とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標
識化膜タンパク質等の割合を測定することを特徴とする
被検液中の本発明の膜タンパク質等の定量法、（ii）被
検液と担体上に不溶化した本発明の抗体および標識化さ
れた別の本発明の抗体とを同時あるいは連続的に反応さ
せたのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定すること
を特徴とする被検液中の本発明の膜タンパク質等の定量
法を提供する。上記（ii）においては、一方の抗体が本
発明の膜タンパク質等のＮ端部を認識する抗体で、他方
の抗体が本発明の膜タンパク質等のＣ端部を認識する抗
体であることが好ましい。

【００９４】本発明においては、本発明の膜タンパク質
等に対するモノクローナル抗体（以下、本発明のモノク
ローナル抗体と略記する）を用いて本発明の膜タンパク
質等の測定を行なえるほか、組織染色等による検出を行
なうこともできる。これらの目的には、抗体分子そのも
のを用いてもよく、また、抗体分子のＦ(ａｂ')₂ 、Ｆ
ａｂ'、あるいはＦａｂ画分を用いてもよい。本発明の
膜タンパク質等に対する抗体を用いる測定法は、特に制
限されるべきものではなく、被測定液中の抗原量（例え
ば、膜タンパク質量）に対応した抗体、抗原もしくは抗
体−抗原複合体の量を化学的または物理的手段により検
出し、これを既知量の抗原を含む標準液を用いて作製し
た標準曲線より算出する測定法であれば、いずれの測定
法を用いてもよい。例えば、ネフロメトリー、競合法、
イムノメトリック法およびサンドイッチ法が好適に用い
られるが、感度、特異性の点で、後述するサンドイッチ
法を用いるのが特に好ましい。標識物質を用いる測定法
に用いられる標識剤としては、例えば、放射性同位元
素、酵素、蛍光物質、発光物質などが用いられる。放射
性同位元素としては、例えば、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹³¹Ｉ〕、
〔³Ｈ〕、〔¹⁴Ｃ〕などが用いられる。上記酵素として
は、安定で比活性の大きなものが好ましく、例えば、β
−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフ
ォスファターゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵
素などが用いられる。蛍光物質としては、例えば、フル
オレスカミン、フルオレッセンイソチオシアネートなど
が用いられる。発光物質としては、例えば、ルミノー
ル、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなど
が用いられる。さらに、抗体または抗原と標識剤との結
合にビオチン−アビジン系を用いることもできる。

【００９５】抗原または抗体の不溶化に当っては、物理
吸着を用いてもよく、また通常、蛋白質あるいは酵素等
を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用いる
方法でもよい。担体としては、例えば、アガロース、デ
キストラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチ
レン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、あ
るいはガラス等が用いられる。サンドイッチ法において
は不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反
応させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモ
ノクローナル抗体を反応させ（２次反応）たのち、不溶
化担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中
の本発明の膜タンパク質量を定量することができる。１
次反応と２次反応は逆の順序に行なっても、また、同時
に行なってもよいし時間をずらして行なってもよい。標
識化剤および不溶化の方法は前記のそれらに準じること
ができる。また、サンドイッチ法による免疫測定法にお
いて、固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体
は必ずしも１種類である必要はなく、測定感度を向上さ
せる等の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよ
い。本発明のサンドイッチ法による膜タンパク質等の測
定法においては、１次反応と２次反応に用いられる本発
明のモノクローナル抗体は膜タンパク質等の結合する部
位が相異なる抗体が好ましく用いられる。即ち、１次反
応および２次反応に用いられる抗体は、例えば、２次反
応で用いられる抗体が、膜タンパク質のＣ端部を認識す
る場合、１次反応で用いられる抗体は、好ましくはＣ端
部以外、例えばＮ端部を認識する抗体が用いられる。

【００９６】本発明のモノクローナル抗体をサンドイッ
チ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメト
リック法またはネフロメトリーなどに用いることができ
る。競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に
対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原
（Ｆ）と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し
（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被
検液中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として
可溶性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコー
ル、前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、お
よび、第１抗体として固相化抗体を用いるか、または、
第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相化抗
体を用いる固相化法とが用いられる。イムノメトリック
法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識
化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離する
か、または、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体とを
反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体を
固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。次に、
いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量を定量
する。また、ネフロメトリーでは、ゲル内または溶液中
で抗原抗体反応の結果、生じた不溶性の沈降物の量を測
定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の沈降物
しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用するレー
ザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。

【００９７】これら個々の免疫学的測定法を本発明の測
定方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の
設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の
条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発
明の膜タンパク質またはその塩の測定系を構築すればよ
い。これらの一般的な技術手段の詳細については、総
説、成書などを参照することができる〔例えば、入江
寛編「ラジオイムノアッセイ〕（講談社、昭和４９年発
行）、入江 寛編「続ラジオイムノアッセイ〕（講談
社、昭和５４年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定
法」（医学書院、昭和５３年発行）、石川栄治ら編「酵
素免疫測定法」（第２版）（医学書院、昭和５７年発
行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第３版）（医
学書院、昭和６２年発行）、「メソッズ・イン・エンジ
モノジー（Methods in ENZYMOLOGY）」 Vol. 70(Immunoc
hemical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunoc
hemical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunoc
hemical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunoc
hemical Techniques(Part D:Selected Immunoassay
s))、 同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part
E:Monoclonal Antibodies and General Immunoassay Me
thods))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques
(Part I:Hybridoma Technology and Monoclonal Antibo
dies))(以上、アカデミックプレス社発行)など参照〕。
以上のように、本発明の抗体を用いることによって、本
発明の膜タンパク質等を感度良く定量することができ
る。さらに、本発明の抗体を用いて本発明の膜タンパク
質等を定量することによって、本発明の膜タンパク質が
関与する種々の疾病の診断をすることができる。

【００９８】具体的には、本発明の膜タンパク質等の濃
度の減少が検出された場合は、例えば、癌（例、乳癌、
前立腺癌、卵巣癌、ろ胞性リンパ球腫、ｐ５３変異を伴
う癌、脳腫瘍、膀胱癌、子宮頸部癌、大腸癌（結腸／直
腸癌）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、胃癌など）、エイ
ズ、感染症（例、ヘルペスウイルス感染症、アデノウイ
ルス感染症、ボックスウイルス感染症、ヘリコバクター
・ピロリ感染症、水痘-帯状疱疹ウイルス感染症、ヒト
パピローマウイルス感染症、侵襲性ブドウ状球菌感染
症、インフルエンザ感染症、重症全身性真菌感染症な
ど）、急性バクテリア髄膜炎、急性ウイルス脳炎、成人
呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、慢性リンパ性白血
病、慢性骨髄性白血病、インシュリン依存性糖尿病（Ｉ
型）、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、非ホジキン性リンパ
腫、消化性潰瘍、敗血症、敗血症ショック、結核などの
疾患である、あるいは将来罹患する可能性が高いと診断
することができる。一方、本発明の膜タンパク質等の濃
度の増加が検出された場合は、例えば、アレルギー性免
疫疾患（例、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、アレル
ギー性鼻炎、花粉症など）、炎症（例、関節炎、肝炎な
ど）、自己免疫疾患（例、リウマチ関節炎、全身性エリ
テマトーデス、シェーグレン病など）、エイズ、糸球体
腎炎、気管支喘息、動脈硬化症などの疾患である、ある
いは将来罹患する可能性が高いと診断することができ
る。このように、本発明の抗体は上記疾患の診断剤とし
て有用である。また、本発明の抗体は、体液や組織など
の被検体中に存在する本発明の膜タンパク質等を検出す
るために使用することができる。また、本発明の膜タン
パク質等を精製するために使用する抗体カラムの作製、
精製時の各分画中の本発明の膜タンパク質等の検出、被
検細胞内における本発明の膜タンパク質の挙動の分析な
どのために使用することができる。

【００９９】（８）本発明の可溶性部分ペプチドを含有
する医薬 本発明の可溶性部分ペプチドは、リガンドと結合し、該
リガンドと本発明の膜タンパク質との結合を阻害するこ
とができるので、該リガンドの生理活性を抑制すること
ができる。したがって、本発明の可溶性部分ペプチド
は、例えば、アレルギー性免疫疾患（例、アトピー性皮
膚炎、接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症な
ど）、炎症（例、関節炎、肝炎など）、自己免疫疾患
（例、リウマチ関節炎、全身性エリテマトーデス、シェ
ーグレン病など）、エイズ、糸球体腎炎、気管支喘息、
動脈硬化症などの種々の疾病の治療・予防剤などの医薬
として使用することができる。本発明の可溶性部分ペプ
チドを上記の医薬として使用する場合、前記した本発明
のＤＮＡを含有する医薬と同様にして製造し、ヒトまた
は哺乳動物に投与することができる。

【０１００】このようにして得られる製剤は安全で低毒
性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラッ
ト、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルな
ど）に対して投与することができる。本発明の可溶性部
分ペプチドの投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルー
トなどにより差異はあるが、例えば、アレルギー性免疫
疾患治療の目的で本発明の可溶性部分ペプチドを経口投
与する場合、一般的に成人（６０ｋｇとして）において
は、一日につき該可溶性部分ペプチドを約０.１ｍｇ〜
１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ま
しくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与す
る場合は、該可溶性部分ペプチドの１回投与量は投与対
象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、自己免
疫疾患治療の目的で本発明の可溶性部分ペプチドを注射
剤の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与する場合
は、一日につき該可溶性部分ペプチドを約０．０１〜３
０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より
好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投
与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ
当たりに換算した量を投与することができる。

【０１０１】（９）本発明の抗体を含有する医薬 本発明の膜タンパク質等のレセプター活性を惹起する作
用（アゴニスト様活性）を有する本発明の抗体は、例え
ば、癌（例、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、ろ胞性リンパ球
腫、ｐ５３変異を伴う癌、脳腫瘍、膀胱癌、子宮頸部
癌、大腸癌（結腸／直腸癌）、非小細胞肺癌、小細胞肺
癌、胃癌など）、エイズ、感染症（例、ヘルペスウイル
ス感染症、アデノウイルス感染症、ボックスウイルス感
染症、ヘリコバクター・ピロリ感染症、水痘-帯状疱疹
ウイルス感染症、ヒトパピローマウイルス感染症、侵襲
性ブドウ状球菌感染症、インフルエンザ感染症、重症全
身性真菌感染症など）、急性バクテリア髄膜炎、急性ウ
イルス脳炎、成人呼吸促迫症候群、バクテリア肺炎、慢
性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、インシュリン依
存性糖尿病（Ｉ型）、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、非ホ
ジキン性リンパ腫、消化性潰瘍、敗血症、敗血症ショッ
ク、結核などの疾患の治療・予防剤などの医薬として有
用である。一方、本発明の膜タンパク質等のレセプター
活性を中和する作用（アンタゴニスト様活性）を有する
本発明の抗体または本発明の膜タンパク質等のＴ細胞活
性化作用を中和する作用を有する本発明の抗体は、例え
ば、アレルギー性免疫疾患（例、アトピー性皮膚炎、接
触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症など）、炎症
（例、関節炎、肝炎など）、自己免疫疾患（例、リウマ
チ関節炎、全身性エリテマトーデス、シェーグレン病な
ど）、エイズ、糸球体腎炎、気管支喘息、動脈硬化症な
どの種々の疾病の治療・予防剤などの医薬として使用す
ることができる。

【０１０２】本発明の抗体を含有する上記疾患の治療・
予防剤は、そのまま液剤として、または適当な剤型の医
薬組成物として、ヒトまたは哺乳動物（例、ラット、ウ
サギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に
対して経口的または非経口的に投与することができる。
投与量は、投与対象、対象疾患、症状、投与ルートなど
によっても異なるが、例えば、成人の癌の治療・予防の
ために使用する場合には、本発明の膜タンパク質のレセ
プター活性を惹起する抗体を１回量として、通常０.０
１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重程度、好ましくは０.１〜１０
ｍｇ／ｋｇ体重程度、さらに好ましくは０.１〜５ｍｇ
／ｋｇ体重程度を、１日１〜５回程度、好ましくは１日
１〜３回程度、静脈注射により投与するのが好都合であ
る。また、例えば、成人のアレルギー性免疫疾患の治療
・予防のために使用する場合には、本発明の膜タンパク
質のレセプター活性またはＴ細胞活性化作用を中和する
抗体を１回量として、通常０.０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体
重程度、好ましくは０.１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重程度、
さらに好ましくは０.１〜５ｍｇ／ｋｇ体重程度を、１
日１〜５回程度、好ましくは１日１〜３回程度、静脈注
射により投与するのが好都合である。他の非経口投与お
よび経口投与の場合もこれに準ずる量を投与することが
できる。症状が特に重い場合には、その症状に応じて増
量してもよい。アゴニスト様活性、アンタゴニスト活性
などを有する本発明の抗体は、それ自体または適当な医
薬組成物として投与することができる。上記投与に用い
られる医薬組成物は、上記またはその塩と薬理学的に許
容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤とを含むもので
ある。かかる組成物は、経口または非経口投与に適する
剤形として提供される。すなわち、例えば、経口投与の
ための組成物としては、固体または液体の剤形、具体的
には錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、
丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を
含む）、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などがあげられる。
かかる組成物は自体公知の方法によって製造され、製剤
分野において通常用いられる担体、希釈剤もしくは賦形
剤を含有するものである。例えば、錠剤用の担体、賦形
剤としては、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグ
ネシウムなどが用いられる。

【０１０３】非経口投与のための組成物としては、例え
ば、注射剤、坐剤などが用いられ、注射剤は静脈注射
剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤
などの剤形を包含する。かかる注射剤は、自体公知の方
法に従って、例えば、上記抗体またはその塩を通常注射
剤に用いられる無菌の水性もしくは油性液に溶解、懸濁
または乳化することによって調製する。注射用の水性液
としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補
助薬を含む等張液などが用いられ、適当な溶解補助剤、
例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコー
ル（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコー
ル）、非イオン界面活性剤〔例、ポリソルベート８０、
ＨＣＯ−５０（polyoxyethylene（５０mol）adduct of
hydrogenated castor oil）〕などと併用してもよい。
油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いら
れ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアル
コールなどを併用してもよい。調製された注射液は、通
常、適当なアンプルに充填される。直腸投与に用いられ
る坐剤は、上記抗体またはその塩を通常の坐薬用基剤に
混合することによって調製される。上記の経口用または
非経口用医薬組成物は、活性成分の投与量に適合するよ
うな投薬単位の剤形に調製されることが好都合である。
かかる投薬単位の剤形としては、錠剤、丸剤、カプセル
剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが例示され、それぞ
れの投薬単位剤形当たり通常５〜５００ｍｇ、とりわけ
注射剤では５〜１００ｍｇ、その他の剤形では１０〜２
５０ｍｇの上記抗体が含有されていることが好ましい。
なお前記した各組成物は、上記抗体との配合により好ま
しくない相互作用を生じない限り他の活性成分を含有し
てもよい。

【０１０４】（１０）アンチセンスＤＮＡを含有する医
薬 本発明のＤＮＡに相補的に結合し、該ＤＮＡの発現を抑
制することができるアンチセンスＤＮＡは、生体内にお
ける本発明の膜タンパク質等またはＤＮＡ（ｍＲＮＡ）
の機能を抑制することができるので、例えば、アレルギ
ー性免疫疾患（例、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、
アレルギー性鼻炎、花粉症など）、炎症（例、関節炎、
肝炎など）、自己免疫疾患（例、リウマチ関節炎、全身
性エリテマトーデス、シェーグレン病など）、エイズ、
糸球体腎炎、気管支喘息、動脈硬化症などの種々の疾病
の治療・予防剤などの医薬として使用することができ
る。上記アンチセンスＤＮＡを上記の医薬として使用す
る場合、前記した本発明のＤＮＡを含有する医薬と同様
にして製造し、ヒトまたは哺乳動物に投与することがで
きる。また、該アンチセンスＤＮＡを単独あるいはレト
ロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ
ウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当
なベクターに挿入した後、常套手段に従ってヒトまたは
温血動物に投与することができる。該アンチセンスＤＮ
Ａは、そのままで、あるいは摂取促進のための補助剤な
どの生理学的に認められる担体とともに、遺伝子銃やハ
イドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与
できる。このようにして得られる製剤は安全で低毒性で
あるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、
ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）
に対して投与することができる。本発明のＤＮＡの投与
量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異
はあるが、例えば、アレルギー性免疫疾患治療の目的で
本発明のＤＮＡを経口投与する場合、一般的に成人（６
０ｋｇとして）においては、一日につき該ＤＮＡを約
０.１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍ
ｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経
口的に投与する場合は、該ＤＮＡの１回投与量は投与対
象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、自己免
疫疾患治療の目的で本発明のＤＮＡを注射剤の形で通常
成人（６０ｋｇとして）に投与する場合は、一日につき
該ＤＮＡを約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約
０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０
ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。
他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与
することができる。

【０１０５】（１１）本発明のＤＮＡを有する非ヒト動
物の作製 本発明のＤＮＡを用いて、本発明の膜タンパク質等を発
現するトランスジェニック非ヒト動物を作製することが
できる。非ヒト動物としては、哺乳動物（例えば、ラッ
ト、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イ
ヌ、サルなど）など（以下、動物と略記する）が挙げれ
るが、特に、マウス、ウサギなどが好適である。本発明
のＤＮＡを対象動物に転移させるにあたっては、該ＤＮ
Ａを動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に結合
した遺伝子コンストラクトとして用いるのが一般に有利
である。例えば、ウサギ由来の本発明のＤＮＡを転移さ
せる場合、これと相同性が高い動物由来のプロモーター
であって、本発明のＤＮＡを動物細胞で発現させうる各
種プロモーターの下流に結合した遺伝子コンストラクト
を、例えば、ウサギ受精卵へマイクロインジェクション
することによって本発明の膜タンパク質等を高産生する
ＤＮＡ転移動物を作出できる。このプロモーターとして
は、例えば、ウイルス由来プロモーター、メタロチオネ
イン等のユビキタスな発現プロモーターも使用しうる。

【０１０６】受精卵細胞段階における本発明のＤＮＡの
転移は、対象動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在
するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽
細胞において本発明の膜タンパク質等が存在すること
は、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞及び体細胞の全
てに本発明の膜タンパク質等を有することを意味する。
遺伝子を受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞
および体細胞の全てに本発明の膜タンパク質等を有す
る。本発明のＤＮＡ転移動物は、交配により遺伝子を安
定に保持することを確認して、該ＤＮＡ保有動物として
通常の飼育環境で飼育継代を行うことができる。さら
に、目的ＤＮＡを保有する雌雄の動物を交配することに
より、導入遺伝子を相同染色体の両方に持つホモザイゴ
ート動物を取得し、この雌雄の動物を交配することによ
りすべての子孫が該ＤＮＡを有するように繁殖継代する
ことができる。本発明のＤＮＡが転移された動物は、本
発明の膜タンパク質等が高発現させられているので、本
発明の膜タンパク質等に対するアゴニストまたはアンタ
ゴニストのスクリーニング用の動物などとして有用であ
る。本発明のＤＮＡ転移動物を、組織培養のための細胞
源として使用することもできる。例えば、本発明のＤＮ
Ａ転移マウスの組織中のＤＮＡもしくはＲＮＡを直接分
析するか、または遺伝子により発現された本発明の膜タ
ンパク質が存在する組織を分析することにより、本発明
の膜タンパク質等について分析することができる。本発
明の膜タンパク質等を有する組織の細胞を標準組織培養
技術により培養し、これらを使用して、例えば、脳や末
梢組織（例、皮膚など）由来のような一般に培養困難な
組織からの細胞の機能を研究することができる。また、
その細胞を用いることにより、例えば、各種組織の機能
を高めるような医薬の選択も可能である。また、高発現
細胞株があれば、そこから、本発明の膜タンパク質等を
単離精製することも可能である。

【０１０７】本明細書および図面において、塩基やアミ
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ
Commision on Biochemical Nomenclature による略号あ
るいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、
その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があ
り得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとす
る。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸 ｄＮＴＰ ：ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＧＴＰおよびｄＣＴＰの混合物 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム

【０１０８】 Ｇｌｙ ：グリシン Ａｌａ ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン Ｉｌｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ：システイン Ｍｅｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ：トリプトファン Ｐｒｏ ：プロリン Ａｓｎ ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸

【０１０９】また、本明細書中で繁用される置換基、保
護基および試薬を下記の記号で表記する。 Ｍｅ ：メチル基 Ｅｔ ：エチル基 Ｂｕ ：ブチル基 Ｐｈ ：フェニル基 ＴＣ ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキサミド基 Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル ＣＨＯ ：ホルミル Ｂｚｌ ：ベンジル Cl₂Bzl ：２，６−ジクロロベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ ：２−クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｒ−Ｚ ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ− １,２,３−ベンゾトリアジン ＨＯＮＢ ：1-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド ＤＣＣ ：Ｎ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド

【０１１０】本明細書の配列表の配列番号は、以下の配
列を示す。 〔配列番号：１〕本発明のヒト樹状細胞由来膜タンパク
質（ＤＣ３）のアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：２〕本発明のヒト樹状細胞由来膜タンパク
質（ＤＣ３'）のアミノ酸配列を示し、配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列の第６７番目のＭｅｔと第６８
番目のＧｌｙとの間に、この配列番号：２で表わされる
アミノ酸配列の第６８番目のＡｌａから第１１８番目の
Ｔｈｒまでの４６アミノ酸が挿入されたものである。 〔配列番号：３〕本発明のヒト樹状細胞由来膜タンパク
質（ＤＣ３）の部分アミノ酸配列（配列番号：１で示さ
れるアミノ酸配列の第７１番目〜２０１番目のアミノ酸
配列）を示す。 〔配列番号：４〕本発明のヒト樹状細胞由来膜タンパク
質（ＤＣ３'）の部分アミノ酸配列（配列番号：２で示
されるアミノ酸配列の第７０番目〜２４７番目のアミノ
酸配列）を示す。 〔配列番号：５〕配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列を有する本発明のヒト樹状細胞由来膜タンパク質（Ｄ
Ｃ３）をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。 〔配列番号：６〕配列番号：２で表わされるアミノ酸配
列を有する本発明のヒト樹状細胞由来膜タンパク質（Ｄ
Ｃ３'）をコードするＤＮＡの塩基配列を示す。 〔配列番号：７〕配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列を有する本発明のヒト樹状細胞由来膜タンパク質（Ｄ
Ｃ３）の部分ペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列を
示す。 〔配列番号：８〕配列番号：２で表わされるアミノ酸配
列を有する本発明のヒト樹状細胞由来膜タンパク質（Ｄ
Ｃ３'）の部分ペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列
を示す。

【０１１１】〔配列番号：９〕実施例１において、本発
明のヒト樹状細胞由来膜タンパク質をコードするｃＤＮ
Ａの増幅に使用した合成プライマーの塩基配列を示す。 〔配列番号：１０〕実施例１において、本発明のヒト樹
状細胞由来膜タンパク質をコードするｃＤＮＡの増幅に
使用した合成プライマーの塩基配列を示す。 〔配列番号：１１〕実施例２において、本発明のヒト樹
状細胞由来膜タンパク質の発現プラスミドの構築に使用
した合成プライマーの塩基配列を示す。 〔配列番号：１２〕実施例２において、本発明のヒト樹
状細胞由来膜タンパク質の発現プラスミドの構築に使用
した合成プライマーの塩基配列を示す。 〔配列番号：１３〕実施例２において、本発明のヒト樹
状細胞由来膜タンパク質の発現プラスミドの構築に使用
した合成プライマーの塩基配列を示す。

【０１１２】後述の実施例１で得られた形質転換体エシ
ェリヒア・コリ（Escherichia coli)ＤＨ５α／ｐＴＢ
２００５は、平成９年６月６日から通商産業省工業技術
院生命工学工業技術研究所（ＮＩＢＨ）に寄託番号ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−５９６３として、平成９年６月３日から財
団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ １６
０８８として寄託されている。また、後述の実施例１で
得られた形質転換体エシェリヒア・コリ（Escherichia
coli)ＤＨ５α／ｐＴＢ２００６は、平成９年６月６日
から通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所（Ｎ
ＩＢＨ）に寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−５９６４として、
平成９年６月３日から財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）
に寄託番号ＩＦＯ １６０８９として寄託されている。

【０１１３】

【実施例】以下に実施例を示して、本発明をより詳細に
説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものでは
ない。なお、大腸菌を用いての遺伝子操作法は、モレキ
ュラー・クローニング（Molecular cloning）に記載さ
れている方法に従った。

【０１１４】

【実施例１】ヒト樹状細胞由来膜タンパク質をコードす
るｃＤＮＡのクローニングと塩基配列の決定 本発明のヒト樹状細胞由来膜タンパク質をコードするＤ
ＮＡは以下のようなＰＣＲ法により取得した。まず凍結
保存されたヒト樹状細胞ｃＤＮＡライブラリー〔ヒュー
マン・ゲノム・サイエンス（Human Genome Science）
社、Library ID H0521〕の大腸菌ＤＨ１０Ｂを１００μ
g/mlのアンピシリンナトリウム塩（和光純薬（株））を
含むTerrific Broth（１２g/l bacto-tryptone（Difc
o），２４g/lbacto-yeast extract（Difco），２.３g/l
potassium dihydrogen phosphate，１２.５g/l potass
ium monohydrogen phosphate）で３０℃、１６時間振と
う培養し、プラスミドＤＮＡを増幅した。キアジェンプ
ラスミドキット（キアジェン社）で該プラスミドＤＮＡ
を精製し、ＤＮＡ溶液を得た。該ＤＮＡ ０.６３μｇと
ＤＮＡ合成装置（Ｏｌｉｇｏ１０００Ｍ、ベックマン
社）で合成した２種のオリゴＤＮＡ： ５'−ＧＡＴＧＡＴＴＴＧＡＣＴＣＡＧＡＧＡＴＴＣＴ
−３'（配列番号：９） ５'−ＴＣＴＧＴＣＣＴＣＣＴＴＡＣＴＡＣＣＴＣＡＣ
−３'（配列番号：１０） 各２５pmol、Takara LA PCR^TM Kit Ver.2（宝酒造
（株））に含まれる、ｄＮＴＰ Mixture ８μl，１０×
LA PCR Buffer II（Ｍｇ²⁺ plus）５μl，およびTakara
LA Taq^TM ５.０ Unitを含む混合液５０μlをサーマル
サイクラーGeneAmp^R PCR System 2400（パーキンエルマ
ー社）を用いて、９４℃、１分、続いて９８℃、１０秒
→５０℃、１０秒→７２℃、２分のサイクルを３５回繰
り返した後、７２℃、４分という条件でＰＣＲ反応を行
なった。反応終了液を１.０％アガロースを用いて電気
泳動したところ、０.８kbから０.９kb付近の位置にかけ
てＰＣＲ反応で増幅されたＤＮＡに対応するバンドを確
認した。キアクィックゲルエキストラクションキット
（キアジェン社）を用いて該ＤＮＡ断片を回収し、塩基
配列を決定するためにｐＴ７Blue Ｔ−vector（ノバジ
ェン社）のＴクローニングサイトにＤＮＡライゲーショ
ンキットバージョン２（宝酒造（株））を用いて挿入・
連結した。該ライゲーション液を大腸菌ＤＨ５α株に導
入後、アンピシリン含有ＬＢ寒天培地上で出現するアン
ピシリン耐性形質転換株のコロニーの中から４クローン
（＃１、＃２、＃３、＃４）を選択し、各々からプラス
ミドＤＮＡを調製した。制限酵素による該プラスミドＤ
ＮＡの消化パターンから、クローン＃１、＃２、および
＃３のプラスミドＤＮＡにはいずれも０.７５kbの同一
の挿入断片が含まれており、またクローン＃４には０.
９kbの別の挿入断片が含まれていることがわかった。

【０１１５】そこで、クローン＃２と＃４の各挿入ＤＮ
Ａ断片の塩基配列を決定するため、該プラスミドＤＮＡ
を鋳型に２種（ＰＲＭ−００７、ＰＲＭ−００８）の市
販プライマーＤＮＡ（東洋紡績（株））の他、ＤＮＡ合
成装置（Oligo1000M、ベックマン社）で合成したオリゴ
ＤＮＡをプライマーとし、ABI PRISM^TM Dye Terminator
Cycle Sequencing FS Ready Reaction Kit（パーキン
エルマー社）を用いたシークエンス反応を添付資料の条
件に従ってGeneAmp^R PCR System 2400で行なったのち、
該試料をＤＮＡシーケンサー373A（パーキンエルマー
社）で分析した。得られた塩基配列は遺伝子解析ソフト
レーザージーン（Lasergene、ディーエヌエースター（D
NASTAR）社）で解析した。その結果、クローン＃２のＴ
クローニングサイトには、配列番号：１で表される２０
１個のアミノ酸からなる新規膜タンパク質（ＤＣ３）を
コードする配列番号：５で表される６０３個の塩基配列
からなるオープンリーディングフレーム（Open reading
frame）を含む７６２個の塩基配列のＤＮＡ断片が含ま
れていた〔図１〕。また、クローン＃４のＴクローニン
グサイトには、配列番号：２で表される２４７個のアミ
ノ酸からなる新規膜タンパク質（ＤＣ３'）をコードす
る配列番号：６で表される７４１個の塩基配列からなる
オープンリーディングフレーム（Open reding frame）
を含む９００個の塩基配列のＤＮＡ断片が含まれていた
〔図２〕。クローン＃２のプラスミドｐＴＢ２００５を
大腸菌ＤＨ５αに形質転換し、大腸菌ＤＨα／ｐＴＢ２
００５を得た。また、クローン＃４のプラスミドｐＴＢ
２００６を大腸菌ＤＨ５αに形質転換し、大腸菌ＤＨα
／ｐＴＢ２００６を得た。

【０１１６】さらに、クローン＃２と＃４の配列比較か
ら、クローン＃４の塩基配列は、配列番号：２で表され
るクローン＃２のオープンリーディングフレームの２０
１番目のグアニンと２０２番目のグアニンの間に、配列
番号：４で表されるクローン＃４のオープンリーディン
グフレームの２０２番目のグアニンから３３９番目のア
デニンまでの１３８個の塩基配列が挿入されたものであ
ることがわかった。これにより、各塩基配列にコードさ
れる膜タンパク質も、クローン＃４のアミノ酸配列が、
配列番号：１で表されるクローン＃２の６７番目のＭｅ
ｔと６８番目のＧｌｙの間に、配列番号：２で表される
クローン＃４の６８番目のＡｌａから１１８番目のＴｈ
ｒまでの４６個のアミノ酸からなるペプチド配列が挿入
されたものであることがわかった。これら２種の膜タン
パク質は親水性プロット解析の結果から、＃２は４２番
（Ｐｒｏ）から７０番（Ｌｅｕ）、＃４は４２番（Ｐｒ
ｏ）から６９番（Ｉｌｅ）の疎水性領域がそれぞれ該タ
ンパク質の膜貫通領域にあたる、いわゆるII型膜タンパ
ク質であることが予想された〔図３および図４〕。これ
らの膜タンパク質と公知のタンパク質との相同性は、両
者ともヒトｏｘ−ＬＤＬ膜タンパク質〔ネーチャー（Na
ture）、386巻、73-77（1997）〕が最も高かったが、そ
の相同性はアミノ酸レベルで＃２が３２％、＃４が２９
％であった。また、配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列の７１番（Ｓｅｒ）から２０１番（Ｍｅｔ）にあた
る両タンパク質に共通の細胞外領域と予想されるアミノ
酸配列には、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の
第７４番、第８５番、第１０２番、第１７４番、第１８
７番、第１９５番の各Ｃｙｓ残基のようにＣ−タイプレ
クチンに特徴的なモチーフが存在し、本膜タンパク質が
新規なＣ−タイプレクチンファミリーに属するタンパク
質であることが明らかとなった。

【０１１７】

【実施例２】大腸菌における本発明の膜タンパク質の細
胞外領域組換えタンパク質の発現 発現プラスミドＧＳＴ−ＤＣ３およびＧＳＴ−ＤＣ３'
は、１）大腸菌replicationオリジン、２）アンピシリ
ン耐性遺伝子および３）ｔａｃプロモーターとその下流
にグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、
トロンビン切断部位及びマルチクローニング部位（ＭＣ
Ｓ）を含むベクターｐＧＥＸ−４Ｔ−３（ファルマシア
・バイオテック社）に由来する。本発明のＤＣ３細胞外
領域およびＤＣ３'細胞外領域をコードするＤＮＡ断片
をベクターのＭＣＳの中へサブクローニングする。従っ
て、組換えタンパク質はＧＳＴからその５'末端フレー
ムに融合され、その発現はｔａｃプロモーターの制御下
で行なわれる。目的タンパク質のＧＳＴへの融合によ
り、ＧＳＴエピトープを認識する抗体を用いて組換えタ
ンパク質を容易に検出することができ、アフィニティー
・マトリックス・グルタチオン・セファロース４Ｂを用
いて組換えタンパク質を容易に精製することができる。
プラスミド構築は次のように行なわれる。まず、本発明
のＤＣ３およびＤＣ３'の各細胞外領域をコードするＤ
ＮＡ断片はＰＣＲ法により調製するが、その際、次の２
組（ＡまたはＢ）のプライマーの組み合わせで増幅反応
を行なう。 （Ａ：ＤＣ３細胞外領域増幅用） ５'−プライマー：（配列番号：１１） ５'−ＴＧＧＡＴＣＣＡＧＣＣＣＴＴＧＴＣＣＴＣＣＴ
ＡＡＴ−３' （このプライマーは、ＢａｍＨＩ認識配列とその３'側
に配列番号７で表されるＤＣ３細胞外領域のＮ末端のコ
ーディング配列の２１塩基を有する） ３'−プライマー：（配列番号：１２） ５'−ＧＧＴＣＧＡＣＴＴＡＣＡＴＴＧＡＡＡＡＣＴＴ
ＣＴＴＣＴＣ−３' （このプライマーは、ＳａｌＩ認識配列とその３'側に
終止コドン（ＴＡＡ）と配列番号７で表されるＤＣ３細
胞外領域のＣ末端のコーディング配列の１８塩基に相補
的な配列を有する）

【０１１８】（Ｂ：ＤＣ３'細胞外領域増幅用） ５'−プライマー：（配列番号：１３） ５'−ＴＧＧＡＴＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＣＡＡＴＴＣＡ
ＧＧＡＡＧＣ−３' （このプライマーは、ＢａｍＨＩ認識配列とその３'側
に配列番号８で表されるＤＣ３'細胞外領域のＮ末端の
コーディング配列の２１塩基を有する） ３'−プライマー： 前記の配列番号：１２で表わされる塩基配列を有するプ
ライマーと同様（このプライマーは、ＳａｌＩ認識配列
とその３'側に終止コドン（ＴＡＡ）と配列番号８で表
されるＤＣ３'細胞外領域のＮ末端のコーディング配列
の１８塩基に相補的な配列を有する） 各ＰＣＲ増幅ＤＮＡ断片をＢａｍＨＩ、ＳａｌＩで消化
後、ＢａｍＨＩ、ＳａｌＩで切断し線状化したｐＧＥＸ
−４Ｔ−３に連結する。連結後、環状化したプラスミド
ＤＮＡは大腸菌形質転換体から単離し、目的のＤＮＡ断
片の挿入はシークエンス分析で確認できる。組換えタン
パク質の発現のために、発現ベクターを保持する大腸菌
ＪＭ１０９を１.０ｍＭ イソプロピル−β−チオガラク
トピラノシド（ＩＰＴＧ）の存在下で培養する。各組換
えタンパク質の発現は、ＧＳＴエピトープを認識する抗
体を含むＧＳＴ検出キット（ファルマシア・バイオテッ
ク社）を用いて確認することができる。また、グルタチ
オン・セファロース４Ｂまたは充填済みグルタチオン・
セファロース４Ｂ（いずれもファルマシア・バイオテッ
ク社）を用いて細胞抽出物から該組換えタンパク質を精
製することができる。精製された各タンパク質は、抗体
作製、リガンド結合能の測定等にそれぞれ用いることが
できる。

【０１１９】

【発明の効果】本発明の膜タンパク質，その部分ペプチ
ドまたはそれらの塩は、該膜タンパク質に対するリガン
ド、アゴニストまたはアンタゴニストなどをスクリーニ
ングするための試薬として有用である。該アゴニスト
は、癌，エイズ，感染症などの治療・予防剤として、該
アンタゴニストは、アレルギー性免疫疾患、炎症、自己
免疫疾患、エイズ、糸球体腎炎、気管支喘息、動脈硬化
症などの治療・予防剤として有用である。本発明の抗体
を用いることによって、被検液中の本発明の膜タンパク
質、その部分ペプチドまたはそれらの塩の濃度を定量す
ることができる。

【０１２０】

【配列表】

【配列番号：１】 配列の長さ：２０１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Glu Tyr His Pro Asp Leu Glu Asn Leu Asp Glu Asp Gly Tyr Thr 1 5 10 15 Gln Leu His Phe Asp Ser Gln Ser Asn Thr Arg Ile Ala Val Val Ser 20 25 30 Glu Lys Gly Ser Cys Ala Ala Ser Pro Pro Trp Arg Leu Ile Ala Val 35 40 45 Ile Leu Gly Ile Leu Cys Leu Val Ile Leu Val Ile Ala Val Val Leu 50 55 60 Gly Thr Met Gly Val Leu Ser Ser Pro Cys Pro Pro Asn Trp Ile Ile 65 70 75 80 Tyr Glu Lys Ser Cys Tyr Leu Phe Ser Met Ser Leu Asn Ser Trp Asp 85 90 95 Gly Ser Lys Arg Gln Cys Trp Gln Leu Gly Ser Asn Leu Leu Lys Ile 100 105 110 Asp Ser Ser Asn Glu Leu Gly Phe Ile Val Lys Gln Val Ser Ser Gln 115 120 125 Pro Asp Asn Ser Phe Trp Ile Gly Leu Ser Arg Pro Gln Thr Glu Val 130 135 140 Pro Trp Leu Trp Glu Asp Gly Ser Thr Phe Ser Ser Asn Leu Phe Gln 145 150 155 160 Ile Arg Thr Thr Ala Thr Gln Glu Asn Pro Ser Pro Asn Cys Val Trp 165 170 175 Ile His Val Ser Val Ile Tyr Asp Gln Leu Cys Ser Val Pro Ser Tyr 180 185 190 Ser Ile Cys Glu Lys Lys Phe Ser Met 195 200

【０１２１】

【配列番号：２】 配列の長さ：２４７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｔｙｒ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ
Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｔｈｒ １ ５
１０ １５ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ａｓｎ
Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｓｅｒ ２０ ２５
３０ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｐｒｏ
Ｐｒｏ Ｔｒｐ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｖａｌ ３５ ４０
４５ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｉｌｅ
Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｅｕ ５０ ５５
６０ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔｒｐ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ａｓｎ
Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ ６５ ７０
７５ ８０ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｌｙｓ
Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｔｈｒ ８５
９０ ９５ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ
Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｔｈｒ １００ １０５
１１０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ｐｒｏ
Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｇｌｕ １１５ １２０
１２５ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｓｅｒ
Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｔｒｐ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｓｅｒ １３０ １３５
１４０ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｔｒｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｓｅｒ
Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｓｅｒ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｌｙｓ
Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ａｓｐ １６５
１７０ １７５ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｒｐ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ
Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｔｒｐ １８０ １８５
１９０ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ
Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ａｒｇ １９５ ２００
２０５ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｓｅｒ
Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｖａｌ Ｔｒｐ Ｉｌｅ Ｈｉｓ ２１０ ２１５
２２０ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｃｙｓ
Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｉｌｅ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｍｅｔ ２４５

【０１２２】

【配列番号：３】 配列の長さ：１３１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｉｌｅ
Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｔｙｒ １ ５
１０ １５ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｔｒｐ
Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｃｙｓ ２０ ２５
３０ Ｔｒｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｙｓ
Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｌｅｕ ３５ ４０
４５ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ
Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｒｐ ５０ ５５
６０ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｇｌｕ
Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｇｌｕ Ａｓｐ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｐｈｅ
Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈｒ ８５
９０ ９５ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｖａｌ
Ｔｒｐ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｉｌｅ １００ １０５
１１０ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｓｅｒ
Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｙｓ １１５ １２０
１２５ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｍｅｔ １３０

【０１２３】

【配列番号：４】 配列の長さ：１７８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Trp Arg Ser Asn Ser Gly Ser Asn Thr Leu Glu Asn Gly Tyr Phe Leu 1 5 10 15 Ser Arg Asn Lys Glu Asn His Ser Gln Pro Thr Gln Ser Ser Leu Glu 20 25 30 Asp Ser Val Thr Pro Thr Lys Ala Val Lys Thr Thr Gly Val Leu Ser 35 40 45 Ser Pro Cys Pro Pro Asn Trp Ile Ile Tyr Glu Lys Ser Cys Tyr Leu 50 55 60 Phe Ser Met Ser Leu Asn Ser Trp Asp Gly Ser Lys Arg Gln Cys Trp 65 70 75 80 Gln Leu Gly Ser Asn Leu Leu Lys Ile Asp Ser Ser Asn Glu Leu Gly 85 90 95 Phe Ile Val Lys Gln Val Ser Ser Gln Pro Asp Asn Ser Phe Trp Ile 100 105 110 Gly Leu Ser Arg Pro Gln Thr Glu Val Pro Trp Leu Trp Glu Asp Gly 115 120 125 Ser Thr Phe Ser Ser Asn Leu Phe Gln Ile Arg Thr Thr Ala Thr Gln 130 135 140 Glu Asn Pro Ser Pro Asn Cys Val Trp Ile His Val Ser Val Ile Tyr 145 150 155 160 Asp Gln Leu Cys Ser Val Pro Ser Tyr Ser Ile Cys Glu Lys Lys Phe 165 170 175 Ser Met

【０１２４】

【配列番号：５】 配列の長さ：６０３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGGAATATC ATCCTGATTT AGAAAATTTG GATGAAGATG GATATACTCA ATTACACTTC 60 GACTCTCAAA GCAATACCAG GATAGCTGTT GTTTCAGAGA AAGGATCGTG TGCTGCATCT 120 CCTCCTTGGC GCCTCATTGC TGTAATTTTG GGAATCCTAT GCTTGGTAAT ACTGGTGATA 180 GCTGTGGTCC TGGGTACCAT GGGGGTTCTT TCCAGCCCTT GTCCTCCTAA TTGGATTATA 240 TATGAGAAGA GCTGTTATCT ATTCAGCATG TCACTAAATT CCTGGGATGG AAGTAAAAGA 300 CAATGCTGGC AACTGGGCTC TAATCTCCTA AAGATAGACA GCTCAAATGA ATTGGGATTT 360 ATAGTAAAAC AAGTGTCTTC CCAACCTGAT AATTCATTTT GGATAGGCCT TTCTCGGCCC 420 CAGACTGAGG TACCATGGCT CTGGGAGGAT GGATCAACAT TCTCTTCTAA CTTATTTCAG 480 ATCAGAACCA CAGCTACCCA AGAAAACCCA TCTCCAAATT GTGTATGGAT TCACGTGTCA 540 GTCATTTATG ACCAACTGTG TAGTGTGCCC TCATATAGTA TTTGTGAGAA GAAGTTTTCA 600 ATG 603

【０１２５】

【配列番号：６】 配列の長さ：７４１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ATGGAATATC ATCCTGATTT AGAAAATTTG GATGAAGATG GATATACTCA ATTACACTTC 60 GACTCTCAAA GCAATACCAG GATAGCTGTT GTTTCAGAGA AAGGATCGTG TGCTGCATCT 120 CCTCCTTGGC GCCTCATTGC TGTAATTTTG GGAATCCTAT GCTTGGTAAT ACTGGTGATA 180 GCTGTGGTCC TGGGTACCAT GGCTATTTGG AGATCCAATT CAGGAAGCAA CACATTGGAG 240 AATGGCTACT TTCTATCAAG AAATAAAGAG AACCACAGTC AACCCACACA ATCATCTTTA 300 GAAGACAGTG TGACTCCTAC CAAAGCTGTC AAAACCACAG GGGTTCTTTC CAGCCCTTGT 360 CCTCCTAATT GGATTATATA TGAGAAGAGC TGTTATCTAT TCAGCATGTC ACTAAATTCC 420 TGGGATGGAA GTAAAAGACA ATGCTGGCAA CTGGGCTCTA ATCTCCTAAA GATAGACAGC 480 TCAAATGAAT TGGGATTTAT AGTAAAACAA GTGTCTTCCC AACCTGATAA TTCATTTTGG 540 ATAGGCCTTT CTCGGCCCCA GACTGAGGTA CCATGGCTCT GGGAGGATGG ATCAACATTC 600 TCTTCTAACT TATTTCAGAT CAGAACCACA GCTACCCAAG AAAACCCATC TCCAAATTGT 660 GTATGGATTC ACGTGTCAGT CATTTATGAC CAACTGTGTA GTGTGCCCTC ATATAGTATT 720 TGTGAGAAGA AGTTTTCAAT G 741

【０１２６】

【配列番号：７】 配列の長さ：３９３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 TCCAGCCCTT GTCCTCCTAA TTGGATTATA TATGAGAAGA GCTGTTATCT ATTCAGCATG 60 TCACTAAATT CCTGGGATGG AAGTAAAAGA CAATGCTGGC AACTGGGCTC TAATCTCCTA 120 AAGATAGACA GCTCAAATGA ATTGGGATTT ATAGTAAAAC AAGTGTCTTC CCAACCTGAT 180 AATTCATTTT GGATAGGCCT TTCTCGGCCC CAGACTGAGG TACCATGGCT CTGGGAGGAT 240 GGATCAACAT TCTCTTCTAA CTTATTTCAG ATCAGAACCA CAGCTACCCA AGAAAACCCA 300 TCTCCAAATT GTGTATGGAT TCACGTGTCA GTCATTTATG ACCAACTGTG TAGTGTGCCC 360 TCATATAGTA TTTGTGAGAA GAAGTTTTCA ATG 393

【０１２７】

【配列番号：８】 配列の長さ：５３４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 TGGAGATCCA ATTCAGGAAG CAACACATTG GAGAATGGCT ACTTTCTATC AAGAAATAAA 60 GAGAACCACA GTCAACCCAC ACAATCATCT TTAGAAGACA GTGTGACTCC TACCAAAGCT 120 GTCAAAACCA CAGGGGTTCT TTCCAGCCCT TGTCCTCCTA ATTGGATTAT ATATGAGAAG 180 AGCTGTTATC TATTCAGCAT GTCACTAAAT TCCTGGGATG GAAGTAAAAG ACAATGCTGG 240 CAACTGGGCT CTAATCTCCT AAAGATAGAC AGCTCAAATG AATTGGGATT TATAGTAAAA 300 CAAGTGTCTT CCCAACCTGA TAATTCATTT TGGATAGGCC TTTCTCGGCC CCAGACTGAG 360 GTACCATGGC TCTGGGAGGA TGGATCAACA TTCTCTTCTA ACTTATTTCA GATCAGAACC 420 ACAGCTACCC AAGAAAACCC ATCTCCAAAT TGTGTATGGA TTCACGTGTC AGTCATTTAT 480 GACCAACTGT GTAGTGTGCC CTCATATAGT ATTTGTGAGA AGAAGTTTTC AATG 534

【０１２８】

【配列番号：９】 配列の長さ：２２ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 GATGATTTGA CTCAGAGATT CT 22

【０１２９】

【配列番号：１０】 配列の長さ：２２ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＴＣＴＧＴＣＣＴＣＣ ＴＴＡＣＴＡＣＣＴＣ ＡＣ
２２

【０１３０】

【配列番号：１１】 配列の長さ：２５ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＴＧＧＡＴＣＣＡＧＣ ＣＣＴＴＧＴＣＣＴＣ ＣＴＡ
ＡＴ ２５

【０１３１】

【配列番号：１２】 配列の長さ：２８ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 GGTCGACTTA CATTGAAAAC TTCTTCTC 28

【０１３２】

【配列番号：１３】 配列の長さ：２８ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＴＧＧＡＴＣＣＴＧＧ ＡＧＡＴＣＣＡＡＴＴ ＣＡＧ
ＧＡＡＧＣ ２８

【０１３３】

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１で得られた本発明のヒト樹状細胞由来
の新規レセプター蛋白質（ＤＣ３）をコードするＤＮＡ
の塩基配列、およびそれから推定されるアミノ酸配列を
示す。

【図２】実施例１で得られた本発明のヒト樹状細胞由来
の新規レセプター蛋白質（ＤＣ３’）をコードするＤＮ
Ａの塩基配列、およびそれから推定されるアミノ酸配列
を示す。

【図３】図１に示したアミノ酸配列をもとに作成した、
本発明のヒト樹状細胞由来レセプター蛋白質（ＤＣ３）
の親水性プロットを示す。縦軸の＋領域は親水性領域
を、−領域は疎水性領域を示す。

【図４】図２に示したアミノ酸配列をもとに作成した、
本発明のヒト樹状細胞由来レセプター蛋白質（ＤＣ
３'）の親水性プロットを示す。縦軸の＋領域は親水性
領域を、−領域は疎水性領域を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＤＺ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 39/395 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 48/00 ＡＤＵ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｃ０７Ｋ 16/28 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＣ Ｃ１２Ｎ 1/21 ＡＢＥ 15/09 ＺＮＡ ＡＢＦ Ｃ１２Ｐ 21/02 ＡＤＹ Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＤＺ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 新谷 靖 茨城県つくば市春日１丁目７番地９ 武田 春日ハイツ703号

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】配列番号：１もしくは配列番号：２で表わ
   されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
   ノ酸配列を含有することを特徴とするタンパク質または
   その塩。
2. 【請求項２】Ｃ−タイプレクチンファミリーに属する樹
   状細胞由来の膜タンパク質である請求項１記載のタンパ
   ク質。
3. 【請求項３】請求項１記載のタンパク質の部分ペプチド
   またはその塩。
4. 【請求項４】配列番号：２で表わされるアミノ酸配列と
   同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
   ンパク質をコードする塩基配列を有するＤＮＡを含有す
   るＤＮＡ。
5. 【請求項５】配列番号：６で表わされる塩基配列を有す
   る請求項４記載のＤＮＡ。
6. 【請求項６】請求項４記載のＤＮＡを含有する組換えベ
   クター。
7. 【請求項７】請求項６記載の組換えベクターで形質転換
   させた形質転換体。
8. 【請求項８】請求項１記載のタンパク質をコードするＤ
   ＮＡを含有するＤＮＡを含有する組換えベクターで形質
   転換された形質転換体を培養し、該タンパク質を生成、
   蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする請求項１
   記載のタンパク質またはその塩の製造法。
9. 【請求項９】請求項１記載のタンパク質、請求項３記載
   の部分ペプチドまたはそれらの塩に対する抗体。
10. 【請求項１０】請求項１記載のタンパク質、請求項３記
    載の部分ペプチドまたはそれらの塩を用いることを特徴
    とする請求項１記載のタンパク質またはその塩に対する
    リガンドの決定方法。
11. 【請求項１１】請求項１記載のタンパク質、請求項３記
    載の部分ペプチドまたはそれらの塩を用いることを特徴
    とするリガンドと請求項１記載のタンパク質またはその
    塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスクリ
    ーニング方法。
12. 【請求項１２】請求項１記載のタンパク質、請求項３記
    載の部分ペプチドまたはそれらの塩を含有することを特
    徴とするリガンドと請求項１記載のタンパク質またはそ
    の塩との結合性を変化させる化合物またはその塩のスク
    リーニング用キット。
13. 【請求項１３】請求項１１記載のスクリーニング方法ま
    たは請求項１２記載のスクリーニング用キットを用いて
    得られる、リガンドと請求項１記載のタンパク質または
    その塩との結合性を変化させる化合物またはその塩。
14. 【請求項１４】請求項１１記載のスクリーニング方法ま
    たは請求項１２記載のスクリーニング用キットを用いて
    得られる、リガンドと請求項１記載のタンパク質または
    その塩との結合性を変化させる化合物またはその塩を含
    有してなる医薬。