JPH11137289A - ２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドおよび２’−デオキシグアノシンの製造法 - Google Patents
２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドおよび２’−デオキシグアノシンの製造法Info
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- JPH11137289A JPH11137289A JP9313207A JP31320797A JPH11137289A JP H11137289 A JPH11137289 A JP H11137289A JP 9313207 A JP9313207 A JP 9313207A JP 31320797 A JP31320797 A JP 31320797A JP H11137289 A JPH11137289 A JP H11137289A
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- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
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Abstract
(57)【要約】
【課題】抗ウィルス剤等の医薬原料、特に最近話題にな
っているアンチセンス医薬の原料として使用される２，
６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドおよび
２’−デオキシグアノシンの効率的および工業的に有利
な製造方法を提供する。 【解決手段】 （１）２’−デオキシリボ−ス−１−リン酸またはその
塩と２，６−ジアミノプリンまたはその塩を微生物に作
用させることにより、２，６−ジアミノプリン−２’−
デオキシリボシドを効率良く生産する方法。 （２）無機リン酸もしくはその塩の存在下で２’−デオ
キウリジンもしくはチミジンと２，６−ジアミノプリン
もしくはその塩に微生物を作用させることにより２，６
−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドを効率よく
生産する方法。 （３）上記（１）、（２）の方法で安定安価に生産供給
される２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシ
ドを基質に用い、これにアデノシンデアミナーゼを作用
させ、高収率で２’−デオキシグアノシンを生産する方
法。
っているアンチセンス医薬の原料として使用される２，
６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドおよび
２’−デオキシグアノシンの効率的および工業的に有利
な製造方法を提供する。 【解決手段】 （１）２’−デオキシリボ−ス−１−リン酸またはその
塩と２，６−ジアミノプリンまたはその塩を微生物に作
用させることにより、２，６−ジアミノプリン−２’−
デオキシリボシドを効率良く生産する方法。 （２）無機リン酸もしくはその塩の存在下で２’−デオ
キウリジンもしくはチミジンと２，６−ジアミノプリン
もしくはその塩に微生物を作用させることにより２，６
−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドを効率よく
生産する方法。 （３）上記（１）、（２）の方法で安定安価に生産供給
される２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシ
ドを基質に用い、これにアデノシンデアミナーゼを作用
させ、高収率で２’−デオキシグアノシンを生産する方
法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、抗ウィルス剤等の
医薬原料、特に最近話題になっているアンチセンス医薬
の原料として使用される２，６−ジアミノプリン−２’
−デオキシリボシドおよび２’−デオキシグアノシンの
製造法に関するものである。
医薬原料、特に最近話題になっているアンチセンス医薬
の原料として使用される２，６−ジアミノプリン−２’
−デオキシリボシドおよび２’−デオキシグアノシンの
製造法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】２’−デオキシグアノシンの製造法とし
ては化学合成法の収率が非常に低いため、工業的製造法
はＤＮＡ（デオキシリボ核酸）の加水分解物よりの抽出
が中心となっている。しかし、従来の抽出法において
は、ＤＮＡの加水分解物中に目的の２’−デオキシグア
ノシン以外に２’−デオキシアデノシン、２’−デオキ
シシチジン、チミジンが含まれており、２’−デオキシ
グアノシンのみを採取するための抽出工程が煩雑、コス
ト高の観点から、更に効率の良い方法の開発が望まれて
いた。
ては化学合成法の収率が非常に低いため、工業的製造法
はＤＮＡ（デオキシリボ核酸）の加水分解物よりの抽出
が中心となっている。しかし、従来の抽出法において
は、ＤＮＡの加水分解物中に目的の２’−デオキシグア
ノシン以外に２’−デオキシアデノシン、２’−デオキ
シシチジン、チミジンが含まれており、２’−デオキシ
グアノシンのみを採取するための抽出工程が煩雑、コス
ト高の観点から、更に効率の良い方法の開発が望まれて
いた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の課題
は、２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシド
および２’−デオキシグアノシンを高収率で効率良く製
造する方法の提供である。
は、２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシド
および２’−デオキシグアノシンを高収率で効率良く製
造する方法の提供である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】そこで本発明者は、効率
の良い２’−デオキシグアノシンの製造法を確立すべく
鋭意検討を重ねた結果、（１）２’−デオキシリボース
−１−リン酸またはその塩と２，６−ジアミノプリンま
たはその塩に微生物を作用させることにより、２，６−
ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドが効率良く生
産できること、（２）２’−デオキウリジンもしくはチ
ミジンと２，６−ジアミノプリンまたはその塩に無機リ
ン酸もしくはその塩の存在下で微生物を作用させること
により２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシ
ドが効率よく生産できること、（３）上記（１）、
（２）の方法で安定安価に生産供給される２，６−ジア
ミノプリン−２’−デオキシリボシドを基質に用い、こ
れにアデノシンデアミナーゼを作用させると高収率で
２’ーデオキシグアノシンが生産できることを見いだ
し、本発明を完成させるに至った。
の良い２’−デオキシグアノシンの製造法を確立すべく
鋭意検討を重ねた結果、（１）２’−デオキシリボース
−１−リン酸またはその塩と２，６−ジアミノプリンま
たはその塩に微生物を作用させることにより、２，６−
ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドが効率良く生
産できること、（２）２’−デオキウリジンもしくはチ
ミジンと２，６−ジアミノプリンまたはその塩に無機リ
ン酸もしくはその塩の存在下で微生物を作用させること
により２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシ
ドが効率よく生産できること、（３）上記（１）、
（２）の方法で安定安価に生産供給される２，６−ジア
ミノプリン−２’−デオキシリボシドを基質に用い、こ
れにアデノシンデアミナーゼを作用させると高収率で
２’ーデオキシグアノシンが生産できることを見いだ
し、本発明を完成させるに至った。
【０００５】即ち本発明は、（１）２’−デオキシリボ
ース−１−リン酸またはその塩と２，６−ジアミノプリ
ンから２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシ
ドを生成する能力を有し、アクロモバクター属、アグロ
バクテリウム属、アシネトバクター属、アルカリゲネス
属、アースロバクター属、エアロモナス属、エシェリヒ
ア属、エンテロバクター属、エルビニア属、キサントモ
ナス属、クレブシエラ属、クルチア属、クルイヘラ属、
コリネバクテリウム属、ザルチナ属、サルモネラ属、シ
トロバクター属、シュードモナス属、ストレプトマイセ
ス属、スポロザルチナ属、スタフィロコッカス属、セラ
チア属、セルロモナス属、ノカルディア属、バチルス
属、ハフニア属、ビブリオ属、フラボバクテリウム属、
プラノコッカス属、ブレビバクテリウム属、、プロタミ
ノバクター属、プロテウス属、ヘモフィラス属、ミクロ
コッカス属、ミコプラナ属、ミクロバクテリウム属、リ
ゾビウム属またはロドコッカス属に属する微生物の培養
物、該培養物より分離した微生物菌体もしくは該微生物
菌体の処理物を２’−デオキシリボース−１−リン酸ま
たはその塩と２，６−ジアミノプリンに作用させ、生成
される２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシ
ドを採取することを特徴とする２，６−ジアミノプリン
−２’−デオキシリボシドの製造法、（２）無機リン酸
もしくはその塩の存在下で２’−デオキシウリジンもし
くはチミジンと２，６−ジアミノプリンから２，６−ジ
アミノプリン−２’−デオキシリボシドを生成する能力
を有し、アクロモバクター属、アグロバクテリウム属、
アシネトバクター属、アルカリゲネス属、アースロバク
ター属、エアロモナス属、エシェリヒア属、エンテロバ
クター属、エルビニア属、キサントモナス属、クレブシ
エラ属、クルチア属、クルイヘラ属、コリネバクテリウ
ム属、ザルチナ属、サルモネラ属、シトロバクター属、
シュードモナス属、ストレプトマイセス属、スポロザル
チナ属、スタフィロコッカス属、セラチア属、セルロモ
ナス属、ノカルディア属、バチルス属、ハフニア属、ビ
ブリオ属、フラボバクテリウム属、プラノコッカス属、
ブレビバクテリウム属、、プロタミノバクター属、プロ
テウス属、ヘモフィラス属、ミクロコッカス属、ミコプ
ラナ属、ミクロバクテリウム属、リゾビウム属またはロ
ドコッカス属に属する微生物の培養物、該培養物より分
離した微生物菌体もしくは該微生物菌体の処理物を無機
リン酸もしくはその塩の存在下で２’−デオキシウリジ
ンもしくはチミジンと２，６−ジアミノプリンに作用さ
せ、生成される２，６−ジアミノプリン−２’−デオキ
シリボシドを採取することを特徴とする２，６−ジアミ
ノプリン−２’−デオキシリボシドの製造法、および、
（３）上記（１）または（２）に記載の製造法で２，６
−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドを製造し、
次いで、得られた２，６−ジアミノプリン−２’−デオ
キシリボシドにアデノシンデアミナーゼまたは該酵素含
有物を水性媒体中で作用せしめ２’−デオキシグアノシ
ンを生成蓄積させることを特徴とする２’−デオキシグ
アノシンの製造法、に関するものである。
ース−１−リン酸またはその塩と２，６−ジアミノプリ
ンから２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシ
ドを生成する能力を有し、アクロモバクター属、アグロ
バクテリウム属、アシネトバクター属、アルカリゲネス
属、アースロバクター属、エアロモナス属、エシェリヒ
ア属、エンテロバクター属、エルビニア属、キサントモ
ナス属、クレブシエラ属、クルチア属、クルイヘラ属、
コリネバクテリウム属、ザルチナ属、サルモネラ属、シ
トロバクター属、シュードモナス属、ストレプトマイセ
ス属、スポロザルチナ属、スタフィロコッカス属、セラ
チア属、セルロモナス属、ノカルディア属、バチルス
属、ハフニア属、ビブリオ属、フラボバクテリウム属、
プラノコッカス属、ブレビバクテリウム属、、プロタミ
ノバクター属、プロテウス属、ヘモフィラス属、ミクロ
コッカス属、ミコプラナ属、ミクロバクテリウム属、リ
ゾビウム属またはロドコッカス属に属する微生物の培養
物、該培養物より分離した微生物菌体もしくは該微生物
菌体の処理物を２’−デオキシリボース−１−リン酸ま
たはその塩と２，６−ジアミノプリンに作用させ、生成
される２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシ
ドを採取することを特徴とする２，６−ジアミノプリン
−２’−デオキシリボシドの製造法、（２）無機リン酸
もしくはその塩の存在下で２’−デオキシウリジンもし
くはチミジンと２，６−ジアミノプリンから２，６−ジ
アミノプリン−２’−デオキシリボシドを生成する能力
を有し、アクロモバクター属、アグロバクテリウム属、
アシネトバクター属、アルカリゲネス属、アースロバク
ター属、エアロモナス属、エシェリヒア属、エンテロバ
クター属、エルビニア属、キサントモナス属、クレブシ
エラ属、クルチア属、クルイヘラ属、コリネバクテリウ
ム属、ザルチナ属、サルモネラ属、シトロバクター属、
シュードモナス属、ストレプトマイセス属、スポロザル
チナ属、スタフィロコッカス属、セラチア属、セルロモ
ナス属、ノカルディア属、バチルス属、ハフニア属、ビ
ブリオ属、フラボバクテリウム属、プラノコッカス属、
ブレビバクテリウム属、、プロタミノバクター属、プロ
テウス属、ヘモフィラス属、ミクロコッカス属、ミコプ
ラナ属、ミクロバクテリウム属、リゾビウム属またはロ
ドコッカス属に属する微生物の培養物、該培養物より分
離した微生物菌体もしくは該微生物菌体の処理物を無機
リン酸もしくはその塩の存在下で２’−デオキシウリジ
ンもしくはチミジンと２，６−ジアミノプリンに作用さ
せ、生成される２，６−ジアミノプリン−２’−デオキ
シリボシドを採取することを特徴とする２，６−ジアミ
ノプリン−２’−デオキシリボシドの製造法、および、
（３）上記（１）または（２）に記載の製造法で２，６
−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドを製造し、
次いで、得られた２，６−ジアミノプリン−２’−デオ
キシリボシドにアデノシンデアミナーゼまたは該酵素含
有物を水性媒体中で作用せしめ２’−デオキシグアノシ
ンを生成蓄積させることを特徴とする２’−デオキシグ
アノシンの製造法、に関するものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明の２，６−ジアミノプリン
−２’−デオキシリボシドの生産において使用される微
生物は、アクロモバクタ−属、アグロバクテリウム属、
アシネトバクター属、アルカリゲネス属、アースロバク
ター属、エアロモナス属、エシェリヒア属、エンテロバ
クター属、エルビニア属、キサントモナス属、クレブシ
エラ属、クルチア属、クルイヘラ属、コリネバクテリウ
ム属、ザルチナ属、サルモネラ属、シトロバクター属、
シュードモナス属、ストレプトマイセス属、スポロザル
チナ属、スタフィロコッカス属、セラチア属、セルロモ
ナス属、ノカルディア属、バクテリウム属、バチルス
属、ハフニア属、ビブリオ属、フラボバクテリウム属、
プラノコッカス属、ブレビバクテリウム属、、プロタミ
ノバクター属、プロテウス属、ヘモフィラス属、ミクロ
コッカス属、ミコプラナ属、ミクロバクテリウム属、リ
ゾビウム属またはロドコッカス属に属し、２’−デオキ
シリボース−１−リン酸またはその塩と２，６−ジアミ
ノプリンから２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシ
リボシドを生成する能力または無機リン酸もしくはその
塩の存在下で２’−デオキシウリジンもしくはチミジン
と２，６−ジアミノプリンから２，６−ジアミノプリン
−２’−デオキシリボシドを生成する能力を有するもの
であればいずれのもでも良いが、具体的には下記に示す
微生物を例示することができる。
−２’−デオキシリボシドの生産において使用される微
生物は、アクロモバクタ−属、アグロバクテリウム属、
アシネトバクター属、アルカリゲネス属、アースロバク
ター属、エアロモナス属、エシェリヒア属、エンテロバ
クター属、エルビニア属、キサントモナス属、クレブシ
エラ属、クルチア属、クルイヘラ属、コリネバクテリウ
ム属、ザルチナ属、サルモネラ属、シトロバクター属、
シュードモナス属、ストレプトマイセス属、スポロザル
チナ属、スタフィロコッカス属、セラチア属、セルロモ
ナス属、ノカルディア属、バクテリウム属、バチルス
属、ハフニア属、ビブリオ属、フラボバクテリウム属、
プラノコッカス属、ブレビバクテリウム属、、プロタミ
ノバクター属、プロテウス属、ヘモフィラス属、ミクロ
コッカス属、ミコプラナ属、ミクロバクテリウム属、リ
ゾビウム属またはロドコッカス属に属し、２’−デオキ
シリボース−１−リン酸またはその塩と２，６−ジアミ
ノプリンから２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシ
リボシドを生成する能力または無機リン酸もしくはその
塩の存在下で２’−デオキシウリジンもしくはチミジン
と２，６−ジアミノプリンから２，６−ジアミノプリン
−２’−デオキシリボシドを生成する能力を有するもの
であればいずれのもでも良いが、具体的には下記に示す
微生物を例示することができる。
【０００７】アクロモハ゛クター ヒ゛スコサス (Achromobacter viscos
us) ATCC 12448アク゛ロハ゛クテリウム ツメファシエンス (Agrobacterium tumefaciens)
ATCC 4720アシネトハ゛クター ルオフィー (Acinetobacter johnsonii) ATCC 903
6アルカリケ゛ネス フェカリス (Alcaligenes faecalis subsp. faeca
lis) ATCC 8750アースロハ゛クター オキシタ゛ンス (Arthrobacter oxydans) ATCC 1435
8エアロモナス サルモニシタ゛ (Aeromonas salmonicida subsp. salmo
nicida) ATCC 14174エシェリヒア コリ (Escherichia coli) ATCC 10798エンテロハ゛クター クロアカエ (Enterobacter cloacae) ATCC 7256エルヒ゛ニア ヘルヒ゛コラ (Erwinia herbicola) ATCC 1453キサントモナス シトリ (Xanthomonas citri) AJ 2785(FERM P-339
6)クレフ゛シエラ ニューモニアエ (Klebsiella pneumoniae) IFO 3321クルチア ソ゛フィー (Kurthia zopfii) ATCC 6900クルイヘラ シトロフィラ (Kluyvera citrophila) AJ 2626(FERM P-
8193)コリネハ゛クテリウム アセトアシト゛フィラム (Corynebacterium acetoacido
philum) ATCC 21407サ゛ルチナ ルテア (Sartina lutea) AJ 1218（FERM P-7400）サルモネラ チフミリウム (Salmonella typhimurium) AJ 2636(FERM
P-3753)シトロハ゛クター フロインテ゛ィ (Citrobacter freundi) ATCC 8090シュート゛モナス テ゛ィミニュータ (Pseudomonas diminuta) ATCC 1156
8ストレフ゜トマイセス タナシエンス (Streptomyces tanashiens) ATCC
15238スホ゜ロサ゛ルチナ ウレアエ (Sporosarcina ureae) IFO 12698スタフィロコッカス エヒ゜テ゛ルミテ゛ィス (Staphyrococcus epidermidis)
ATCC 155セラチア マルセッセンス (Serratia marcescens) ATCC 14226セルロモナス フラヒ゛ケ゛ラ (Cellulomonas flavigera) ATCC 486ノカルテ゛ィア アステロイテ゛ス (Nocardia asteroides) ATCC 19247ハ゛チルス ス゛フ゛チリス (Bacillus subtilis) ATCC 6633ハフニア アルヘ゛イ (Hafnia alvei) ATCC 9760ヒ゛フ゛リオ メチュニコヒ゛ (Vibrio metschnikovii) ATCC 7708フラホ゛ハ゛クテリウム フ゛レヘ゛ (Flavobacterium breve) ATCC 1423
4フ゜ラノコッカス ユーシナタス (Planococcus eucinatus) AJ 1656(FE
RM P-9133)フ゛レヒ゛ハ゛クテリウム フ゜シルム (Brevibacterium pusillum) ATCC
19096フ゜ロタミノハ゛クター アルホ゛フラフ゛ス (Protaminobacter alboflavus)
ATCC 8458フ゜ロテウス レッテケ゛リ (Proteus rettegeri) AJ 2770(FERM BP-
941)ヘモフィラス インフルエンサ゛エ (Haemophilus influenzae) ATCC 913
4ミクロコッカス ルテウス (Micrococcus luteus) ATCC 4698ミコフ゜ラナ テ゛ィモルファ (Mycoplana dimorpha) ATCC 4279ミクロハ゛クテリウム ラクチクム (Microbacterium lacticum) ATCC 81
80リソ゛ヒ゛ウム メィロッティ (Rhizobium melilotti) AJ 2823(FERM
P-8197)ロト゛コッカス ロト゛クラウス (Rhodococcus rhodochraus) ATCC 191
49 上記菌株の内、キサントモナス シトリ (Xanthomonas citri) AJ 2
785(FERM P-3396)は、国際寄託当局：通商産業省工業技
術院微生物工業技術研究所（現、通商産業省工業技術院
生命工学工業技術研究所）に昭和５１年１月２７日に寄
託された受託番号FERM P-3396の菌株であり、クルイヘラ シトロ
フィラ (Kluyvera citrophila) AJ 2626(FERM P-8193)は、
同寄託当局に昭和６０年４月２３日に寄託された受託番
号FERM P-8193の菌株であり、サ゛ルチナ ルテア (Sartina lute
a) AJ 1218(FERM P-7400)は、同寄託当局に昭和５９年
１月２０日に寄託された受託番号FERM P-7400の菌株で
あり、サルモネラ チフミリウム (Salmonella typhimurium) AJ 263
6(FERM P-3753)は、同寄託当局に昭和５１年１０月６日
に寄託された受託番号FERM P-3753の菌株であり、フ゜ラノコ
ッカス ユーシナタス (Planococcus eucinatus) AJ 1656(FERM P-
9133)は、同寄託当局に昭和６２年１月１９日に寄託さ
れた受託番号FERM P-9133の菌株であり、フ゜ロテウス レッテケ゛リ
(Proteus rettegeri) AJ 2770(FERM BP-941)は、同寄
託当局に昭和６０年４月２５日に寄託され、昭和６０年
１１月２８日にブダペスト条約に基づく国際寄託に移管
された受託番号FERM BP-941の菌株であり、リソ゛ヒ゛ウム メィロ
ッティ (Rhizobium melilotti) AJ 2823(FERM P-8197)は、
同寄託当局に昭和６０年４月２５日に寄託された受託番
号FERM P-8197の菌株である。
us) ATCC 12448アク゛ロハ゛クテリウム ツメファシエンス (Agrobacterium tumefaciens)
ATCC 4720アシネトハ゛クター ルオフィー (Acinetobacter johnsonii) ATCC 903
6アルカリケ゛ネス フェカリス (Alcaligenes faecalis subsp. faeca
lis) ATCC 8750アースロハ゛クター オキシタ゛ンス (Arthrobacter oxydans) ATCC 1435
8エアロモナス サルモニシタ゛ (Aeromonas salmonicida subsp. salmo
nicida) ATCC 14174エシェリヒア コリ (Escherichia coli) ATCC 10798エンテロハ゛クター クロアカエ (Enterobacter cloacae) ATCC 7256エルヒ゛ニア ヘルヒ゛コラ (Erwinia herbicola) ATCC 1453キサントモナス シトリ (Xanthomonas citri) AJ 2785(FERM P-339
6)クレフ゛シエラ ニューモニアエ (Klebsiella pneumoniae) IFO 3321クルチア ソ゛フィー (Kurthia zopfii) ATCC 6900クルイヘラ シトロフィラ (Kluyvera citrophila) AJ 2626(FERM P-
8193)コリネハ゛クテリウム アセトアシト゛フィラム (Corynebacterium acetoacido
philum) ATCC 21407サ゛ルチナ ルテア (Sartina lutea) AJ 1218（FERM P-7400）サルモネラ チフミリウム (Salmonella typhimurium) AJ 2636(FERM
P-3753)シトロハ゛クター フロインテ゛ィ (Citrobacter freundi) ATCC 8090シュート゛モナス テ゛ィミニュータ (Pseudomonas diminuta) ATCC 1156
8ストレフ゜トマイセス タナシエンス (Streptomyces tanashiens) ATCC
15238スホ゜ロサ゛ルチナ ウレアエ (Sporosarcina ureae) IFO 12698スタフィロコッカス エヒ゜テ゛ルミテ゛ィス (Staphyrococcus epidermidis)
ATCC 155セラチア マルセッセンス (Serratia marcescens) ATCC 14226セルロモナス フラヒ゛ケ゛ラ (Cellulomonas flavigera) ATCC 486ノカルテ゛ィア アステロイテ゛ス (Nocardia asteroides) ATCC 19247ハ゛チルス ス゛フ゛チリス (Bacillus subtilis) ATCC 6633ハフニア アルヘ゛イ (Hafnia alvei) ATCC 9760ヒ゛フ゛リオ メチュニコヒ゛ (Vibrio metschnikovii) ATCC 7708フラホ゛ハ゛クテリウム フ゛レヘ゛ (Flavobacterium breve) ATCC 1423
4フ゜ラノコッカス ユーシナタス (Planococcus eucinatus) AJ 1656(FE
RM P-9133)フ゛レヒ゛ハ゛クテリウム フ゜シルム (Brevibacterium pusillum) ATCC
19096フ゜ロタミノハ゛クター アルホ゛フラフ゛ス (Protaminobacter alboflavus)
ATCC 8458フ゜ロテウス レッテケ゛リ (Proteus rettegeri) AJ 2770(FERM BP-
941)ヘモフィラス インフルエンサ゛エ (Haemophilus influenzae) ATCC 913
4ミクロコッカス ルテウス (Micrococcus luteus) ATCC 4698ミコフ゜ラナ テ゛ィモルファ (Mycoplana dimorpha) ATCC 4279ミクロハ゛クテリウム ラクチクム (Microbacterium lacticum) ATCC 81
80リソ゛ヒ゛ウム メィロッティ (Rhizobium melilotti) AJ 2823(FERM
P-8197)ロト゛コッカス ロト゛クラウス (Rhodococcus rhodochraus) ATCC 191
49 上記菌株の内、キサントモナス シトリ (Xanthomonas citri) AJ 2
785(FERM P-3396)は、国際寄託当局：通商産業省工業技
術院微生物工業技術研究所（現、通商産業省工業技術院
生命工学工業技術研究所）に昭和５１年１月２７日に寄
託された受託番号FERM P-3396の菌株であり、クルイヘラ シトロ
フィラ (Kluyvera citrophila) AJ 2626(FERM P-8193)は、
同寄託当局に昭和６０年４月２３日に寄託された受託番
号FERM P-8193の菌株であり、サ゛ルチナ ルテア (Sartina lute
a) AJ 1218(FERM P-7400)は、同寄託当局に昭和５９年
１月２０日に寄託された受託番号FERM P-7400の菌株で
あり、サルモネラ チフミリウム (Salmonella typhimurium) AJ 263
6(FERM P-3753)は、同寄託当局に昭和５１年１０月６日
に寄託された受託番号FERM P-3753の菌株であり、フ゜ラノコ
ッカス ユーシナタス (Planococcus eucinatus) AJ 1656(FERM P-
9133)は、同寄託当局に昭和６２年１月１９日に寄託さ
れた受託番号FERM P-9133の菌株であり、フ゜ロテウス レッテケ゛リ
(Proteus rettegeri) AJ 2770(FERM BP-941)は、同寄
託当局に昭和６０年４月２５日に寄託され、昭和６０年
１１月２８日にブダペスト条約に基づく国際寄託に移管
された受託番号FERM BP-941の菌株であり、リソ゛ヒ゛ウム メィロ
ッティ (Rhizobium melilotti) AJ 2823(FERM P-8197)は、
同寄託当局に昭和６０年４月２５日に寄託された受託番
号FERM P-8197の菌株である。
【０００８】これらの微生物を用いて２，６−ジアミノ
プリン−２’−デオキシリボシドを生成せしめる方法
は、微生物の培養中に基質を添加する培養法を用いても
良いし、また培養した菌体あるいはこの処理物を基質に
作用させる静止菌体法を用いても良い。
プリン−２’−デオキシリボシドを生成せしめる方法
は、微生物の培養中に基質を添加する培養法を用いても
良いし、また培養した菌体あるいはこの処理物を基質に
作用させる静止菌体法を用いても良い。
【０００９】培養法を用いる場合には、炭素源、窒素
源、リン源、Ｓ源、無機イオン等、更に必要ならばビタ
ミン、有機窒素源を含有する通常の培地を用いれば良
い。炭素源としては、グルコ−ス等の炭水化物、グリセ
ロ−ル等のアルコ−ル類、酢酸等の有機酸、窒素源とし
ては、アンモニアガス、アンモニア水、アンモニウム
塩、硝酸およびその塩等、リン源としてはリン酸１カリ
ウム等の無機リン酸およびその塩等、Ｓ源としては硫酸
マグネシウム等、無機イオンとしては、マグネシウムイ
オン、カリウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、そ
の他が必要に応じ適宜使用される。有機栄養源として
は、ビタミン、アミノ酸等及びこれらを含有する酵母エ
キス、ペプトン、肉エキス、コ−ンスティ−プリカ−、
カゼイン分解物その他が適宜用いられる。培養条件にも
格別の制限はなく、例えば、好気的条件下pH５〜８及び
温度25〜40℃の範囲内でpH及び温度を適当に制限しつつ
12〜72時間程度培養を行なえばよい。具体的には、
（１）２’−デオキシリボース−１−リン酸から２，６
−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドを生産する
場合には、上記基本培地に２’−デオキシリボース−１
−リン酸と、２，６−ジアミノプリンを、（２）２’−
デオキシウリジンもしくはチミジンから２，６−ジアミ
ノプリン−２’−デオキシリボシドを生産する場合に
は、上記基本培地に２’−デオキシウリジンもしくはチ
ミジンと、２，６−ジアミノプリンを適宜添加して微生
物の培養を行えば良い。上記基質の添加は培養初期でも
培養途中でも構わない。
源、リン源、Ｓ源、無機イオン等、更に必要ならばビタ
ミン、有機窒素源を含有する通常の培地を用いれば良
い。炭素源としては、グルコ−ス等の炭水化物、グリセ
ロ−ル等のアルコ−ル類、酢酸等の有機酸、窒素源とし
ては、アンモニアガス、アンモニア水、アンモニウム
塩、硝酸およびその塩等、リン源としてはリン酸１カリ
ウム等の無機リン酸およびその塩等、Ｓ源としては硫酸
マグネシウム等、無機イオンとしては、マグネシウムイ
オン、カリウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、そ
の他が必要に応じ適宜使用される。有機栄養源として
は、ビタミン、アミノ酸等及びこれらを含有する酵母エ
キス、ペプトン、肉エキス、コ−ンスティ−プリカ−、
カゼイン分解物その他が適宜用いられる。培養条件にも
格別の制限はなく、例えば、好気的条件下pH５〜８及び
温度25〜40℃の範囲内でpH及び温度を適当に制限しつつ
12〜72時間程度培養を行なえばよい。具体的には、
（１）２’−デオキシリボース−１−リン酸から２，６
−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドを生産する
場合には、上記基本培地に２’−デオキシリボース−１
−リン酸と、２，６−ジアミノプリンを、（２）２’−
デオキシウリジンもしくはチミジンから２，６−ジアミ
ノプリン−２’−デオキシリボシドを生産する場合に
は、上記基本培地に２’−デオキシウリジンもしくはチ
ミジンと、２，６−ジアミノプリンを適宜添加して微生
物の培養を行えば良い。上記基質の添加は培養初期でも
培養途中でも構わない。
【００１０】静止菌体法を用いる場合の酵素源として
は、上記の方法で得られた培養液そのまま、あるいは洗
浄菌体が使用できる他、菌体処理物も使用できる。菌体
処理物としては、アセトン乾燥菌体、菌体摩砕物、菌体
の超音波あるいはダイノミルあるいはフレンチプレス等
処理物、界面活性剤またはトルエン等に接触せしめた菌
体、リゾチーム、プロテアーゼ等の酵素処理した菌体、
菌体より抽出した後、透析処理等で分離したタンパク画
分、本反応の酵素活性を有する精製酵素、更に上記菌体
または処理物の固定化物等何れもが使用できる。具体的
には、（１）２’−デオキシリボース−１−リン酸から
２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドを生
産する場合には、上記基本培地に２’−デオキシリボー
ス−１−リン酸と、２，６−ジアミノプリンを、（２）
２’−デオキシウリジンもしくはチミジンから２，６−
ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドを生産する場
合には、上記基本培地に２’ーデオキシウリジンもしく
はチミジンと、２，６−ジアミノプリンを含む水溶液に
前記微生物菌体またはその処理物を添加し適宜添加して
反応を行えば良い。
は、上記の方法で得られた培養液そのまま、あるいは洗
浄菌体が使用できる他、菌体処理物も使用できる。菌体
処理物としては、アセトン乾燥菌体、菌体摩砕物、菌体
の超音波あるいはダイノミルあるいはフレンチプレス等
処理物、界面活性剤またはトルエン等に接触せしめた菌
体、リゾチーム、プロテアーゼ等の酵素処理した菌体、
菌体より抽出した後、透析処理等で分離したタンパク画
分、本反応の酵素活性を有する精製酵素、更に上記菌体
または処理物の固定化物等何れもが使用できる。具体的
には、（１）２’−デオキシリボース−１−リン酸から
２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドを生
産する場合には、上記基本培地に２’−デオキシリボー
ス−１−リン酸と、２，６−ジアミノプリンを、（２）
２’−デオキシウリジンもしくはチミジンから２，６−
ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドを生産する場
合には、上記基本培地に２’ーデオキシウリジンもしく
はチミジンと、２，６−ジアミノプリンを含む水溶液に
前記微生物菌体またはその処理物を添加し適宜添加して
反応を行えば良い。
【００１１】反応は通常、温度２０〜８０℃、望ましく
は４０〜７０℃で、ｐＨ３〜１１望ましくはｐＨ４〜１
０が好結果を与える。反応には静置あるいは攪拌のいず
れの方法も採用し得る。反応時間は使用する酵素の活
性、基質濃度などの条件によって異なるが、１０分〜１
０日間保持反応させれば良い。
は４０〜７０℃で、ｐＨ３〜１１望ましくはｐＨ４〜１
０が好結果を与える。反応には静置あるいは攪拌のいず
れの方法も採用し得る。反応時間は使用する酵素の活
性、基質濃度などの条件によって異なるが、１０分〜１
０日間保持反応させれば良い。
【００１２】上記により得られた２，６−ジアミノプリ
ン−２’−デオキシリボシドにアデノシンデアミナーゼ
または該酵素含有物を水性媒体中で作用せしめること
で、２’−デオキシグアノシンを製造することができ
る。２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシド
は、上記反応液から分離をせずにアデノシンデアミナー
ゼを作用させて２’−デオキシグアノシンに作用させて
も良いし、反応終了混合物より採取分離した後、作用さ
せても良い。採取分離の方法としては、合成吸着樹脂を
用いる方法や、その他通常の採取分離方法が適用可能で
ある。
ン−２’−デオキシリボシドにアデノシンデアミナーゼ
または該酵素含有物を水性媒体中で作用せしめること
で、２’−デオキシグアノシンを製造することができ
る。２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシド
は、上記反応液から分離をせずにアデノシンデアミナー
ゼを作用させて２’−デオキシグアノシンに作用させて
も良いし、反応終了混合物より採取分離した後、作用さ
せても良い。採取分離の方法としては、合成吸着樹脂を
用いる方法や、その他通常の採取分離方法が適用可能で
ある。
【００１３】アデノシンデアミナーゼは、アデノシンを
イノシンに変換する能力を有する酵素であるが、本発明
者らは、アデノシンデアミナーゼが２，６−ジアミノプ
リン−２’−デオキシリボシドを２’−デオキシグアノ
シンに変換する能力も有することを見いだした。従っ
て、本発明のアデノシンデアミナーゼの作用による２，
６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドからの
２’−デオキシグアノシンの生産において使用されるア
デノシンデアミナーゼは、２，６−ジアミノプリン−
２’−デオキシリボシドを２’−デオキシグアノシンに
変換できるものであればその起源を問わずいずれも使用
できる。具体的には動物由来としては、ウシ腸由来、脾
臓由来のもの等が使用でき、微生物由来としては酵素ハ
ンドブック（１９９３年４月２０日第８刷、第６０５
頁、朝倉書店）に記載のものが使用できる。
イノシンに変換する能力を有する酵素であるが、本発明
者らは、アデノシンデアミナーゼが２，６−ジアミノプ
リン−２’−デオキシリボシドを２’−デオキシグアノ
シンに変換する能力も有することを見いだした。従っ
て、本発明のアデノシンデアミナーゼの作用による２，
６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドからの
２’−デオキシグアノシンの生産において使用されるア
デノシンデアミナーゼは、２，６−ジアミノプリン−
２’−デオキシリボシドを２’−デオキシグアノシンに
変換できるものであればその起源を問わずいずれも使用
できる。具体的には動物由来としては、ウシ腸由来、脾
臓由来のもの等が使用でき、微生物由来としては酵素ハ
ンドブック（１９９３年４月２０日第８刷、第６０５
頁、朝倉書店）に記載のものが使用できる。
【００１４】また、特開平02-291291号公報に記載のも
の、すなわち、アシネトバクター属、エアロモナス属、
アルカリゲネス属、アースロバクター属、バチルス属、
ブレビバクテリウム属、セルロモナス属、シトロバクタ
ー属、コリネバクテリウム属、エシェリヒア属、エンテ
ロバクター属、エルビニア属、フラボバクテリウム属、
ハフニア属、クレブシェラ属、クルイヘラ属、ミクロバ
クテリウム属、ミクロコッカス属、ミコプラナ属、ノカ
ルディア属、プラノコッカス属、プロタミノバクター
属、プロテウス属、シュードモナス属、リゾビウム属、
ロドコッカス属、サルモネラ属、セラチア属、スタフィ
ロコッカス属、ストレプトマイセス属、ビブリオ属また
はキサントモナス属に属し、２’，３’−ジデオキシア
デノシンを２’，３’−ジデオキシイノシンに変換する
能力を有する微生物由来のアデノシンデアミナーゼが使
用可能であるが、具体的には下記に例示した微生物由来
のアデノシンデアミナーゼが使用可能である。
の、すなわち、アシネトバクター属、エアロモナス属、
アルカリゲネス属、アースロバクター属、バチルス属、
ブレビバクテリウム属、セルロモナス属、シトロバクタ
ー属、コリネバクテリウム属、エシェリヒア属、エンテ
ロバクター属、エルビニア属、フラボバクテリウム属、
ハフニア属、クレブシェラ属、クルイヘラ属、ミクロバ
クテリウム属、ミクロコッカス属、ミコプラナ属、ノカ
ルディア属、プラノコッカス属、プロタミノバクター
属、プロテウス属、シュードモナス属、リゾビウム属、
ロドコッカス属、サルモネラ属、セラチア属、スタフィ
ロコッカス属、ストレプトマイセス属、ビブリオ属また
はキサントモナス属に属し、２’，３’−ジデオキシア
デノシンを２’，３’−ジデオキシイノシンに変換する
能力を有する微生物由来のアデノシンデアミナーゼが使
用可能であるが、具体的には下記に例示した微生物由来
のアデノシンデアミナーゼが使用可能である。
【００１５】Acinetobacter lwoffii ATCC 9036 Aeromonas salmonicida ATCC 14174 Alcaligenes faecalis FERM BP-940 Arthrobacter citreus ATCC 11624 Bacillus firmus ATCC 8247 Brevibacterium pusillum ATCC 19096 Cellulomonas flavigena ATCC 491 Citrobacter freundii ATCC 8090 Corynebacterium aquaticum ATCC 14665 Escherichia coli FERM P-7404 Enterobacter cloacae ATCC 13047 Erwinia carotovora FERM P-2766 Flavobacterium aquatile ATCC 8375 Hafnia alvei ATCC 9760 Klebsiella pneumoniae ATCC 8308 Kluyvera citrophila FERM P-8193 Microbacterium imperiable ATCC 8365 Micrococcus luteus ATCC 400 Mycloplana dimorpha ATCC 4279 Nocardia restricta ATCC 14887 Planococcus citreus ATCC 15234 Protaminobacter alboflavus ATCC 8458 Proteus rettgeri FERM BP-941 Pseudomonas oleovorans ATCC 8062 Rhizobium meliloti FERM P-8197 Rhodococcus rhodochrous ATCC 12974 Salmonella typhimurium FERM P-9470 Arthrobacter ureafaciens FERM BP-2472 Serratia grimesii ATCC 14460 Staphyrococcus epidermidis ATCC 155 Streptomyces flavovirens IFO 3197 Vibrio metschnikovii ATCC 7708 Xantomonas citri FERM P-3396
【００１６】上記菌株の内、Xanthomonas citri FERM P
-3396は、国際寄託当局：通商産業省工業技術院微生物
工業技術研究所（現、通商産業省工業技術院生命工学工
業技術研究所）に昭和５１年１月２７日に寄託された受
託番号FERM P-3396の菌株であり、Kluyvera citrophila
FERM P-8193は、同寄託当局に昭和６０年４月２３日に
寄託された受託番号FERM P-8193の菌株であり、Arthrob
acter ureafaciensFERM BP-2472は、同寄託当局に昭和
５８年４月２５日に寄託され、平成元年６月１４日にブ
ダペスト条約に基づく国際寄託に移管された受託番号FE
RM BP-2472の菌株であり、Salmonella typhimurium FER
M P-9470は、同寄託当局に昭和６２年７月１１日に寄託
された受託番号FERM P-9470の菌株であり、Escherichia
coliFERM P-7404は、同寄託当局に昭和５９年１月２０
日に寄託された受託番号FERMP-7404の菌株であり、Prot
eus rettegeri FERM BP-941は、同寄託当局に昭和６０
年４月２５日に寄託され、昭和６０年１１月２８日にブ
ダペスト条約に基づく国際寄託に移管された受託番号FE
RM BP-941の菌株であり、Rhizobium melilottiFERM P-8
197は、同寄託当局に昭和６０年４月２５日に寄託され
た受託番号FERMP-8197の菌株であり、Alcaligenes faec
alis FERM BP-940は、同寄託当局に昭和５９年１２月２
４日に寄託され、昭和６０年１１月２８日にブダペスト
条約に基づく国際寄託に移管された受託番号FERM BP-94
0の菌株であり、Erwinia carotovora FERM P-2766は、
同寄託当局に昭和４９年１０月２９日に寄託された受託
番号FERM P-2766の菌株である。
-3396は、国際寄託当局：通商産業省工業技術院微生物
工業技術研究所（現、通商産業省工業技術院生命工学工
業技術研究所）に昭和５１年１月２７日に寄託された受
託番号FERM P-3396の菌株であり、Kluyvera citrophila
FERM P-8193は、同寄託当局に昭和６０年４月２３日に
寄託された受託番号FERM P-8193の菌株であり、Arthrob
acter ureafaciensFERM BP-2472は、同寄託当局に昭和
５８年４月２５日に寄託され、平成元年６月１４日にブ
ダペスト条約に基づく国際寄託に移管された受託番号FE
RM BP-2472の菌株であり、Salmonella typhimurium FER
M P-9470は、同寄託当局に昭和６２年７月１１日に寄託
された受託番号FERM P-9470の菌株であり、Escherichia
coliFERM P-7404は、同寄託当局に昭和５９年１月２０
日に寄託された受託番号FERMP-7404の菌株であり、Prot
eus rettegeri FERM BP-941は、同寄託当局に昭和６０
年４月２５日に寄託され、昭和６０年１１月２８日にブ
ダペスト条約に基づく国際寄託に移管された受託番号FE
RM BP-941の菌株であり、Rhizobium melilottiFERM P-8
197は、同寄託当局に昭和６０年４月２５日に寄託され
た受託番号FERMP-8197の菌株であり、Alcaligenes faec
alis FERM BP-940は、同寄託当局に昭和５９年１２月２
４日に寄託され、昭和６０年１１月２８日にブダペスト
条約に基づく国際寄託に移管された受託番号FERM BP-94
0の菌株であり、Erwinia carotovora FERM P-2766は、
同寄託当局に昭和４９年１０月２９日に寄託された受託
番号FERM P-2766の菌株である。
【００１７】一方、該酵素（アデノシンデアミナーゼ）
含有物としては、上記の微生物の培養液、培養菌体が使
用できる他、菌体処理物である、アセトン処理菌体、菌
体の磨砕物、界面活性剤あるいはトルエン等の処理菌
体、リゾチーム等の酵素処理菌体、菌体より抽出した
後、塩析・カラムクロマト等で分離したタンハ゜ク画分、ア
デノシンデアミナーゼ活性を有するタンハ゜ク画分の精製
物、更に本菌体および菌体処理物の固定化物等が使用で
きる。動植物由来の該素含有物としては、該酵素を含有
する部分の磨砕物の他、上記微生物由来酵素と同様な処
理物、固定化物が使用できる。
含有物としては、上記の微生物の培養液、培養菌体が使
用できる他、菌体処理物である、アセトン処理菌体、菌
体の磨砕物、界面活性剤あるいはトルエン等の処理菌
体、リゾチーム等の酵素処理菌体、菌体より抽出した
後、塩析・カラムクロマト等で分離したタンハ゜ク画分、ア
デノシンデアミナーゼ活性を有するタンハ゜ク画分の精製
物、更に本菌体および菌体処理物の固定化物等が使用で
きる。動植物由来の該素含有物としては、該酵素を含有
する部分の磨砕物の他、上記微生物由来酵素と同様な処
理物、固定化物が使用できる。
【００１８】アデノシンデアミナーゼを２，６−ジアミ
ノプリン−２’−デオキシリボシドに作用させる方法と
しては、２、６ージアミノプリンー２’ーデオキシリボ
シドを含む溶液にアデノシンデアミナーゼを添加し反応
させれば良い。２，６−ジアミノプリン−２’−デオキ
シリボシドにアデノシンデアミナーゼを作用させる反応
は、通常、温度５〜５０℃、望ましくは１０〜４０℃
で、ｐＨ４〜１０望ましくはｐＨ５〜９が好結果を与え
る。反応には静置あるいは攪拌のいずれの方法も採用し
得る。反応中には、該酵素の作用によりアンモニアが生
成し、反応液のｐＨが上昇するので、酵素の至適ｐＨに
応じてｐＨを調整すれば好結果が得られる、反応時間は
使用する酵素の活性、基質濃度などの条件によって異な
るが、１０分〜５日間保持反応させれば良い。
ノプリン−２’−デオキシリボシドに作用させる方法と
しては、２、６ージアミノプリンー２’ーデオキシリボ
シドを含む溶液にアデノシンデアミナーゼを添加し反応
させれば良い。２，６−ジアミノプリン−２’−デオキ
シリボシドにアデノシンデアミナーゼを作用させる反応
は、通常、温度５〜５０℃、望ましくは１０〜４０℃
で、ｐＨ４〜１０望ましくはｐＨ５〜９が好結果を与え
る。反応には静置あるいは攪拌のいずれの方法も採用し
得る。反応中には、該酵素の作用によりアンモニアが生
成し、反応液のｐＨが上昇するので、酵素の至適ｐＨに
応じてｐＨを調整すれば好結果が得られる、反応時間は
使用する酵素の活性、基質濃度などの条件によって異な
るが、１０分〜５日間保持反応させれば良い。
【００１９】また、２，６−ジアミノプリン−２’−デ
オキシリボシド、２’−デオキシグアノシンの定量は高
速液体クロマトグラフィーを用いる方法で行えば良い。
以下、実施例にて本発明を詳細に説明する。
オキシリボシド、２’−デオキシグアノシンの定量は高
速液体クロマトグラフィーを用いる方法で行えば良い。
以下、実施例にて本発明を詳細に説明する。
【００２０】
【実施例】（実施例 １）酵母エキス 5 g/l、肉エキス
10 g/l、ペプトン １0 g/l、NaCl 5 g/l を含有する栄
養培地（pH 7.0） 50 ml を 坂口フラスコ（500 ml)に
入れ、120 ℃にて20 分間加熱殺菌した。これに、ブイ
ヨン寒天培地で 30℃, 16 時間培養した第１表に示す微
生物をそれぞれ１白金耳づつ接種し、30℃にて 18 時間
振盪培養した。得られた培養液から菌体を遠心分離によ
り分離した後、50 mM トリス−塩酸バッファー(pH 7.2)
で洗浄し、更に遠心分離することにより洗浄菌体を調製
した。上記洗浄菌体を 100 mM の２’−デオキシリボー
ス−１−リン酸と 100 mM の２，６−ジアミノプリン・
1/2硫酸塩を含む 50 mM のトリス−塩酸バッファー(pH
7.2) 10 ml に 上記洗浄菌体を 50 g/l になるように添
加し、60℃にて 2時間反応させた。反応液中に生成した
２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドの濃
度を高速液体クロマトグラフィーを用いて測定し、その
結果を第１表に示した。
10 g/l、ペプトン １0 g/l、NaCl 5 g/l を含有する栄
養培地（pH 7.0） 50 ml を 坂口フラスコ（500 ml)に
入れ、120 ℃にて20 分間加熱殺菌した。これに、ブイ
ヨン寒天培地で 30℃, 16 時間培養した第１表に示す微
生物をそれぞれ１白金耳づつ接種し、30℃にて 18 時間
振盪培養した。得られた培養液から菌体を遠心分離によ
り分離した後、50 mM トリス−塩酸バッファー(pH 7.2)
で洗浄し、更に遠心分離することにより洗浄菌体を調製
した。上記洗浄菌体を 100 mM の２’−デオキシリボー
ス−１−リン酸と 100 mM の２，６−ジアミノプリン・
1/2硫酸塩を含む 50 mM のトリス−塩酸バッファー(pH
7.2) 10 ml に 上記洗浄菌体を 50 g/l になるように添
加し、60℃にて 2時間反応させた。反応液中に生成した
２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドの濃
度を高速液体クロマトグラフィーを用いて測定し、その
結果を第１表に示した。
【００２１】
【表１】
【００２２】（実施例 ２）酵母エキス 5 g/l、肉エキ
ス 10 g/l、ペプトン １0 g/l、NaCl 5 g/l を含有する
栄養培地（pH 7.0） 50 ml を 坂口フラスコ（500 ml)
に入れ、120 ℃にて20 分間加熱殺菌した。これに、ブ
イヨン寒天培地で 30℃, 16 時間培養した第２表に示す
微生物をそれぞれ１白金耳づつ接種し、30℃にて 18 時
間振盪培養した。得られた培養液から菌体を遠心分離に
より分離した後、50 mM リン酸バッファー(pH 7.0)で洗
浄し、更に遠心分離することにより洗浄菌体を調製し
た。上記洗浄菌体を 100 mM の２’−デオキシウリジン
と 100 mM の２，６−ジアミノプリン・1/2硫酸塩を含
む50 mM のリン酸バッファー(pH 7.0) 10 ml に上記洗
浄菌体を 50 g/l になるように添加し、60℃にて 2 時
間反応させた。反応液中に生成した２，６−ジアミノプ
リン−２’−デオキシリボシドの濃度を高速液体クロマ
トグラフィーを用いて測定し、その結果を第２表に示し
た。
ス 10 g/l、ペプトン １0 g/l、NaCl 5 g/l を含有する
栄養培地（pH 7.0） 50 ml を 坂口フラスコ（500 ml)
に入れ、120 ℃にて20 分間加熱殺菌した。これに、ブ
イヨン寒天培地で 30℃, 16 時間培養した第２表に示す
微生物をそれぞれ１白金耳づつ接種し、30℃にて 18 時
間振盪培養した。得られた培養液から菌体を遠心分離に
より分離した後、50 mM リン酸バッファー(pH 7.0)で洗
浄し、更に遠心分離することにより洗浄菌体を調製し
た。上記洗浄菌体を 100 mM の２’−デオキシウリジン
と 100 mM の２，６−ジアミノプリン・1/2硫酸塩を含
む50 mM のリン酸バッファー(pH 7.0) 10 ml に上記洗
浄菌体を 50 g/l になるように添加し、60℃にて 2 時
間反応させた。反応液中に生成した２，６−ジアミノプ
リン−２’−デオキシリボシドの濃度を高速液体クロマ
トグラフィーを用いて測定し、その結果を第２表に示し
た。
【００２３】
【表２】
【００２４】（実施例 ３）酵母エキス 5 g/l、肉エキ
ス 10 g/l、ペプトン １0 g/l、NaCl 5 g/l を含有する
栄養培地（pH 7.0） 50 ml を 坂口フラスコ（500 ml)
に入れ、120 ℃にて20 分間加熱殺菌した。これに、ブ
イヨン寒天培地で 30℃, 16 時間培養したクレフ゛シエラ ニューモ
ニアエ (Klebsiella pneumoniae) IFO 3321 を１白金耳づ
つ接種し、30℃にて 18 時間振盪培養した。得られた培
養液から菌体を遠心分離により分離した後、50 mM リン
酸バッファー(pH 7.0)で洗浄し、更に遠心分離すること
により洗浄菌体を調製した。上記洗浄菌体を 100 mM の
チミジンと、100 mM の２，６−ジアミノプリン・1/2硫
酸塩を含む50 mM のリン酸バッファー(pH 7.0) 10 ml
に 上記洗浄菌体を 50 g/l になるように添加し、60℃
にて 2 時間反応させた。反応液中に生成した２，６−
ジアミノプリンー２’ーデオキシリボシドの濃度を高速
液体クロマトグラフィーを用いて測定した結果、15.2 g
/lの２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシド
が生成していた。
ス 10 g/l、ペプトン １0 g/l、NaCl 5 g/l を含有する
栄養培地（pH 7.0） 50 ml を 坂口フラスコ（500 ml)
に入れ、120 ℃にて20 分間加熱殺菌した。これに、ブ
イヨン寒天培地で 30℃, 16 時間培養したクレフ゛シエラ ニューモ
ニアエ (Klebsiella pneumoniae) IFO 3321 を１白金耳づ
つ接種し、30℃にて 18 時間振盪培養した。得られた培
養液から菌体を遠心分離により分離した後、50 mM リン
酸バッファー(pH 7.0)で洗浄し、更に遠心分離すること
により洗浄菌体を調製した。上記洗浄菌体を 100 mM の
チミジンと、100 mM の２，６−ジアミノプリン・1/2硫
酸塩を含む50 mM のリン酸バッファー(pH 7.0) 10 ml
に 上記洗浄菌体を 50 g/l になるように添加し、60℃
にて 2 時間反応させた。反応液中に生成した２，６−
ジアミノプリンー２’ーデオキシリボシドの濃度を高速
液体クロマトグラフィーを用いて測定した結果、15.2 g
/lの２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシド
が生成していた。
【００２５】（実施例 ４）２，６−ジアミノプリン−
２’−デオキシリボシドを 20.0 g/l 含む 50 mM リン
酸バッファー溶液および実施例 ２で得られた クレフ゛シエラ
ニューモニアエ(Klebsiellapneumoniae) IFO 3321 を用いた反
応終了液（２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリ
ボシド 16.9 g/l 含有）5 ml (pH 7.0)にBoehringer 社
製アデノシンデアミナーゼ（50% グリセロール溶液、仔
ウシ腸由来、約 200 U/mg) をそれぞれ 50 μl 添加
し、pH を 7.0に調製しながら 25℃にて１時間反応させ
た。反応液中に生成した２’−デオキシグアノシンの濃
度を高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した結
果、それぞれ 19.8 g/l（変換モル収率 99 %）、16.8g/
l（変換モル収率 99 %）であった。
２’−デオキシリボシドを 20.0 g/l 含む 50 mM リン
酸バッファー溶液および実施例 ２で得られた クレフ゛シエラ
ニューモニアエ(Klebsiellapneumoniae) IFO 3321 を用いた反
応終了液（２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリ
ボシド 16.9 g/l 含有）5 ml (pH 7.0)にBoehringer 社
製アデノシンデアミナーゼ（50% グリセロール溶液、仔
ウシ腸由来、約 200 U/mg) をそれぞれ 50 μl 添加
し、pH を 7.0に調製しながら 25℃にて１時間反応させ
た。反応液中に生成した２’−デオキシグアノシンの濃
度を高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した結
果、それぞれ 19.8 g/l（変換モル収率 99 %）、16.8g/
l（変換モル収率 99 %）であった。
【００２６】（実施例 ５）酵母エキス 5 g/l、肉エキ
ス 10 g/l、ペプトン １0 g/l、NaCl 5 g/l を含有する
栄養培地（pH 7.0） 50 ml を 坂口フラスコ（500 ml)
に入れ、120 ℃にて20 分間加熱殺菌した。これに、ブ
イヨン寒天培地で 30℃, 16 時間培養したアースロハ゛クター ウレ
アファシエンス (Arthrobacter ureafaciens) (FERM BP-2472)
を１白金耳接種し、30℃にて 16 時間振盪培養した。得
られた培養液から菌体を遠心分離により分離した後、50
mM トリスー塩酸バッファー(pH 7.2)で洗浄し、更に遠
心分離することにより洗浄菌体を調製した。上記洗浄菌
体を 20.0 g/l の２，６−ジアミノプリン−２’−デオ
キシリボシドを含む 50 mM トリスー塩酸バッファー溶
液(pH 7.2) に 5 g/l になるように添加し、pH を 7.2
に保持しながら 30℃、３時間反応させた。反応液中に
生成した２’−デオキシグアノシンの濃度を高速液体ク
ロマトグラフィーを用いて測定した結果、それぞれ 19.
8 g/l（変換モル収率 99 %）であった。
ス 10 g/l、ペプトン １0 g/l、NaCl 5 g/l を含有する
栄養培地（pH 7.0） 50 ml を 坂口フラスコ（500 ml)
に入れ、120 ℃にて20 分間加熱殺菌した。これに、ブ
イヨン寒天培地で 30℃, 16 時間培養したアースロハ゛クター ウレ
アファシエンス (Arthrobacter ureafaciens) (FERM BP-2472)
を１白金耳接種し、30℃にて 16 時間振盪培養した。得
られた培養液から菌体を遠心分離により分離した後、50
mM トリスー塩酸バッファー(pH 7.2)で洗浄し、更に遠
心分離することにより洗浄菌体を調製した。上記洗浄菌
体を 20.0 g/l の２，６−ジアミノプリン−２’−デオ
キシリボシドを含む 50 mM トリスー塩酸バッファー溶
液(pH 7.2) に 5 g/l になるように添加し、pH を 7.2
に保持しながら 30℃、３時間反応させた。反応液中に
生成した２’−デオキシグアノシンの濃度を高速液体ク
ロマトグラフィーを用いて測定した結果、それぞれ 19.
8 g/l（変換モル収率 99 %）であった。
【００２７】
【発明の効果】上記のように、本発明によれば、高収率
で容易かつ安価に２，６−ジアミノプリン−２’−デオ
キシリボシドおよび２’−デオキシグアノシンを製造す
ることが可能となる。
で容易かつ安価に２，６−ジアミノプリン−２’−デオ
キシリボシドおよび２’−デオキシグアノシンを製造す
ることが可能となる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:06） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:64） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:22） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:15） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:42） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:44） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:425） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:365） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:125） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:13） (Ｃ１２Ｐ 19/40 Ｃ１２Ｒ 1:265）
Claims (3)
- 【請求項１】 ２’−デオキシリボース−１−リン酸ま
たはその塩と２，６−ジアミノプリンから２，６−ジア
ミノプリン−２’−デオキシリボシドを生成する能力を
有し、アクロモバクター属、アグロバクテリウム属、ア
シネトバクター属、アルカリゲネス属、アースロバクタ
ー属、エアロモナス属、エシェリヒア属、エンテロバク
ター属、エルビニア属、キサントモナス属、クレブシエ
ラ属、クルチア属、クルイヘラ属、コリネバクテリウム
属、ザルチナ属、サルモネラ属、シトロバクター属、シ
ュードモナス属、ストレプトマイセス属、スポロザルチ
ナ属、スタフィロコッカス属、セラチア属、セルロモナ
ス属、ノカルディア属、バチルス属、ハフニア属、ビブ
リオ属、フラボバクテリウム属、プラノコッカス属、ブ
レビバクテリウム属、、プロタミノバクター属、プロテ
ウス属、ヘモフィラス属、ミクロコッカス属、ミコプラ
ナ属、ミクロバクテリウム属、リゾビウム属またはロド
コッカス属に属する微生物の培養物、該培養物より分離
した微生物菌体もしくは該微生物菌体の処理物を２’−
デオキシリボース−１−リン酸またはその塩と２，６−
ジアミノプリンに作用させ、生成される２，６−ジアミ
ノプリン−２’−デオキシリボシドを採取することを特
徴とする、２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリ
ボシドの製造法。 - 【請求項２】 無機リン酸もしくはその塩の存在下で
２’−デオキシウリジンもしくはチミジンと２，６−ジ
アミノプリンから２，６−ジアミノプリン−２’−デオ
キシリボシドを生成する能力を有し、アクロモバクター
属、アグロバクテリウム属、アシネトバクター属、アル
カリゲネス属、アースロバクター属、エアロモナス属、
エシェリヒア属、エンテロバクター属、エルビニア属、
キサントモナス属、クレブシエラ属、クルチア属、クル
イヘラ属、コリネバクテリウム属、ザルチナ属、サルモ
ネラ属、シトロバクター属、シュードモナス属、ストレ
プトマイセス属、スポロザルチナ属、スタフィロコッカ
ス属、セラチア属、セルロモナス属、ノカルディア属、
バチルス属、ハフニア属、ビブリオ属、フラボバクテリ
ウム属、プラノコッカス属、ブレビバクテリウム属、、
プロタミノバクター属、プロテウス属、ヘモフィラス
属、ミクロコッカス属、ミコプラナ属、ミクロバクテリ
ウム属、リゾビウム属またはロドコッカス属に属する微
生物の培養物、該培養物より分離した微生物菌体もしく
は該微生物菌体の処理物を無機リン酸もしくはその塩の
存在下で２’−デオキシウリジンもしくはチミジンと
２，６−ジアミノプリンに作用させ、生成される２，６
−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドを採取する
ことを特徴とする２，６−ジアミノプリン−２’−デオ
キシリボシドの製造法。 - 【請求項３】 請求項１または請求項２に記載の製造法
で２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドを
製造し、次いで、得られた２，６−ジアミノプリン−
２’−デオキシリボシドにアデノシンデアミナーゼまた
は該酵素含有物を水性媒体中で作用せしめ２’−デオキ
シグアノシンを生成蓄積させることを特徴とする２’−
デオキシグアノシンの製造法。
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|---|---|---|---|
| JP31320797A JP3799784B2 (ja) | 1997-11-14 | 1997-11-14 | ２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドおよび２’−デオキシグアノシンの製造法 |
| DE69840863T DE69840863D1 (de) | 1997-11-14 | 1998-11-13 | Verfahren zur Herstellung von 2,6-Diaminopurin-2'deoxyribosid und 2'-Deoxyguanosin |
| EP98121199A EP0916735B1 (en) | 1997-11-14 | 1998-11-13 | Process for preparing 2,6-diaminopurine-2'-deoxyriboside and 2'-deoxyguanosine |
| US09/192,286 US6197552B1 (en) | 1997-11-14 | 1998-11-16 | Process for preparing 2,6-diaminopurine-2′-deoxyriboside and 2′-deoxyguanosine |
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|---|---|---|---|
| JP31320797A JP3799784B2 (ja) | 1997-11-14 | 1997-11-14 | ２，６−ジアミノプリン−２’−デオキシリボシドおよび２’−デオキシグアノシンの製造法 |
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|---|---|
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|---|---|---|---|---|
| WO2003057895A1 (fr) * | 2001-12-28 | 2003-07-17 | Yamasa Corporation | Procede de production de 2'-desoxyguanosine |
| JP2006061039A (ja) * | 2004-08-25 | 2006-03-09 | Chisso Corp | ジピコリン酸の製造法 |
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|---|---|---|---|---|
| IT1304500B1 (it) * | 1998-12-23 | 2001-03-19 | Norpharma Spa | Ceppi batterici ricombinati per la produzione di nucleosidi naturali edi analoghi modificati. |
| CN102174618A (zh) * | 2010-12-29 | 2011-09-07 | 南通秋之友生物科技有限公司 | 用乙酰短杆菌的核苷磷酸化酶合成2’-脱氧鸟苷的方法 |
| CN109136314B (zh) * | 2018-09-20 | 2021-06-25 | 新乡拓新药业股份有限公司 | 利用密西根克雷伯氏菌合成2’-脱氧-2-氨基腺苷的方法 |
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|---|---|---|---|---|
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| DE1470360B2 (de) * | 1963-03-18 | 1976-07-15 | Takeda Chemical Industries, Ltd., Osaka (Japan) | Verfahren zur herstellung von purinnucleosiden |
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1998
- 1998-11-13 DE DE69840863T patent/DE69840863D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-13 EP EP98121199A patent/EP0916735B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-11-16 US US09/192,286 patent/US6197552B1/en not_active Expired - Lifetime
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|---|---|---|---|---|
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