JPH1087698A - 新規タンパク質およびそのｄｎａ - Google Patents
新規タンパク質およびそのｄｎａInfo
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- JPH1087698A JPH1087698A JP9177496A JP17749697A JPH1087698A JP H1087698 A JPH1087698 A JP H1087698A JP 9177496 A JP9177496 A JP 9177496A JP 17749697 A JP17749697 A JP 17749697A JP H1087698 A JPH1087698 A JP H1087698A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】新規カベオリンの提供。
【解決手段】新規カベオリンタンパク質，その部分ペプ
チドまたはその塩、該タンパク質をコードするＤＮＡ、
該ＤＮＡを含有する組換えベクター、形質転換体、該タ
ンパク質の製造法、該タンパク質もしくはＤＮＡ含有し
てなる医薬、該タンパク質に対する抗体、該タンパク質
の機能を促進または阻害する化合物のスクリーニング方
法／スクリーニング用キット、該スクリーニングで得ら
れる化合物、該化合物を含有してなる医薬など。 【効果】本発明のタンパク質またはそれをコードするＤ
ＮＡは、例えば、糖尿病、肥満、癌、動脈硬化症、筋ジ
ストロフィーなどの種々の疾病の治療・予防剤として使
用することができる。本発明の抗体は、被検液中の本発
明のタンパク質の定量などに使用することができる。本
発明のタンパク質は、本発明のタンパク質の機能を促進
または阻害する化合物をスクリーニングするための試薬
として有用である。
チドまたはその塩、該タンパク質をコードするＤＮＡ、
該ＤＮＡを含有する組換えベクター、形質転換体、該タ
ンパク質の製造法、該タンパク質もしくはＤＮＡ含有し
てなる医薬、該タンパク質に対する抗体、該タンパク質
の機能を促進または阻害する化合物のスクリーニング方
法／スクリーニング用キット、該スクリーニングで得ら
れる化合物、該化合物を含有してなる医薬など。 【効果】本発明のタンパク質またはそれをコードするＤ
ＮＡは、例えば、糖尿病、肥満、癌、動脈硬化症、筋ジ
ストロフィーなどの種々の疾病の治療・予防剤として使
用することができる。本発明の抗体は、被検液中の本発
明のタンパク質の定量などに使用することができる。本
発明のタンパク質は、本発明のタンパク質の機能を促進
または阻害する化合物をスクリーニングするための試薬
として有用である。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、例えばカベオリン
等の機能を示す新規なタンパク質およびそのＤＮＡに関
する。
等の機能を示す新規なタンパク質およびそのＤＮＡに関
する。
【０００２】
【従来の技術】コレステロールやスフィンゴ脂質は、哺
乳動物の細胞が生きていくためには必須と考えられてい
る脂質であり、その大部分は細胞膜に存在するが特に細
胞膜上のカベオーラと呼ばれる構造と機能に深く関係し
ていることが分かっている。細胞膜には数多くのピット
（くぼみ）が存在するが、カベオーラは非被覆ピットの
一つで、直径５０〜９０nmの丸底フラスコ型をしてお
り、これまで血管内皮細胞ではトランスサイトーシスや
カルシウム代謝への関与が示唆され、またＧＰＩアンカ
ータンパクに加え、ＣＤ３６、ＡＧＥレセプターといっ
たスキャベンジャーレセプターが濃縮されていることか
ら、血管障害との関係が考えられていた。カベオーラの
構造維持およびその形成にはコレステロールおよびカベ
オリン〔J. R. Glenney Jr.、フェブス・レター、３１
４巻、４５頁、１９９２年〕が必須の因子であると考え
られている。最近、カベオリンは直接Ｇプロテインのα
サブユニットとインターラクトすることや、Ｓｒｃ様キ
ナーゼやＰＫＣα、Ｒａｓ関連ＧＴＰａｓｅとリンクし
ている可能性も示された。また、インシュリン刺激に応
じて素早くチロシンのリン酸化が起こること等から糖尿
病との関連も報告されている。さらに、カベオリンの減
少が細胞のトランスフォーメーションに伴うコンタクト
インヒビションの消去に寄与している可能性を示唆する
報告も見られ癌化との関連も考えられる。このようにカ
ベオリンはカベオーラの構造維持のみならず情報伝達等
の面からもその重要性が注目されつつある。
乳動物の細胞が生きていくためには必須と考えられてい
る脂質であり、その大部分は細胞膜に存在するが特に細
胞膜上のカベオーラと呼ばれる構造と機能に深く関係し
ていることが分かっている。細胞膜には数多くのピット
（くぼみ）が存在するが、カベオーラは非被覆ピットの
一つで、直径５０〜９０nmの丸底フラスコ型をしてお
り、これまで血管内皮細胞ではトランスサイトーシスや
カルシウム代謝への関与が示唆され、またＧＰＩアンカ
ータンパクに加え、ＣＤ３６、ＡＧＥレセプターといっ
たスキャベンジャーレセプターが濃縮されていることか
ら、血管障害との関係が考えられていた。カベオーラの
構造維持およびその形成にはコレステロールおよびカベ
オリン〔J. R. Glenney Jr.、フェブス・レター、３１
４巻、４５頁、１９９２年〕が必須の因子であると考え
られている。最近、カベオリンは直接Ｇプロテインのα
サブユニットとインターラクトすることや、Ｓｒｃ様キ
ナーゼやＰＫＣα、Ｒａｓ関連ＧＴＰａｓｅとリンクし
ている可能性も示された。また、インシュリン刺激に応
じて素早くチロシンのリン酸化が起こること等から糖尿
病との関連も報告されている。さらに、カベオリンの減
少が細胞のトランスフォーメーションに伴うコンタクト
インヒビションの消去に寄与している可能性を示唆する
報告も見られ癌化との関連も考えられる。このようにカ
ベオリンはカベオーラの構造維持のみならず情報伝達等
の面からもその重要性が注目されつつある。
【０００３】一方、カベオリンはコレステロール結合タ
ンパクとして機能することも明らかとなり、カベオーラ
とゴルジコンプレックスの両者に存在することから、こ
の間をリサイクルすることでカベオーラにコレステロー
ルを運搬している可能性が大きい。さらにＨＤＬによる
繊維芽細胞からのコレステロール引き抜きはカベオーラ
で行われていることを示唆する報告もあり、泡沫化細胞
からのコレステロール引き抜きにカベオリンが関与して
いる可能性も高いものと思われ動脈硬化との関連も考え
られる。従来のカベオリン（カベオリン−１）に加え
て、ヒトではカベオリン−２が、ラットではカベオリン
−３の遺伝子がクローニングされ〔P. E.Schererら、プ
ロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミィ・オブ
・サイエンス、９３巻、１３１頁、１９９６年；Z. Tan
gら、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
ー、２７１巻、２２５５頁、１９９６年〕、カベオリン
がマルチジーンファミリーを形成している可能性が明ら
かとなってきた。また、カベオリン−３はジストロフィ
ンとインターラクションしている可能性もあり、Duchen
ne型筋ジストロフィー発症にも関連していると考えられ
る。
ンパクとして機能することも明らかとなり、カベオーラ
とゴルジコンプレックスの両者に存在することから、こ
の間をリサイクルすることでカベオーラにコレステロー
ルを運搬している可能性が大きい。さらにＨＤＬによる
繊維芽細胞からのコレステロール引き抜きはカベオーラ
で行われていることを示唆する報告もあり、泡沫化細胞
からのコレステロール引き抜きにカベオリンが関与して
いる可能性も高いものと思われ動脈硬化との関連も考え
られる。従来のカベオリン（カベオリン−１）に加え
て、ヒトではカベオリン−２が、ラットではカベオリン
−３の遺伝子がクローニングされ〔P. E.Schererら、プ
ロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミィ・オブ
・サイエンス、９３巻、１３１頁、１９９６年；Z. Tan
gら、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
ー、２７１巻、２２５５頁、１９９６年〕、カベオリン
がマルチジーンファミリーを形成している可能性が明ら
かとなってきた。また、カベオリン−３はジストロフィ
ンとインターラクションしている可能性もあり、Duchen
ne型筋ジストロフィー発症にも関連していると考えられ
る。
【０００４】
【本発明が解決しようとする課題】新たなヒト由来のカ
ベオリンは、カベオリンが関与する種々の疾患、例え
ば、糖尿病、肥満、癌、動脈硬化症、筋ジストロフィー
などの治療・予防に役立つ新たな医薬品の開発を可能に
する。したがって、本発明の分野では、ヒト由来の新規
なカベオリンを見いだし、大量に産生する方法の開発が
望まれていた。
ベオリンは、カベオリンが関与する種々の疾患、例え
ば、糖尿病、肥満、癌、動脈硬化症、筋ジストロフィー
などの治療・予防に役立つ新たな医薬品の開発を可能に
する。したがって、本発明の分野では、ヒト由来の新規
なカベオリンを見いだし、大量に産生する方法の開発が
望まれていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ヒト心臓由
来ｃＤＮＡライブラリーから、新規な塩基配列を有する
ｃＤＮＡをクローニングすることに成功し、それにコー
ドされるタンパク質がカベオリンであることを見いだし
た。本発明者らは、これらの知見に基づいて、さらに検
討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ヒト心臓由
来ｃＤＮＡライブラリーから、新規な塩基配列を有する
ｃＤＮＡをクローニングすることに成功し、それにコー
ドされるタンパク質がカベオリンであることを見いだし
た。本発明者らは、これらの知見に基づいて、さらに検
討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
【０００６】すなわち、本発明は、（１）配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩、
（２）カベオリンである第（１）項記載のタンパク質、
（３）第（１）項記載のタンパク質の部分ペプチドまた
はその塩、（４）第（１）項記載のタンパク質をコード
する塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡ、（５）
配列番号：４で表される塩基配列を有する第（４）項記
載のＤＮＡ、（６）第（４）項記載のＤＮＡを含有する
組換えベクター、（７）第（６）項記載の組換えベクタ
ーで形質転換された形質転換体、（８）第（７）項記載
の形質転換体を培養し、第（１）項記載のタンパク質を
生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする第
（１）項記載のタンパク質またはその塩の製造方法、
（９）第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の
部分ペプチドまたはそれらの塩を含有してなる医薬、
（１０）第（４）項記載のＤＮＡを含有してなる医薬、
（１１）糖尿病、肥満、癌、動脈硬化症または筋ジスト
ロフィーの治療・予防剤である第（９）項または第（１
０）項記載の医薬、
で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩、
（２）カベオリンである第（１）項記載のタンパク質、
（３）第（１）項記載のタンパク質の部分ペプチドまた
はその塩、（４）第（１）項記載のタンパク質をコード
する塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡ、（５）
配列番号：４で表される塩基配列を有する第（４）項記
載のＤＮＡ、（６）第（４）項記載のＤＮＡを含有する
組換えベクター、（７）第（６）項記載の組換えベクタ
ーで形質転換された形質転換体、（８）第（７）項記載
の形質転換体を培養し、第（１）項記載のタンパク質を
生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする第
（１）項記載のタンパク質またはその塩の製造方法、
（９）第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の
部分ペプチドまたはそれらの塩を含有してなる医薬、
（１０）第（４）項記載のＤＮＡを含有してなる医薬、
（１１）糖尿病、肥満、癌、動脈硬化症または筋ジスト
ロフィーの治療・予防剤である第（９）項または第（１
０）項記載の医薬、
【０００７】（１２）第（１）項１記載のタンパク質、
第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩に対す
る抗体、（１３）第（１）項記載のタンパク質、第
（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩を用いる
ことを特徴とする第（１）項記載のタンパク質、第
（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を
促進または阻害する化合物のスクリーニング方法、（１
４）第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部
分ペプチドまたはそれらの塩を含有してなる第（１）項
記載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまた
はそれらの塩の機能を促進または阻害する化合物のスク
リーニング用キット、（１５）第（１３）項記載のスク
リーニング方法または第（１４）項記載のスクリーニン
グ用キットを用いて得られる、第（１）項記載のタンパ
ク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩
の機能を促進または阻害する化合物またはその塩、およ
び（１６）第（１３）項記載のスクリーニング方法また
は第（１４）項記載のスクリーニング用キットを用いて
得られる第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載
の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進または阻
害する化合物またはその塩を含有してなる医薬を提供す
る。
第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩に対す
る抗体、（１３）第（１）項記載のタンパク質、第
（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩を用いる
ことを特徴とする第（１）項記載のタンパク質、第
（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を
促進または阻害する化合物のスクリーニング方法、（１
４）第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部
分ペプチドまたはそれらの塩を含有してなる第（１）項
記載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまた
はそれらの塩の機能を促進または阻害する化合物のスク
リーニング用キット、（１５）第（１３）項記載のスク
リーニング方法または第（１４）項記載のスクリーニン
グ用キットを用いて得られる、第（１）項記載のタンパ
ク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩
の機能を促進または阻害する化合物またはその塩、およ
び（１６）第（１３）項記載のスクリーニング方法また
は第（１４）項記載のスクリーニング用キットを用いて
得られる第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載
の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進または阻
害する化合物またはその塩を含有してなる医薬を提供す
る。
【０００８】さらに、本発明は、（１７）配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配
列が、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と約８０
％以上（好ましくは約９０％以上、より好ましくは約９
５％以上）の相同性を有するアミノ酸配列である第
（１）項記載のタンパク質、（１８）配列番号：１で表
わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列
が、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１ま
たは２個以上（好ましくは、１〜２０個程度）のアミノ
酸が欠失したアミノ酸配列、配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜
２０個程度）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、配
列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１または２個
以上（好ましくは、１〜２０個程度）のアミノ酸が他の
アミノ酸で置換されたアミノ酸配列、またはそれらを
組み合わせたアミノ酸配列である第（１）項記載のタン
パク質またはその塩、（１９）配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列の第３〜１２番目、第１２〜１４番目、
第１４〜４９番目、第４９〜５６番目、第５６〜第５９
番目、第５９〜第１４２番目、第１４２〜１４９番目ま
たは（および）第１４９〜１５１番のアミノ酸配列を有
する第（３）項記載の部分ペプチド、（２０）配列番
号：１で表わされるアミノ酸配列の第３〜１４番目、第
４９〜５９番目、第５５〜第７４番目または（および）
第１４２〜１５１番目のアミノ酸配列を有する第（３）
項記載の部分ペプチド、
で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配
列が、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と約８０
％以上（好ましくは約９０％以上、より好ましくは約９
５％以上）の相同性を有するアミノ酸配列である第
（１）項記載のタンパク質、（１８）配列番号：１で表
わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列
が、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１ま
たは２個以上（好ましくは、１〜２０個程度）のアミノ
酸が欠失したアミノ酸配列、配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜
２０個程度）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、配
列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１または２個
以上（好ましくは、１〜２０個程度）のアミノ酸が他の
アミノ酸で置換されたアミノ酸配列、またはそれらを
組み合わせたアミノ酸配列である第（１）項記載のタン
パク質またはその塩、（１９）配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列の第３〜１２番目、第１２〜１４番目、
第１４〜４９番目、第４９〜５６番目、第５６〜第５９
番目、第５９〜第１４２番目、第１４２〜１４９番目ま
たは（および）第１４９〜１５１番のアミノ酸配列を有
する第（３）項記載の部分ペプチド、（２０）配列番
号：１で表わされるアミノ酸配列の第３〜１４番目、第
４９〜５９番目、第５５〜第７４番目または（および）
第１４２〜１５１番目のアミノ酸配列を有する第（３）
項記載の部分ペプチド、
【０００９】（２１）配列番号：２で表わされる塩基配
列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズす
る塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡ、（２２）
第（２０）項記載のＤＮＡを含有する組換えベクター、
（２３）第（２１）項記載の組換えベクターで形質転換
させた形質転換体、（２４）第（２２）項記載の形質転
換体を培養し、第（２１）項記載のＤＮＡにコードされ
るタンパク質を生成し、蓄積せしめ、これを採取するこ
とを特徴とする第（２１）項記載のＤＮＡでコードされ
るタンパク質またはその塩の製造法、（２５）第（２
４）項記載の製造法で製造されるタンパク質またはその
塩、（２６）第（３）項記載の部分ペプチドをコードす
るＤＮＡを含有するＤＮＡ、（２７）配列番号：７で表
わされる塩基配列を有する第（２６）項記載のＤＮＡ、
（２８）第（２６）項記載のＤＮＡを含有する組換えベ
クター、（２９）第（２８）項記載の組換えベクターで
形質転換させた形質転換体、（３０）第（２９）項記載
の形質転換体を培養し、ペプチドを生成、蓄積せしめ、
これを採取することを特徴とする第（３）項記載の部分
ペプチドまたはその塩の製造法、
列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズす
る塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡ、（２２）
第（２０）項記載のＤＮＡを含有する組換えベクター、
（２３）第（２１）項記載の組換えベクターで形質転換
させた形質転換体、（２４）第（２２）項記載の形質転
換体を培養し、第（２１）項記載のＤＮＡにコードされ
るタンパク質を生成し、蓄積せしめ、これを採取するこ
とを特徴とする第（２１）項記載のＤＮＡでコードされ
るタンパク質またはその塩の製造法、（２５）第（２
４）項記載の製造法で製造されるタンパク質またはその
塩、（２６）第（３）項記載の部分ペプチドをコードす
るＤＮＡを含有するＤＮＡ、（２７）配列番号：７で表
わされる塩基配列を有する第（２６）項記載のＤＮＡ、
（２８）第（２６）項記載のＤＮＡを含有する組換えベ
クター、（２９）第（２８）項記載の組換えベクターで
形質転換させた形質転換体、（３０）第（２９）項記載
の形質転換体を培養し、ペプチドを生成、蓄積せしめ、
これを採取することを特徴とする第（３）項記載の部分
ペプチドまたはその塩の製造法、
【００１０】（３１）コレステロール含有膜成分を、
標識した第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載
の部分ペプチドまたはそれらの塩に接触させた場合と、
コレステロール含有膜成分および試験化合物を、標識
した第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部
分ペプチドまたはそれらの塩に接触させた場合におけ
る、コレステロール含有膜成分と標識した第（１）項記
載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたは
それらの塩との結合量を測定し、比較することを特徴と
する第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部
分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進または阻害す
る化合物またはその塩のスクリーニング方法、（３２）
第（１）項記載のタンパク質と相互作用を示す、標識
した結合タンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの
塩（以下、結合タンパク質またはその部分ペプチドと略
記する）を、第（１）項記載のタンパク質を含有する細
胞またはその細胞膜画分に接触させた場合と、標識し
た結合タンパク質またはその部分ペプチドおよび試験化
合物を、第（１）項記載のタンパク質を含有する細胞ま
たはその細胞膜画分に接触させた場合における、標識し
た結合タンパク質またはその部分ペプチドと該細胞また
はその細胞膜画分との結合量を測定し、比較することを
特徴とする第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記
載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進または
阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（３３）第（１３）項、第（３１）項および第（３２）
のいずれかのスクリーニング方法、または第（１４）項
記載のスクリーニング用キットを用いて得られる、第
（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプ
チドまたはそれらの塩の機能を促進する化合物またはそ
の塩を含有することを特徴とする医薬、（３４）糖尿
病、肥満、癌、動脈硬化症または筋ジストロフィーの治
療・予防剤である第（３３）項記載の医薬、（３５）第
（１３）項、第（３１）項および第（３２）のいずれか
のスクリーニング方法、または第（１４）項記載のスク
リーニング用キットを用いて得られる、第（１）項記載
のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそ
れらの塩の機能を阻害する化合物またはその塩を含有す
ることを特徴とする医薬、（３６）虚血性心疾患または
末梢血管疾患の治療・予防剤である第（３５）項記載の
医薬、
標識した第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載
の部分ペプチドまたはそれらの塩に接触させた場合と、
コレステロール含有膜成分および試験化合物を、標識
した第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部
分ペプチドまたはそれらの塩に接触させた場合におけ
る、コレステロール含有膜成分と標識した第（１）項記
載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたは
それらの塩との結合量を測定し、比較することを特徴と
する第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部
分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進または阻害す
る化合物またはその塩のスクリーニング方法、（３２）
第（１）項記載のタンパク質と相互作用を示す、標識
した結合タンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの
塩（以下、結合タンパク質またはその部分ペプチドと略
記する）を、第（１）項記載のタンパク質を含有する細
胞またはその細胞膜画分に接触させた場合と、標識し
た結合タンパク質またはその部分ペプチドおよび試験化
合物を、第（１）項記載のタンパク質を含有する細胞ま
たはその細胞膜画分に接触させた場合における、標識し
た結合タンパク質またはその部分ペプチドと該細胞また
はその細胞膜画分との結合量を測定し、比較することを
特徴とする第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記
載の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進または
阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（３３）第（１３）項、第（３１）項および第（３２）
のいずれかのスクリーニング方法、または第（１４）項
記載のスクリーニング用キットを用いて得られる、第
（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプ
チドまたはそれらの塩の機能を促進する化合物またはそ
の塩を含有することを特徴とする医薬、（３４）糖尿
病、肥満、癌、動脈硬化症または筋ジストロフィーの治
療・予防剤である第（３３）項記載の医薬、（３５）第
（１３）項、第（３１）項および第（３２）のいずれか
のスクリーニング方法、または第（１４）項記載のスク
リーニング用キットを用いて得られる、第（１）項記載
のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそ
れらの塩の機能を阻害する化合物またはその塩を含有す
ることを特徴とする医薬、（３６）虚血性心疾患または
末梢血管疾患の治療・予防剤である第（３５）項記載の
医薬、
【００１１】（３７）第（１２）項記載の抗体と、第
（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプ
チドまたはそれらの塩とを接触させることを特徴とする
第（１）項のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチ
ドまたはそれらの塩の定量法、（３８）第（１２）項記
載の抗体と、被検液および標識化された第（１）項記載
のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそ
れらの塩とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識
化された第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載
の部分ペプチドまたはそれらの塩の割合を測定すること
を特徴とする被検液中の第（１）項記載のタンパク質、
第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の定量
法、（３９）被検液と担体上に不溶化した第（１２）項
記載の抗体および標識化された別の第（１２）項記載の
抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化
担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検
液中の第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の
部分ペプチドまたはそれらの塩の定量法、（４０）第
（４）項または第（２０）項記載のＤＮＡに相補的また
は実質的に相補的な塩基配列を有し、該ＤＮＡの発現を
抑制し得る作用を有するアンチセンスＤＮＡ、（４１）
第（４）項または第（２０）項記載のＤＮＡに実質的に
相補的な塩基配列が、該ＤＮＡに相補的な塩基配列の全
塩基配列あるいは部分塩基配列と約８０％以上（好まし
くは約９０％以上、より好ましくは約９５％以上）の相
同性を有する塩基配列である第（４０）項記載のアンチ
センスＤＮＡ、（４２）第（４０）項記載のアンチセン
スＤＮＡを含有してなる医薬、および（４３）虚血性心
疾患または末梢血管疾患の治療・予防剤である第（４
２）項記載の医薬を提供する。
（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプ
チドまたはそれらの塩とを接触させることを特徴とする
第（１）項のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチ
ドまたはそれらの塩の定量法、（３８）第（１２）項記
載の抗体と、被検液および標識化された第（１）項記載
のタンパク質、第（３）項記載の部分ペプチドまたはそ
れらの塩とを競合的に反応させ、該抗体に結合した標識
化された第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載
の部分ペプチドまたはそれらの塩の割合を測定すること
を特徴とする被検液中の第（１）項記載のタンパク質、
第（３）項記載の部分ペプチドまたはそれらの塩の定量
法、（３９）被検液と担体上に不溶化した第（１２）項
記載の抗体および標識化された別の第（１２）項記載の
抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化
担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検
液中の第（１）項記載のタンパク質、第（３）項記載の
部分ペプチドまたはそれらの塩の定量法、（４０）第
（４）項または第（２０）項記載のＤＮＡに相補的また
は実質的に相補的な塩基配列を有し、該ＤＮＡの発現を
抑制し得る作用を有するアンチセンスＤＮＡ、（４１）
第（４）項または第（２０）項記載のＤＮＡに実質的に
相補的な塩基配列が、該ＤＮＡに相補的な塩基配列の全
塩基配列あるいは部分塩基配列と約８０％以上（好まし
くは約９０％以上、より好ましくは約９５％以上）の相
同性を有する塩基配列である第（４０）項記載のアンチ
センスＤＮＡ、（４２）第（４０）項記載のアンチセン
スＤＮＡを含有してなる医薬、および（４３）虚血性心
疾患または末梢血管疾患の治療・予防剤である第（４
２）項記載の医薬を提供する。
【００１２】本発明の配列番号：１で表わされるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するタンパク質（以下、本発明のタンパク質と称す
る）は、ヒトや温血動物（例えば、モルモット、ラッ
ト、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、
サルなど）の細胞（例えば、肝細胞、脾細胞、神経細
胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム
細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮
細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫
細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラ
ルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、
単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細
胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、ま
たはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン細胞な
ど）またはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例え
ば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、
海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊
髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、
胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大
腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢
血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格
筋などに由来するタンパク質であってもよく、また合成
タンパク質であってもよい。配列番号：１で表わされる
アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、
例えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と約８
０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは約９
５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが用いられ
る。本発明の配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と
実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質とし
ては、例えば、配列番号：１と実質的に同一のアミノ酸
配列を有し、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を
含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタン
パク質などが好ましい。実質的に同質の活性としては、
例えば、コレステロール結合活性、細胞情報伝達作用、
カベオーラの形成作用などが挙げられる。実質的に同質
とは、それらの活性が性質的（例えば、生理化学的に、
または薬理学的）に同質であることを示す。したがっ
て、コレステロール結合活性などの活性が同等（例え
ば、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．５〜２０
倍、より好ましくは約０．５〜２倍）であることが好ま
しいが、これらの活性の程度や、タンパク質の分子量な
どの量的要素は異なっていてもよい。
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するタンパク質（以下、本発明のタンパク質と称す
る）は、ヒトや温血動物（例えば、モルモット、ラッ
ト、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、
サルなど）の細胞（例えば、肝細胞、脾細胞、神経細
胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム
細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮
細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫
細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラ
ルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、
単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細
胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、ま
たはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン細胞な
ど）またはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、例え
ば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、
海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊
髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、
胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大
腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢
血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格
筋などに由来するタンパク質であってもよく、また合成
タンパク質であってもよい。配列番号：１で表わされる
アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、
例えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と約８
０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは約９
５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが用いられ
る。本発明の配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と
実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質とし
ては、例えば、配列番号：１と実質的に同一のアミノ酸
配列を有し、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を
含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタン
パク質などが好ましい。実質的に同質の活性としては、
例えば、コレステロール結合活性、細胞情報伝達作用、
カベオーラの形成作用などが挙げられる。実質的に同質
とは、それらの活性が性質的（例えば、生理化学的に、
または薬理学的）に同質であることを示す。したがっ
て、コレステロール結合活性などの活性が同等（例え
ば、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．５〜２０
倍、より好ましくは約０．５〜２倍）であることが好ま
しいが、これらの活性の程度や、タンパク質の分子量な
どの量的要素は異なっていてもよい。
【００１３】また、本発明のタンパク質としては、配
列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１個または２
個以上（例えば１〜２０個程度、好ましくは１〜９個程
度、さらに好ましくは数個（例、１〜５個））のアミノ
酸が欠失したアミノ酸配列、配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列に１個または２個以上（例えば１〜２０
個程度、好ましくは１〜９個程度、さらに好ましくは数
個（例、１〜５個））のアミノ酸が付加したアミノ酸配
列、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１個
または２個以上（例えば１〜２０個程度、好ましくは１
〜９個程度、さらに好ましくは数個（例、１〜５個））
のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、
またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含有する
タンパク質などの、いわゆるムテインも含まれる。上記
のように配列番号：１で表わされるアミノ酸配列が欠
失、付加または置換されている場合、その欠失、付加ま
たは置換の位置としては、特に限定されないが、例え
ば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第３〜１
２番目、第１２〜１４番目、第１４〜４９番目、第４９
〜５６番目、第５６〜第５９番目、第５９〜第１４２番
目、第１４２〜１４９番目または第１４９〜１５１番の
アミノ酸配列以外の位置などが挙げられる。また、配列
番号：１で表わされるアミノ酸配列の第３〜１４番目、
第４９〜５９番目、第５５〜第７４番目または第１４２
〜１５１番目のアミノ酸配列以外の位置などが挙げられ
る。
列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１個または２
個以上（例えば１〜２０個程度、好ましくは１〜９個程
度、さらに好ましくは数個（例、１〜５個））のアミノ
酸が欠失したアミノ酸配列、配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列に１個または２個以上（例えば１〜２０
個程度、好ましくは１〜９個程度、さらに好ましくは数
個（例、１〜５個））のアミノ酸が付加したアミノ酸配
列、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１個
または２個以上（例えば１〜２０個程度、好ましくは１
〜９個程度、さらに好ましくは数個（例、１〜５個））
のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、
またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含有する
タンパク質などの、いわゆるムテインも含まれる。上記
のように配列番号：１で表わされるアミノ酸配列が欠
失、付加または置換されている場合、その欠失、付加ま
たは置換の位置としては、特に限定されないが、例え
ば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第３〜１
２番目、第１２〜１４番目、第１４〜４９番目、第４９
〜５６番目、第５６〜第５９番目、第５９〜第１４２番
目、第１４２〜１４９番目または第１４９〜１５１番の
アミノ酸配列以外の位置などが挙げられる。また、配列
番号：１で表わされるアミノ酸配列の第３〜１４番目、
第４９〜５９番目、第５５〜第７４番目または第１４２
〜１５１番目のアミノ酸配列以外の位置などが挙げられ
る。
【００１４】さらに、本発明のタンパク質には、上記し
たタンパク質において、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メ
チオニン残基）のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル
基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイルなどのＣ1-6ア
シル基など）で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で
切断され生成したグルタミル基がピログルタミル化した
もの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば、−
ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、インドール
基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホル
ミル基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイルなどのＣ
1-6アシル基など）で保護されているもの、あるいは糖
鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドな
ども含まれる。本明細書におけるタンパク質は、ペプチ
ド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右
端がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をはじ
めとする、本発明のタンパク質は、Ｃ末端が通常カルボ
キシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレート(−Ｃ
ＯＯ-）であるが、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮＨ2）また
はエステル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。ここでエス
テル基のＲとしては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、
イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどのＣ1-6アルキル
基、Ｃ3-8シクロアルキル（例、シクロペンチル、シク
ロヘキシル）などのシクロアルキル基、Ｃ6-12アリール
基（例、フェニル、α−ナフチル）などのアリール基、
Ｃ7-14アラルキル基（例、ベンジル、フェネチルなどの
フェニル−Ｃ1-2アルキル、もしくはα−ナフチルメチ
ルなどのα−ナフチル−Ｃ1-2アルキル）などのアラル
キル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロ
イルオキシメチル基などが用いられる。本発明のタンパ
ク質がＣ末端以外にカルボキシル基またはカルボキシレ
ートを有している場合、それらの基がアミド化またはエ
ステル化されているものも本発明のポリペプチドに含ま
れる。この時のエステルとしては、例えば上記したＣ末
端のエステルなどが用いられる。
たタンパク質において、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メ
チオニン残基）のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル
基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイルなどのＣ1-6ア
シル基など）で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で
切断され生成したグルタミル基がピログルタミル化した
もの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば、−
ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、インドール
基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホル
ミル基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイルなどのＣ
1-6アシル基など）で保護されているもの、あるいは糖
鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチドな
ども含まれる。本明細書におけるタンパク質は、ペプチ
ド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右
端がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をはじ
めとする、本発明のタンパク質は、Ｃ末端が通常カルボ
キシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレート(−Ｃ
ＯＯ-）であるが、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮＨ2）また
はエステル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。ここでエス
テル基のＲとしては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、
イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどのＣ1-6アルキル
基、Ｃ3-8シクロアルキル（例、シクロペンチル、シク
ロヘキシル）などのシクロアルキル基、Ｃ6-12アリール
基（例、フェニル、α−ナフチル）などのアリール基、
Ｃ7-14アラルキル基（例、ベンジル、フェネチルなどの
フェニル−Ｃ1-2アルキル、もしくはα−ナフチルメチ
ルなどのα−ナフチル−Ｃ1-2アルキル）などのアラル
キル基のほか、経口用エステルとして汎用されるピバロ
イルオキシメチル基などが用いられる。本発明のタンパ
ク質がＣ末端以外にカルボキシル基またはカルボキシレ
ートを有している場合、それらの基がアミド化またはエ
ステル化されているものも本発明のポリペプチドに含ま
れる。この時のエステルとしては、例えば上記したＣ末
端のエステルなどが用いられる。
【００１５】より具体的には、本発明のタンパク質は、
例えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を含有
するヒト心臓由来のカベオリンなどが用いられる〔図
１〕。本発明のタンパク質の塩としては、生理学的に許
容される酸（例、無機酸、有機酸）または塩基（例、ア
ルカリ金属）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的
に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩として
は、例えば無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素
酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ
酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、
酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタン
スルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いら
れる。
例えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を含有
するヒト心臓由来のカベオリンなどが用いられる〔図
１〕。本発明のタンパク質の塩としては、生理学的に許
容される酸（例、無機酸、有機酸）または塩基（例、ア
ルカリ金属）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的
に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩として
は、例えば無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素
酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ
酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、
酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタン
スルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いら
れる。
【００１６】本発明のタンパク質の部分ペプチドとして
は、前記した本発明のタンパク質の部分ペプチドであれ
ば何れのものであってもよいが、例えば、本発明のタン
パク質の構成アミノ酸配列のうち少なくとも１０個以
上、好ましくは５０個以上、より好ましくは１００個以
上のアミノ酸配列を有するペプチドであって、好ましく
は、コレステロール結合活性、細胞情報伝達作用、カベ
オーラの形成作用などの活性を有するペプチドなどが用
いられる。具体的には、例えば、配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列の第３〜１２番目、第１２〜１４番
目、第１４〜４９番目、第４９〜５６番目、第５６〜第
５９番目、第５９〜第１４２番目、第１４２〜１４９番
目または（および）第１４９〜１５１番のアミノ酸配列
を含有する部分ペプチドや、配列番号：１で表わされる
アミノ酸配列の第３〜１４番目、第４９〜５９番目、第
５５〜第７４番目または（および）第１４２〜１５１番
目のアミノ酸配列を含有する部分ペプチドなどが用いら
れる。本発明の部分ペプチドは、上記アミノ酸配列中の
１個または２個以上（例えば、１〜５個）のアミノ酸が
欠失し、または、そのアミノ酸配列に１個または２個以
上（例えば、１〜５個）のアミノ酸が付加し、または、
そのアミノ酸配列の１個または２個以上（例えば、１〜
５個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよ
い。また、本発明の部分ペプチドは、Ｃ末端が通常カル
ボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレート(−
ＣＯＯ-）であるが、前記した本発明のタンパク質と同
様に、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮＨ2）またはエステル
（−ＣＯＯＲ）であってもよい。さらに、本発明の部分
ペプチドには、前記した本発明のタンパク質と同様に、
Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ
基が保護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切
断され生成したグルタミル基がピログルタミル化したも
の、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基
で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆ
る糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。本発
明のタンパク質の部分ペプチドの塩としては、上記した
タンパク質と同様の塩が用いられる。本発明の部分ペプ
チドは、抗体作成のための抗原として用いることができ
るので、必ずしもコレステロール結合活性、細胞情報伝
達作用、カベオーラの形成作用などの活性を有する必要
はない。
は、前記した本発明のタンパク質の部分ペプチドであれ
ば何れのものであってもよいが、例えば、本発明のタン
パク質の構成アミノ酸配列のうち少なくとも１０個以
上、好ましくは５０個以上、より好ましくは１００個以
上のアミノ酸配列を有するペプチドであって、好ましく
は、コレステロール結合活性、細胞情報伝達作用、カベ
オーラの形成作用などの活性を有するペプチドなどが用
いられる。具体的には、例えば、配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列の第３〜１２番目、第１２〜１４番
目、第１４〜４９番目、第４９〜５６番目、第５６〜第
５９番目、第５９〜第１４２番目、第１４２〜１４９番
目または（および）第１４９〜１５１番のアミノ酸配列
を含有する部分ペプチドや、配列番号：１で表わされる
アミノ酸配列の第３〜１４番目、第４９〜５９番目、第
５５〜第７４番目または（および）第１４２〜１５１番
目のアミノ酸配列を含有する部分ペプチドなどが用いら
れる。本発明の部分ペプチドは、上記アミノ酸配列中の
１個または２個以上（例えば、１〜５個）のアミノ酸が
欠失し、または、そのアミノ酸配列に１個または２個以
上（例えば、１〜５個）のアミノ酸が付加し、または、
そのアミノ酸配列の１個または２個以上（例えば、１〜
５個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよ
い。また、本発明の部分ペプチドは、Ｃ末端が通常カル
ボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレート(−
ＣＯＯ-）であるが、前記した本発明のタンパク質と同
様に、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮＨ2）またはエステル
（−ＣＯＯＲ）であってもよい。さらに、本発明の部分
ペプチドには、前記した本発明のタンパク質と同様に、
Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ
基が保護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切
断され生成したグルタミル基がピログルタミル化したも
の、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基
で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆ
る糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。本発
明のタンパク質の部分ペプチドの塩としては、上記した
タンパク質と同様の塩が用いられる。本発明の部分ペプ
チドは、抗体作成のための抗原として用いることができ
るので、必ずしもコレステロール結合活性、細胞情報伝
達作用、カベオーラの形成作用などの活性を有する必要
はない。
【００１７】本発明のタンパク質、その部分ペプチドま
たはその塩は、前述したヒトや温血動物の細胞または組
織から自体公知のタンパク質またはペプチドの単離・精
製方法によって製造することもできるし、後述する本発
明のタンパク質または部分ペプチドをコードするＤＮＡ
を含有する組換えネクターで形質転換された形質転換体
を培養することによっても製造することができる。ま
た、後述のペプチド合成法に準じて製造することもでき
る。ヒトや温血動物の組織または細胞から製造する場
合、ヒトや温血動物の組織または細胞をホモジナイズし
た後、酸などで抽出を行ない、該抽出液を逆相クロマト
グラフィー、イオン交換クロマトグラフィーなどのクロ
マトグラフィーを組み合わせることにより単離、精製す
ることができる。本発明のタンパク質、その部分ペプチ
ドもしくはそれらの塩またはそのアミド体の合成には、
通常市販のペプチド合成用樹脂を用いることができる。
そのような樹脂としては、例えば、クロロメチル樹脂、
ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、ア
ミノメチル樹脂、４−ベンジルオキシベンジルアルコー
ル樹脂、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、PAM樹
脂、４−ヒドロキシメチルメチルフェニルアセトアミド
メチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、４−（2',4'-ジ
メトキシフェニル−ヒドロキシメチル）フェノキシ樹
脂、４−（2',4'-ジメトキシフェニル−Fmocアミノエチ
ル）フェノキシ樹脂などを用いることができる。このよ
うな樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に保
護したアミノ酸を、目的とするタンパク質またはペプチ
ドの配列通りに、自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂
上で縮合させる。反応の最後に樹脂からタンパク質また
はペプチドを切り出すと同時に各種保護基を除去し、さ
らに高希釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を
実施し、目的のタンパク質またはそのアミド体を取得す
る。
たはその塩は、前述したヒトや温血動物の細胞または組
織から自体公知のタンパク質またはペプチドの単離・精
製方法によって製造することもできるし、後述する本発
明のタンパク質または部分ペプチドをコードするＤＮＡ
を含有する組換えネクターで形質転換された形質転換体
を培養することによっても製造することができる。ま
た、後述のペプチド合成法に準じて製造することもでき
る。ヒトや温血動物の組織または細胞から製造する場
合、ヒトや温血動物の組織または細胞をホモジナイズし
た後、酸などで抽出を行ない、該抽出液を逆相クロマト
グラフィー、イオン交換クロマトグラフィーなどのクロ
マトグラフィーを組み合わせることにより単離、精製す
ることができる。本発明のタンパク質、その部分ペプチ
ドもしくはそれらの塩またはそのアミド体の合成には、
通常市販のペプチド合成用樹脂を用いることができる。
そのような樹脂としては、例えば、クロロメチル樹脂、
ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、ア
ミノメチル樹脂、４−ベンジルオキシベンジルアルコー
ル樹脂、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、PAM樹
脂、４−ヒドロキシメチルメチルフェニルアセトアミド
メチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、４−（2',4'-ジ
メトキシフェニル−ヒドロキシメチル）フェノキシ樹
脂、４−（2',4'-ジメトキシフェニル−Fmocアミノエチ
ル）フェノキシ樹脂などを用いることができる。このよ
うな樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に保
護したアミノ酸を、目的とするタンパク質またはペプチ
ドの配列通りに、自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂
上で縮合させる。反応の最後に樹脂からタンパク質また
はペプチドを切り出すと同時に各種保護基を除去し、さ
らに高希釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を
実施し、目的のタンパク質またはそのアミド体を取得す
る。
【００１８】上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、
タンパク質またはペプチド合成に使用できる各種活性化
試薬を用いることができるが、特に、カルボジイミド類
がよい。カルボジイミド類としては、例えば、DCC、N,
N'-ジイソプロピルカルボジイミド、N-エチル-N'-(3-ジ
メチルアミノプロリル）カルボジイミドなどが用いられ
る。これらによる活性化には、ラセミ化抑制添加剤（例
えば、HOBt, HOOBt)とともに保護アミノ酸を直接樹脂に
添加するか、または、対称酸無水物またはHOBtエステル
あるいはHOOBtエステルとしてあらかじめ保護アミノ酸
の活性化を行なった後に、樹脂に添加することができ
る。保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用いられる
溶媒としては、ペプチド縮合反応に使用しうることが知
られている溶媒から適宜選択されうる。例えば、Ｎ，Ｎ
−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、クロ
ロホルム、トリフルオロエタノール、ジメチルスルホキ
シド、DMF、ジメチルスルホキシド、ピリジン、クロロ
ホルム、ジオキサン、塩化メチレン、テトラヒドロフラ
ン、アセトニトリル、酢酸エチル、Ｎ-メチルピロリド
ンあるいはこれらの適宜の混合物などが用いられる。反
応温度はタンパク質またはペプチド結合形成反応に使用
され得ることが知られている範囲から適宜選択され、通
常約−２０℃〜５０℃の範囲から適宜選択される。活性
化されたアミノ酸誘導体は、樹脂上のアミノ酸残基に対
して、通常約１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒド
リン反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合に
は保護基の脱離を行なうことなく縮合反応を繰り返すこ
とにより十分な縮合を行なうことができる。反応を繰り
返しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸ま
たはアセチルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をア
セチル化することによって、後の反応に影響を与えない
ようにすることができる。
タンパク質またはペプチド合成に使用できる各種活性化
試薬を用いることができるが、特に、カルボジイミド類
がよい。カルボジイミド類としては、例えば、DCC、N,
N'-ジイソプロピルカルボジイミド、N-エチル-N'-(3-ジ
メチルアミノプロリル）カルボジイミドなどが用いられ
る。これらによる活性化には、ラセミ化抑制添加剤（例
えば、HOBt, HOOBt)とともに保護アミノ酸を直接樹脂に
添加するか、または、対称酸無水物またはHOBtエステル
あるいはHOOBtエステルとしてあらかじめ保護アミノ酸
の活性化を行なった後に、樹脂に添加することができ
る。保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用いられる
溶媒としては、ペプチド縮合反応に使用しうることが知
られている溶媒から適宜選択されうる。例えば、Ｎ，Ｎ
−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、クロ
ロホルム、トリフルオロエタノール、ジメチルスルホキ
シド、DMF、ジメチルスルホキシド、ピリジン、クロロ
ホルム、ジオキサン、塩化メチレン、テトラヒドロフラ
ン、アセトニトリル、酢酸エチル、Ｎ-メチルピロリド
ンあるいはこれらの適宜の混合物などが用いられる。反
応温度はタンパク質またはペプチド結合形成反応に使用
され得ることが知られている範囲から適宜選択され、通
常約−２０℃〜５０℃の範囲から適宜選択される。活性
化されたアミノ酸誘導体は、樹脂上のアミノ酸残基に対
して、通常約１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒド
リン反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合に
は保護基の脱離を行なうことなく縮合反応を繰り返すこ
とにより十分な縮合を行なうことができる。反応を繰り
返しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸ま
たはアセチルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をア
セチル化することによって、後の反応に影響を与えない
ようにすることができる。
【００１９】原料のアミノ基の保護基としては、例え
ば、Ｚ、Boc、ターシャリーアミルオキシカルボニル、
イソボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジル
オキシカルボニル、Cl-Z、Br-Z、アダマンチルオキシカ
ルボニル、トリフルオロアセチル、フタリル、ホルミ
ル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホス
フィノチオイル、Fmocなどが用いられる。カルボキシル
基は、例えば、アルキルエステル化（例えば、メチル、
エチル、プロピル、ブチル、ターシャリーブチル、シク
ロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロ
オクチル、２−アダマンチルなど鎖状もしくは環状のア
ルキルエステル化）、アラルキルエステル化（例えば、
ベンジルエステル化、４−ニトロベンジルエステル化、
４−メトキシベンジルエステル化、４−クロロベンジル
エステル化、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシン
エステル化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド化、
ターシャリーブトキシカルボニルヒドラジド化、トリチ
ルヒドラジド化などによって保護することができる。セ
リンの水酸基は、例えば、エステル化またはエーテル化
によって保護することができる。このエステル化に適す
る基としては、例えば、アセチル基などの低級アルカノ
イル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジルオキ
シカルボニル基、エトキシカルボニル基などのアシルか
ら誘導される基などが用いられる。また、エーテル化に
適する基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒドロ
ピラニル基、ターシャリーブチル基などが用いられる。
チロシンのフェノール性水酸基の保護基としては、例え
ば、Bzl、Cl2-Bzl、２−ニトロベンジル、Br-Z、ターシ
ャリーブチルなどが用いられる。ヒスチジンのイミダゾ
ールの保護基としては、例えば、Tos、４-メトキシ-2,
3,6-トリメチルベンゼンスルホニル、DNP、ベンジルオ
キシメチル、Bom、Boc、Trt、Fmocなどが用いられる。
ば、Ｚ、Boc、ターシャリーアミルオキシカルボニル、
イソボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジル
オキシカルボニル、Cl-Z、Br-Z、アダマンチルオキシカ
ルボニル、トリフルオロアセチル、フタリル、ホルミ
ル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホス
フィノチオイル、Fmocなどが用いられる。カルボキシル
基は、例えば、アルキルエステル化（例えば、メチル、
エチル、プロピル、ブチル、ターシャリーブチル、シク
ロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロ
オクチル、２−アダマンチルなど鎖状もしくは環状のア
ルキルエステル化）、アラルキルエステル化（例えば、
ベンジルエステル化、４−ニトロベンジルエステル化、
４−メトキシベンジルエステル化、４−クロロベンジル
エステル化、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシン
エステル化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド化、
ターシャリーブトキシカルボニルヒドラジド化、トリチ
ルヒドラジド化などによって保護することができる。セ
リンの水酸基は、例えば、エステル化またはエーテル化
によって保護することができる。このエステル化に適す
る基としては、例えば、アセチル基などの低級アルカノ
イル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジルオキ
シカルボニル基、エトキシカルボニル基などのアシルか
ら誘導される基などが用いられる。また、エーテル化に
適する基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒドロ
ピラニル基、ターシャリーブチル基などが用いられる。
チロシンのフェノール性水酸基の保護基としては、例え
ば、Bzl、Cl2-Bzl、２−ニトロベンジル、Br-Z、ターシ
ャリーブチルなどが用いられる。ヒスチジンのイミダゾ
ールの保護基としては、例えば、Tos、４-メトキシ-2,
3,6-トリメチルベンゼンスルホニル、DNP、ベンジルオ
キシメチル、Bom、Boc、Trt、Fmocなどが用いられる。
【００２０】原料のカルボキシル基の活性化されたもの
としては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノー
ル、2,4,5-トリクロロフェノール、2,4-ジニトロフェノ
ール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノー
ル、HONB、N-ヒドロキシスクシミド、N-ヒドロキシフタ
ルイミド、HOBt）とのエステル〕などが用いられる。原
料のアミノ基の活性化されたものとしては、例えば、対
応するリン酸アミドが用いられる。保護基の除去（脱
離）方法としては、例えば、Pd黒あるいはPd-炭素など
の触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、また、
無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタ
ンスルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれらの混合
液などによる酸処理や、ジイソプロピルエチルアミン、
トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジンなどによる
塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによる還元
なども用いられる。上記酸処理による脱離反応は、一般
に約−２０℃〜４０℃の温度で行われるが、酸処理にお
いてはアニソール、フェノール、チオアニソール、メタ
クレゾール、パラクレゾール、ジメチルスルフィド、1,
4-ブタンジチオール、1,2-エタンジチオールのようなカ
チオン捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンの
イミダゾール保護基として用いられる2,4-ジニトロフェ
ニル基はチオフェノール処理により除去され、トリプト
ファンのインドール保護基として用いられるホルミル基
は上記の1,2-エタンジチオール、1,4-ブタンジチオール
などの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナ
トリウム、希アンモニアなどによるアルカリ処理によっ
ても除去される。原料の反応に関与すべきでない官能基
の保護および保護基、ならびにその保護基の脱離、反応
に関与する官能基の活性化などは公知の基あるいは公知
の手段から適宜選択しうる。
としては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノー
ル、2,4,5-トリクロロフェノール、2,4-ジニトロフェノ
ール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノー
ル、HONB、N-ヒドロキシスクシミド、N-ヒドロキシフタ
ルイミド、HOBt）とのエステル〕などが用いられる。原
料のアミノ基の活性化されたものとしては、例えば、対
応するリン酸アミドが用いられる。保護基の除去（脱
離）方法としては、例えば、Pd黒あるいはPd-炭素など
の触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、また、
無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオロメタ
ンスルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれらの混合
液などによる酸処理や、ジイソプロピルエチルアミン、
トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジンなどによる
塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによる還元
なども用いられる。上記酸処理による脱離反応は、一般
に約−２０℃〜４０℃の温度で行われるが、酸処理にお
いてはアニソール、フェノール、チオアニソール、メタ
クレゾール、パラクレゾール、ジメチルスルフィド、1,
4-ブタンジチオール、1,2-エタンジチオールのようなカ
チオン捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンの
イミダゾール保護基として用いられる2,4-ジニトロフェ
ニル基はチオフェノール処理により除去され、トリプト
ファンのインドール保護基として用いられるホルミル基
は上記の1,2-エタンジチオール、1,4-ブタンジチオール
などの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナ
トリウム、希アンモニアなどによるアルカリ処理によっ
ても除去される。原料の反応に関与すべきでない官能基
の保護および保護基、ならびにその保護基の脱離、反応
に関与する官能基の活性化などは公知の基あるいは公知
の手段から適宜選択しうる。
【００２１】タンパク質またはペプチドのアミド体を得
る別の方法としては、まず、カルボキシ末端アミノ酸の
α−カルボキシル基をアミド化した後、アミノ基側にペ
プチド鎖を所望の鎖長まで延ばした後、α−アミノ基の
保護基を除いたカルボキシル末端側ペプチドと所望ペプ
チドからカルボキシル末端側を除いたアミノ末端側ペプ
チドのα−カルボキシル基の保護基のみを除去し、α−
アミノ基や側鎖官能基に上記したような適当な保護基を
付けた保護ペプチドを上記したような混合溶媒中で縮合
させる。縮合反応の詳細については上記と同様である。
縮合により得られた保護タンパク質を精製した後、上記
方法によりすべての保護基を除去し、所望の粗タンパク
質または粗ペプチドを得ることができる。この粗タンパ
ク質または粗ペプチドは既知の各種精製手段を駆使して
精製し、主要画分を凍結乾燥することで、所望のタンパ
ク質、その部分ペプチドまたはそのアミド体を得ること
ができる。タンパク質またはペプチドのエステル体を得
るには、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基
を所望のアルコール類と縮合しアミノ酸エステルとした
後、タンパク質のアミド体と同様にして、所望のタンパ
ク質またはペプチドのエステル体を得ることができる。
る別の方法としては、まず、カルボキシ末端アミノ酸の
α−カルボキシル基をアミド化した後、アミノ基側にペ
プチド鎖を所望の鎖長まで延ばした後、α−アミノ基の
保護基を除いたカルボキシル末端側ペプチドと所望ペプ
チドからカルボキシル末端側を除いたアミノ末端側ペプ
チドのα−カルボキシル基の保護基のみを除去し、α−
アミノ基や側鎖官能基に上記したような適当な保護基を
付けた保護ペプチドを上記したような混合溶媒中で縮合
させる。縮合反応の詳細については上記と同様である。
縮合により得られた保護タンパク質を精製した後、上記
方法によりすべての保護基を除去し、所望の粗タンパク
質または粗ペプチドを得ることができる。この粗タンパ
ク質または粗ペプチドは既知の各種精製手段を駆使して
精製し、主要画分を凍結乾燥することで、所望のタンパ
ク質、その部分ペプチドまたはそのアミド体を得ること
ができる。タンパク質またはペプチドのエステル体を得
るには、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基
を所望のアルコール類と縮合しアミノ酸エステルとした
後、タンパク質のアミド体と同様にして、所望のタンパ
ク質またはペプチドのエステル体を得ることができる。
【００２２】本発明の部分ペプチドまたはその塩は、自
体公知のペプチドの合成法に従って、あるいは本発明の
タンパク質を適当なペプチダーゼで切断することによっ
て製造することができる。ペプチドの合成法としては、
例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによっても良
い。すなわち、本発明のタンパク質を構成し得る部分ペ
プチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成
物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより
目的のペプチドを製造することができる。公知の縮合方
法や保護基の脱離としては、例えば、以下の〜に記
載された方法が挙げられる。 M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド・シン
セシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年) SchroederおよびLuebke、ザ・ペプチド(The Peptid
e), Academic Press, NewYork (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年） 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タン
パク質の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド合成
・広川書店 また、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留
・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー
・再結晶などを組み合わせて本発明のタンパク質を精製
単離することができる。上記方法で得られるタンパク質
が遊離体である場合は、自体公知の方法あるいはそれに
準じる方法によって適当な塩に変換することができる
し、逆に塩で得られた場合は、自体公知の方法あるいは
それに準じる方法によって遊離体または他の塩に変換す
ることができる。
体公知のペプチドの合成法に従って、あるいは本発明の
タンパク質を適当なペプチダーゼで切断することによっ
て製造することができる。ペプチドの合成法としては、
例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによっても良
い。すなわち、本発明のタンパク質を構成し得る部分ペ
プチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成
物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより
目的のペプチドを製造することができる。公知の縮合方
法や保護基の脱離としては、例えば、以下の〜に記
載された方法が挙げられる。 M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド・シン
セシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年) SchroederおよびLuebke、ザ・ペプチド(The Peptid
e), Academic Press, NewYork (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年） 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タン
パク質の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド合成
・広川書店 また、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留
・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー
・再結晶などを組み合わせて本発明のタンパク質を精製
単離することができる。上記方法で得られるタンパク質
が遊離体である場合は、自体公知の方法あるいはそれに
準じる方法によって適当な塩に変換することができる
し、逆に塩で得られた場合は、自体公知の方法あるいは
それに準じる方法によって遊離体または他の塩に変換す
ることができる。
【００２３】本発明のタンパク質をコードするＤＮＡと
しては、前述した本発明のタンパク質をコードする塩基
配列を含有するものであればいかなるものであってもよ
い。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、
前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組
織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれで
もよい。ライブラリーに使用するベクターは、バクテリ
オファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなど
いずれであってもよい。また、前記した細胞・組織より
ｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接Reverse Tran
scriptase Polymerase Chain Reaction（以下、ＲＴ-Ｐ
ＣＲ法と略称する）によって増幅することもできる。具
体的には、本発明の配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
するタンパク質をコードするＤＮＡとしては、例えば、
配列番号：２で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、
または配列番号：２で表わされる塩基配列とハイストリ
ンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有
し、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有するタ
ンパク質と実質的に同質の活性（例、コレステロール結
合活性、泡沫化細胞からのコレステロール抜き出し活
性、細胞情報伝達作用、カベオーラ構造の形成作用な
ど）を有するタンパク質をコードする塩基配列を含有す
るＤＮＡであれば何れのものでもよい。配列番号：２で
表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズする塩基配列としては、例えば、配列番
号：２で表わされる塩基配列と約８０％以上、好ましく
は約９０％以上、好ましくは約９５％以上の相同性を有
する塩基配列などが用いられる。
しては、前述した本発明のタンパク質をコードする塩基
配列を含有するものであればいかなるものであってもよ
い。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、
前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組
織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれで
もよい。ライブラリーに使用するベクターは、バクテリ
オファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなど
いずれであってもよい。また、前記した細胞・組織より
ｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接Reverse Tran
scriptase Polymerase Chain Reaction（以下、ＲＴ-Ｐ
ＣＲ法と略称する）によって増幅することもできる。具
体的には、本発明の配列番号：１で表わされるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
するタンパク質をコードするＤＮＡとしては、例えば、
配列番号：２で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、
または配列番号：２で表わされる塩基配列とハイストリ
ンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有
し、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有するタ
ンパク質と実質的に同質の活性（例、コレステロール結
合活性、泡沫化細胞からのコレステロール抜き出し活
性、細胞情報伝達作用、カベオーラ構造の形成作用な
ど）を有するタンパク質をコードする塩基配列を含有す
るＤＮＡであれば何れのものでもよい。配列番号：２で
表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズする塩基配列としては、例えば、配列番
号：２で表わされる塩基配列と約８０％以上、好ましく
は約９０％以上、好ましくは約９５％以上の相同性を有
する塩基配列などが用いられる。
【００２４】ハイブリダイゼーションは、自体公知の方
法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・
クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook
etal., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記
載の方法などに従って行なうことができる。また、市販
のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記
載の方法に従って行なうことができる。より好ましく
は、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことが
できる。ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナ
トリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜
２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０
〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９
ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。より具体
的には、配列番号：１のアミノ酸配列を含有するタンパ
ク質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表わ
される塩基配列〔図１の第４２番目〜５７５番目の塩基
配列〕を有するＤＮＡなどが用いられる。
法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・
クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook
etal., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記
載の方法などに従って行なうことができる。また、市販
のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記
載の方法に従って行なうことができる。より好ましく
は、ハイストリンジェントな条件に従って行なうことが
できる。ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナ
トリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜
２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０
〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９
ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。より具体
的には、配列番号：１のアミノ酸配列を含有するタンパ
ク質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表わ
される塩基配列〔図１の第４２番目〜５７５番目の塩基
配列〕を有するＤＮＡなどが用いられる。
【００２５】本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡ
としては、前述した本発明の部分ペプチドをコードする
塩基配列を含有するものであればいかなるものであって
もよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリ
ー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞
・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいず
れでもよい。ライブラリーに使用するベクターは、バク
テリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミド
などいずれであってもよい。また、前記した細胞・組織
よりｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接ＲＴ-Ｐ
ＣＲ法によって増幅することもできる。具体的には、例
えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第３〜
１２番目のアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコード
するＤＮＡとしては、配列番号：２で表わされる塩基配
列の第７〜３６番目の塩基配列を有するＤＮＡを含有す
るＤＮＡなどが、配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列の第１２〜１４番目のアミノ酸配列を有する部分ペプ
チドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表わ
される塩基配列の第３４〜４２番目の塩基配列を有する
ＤＮＡを含有するＤＮＡなどが、配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列の第１４〜４９番目のアミノ酸配列を
有する部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列
番号：２で表わされる塩基配列の第４０〜１４７番目の
塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡなどが、配列
番号：１で表わされるアミノ酸配列の第４９〜５６番目
のアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコードするＤＮ
Ａとしては、配列番号：２で表わされる塩基配列の第１
４５〜１６８番目の塩基配列を有するＤＮＡを含有する
ＤＮＡなどが、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列
の第５６〜５９番目のアミノ酸配列を有する部分ペプチ
ドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表わさ
れる塩基配列の第１６６〜１７７番目の塩基配列を有す
るＤＮＡを含有するＤＮＡなどが、配列番号：１で表わ
されるアミノ酸配列の第５９〜１４２番目のアミノ酸配
列を有する部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、
配列番号：２で表わされる塩基配列の第１７５〜４２６
番目の塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡなど
が、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第１４２
〜１４９番目のアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコ
ードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表わされる塩
基配列の第４２４〜４４７番目の塩基配列を有するＤＮ
Ａを含有するＤＮＡなどが、配列番号：１で表わされる
アミノ酸配列の第１４９〜１５１番目のアミノ酸配列を
有する部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列
番号：２で表わされる塩基配列の第４４５〜４５３番目
の塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡなどが用い
られ。
としては、前述した本発明の部分ペプチドをコードする
塩基配列を含有するものであればいかなるものであって
もよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリ
ー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞
・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいず
れでもよい。ライブラリーに使用するベクターは、バク
テリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミド
などいずれであってもよい。また、前記した細胞・組織
よりｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接ＲＴ-Ｐ
ＣＲ法によって増幅することもできる。具体的には、例
えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第３〜
１２番目のアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコード
するＤＮＡとしては、配列番号：２で表わされる塩基配
列の第７〜３６番目の塩基配列を有するＤＮＡを含有す
るＤＮＡなどが、配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列の第１２〜１４番目のアミノ酸配列を有する部分ペプ
チドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表わ
される塩基配列の第３４〜４２番目の塩基配列を有する
ＤＮＡを含有するＤＮＡなどが、配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列の第１４〜４９番目のアミノ酸配列を
有する部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列
番号：２で表わされる塩基配列の第４０〜１４７番目の
塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡなどが、配列
番号：１で表わされるアミノ酸配列の第４９〜５６番目
のアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコードするＤＮ
Ａとしては、配列番号：２で表わされる塩基配列の第１
４５〜１６８番目の塩基配列を有するＤＮＡを含有する
ＤＮＡなどが、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列
の第５６〜５９番目のアミノ酸配列を有する部分ペプチ
ドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表わさ
れる塩基配列の第１６６〜１７７番目の塩基配列を有す
るＤＮＡを含有するＤＮＡなどが、配列番号：１で表わ
されるアミノ酸配列の第５９〜１４２番目のアミノ酸配
列を有する部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、
配列番号：２で表わされる塩基配列の第１７５〜４２６
番目の塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡなど
が、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第１４２
〜１４９番目のアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコ
ードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表わされる塩
基配列の第４２４〜４４７番目の塩基配列を有するＤＮ
Ａを含有するＤＮＡなどが、配列番号：１で表わされる
アミノ酸配列の第１４９〜１５１番目のアミノ酸配列を
有する部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列
番号：２で表わされる塩基配列の第４４５〜４５３番目
の塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡなどが用い
られ。
【００２６】また、例えば、配列番号：１で表わされる
アミノ酸配列の第３〜１４番目のアミノ酸配列を有する
部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：
２で表わされる塩基配列の第７〜４２番目の塩基配列を
有するＤＮＡを含有するＤＮＡなどが、配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列の第４９〜５９番目のアミノ酸
配列を有する部分ペプチドをコードするＤＮＡとして
は、配列番号：２で表わされる塩基配列の第１４５〜１
７７番目の塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡな
どが、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第５５
〜７４番目のアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコー
ドするＤＮＡとしては、配列番号：２で表わされる塩基
配列の第１６３〜２２２番目の塩基配列を有するＤＮＡ
を含有するＤＮＡなどが、配列番号：１で表わされるア
ミノ酸配列の第１４２〜１５１番目のアミノ酸配列を有
する部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番
号：２で表わされる塩基配列の第４２４〜４５３番目の
塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡなどが用いら
れ。
アミノ酸配列の第３〜１４番目のアミノ酸配列を有する
部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番号：
２で表わされる塩基配列の第７〜４２番目の塩基配列を
有するＤＮＡを含有するＤＮＡなどが、配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列の第４９〜５９番目のアミノ酸
配列を有する部分ペプチドをコードするＤＮＡとして
は、配列番号：２で表わされる塩基配列の第１４５〜１
７７番目の塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡな
どが、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列の第５５
〜７４番目のアミノ酸配列を有する部分ペプチドをコー
ドするＤＮＡとしては、配列番号：２で表わされる塩基
配列の第１６３〜２２２番目の塩基配列を有するＤＮＡ
を含有するＤＮＡなどが、配列番号：１で表わされるア
ミノ酸配列の第１４２〜１５１番目のアミノ酸配列を有
する部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、配列番
号：２で表わされる塩基配列の第４２４〜４５３番目の
塩基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡなどが用いら
れ。
【００２７】本発明のタンパク質または部分ペプチドを
コードするＤＮＡのクローニングの手段としては、
（１）本発明のタンパク質または部分ペプチドをコード
するＤＮＡの部分塩基配列を有する合成ＤＮＡプライマ
ーを用いて、ＰＣＲ法によって前記ＤＮＡライブラリー
等から目的とするＤＮＡを増幅するか、または（２）適
当なベクターに組み込んだＤＮＡと、本発明のタンパク
質または部分ペプチドの一部あるいは全領域を有するＤ
ＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを標識したものとのハイブ
リダイゼーションによって選別すること、などが挙げら
れる。ハイブリダイゼーションの方法は、例えば Molec
ular Cloning ２nd（ed.；J.Sambrook et al., Cold Sp
ring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従
って行われる。また、市販のライブラリーを使用する場
合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行う。ま
た、本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡは、自体
公知のオリゴヌクレオチドの合成法に従って、製造する
こともできる。ＤＮＡの塩基配列の変換（欠失・付加・
置換）は、公知のキット、例えば、MutanTM-G（宝酒造
（株））、MutanTM-K（宝酒造（株））などを用いて、G
apped duplex法やKunkel法などの自体公知の方法あるい
はそれらに準じる方法に従って行なうことができる。ク
ローン化された本発明のタンパク質または部分ペプチド
をコードするＤＮＡは、目的によりそのまま、または所
望により制限酵素で消化したり、リンカーを付加したり
して使用することができる。該ＤＮＡはその５'末端側
に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、また３'末端
側には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴ
ＡＧを有していてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻
訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて
付加することもできる。本発明のタンパク質または部分
ペプチドをコードするＤＮＡの発現ベクターは、例え
ば、（イ）本発明のタンパク質または部分ペプチドをコ
ードするＤＮＡから目的とするＤＮＡ断片を切り出し、
（ロ）該ＤＮＡ断片を適当な発現ベクター中のプロモー
ターの下流に連結することにより製造することができ
る。
コードするＤＮＡのクローニングの手段としては、
（１）本発明のタンパク質または部分ペプチドをコード
するＤＮＡの部分塩基配列を有する合成ＤＮＡプライマ
ーを用いて、ＰＣＲ法によって前記ＤＮＡライブラリー
等から目的とするＤＮＡを増幅するか、または（２）適
当なベクターに組み込んだＤＮＡと、本発明のタンパク
質または部分ペプチドの一部あるいは全領域を有するＤ
ＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを標識したものとのハイブ
リダイゼーションによって選別すること、などが挙げら
れる。ハイブリダイゼーションの方法は、例えば Molec
ular Cloning ２nd（ed.；J.Sambrook et al., Cold Sp
ring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従
って行われる。また、市販のライブラリーを使用する場
合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行う。ま
た、本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡは、自体
公知のオリゴヌクレオチドの合成法に従って、製造する
こともできる。ＤＮＡの塩基配列の変換（欠失・付加・
置換）は、公知のキット、例えば、MutanTM-G（宝酒造
（株））、MutanTM-K（宝酒造（株））などを用いて、G
apped duplex法やKunkel法などの自体公知の方法あるい
はそれらに準じる方法に従って行なうことができる。ク
ローン化された本発明のタンパク質または部分ペプチド
をコードするＤＮＡは、目的によりそのまま、または所
望により制限酵素で消化したり、リンカーを付加したり
して使用することができる。該ＤＮＡはその５'末端側
に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、また３'末端
側には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴ
ＡＧを有していてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻
訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて
付加することもできる。本発明のタンパク質または部分
ペプチドをコードするＤＮＡの発現ベクターは、例え
ば、（イ）本発明のタンパク質または部分ペプチドをコ
ードするＤＮＡから目的とするＤＮＡ断片を切り出し、
（ロ）該ＤＮＡ断片を適当な発現ベクター中のプロモー
ターの下流に連結することにより製造することができ
る。
【００２８】ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミ
ド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐ
ＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１
０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐ
Ａ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳ
Ｖ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。本発明で
用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用い
る宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなる
ものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場
合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、Ｌ
ＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ-ＴＫ
プロモーターなどが挙げられる。これらのうち、ＣＭＶ
プロモーター、ＳＲαプロモーターなどを用いるのが好
ましい。宿主がエシェリヒア属菌である場合は、ｔｒｐ
プロモーター、ｌａｃプロモーター、ｒｅｃＡプロモー
ター、λＰLプロモーター、ｌｐｐプロモーターなど
が、宿主がバチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモ
ーター、ＳＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーター
など、宿主が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモータ
ー、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨ
プロモーターなどが好ましい。
ド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐ
ＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１
０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐ
Ａ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳ
Ｖ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。本発明で
用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用い
る宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなる
ものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場
合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、Ｌ
ＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ-ＴＫ
プロモーターなどが挙げられる。これらのうち、ＣＭＶ
プロモーター、ＳＲαプロモーターなどを用いるのが好
ましい。宿主がエシェリヒア属菌である場合は、ｔｒｐ
プロモーター、ｌａｃプロモーター、ｒｅｃＡプロモー
ター、λＰLプロモーター、ｌｐｐプロモーターなど
が、宿主がバチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモ
ーター、ＳＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーター
など、宿主が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモータ
ー、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨ
プロモーターなどが好ましい。
【００２９】発現ベクターには、以上の他に、所望によ
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有
しているものを用いることができる。選択マーカーとし
ては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒ
と略称する場合がある）遺伝子、アンピシリン耐性遺伝
子（以下、Ａｍｐrと略称する場合がある）、ネオマイ
シン耐性遺伝子（以下、Ｎｅｏと略称する場合がある）
等が挙げられる。ｄｈｆｒ遺伝子はメソトレキセート
（ＭＴＸ）耐性を、ＮｅｏはＧ４１８耐性を付与する。
特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞
ＣＨＯを用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マーカーとして使
用する場合、目的遺伝子で形質転換された細胞をチミジ
ンを含まない培地によっても選択できる。また、必要に
応じて、宿主に合ったシグナル配列を、本発明のタンパ
ク質または部分ペプチドのアミノ末端側に付加する。宿
主がエシェリヒア属菌である場合は、PhoＡ・シグナル
配列、OmpＡ・シグナル配列などが、宿主がバチルス属
菌である場合は、α−アミラーゼ・シグナル配列、サブ
チリシン・シグナル配列などが、宿主が酵母である場合
は、ＭＦα・シグナル配列、ＳＵＣ２・シグナル配列な
ど、宿主が動物細胞である場合には、インシュリン・シ
グナル配列、α−インターフェロン・シグナル配列、抗
体分子・シグナル配列などがそれぞれ利用できる。この
ようにして構築された本発明のタンパク質または部分ペ
プチドをコードするＤＮＡを含有するベクターを用い
て、形質転換体を製造することができる。
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有
しているものを用いることができる。選択マーカーとし
ては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒ
と略称する場合がある）遺伝子、アンピシリン耐性遺伝
子（以下、Ａｍｐrと略称する場合がある）、ネオマイ
シン耐性遺伝子（以下、Ｎｅｏと略称する場合がある）
等が挙げられる。ｄｈｆｒ遺伝子はメソトレキセート
（ＭＴＸ）耐性を、ＮｅｏはＧ４１８耐性を付与する。
特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞
ＣＨＯを用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マーカーとして使
用する場合、目的遺伝子で形質転換された細胞をチミジ
ンを含まない培地によっても選択できる。また、必要に
応じて、宿主に合ったシグナル配列を、本発明のタンパ
ク質または部分ペプチドのアミノ末端側に付加する。宿
主がエシェリヒア属菌である場合は、PhoＡ・シグナル
配列、OmpＡ・シグナル配列などが、宿主がバチルス属
菌である場合は、α−アミラーゼ・シグナル配列、サブ
チリシン・シグナル配列などが、宿主が酵母である場合
は、ＭＦα・シグナル配列、ＳＵＣ２・シグナル配列な
ど、宿主が動物細胞である場合には、インシュリン・シ
グナル配列、α−インターフェロン・シグナル配列、抗
体分子・シグナル配列などがそれぞれ利用できる。この
ようにして構築された本発明のタンパク質または部分ペ
プチドをコードするＤＮＡを含有するベクターを用い
て、形質転換体を製造することができる。
【００３０】宿主としては、例えば、エシェリヒア属
菌、バチルス属菌、酵母、昆虫、動物細胞などが用いら
れる。エシェリヒア属菌の具体例としては、例えば、エ
シェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２・ＤＨ１
〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６０巻，１６０
(１９６８)〕，ＪＭ１０３〔ヌクイレック・アシッズ・
リサーチ，（Nucleic Acids Research），９巻，３０９
(１９８１)〕，ＪＡ２２１〔ジャーナル・オブ・モレキ
ュラー・バイオロジー（Journal of Molecular Biolog
y）〕，１２０巻，５１７(１９７８)〕，ＨＢ１０１
〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー，４
１巻，４５９(１９６９)〕，Ｃ６００〔ジェネティック
ス（Genetics），３９巻，４４０(１９５４)〕などが用
いられる。バチルス属菌としては、例えば、バチルス・
サチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４〔ジーン，
２４巻，２５５(１９８３)〕，２０７−２１〔ジャーナ
ル・オブ・バイオケミストリー（Journal of Biochemis
try），９５巻，８７(１９８４)〕などが用いられる。
酵母としては、例えば、サッカロマイセス・セレビシエ
（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２
Ｒ-，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ−１
２、シゾサッカロマイセス・ポンベ（Schizosaccharomy
ces pombe）ＮＣＹＣ１９１３，ＮＣＹＣ２０３６、ピ
キア・パストリス（Pichia pastoris）などが用いられ
る。
菌、バチルス属菌、酵母、昆虫、動物細胞などが用いら
れる。エシェリヒア属菌の具体例としては、例えば、エ
シェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２・ＤＨ１
〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６０巻，１６０
(１９６８)〕，ＪＭ１０３〔ヌクイレック・アシッズ・
リサーチ，（Nucleic Acids Research），９巻，３０９
(１９８１)〕，ＪＡ２２１〔ジャーナル・オブ・モレキ
ュラー・バイオロジー（Journal of Molecular Biolog
y）〕，１２０巻，５１７(１９７８)〕，ＨＢ１０１
〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー，４
１巻，４５９(１９６９)〕，Ｃ６００〔ジェネティック
ス（Genetics），３９巻，４４０(１９５４)〕などが用
いられる。バチルス属菌としては、例えば、バチルス・
サチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４〔ジーン，
２４巻，２５５(１９８３)〕，２０７−２１〔ジャーナ
ル・オブ・バイオケミストリー（Journal of Biochemis
try），９５巻，８７(１９８４)〕などが用いられる。
酵母としては、例えば、サッカロマイセス・セレビシエ
（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２
Ｒ-，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ−１
２、シゾサッカロマイセス・ポンベ（Schizosaccharomy
ces pombe）ＮＣＹＣ１９１３，ＮＣＹＣ２０３６、ピ
キア・パストリス（Pichia pastoris）などが用いられ
る。
【００３１】昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡ
ｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Spodop
tera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia ni
の中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来のH
igh FiveTM細胞、Mamestra brassicae由来の細胞または
Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイル
スがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来株化細胞（Bombyx mor
i N；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ細胞とし
ては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC CRL1711）、Ｓｆ２１
細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イン・ヴィボ（In Viv
o）,13, 213-217,(1977)）などが用いられる。昆虫とし
ては、例えばカイコの幼虫などが用いられる〔前田ら、
ネイチャー（Nature），３１５巻，５９２(１９８
５)〕。動物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ−
７，Ｖero，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以
下、ＣＨＯ細胞と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニ
ーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆ
ｒ-）細胞と略記），マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２
０，マウスミエローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細
胞、２９３細胞、Ｃ１２７細胞、ＢＡＬＢ３Ｔ３細胞、
Ｓｐ−２細胞などが用いられる。これらの中でも、ＣＨ
Ｏ細胞、ＣＨＯ（ｄｈｆｒ-）細胞、２９３細胞などが
好ましい。
ｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Spodop
tera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia ni
の中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来のH
igh FiveTM細胞、Mamestra brassicae由来の細胞または
Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイル
スがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来株化細胞（Bombyx mor
i N；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ細胞とし
ては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC CRL1711）、Ｓｆ２１
細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イン・ヴィボ（In Viv
o）,13, 213-217,(1977)）などが用いられる。昆虫とし
ては、例えばカイコの幼虫などが用いられる〔前田ら、
ネイチャー（Nature），３１５巻，５９２(１９８
５)〕。動物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ−
７，Ｖero，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以
下、ＣＨＯ細胞と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニ
ーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆ
ｒ-）細胞と略記），マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２
０，マウスミエローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細
胞、２９３細胞、Ｃ１２７細胞、ＢＡＬＢ３Ｔ３細胞、
Ｓｐ−２細胞などが用いられる。これらの中でも、ＣＨ
Ｏ細胞、ＣＨＯ（ｄｈｆｒ-）細胞、２９３細胞などが
好ましい。
【００３２】エシェリヒア属菌を形質転換するには、例
えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンジイズ・オブ・ザ・ユーエスエ
ー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６９巻，２１
１０(１９７２)やジーン（Gene），１７巻，１０７(１
９８２)などに記載の方法に従って行なうことができ
る。バチルス属菌を形質転換するには、例えば、モレキ
ュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティックス（Mole
cular ＆ General Genetics），１６８巻，１１１(１９
７９)などに記載の方法に従って行なうことができる。
酵母を形質転換するには、例えば、メソッズ・イン・エ
ンザイモロジー（Methods in Enzymology），１９４
巻，１８２−１８７（１９９１）、プロシージングズ・
オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシ
イズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sc
i. ＵＳＡ），７５巻，１９２９(１９７８）などに記載
の方法に従って行なうことができる。昆虫細胞または昆
虫を形質転換するには、例えば、バイオ／テクノロジー
（Bio/Technology）,6, 47-55(1988)）などに記載の方
法に従って行なうことができる。動物細胞を形質転換す
るには、例えば、細胞工学別冊８ 新細胞工学実験プロ
トコール．２６３−２６７（１９９５）（秀潤社発
行）、ヴィロロジー（Virology），５２巻，４５６(１
９７３)に記載の方法に従って行なうことができる。
えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンジイズ・オブ・ザ・ユーエスエ
ー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６９巻，２１
１０(１９７２)やジーン（Gene），１７巻，１０７(１
９８２)などに記載の方法に従って行なうことができ
る。バチルス属菌を形質転換するには、例えば、モレキ
ュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティックス（Mole
cular ＆ General Genetics），１６８巻，１１１(１９
７９)などに記載の方法に従って行なうことができる。
酵母を形質転換するには、例えば、メソッズ・イン・エ
ンザイモロジー（Methods in Enzymology），１９４
巻，１８２−１８７（１９９１）、プロシージングズ・
オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシ
イズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sc
i. ＵＳＡ），７５巻，１９２９(１９７８）などに記載
の方法に従って行なうことができる。昆虫細胞または昆
虫を形質転換するには、例えば、バイオ／テクノロジー
（Bio/Technology）,6, 47-55(1988)）などに記載の方
法に従って行なうことができる。動物細胞を形質転換す
るには、例えば、細胞工学別冊８ 新細胞工学実験プロ
トコール．２６３−２６７（１９９５）（秀潤社発
行）、ヴィロロジー（Virology），５２巻，４５６(１
９７３)に記載の方法に従って行なうことができる。
【００３３】発現ベクターの細胞への導入方法として
は、例えば、リン酸カルシウム法〔Graham, F. L. and
van der Eb, A. J.ヴィロロジー（Virology） 52, 456-
467（1973）〕、電気穿孔法〔Nuemann, E. et al. エン
ボ・ジャーナル（EMBO J.） 1,841-845（1982）〕等が
用いられる。このようにして、本発明のタンパク質をコ
ードするＤＮＡを含有する発現ベクターで形質転換され
た形質転換体を得ることができる。なお、動物細胞を用
いて、本発明のタンパク質を安定に発現させる方法とし
ては、上記の動物細胞に導入された発現ベクターが染色
体に組み込まれた細胞をクローン選択によって選択する
方法がある。具体的には、上記の選択マーカーを指標に
して形質転換体を選択する。さらに、このように選択マ
ーカーを用いて得られた動物細胞に対して、繰り返しク
ローン選択を行なうことにより本発明のタンパク質の高
発現能を有する安定な動物細胞株を得ることができる。
また、ｄｈｆｒ遺伝子を選択マーカーとして用いた場
合、ＭＴＸ濃度を徐々に上げて培養し、耐性株を選択す
ることにより、ｄｈｆｒ遺伝子とともに、本発明のタン
パク質をコードするＤＮＡを細胞内で増幅させて、さら
に高発現の動物細胞株を得ることもできる。
は、例えば、リン酸カルシウム法〔Graham, F. L. and
van der Eb, A. J.ヴィロロジー（Virology） 52, 456-
467（1973）〕、電気穿孔法〔Nuemann, E. et al. エン
ボ・ジャーナル（EMBO J.） 1,841-845（1982）〕等が
用いられる。このようにして、本発明のタンパク質をコ
ードするＤＮＡを含有する発現ベクターで形質転換され
た形質転換体を得ることができる。なお、動物細胞を用
いて、本発明のタンパク質を安定に発現させる方法とし
ては、上記の動物細胞に導入された発現ベクターが染色
体に組み込まれた細胞をクローン選択によって選択する
方法がある。具体的には、上記の選択マーカーを指標に
して形質転換体を選択する。さらに、このように選択マ
ーカーを用いて得られた動物細胞に対して、繰り返しク
ローン選択を行なうことにより本発明のタンパク質の高
発現能を有する安定な動物細胞株を得ることができる。
また、ｄｈｆｒ遺伝子を選択マーカーとして用いた場
合、ＭＴＸ濃度を徐々に上げて培養し、耐性株を選択す
ることにより、ｄｈｆｒ遺伝子とともに、本発明のタン
パク質をコードするＤＮＡを細胞内で増幅させて、さら
に高発現の動物細胞株を得ることもできる。
【００３４】上記の形質転換体を本発明のタンパク質ま
たは部分ペプチドをコードするＤＮＡが発現可能な条件
下で培養し、本発明のタンパク質または部分ペプチドを
生成、蓄積せしめることによって、本発明のタンパク
質、その部分ペプチドまたはそれらの塩を製造すること
ができる。宿主がエシェリヒア属菌、バチルス属菌であ
る形質転換体を培養する際、培養に使用される培地とし
ては、液体培地が適当であり、その中には該形質転換体
の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が含有せ
しめられる。炭素源としては、例えば、グルコース、デ
キストリン、可溶性澱粉、ショ糖などが用いられる。窒
素源としては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、
コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキ
ス、大豆粕、バレイショ抽出液などの無機または有機物
質が用いられる。無機物としては、例えば、塩化カルシ
ウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウムなど
が用いられる。また、酵母エキス、ビタミン類、生長促
進因子などを添加してもよい。培地のｐＨは約５〜８が
望ましい。エシェリヒア属菌を培養する際の培地として
は、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地
〔ミラー（Miller），ジャーナル・オブ・エクスペリメ
ンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journa
l of Experiments in Molecular Genetics），４３１−
４３３，Cold Spring Harbor Laboratory, New York１
９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを
効率よく働かせるために、例えば３β−インドリル ア
クリル酸のような薬剤を加えることができる。宿主がエ
シェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約
３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加える
こともできる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常
約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通
気や撹拌を加えることもできる。
たは部分ペプチドをコードするＤＮＡが発現可能な条件
下で培養し、本発明のタンパク質または部分ペプチドを
生成、蓄積せしめることによって、本発明のタンパク
質、その部分ペプチドまたはそれらの塩を製造すること
ができる。宿主がエシェリヒア属菌、バチルス属菌であ
る形質転換体を培養する際、培養に使用される培地とし
ては、液体培地が適当であり、その中には該形質転換体
の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が含有せ
しめられる。炭素源としては、例えば、グルコース、デ
キストリン、可溶性澱粉、ショ糖などが用いられる。窒
素源としては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、
コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキ
ス、大豆粕、バレイショ抽出液などの無機または有機物
質が用いられる。無機物としては、例えば、塩化カルシ
ウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウムなど
が用いられる。また、酵母エキス、ビタミン類、生長促
進因子などを添加してもよい。培地のｐＨは約５〜８が
望ましい。エシェリヒア属菌を培養する際の培地として
は、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地
〔ミラー（Miller），ジャーナル・オブ・エクスペリメ
ンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journa
l of Experiments in Molecular Genetics），４３１−
４３３，Cold Spring Harbor Laboratory, New York１
９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを
効率よく働かせるために、例えば３β−インドリル ア
クリル酸のような薬剤を加えることができる。宿主がエ
シェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約
３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加える
こともできる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常
約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通
気や撹拌を加えることもできる。
【００３５】宿主が酵母である形質転換体を培養する
際、培地としては、例えば、バークホールダー（Burkho
lder）最小培地〔Bostian, K. L. ら、プロシージング
ズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエ
ンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Aca
d. Sci. ＵＳＡ），７７巻，４５０５(１９８０)〕や
０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ培地〔Bitter, G. A.
ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエ
ー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），８１巻，５３
３０（１９８４）〕が挙げられる。培地のｐＨは約５〜
８に調整するのが好ましい。培養は通常約２０℃〜３５
℃で約２４〜７２時間行ない、必要に応じて通気や撹拌
を加える。宿主が昆虫細胞である形質転換体を培養する
際、培地としては、Grace's Insect Medium（Grace, T.
C.C.,ネイチャー（Nature）,195,788(1962)）に非動化
した１０％ウシ血清等の添加物を適宜加えたものなどが
用いられる。培地のｐＨは約６．２〜６．４に調整する
のが好ましい。培養は通常約２７℃で約３〜５日間行な
い、必要に応じて通気や撹拌を加える。宿主が動物細胞
である形質転換体を培養する際、培地としては、例え
ば、約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地〔サイ
エンス（Seience），１２２巻，５０１(１９５２)〕，
ＤＭＥＭ培地〔ヴィロロジー（Virology），８巻，３９
６(１９５９)〕，ＲＰＭＩ １６４０培地〔ジャーナル
・オブ・ザ・アメリカン・メディカル・アソシエーショ
ン（The Jounal of the American Medical Associatio
n）１９９巻，５１９(１９６７)〕，１９９培地〔プロ
シージング・オブ・ザ・ソサイエティ・フォー・ザ・バ
イオロジカル・メディスン（Proceeding of the Societ
y for the Biological Medicine），７３巻，１(１９５
０)〕などが用いられる。ｐＨは約６〜８であるのが好
ましい。培養は通常約３０℃〜４０℃で約１５〜７２時
間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。特に、Ｃ
ＨＯ（ｄｈｆｒ-）細胞およびｄｈｆｒ遺伝子を選択マ
ーカーとして用いる場合、チミジンをほとんど含まない
透析ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地を用いるのが好ま
しい。
際、培地としては、例えば、バークホールダー（Burkho
lder）最小培地〔Bostian, K. L. ら、プロシージング
ズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエ
ンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Aca
d. Sci. ＵＳＡ），７７巻，４５０５(１９８０)〕や
０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ培地〔Bitter, G. A.
ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエ
ー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），８１巻，５３
３０（１９８４）〕が挙げられる。培地のｐＨは約５〜
８に調整するのが好ましい。培養は通常約２０℃〜３５
℃で約２４〜７２時間行ない、必要に応じて通気や撹拌
を加える。宿主が昆虫細胞である形質転換体を培養する
際、培地としては、Grace's Insect Medium（Grace, T.
C.C.,ネイチャー（Nature）,195,788(1962)）に非動化
した１０％ウシ血清等の添加物を適宜加えたものなどが
用いられる。培地のｐＨは約６．２〜６．４に調整する
のが好ましい。培養は通常約２７℃で約３〜５日間行な
い、必要に応じて通気や撹拌を加える。宿主が動物細胞
である形質転換体を培養する際、培地としては、例え
ば、約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地〔サイ
エンス（Seience），１２２巻，５０１(１９５２)〕，
ＤＭＥＭ培地〔ヴィロロジー（Virology），８巻，３９
６(１９５９)〕，ＲＰＭＩ １６４０培地〔ジャーナル
・オブ・ザ・アメリカン・メディカル・アソシエーショ
ン（The Jounal of the American Medical Associatio
n）１９９巻，５１９(１９６７)〕，１９９培地〔プロ
シージング・オブ・ザ・ソサイエティ・フォー・ザ・バ
イオロジカル・メディスン（Proceeding of the Societ
y for the Biological Medicine），７３巻，１(１９５
０)〕などが用いられる。ｐＨは約６〜８であるのが好
ましい。培養は通常約３０℃〜４０℃で約１５〜７２時
間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。特に、Ｃ
ＨＯ（ｄｈｆｒ-）細胞およびｄｈｆｒ遺伝子を選択マ
ーカーとして用いる場合、チミジンをほとんど含まない
透析ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地を用いるのが好ま
しい。
【００３６】上記培養物から本発明のタンパク質または
部分ペプチドを分離精製するには、例えば、下記の方法
により行なうことができる。本発明のタンパク質または
部分ペプチドを培養菌体あるいは細胞から抽出するに際
しては、培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集
め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチーム
および／または凍結融解などによって菌体あるいは細胞
を破壊したのち、遠心分離やろ過により本発明のタンパ
ク質または部分ペプチドの粗抽出液を得る方法などが適
宜用い得る。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンなどの
タンパク質変性剤や、トリトンＸ−１００TMなどの界面
活性剤が含まれていてもよい。培養液中にタンパク質が
分泌される場合には、培養終了後、それ自体公知の方法
で菌体あるいは細胞と上清とを分離し、上清を集める。
このようにして得られた培養上清、あるいは抽出液中に
含まれる本発明のタンパク質の精製は、自体公知の分離
・精製法を適切に組み合わせて行なうことができる。こ
れらの公知の分離、精製法としては、塩析や溶媒沈澱法
などの溶解度を利用する方法、透析法、限外ろ過法、ゲ
ルろ過法、およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動法などの主として分子量の差を利用する方法、イオ
ン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用する方
法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的親
和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィー
などの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動法な
どの等電点の差を利用する方法などが用いられる。
部分ペプチドを分離精製するには、例えば、下記の方法
により行なうことができる。本発明のタンパク質または
部分ペプチドを培養菌体あるいは細胞から抽出するに際
しては、培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集
め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチーム
および／または凍結融解などによって菌体あるいは細胞
を破壊したのち、遠心分離やろ過により本発明のタンパ
ク質または部分ペプチドの粗抽出液を得る方法などが適
宜用い得る。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンなどの
タンパク質変性剤や、トリトンＸ−１００TMなどの界面
活性剤が含まれていてもよい。培養液中にタンパク質が
分泌される場合には、培養終了後、それ自体公知の方法
で菌体あるいは細胞と上清とを分離し、上清を集める。
このようにして得られた培養上清、あるいは抽出液中に
含まれる本発明のタンパク質の精製は、自体公知の分離
・精製法を適切に組み合わせて行なうことができる。こ
れらの公知の分離、精製法としては、塩析や溶媒沈澱法
などの溶解度を利用する方法、透析法、限外ろ過法、ゲ
ルろ過法、およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動法などの主として分子量の差を利用する方法、イオ
ン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用する方
法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的親
和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィー
などの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動法な
どの等電点の差を利用する方法などが用いられる。
【００３７】かくして得られる本発明のタンパク質が遊
離体で得られた場合には、自体公知の方法あるいはそれ
に準じる方法によって塩に変換することができ、逆に塩
で得られた場合には自体公知の方法あるいはそれに準じ
る方法により、遊離体または他の塩に変換することがで
きる。なお、組換え体が産生する本発明のタンパク質ま
たは部分ペプチドを、精製前または精製後に適当な蛋白
修飾酵素を作用させることにより、任意に修飾を加えた
り、ポリペプチドを部分的に除去することもできる。蛋
白修飾酵素としては、例えば、トリプシン、キモトリプ
シン、アルギニルエンドペプチダーゼ、プロテインキナ
ーゼ、グリコシダーゼなどが用いられる。かくして生成
する本発明のタンパク質の存在は、特異抗体を用いたエ
ンザイムイムノアッセイなどにより測定することができ
る。また、本発明のタンパク質または部分ペプチドは、
検出や精製を容易にするために、他のタンパク質やペプ
チド、例えば、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（Ｇ
ＳＴ）、カルモジュリン・バインディング・ペプチド
（ＣＢＰ）、ヒスチジンのオリゴマー、Ｍｙｃ由来ペプ
チドなどと融合した融合タンパク質として製造すること
もできる。融合タンパク質の製造は、自体公知の遺伝子
学的手法に準じて行なうことができる。
離体で得られた場合には、自体公知の方法あるいはそれ
に準じる方法によって塩に変換することができ、逆に塩
で得られた場合には自体公知の方法あるいはそれに準じ
る方法により、遊離体または他の塩に変換することがで
きる。なお、組換え体が産生する本発明のタンパク質ま
たは部分ペプチドを、精製前または精製後に適当な蛋白
修飾酵素を作用させることにより、任意に修飾を加えた
り、ポリペプチドを部分的に除去することもできる。蛋
白修飾酵素としては、例えば、トリプシン、キモトリプ
シン、アルギニルエンドペプチダーゼ、プロテインキナ
ーゼ、グリコシダーゼなどが用いられる。かくして生成
する本発明のタンパク質の存在は、特異抗体を用いたエ
ンザイムイムノアッセイなどにより測定することができ
る。また、本発明のタンパク質または部分ペプチドは、
検出や精製を容易にするために、他のタンパク質やペプ
チド、例えば、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（Ｇ
ＳＴ）、カルモジュリン・バインディング・ペプチド
（ＣＢＰ）、ヒスチジンのオリゴマー、Ｍｙｃ由来ペプ
チドなどと融合した融合タンパク質として製造すること
もできる。融合タンパク質の製造は、自体公知の遺伝子
学的手法に準じて行なうことができる。
【００３８】本発明のタンパク質、その部分ペプチドま
たはそれらの塩に対する抗体は、本発明のタンパク質、
その部分ペプチドまたはそれらの塩を認識し得る抗体で
あれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何
れであってもよい。なかでも、本発明の抗体としては、
本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの
塩の活性を中和する活性を有するものが好ましい。本発
明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩
（以下、抗体の説明の項では、本発明のタンパク質と略
記する）に対する抗体は、本発明のタンパク質を抗原と
して用い、自体公知の抗体または抗血清の製造法に従っ
て製造することができる。
たはそれらの塩に対する抗体は、本発明のタンパク質、
その部分ペプチドまたはそれらの塩を認識し得る抗体で
あれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何
れであってもよい。なかでも、本発明の抗体としては、
本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの
塩の活性を中和する活性を有するものが好ましい。本発
明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩
（以下、抗体の説明の項では、本発明のタンパク質と略
記する）に対する抗体は、本発明のタンパク質を抗原と
して用い、自体公知の抗体または抗血清の製造法に従っ
て製造することができる。
【００３９】〔モノクローナル抗体の作製〕 （ａ）モノクロナール抗体産生細胞の作製 本発明のタンパク質は、温血動物に対して投与により抗
体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤と
ともに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるた
め、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントア
ジュバントを投与してもよい。投与は通常２〜６週毎に
１回ずつ、計２〜１０回程度行われる。温血動物として
は、例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモット、マウ
ス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ニワトリが用いられ、マウ
スおよびラットが好ましい。モノクローナル抗体産生細
胞の作製に際しては、抗原を免疫された温血動物、例え
ば、マウスから抗体価の認められた個体を選択し最終免
疫の２〜５日後に脾臓またはリンパ節を採取し、それら
に含まれる抗体産生細胞を同種または異種の骨髄腫細胞
と融合させることにより、モノクローナル抗体産生ハイ
ブリドーマを調製することができる。抗血清中の抗体価
の測定は、例えば、後記の標識化タンパク質と抗血清と
を反応させた後、抗体に結合した標識剤の活性を測定す
ることによりなされる。融合操作は既知の方法、例え
ば、ケーラーとミルスタインの方法〔ネイチャー（Natu
re)、256、495 (1975)〕に従い実施することができる。
融合促進剤としては、後えば、ポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）やセンダイウィルスなどが挙げられるが、好
ましくはＰＥＧが用いられる。骨髄腫細胞としては、例
えばＮＳ−１、Ｐ３Ｕ１、ＳＰ２／０、ＡＰ−１などの
温血動物の骨髄腫細胞などが挙げられるが、Ｐ３Ｕ１が
好ましく用いられる。用いられる抗体産生細胞（脾臓細
胞）数と骨髄腫細胞数との好ましい比率は１：１〜２
０：１程度であり、ＰＥＧ（好ましくはＰＥＧ１０００
〜ＰＥＧ６０００）が約１０〜８０％程度の濃度で添加
され、約２０〜４０℃、好ましくは約３０〜３７℃で約
１〜１０分間インキュベートすることにより効率よく細
胞融合を実施できる。
体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤と
ともに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるた
め、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントア
ジュバントを投与してもよい。投与は通常２〜６週毎に
１回ずつ、計２〜１０回程度行われる。温血動物として
は、例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモット、マウ
ス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ニワトリが用いられ、マウ
スおよびラットが好ましい。モノクローナル抗体産生細
胞の作製に際しては、抗原を免疫された温血動物、例え
ば、マウスから抗体価の認められた個体を選択し最終免
疫の２〜５日後に脾臓またはリンパ節を採取し、それら
に含まれる抗体産生細胞を同種または異種の骨髄腫細胞
と融合させることにより、モノクローナル抗体産生ハイ
ブリドーマを調製することができる。抗血清中の抗体価
の測定は、例えば、後記の標識化タンパク質と抗血清と
を反応させた後、抗体に結合した標識剤の活性を測定す
ることによりなされる。融合操作は既知の方法、例え
ば、ケーラーとミルスタインの方法〔ネイチャー（Natu
re)、256、495 (1975)〕に従い実施することができる。
融合促進剤としては、後えば、ポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）やセンダイウィルスなどが挙げられるが、好
ましくはＰＥＧが用いられる。骨髄腫細胞としては、例
えばＮＳ−１、Ｐ３Ｕ１、ＳＰ２／０、ＡＰ−１などの
温血動物の骨髄腫細胞などが挙げられるが、Ｐ３Ｕ１が
好ましく用いられる。用いられる抗体産生細胞（脾臓細
胞）数と骨髄腫細胞数との好ましい比率は１：１〜２
０：１程度であり、ＰＥＧ（好ましくはＰＥＧ１０００
〜ＰＥＧ６０００）が約１０〜８０％程度の濃度で添加
され、約２０〜４０℃、好ましくは約３０〜３７℃で約
１〜１０分間インキュベートすることにより効率よく細
胞融合を実施できる。
【００４０】モノクローナル抗体産生ハイブリドーマの
スクリーニングには種々の方法が使用できるが、例え
ば、タンパク質等の抗原を直接あるいは担体とともに吸
着させた固相（例、マイクロプレート）にハイブリドー
マ培養上清を添加し、次に放射性物質や酵素などで標識
した抗免疫グロブリン抗体（細胞融合に用いられる細胞
がマウスの場合、抗マウス免疫グロブリン抗体が用いら
れる）またはプロテインＡを加え、固相に結合した抗タ
ンパク質抗体を検出する方法、抗免疫グロブリン抗体ま
たはプロテインＡを吸着させた固相にハイブリドーマ培
養上清を添加し、放射性物質や酵素などで標識したタン
パク質を加え、固相に結合した抗タンパク質モノクロー
ナル抗体を検出する方法などが挙げられる。モノクロー
ナル抗体の選別は、自体公知あるいはそれに準じる方法
に従って行なうことができる。通常はＨＡＴ（ヒポキサ
ンチン、アミノプテリン、チミジン）を添加した動物細
胞用培地で行なわれる。選別および育種用培地として
は、ハイブリドーマが生育できるものならばどのような
培地を用いても良い。例えば、約１〜２０％、好ましく
は約１０〜２０％の牛胎児血清を含むＲＰＭＩ １６４
０培地、約１〜１０％の牛胎児血清を含むＧＩＴ培地
（和光純薬工業（株））あるいはハイブリドーマ培養用
無血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製薬（株））などを
用いることができる。培養温度は、通常約２０〜４０
℃、好ましくは約３７℃である。培養時間は、通常５日
〜３週間、好ましくは約１〜２週間である。培養は、通
常５％炭酸ガス下で行なうことができる。ハイブリドー
マ培養上清の抗体価は、上記の抗血清中の抗体価の測定
と同様にして測定できる。
スクリーニングには種々の方法が使用できるが、例え
ば、タンパク質等の抗原を直接あるいは担体とともに吸
着させた固相（例、マイクロプレート）にハイブリドー
マ培養上清を添加し、次に放射性物質や酵素などで標識
した抗免疫グロブリン抗体（細胞融合に用いられる細胞
がマウスの場合、抗マウス免疫グロブリン抗体が用いら
れる）またはプロテインＡを加え、固相に結合した抗タ
ンパク質抗体を検出する方法、抗免疫グロブリン抗体ま
たはプロテインＡを吸着させた固相にハイブリドーマ培
養上清を添加し、放射性物質や酵素などで標識したタン
パク質を加え、固相に結合した抗タンパク質モノクロー
ナル抗体を検出する方法などが挙げられる。モノクロー
ナル抗体の選別は、自体公知あるいはそれに準じる方法
に従って行なうことができる。通常はＨＡＴ（ヒポキサ
ンチン、アミノプテリン、チミジン）を添加した動物細
胞用培地で行なわれる。選別および育種用培地として
は、ハイブリドーマが生育できるものならばどのような
培地を用いても良い。例えば、約１〜２０％、好ましく
は約１０〜２０％の牛胎児血清を含むＲＰＭＩ １６４
０培地、約１〜１０％の牛胎児血清を含むＧＩＴ培地
（和光純薬工業（株））あるいはハイブリドーマ培養用
無血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製薬（株））などを
用いることができる。培養温度は、通常約２０〜４０
℃、好ましくは約３７℃である。培養時間は、通常５日
〜３週間、好ましくは約１〜２週間である。培養は、通
常５％炭酸ガス下で行なうことができる。ハイブリドー
マ培養上清の抗体価は、上記の抗血清中の抗体価の測定
と同様にして測定できる。
【００４１】（ｂ）モノクロナール抗体の精製 モノクローナル抗体の分離精製は通常のポリクローナル
抗体の分離精製と同様に免疫グロブリンの分離精製法
〔例、塩析法、アルコール沈殿法、等電点沈殿法、電気
泳動法、イオン交換体（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着
法、超遠心法、ゲルろ過法、抗原結合固相あるいはプロ
テインＡあるいはプロテインＧなどの活性吸着剤により
抗体のみを採取し、結合を解離させて抗体を得る特異的
精製法〕に従って行なうことができる。
抗体の分離精製と同様に免疫グロブリンの分離精製法
〔例、塩析法、アルコール沈殿法、等電点沈殿法、電気
泳動法、イオン交換体（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着
法、超遠心法、ゲルろ過法、抗原結合固相あるいはプロ
テインＡあるいはプロテインＧなどの活性吸着剤により
抗体のみを採取し、結合を解離させて抗体を得る特異的
精製法〕に従って行なうことができる。
【００４２】〔ポリクローナル抗体の作製〕本発明のポ
リクローナル抗体は、それ自体公知あるいはそれに準じ
る方法に従って製造することができる。例えば、免疫抗
原（タンパク質抗原）とキャリアー蛋白質との複合体を
つくり、上記のモノクローナル抗体の製造法と同様に温
血動物に免疫を行ない、該免疫動物から本発明のタンパ
ク質に対する抗体含有物を採取して、抗体の分離精製を
行なうことにより製造できる。温血動物を免疫するため
に用いられる免疫抗原とキャリアー蛋白質との複合体に
関し、キャリアー蛋白質の種類およびキャリアーとハプ
テンとの混合比は、キャリアーに架橋させて免疫したハ
プテンに対して抗体が効率良くできれば、どの様なもの
をどの様な比率で架橋させてもよいが、例えば、ウシ血
清アルブミン、ウシサイログロブリン、キーホール・リ
ンペット・ヘモシアニン等を重量比でハプテン１に対
し、約０．１〜２０、好ましくは約１〜５の割合でカプ
ルさせる方法が用いられる。また、ハプテンとキャリア
ーのカプリングには、種々の縮合剤を用いることができ
るが、グルタルアルデヒドやカルボジイミド、マレイミ
ド活性エステル、チオール基、ジチオビリジル基を含有
する活性エステル試薬等が用いられる。縮合生成物は、
温血動物（例、マウス）に対して、抗体産生が可能な部
位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与され
る。投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイ
ントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投
与してもよい。投与は、通常約２〜６週毎に１回ずつ、
計約３〜１０回程度行なうことができる。ポリクローナ
ル抗体は、上記の方法で免疫された温血動物の血液、腹
水など、好ましくは血液から採取される。抗血清中のポ
リクローナル抗体価の測定は、上記ハイブリドーマ培養
上清の抗体価の測定と同様にして測定できる。抗体の分
離精製は、上記のモノクローナル抗体の分離精製と同様
の免疫グロブリンの分離精製法に従って行なうことがで
きる。
リクローナル抗体は、それ自体公知あるいはそれに準じ
る方法に従って製造することができる。例えば、免疫抗
原（タンパク質抗原）とキャリアー蛋白質との複合体を
つくり、上記のモノクローナル抗体の製造法と同様に温
血動物に免疫を行ない、該免疫動物から本発明のタンパ
ク質に対する抗体含有物を採取して、抗体の分離精製を
行なうことにより製造できる。温血動物を免疫するため
に用いられる免疫抗原とキャリアー蛋白質との複合体に
関し、キャリアー蛋白質の種類およびキャリアーとハプ
テンとの混合比は、キャリアーに架橋させて免疫したハ
プテンに対して抗体が効率良くできれば、どの様なもの
をどの様な比率で架橋させてもよいが、例えば、ウシ血
清アルブミン、ウシサイログロブリン、キーホール・リ
ンペット・ヘモシアニン等を重量比でハプテン１に対
し、約０．１〜２０、好ましくは約１〜５の割合でカプ
ルさせる方法が用いられる。また、ハプテンとキャリア
ーのカプリングには、種々の縮合剤を用いることができ
るが、グルタルアルデヒドやカルボジイミド、マレイミ
ド活性エステル、チオール基、ジチオビリジル基を含有
する活性エステル試薬等が用いられる。縮合生成物は、
温血動物（例、マウス）に対して、抗体産生が可能な部
位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与され
る。投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイ
ントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投
与してもよい。投与は、通常約２〜６週毎に１回ずつ、
計約３〜１０回程度行なうことができる。ポリクローナ
ル抗体は、上記の方法で免疫された温血動物の血液、腹
水など、好ましくは血液から採取される。抗血清中のポ
リクローナル抗体価の測定は、上記ハイブリドーマ培養
上清の抗体価の測定と同様にして測定できる。抗体の分
離精製は、上記のモノクローナル抗体の分離精製と同様
の免疫グロブリンの分離精製法に従って行なうことがで
きる。
【００４３】本発明のタンパク質または部分ペプチドを
コードする塩基配列を含有するＤＮＡまたはｍＲＮＡ
（以下、本発明のＤＮＡまたはｍＲＮＡと略記する）に
相補的または実質的に相補的な塩基配列を有するアンチ
センスＤＮＡとしては、本発明のＤＮＡまたはｍＲＮＡ
に相補的または実質的に相補的な塩基配列を有し、本発
明のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはＤＮＡの発
現を抑制し得る作用を有するものであれば、いずれのア
ンチセンスＤＮＡであってもよい。本発明のＤＮＡまた
はｍＲＮＡに実質的に相補的な塩基配列とは、例えば、
本発明のＤＮＡまたはｍＲＮＡに相補的な塩基配列（す
なわち、本発明のＤＮＡまたはｍＲＮＡの相補鎖）の全
塩基配列あるいは部分塩基配列と約８０％以上、好まし
くは約９０％以上、より好ましくは約９５％以上の相同
性を有する塩基配列などが挙げられる。特に、本発明の
ＤＮＡまたはｍＲＮＡの相補鎖の全塩基配列うち、本発
明のタンパク質のＮ末端部位をコードする部分の塩基配
列（例えば、開始コドン付近の塩基配列など）の相補鎖
と約８０％以上、好ましくは約９０％以上、より好まし
くは約９５％以上の相同性を有するアンチセンスＤＮＡ
が好適である。これらのアンチセンスＤＮＡは、公知の
ＤＮＡ合成装置などを用いて製造することができる。
コードする塩基配列を含有するＤＮＡまたはｍＲＮＡ
（以下、本発明のＤＮＡまたはｍＲＮＡと略記する）に
相補的または実質的に相補的な塩基配列を有するアンチ
センスＤＮＡとしては、本発明のＤＮＡまたはｍＲＮＡ
に相補的または実質的に相補的な塩基配列を有し、本発
明のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはＤＮＡの発
現を抑制し得る作用を有するものであれば、いずれのア
ンチセンスＤＮＡであってもよい。本発明のＤＮＡまた
はｍＲＮＡに実質的に相補的な塩基配列とは、例えば、
本発明のＤＮＡまたはｍＲＮＡに相補的な塩基配列（す
なわち、本発明のＤＮＡまたはｍＲＮＡの相補鎖）の全
塩基配列あるいは部分塩基配列と約８０％以上、好まし
くは約９０％以上、より好ましくは約９５％以上の相同
性を有する塩基配列などが挙げられる。特に、本発明の
ＤＮＡまたはｍＲＮＡの相補鎖の全塩基配列うち、本発
明のタンパク質のＮ末端部位をコードする部分の塩基配
列（例えば、開始コドン付近の塩基配列など）の相補鎖
と約８０％以上、好ましくは約９０％以上、より好まし
くは約９５％以上の相同性を有するアンチセンスＤＮＡ
が好適である。これらのアンチセンスＤＮＡは、公知の
ＤＮＡ合成装置などを用いて製造することができる。
【００４４】本発明のタンパク質は、タンパク質部分の
分子量が約１.５〜３万、好ましくは約１.８〜２万のカ
ベオリン（好ましくは、ヒト由来カベオリン）であり、
例えば、カベオーラ構造の形成、糖尿病、肥満、癌化、
泡沫化細胞からのコレステロールの抜き出し、血管障
害、動脈硬化症、筋ジストロフィーなどに関与している
ほか、セリンキナーゼ、Ｇプロテイン、Ｓｒｃ様キナー
ゼ、プロテインキナーゼＣ（例、プロテインキナーゼＣ
αなど）、Ｒａｓ関連ＧＴＰアーゼ、ＲＡＳ、ジストロ
フィン等と相互作用している。以下に、本発明のタンパ
ク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩（以下、本発
明のタンパク質等と略記する場合がある）、本発明のタ
ンパク質または部分ペプチドをコードするＤＮＡ（以
下、本発明のＤＮＡと略記する場合がある）、本発明の
タンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩に対す
る抗体（以下、本発明の抗体と略記する場合がある）お
よびアンチセンスＤＮＡの用途を説明する。
分子量が約１.５〜３万、好ましくは約１.８〜２万のカ
ベオリン（好ましくは、ヒト由来カベオリン）であり、
例えば、カベオーラ構造の形成、糖尿病、肥満、癌化、
泡沫化細胞からのコレステロールの抜き出し、血管障
害、動脈硬化症、筋ジストロフィーなどに関与している
ほか、セリンキナーゼ、Ｇプロテイン、Ｓｒｃ様キナー
ゼ、プロテインキナーゼＣ（例、プロテインキナーゼＣ
αなど）、Ｒａｓ関連ＧＴＰアーゼ、ＲＡＳ、ジストロ
フィン等と相互作用している。以下に、本発明のタンパ
ク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩（以下、本発
明のタンパク質等と略記する場合がある）、本発明のタ
ンパク質または部分ペプチドをコードするＤＮＡ（以
下、本発明のＤＮＡと略記する場合がある）、本発明の
タンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩に対す
る抗体（以下、本発明の抗体と略記する場合がある）お
よびアンチセンスＤＮＡの用途を説明する。
【００４５】（１）本発明のタンパク質が関与する各種
疾病の治療・予防剤 カベオリンタンパク質またはそれをコードするＤＮＡに
異常があったり、欠損している場合、発現量が減少して
いる場合、あるいは本発明のタンパク質の機能が十分に
発揮されていない場合、例えば、血管障害、糖尿病、肥
満、癌化、動脈硬化症、筋ジストロフィーなどの種々の
疾病が発症する。本発明のタンパク質等は前記したカベ
オリンの機能を有しているので、本発明のタンパク質等
または本発明のＤＮＡは、例えば、血管障害、糖尿病、
肥満、癌化、動脈硬化症、筋ジストロフィーなどの種々
の疾病の治療・予防剤として使用することができる。例
えば、生体内において本発明のタンパク質等が減少ある
いは欠損しているために、細胞におけるカベオリンの機
能を十分に、あるいは正常に発揮できない患者がいる場
合に、（イ）本発明のタンパク質等をコードするＤＮＡ
を該患者に投与し、生体内で該タンパク質等を発現させ
ることによって、（ロ）細胞に本発明のタンパク質等を
コードするＤＮＡを挿入し、該タンパク質を発現させた
後に、該細胞を患者に移植することによって、または
（ハ）本発明のタンパク質等を該患者に投与することな
どによって、該患者における本発明のタンパク質等の役
割を十分に、あるいは正常に発揮させることができる。
疾病の治療・予防剤 カベオリンタンパク質またはそれをコードするＤＮＡに
異常があったり、欠損している場合、発現量が減少して
いる場合、あるいは本発明のタンパク質の機能が十分に
発揮されていない場合、例えば、血管障害、糖尿病、肥
満、癌化、動脈硬化症、筋ジストロフィーなどの種々の
疾病が発症する。本発明のタンパク質等は前記したカベ
オリンの機能を有しているので、本発明のタンパク質等
または本発明のＤＮＡは、例えば、血管障害、糖尿病、
肥満、癌化、動脈硬化症、筋ジストロフィーなどの種々
の疾病の治療・予防剤として使用することができる。例
えば、生体内において本発明のタンパク質等が減少ある
いは欠損しているために、細胞におけるカベオリンの機
能を十分に、あるいは正常に発揮できない患者がいる場
合に、（イ）本発明のタンパク質等をコードするＤＮＡ
を該患者に投与し、生体内で該タンパク質等を発現させ
ることによって、（ロ）細胞に本発明のタンパク質等を
コードするＤＮＡを挿入し、該タンパク質を発現させた
後に、該細胞を患者に移植することによって、または
（ハ）本発明のタンパク質等を該患者に投与することな
どによって、該患者における本発明のタンパク質等の役
割を十分に、あるいは正常に発揮させることができる。
【００４６】本発明のタンパク質等を上記の治療・予防
剤として使用する場合は、例えば、必要に応じて糖衣を
施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプ
セル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以
外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁
液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例え
ば、本発明のタンパク質等を生理学的に認められる担
体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合
剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される
単位用量形態で混和することによって製造することがで
きる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲
の適当な容量が得られるようにするものである。本発明
のＤＮＡを上記した疾患の治療・予防剤として使用する
場合は、本発明のＤＮＡを単独あるいはレトロウイルス
ベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスア
ソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクター
に挿入した後、常套手段に従ってヒトまたは温血動物に
投与することができる。本発明のＤＮＡは、そのまま
で、あるいは摂取促進のための補助剤などの生理学的に
認められる担体とともに、遺伝子銃やハイドロゲルカテ
ーテルのようなカテーテルによって投与できる。本発明
のタンパク質等を上記の治療・予防剤として使用する場
合は、少なくとも９０％、好ましくは９５％以上、より
好ましく９８％以上、さらに好ましくは９９％以上に精
製されたものを使用するのが好ましい。
剤として使用する場合は、例えば、必要に応じて糖衣を
施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプ
セル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以
外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁
液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例え
ば、本発明のタンパク質等を生理学的に認められる担
体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合
剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される
単位用量形態で混和することによって製造することがで
きる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲
の適当な容量が得られるようにするものである。本発明
のＤＮＡを上記した疾患の治療・予防剤として使用する
場合は、本発明のＤＮＡを単独あるいはレトロウイルス
ベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスア
ソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクター
に挿入した後、常套手段に従ってヒトまたは温血動物に
投与することができる。本発明のＤＮＡは、そのまま
で、あるいは摂取促進のための補助剤などの生理学的に
認められる担体とともに、遺伝子銃やハイドロゲルカテ
ーテルのようなカテーテルによって投与できる。本発明
のタンパク質等を上記の治療・予防剤として使用する場
合は、少なくとも９０％、好ましくは９５％以上、より
好ましく９８％以上、さらに好ましくは９９％以上に精
製されたものを使用するのが好ましい。
【００４７】錠剤、カプセル剤などに混和することがで
きる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスター
チ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性
セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチ
ン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグ
ネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリ
ンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチ
ェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態
がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。注射の
ための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性
物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油など
を溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って
処方することができる。注射用の水性液としては、例え
ば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張
液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩
化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助
剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアル
コール（ば、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート
８０TM、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液
としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶
解補助剤として、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコー
ルなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン
酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例え
ば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安
定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリ
コールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、
フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。
調整された注射液などの医薬組成物は、通常、適当なア
ンプルに充填される。
きる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスター
チ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性
セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチ
ン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグ
ネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリ
ンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチ
ェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態
がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに
油脂のような液状担体を含有することができる。注射の
ための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性
物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油など
を溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って
処方することができる。注射用の水性液としては、例え
ば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張
液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩
化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助
剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアル
コール（ば、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート
８０TM、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液
としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶
解補助剤として、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコー
ルなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン
酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例え
ば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安
定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリ
コールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、
フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。
調整された注射液などの医薬組成物は、通常、適当なア
ンプルに充填される。
【００４８】このようにして得られる製剤は、安全で低
毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例え
ば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブ
タ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与
することができる。本発明のタンパク質等の投与量は、
対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はある
が、例えば、動脈硬化症の治療目的で本発明のタンパク
質等を経口投与する場合、一般的に成人（６０ｋｇとし
て）においては、一日につき本発明のタンパク質等を約
０.１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍ
ｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経
口的に投与する場合、本発明のタンパク質等の１回投与
量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例え
ば、動脈硬化症の治療目的で本発明のタンパク質等を注
射剤の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与する場合
は、一日につき本発明のタンパク質等を約０．０１〜３
０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より
好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投
与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ
当たりに換算した量を投与することができる。
毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例え
ば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブ
タ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与
することができる。本発明のタンパク質等の投与量は、
対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はある
が、例えば、動脈硬化症の治療目的で本発明のタンパク
質等を経口投与する場合、一般的に成人（６０ｋｇとし
て）においては、一日につき本発明のタンパク質等を約
０.１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍ
ｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経
口的に投与する場合、本発明のタンパク質等の１回投与
量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例え
ば、動脈硬化症の治療目的で本発明のタンパク質等を注
射剤の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与する場合
は、一日につき本発明のタンパク質等を約０．０１〜３
０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より
好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投
与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ
当たりに換算した量を投与することができる。
【００４９】（２）遺伝子診断剤 本発明のＤＮＡは、プローブとして使用することによ
り、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、ウサギ、ヒ
ツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）における本
発明のタンパク質等をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡ
の異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例
えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるい
は発現低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは
発現過多などを検出するための遺伝子診断剤として有用
である。本発明のＤＮＡを用いる上記の遺伝子診断は、
例えば、自体公知のノーザンハイブリダイゼーションや
ＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（ゲノミックス（Genomics），第５
巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、プロシージング
ズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエ
ンシイズ・オブ・ユーエスエー（Proceedings ofthe Na
tinal Academy of Sciences of the United States of
America），第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１９８
９年））などにより実施することができる。例えば、ノ
ーザンハイブリダイゼーションにより本発明のタンパク
質等をコードするｍＲＮＡの発現低下が検出された場合
は、例えば、血管障害、糖尿病、肥満、癌化、動脈硬化
症、筋ジストロフィーなどの疾患である、または将来罹
患する可能性が高いと診断することができる。一方、ハ
イブリダイゼーションにより該ｍＲＮＡの発現過多が検
出された場合は、例えば、虚血性心疾患、末梢血管疾患
などの疾患である、または将来罹患する可能性が高いと
診断することができる。また、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ法によ
りＤＮＡの突然変異が検出された場合は、例えば、血管
障害、糖尿病、肥満、癌化、動脈硬化症、筋ジストロフ
ィー、虚血性心疾患、末梢血管疾患などの疾患である、
または将来罹患する可能性が高いと診断することができ
る。
り、ヒトまたは哺乳動物（例えば、ラット、ウサギ、ヒ
ツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）における本
発明のタンパク質等をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡ
の異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例
えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるい
は発現低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは
発現過多などを検出するための遺伝子診断剤として有用
である。本発明のＤＮＡを用いる上記の遺伝子診断は、
例えば、自体公知のノーザンハイブリダイゼーションや
ＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（ゲノミックス（Genomics），第５
巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、プロシージング
ズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエ
ンシイズ・オブ・ユーエスエー（Proceedings ofthe Na
tinal Academy of Sciences of the United States of
America），第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１９８
９年））などにより実施することができる。例えば、ノ
ーザンハイブリダイゼーションにより本発明のタンパク
質等をコードするｍＲＮＡの発現低下が検出された場合
は、例えば、血管障害、糖尿病、肥満、癌化、動脈硬化
症、筋ジストロフィーなどの疾患である、または将来罹
患する可能性が高いと診断することができる。一方、ハ
イブリダイゼーションにより該ｍＲＮＡの発現過多が検
出された場合は、例えば、虚血性心疾患、末梢血管疾患
などの疾患である、または将来罹患する可能性が高いと
診断することができる。また、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ法によ
りＤＮＡの突然変異が検出された場合は、例えば、血管
障害、糖尿病、肥満、癌化、動脈硬化症、筋ジストロフ
ィー、虚血性心疾患、末梢血管疾患などの疾患である、
または将来罹患する可能性が高いと診断することができ
る。
【００５０】（３）本発明のタンパク質、その部分ペプ
チドまたはそれらの塩の定量 本発明の抗体は、本発明のタンパク質等を特異的に認識
することができるので、被検液中の本発明のタンパク質
の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定量などに
使用することができる。すなわち、本発明は、（ｉ）本
発明のタンパク質等に対する抗体と、被検液および標識
化された本発明のタンパク質等とを競合的に反応させ、
該抗体に結合した標識化された本発明のタンパク質等の
割合を測定することを特徴とする被検液中の本発明のタ
ンパク質等の定量法、および（ii）被検液と担体上に不
溶化した本発明の抗体および標識化された本発明の別の
抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化
担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検
液中の本発明のタンパク質等の定量法を提供する。上記
（ii）の定量法においては、一方の抗体が本発明のタン
パク質等のＮ端部を認識する抗体で、他方の抗体が本発
明のタンパク質等のＣ端部に反応する抗体であることが
望ましい。
チドまたはそれらの塩の定量 本発明の抗体は、本発明のタンパク質等を特異的に認識
することができるので、被検液中の本発明のタンパク質
の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定量などに
使用することができる。すなわち、本発明は、（ｉ）本
発明のタンパク質等に対する抗体と、被検液および標識
化された本発明のタンパク質等とを競合的に反応させ、
該抗体に結合した標識化された本発明のタンパク質等の
割合を測定することを特徴とする被検液中の本発明のタ
ンパク質等の定量法、および（ii）被検液と担体上に不
溶化した本発明の抗体および標識化された本発明の別の
抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、不溶化
担体上の標識剤の活性を測定することを特徴とする被検
液中の本発明のタンパク質等の定量法を提供する。上記
（ii）の定量法においては、一方の抗体が本発明のタン
パク質等のＮ端部を認識する抗体で、他方の抗体が本発
明のタンパク質等のＣ端部に反応する抗体であることが
望ましい。
【００５１】また、本発明のタンパク質等に対するモノ
クローナル抗体（以下、抗タンパク質抗体と称する場合
がある）を用いて本発明のタンパク質等の定量を行なえ
るほか、組織染色等による検出を行なうこともできる。
これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、
また、抗体分子のＦ(ａｂ')2 、Ｆａｂ'、あるいはＦａ
ｂ画分を用いてもよい。本発明の抗体を用いる本発明の
タンパク質等の定量法は、 特に制限されるべきもので
はなく、被測定液中の抗原量（例えば、タンパク質量）
に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を
化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の
抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出す
る測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例
えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法お
よびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感度、特異
性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好
ましい。標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤と
しては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発
光物質などが用いられる。放射性同位元素としては、例
えば、〔125Ｉ〕、〔131Ｉ〕、〔3Ｈ〕、〔14Ｃ〕など
が用いられる。上記酵素としては、安定で比活性の大き
なものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β
−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオ
キシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍
光物質としては、例えば、フルオレスカミン、フルオレ
ッセンイソチオシアネートなどが用いられる。発光物質
としては、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ル
シフェリン、ルシゲニンなどがそれぞれ用いられる。さ
らに、抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビオチン−
アビジン系を用いることもできる。
クローナル抗体（以下、抗タンパク質抗体と称する場合
がある）を用いて本発明のタンパク質等の定量を行なえ
るほか、組織染色等による検出を行なうこともできる。
これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよく、
また、抗体分子のＦ(ａｂ')2 、Ｆａｂ'、あるいはＦａ
ｂ画分を用いてもよい。本発明の抗体を用いる本発明の
タンパク質等の定量法は、 特に制限されるべきもので
はなく、被測定液中の抗原量（例えば、タンパク質量）
に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を
化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の
抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出す
る測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例
えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法お
よびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感度、特異
性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好
ましい。標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤と
しては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発
光物質などが用いられる。放射性同位元素としては、例
えば、〔125Ｉ〕、〔131Ｉ〕、〔3Ｈ〕、〔14Ｃ〕など
が用いられる。上記酵素としては、安定で比活性の大き
なものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β
−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオ
キシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍
光物質としては、例えば、フルオレスカミン、フルオレ
ッセンイソチオシアネートなどが用いられる。発光物質
としては、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ル
シフェリン、ルシゲニンなどがそれぞれ用いられる。さ
らに、抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビオチン−
アビジン系を用いることもできる。
【００５２】抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物
理吸着を用いてもよく、また通常タンパク質あるいは酵
素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用
いる方法でもよい。担体としては、例えば、アガロー
ス、デキストラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポ
リスチレン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹
脂、あるいはガラス等が用いられる。サンドイッチ法に
おいては不溶化した抗タンパク質抗体に被検液を反応さ
せ（１次反応）、さらに標識化抗タンパク質抗体を反応
させ（２次反応）たのち、不溶化担体上の標識剤の活性
を測定することにより被検液中の本発明のタンパク質量
を定量することができる。１次反応と２次反応は逆の順
序に行なっても、また、同時に行なってもよいし時間を
ずらして行なってもよい。標識化剤および不溶化の方法
は前記のそれらに準じることができる。また、サンドイ
ッチ法による免疫測定法において、固相用抗体あるいは
標識用抗体に用いられる抗体は必ずしも１種類である必
要はなく、測定感度を向上させる等の目的で２種類以上
の抗体の混合物を用いてもよい。本発明のサンドイッチ
法による本発明のタンパク質等の測定法においては、１
次反応と２次反応に用いられる抗体は、本発明のタンパ
ク質等の結合する部位が相異なる抗体が好ましく用いら
れる。すなわち、１次反応および２次反応に用いられる
抗体は、例えば、２次反応で用いられる抗体が、本発明
のタンパク質等のＣ端部を認識する場合、１次反応で用
いられる抗体は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部
を認識する抗体が用いられる。
理吸着を用いてもよく、また通常タンパク質あるいは酵
素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用
いる方法でもよい。担体としては、例えば、アガロー
ス、デキストラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポ
リスチレン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹
脂、あるいはガラス等が用いられる。サンドイッチ法に
おいては不溶化した抗タンパク質抗体に被検液を反応さ
せ（１次反応）、さらに標識化抗タンパク質抗体を反応
させ（２次反応）たのち、不溶化担体上の標識剤の活性
を測定することにより被検液中の本発明のタンパク質量
を定量することができる。１次反応と２次反応は逆の順
序に行なっても、また、同時に行なってもよいし時間を
ずらして行なってもよい。標識化剤および不溶化の方法
は前記のそれらに準じることができる。また、サンドイ
ッチ法による免疫測定法において、固相用抗体あるいは
標識用抗体に用いられる抗体は必ずしも１種類である必
要はなく、測定感度を向上させる等の目的で２種類以上
の抗体の混合物を用いてもよい。本発明のサンドイッチ
法による本発明のタンパク質等の測定法においては、１
次反応と２次反応に用いられる抗体は、本発明のタンパ
ク質等の結合する部位が相異なる抗体が好ましく用いら
れる。すなわち、１次反応および２次反応に用いられる
抗体は、例えば、２次反応で用いられる抗体が、本発明
のタンパク質等のＣ端部を認識する場合、１次反応で用
いられる抗体は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部
を認識する抗体が用いられる。
【００５３】本発明の抗体をサンドイッチ法以外の測定
システム、例えば、競合法、イムノメトリック法あるい
はネフロメトリーなどに用いることができる。競合法で
は、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的
に反応させたのち、未反応の標識抗原（Ｆ）と抗体と結
合した標識抗原（Ｂ）とを分離し（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，
Ｆいずれかの標識量を測定し、被検液中の抗原量を定量
する。本反応法には、抗体として可溶性抗体を用い、Ｂ
／Ｆ分離をポリエチレングリコール、前記抗体に対する
第２抗体などを用いる液相法、および、第１抗体として
固相化抗体を用いるか、あるいは、第１抗体は可溶性の
ものを用い第２抗体として固相化抗体を用いる固相化法
とが用いられる。イムノメトリック法では、被検液中の
抗原と固相化抗原とを一定量の標識化抗体に対して競合
反応させた後固相と液相を分離するか、あるいは、被検
液中の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応させ、次に固
相化抗原を加え未反応の標識化抗体を固相に結合させた
のち、固相と液相を分離する。次に、いずれかの相の標
識量を測定し被検液中の抗原量を定量する。また、ネフ
ロメトリーでは、ゲル内あるいは溶液中で抗原抗体反応
の結果生じた不溶性の沈降物の量を測定する。被検液中
の抗原量が僅かであり、少量の沈降物しか得られない場
合にもレーザーの散乱を利用するレーザーネフロメトリ
ーなどが好適に用いられる。
システム、例えば、競合法、イムノメトリック法あるい
はネフロメトリーなどに用いることができる。競合法で
は、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的
に反応させたのち、未反応の標識抗原（Ｆ）と抗体と結
合した標識抗原（Ｂ）とを分離し（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，
Ｆいずれかの標識量を測定し、被検液中の抗原量を定量
する。本反応法には、抗体として可溶性抗体を用い、Ｂ
／Ｆ分離をポリエチレングリコール、前記抗体に対する
第２抗体などを用いる液相法、および、第１抗体として
固相化抗体を用いるか、あるいは、第１抗体は可溶性の
ものを用い第２抗体として固相化抗体を用いる固相化法
とが用いられる。イムノメトリック法では、被検液中の
抗原と固相化抗原とを一定量の標識化抗体に対して競合
反応させた後固相と液相を分離するか、あるいは、被検
液中の抗原と過剰量の標識化抗体とを反応させ、次に固
相化抗原を加え未反応の標識化抗体を固相に結合させた
のち、固相と液相を分離する。次に、いずれかの相の標
識量を測定し被検液中の抗原量を定量する。また、ネフ
ロメトリーでは、ゲル内あるいは溶液中で抗原抗体反応
の結果生じた不溶性の沈降物の量を測定する。被検液中
の抗原量が僅かであり、少量の沈降物しか得られない場
合にもレーザーの散乱を利用するレーザーネフロメトリ
ーなどが好適に用いられる。
【００５４】これら個々の免疫学的測定法を本発明の定
量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の
設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の
条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発
明のタンパク質等の測定系を構築すればよい。これらの
一般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを
参照することができる。例えば、入江 寛編「ラジオイ
ムノアッセイ〕（講談社、昭和４９年発行）、入江 寛
編「続ラジオイムノアッセイ〕（講談社、昭和５４年発
行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭
和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第
２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編
「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年
発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 70(Immunochem
ical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunochem
ical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunochem
ical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochem
ical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Mono
clonal Antibodies and General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I:Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodie
s))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照する
ことができる。以上のようにして、本発明の抗体を用い
ることによって、本発明のタンパク質等を感度良く定量
することができる。
量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の
設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の
条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発
明のタンパク質等の測定系を構築すればよい。これらの
一般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを
参照することができる。例えば、入江 寛編「ラジオイ
ムノアッセイ〕（講談社、昭和４９年発行）、入江 寛
編「続ラジオイムノアッセイ〕（講談社、昭和５４年発
行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭
和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第
２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編
「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年
発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 70(Immunochem
ical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunochem
ical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunochem
ical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochem
ical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Mono
clonal Antibodies and General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I:Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodie
s))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照する
ことができる。以上のようにして、本発明の抗体を用い
ることによって、本発明のタンパク質等を感度良く定量
することができる。
【００５５】さらには、本発明の抗体を用いて本発明の
タンパク質等の濃度を定量することによって、本発明の
タンパク質等が関与する種々の疾病の診断をすることが
できる。具体的には、本発明のタンパク質等の濃度の減
少が検出された場合は、例えば、例えば、血管障害、糖
尿病、肥満、癌化、動脈硬化症、筋ジストロフィーなど
の疾患である、あるいは将来罹患する可能性が高いと診
断することができる。一方、本発明のタンパク質等の濃
度の増加が検出された場合は、例えば、虚血性心疾患、
末梢血管疾患などの疾患である、あるいは将来罹患する
可能性が高いと診断することができる。このように、本
発明の抗体は上記疾患の診断剤として有用である。ま
た、本発明の抗体は、体液や組織などの被検体中に存在
する本発明のタンパク質等を検出するために使用するこ
とができる。また、本発明のタンパク質等を精製するた
めに使用する抗体カラムの作製、精製時の各分画中の本
発明のタンパク質等の検出、被検細胞内における本発明
のタンパク質等の挙動の分析などのために使用すること
ができる。
タンパク質等の濃度を定量することによって、本発明の
タンパク質等が関与する種々の疾病の診断をすることが
できる。具体的には、本発明のタンパク質等の濃度の減
少が検出された場合は、例えば、例えば、血管障害、糖
尿病、肥満、癌化、動脈硬化症、筋ジストロフィーなど
の疾患である、あるいは将来罹患する可能性が高いと診
断することができる。一方、本発明のタンパク質等の濃
度の増加が検出された場合は、例えば、虚血性心疾患、
末梢血管疾患などの疾患である、あるいは将来罹患する
可能性が高いと診断することができる。このように、本
発明の抗体は上記疾患の診断剤として有用である。ま
た、本発明の抗体は、体液や組織などの被検体中に存在
する本発明のタンパク質等を検出するために使用するこ
とができる。また、本発明のタンパク質等を精製するた
めに使用する抗体カラムの作製、精製時の各分画中の本
発明のタンパク質等の検出、被検細胞内における本発明
のタンパク質等の挙動の分析などのために使用すること
ができる。
【００５６】（４）疾病に対する医薬候補化合物のスク
リーニング 本発明のタンパク質のカベオリンとしての機能を促進す
る化合物またはその塩は、例えば、血管障害、糖尿病、
肥満、癌化、動脈硬化、筋ジストロフィーなどの各種疾
病の治療・予防剤として使用できる。また、 本発明の
タンパク質のカベオリンとしての機能を阻害する化合物
またはその塩は、例えば、虚血性心疾患、末梢血管疾患
などの各種疾病の治療・予防剤として使用できる。した
がって、本発明のタンパク質は、本発明のタンパク質の
機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリ
ーニングのための試薬として有用である。すなわち、本
発明は、 （Ｉ）本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそ
れらの塩を用いることを特徴とする本発明のタンパク質
の機能を促進または阻害する化合物もしくはその塩のス
クリーニング方法を提供し、より具体的には、例えば、 （II）（ｉ）本発明のタンパク質、その部分ペプチドま
たはそれらの塩に試験化合物を接触させない場合と（i
i）本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれ
らの塩に試験化合物を接触させた場合との比較を行なう
ことを特徴とする本発明のタンパク質の機能を促進また
は阻害する化合物もしくはその塩のスクリーニング方法
を提供する。本発明のタンパク質の機能を促進すると
は、機能の増強にかぎらず、本発明のタンパク質の発現
量を増加することなども意味し、本発明のタンパク質の
機能を阻害するとは、機能の抑制にかぎらず、本発明の
タンパク質の発現量を減少させることなども意味する。
具体的には、上記スクリーニング方法においては、例え
ば、（ｉ）と（ii）の場合における、カベオーラ構造の
形成、コレステロール結合活性、本発明のタンパク質の
発現量、あるいはセリンキナーゼ，Ｇプロテイン，Ｓｒ
ｃ様キナーゼ，プロテインキナーゼＣ，Ｒａｓ関連ＧＴ
Ｐアーゼ，Ｒａｓ，ジストロフィンなどの結合タンパク
質との相互作用などを測定して、比較することを特徴と
するものである。本発明のタンパク質、その部分ペプチ
ドまたはそれらの塩としては、本発明のタンパク質を含
有する細胞またはその細胞膜画分を用いることもできる
し、温血動物の各種細胞もしくは組織またはそれらの膜
画分を用いることができる。
リーニング 本発明のタンパク質のカベオリンとしての機能を促進す
る化合物またはその塩は、例えば、血管障害、糖尿病、
肥満、癌化、動脈硬化、筋ジストロフィーなどの各種疾
病の治療・予防剤として使用できる。また、 本発明の
タンパク質のカベオリンとしての機能を阻害する化合物
またはその塩は、例えば、虚血性心疾患、末梢血管疾患
などの各種疾病の治療・予防剤として使用できる。した
がって、本発明のタンパク質は、本発明のタンパク質の
機能を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリ
ーニングのための試薬として有用である。すなわち、本
発明は、 （Ｉ）本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそ
れらの塩を用いることを特徴とする本発明のタンパク質
の機能を促進または阻害する化合物もしくはその塩のス
クリーニング方法を提供し、より具体的には、例えば、 （II）（ｉ）本発明のタンパク質、その部分ペプチドま
たはそれらの塩に試験化合物を接触させない場合と（i
i）本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれ
らの塩に試験化合物を接触させた場合との比較を行なう
ことを特徴とする本発明のタンパク質の機能を促進また
は阻害する化合物もしくはその塩のスクリーニング方法
を提供する。本発明のタンパク質の機能を促進すると
は、機能の増強にかぎらず、本発明のタンパク質の発現
量を増加することなども意味し、本発明のタンパク質の
機能を阻害するとは、機能の抑制にかぎらず、本発明の
タンパク質の発現量を減少させることなども意味する。
具体的には、上記スクリーニング方法においては、例え
ば、（ｉ）と（ii）の場合における、カベオーラ構造の
形成、コレステロール結合活性、本発明のタンパク質の
発現量、あるいはセリンキナーゼ，Ｇプロテイン，Ｓｒ
ｃ様キナーゼ，プロテインキナーゼＣ，Ｒａｓ関連ＧＴ
Ｐアーゼ，Ｒａｓ，ジストロフィンなどの結合タンパク
質との相互作用などを測定して、比較することを特徴と
するものである。本発明のタンパク質、その部分ペプチ
ドまたはそれらの塩としては、本発明のタンパク質を含
有する細胞またはその細胞膜画分を用いることもできる
し、温血動物の各種細胞もしくは組織またはそれらの膜
画分を用いることができる。
【００５７】より具体的には、本発明は、 （３）コレステロール含有膜成分を、標識した本発明
のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩に接
触させた場合と、コレステロール含有膜成分および試
験化合物を標識した本発明のタンパク質、その部分ペプ
チドまたはそれらの塩に接触させた場合における、コレ
ステロール含有膜成分と標識した本発明のタンパク質、
その部分ペプチドまたはそれらの塩との結合量を測定
し、比較することを特徴とする本発明のタンパク質、そ
の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進または阻
害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、およ
び （４）本発明のタンパク質と相互作用を示す、標識し
た結合タンパク質あるいはその部分ペプチドまたはそれ
らの塩（以下、結合タンパク質またはその部分ペプチド
と略記する）を、本発明のタンパク質を含有する細胞ま
たはその細胞膜画分に接触させた場合と、標識した結
合タンパク質あるいはその部分ペプチドおよび試験化合
物を、本発明のタンパク質を含有する細胞またはその細
胞膜画分に接触させた場合における、標識した結合タン
パク質あるいはその部分ペプチドと該細胞またはその細
胞膜画分との結合量を測定し、比較することを特徴とす
る本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれら
の塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩の
スクリーニング方法を提供する。
のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの塩に接
触させた場合と、コレステロール含有膜成分および試
験化合物を標識した本発明のタンパク質、その部分ペプ
チドまたはそれらの塩に接触させた場合における、コレ
ステロール含有膜成分と標識した本発明のタンパク質、
その部分ペプチドまたはそれらの塩との結合量を測定
し、比較することを特徴とする本発明のタンパク質、そ
の部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進または阻
害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、およ
び （４）本発明のタンパク質と相互作用を示す、標識し
た結合タンパク質あるいはその部分ペプチドまたはそれ
らの塩（以下、結合タンパク質またはその部分ペプチド
と略記する）を、本発明のタンパク質を含有する細胞ま
たはその細胞膜画分に接触させた場合と、標識した結
合タンパク質あるいはその部分ペプチドおよび試験化合
物を、本発明のタンパク質を含有する細胞またはその細
胞膜画分に接触させた場合における、標識した結合タン
パク質あるいはその部分ペプチドと該細胞またはその細
胞膜画分との結合量を測定し、比較することを特徴とす
る本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれら
の塩の機能を促進または阻害する化合物またはその塩の
スクリーニング方法を提供する。
【００５８】本発明のタンパク質を含有する細胞として
は、前記した本発明のタンパク質を発現した宿主細胞を
いうが、該宿主細胞としては、大腸菌、枯草菌、酵母、
昆虫細胞、動物細胞などが好ましい。本発明のスクリー
ニング方法において、本発明のタンパク質を含有する細
胞を用いる場合、該細胞をグルタルアルデヒド、ホルマ
リンなどで固定化してもよい。固定化方法はそれ自体公
知の方法に従って行うことができる。本発明のタンパク
質を含有する細胞の細胞膜画分としては、細胞を破砕し
た後、それ自体公知の方法で得られる細胞膜が多く含ま
れる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、Pott
er−Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、
ワーリングブレンダーやポリトロン（Kinematica社製）
のよる破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで
加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによ
る破砕などが挙げられる。細胞膜の分画には、分画遠心
分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法
が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（50
0rpm〜3000rpm）で短時間（通常、約１分〜１０分）遠
心し、上清をさらに高速（15000rpm〜30000rpm）で通常
３０分〜２時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。
該膜画分中には、発現した本発明のタンパク質と細胞由
来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。
は、前記した本発明のタンパク質を発現した宿主細胞を
いうが、該宿主細胞としては、大腸菌、枯草菌、酵母、
昆虫細胞、動物細胞などが好ましい。本発明のスクリー
ニング方法において、本発明のタンパク質を含有する細
胞を用いる場合、該細胞をグルタルアルデヒド、ホルマ
リンなどで固定化してもよい。固定化方法はそれ自体公
知の方法に従って行うことができる。本発明のタンパク
質を含有する細胞の細胞膜画分としては、細胞を破砕し
た後、それ自体公知の方法で得られる細胞膜が多く含ま
れる画分のことをいう。細胞の破砕方法としては、Pott
er−Elvehjem型ホモジナイザーで細胞を押し潰す方法、
ワーリングブレンダーやポリトロン（Kinematica社製）
のよる破砕、超音波による破砕、フレンチプレスなどで
加圧しながら細胞を細いノズルから噴出させることによ
る破砕などが挙げられる。細胞膜の分画には、分画遠心
分離法や密度勾配遠心分離法などの遠心力による分画法
が主として用いられる。例えば、細胞破砕液を低速（50
0rpm〜3000rpm）で短時間（通常、約１分〜１０分）遠
心し、上清をさらに高速（15000rpm〜30000rpm）で通常
３０分〜２時間遠心し、得られる沈澱を膜画分とする。
該膜画分中には、発現した本発明のタンパク質と細胞由
来のリン脂質や膜蛋白質などの膜成分が多く含まれる。
【００５９】標識したコレステロール含有膜成分として
は、例えば、平滑筋細胞、繊維芽細胞、脂肪細胞などの
細胞の膜成分やコレステロール含有リポソームなどの膜
成分を、例えば〔3Ｈ〕、〔125Ｉ〕、〔14Ｃ〕、
〔35Ｓ〕などで標識したものなどが用いられる。膜成分
の調製は、前記の本発明のタンパク質を含有する細胞の
細胞膜画分と同様にして行なうことができる。標識した
結合タンパク質またはその部分ペプチドとしては、例え
ば、セリンキナーゼ、Ｇプロテイン、プロテインキナー
ゼＣα、Ｒａｓ関連ＧＴＰアーゼ〔以上、P.E.Scherer
ら、プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミッ
ク・サイエンス、９３巻、１３１頁、１９９６年〕、Ｓ
ｒｃ様キナーゼ〔Murataら、プロシーディング・オブ・
ナショナル・アカデミック・サイエンス、９２巻、１０
３９頁、１９９５年〕、Ｒａｓ〔K.O.Songら、ジャーナ
ル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２７１巻、
９６９０頁、１９９６年〕、ジストロフィン〔Z.Tang
ら、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
ー、２７１巻、２２５５頁、１９９６年〕などの本発明
のタンパク質と相互作用を示すタンパク質またはその部
分ペプチドを、例えば〔3Ｈ〕、〔125Ｉ〕、〔14Ｃ〕、
〔35Ｓ〕などで標識したものなどが用いられる。試験化
合物としては、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチ
ド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植
物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが用いられ、これ
ら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合
物であってもよい。
は、例えば、平滑筋細胞、繊維芽細胞、脂肪細胞などの
細胞の膜成分やコレステロール含有リポソームなどの膜
成分を、例えば〔3Ｈ〕、〔125Ｉ〕、〔14Ｃ〕、
〔35Ｓ〕などで標識したものなどが用いられる。膜成分
の調製は、前記の本発明のタンパク質を含有する細胞の
細胞膜画分と同様にして行なうことができる。標識した
結合タンパク質またはその部分ペプチドとしては、例え
ば、セリンキナーゼ、Ｇプロテイン、プロテインキナー
ゼＣα、Ｒａｓ関連ＧＴＰアーゼ〔以上、P.E.Scherer
ら、プロシーディング・オブ・ナショナル・アカデミッ
ク・サイエンス、９３巻、１３１頁、１９９６年〕、Ｓ
ｒｃ様キナーゼ〔Murataら、プロシーディング・オブ・
ナショナル・アカデミック・サイエンス、９２巻、１０
３９頁、１９９５年〕、Ｒａｓ〔K.O.Songら、ジャーナ
ル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２７１巻、
９６９０頁、１９９６年〕、ジストロフィン〔Z.Tang
ら、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
ー、２７１巻、２２５５頁、１９９６年〕などの本発明
のタンパク質と相互作用を示すタンパク質またはその部
分ペプチドを、例えば〔3Ｈ〕、〔125Ｉ〕、〔14Ｃ〕、
〔35Ｓ〕などで標識したものなどが用いられる。試験化
合物としては、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチ
ド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植
物抽出液、動物組織抽出液、血漿などが用いられ、これ
ら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合
物であってもよい。
【００６０】具体的には、標識した結合タンパク質また
はその部分ペプチドと本発明のタンパク質を含有する細
胞または細胞膜画分との結合を促進または阻害する化合
物のスクリーニングを行なうには、まず本発明のタンパ
ク質を含有する細胞またはその細胞膜画分を、スクリー
ニングに適したバッファーに懸濁することにより本発明
のタンパク質標品を調製する。バッファーには、ｐＨ４
〜１０（望ましくはｐＨ６〜８）のリン酸バッファー、
トリス−塩酸バッファーなどの結合タンパク質等と本発
明のタンパク質を含有する細胞等との結合を阻害しない
バッファーであればいずれでもよい。また、非特異的結
合を低減させる目的で、オクチルグルコシド、ＣＨＡＰ
Ｓ、Ｔｗｅｅｎ−８０TM（花王−アトラス社）、ジギト
ニン、デオキシコレートなどの界面活性剤をバッファー
に加えることもできる。さらに、プロテアーゼによるレ
セプターやリガンドの分解を抑える目的でＰＭＳＦ、ロ
イペプチン、Ｅ−６４（ペプチド研究所製）、ペプスタ
チンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加することもでき
る。０.０１ml〜１０ｍｌの本発明のタンパク質溶液
に、一定量（５０００ｃｐｍ〜５０００００ｃｐｍ）の
標識した結合タンパク質またはその部分ペプチドを添加
し、同時に１０-4Ｍ〜１０-10 Ｍの試験化合物を共存さ
せる。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知るために大過剰の
未標識の結合タンパク質またはその部分ペプチドを加え
た反応チューブも用意する。反応は０℃〜約５０℃、望
ましくは約４℃〜約３７℃で約２０分〜約２４時間、望
ましくは３０分〜３時間行なう。反応後、ガラス繊維濾
紙等で濾過し、適量の同バッファーで洗浄した後、ガラ
ス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレーション
カウンターまたはγ−カウンターで計測する。拮抗する
物質がない場合のカウント(Ｂ0）から非特異的結合量
（ＮＳＢ）を引いたカウント（Ｂ0−ＮＳＢ）を１００
％とした時、特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）が例えば２０
％以下、好ましくは５０％以下になる試験化合物を本発
明のタンパク質等の機能を阻害する化合物として選択す
ることができる。一方、特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）が
例えば１２０％以上、好ましくは１５０％以上になる試
験化合物を本発明のタンパク質等の機能を促進する化合
物として選択することができる。また、標識したコレス
テロール含有膜成分と本発明のタンパク質等との結合を
促進または阻害する化合物のスクリーニングも同様にし
て行なうことができる。
はその部分ペプチドと本発明のタンパク質を含有する細
胞または細胞膜画分との結合を促進または阻害する化合
物のスクリーニングを行なうには、まず本発明のタンパ
ク質を含有する細胞またはその細胞膜画分を、スクリー
ニングに適したバッファーに懸濁することにより本発明
のタンパク質標品を調製する。バッファーには、ｐＨ４
〜１０（望ましくはｐＨ６〜８）のリン酸バッファー、
トリス−塩酸バッファーなどの結合タンパク質等と本発
明のタンパク質を含有する細胞等との結合を阻害しない
バッファーであればいずれでもよい。また、非特異的結
合を低減させる目的で、オクチルグルコシド、ＣＨＡＰ
Ｓ、Ｔｗｅｅｎ−８０TM（花王−アトラス社）、ジギト
ニン、デオキシコレートなどの界面活性剤をバッファー
に加えることもできる。さらに、プロテアーゼによるレ
セプターやリガンドの分解を抑える目的でＰＭＳＦ、ロ
イペプチン、Ｅ−６４（ペプチド研究所製）、ペプスタ
チンなどのプロテアーゼ阻害剤を添加することもでき
る。０.０１ml〜１０ｍｌの本発明のタンパク質溶液
に、一定量（５０００ｃｐｍ〜５０００００ｃｐｍ）の
標識した結合タンパク質またはその部分ペプチドを添加
し、同時に１０-4Ｍ〜１０-10 Ｍの試験化合物を共存さ
せる。非特異的結合量（ＮＳＢ）を知るために大過剰の
未標識の結合タンパク質またはその部分ペプチドを加え
た反応チューブも用意する。反応は０℃〜約５０℃、望
ましくは約４℃〜約３７℃で約２０分〜約２４時間、望
ましくは３０分〜３時間行なう。反応後、ガラス繊維濾
紙等で濾過し、適量の同バッファーで洗浄した後、ガラ
ス繊維濾紙に残存する放射活性を液体シンチレーション
カウンターまたはγ−カウンターで計測する。拮抗する
物質がない場合のカウント(Ｂ0）から非特異的結合量
（ＮＳＢ）を引いたカウント（Ｂ0−ＮＳＢ）を１００
％とした時、特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）が例えば２０
％以下、好ましくは５０％以下になる試験化合物を本発
明のタンパク質等の機能を阻害する化合物として選択す
ることができる。一方、特異的結合量（Ｂ−ＮＳＢ）が
例えば１２０％以上、好ましくは１５０％以上になる試
験化合物を本発明のタンパク質等の機能を促進する化合
物として選択することができる。また、標識したコレス
テロール含有膜成分と本発明のタンパク質等との結合を
促進または阻害する化合物のスクリーニングも同様にし
て行なうことができる。
【００６１】本発明のスクリーニング用キットは、本発
明のタンパク質、その部分ペプチドまたはその塩、ある
いは本発明のタンパク質を含有する細胞またはその細胞
膜画分を含有するものである。本発明のスクリーニング
用キットの例としては、次のものが挙げられる。 〔スクリーニング用試薬（１）〕 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 ＭＥＳ（４−モルフォリンエタンスルフォニックアシッ
ド）緩衝液−食塩水（２５ｍＭ、ｐＨ６.５、０.１５Ｍ
塩化ナトリウム） タンパク質標品 本発明のタンパク質を含有する細胞またはその細胞膜画
分 標識した結合タンパク質またはその部分ペプチド 〔3Ｈ〕、〔125Ｉ〕、〔14Ｃ〕、〔35Ｓ〕などで標識し
たセリンキナーゼ、Ｇプロテイン、Ｓｒｃ様キナーゼ、
プロテインキナーゼＣ、Ｒａｓ関連ＧＴＰアーゼ、Ｒａ
ｓまたはジストロフィン 結合タンパク質またはその部分ペプチドの標準液 結合タンパク質またはその部分ペプチドを０.１％ウシ
血清アルブミン（シグマ社製）を含むＰＢＳで１ｍＭと
なるように溶解し、−２０℃で保存する。 〔測定法〕 本発明のタンパク質を含有する細胞膜画分に、１０-3
〜１０-10Ｍの試験化合物溶液を５μｌ加えた後、標識
した結合タンパク質を５μｌ加え、４℃にて３時間反応
させる。非特異的結合量を知るためには試験化合物の代
わりに１０-3Ｍの結合タンパク質を加えておく。 グラスフィルター（WhatmannGF/B）上で吸引濾過し、
１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄後、フィルターにトラ
ップされた放射活性を測定する。 液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）
を用いて放射活性を測定し、Percent of Maximum Bindi
ng（ＰＭＢ）を次の式〔数１〕で求める。
明のタンパク質、その部分ペプチドまたはその塩、ある
いは本発明のタンパク質を含有する細胞またはその細胞
膜画分を含有するものである。本発明のスクリーニング
用キットの例としては、次のものが挙げられる。 〔スクリーニング用試薬（１）〕 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 ＭＥＳ（４−モルフォリンエタンスルフォニックアシッ
ド）緩衝液−食塩水（２５ｍＭ、ｐＨ６.５、０.１５Ｍ
塩化ナトリウム） タンパク質標品 本発明のタンパク質を含有する細胞またはその細胞膜画
分 標識した結合タンパク質またはその部分ペプチド 〔3Ｈ〕、〔125Ｉ〕、〔14Ｃ〕、〔35Ｓ〕などで標識し
たセリンキナーゼ、Ｇプロテイン、Ｓｒｃ様キナーゼ、
プロテインキナーゼＣ、Ｒａｓ関連ＧＴＰアーゼ、Ｒａ
ｓまたはジストロフィン 結合タンパク質またはその部分ペプチドの標準液 結合タンパク質またはその部分ペプチドを０.１％ウシ
血清アルブミン（シグマ社製）を含むＰＢＳで１ｍＭと
なるように溶解し、−２０℃で保存する。 〔測定法〕 本発明のタンパク質を含有する細胞膜画分に、１０-3
〜１０-10Ｍの試験化合物溶液を５μｌ加えた後、標識
した結合タンパク質を５μｌ加え、４℃にて３時間反応
させる。非特異的結合量を知るためには試験化合物の代
わりに１０-3Ｍの結合タンパク質を加えておく。 グラスフィルター（WhatmannGF/B）上で吸引濾過し、
１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄後、フィルターにトラ
ップされた放射活性を測定する。 液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）
を用いて放射活性を測定し、Percent of Maximum Bindi
ng（ＰＭＢ）を次の式〔数１〕で求める。
【００６２】
【数１】 ＰＭＢ：Percent of Maximum Binding Ｂ ：試験化合物を加えた時の結合量 ＮＳＢ：Non-specific Binding（非特異的結合量） Ｂ0 ：最大結合量
【００６３】〔スクリーニング用試薬（２）〕 測定用緩衝液および洗浄用緩衝液 ＭＥＳ（４−モルフォリンエタンスルフォニックアシッ
ド）緩衝液−食塩水（２５ｍＭ、ｐＨ６.５、０.１５Ｍ
塩化ナトリウム） コレステロール含有膜成分 平滑筋細胞膜画分などのコレステロール含有膜成分 標識したタンパク質標品 〔3Ｈ〕、〔125Ｉ〕、〔14Ｃ〕、〔35Ｓ〕などで標識し
た本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれら
の塩 タンパク質の標準液 本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの
塩 〔測定法〕 標識した本発明のタンパク質、その部分ペプチドまた
はそれらの塩に、１０-3〜１０-10Ｍの試験化合物溶液
を５μｌ加えた後、コレステロール含有膜成分を５μｌ
加え、４℃にて３時間反応させる。非特異的結合量を知
るためには試験化合物の代わりに１０-3Ｍの本発明のタ
ンパク質等を加えておく。 グラスフィルター（WhatmannGF/B）上で吸引濾過し、
１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄後、フィルターにトラ
ップされた放射活性を測定する。 液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）
を用いて放射活性を測定し、Percent of Maximum Bindi
ng（ＰＭＢ）を上記の式〔数１〕で求める。
ド）緩衝液−食塩水（２５ｍＭ、ｐＨ６.５、０.１５Ｍ
塩化ナトリウム） コレステロール含有膜成分 平滑筋細胞膜画分などのコレステロール含有膜成分 標識したタンパク質標品 〔3Ｈ〕、〔125Ｉ〕、〔14Ｃ〕、〔35Ｓ〕などで標識し
た本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれら
の塩 タンパク質の標準液 本発明のタンパク質、その部分ペプチドまたはそれらの
塩 〔測定法〕 標識した本発明のタンパク質、その部分ペプチドまた
はそれらの塩に、１０-3〜１０-10Ｍの試験化合物溶液
を５μｌ加えた後、コレステロール含有膜成分を５μｌ
加え、４℃にて３時間反応させる。非特異的結合量を知
るためには試験化合物の代わりに１０-3Ｍの本発明のタ
ンパク質等を加えておく。 グラスフィルター（WhatmannGF/B）上で吸引濾過し、
１ｍｌの洗浄用緩衝液で３回洗浄後、フィルターにトラ
ップされた放射活性を測定する。 液体シンチレーションカウンター（ベックマン社製）
を用いて放射活性を測定し、Percent of Maximum Bindi
ng（ＰＭＢ）を上記の式〔数１〕で求める。
【００６４】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
は、上記した試験化合物、例えば、ペプチド、タンパ
ク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細
胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから
選ばれた化合物であり、本発明のタンパク質等の機能を
促進または阻害する化合物である。該化合物は新規化合
物であってもよく、公知化合物であってもよい。該化合
物の塩としては、例えば、生理学的に許容される酸
（例、無機酸、有機酸）または塩基（例、アルカリ金
属）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容さ
れる酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例え
ば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫
酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プ
ロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石
酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスル
ホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられ
る。本発明のタンパク質等の機能を促進する化合物は、
例えば、血管障害、糖尿病、肥満、癌化、動脈硬化、筋
ジストロフィーなどの各種疾病に対する安全で低毒性な
治療・予防剤として有用である。本発明のタンパク質等
の機能を阻害する化合物は、例えば、虚血性心疾患、末
梢血管疾患などの各種疾病に対する安全で低毒性な治療
・予防剤として有用である。
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
は、上記した試験化合物、例えば、ペプチド、タンパ
ク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細
胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから
選ばれた化合物であり、本発明のタンパク質等の機能を
促進または阻害する化合物である。該化合物は新規化合
物であってもよく、公知化合物であってもよい。該化合
物の塩としては、例えば、生理学的に許容される酸
（例、無機酸、有機酸）または塩基（例、アルカリ金
属）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容さ
れる酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例え
ば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫
酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プ
ロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石
酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスル
ホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられ
る。本発明のタンパク質等の機能を促進する化合物は、
例えば、血管障害、糖尿病、肥満、癌化、動脈硬化、筋
ジストロフィーなどの各種疾病に対する安全で低毒性な
治療・予防剤として有用である。本発明のタンパク質等
の機能を阻害する化合物は、例えば、虚血性心疾患、末
梢血管疾患などの各種疾病に対する安全で低毒性な治療
・予防剤として有用である。
【００６５】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
を上述の治療・予防剤として使用する場合、常套手段に
従って実施することができる。例えば、必要に応じて糖
衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロ
カプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそ
れ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または
懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例
えば、該化合物またはその塩を生理学的に認められる担
体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合
剤などとともに一般に認められた製薬実施に要求される
単位用量形態で混和することによって製造することがで
きる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲
の適当な容量が得られるようにするものである。これら
錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル
剤、注射剤としては、前記した本発明のタンパク質等を
含有する医薬と同様にして製造することができる。この
ようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例
えばヒトまたは哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウ
サギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、
チンパンジーなど）に対して投与することができる。
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
を上述の治療・予防剤として使用する場合、常套手段に
従って実施することができる。例えば、必要に応じて糖
衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロ
カプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそ
れ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または
懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例
えば、該化合物またはその塩を生理学的に認められる担
体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合
剤などとともに一般に認められた製薬実施に要求される
単位用量形態で混和することによって製造することがで
きる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲
の適当な容量が得られるようにするものである。これら
錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル
剤、注射剤としては、前記した本発明のタンパク質等を
含有する医薬と同様にして製造することができる。この
ようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例
えばヒトまたは哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウ
サギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、
チンパンジーなど）に対して投与することができる。
【００６６】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどによ
り差異はあるが、例えば、動脈硬化症の治療目的で本発
明のタンパク質の機能を促進する化合物を経口投与する
場合、一般的に成人（６０ｋｇとして）においては、一
日につき該化合物を約０.１ｍｇ〜１００ｍｇ、好まし
くは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２
０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物
の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異な
るが、例えば、動脈硬化症の治療目的で該化合物を注射
剤の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与する場合
は、一日につき該ＤＮＡを約０．０１〜３０ｍｇ程度、
好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約
０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好
都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算
した量を投与することができる。一方、例えば、虚血性
心疾患の治療目的で本発明のタンパク質の機能を阻害す
る化合物を経口投与する場合、一般的に成人（６０ｋｇ
として）においては、一日につき該化合物を約０.１ｍ
ｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より
好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投
与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象
疾患などによっても異なるが、例えば、虚血性心疾患の
治療目的で該化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇ
として）に投与する場合は、一日につき該ＤＮＡを約
０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍ
ｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈
注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合
も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができ
る。
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどによ
り差異はあるが、例えば、動脈硬化症の治療目的で本発
明のタンパク質の機能を促進する化合物を経口投与する
場合、一般的に成人（６０ｋｇとして）においては、一
日につき該化合物を約０.１ｍｇ〜１００ｍｇ、好まし
くは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２
０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合物
の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異な
るが、例えば、動脈硬化症の治療目的で該化合物を注射
剤の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与する場合
は、一日につき該ＤＮＡを約０．０１〜３０ｍｇ程度、
好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約
０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好
都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算
した量を投与することができる。一方、例えば、虚血性
心疾患の治療目的で本発明のタンパク質の機能を阻害す
る化合物を経口投与する場合、一般的に成人（６０ｋｇ
として）においては、一日につき該化合物を約０.１ｍ
ｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より
好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投
与する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象
疾患などによっても異なるが、例えば、虚血性心疾患の
治療目的で該化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇ
として）に投与する場合は、一日につき該ＤＮＡを約
０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍ
ｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈
注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合
も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができ
る。
【００６７】（５）アンチセンスＤＮＡを含有する医薬 本発明のＤＮＡまたはｍＲＮＡに相補的に結合し、本発
明のタンパク質等またはＤＮＡの発現を抑制することが
できるアンチセンスＤＮＡは、生体内における本発明の
タンパク質等またはＤＮＡ（ｍＲＮＡ）の機能を抑制す
ることができるので、例えば、虚血性心疾患、末梢血管
疾患などの種々の疾病の治療・予防剤などの医薬として
使用することができる。上記アンチセンスＤＮＡを上記
の医薬として使用する場合、前記した本発明のＤＮＡを
含有する医薬と同様にして製造し、ヒトまたは哺乳動物
に投与することができる。また、該アンチセンスＤＮＡ
を単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイル
スベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルス
ベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段
に従ってヒトまたは温血動物に投与することができる。
該アンチセンスＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促
進のための補助剤などの生理学的に認められる担体とと
もに、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテ
ーテルによって投与できる。このようにして得られる製
剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物
（例えば、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネ
コ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
本発明のＤＮＡの投与量は、対象疾患、投与対象、投与
ルートなどにより差異はあるが、例えば、虚血性心疾患
の治療目的で該アンチセンスＤＮＡを経口投与する場
合、一般的に成人（６０ｋｇとして）においては、一日
につき該アンチセンスＤＮＡを約０.１ｍｇ〜１００ｍ
ｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約
１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合
は、該アンチセンスＤＮＡの１回投与量は投与対象、対
象疾患などによっても異なるが、例えば、虚血性心疾患
の治療目的で該アンチセンスＤＮＡを注射剤の形で通常
成人（６０ｋｇとして）に投与する場合は、一日につき
該アンチセンスＤＮＡを約０．０１〜３０ｍｇ程度、好
ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約
０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好
都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算
した量を投与することができる。
明のタンパク質等またはＤＮＡの発現を抑制することが
できるアンチセンスＤＮＡは、生体内における本発明の
タンパク質等またはＤＮＡ（ｍＲＮＡ）の機能を抑制す
ることができるので、例えば、虚血性心疾患、末梢血管
疾患などの種々の疾病の治療・予防剤などの医薬として
使用することができる。上記アンチセンスＤＮＡを上記
の医薬として使用する場合、前記した本発明のＤＮＡを
含有する医薬と同様にして製造し、ヒトまたは哺乳動物
に投与することができる。また、該アンチセンスＤＮＡ
を単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイル
スベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルス
ベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段
に従ってヒトまたは温血動物に投与することができる。
該アンチセンスＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促
進のための補助剤などの生理学的に認められる担体とと
もに、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテ
ーテルによって投与できる。このようにして得られる製
剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物
（例えば、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネ
コ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。
本発明のＤＮＡの投与量は、対象疾患、投与対象、投与
ルートなどにより差異はあるが、例えば、虚血性心疾患
の治療目的で該アンチセンスＤＮＡを経口投与する場
合、一般的に成人（６０ｋｇとして）においては、一日
につき該アンチセンスＤＮＡを約０.１ｍｇ〜１００ｍ
ｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約
１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合
は、該アンチセンスＤＮＡの１回投与量は投与対象、対
象疾患などによっても異なるが、例えば、虚血性心疾患
の治療目的で該アンチセンスＤＮＡを注射剤の形で通常
成人（６０ｋｇとして）に投与する場合は、一日につき
該アンチセンスＤＮＡを約０．０１〜３０ｍｇ程度、好
ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約
０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好
都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算
した量を投与することができる。
【００６８】（６）本発明のＤＮＡを有する非ヒト動物
の作製 本発明のＤＮＡを用いて、本発明のタンパク質等を発現
するトランスジェニック非ヒト動物を作製することがで
きる。非ヒト動物としては、哺乳動物（例えば、ラッ
ト、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イ
ヌ、サルなど）など（以下、動物と略記する）が挙げれ
るが、特に、マウス、ウサギなどが好適である。本発明
のＤＮＡを対象動物に転移させるにあたっては、該ＤＮ
Ａを動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に結合
した遺伝子コンストラクトとして用いるのが一般に有利
である。例えば、ウサギ由来の本発明のＤＮＡを転移さ
せる場合、これと相同性が高い動物由来のプロモーター
であって、本発明のＤＮＡを動物細胞で発現させうる各
種プロモーターの下流に結合した遺伝子コンストラクト
を、例えば、ウサギ受精卵へマイクロインジェクション
することによって本発明のタンパク質等を高産生するＤ
ＮＡ転移動物を作出できる。このプロモーターとして
は、例えば、ウイルス由来プロモーター、メタロチオネ
イン等のユビキタスな発現プロモーターも使用しうる。
の作製 本発明のＤＮＡを用いて、本発明のタンパク質等を発現
するトランスジェニック非ヒト動物を作製することがで
きる。非ヒト動物としては、哺乳動物（例えば、ラッ
ト、マウス、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イ
ヌ、サルなど）など（以下、動物と略記する）が挙げれ
るが、特に、マウス、ウサギなどが好適である。本発明
のＤＮＡを対象動物に転移させるにあたっては、該ＤＮ
Ａを動物細胞で発現させうるプロモーターの下流に結合
した遺伝子コンストラクトとして用いるのが一般に有利
である。例えば、ウサギ由来の本発明のＤＮＡを転移さ
せる場合、これと相同性が高い動物由来のプロモーター
であって、本発明のＤＮＡを動物細胞で発現させうる各
種プロモーターの下流に結合した遺伝子コンストラクト
を、例えば、ウサギ受精卵へマイクロインジェクション
することによって本発明のタンパク質等を高産生するＤ
ＮＡ転移動物を作出できる。このプロモーターとして
は、例えば、ウイルス由来プロモーター、メタロチオネ
イン等のユビキタスな発現プロモーターも使用しうる。
【００６９】受精卵細胞段階における本発明のＤＮＡの
転移は、対象動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在
するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽
細胞において本発明のタンパク質等が存在することは、
作出動物の子孫が全てその胚芽細胞及び体細胞の全てに
本発明のタンパク質等を有することを意味する。遺伝子
を受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および
体細胞の全てに本発明のタンパク質等を有する。本発明
のＤＮＡ転移動物は、交配により遺伝子を安定に保持す
ることを確認して、該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育
環境で飼育継代を行うことができる。さらに、目的ＤＮ
Ａを保有する雌雄の動物を交配することにより、導入遺
伝子を相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取
得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子
孫が該ＤＮＡを有するように繁殖継代することができ
る。本発明のＤＮＡが転移された動物は、本発明のタン
パク質等が高発現させられているので、本発明のタンパ
ク質等に対するアゴニストまたはアンタゴニストのスク
リーニング用の動物などとして有用である。本発明のＤ
ＮＡ転移動物を、組織培養のための細胞源として使用す
ることもできる。例えば、本発明のＤＮＡ転移マウスの
組織中のＤＮＡもしくはＲＮＡを直接分析するか、また
は遺伝子により発現された本発明のタンパク質が存在す
る組織を分析することにより、本発明のタンパク質等に
ついて分析することができる。本発明のタンパク質等を
有する組織の細胞を標準組織培養技術により培養し、こ
れらを使用して、例えば、脳や末梢組織（例、皮膚な
ど）由来のような一般に培養困難な組織からの細胞の機
能を研究することができる。また、その細胞を用いるこ
とにより、例えば、各種組織の機能を高めるような医薬
の選択も可能である。また、高発現細胞株があれば、そ
こから、本発明のタンパク質等を単離精製することも可
能である。
転移は、対象動物の胚芽細胞および体細胞の全てに存在
するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽
細胞において本発明のタンパク質等が存在することは、
作出動物の子孫が全てその胚芽細胞及び体細胞の全てに
本発明のタンパク質等を有することを意味する。遺伝子
を受け継いだこの種の動物の子孫はその胚芽細胞および
体細胞の全てに本発明のタンパク質等を有する。本発明
のＤＮＡ転移動物は、交配により遺伝子を安定に保持す
ることを確認して、該ＤＮＡ保有動物として通常の飼育
環境で飼育継代を行うことができる。さらに、目的ＤＮ
Ａを保有する雌雄の動物を交配することにより、導入遺
伝子を相同染色体の両方に持つホモザイゴート動物を取
得し、この雌雄の動物を交配することによりすべての子
孫が該ＤＮＡを有するように繁殖継代することができ
る。本発明のＤＮＡが転移された動物は、本発明のタン
パク質等が高発現させられているので、本発明のタンパ
ク質等に対するアゴニストまたはアンタゴニストのスク
リーニング用の動物などとして有用である。本発明のＤ
ＮＡ転移動物を、組織培養のための細胞源として使用す
ることもできる。例えば、本発明のＤＮＡ転移マウスの
組織中のＤＮＡもしくはＲＮＡを直接分析するか、また
は遺伝子により発現された本発明のタンパク質が存在す
る組織を分析することにより、本発明のタンパク質等に
ついて分析することができる。本発明のタンパク質等を
有する組織の細胞を標準組織培養技術により培養し、こ
れらを使用して、例えば、脳や末梢組織（例、皮膚な
ど）由来のような一般に培養困難な組織からの細胞の機
能を研究することができる。また、その細胞を用いるこ
とにより、例えば、各種組織の機能を高めるような医薬
の選択も可能である。また、高発現細胞株があれば、そ
こから、本発明のタンパク質等を単離精製することも可
能である。
【００７０】本明細書および図面において、塩基やアミ
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ
Commision on Biochemical Nomenclature による略号あ
るいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、
その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があ
り得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとす
る。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム ＥＩＡ ：エンザイムイムノアッセイ
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ
Commision on Biochemical Nomenclature による略号あ
るいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、
その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があ
り得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すものとす
る。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム ＥＩＡ ：エンザイムイムノアッセイ
【００７１】 Ｇｌｙ ：グリシン Ａｌａ ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン Ｉｌｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ：システイン Ｍｅｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ：トリプトファン Ｐｒｏ ：プロリン Ａｓｎ ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸
【００７２】また、本明細書中で繁用される置換基、保
護基および試薬を下記の記号で表記する。 Ｍｅ ：メチル基 Ｅｔ ：エチル基 Ｂｕ ：ブチル基 Ｐｈ ：フェニル基 ＴＣ ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキ
サミド基 Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル ＣＨＯ ：ホルミル Ｂｚｌ ：ベンジル Cl2Bzl ：２，６−ジクロロベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ ：２−クロロベンジルオキシカルボニ
ル Ｂｒ−Ｚ ：２−ブロモベンジルオキシカルボニ
ル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカル
ボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ
−４−オキソ−１,２,３−ベンゾトリアジン ＨＯＮＢ ：1-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-
ジカルボキシイミド ＤＣＣ ：Ｎ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボ
ジイミド
護基および試薬を下記の記号で表記する。 Ｍｅ ：メチル基 Ｅｔ ：エチル基 Ｂｕ ：ブチル基 Ｐｈ ：フェニル基 ＴＣ ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキ
サミド基 Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル ＣＨＯ ：ホルミル Ｂｚｌ ：ベンジル Cl2Bzl ：２，６−ジクロロベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ ：２−クロロベンジルオキシカルボニ
ル Ｂｒ−Ｚ ：２−ブロモベンジルオキシカルボニ
ル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカル
ボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ
−４−オキソ−１,２,３−ベンゾトリアジン ＨＯＮＢ ：1-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-
ジカルボキシイミド ＤＣＣ ：Ｎ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボ
ジイミド
【００７３】本明細書の配列表の配列番号は、以下の配
列を示す。 〔配列番号：１〕本発明のヒト心臓由来カベオリンのア
ミノ酸配列を示す。 〔配列番号：２〕配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列を有する本発明のヒト心臓由来カベオリンをコードす
るＤＮＡの塩基配列を示す。 〔配列番号：３〕本発明のタンパク質をコードするＤＮ
Ａのクローニングに使用した合成プライマーの塩基配列
を示す。 〔配列番号：４〕本発明のタンパク質をコードするＤＮ
Ａのクローニングに使用した合成プライマーの塩基配列
を示す。 〔配列番号：５〕本発明のタンパク質をコードするＤＮ
Ａのクローニングに使用した合成プライマーの塩基配列
を示す。後述の実施例１で得られた形質転換体エシェリ
ヒア コリ（Escherichia coli)ＤＨ１０Ｂ／ｐＴＢ１
９３４は、平成８年７月４日から通商産業省工業技術院
生命工学工業技術研究所（ＮＩＢＨ）に寄託番号ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−５５７５として、平成８年７月４日から財団
法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ１５９９
６として寄託されている。
列を示す。 〔配列番号：１〕本発明のヒト心臓由来カベオリンのア
ミノ酸配列を示す。 〔配列番号：２〕配列番号：１で表わされるアミノ酸配
列を有する本発明のヒト心臓由来カベオリンをコードす
るＤＮＡの塩基配列を示す。 〔配列番号：３〕本発明のタンパク質をコードするＤＮ
Ａのクローニングに使用した合成プライマーの塩基配列
を示す。 〔配列番号：４〕本発明のタンパク質をコードするＤＮ
Ａのクローニングに使用した合成プライマーの塩基配列
を示す。 〔配列番号：５〕本発明のタンパク質をコードするＤＮ
Ａのクローニングに使用した合成プライマーの塩基配列
を示す。後述の実施例１で得られた形質転換体エシェリ
ヒア コリ（Escherichia coli)ＤＨ１０Ｂ／ｐＴＢ１
９３４は、平成８年７月４日から通商産業省工業技術院
生命工学工業技術研究所（ＮＩＢＨ）に寄託番号ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−５５７５として、平成８年７月４日から財団
法人・発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ１５９９
６として寄託されている。
【００７４】
【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体
的に説明するが、本発明はそれに限定されるものではな
い。なお、大腸菌を用いての遺伝子操作法はモレキュラ
ー・クローニング（Molecular cloning）に記載されて
いる方法に従った。
的に説明するが、本発明はそれに限定されるものではな
い。なお、大腸菌を用いての遺伝子操作法はモレキュラ
ー・クローニング（Molecular cloning）に記載されて
いる方法に従った。
【００７５】
【実施例１】ヒト由来カベオリンをコードする遺伝子の
クローニング ｃＤＮＡのクローニングは、ジーントラッパーポジティ
ブ選択システム（ギブコビーアールエル社）を用いて行
った。ヒト心臓由来のｃＤＮＡライブラリー（ギブコビ
ーアールエル社）の大腸菌ＤＨ１２Ｓ株をTerrific Bro
th（１２ｇ/ｌ bacto−tryptone（ディフコ社），２４
ｇ/ｌ bacto−yeast extract（ディフコ社），２.３ｇ/
ｌ リン酸一カリウム，１２.５ｇ/ｌ リン酸二カリウ
ム）で３０℃で１６時間培養し、キアジェンプラスミド
キット（キアジェン社）を用いて、プラスミドｃＤＮＡ
ライブラリーを精製抽出した。精製したプラスミドｃＤ
ＮＡライブラリーをＧｅｎｅII,ＥｘｏIII（いずれもギ
ブコビーアールエル社）によって消化し、一本鎖ｃＤＮ
Ａライブラリーを作成した。一方、プローブとして、合
成オリゴヌクレオチド（配列番号：３）をｃＤＮＡライ
ブラリーのスクリーニングに用いた。プローブは、Ｔｄ
Ｔ，ビオチン−１４−ｄＣＴＰ（ギブコビーアールエル
社）を用いて、３'末端をビオチン化することで標識し
た。一本鎖ｃＤＮＡライブラリーを９５℃で１分間処理
した後、氷中で急冷し、ビオチン化したプローブを加え
て３７℃で１時間、室温でハイブリダイゼーションを行
った。ハイブリダイゼーション後、ジーントラッパーポ
ジティブ選択システム・マグネットビーズ（ギブコビー
アールエル社）を加えて、室温で２分ごとに撹拌しなが
ら３０分間放置した。その後、ジーントラッパーポジテ
ィブ選択システム・マグネットラック（ギブコビーアー
ルエル社）中に入れ、２分間放置した。上清を捨て、マ
グネットビーズをジーントラッパーポジティブ選択シス
テム・ウオッシュバッファーで洗浄した。このウオッシ
ュバッファーによる洗浄を３回行った。その後、マグネ
ットラックに入れて放置し、上清を捨て、ジーントラッ
パーポジティブ選択システム・溶出バッファーを加え、
５分間室温で放置した。マグネットラックに入れて５分
間放置した後、その上清のＤＮＡ溶液を回収した。
クローニング ｃＤＮＡのクローニングは、ジーントラッパーポジティ
ブ選択システム（ギブコビーアールエル社）を用いて行
った。ヒト心臓由来のｃＤＮＡライブラリー（ギブコビ
ーアールエル社）の大腸菌ＤＨ１２Ｓ株をTerrific Bro
th（１２ｇ/ｌ bacto−tryptone（ディフコ社），２４
ｇ/ｌ bacto−yeast extract（ディフコ社），２.３ｇ/
ｌ リン酸一カリウム，１２.５ｇ/ｌ リン酸二カリウ
ム）で３０℃で１６時間培養し、キアジェンプラスミド
キット（キアジェン社）を用いて、プラスミドｃＤＮＡ
ライブラリーを精製抽出した。精製したプラスミドｃＤ
ＮＡライブラリーをＧｅｎｅII,ＥｘｏIII（いずれもギ
ブコビーアールエル社）によって消化し、一本鎖ｃＤＮ
Ａライブラリーを作成した。一方、プローブとして、合
成オリゴヌクレオチド（配列番号：３）をｃＤＮＡライ
ブラリーのスクリーニングに用いた。プローブは、Ｔｄ
Ｔ，ビオチン−１４−ｄＣＴＰ（ギブコビーアールエル
社）を用いて、３'末端をビオチン化することで標識し
た。一本鎖ｃＤＮＡライブラリーを９５℃で１分間処理
した後、氷中で急冷し、ビオチン化したプローブを加え
て３７℃で１時間、室温でハイブリダイゼーションを行
った。ハイブリダイゼーション後、ジーントラッパーポ
ジティブ選択システム・マグネットビーズ（ギブコビー
アールエル社）を加えて、室温で２分ごとに撹拌しなが
ら３０分間放置した。その後、ジーントラッパーポジテ
ィブ選択システム・マグネットラック（ギブコビーアー
ルエル社）中に入れ、２分間放置した。上清を捨て、マ
グネットビーズをジーントラッパーポジティブ選択シス
テム・ウオッシュバッファーで洗浄した。このウオッシ
ュバッファーによる洗浄を３回行った。その後、マグネ
ットラックに入れて放置し、上清を捨て、ジーントラッ
パーポジティブ選択システム・溶出バッファーを加え、
５分間室温で放置した。マグネットラックに入れて５分
間放置した後、その上清のＤＮＡ溶液を回収した。
【００７６】取得したＤＮＡ溶液にプライマーとして合
成オリゴヌクレオチド（配列番号：３）を入れ、９５℃
で１分間放置した。ジーントラッパーポジティブ選択シ
ステム・修復酵素を加え、７０℃で１５分間放置して二
本鎖ＤＮＡを合成した。合成した二本鎖ＤＮＡをエレク
トロポレーション装置（バイオ・ラッド社）により、大
腸菌ＤＨ１０Ｂ株に導入した。得られた形質転換株を用
いて２本のオリゴヌクレオチド（配列番号：４、配列番
号：５）をプライマーとしてコロニーＰＣＲによるスク
リーニングを行った。ＰＣＲにより約５１０ｂｐの増幅
断片が形成されたコロニーを陽性クローンとして１株選
択した。選択した大腸菌を培養後、ＤＮＡを抽出し、AB
I PRISM Dye Terminator CycleSequencing Ready Peact
ion Kit with AmpliTaq DNA polymerase, ＦＳ（パーキ
ンエルマー社）を用いて反応を行い、３７７ ＤＮＡシ
ーケンサー（パーキンエルマー社）により、ｃＤＮＡ断
片の塩基配列を決定した。取得したクローンは、poly
(Ａ)+鎖および配列番号：２で表される４５３個の塩基
配列を含有する１４１５個の塩基配列を有していた。こ
のｃＤＮＡ断片には、配列番号：１で表される１５１個
のアミノ酸からなる新規カベオリンがコードされてい
た。本発明のカベオリンタンパク質をコードするＤＮＡ
を保持するプラスミドｐＴＢ１９３４を大腸菌（Escher
ichia coli）ＤＨ１０Ｂに導入して、形質転換体：大腸
菌（Escherichia coli）ＤＨ１０Ｂ／ｐＴＢ１９３４を
得た。
成オリゴヌクレオチド（配列番号：３）を入れ、９５℃
で１分間放置した。ジーントラッパーポジティブ選択シ
ステム・修復酵素を加え、７０℃で１５分間放置して二
本鎖ＤＮＡを合成した。合成した二本鎖ＤＮＡをエレク
トロポレーション装置（バイオ・ラッド社）により、大
腸菌ＤＨ１０Ｂ株に導入した。得られた形質転換株を用
いて２本のオリゴヌクレオチド（配列番号：４、配列番
号：５）をプライマーとしてコロニーＰＣＲによるスク
リーニングを行った。ＰＣＲにより約５１０ｂｐの増幅
断片が形成されたコロニーを陽性クローンとして１株選
択した。選択した大腸菌を培養後、ＤＮＡを抽出し、AB
I PRISM Dye Terminator CycleSequencing Ready Peact
ion Kit with AmpliTaq DNA polymerase, ＦＳ（パーキ
ンエルマー社）を用いて反応を行い、３７７ ＤＮＡシ
ーケンサー（パーキンエルマー社）により、ｃＤＮＡ断
片の塩基配列を決定した。取得したクローンは、poly
(Ａ)+鎖および配列番号：２で表される４５３個の塩基
配列を含有する１４１５個の塩基配列を有していた。こ
のｃＤＮＡ断片には、配列番号：１で表される１５１個
のアミノ酸からなる新規カベオリンがコードされてい
た。本発明のカベオリンタンパク質をコードするＤＮＡ
を保持するプラスミドｐＴＢ１９３４を大腸菌（Escher
ichia coli）ＤＨ１０Ｂに導入して、形質転換体：大腸
菌（Escherichia coli）ＤＨ１０Ｂ／ｐＴＢ１９３４を
得た。
【００７７】
【発明の効果】本発明のカベオリンタンパク質およびそ
れをコードするＤＮＡは、例えば、血管障害、糖尿病、
肥満、癌化、動脈硬化、筋ジストロフィーなどの種々の
疾病の治療・予防剤として使用することができる。ま
た、本発明の抗体は、本発明のタンパク質等を特異的に
認識することができるので、被検液中の本発明のタンパ
ク質等の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定量
などに使用することができる。さらに、本発明のタンパ
ク質は、本発明のタンパク質の機能を促進または阻害す
る化合物のスクリーニング用試薬として有用である。
れをコードするＤＮＡは、例えば、血管障害、糖尿病、
肥満、癌化、動脈硬化、筋ジストロフィーなどの種々の
疾病の治療・予防剤として使用することができる。ま
た、本発明の抗体は、本発明のタンパク質等を特異的に
認識することができるので、被検液中の本発明のタンパ
ク質等の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定量
などに使用することができる。さらに、本発明のタンパ
ク質は、本発明のタンパク質の機能を促進または阻害す
る化合物のスクリーニング用試薬として有用である。
【００７８】
【配列番号：１】 配列の長さ：１５１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク 配列 Met Met Ala Glu Glu His Thr Asp Leu Glu Ala Gln Ile Val Lys Asp 1 5 10 15 Ile His Cys Lys Glu Ile Asp Leu Val Asn Arg Asp Pro Lys Asn Ile 20 25 30 Asn Glu Asp Ile Val Lys Val Asp Phe Glu Asp Val Ile Ala Glu Pro 35 40 45 Val Gly Thr Tyr Ser Phe Asp Ser Val Trp Lys Val Ser Tyr Thr Thr 50 55 60 Phe Thr Val Ser Lys Tyr Trp Cys Tyr Arg Leu Leu Ser Thr Leu Leu 65 70 75 80 Gly Val Pro Leu Ala Leu Leu Trp Gly Phe Leu Phe Ala Cys Ile Ser 85 90 95 Phe Cys His Ile Trp Ala Val Val Pro Cys Ile Lys Ser Tyr Leu Ile 100 105 110 Glu Ile Gln Cys Ile Ser His Ile Tyr Ser Leu Cys Ile Arg Thr Phe 115 120 125 Cys Asn Pro Leu Phe Ala Ala Leu Gly Gln Val Cys Ser Ser Ile Lys 130 135 140 Val Val Leu Arg Lys Glu Val 145 150
【００７９】
【配列番号：２】 配列の長さ：４５３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ＡＴＧＡＴＧＧＣＡＧ ＡＡＧＡＧＣＡＣＡＣ ＡＧＡＴＣＴＣＧＡＧ ＧＣＣ
ＣＡＧＡＴＣＧ ＴＣＡＡＧＧＡＴＡＴ ＣＣＡＣＴＧＣＡＡＧ ６０ ＧＡＧＡＴＴＧＡＣＣ ＴＧＧＴＧＡＡＣＣＧ ＡＧＡＣＣＣＣＡＡＧ ＡＡＣ
ＡＴＴＡＡＴＧ ＡＧＧＡＣＡＴＡＧＴ ＣＡＡＧＧＴＧＧＡＴ １２０ ＴＴＣＧＡＡＧＡＣＧ ＴＧＡＴＣＧＣＡＧＡ ＧＣＣＴＧＴＧＧＧＣ ＡＣＣ
ＴＡＣＡＧＣＴ ＴＴＧＡＣＡＧＣＧＴ ＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧ １８０ ＡＧＣＴＡＣＡＣＣＡ ＣＣＴＴＣＡＣＴＧＴ ＣＴＣＣＡＡＧＴＡＣ ＴＧＧ
ＴＧＣＴＡＣＣ ＧＴＣＴＧＴＴＧＴＣ ＣＡＣＧＣＴＧＣＴＧ ２４０ ＧＧＣＧＴＣＣＣＡＣ ＴＧＧＣＣＣＴＧＣＴ ＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣ ＣＴＧ
ＴＴＣＧＣＣＴ ＧＣＡＴＣＴＣＣＴＴ ＣＴＧＣＣＡＣＡＴＣ ３００ ＴＧＧＧＣＧＧＴＧＧ ＴＧＣＣＡＴＧＣＡＴ ＴＡＡＧＡＧＣＴＡＣ ＣＴＧ
ＡＴＣＧＡＧＡ ＴＣＣＡＧＴＧＣＡＴ ＣＡＧＣＣＡＣＡＴＣ ３６０ ＴＡＣＴＣＡＣＴＣＴ ＧＣＡＴＣＣＧＣＡＣ ＣＴＴＣＴＧＣＡＡＣ ＣＣＡ
ＣＴＣＴＴＣＧ ＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧ ＣＣＡＧＧＴＣＴＧＣ ４２０ ＡＧＣＡＧＣＡＴＣＡ ＡＧＧＴＧＧＴＧＣＴ ＧＣＧＧＡＡＧＧＡＧ ＧＴＣ
４５３
ＣＡＧＡＴＣＧ ＴＣＡＡＧＧＡＴＡＴ ＣＣＡＣＴＧＣＡＡＧ ６０ ＧＡＧＡＴＴＧＡＣＣ ＴＧＧＴＧＡＡＣＣＧ ＡＧＡＣＣＣＣＡＡＧ ＡＡＣ
ＡＴＴＡＡＴＧ ＡＧＧＡＣＡＴＡＧＴ ＣＡＡＧＧＴＧＧＡＴ １２０ ＴＴＣＧＡＡＧＡＣＧ ＴＧＡＴＣＧＣＡＧＡ ＧＣＣＴＧＴＧＧＧＣ ＡＣＣ
ＴＡＣＡＧＣＴ ＴＴＧＡＣＡＧＣＧＴ ＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧ １８０ ＡＧＣＴＡＣＡＣＣＡ ＣＣＴＴＣＡＣＴＧＴ ＣＴＣＣＡＡＧＴＡＣ ＴＧＧ
ＴＧＣＴＡＣＣ ＧＴＣＴＧＴＴＧＴＣ ＣＡＣＧＣＴＧＣＴＧ ２４０ ＧＧＣＧＴＣＣＣＡＣ ＴＧＧＣＣＣＴＧＣＴ ＣＴＧＧＧＧＣＴＴＣ ＣＴＧ
ＴＴＣＧＣＣＴ ＧＣＡＴＣＴＣＣＴＴ ＣＴＧＣＣＡＣＡＴＣ ３００ ＴＧＧＧＣＧＧＴＧＧ ＴＧＣＣＡＴＧＣＡＴ ＴＡＡＧＡＧＣＴＡＣ ＣＴＧ
ＡＴＣＧＡＧＡ ＴＣＣＡＧＴＧＣＡＴ ＣＡＧＣＣＡＣＡＴＣ ３６０ ＴＡＣＴＣＡＣＴＣＴ ＧＣＡＴＣＣＧＣＡＣ ＣＴＴＣＴＧＣＡＡＣ ＣＣＡ
ＣＴＣＴＴＣＧ ＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧ ＣＣＡＧＧＴＣＴＧＣ ４２０ ＡＧＣＡＧＣＡＴＣＡ ＡＧＧＴＧＧＴＧＣＴ ＧＣＧＧＡＡＧＧＡＧ ＧＴＣ
４５３
【００８０】
【配列番号：３】 配列の長さ：２５ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＴＴＣＣＴＧＴＴＣＧ ＣＣＴＧＣＡＴＣＴＣ ＣＴＴ
ＣＴ
ＣＴ
【００８１】
【配列番号：４】 配列の長さ：２３ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 TTTGACGGCG TGTGGAAGGT GAG
【００８２】
【配列番号：５】 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列 ＣＡＴＧＧＴＧＧＧＧ ＣＴＧＧＧＧＧＡＧＡ Ｇ
【００８３】
【図１】本発明のヒト心臓由来カベオリンのアミノ酸配
列およびそれをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
列およびそれをコードするＤＮＡの塩基配列を示す。
【図２】本発明のヒト心臓由来カベオリン（Ｎｏ．１３
ＯＲＦ）と公知のラット由来カベオリン−３（rat ca
veolin-3）のアミノ酸配列の比較図を示す。□で囲んだ
箇所が異なるアミノ酸を示す。
ＯＲＦ）と公知のラット由来カベオリン−３（rat ca
veolin-3）のアミノ酸配列の比較図を示す。□で囲んだ
箇所が異なるアミノ酸を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＣＮ Ｃ０７Ｂ 61/00 Ｚ ＡＤＮ Ｃ０７Ｈ 21/04 Ｂ ＡＤＰ Ｃ０７Ｋ 16/18 ＡＤＵ Ｃ１２Ｎ 1/21 39/395 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 21/08 48/00 ＡＢＳ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｃ０７Ｂ 61/00 Ｚ Ｃ０７Ｈ 21/04 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＡＲ Ｃ０７Ｋ 16/18 ＡＢＪ Ｃ１２Ｎ 1/21 ＡＢＸ 15/09 ＡＣＮ Ｃ１２Ｐ 21/02 ＡＤＮ 21/08 ＡＤＰ Ｇ０１Ｎ 33/53 ＡＤＵ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19）
Claims (16)
- 【請求項１】配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質またはその塩。 - 【請求項２】カベオリンである請求項１記載のタンパク
質。 - 【請求項３】請求項１記載のタンパク質の部分ペプチド
またはその塩。 - 【請求項４】請求項１記載のタンパク質をコードする塩
基配列を有するＤＮＡを含有するＤＮＡ。 - 【請求項５】配列番号：２で表わされる塩基配列を有す
る請求項４記載のＤＮＡ。 - 【請求項６】請求項４記載のＤＮＡを含有する組換えベ
クター。 - 【請求項７】請求項６記載の組換えベクターで形質転換
された形質転換体。 - 【請求項８】請求項７記載の形質転換体を培養し、請求
項１記載のタンパク質を生成、蓄積せしめ、これを採取
することを特徴とする請求項１記載のタンパク質または
その塩の製造方法。 - 【請求項９】請求項１記載のタンパク質、請求項３記載
の部分ペプチドまたはそれらの塩を含有してなる医薬。 - 【請求項１０】請求項４記載のＤＮＡを含有してなる医
薬。 - 【請求項１１】糖尿病、肥満、癌、動脈硬化症または筋
ジストロフィーの治療・予防剤である請求項９または１
０記載の医薬。 - 【請求項１２】請求項１記載のタンパク質、請求項３記
載の部分ペプチドまたはそれらの塩に対する抗体。 - 【請求項１３】請求項１記載のタンパク質、請求項３記
載の部分ペプチドまたはそれらの塩を用いることを特徴
とする請求項１記載のタンパク質、請求項３記載の部分
ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進または阻害する
化合物またはその塩のスクリーニング方法。 - 【請求項１４】請求項１記載のタンパク質、請求項３記
載の部分ペプチドまたはそれらの塩を含有してなる請求
項１記載のタンパク質、請求項３記載の部分ペプチドま
たはそれらの塩の機能を促進または阻害する化合物また
はその塩のスクリーニング用キット。 - 【請求項１５】請求項１３記載のスクリーニング方法ま
たは請求項１４記載のスクリーニング用キットを用いて
得られる、請求項１記載のタンパク質、請求項３記載の
部分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進または阻害
する化合物またはその塩。 - 【請求項１６】請求項１３記載のスクリーニング方法ま
たは請求項１４記載のスクリーニング用キットを用いて
得られる請求項１記載のタンパク質、請求項３記載の部
分ペプチドまたはそれらの塩の機能を促進または阻害す
る化合物またはその塩を含有してなる医薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9177496A JPH1087698A (ja) | 1996-07-09 | 1997-07-03 | 新規タンパク質およびそのｄｎａ |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17966696 | 1996-07-09 | ||
| JP8-179666 | 1996-07-09 | ||
| JP9177496A JPH1087698A (ja) | 1996-07-09 | 1997-07-03 | 新規タンパク質およびそのｄｎａ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1087698A true JPH1087698A (ja) | 1998-04-07 |
Family
ID=26498026
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9177496A Withdrawn JPH1087698A (ja) | 1996-07-09 | 1997-07-03 | 新規タンパク質およびそのｄｎａ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1087698A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1076091A1 (en) * | 1999-08-09 | 2001-02-14 | Universite Catholique De Louvain | Medicament for the prevention and/or the treatment of ischemic heart and peripheral vascular diseases, tumour and wounds |
| EP2265278A4 (en) * | 2008-03-21 | 2011-09-07 | Seoul Nat Univ Ind Foundation | CAVEOLIN COMPREHENSIVE COMPOSITION FOR THE TREATMENT AND IMPROVEMENT OF DIABETES AND METHOD FOR THE TREATMENT OF DIABETES THEREFOR |
| US10206896B2 (en) | 2014-06-10 | 2019-02-19 | Kuwait University | Method of treating delayed healing of a wound associated with diabetes |
-
1997
- 1997-07-03 JP JP9177496A patent/JPH1087698A/ja not_active Withdrawn
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1076091A1 (en) * | 1999-08-09 | 2001-02-14 | Universite Catholique De Louvain | Medicament for the prevention and/or the treatment of ischemic heart and peripheral vascular diseases, tumour and wounds |
| EP2265278A4 (en) * | 2008-03-21 | 2011-09-07 | Seoul Nat Univ Ind Foundation | CAVEOLIN COMPREHENSIVE COMPOSITION FOR THE TREATMENT AND IMPROVEMENT OF DIABETES AND METHOD FOR THE TREATMENT OF DIABETES THEREFOR |
| US10206896B2 (en) | 2014-06-10 | 2019-02-19 | Kuwait University | Method of treating delayed healing of a wound associated with diabetes |
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