JPH10512560A

JPH10512560A - 新規なファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、その製造及びそれを含有する製薬学的組成物

Info

Publication number: JPH10512560A
Application number: JP8522080A
Authority: JP
Inventors: ボードワン，ベルナール; バーンズ，クリストフアー; コメルソン，アラン; ルブラン，アラン
Original assignee: ローン−プーラン・ロレ・ソシエテ・アノニム
Priority date: 1995-01-18
Filing date: 1996-01-16
Publication date: 1998-12-02
Also published as: ZA96258B; MX9705270A; SK95997A3; NO973222D0; AU4543696A; WO1996022278A1; EP0804415A1; FI973039A0; CZ228297A3; CN1169145A; PL321380A1; FI973039A; FR2729390A1; BR9606970A; CA2211786A1; FR2729390B1; TR199700660T1; NO973222L; KR19980701469A; US5750567A

Abstract

(57)【要約】一般式（Ｉ）の新規なファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、その製造及びそれを含有する製薬学的組成物。一般式（Ｉ）において、Ｒ₁はＹ−Ｓ−Ａ₁−であり（ここでＹは水素原子、アミノ酸残基、脂肪酸残基又はアルキルもしくはアルコキシカルボニル基であり、Ａ₁は場合により＞Ｃ（Ｘ₁）（Ｙ₁）基においてアミノ、そのアルキルもしくはアルカノイル部分の炭素数が１〜６のアルキルアミノ、アルカノイルアミノ又はアルコキシカルボニルアミノ基によりα置換されていることができるＣ_1-4アルキレン基であり；Ｘ₁及びＹ₁のそれぞれは水素原子であるか、あるいはＸ₁及びＹ₁はそれらが結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝Ｏ基を形成し；Ｒ’₁は水素原子又はＣ_1-6アルキル基であり；Ｘは酸素又は硫黄原子であり；Ｒ₂は場合によりヒドロキシ、アルコキシ、メルカプト、アルキルチオ、アルキルスルフィニル又はアルキルスルホニルで置換されていることができるＣ_1-6アルキル、アルケニル又はアルキニル基であり、但しＲ₂がヒドロキシル基により置換されたアルキル基である場合、Ｒ₂及びαカルボキシ基はラクトンを形成することができ；Ｒ’₂は水素又はＣ_1-6アルキル基であり；Ｒは水素原子、場合により置換されていることができるアルキル基又は場合により置換されていることができるフェニル基である。該新規な生成物は抗癌性を有する。

Description

【発明の詳細な説明】新規なファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、その製造及びそれを含有する製薬学的組成物本発明は一般式：の新規なファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、場合によりその塩、その製造及びそれを含有する製薬学的組成物に関する。ファルネシルトランスフェラーゼの、及び結果としてＲａｓタンパク質のファルネシル化の阻害は、突然変異したＲａｓタンパク質が正常な細胞を癌細胞に変換する能力を阻害する。Ｒａｓ遺伝子のＣ−末端配列は、単位「ＣＡＡＸ」又は「Ｃｙｓ−Ａａａ₁− Ａａａ₂−ｘａａ」を含有し、ここでＡａａは脂肪族アミノ酸を示し、Ｘａａは任意のアミノ酸を示す。ＣＡＡＸ配列を有するテトラペプチドがＲａｓタンパク質のファルネシル化を阻害することができることは既知である。例えば、特定的にはペプチドＣｙｓ− Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ、Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ及びＣｙｓ−Ｖａｌ −Ｖａｌ−Ｍｅｔにより示され、１０^-6Ｍ又は１０^-7Ｍの範囲の濃度でその阻害活性を現すファルネシルトランスフェラーゼのペプチド阻害剤、Ｃｙｓ−Ａａａ₁−Ａａａ₂−ＸａａがＰＣＴ出願ＷＯ９１／１６３４０及び出願ＥＰ０，４６１，８６９に記載されている。今回、一般式（Ｉ）のペプチドが１０^-8又は１０^-9Ｍの桁の濃度で阻害活性（ＩＣ₅₀）を現すことが見いだされ、それが本発明の主題を形成している。一般式（Ｉ）において、Ｒ₁は一般式Ｙ−Ｓ−Ａ₁−の基を示し、ここでＹは水素原子又はアミノ酸残基又は脂肪酸残基又はアルキルもしくはアルコキシカルボニル基を示し、Ａ₁は場合により＞Ｃ（Ｘ₁）（Ｙ₁）基に対してα位においてアミノ、その直鎖状もしくは分枝鎖状アルキルもしくはアルカノイル部分の炭素数が１〜６のアルキルアミノ、アルカノイルアミノ又はアルコキシカルボニルアミノ基で置換されていることができる炭素数が１〜４の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキレン基を示し、Ｘ₁及びＹ₁はそれぞれ水素原子を示すか、あるいはそれらが結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝Ｏ基を形成し、Ｒ’₁は水素原子又は炭素数が１〜６の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル基を示し、Ｘは酸素又は硫黄原子を示し、Ｒ₂は場合によりヒドロキシル基、炭素数が１〜４のアルコキシ基、メルカプト基、炭素数が１〜４のアルキルチオ基、炭素数が１〜４のアルキルスルフィニル基又は炭素数が１〜４のアルキルスルホニル基で置換されていることができる炭素数が１〜６の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル、アルケニル又はアルキニル基を示し、Ｒ₂がヒドロキシル基により置換されたアルキル基を示す場合、Ｒ₂はα位におけるカルボキシル基と一緒にラクトンを形成することができると理解され、Ｒ’₂は水素原子又は炭素数が１〜６の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル基を示し、Ｒは水素原子、あるいは場合により炭素数が１〜４のアルコキシ基、炭素数が１〜４のアルキルチオ基、炭素数が１〜４のアルキルスルフィニル基、炭素数が１〜４のアルキルスルホニル基、フェニル基、フェノキシ基、フェニルチオ基、フェニルスルフィニル基、フェニルスルホニル基、炭素数が１〜４のアルキルアミノ基、又は各アルキル部分の炭素数が１〜４のジアルキルアミノ基で置換されていることができる炭素数が１〜６のアルキル基、あるいは場合によりハロゲン原子及びアルキル、アルキルオキシ、アルキルチオ又はアルカノイル基から選ばれる１つ又は複数の原子もしくは基により置換されていることができるフェニル基を示す。さらに特定的には、Ｒ₁は式Ｙ−Ｓ−Ａ₁−の基を示し、ここでＹは水素原子又はリシン残基又は炭素数が最高２０の脂肪酸残基を示し、Ａ₁は場合によりアミノ基で置換されていることができるエチレン又はプロピレン基を示し、Ｘ₁及びＹ₁はそれぞれ水素原子を示すか、あるいはそれらが結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝Ｏ基を形成し、Ｒ’₁は水素原子又はメチル基を示し、Ｘは酸素原子を示し、Ｒ₂は場合によりヒドロキシル、メトキシ、メルカプト、メチルチオ、メチルスルフィニル又はメチルスルホニル基で置換されていることができる炭素数が１〜４のアルキル基を示し、Ｒ’₂は水素原子又はメチル基を示し、Ｒは水素原子、あるいは場合によりアルコキシ基で置換されていることができる炭素数が１〜４のアルキル基、あるいはフェニル基を示す。さらにもっと特定的には、Ｒ₁は式Ｙ−Ｓ−Ａ₁−の基を示し、ここでＹは水素原子を示し、Ａ₁は場合によりアミノ基で置換されていることができるエチレン又はプロピレン基を示し、Ｘ₁及びＹ₁はそれぞれ水素原子を示すか、あるいはそれらが結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝Ｏ基を形成し、Ｒ’₁は水素原子を示し、Ｘは酸素原子を示し、Ｒ₂は場合によりヒドロキシル、メトキシ、メルカプト又はメチルチオで置換されていることができるメチル、エチル、プロピル又はブチル基を示し、Ｒ’₂は水素原子を示し、Ｒは水素原子又は炭素数が１〜４のアルキル基を示す。Ｒ₁が２−メルカプトエチル又は１−アミノ−２−メルカプトエチル基を示し、Ｘ₁及びＹ₁がそれぞれ水素原子を示すか、あるいはそれらが結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝Ｏ基を形成し、Ｒ’₁が水素原子を示し、Ｘが酸素原子を示し、Ｒ₂がｎ−ブチル又は２−（メチルチオ）エチル基を示し、Ｒ’₂が水素原子を示し、Ｒが水素原子又はメチル基を示す一般式（Ｉ）の生成物が特別に有利である。本発明は一般式（Ｉ）の生成物の立体異性体にも関する。Ｒ₁Ｃ（Ｘ₁）（Ｙ₁ ）（ＮＲ’₁）及びＲ’₂ＣＨ（ＮＲ’₂）ＣＯ−ＯＨにより示されるアミノ酸残基は天然のアミノ酸の立体配置を有するのが好ましい。本発明は一般式（Ｉ）の生成物の無機又は有機塩にも関する。本発明の新規な生成物は既知の方法の、さらに特定的にはペプチドの化学において鎖の集成のために用いられる方法から誘導される既知の方法の適用により製造することができる。一般に、Ｘ₁及びＹ₁がそれらが結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝Ｏ基を形成し、Ｘが酸素原子を示す一般式（Ｉ）の生成物は、５−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフチル−１−カルボン酸から、それと一般式：［式中、Ｒ₂及びＲ’₂は上記の通りに定義され、Ｒ’は場合によりフェニル基により置換されていることができる炭素数が１〜４のアルキル基、好ましくはｔｅｒｔ−ブチル基を示す］のアミノ酸を縮合させることにより得られ、その反応はヒドロキシベンゾトリアゾール及びジシクロヘキシルカルボジイミドなどのカップリング剤、ならびにトリエチルアミンなどの塩基の存在下に、ジメチルホルムアミドなどの有機溶媒中で行い、一般式：［式中、Ｘは酸素原子を示し、Ｒ₂、Ｒ’₂及びＲ’は上記の通りに定義される］の生成物を得、それを好ましくは塩化錫を用いて一般式：［式中、Ｘは酸素原子を示し、Ｒ₂、Ｒ’₂及びＲ’は上記の通りに定義される］の生成物に還元し、それと式：［式中、Ｒ₁は上記の通りに定義され、Ｘ₁及びＹ₁はそれらが結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝Ｏ基を形成し、Ｒ₁が有するアミノ及びメルカプト官能基は場合により保護基により、例えばメルカプト官能基の場合はトリチル基又はアミノ官能基の場合はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基により保護されていることができると理解される］の生成物を縮合させ、この反応を好ましくはアルキルハロホルメート（イソブチルクロロホルメート）及び有機塩基（Ｎ−メチルモルホリン）の存在下に、不活性有機溶媒（テトラヒドロフラン）中で行い、一般式：［式中、記号Ｘ、Ｘ₁、Ｙ₁、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ’₂及びＲ’は上記の通りに定義される］の生成物を得、その保護基を、それがトリチル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル又はｔｅｒｔ−ブチル基を示す場合はエタンジチオールの存在下で三フッ化酢酸を用いて水素原子により置換し、Ｘ₁及びＹ₁がそれらが結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝Ｏ基を形成する一般式（Ｉ）の生成物を得る。一般に、記号Ｘ₁及びＹ₁がそれぞれ水素原子を示す一般式（Ｉ）の生成物は、一般式：Ｒ₁−ＣＨＯ（ＶＩＩ）［式中、Ｒ1は上記の通りに定義され、Ｒ₁が有するアミノ及びメルカプト官能基は場合により適した保護基、例えばメルカプト官能基の場合はトリチル基又はアミノ官能基の場合はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基により保護されることができると理解される］のアルデヒドの、シアン化ホウ水素化ナトリウム、ホウ水素化ナトリウム、トリアセトキシホウ水素化ナトリウム又は触媒の存在下における水素などの還元剤の存在下における一般式（Ｖ）の生成物との反応により得ることができる。一般に反応は場合によりエーテル、例えばテトラヒドロフランなどの他の有機溶媒と組み合わされたアルコール、例えばメタノールなどの有機溶媒中で行われる。無水媒体中で反応を行うのが特に有利である。アミンとのアルデヒドの縮合が行われたら、通常の方法の適用により保護基を水素で置換する。かくしてＢｏｃ又はトリチル又はｔｅｒｔ−ブチル保護基をエタンジチオールの存在下で三フッ化酢酸を用いて水素で置換することができる。Ｘが硫黄原子を示す一般式（Ｉ）の生成物は一般に、Ｘが酸素原子を示す一般式（ＩＩＩ）の生成物から、チオン化及び次いで状況に従って還元、縮合又は還元的アミノ化、ならびにＸが酸素原子を示す一般式（Ｉ）の生成物の製造に関して上記で記載した脱保護段階を行うことにより得ることができる。一般式（Ｉ）において、Ｒ₂の記号がα位におけるカルボキシル官能基と一緒にラクトンを形成する場合、対応する生成物を塩基性媒体中で処理すると、Ｒ₂ がヒドロキシル基で置換されたアルキル基を示す一般式（Ｉ）の生成物を生ずる。一般にラクトンの開環は、ｐＨが７より高くなるとすぐに起こる。無機塩基（水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム）の存在下に、水性／アルコール性媒体、例えば水／メタノール混合物中で反応を行うのが特に有利である。Ｒが上記の通り、場合により置換されていることができるアルキル基又は場合により置換されていることができるフェニル基を示す一般式（Ｉ）の生成物は、Ｒが水素原子を示す一般式（Ｉ）の生成物を、分子の残りに影響を与えない通常のエステル化条件下でエステル化することにより得ることができる。Ｒが水素を示す一般式（Ｉ）の生成物も、一般式（ＶＩ）の生成物をけん化し、続いてＲ₁が有する保護基を上記の条件下で置換することにより得ることができる。７−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフチル−１−カルボン酸との混合物として得られる得る５−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフチル− １−カルボン酸は、Ｔ．Ｎａｋａｙａｍａｅｔａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３２，３９６８（１９８４）により記載されている方法に従って製造することができる。一般式（Ｉ）の生成物は、クロマトグラフィーなどの通常の方法に従って精製することができる。以下の実施例は本発明の生成物の製造を例示している。実施例１５−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフチル−１（Ｒ，Ｓ）−カルボン酸をＮａｋａｙａｍａ，Ｔ．ｅｔａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３２，３９６８（１９８４）の方法に従って製造する。１．２４ｇの（Ｌ）−メチオニンメチルエステル塩酸塩、０．８４ｇの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、０．９ｃｍ³のトリエチルアミン及び１．２８ｇのジシクロヘキシルカルボジイミドを２５ｃｍ³のクロロホルム及び７．５ｃｍ³ のジメチルホルムアミド中の１．２３ｇの５−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン−１（Ｒ，Ｓ） −カルボン酸の溶液に加える。反応混合物を２０℃近辺の温度で２日間撹拌し、焼結ガラス上で濾過し、次いで５０ｃｍ³のクロロホルムで洗浄する。有機溶液を５０ｃｍ³の１０％（ｗ／ｖ）炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、次いで５０ｃｍ³の１０％クエン酸水溶液で１回、蒸留水で１回、及び最後に飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、次いで減圧下で濃縮乾固する。３．６８ｇのＮ−（５−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフチル−１（Ｒ，Ｓ）−カルボニル）−（Ｌ）−メチオニンのメチルエステルが油の形態で得られ、その特性は以下の通りである： −プロトン核磁気共鳴スペクトル（３００ＭＨｚ；ｄ６−（ＣＤ₃）₂ＳＯ；ｐｐｍにおけるδ；Ｈｚにおけるカップリング定数Ｊ）：１．５５−２．１０（ｍｔ，６Ｈ，２位におけるＣＨ₂ＣＨ₂及び３位におけるＣＨ₂），２．０７（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ₃），２．５６（ｍｔ，１Ｈ，１位におけるＣＨ），４．４５（ｍｔ，１Ｈ，ＣＨＣＯＯ），７．３５−７．５５及び７．７７（２ｍｔｓ，それぞれ２Ｈ及び１Ｈ，６位におけるＨ及び７位におけるＨ及び８位におけるＨ），８．６３及び８．６９（２ｄ，Ｊ＝８．５，１Ｈ，ＣＯＮＨ）。６．３２ｇの塩化錫（ＩＩ）二水和物を１００ｃｍ³のエタノール中の３．６８ｇのＮ−（５−ニトロ−１，２，３，４−テトラヒドロナフチル−１（Ｒ，Ｓ）−カルボニル）−（Ｌ）−メチオニンのメチルエステルの溶液に加える。反応混合物を７０℃近辺の温度で３０分間撹拌し、次いで２０℃近辺の温度に冷却する。１００ｃｍ³の酢酸エチルで希釈した後、反応混合物を氷上に注ぎ、５％炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてｐＨ＝７〜８とする。得られる混合物をセライトで覆われた焼結ガラス上で濾過する。有機相を沈降により分離し、水相を１５０ｃｍ³の酢酸エチルで２回抽出する。有機相を合わせ、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮乾固する。かくして２．４９ｇのＮ−（５−アミノ−１，２，３，４ −テトラヒドロナフチル−１（Ｒ，Ｓ）−カルボニル）−（Ｌ）−メチオニンのメチルエステルが油の形態で得られ、その特性は以下の通りである： −プロトン核磁気共鳴スペクトル（３００ＭＨｚ；ｄ６−（ＣＤ₃）₂ＳＯ；ｐｐｍにおけるδ；Ｈｚにおけるカップリング定数Ｊ）：１．５０−２．１０（ｍｔ，６Ｈ，２位におけるＣＨ₂ＣＨ₂及び３位におけるＣＨ₂），２．１０（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ₃），２．３９及び２．５３（２ｍｔｓ，それぞれ２Ｈ，ＣＨ₂Ｓ及び４位のＣＨ₂），３．６６（ｍｔ，１Ｈ，１位におけるＣＨ），３．６９（ｓ，３Ｈ，ＣＨＣＯＯ），４．７５（ブロードｓ，２Ｈ，ＮＨ₂），６．３０−６．６０及び６．８２（２ｍｔｓ，それぞれ２Ｈ及び１Ｈ，６位におけるＨ及び７位におけるＨ及び８位におけるＨ），８．４８（ｄ，Ｊ＝９，１Ｈ，ＣＯＮＨ）。３．７３ｇのＳ−トリフェニルメチル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）システイナール、０．４８ｃｍ³の濃酢酸、モレキュラーシーブ（３Å）及び次いで０．５２ｇのシアン化ホウ水素化ナトリウムを、６０ｃｍ³のメタノール中の１．２４ｇのＮ−（５−アミノ−１，２，３，４−テトラヒドロナフチル− １（Ｒ，Ｓ）−カルボニル）−（Ｌ）−メチオニンのメチルエステルの溶液に加える。反応混合物を２０℃近辺の温度で２日間撹拌し、次いでセライトで覆われた焼結ガラス上で濾過する。焼結ガラスをメタノールで洗浄する。濾液を減圧下で濃縮乾固する。残留物を１５０ｃｍ³の酢酸エチルに溶解し、１００ｃｍ³の１０％（ｗ／ｖ）炭酸水素ナトリウム水溶液、１００ｃｍ³の１０％（ｗ／ｖ）クエン酸水溶液、１００ｃｍ³の蒸留水、さらに１００ｃｍ³の１０％（ｗ／ｖ）炭酸水素ナトリウム水溶液及び最後に１００ｃｍ³の飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮乾固する。５．６２ｇのＮ−［５−（２（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ− ３−（トリフェニルメチルメルカプト）−プロピルアミノ）−１，２，３，４− テトラヒドロナフチル−１（Ｒ，Ｓ）−カルボニル］−（Ｌ）−メチオニンのメチルエステルがベージュ色の泡の形態で得られ、その特性は以下の通りである： −プロトン核磁気共鳴スペクトル（３００ＭＨｚ；数滴のｄ４−ＣＤ₃ＣＯＯＤを含むｄ６−（ＣＤ₃）₂ＳＯ；ｐｐｍにおけるδ；Ｔ＝３９３Ｋ；Ｈｚにおけるカップリング定数Ｊ）：１．３８（ｓ，９Ｈ，Ｃ（ＣＨ₃）₃），１．５０−２．０５（ｍｔ，３Ｈ，２位におけるＣＨ₂ＣＨ₂及び３位におけるＣＨ₂），２．０６（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ₃），２．０５−２．４５及び２．５３（２ｍｔｓ，それぞれ４Ｈ及び２Ｈ，２ＣＨ₂Ｓ及び４位におけるＣＨ₂），２．８５−３．０５（ｍｔ，２Ｈ，ＮＨ₂），３．６３（ｍｔ，１Ｈ，１位におけるＣＨ），３．６３及び３．６７（２ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＣＨ₃），３．７１（ｍｔ，１Ｈ，ＣＨＮ），４．４３（ｍｔ，１Ｈ，ＣＨＣＯＯ），６．３０−６．５６及び６．９０（２ｍｔｓ，それぞれ２Ｈ及び１Ｈ，６位におけるＨ及び７位におけるＨ及び８位におけるＨ），７．１５−７．３５（ｍｔ，１５Ｈ，芳香族プロトン），８．３６及び８．３９（２個の分解の悪いｄ，Ｊ＝１０，１Ｈ，ＣＯＮＨ）。１０ｃｍのエタンジチオール中の５．４５ｇのＮ−［５−（２（Ｒ） −ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−（トリフェニルメチルメルカプト）−プロピルアミノ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフチル−１（Ｒ，Ｓ） −カルボニル］−（Ｌ）−メチオニンのメチルエステルの混合物に１１０ｃｍ³ の三フッ化酢酸を２０℃近辺の温度で加える。反応混合物を２０℃近辺の温度で２時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮する。残留物を２５ｃｍ³のエテルエーテルを用いて３回摩砕し、次いで減圧下で乾燥する。残留物を高性能液体クロマトグラフィー（Ｃ₁₈相）により精製し、０．１％の三フッ化酢酸を含有するアセトニトリル／水混合物を用いて溶離を行う。０．４ｇのＮ−［５−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプト−プロピルアミノ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフチル−１（Ｒ，Ｓ）−カルボニル］−（Ｌ）−メチオニンのメチルエステルの三フッ化酢酸塩が粉末の形態で得られ、その特性は以下の通りである： −プロトン核磁気共鳴スペクトル（３００ＭＨｚ；数滴のｄ４−ＣＤ₃ＣＯＯＤを含むｄ６−（ＣＤ₃）₂ＳＯ；Ｔ＝３９３Ｋ；ｐｐｍにおけるδ；Ｈｚにおけるカップリング定数Ｊ）：１．５５−２．１０（ｍｔ，６Ｈ，２位におけるＣＨ₂ ＣＨ₂及び３位におけるＣＨ₂），２．０４（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ₃），２．３０− ２．６５及び２．８０（２ｍｔｓ，それぞれ４Ｈ及び２Ｈ，２ＣＨ₂Ｓ及び４位におけるＣＨ₂），３．３０及び３．３５−３．５０（それぞれｄｄ，Ｊ＝１４及び８、ならびにｍｔ，それぞれ１Ｈ，ＮＣＨ₂），３．４３（ｍｔ，１Ｈ，ＣＨＮ），３．６３（ｍｔ，１Ｈ，１位におけるＣＨ），３．６３（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＣＨ₃），４．４２（ｍｔ，１Ｈ，ＣＨＣＯＯ），６．４０−６．６０及び６．９５（２ｍｔｓ，それぞれ２Ｈ及び１Ｈ、６位におけるＨ及び７位におけるＨ及び８位におけるＨ），８．３５及び８．３８（２個の分解の悪いｄ，Ｊ＝８，１Ｈ，ＣＯＮＨ）。 −元素分析：Ｃ₂₀Ｈ₃₁Ｎ₃Ｏ₃Ｓ₂・１．２５ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ計算値％：Ｃ＝４７．７，Ｈ＝５．７０，Ｎ＝７．４，Ｓ＝１１．９測定値４７．８，５．３７，７．１，１０．６実施例２０．１７ｇの水酸化リチウム一水和物（ＬｉＯＨ・Ｈ₂Ｏ）を、８．４ｃｍ³の蒸留水及び３０ｃｍ³のテトラヒドロフラン中の１．９８ｇのＮ−［５−（２（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−（トリフェニルメチルメルカプト）プロピルアミノ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフチル−１（Ｒ，Ｓ）−カルボニル］−（Ｌ）−メチオニンのメチルエステルの溶液に加える。溶液を２０℃近辺の温度で２０時間撹拌し、次いでそれを減圧下で濃縮する。残留物を蒸留水に溶解する。１０％（ｗ／ｖ）クエン酸水溶液を加えることによりｐＨを３とする。水相を１００ｃｍ³の酢酸エチルで３回抽出する。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮乾固する。１．９２ｇのＮ−［５−（２（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−（トリフェニルメチルメルカプト）プロピルアミノ） −１，２，３，４−テトラヒドロナフチル−１（Ｒ，Ｓ）−カルボニル］−（Ｌ）−メチオニンが泡の形態で得られる。２．５ｃｍ³のトリエチルシラン中の０．５ｇのＮ−［５−（２（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−（トリフェニルメチルメルカプト）プロピルアミノ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフチル−１（Ｒ，Ｓ）−カルボニル］−（Ｌ）−メチオニンの混合物に８ｃｍ³ の三フッ化酢酸を２０℃近辺の温度で加える。反応混合物を２０℃近辺の温度で２時間撹拌し、それを次いで減圧下で濃縮する。残留物を２５ｃｍ³のエチルエーテルを用いて３回摩砕し、次いで減圧下で乾燥する。残留物を高性能液体クロマトグラフィー（Ｃ₁₈相）により精製し、０．１％の三フッ化酢酸を含有するアセトニトリル／水混合物を用いて溶離を行う。０．０９４ｇのＮ−［５−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルアミノ）−１，２，３，４−テトラヒドロナフチル−１（Ｒ，Ｓ）−カルボニル］−（Ｌ）−メチオニンの三フッ化酢酸塩が粉末の形態で得られ、その特性は以下の通りである： −プロトン核磁気共鳴スペクトル（３００ＭＨｚ；ｄ６−（ＣＤ₃）₂ＳＯ；ｐｐｍにおけるδ；Ｈｚにおけるカップリング定数Ｊ）：１．５５−２．１０（ｍｔ，６Ｈ，２位におけるＣＨ₂ＣＨ₂，３位におけるＣＨ₂），２．０６（ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ₃），２．３０−２．６５及び２．７５−２．３０（２ｍｔｓ，それぞれ４Ｈ及び２Ｈ，２ＣＨ₂Ｓ及び４位におけるＣＨ₂），３．３０及び３．３５− ３．５０（それぞれｄｄ，Ｊ＝１４及び８、ならびにｍｔ，それぞれ１Ｈ，ＮＣＨ₂），３．４３（ｍｔ，１Ｈ，ＣＨＮ），３．６６（ｍｔ，１Ｈ，１位におけるＣＨ），４．３７（ｍｔ，１Ｈ，ＣＨＣＯＯ），６．４０−６．６０及び６．９５（２ｍｔｓ，それぞれ２Ｈ及び１Ｈ，６位におけるＨ及び７位におけるＨ及び８位におけるＨ），７．９５（ブロードｓ，３Ｈ，ＮＨ₃ ⁺），８．３３及び８．３５（２ｄ，Ｊ＝９，１Ｈ，ＣＯＮＨ）。 −元素分析：Ｃ₁₉Ｈ₂₉Ｎ₃Ｏ₃Ｓ₂・１．３３ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ計算値％：Ｃ＝４６．２，Ｈ＝５．４２，Ｎ＝７．４６，Ｓ＝１１．３８，Ｆ＝１３．４６測定値：Ｃ＝４５．８，Ｈ＝５．５，Ｎ＝７．４７，Ｓ＝１１．２５，Ｆ＝１３．２ファルネシルトランスフェラーゼに関する、及びＲａｓタンパク質のファルネシル化に関する阻害活性を以下の試験で示すことができる：［³Ｈ］ファルネシルピロホスフェート［［³Ｈ］ＦＰＰ）からｐ２１Ｈ−Ｒａｓタンパク質に転移された［³Ｈ］ファルネシルの量によりファルネシルトランスフェラーゼ活性を決定する。標準反応混合物は６０μｌの最終的体積に対して５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ₂、５ｍＭのジチオトレイトール、０．２％のオクチルβ−Ｄ−グルコピラノシド、２００ピコモルのｐ２１Ｈ−ｒａｓ、４．５ピコモルの［³Ｈ］ＦＰＰ（活性６１０００ｄｐｍ／ピコモル）を含む。ＴＨＰ１細胞培養物から精製された約５ｎｇのヒトファルネシルトランスフェラーゼを加えることにより反応を開始させる。プレート当たりに９６個の１−ｃｍ³のウェルを含有する微量滴定プレート（ＴｉｔｅｒＰｌａｔｅ^R、Ｂｅｃｋｍａｎ）において３７℃で２０分間インキュベートした後、０℃においてメタノール中の０．１％ＳＤＳを０．４ｃｍ³加えることにより反応を停止させる。次いで混合物をメタノール中の３０％三塩化酢酸（ＴＣＡ）の０．４ｃｍ³で処理する。プレートを１時間、氷中に放置する。沈澱する内容物を次いで濾過装置（ＣｏｍｂｉＣｅｌｌＨａｒｖｅｓｔｅｒ^R，Ｓｋａｔｒｏｎ）を有するＦｉｌｔｅｒｍａｔ^R，Ｐｈａｒｍａｃｉａ）ガラス繊維膜上に保持し、蒸留水中の６％の三塩化酢酸で濯ぐ。膜をマイクロ波の炉において乾燥し、次いで熱風下におけるＭｅｌｔｉｌｅｘ^R（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の溶融によりシンチレーション媒体を含浸させ、最後にβ−Ｐｌａｔｅｃｏｕｎｔｅｒ^R（ＬＫＢ）においてｃｐｍで計数する。各試験を３回繰り返す。活性の単位を２０分間にｐ２１Ｈ−Ｒａｓに転移された１ピコモルの［³Ｈ］ＦＰＰとして定義する。ブランクを差し引いた後に、阻害剤を含む、及び含まない試験を比較することによりパーセンテージ阻害値を得、ＩＣ₅₀値をＥｎｚｆｉｔｔｅｒ^R又はＧｒａｆｉｔソフトウェアを用いて９種の濃度で得られる阻害に基づいて測定する。細胞に対する活性を以下の方法で決定することができる：細胞系はＫ．Ｓｅｕｗｅｎｅｔａｌ．，ＥＭＢＯＪ．，７（１）１６１ −１６８（１９８８）に従うＴＨＡＣ系（活性化Ｈａ−Ｒａｓが転移されたＣＣＬ３９細胞）である。細胞をＤＭＥＭ培地、５％ウシ胎児血清及び１％Ｇ４１８を含有する６ｃｍの直径のペトリ皿において培養する。２４時間培養した後、培地を変え（血清を含む、又は含まない）、研究されるべき生成物をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の溶液として、ＤＴＴの存在下又は不在下で加える（ＤＭＦにおいて０．５％及びＤＴＴにおいて０．１ｍＭの最終的濃度）。３７℃で２４時間培養した後、１ｃｍ³のライシス緩衝液（２０ｍＭＴｒｉｓ、ＨＣｌ、１％ＴｒｉｔｏｎＸ１１４、５ｍＭＭｇＣｌ₂ 、７ｍＭＤＴＴ、１５０ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ＝７．４）中で細胞をライシスする。ライセートを４０００回転／分において１０分間遠心することにより透明化する。ＴｒｉｔｏｎＸ１１４で抽出すると、ファルネシル化Ｒａｓタンパク質を非−ファルネシル化Ｒａｓタンパク質から分離することができる（Ｃ．Ｂｏｒｄｉｅｒ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５６（４），１６０４−１６０７（１９８１）］。より疎水性であるファルネシル化Ｒａｓタンパク質は界面活性剤相に存在するが、非−ファルネシル化Ｒａｓタンパク質は水相に存在する。電気泳動のための変性緩衝液中で９５℃に加熱することにより試料を変性させ、１４％ポリアクリルアミドゲル上に付着させる。色素がゲルの底に達したら、ゲルのタンパク質をＰＶＤＦ膜上に移す。Ｒａｓタンパク質をウェスターンブロット法により視覚化する：膜を抗−Ｒａｓ特異的モノクローナル抗体（ｐａｎ−ＲａｓＡｂ３，ＯｎｃｏｇｅｎｅＳｃｉｅｎｃｅ）と共にインキュベートし、次いで¹²⁵Ｉで標識されたタンパク質Ａと共にインキュベートする。オートラジオグラフィーの後、バンドを同定し、切り出し、γカウンターにおいて計数する。ファルネシル化Ｒａｓ及び非−ファルネシル化Ｒａｓに対応するバンドの放射性が、Ｒａｓタンパク質のファルネシル化の阻害のパーセンテージの決定を可能にする。得られた結果を表Ｉに集める。一般式（Ｉ）の新規な生成物は無毒性の製薬学的に許容され得る塩の形態であることができる。これらの無毒性の塩は一般式（Ｉ）の生成物のＲ₁及びＲの記号の性質に依存して、無機酸（塩酸、硫酸、臭化水素酸、リン酸及び硝酸）との、又は有機酸（酢酸、プロピオン酸、コハク酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、フマル酸、メタンスルホン酸、三フッ化酢酸又はシュウ酸）との、あるいは無機塩基（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化カルシウム）又は有機塩基（第３アミン類、例えばトリエチルアミン、ピペリジン、ベンジルアミン）との塩を含む。本発明は、不活性又は生理学的に活性であることができる１種又はそれ以上の製薬学的に許容され得る希釈剤又は添加剤と組み合わせて少なくとも１種の一般式（Ｉ）の生成物を含有する製薬学的組成物にも関する。これらの組成物は経口的、非経口的又は直腸内に投与されることができる。経口的投与のための組成物は錠剤、丸薬、散剤又は粒剤を含む。これらの組成物の場合、本発明の活性生成物が１種又はそれ以上の不活性希釈剤、例えばスクロース、ラクトース又は澱粉と混合される。これらの組成物は希釈剤以外の物質、例えばステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤を含むことができる。経口的投与のための液体組成物として、水又は液体パラフィンなどの不活性希釈剤を含有する水剤、懸濁剤、シロップ、エリキサー及び製薬学的に許容され得る乳剤を用いることができる。これらの組成物は希釈剤以外の物質、例えば湿潤剤、甘味料又は風味料を含むこともできる。非経口的投与のための本発明の組成物は無菌の溶液、水性又は非−水性懸濁液又は乳液であることができる。溶媒又はビヒクルとしてプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、特にオリーブ油、又は注射用有機エステル類、例えばオレイン酸エチルを用いることができる。これらの組成物は添加剤、特に湿潤剤、乳化剤及び分散剤を含有することもできる。滅菌は数通りの方法で、例えば細菌学的フィルターを用いて、組成物に滅菌剤を挿入することにより、又は加熱により行うことができる。それを無菌の固体組成物の形態で調製し、使用時に無菌の水又は他のいずれかの無菌の注射用媒体に溶解することもできる。直腸内投与のための組成物は座薬であり、それは活性生成物の他にココアバターなどの賦形剤を含有することができる。本発明の組成物はヒトの治療において、種々の起源の癌の治療に特に有用である。ヒトの治療の場合投薬量は、求められている効果、治療の期間及び処置されるべき患者に特異的な因子に依存する。一般にヒトの場合、投薬量は腹孔内経路を介して１日当たり０．１〜２０ｍｇ／ｋｇである。本発明の組成物を以下の実施例において例示する。実施例実施例１で得られた２００ｍｇの生成物を１００ｃｍ³の生理学的血清に溶解する。得られる溶液を１０ｃｍ³のバイアル中に無菌的に分ける。バイアルを１回の注射又は潅水（ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）として投与する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者コメルソン，アランフランス・エフ−94400ビトリ−シユール −セーヌ・リユシヤルル−フロケ１ビス (72)発明者ルブラン，アランフランス・エフ−91270ビニユー・リユアンリ−クラロン６

Claims

【特許請求の範囲】１．一般式：［式中、Ｒ₁は一般式Ｙ−Ｓ−Ａ₁−の基を示し、ここでＹは水素原子又はアミノ酸残基又は脂肪酸残基又はアルキルもしくはアルコキシカルボニル基を示し、Ａ₁は場合により＞Ｃ（Ｘ₁）（Ｙ₁）基に対してα位においてアミノ、その直鎖状もしくは分枝鎖状アルキルもしくはアルカノイル部分の炭素数が１〜６のアルキルアミノ、アルカノイルアミノ又はアルコキシカルボニルアミノ基で置換されていることができる炭素数が１〜４の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキレン基を示し、Ｘ₁及びＹ₁はそれぞれ水素原子を示すか、あるいはそれらが結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝Ｏ基を形成し、Ｒ’₁は水素原子又は炭素数が１〜６の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル基を示し、Ｘは酸素又は硫黄原子を示し、Ｒ₂は場合によりヒドロキシル基、炭素数が１〜４のアルコキシ基、メルカプト基、炭素数が１〜４のアルキルチオ基、炭素数が１〜４のアルキルスルフィニル基又は炭素数が１〜４のアルキルスルホニル基で置換されていることができる炭素数が１〜６の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル、アルケニル又はアルキニル基を示し、Ｒ₂がヒドロキシル基により置換されたアルキル基を示す場合、Ｒ₂はα位におけるカルボキシル基と一緒にラクトンを形成することができると理解され、Ｒ’₂は水素原子又は炭素数が１〜６の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル基を示し、Ｒは水素原子、あるいは場合により炭素数が１〜４のアルコキシ基、炭素数が１〜４のアルキルチオ基、炭素数が１〜４のアルキルスルフィニル基、炭素数が１〜４のアルキルスルホニル基、フェニル基、フェノキシ基、フェニルチオ基、フェニルスルフィニル基、フェニルスルホニル基、炭素数が１〜４のアルキルアミノ基、又は各アルキル部分の炭素数が１〜４のジアルキルアミノ基で置換されていることができる炭素数が１〜６のアルキル基、あるいは場合によりハロゲン原子及びアルキル、アルキルオキシ、アルキルチオ又はアルカノイル基から選ばれる１つ又は複数の原子もしくは基により置換されていることができるフェニル基を示す］の新規な生成物。２．Ｒ₁が式Ｙ−Ｓ−Ａ₁−の基を示し、ここでＹは水素原子又はリシン残基又は炭素数が最高２０の脂肪酸残基を示し、Ａ₁は場合によりアミノ基で置換されていることができるエチレン又はプロピレン基を示し、Ｘ₁及びＹ₁がそれぞれ水素原子を示すか、あるいはそれらが結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝Ｏ基を形成し、Ｒ’₁が水素原子又はメチル基を示し、Ｘが酸素原子を示し、Ｒ₂が場合によりヒドロキシル、メトキシ、メルカプト、メチルチオ、メチルスルフィニル又はメチルスルホニル基で置換されていることができる炭素数が１〜４のアルキル基を示し、Ｒ’₂が水素原子又はメチル基を示し、Ｒが水素原子、あるいは場合によりアルコキシ基で置換されていることができる炭素数が１〜４のアルキル基、あるいはフェニル基を示す請求の範囲第１項に記載の新規な生成物。３．Ｒ₁が式Ｙ−Ｓ−Ａ₁−の基を示し、ここでＹは水素原子を示し、Ａ₁は場合によりアミノ基で置換されていることができるエチレン又はプロピレン基を示し、Ｘ₁及びＹ₁がそれぞれ水素原子を示すか、あるいはそれらが結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝Ｏ基を形成し、Ｒ’₁が水素原子を示し、Ｘが酸素原子を示し、Ｒ₂が場合によりヒドロキシル、メトキシ、メルカプト又はメチルチオ基で置換されていることができるメチル、エチル、プロピル又はブチル基を示し、Ｒ’₂が水素原子を示し、Ｒが水素原子又は炭素数が１〜４のアルキル基を示す請求の範囲第１項に記載の新規な生成物。４．Ｒ₁が２−メルカプトエチル又は１−アミノ−２−メルカプトエチル基を示し、Ｘ₁及びＹ₁がそれぞれ水素原子を示すか、あるいはそれらが結合している炭素原子と一緒になって＞Ｃ＝Ｏ基を形成し、Ｒ’₁が水素原子を示し、Ｘが酸素原子を示し、Ｒ₂がｎ−ブチル又は２−（メチルチオ）エチル基を示し、Ｒ’₂が水素原子を示し、Ｒが水素原子又はメチル基を示す請求の範囲第１項に記載の新規な生成物。５．１種又は複数種の不活性又は生理学的に活性な製薬学的に許容され得る希釈剤又は添加剤と組み合わせて請求の範囲第１〜４項の１つに記載の十分な量の生成物を含有することを特徴とする製薬学的組成物。