JPH10511701A - 生体組織のｎｍｒイメージングにおける標的コントラスト剤としての磁気標識化学誘引剤 - Google Patents

生体組織のｎｍｒイメージングにおける標的コントラスト剤としての磁気標識化学誘引剤

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JPH10511701A JP9515662A JP51566297A JPH10511701A JP H10511701 A JPH10511701 A JP H10511701A JP 9515662 A JP9515662 A JP 9515662A JP 51566297 A JP51566297 A JP 51566297A JP H10511701 A JPH10511701 A JP H10511701A
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クマール，クリシャン
イートン，スティーブン
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ブラッコ インターナショナル ベスローテン フエンノートシャップ
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、たとえば走化性ペプチドなどの、ヒトおよび動物患者の疾患または不調組織部位または器官の検出および検査用磁気標識化学誘引剤に関する。走化性ペプチドは、一般式：Ｎ(Ｘ)−Ｙ−Ｌeu−Ｐhe-Ｚ−Ａ−Ｗ［式中、Ｘは水素またはホルミル、アセチルまたはｔ−Ｂｏｃなどの保護基；Ｙはノルロイシン（Ｎle）またはメチオニン（Ｍet）；Ｚは化学結合、(Ｎ(γ))Ｌys、Ｉle、Ａsp、Ｎle−Ｔyr−Ｌysまたは(Ｇly)ｎ（ｎは１〜４）などのアミノ酸またはオリゴペプチド；Ａはリンカー；およびＷは適当に誘導された常磁性大員環キレート化合物または磁性粒子である］で示される。また本発明は、標識化学誘引剤を含む生理学的に許容しうる投与可能な組成物または製剤、標識白血球、該化学誘引剤および製剤の製造方法、ならびに該製剤を用いた生物における感染または炎症部位もしくはその他の外傷の検出、定位および診断方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 生体組織のＮＭＲイメージングにおける 標的コントラスト剤としての磁気標識化学誘引剤 発明の属する技術分野 本発明は、たとえば走化性ペプチドなどの、ヒトおよび動物患者の疾患または 不調組織部位または器官の検出および検査用磁気標識化学誘引剤に関する。“不 調部位”とは、感染、炎症部位またはその他の外傷部位を意味する。また本発明 は、標識化学誘引剤を含む生理学的に許容しうる投与可能な組成物または製剤、 標識白血球、該化学誘引剤および製剤の製造方法、ならびに該製剤を用いた生物 における感染または炎症部位もしくはその他の外傷の検出、定位および診断方法 に関する。 発明の背景 患者生物における特定の部位または受容体を標的とする生体分子が診断上有用 な情報を提供するシグナル発生手段となるリガンドにカップリングしている複合 体の使用は、近年、広範に知られるようになった。該リガンドは、適当な医療装 置により検出可能かつ記録データに加工可能なシグナルを提供しうる要素を含ん でいる。その後、このようなデータは、医療的専門家により、診断に適した情報 へと表示および解釈しうるようになる。有用なシグナル発生手段には、たとえば 放射性エミッター（放射性トレーサー）、ヨウ化化合物などの注射可能なＸ線乳 白剤および磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）における磁気コントラスト強化剤が 包含される。 ＷＯ−Ａ−９０／１４８８１には、イソシアナト−、イソチオシアナト−、ブ ロモアセトアミド−、ジアゾ−、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド−エステル類お よび分子間または分子内無水物などの架橋官能基を用いることによる、タンパク 質を自動追尾するためのポリアミノカルボキシルキレートのアッタチメントが開 示されている。 また、たとえばＷＯ８６／０１１１２（Ｔ.ブラウン）には、有機組織に対す る結合親和性を有する物質にカップリングした投与可能な磁性微粒子（マグネタ イトなど）が開示されている。該組織特異的物質には、抗体、神経伝達物質、ホ ルモン、代謝産物、酵素、毒素および天然または合成薬物が包含される。マグネ タイト粒子は、反応性官能基をもち、該反応性基を介して組織特異的物質に結合 する化合物（たとえば生体崩壊性ポリマーなど）で該粒子をコーティングするこ とにより、組織特異的物質に対して都合よくカップリングする。組織特異的標的 化マグネタイト微粒子は、血流中に注入すること（または他の方法）によって投 与され、それによって、標的器官または組織に輸送され、該器官のＭＲＩ研究に おけるコントラスト強化剤として作動する。 同様に、ＵＳ特許第５,２７７,８９２号（Ｂ.Ａ.ローデス）には、たとえばリ ンパ球などの多形白血球（ポリモルホニュクリアロイコサイト：ＰＭＮ）に放射 性同位体および常磁性要素などの医療上有用な金属イオンでインビボ標識し、続 いて、放射検出またはＭＲＩにより該ＰＭＮの輸送および器官内で濃縮された白 血球の部位を検出する方法および試薬が開示されている。この文献では、有用な 金属に結合した有効量の白血球刺激性試薬（レクチン）を含む製剤が投与されて 該試薬が白血球に付着し、それによって、刺激された白血球の濃度を金属の検出 および測定手段によって引き続いて確認されている。 ＷＯ８７／０５０３０およびＷＯ８９／０１４７６（Ｄ.パーカーら）には、 ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、カルボキシアルキル、ホスフェート 、スルホネートまたはホスホネートなどの求電子基によってＮ置換されたポリア ザ大員環の複合体および特異的な組織タイプに局在するように設計された輸送抗 体が開示されている。該大員環は、金属イオン（Ｔｃ、Ｒｅ、Ｃｏ、Ｃｕ、Ａｕ 、Ａｇ、Ｐｂ、Ｂｉ、ＩｎおよびＧＡなどの放射性同位体が適当である）と錯体 を形成している。該複合体が生物に注入された後、該化合物は標的部位へ輸送さ れ、金属がシグナル源となってシンチレーションまたは多の放射トレーサー検出 手段によって検出される。 ＵＳ第４,９８６,９７９号（Ａ.Ｃ.モーガンら）には、炎症部位で活性化され た白血球と選択的に相互作用しうる認識剤の使用が開示されている。該認識剤は 、 活性化された白血球上に強化されて発現している受容体と選択的に相互作用しう るモノクローナル抗体およびペプチドを含む。さらに詳しくは、該文献は、白血 球に複合した親和性標識および放射性同位体標識を含む走化性ペプチドを利用し て炎症部位を標的化するというイメージング方法を開示している。開示されてい る方法に有用なモノクローナル抗体は、白血球の活性化にともなってアップレギ ュレーションされる細胞表面抗原のエピトープに対する抗体である。この文献で は、該認識剤に放射性核種を含むシグナル発生部分を結合することによって標識 を行っている。放射性核種の例として、111Ｉｎ、198Ａｕ、113Ａｇ、111Ａｇ、123 Ｉ、125Ｉ、130Ｉ、47Ｓｃ、90Ｙ、100Ｐｄ、67Ｇａ、64Ｃｕ、67Ｃｒおよび99 Ｔｃなどが挙げられる。また該文献は、該放射性核種と錯体を形成するキレー ト配位子の例および該キレート化合物が認識剤の標的ヘッドへ付着するための方 法を提供している。 ＷＯ９３／１７７１９およびＷＯ９４／１９０２４（Ｒ.Ｔ.ディーン；ダイア テック・インコーポレイテッド）には、診断イメージング用99Ｔｃ標識ペプチド が開示されている。該ペプチドは、インビボ標的部位に対して、すなわち、感染 および炎症部位あるいはまた血栓、アテローム性硬化または腫瘍部位に特異的に 結合するように選ばれる。該文献は特に、特異的ペプチドおよび該ペプチドにア ミド結合を介して共有的に結合するビスアミノ−ビスチオール放射標識部分を開 示している。該文献はまた、亜二オン酸塩、Ｓｎ2+、Ｆｅ2+などの還元剤の存在 下に99mパーテクネテートと反応させることによって標的化ペプチドを放射標識 する方法ならびに種々の器官の診断イメージングにおける放射標識ペプチドの使 用方法を開示している。 ＥＰ−Ａ−０３９８１４３（Ａ.Ｊ.フィッシュマンら；ザ・ジェネラル・ホス ピタル・コーポレイション）は、感染または炎症の焦点部位をイメージングする ための標識された走化性ペプチドを開示している。この文献に記載された該標識 ペプチドは、式： Ｎ(Ｘ)−Ｙ−Ｌeu−Ｐhe−Ｚ−Ｗ ［式中、Ｘは保護ホルミル、アセチルまたはｔ−Ｂｏｃ基；Ｙはメチオニンまた はノルロイシン；Ｗは標識（ペプチドに共有的に結合した放射性また常磁性同位 体のＥＤＴＡまたはＤＴＰＡキレート化合物など）；およびＺは単結合またはリ ンカー（ＬysまたはＮｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓなど）である］ で表される。また該文献には、腿にあらかじめ大腸菌を感染させた実験用ラット への放射標識走化性ペプチドの注入およびそれに続く連続的γカメラ造影による 感染部位の定位について記載されている。 生体における病気部位の検出および評価という分野において、先行技術はある 程度の到達点には至っており、長所というものを有しているが、診断研究のため に放射性物質を使用する際に起こるよく知られている健康上の危険性に関しては 、依然として欠点をかかえている。さらに、常磁性金属と錯体を形成するために ＥＤＴＡおよびＤＴＰＡを使用するのは、酸触媒性の錯体分解または血清中のＣ ａ+2の競合的キレート結合あるいはトランスフェリンからの競合のいずれかの結 果として、それらがインビボでは不安定な傾向にあるために、生理学的許容性に 関して望ましくないとみなされている（Ｓ.Ｍ.モーラインら；Int．J．Nucl．Me d．Biol.８（１９９１））。 発明の要約 先に述べた欠点を克服するために、本発明は、走化性ペプチドと常磁性大員環 キレート化合物またはマグネタイト粒子との新規な複合体を提案する。 本発明の新規複合体は、一般式（Ｆ）： Ｎ(Ｘ)−Ｙ−Ｌeu−Ｐhe-Ｚ−Ａ−Ｗ （Ｆ） ［式中、Ｘは水素またはホルミル、アセチルまたはｔ−Ｂｏｃなどの保護基；Ｙ はノルロイシン（Ｎle）またはメチオニン（Ｍet）；Ｚは化学結合、(Ｎ(γ))Ｌ ys、Ｉl、Ａsp、Ｎle−Ｔyr−Ｌysまたは(Ｇly)ｎ（ｎは１〜４）などのアミノ 酸またはオリゴペプチド；Ａはリンカー；およびＷは適当に誘導された常磁性大 員環キレート化合物または磁性粒子である］ で示される。 図面の簡単な説明 第１図は、天然およびＧｄ標識走化性ペプチドを用いる競合結合実験の結果を 示すグラフである。 第２図は、Ｇｄ−ホルミル原子間距離に対する関数としてのＧｄ標識ペプチド の結合強度の変動を示すグラフである。 第３図は、Ｇｄ標識ペプチド濃度に対する関数としてのＰＭＮ強度の応答を示 すグラフである。 第４図は、ＰＭＮおよび標識ペプチドを用いるＧｄ標識分子／細胞の会合の図 式的表現である。 第５図は、感染および非感染筋肉における99mＴｃ−ＤＴＰＡおよびＧｄ標識 ペプチドの取り込みの図式的表現である。 第６図は、マグネタイト標識ヘキサペプチドで刺激されたヒトＰＭＮによるＮ ＢＴの還元速度を示すグラフである。 詳細な記載 常磁性大員環キレート化合物（Ｗ）を形成するための大員環リガンドの一般 構造は、好ましくは、式(Ｉ)： ［式中、Ｘは１個またはそれ以上の酸素含有官能基（ＯＨ、ＣＯ、ＣＯＯＨなど ）を有するアルキル置換基である］ で示される１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン環化合物から選択される 。さらに化合物Ｉは、Ｎ原子に結合したアセトキシ基を有し、必要に応じて、他 の酸素含有アルキル置換基を有する。本発明に有用な化合物Ｉは、Ｋ.クマーら のJ.Liquid．Chromatography，１７（１９９４）３７３５〜３７４６に開示され ている。好ましい化合物は、ＸがＨ（ＤＯ３Ａ）、アセトキシ（ＤＯＴＡ）、− ＣＨ2−ＣＨＯＨ−ＣＨ3（ＨＰ−ＤＯ３Ａ，ガドテリドール，ＰＲＯＨＡＮＣＥ （登 録商標））および−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＯＯＨ（ＤＯＴＭＡ）である。他の適当な 大員環キレートは、本発明の引用文献であるＷＯ８７／０５０３０およびＷＯ８ ９／０１４７６に開示されている。 本発明に有用な他のクラスの大員環キレート分子は、式(ＩＩ)： ［式中、少なくともひとつのＲは式(Ｆ)のＡであり、他のＲは常磁性金属のレー ト化合物［たとえば、イソチオシアナト−ＤＴＰＡ（ＩＴＣ−ＤＴＰＡ）、ＳＣ Ｎ−Ｐｈ−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ2−ＤＯ３Ａ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）または式： （ここで、ＡｃＯ-はアセテート基を意味する） で示される基］と誘導体を形成する］ で示されるスターバースト（starburst，登録商標）デンドリマーである。 上記デンドリマーキレート分子は、本発明の引用文献であるＥ.Ｃ.ウィーナー らの刊行物であるMagnetic Resonance in Medicine，３１（１９９４），１〜８ に詳細に開示されている。 以下に詳細に記載するように、キレート化合物またはキレート分子は、本発明 の磁気標識化学誘引剤の製造において、結合（ボンディング）を可能にするため の基をもつように適当に誘導する。 常磁性イオンは、ランタニド類（たとえば、ガドリニウムおよび他のランタニ ド系列の原子）およびＭｎ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｒ、Ｆｅ、Ｃｕなどの適当な遷移元 素から適宜選択する。 リンカーＡは、ペプチドと大員環キレート分子の間に複合架橋を達成するのに 必要な官能基を有する化学配列から選択できる。好ましいリンカーは、キレート 分子の炭素原子または窒素原子に結合するかまたは結合されて、走化性ペプチド の天然または誘導されたアミノ酸アクセプター基（−ＳＨ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ 、ＮＨ2など）に結合しうる反応性官能基をもつ置換基から選択する。 適当なリンカーは当業者には公知であり、たとえば−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＨ Ｎ＝、ＮＨＣＯＮＨＮ＝、ＮＨＣＳＮＨＮ＝、 などの結合ユニットおよび配列が包含される。 本発明製造方法の一例として、下記反応工程式にしたがって、ＤＯ３Ａを、そ のｐ−アミノフェニル−およびｐ−イソチオシアナトフェニル−アセトアミド誘 導体に連続的に変換することができる。 上記工程にしたがって、イソチオシアナト基とペプチドの末端アミノ基とを反 応させることによって、キレート化合物とペプチド（Ｒで表す）のカップリング を行う。 別法として、トリエチルアミンの存在下、ペプチド（Ｒで表す）のカルボキシ ル基を（ベンゾトリアゾール−１−イル）−トリス−（ジメチルアミノ）ホスホ ニウム・ヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）によって活性化させ、キレート 分子のアセチルアミノ−アミノフェニル誘導体上で直接カップリングを行う。こ の工程を下記に示す。 上記工程にしたがって、適当な保護基を用いれば、中間段階または最終段階後 に常磁性イオンを導入することができる。 他のカップリング法も本発明に使用することができる。以下に２，３の例を簡 単に述べるがこれらに限定されるものではない（Ｒ＝ペプチド、Ｒ’＝キレート 分子）。 とアミノ誘導キレート分子であるＨ2−Ｒ’； スルホ−ＳＭＢＰ［４−（４−マレイミドフェニル）−Ｎ−スルホスクシンイ アミノ誘導キレート分子Ｈ2Ｒ’およびＨＳ−ペプチド； 無水物Ｒ’−ＣＯ−Ｏ−ＣＯ−Ｒ’混合キレート分子（キレート分子テトラメ チルグアニジン塩およびクロロギ酸イソブチルから得たもの）およびリシン官能 性−ＮＨ2を有するペプチド； レート分子Ｈ2−Ｒ’およびスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレインイミドメチ ル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート 分子内または分子間の環状無水物Ｒ’−ＣＯ−Ｏ−ＣＯ−Ｒ’とアルキレンジ アミンとの反応によるキレート分子Ｒ'の誘導、Ｎ−スクシンイミジル−３−（ ２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）と２−ピリジルジスルフィ ド基の導入、およびチオラート化走化性ペプチドとのカップリングによって共有 チア結合複合体を形成する。 フェライトまたはマグネタイトから誘導された強磁性または超常磁性粒子など の磁性応答性粒子をカップリングするには、フェライトまたはマグネタイトを、 リンカーＡになるかまたはリンカーＡと結合する物質と誘導する。これは、たと えば、まず、化学誘引剤ペプチドに結合しうる官能基をもっているかまたは後に もつようになるポリマー物質で該粒子をコーティングすることによってなしえる 。この具体例の結合においては、連結技術は前記開示したものと同様である。た と えば、誘導ポリアクリル酸類、ポリスチレン、デキストランおよび他のポリサッ カライドで磁性粒子をコーティングすることができる。生体活性タンパク質が共 有的にカップリングするように磁性粒子に水不溶性コーティングを適用すること に関するすべての詳細は、ＵＳ４,０７０,２４６（Ｊ.Ｆ.ケネディーら；アボッ ト・ラボラトリーズ）およびＵＳ４,１５７,３２３（Ｓ.Ｙ.シャオピンら；カル ・テック）に記載されており、これらは本発明の引用文献である。 本発明の磁性粒子に適用可能な別の方策にしたがって、さらなる中間配列を追 加して（あるいは追加することなく）、タンパク質に結合しうる官能基を有する 化合物でフェラィトまたはマグネタイトをシラン化する。たとえば、イソシアナ トアルキルシラン、イソチオシアナトアルキルシラン、３−アミノプロピルトリ メトキシシラン、ヒドロキシプロピルトリエトキシシランおよび４−クロロブチ ルトリメトキシシランなどの反応性トリアルコキシシランを用いてシラン化を行 うことができる。磁性粒子のシラン化に関する全詳細は、鉄塩溶液からの該粒子 の調製も含めて、ＥＰ−１２５９９５（Ｍ.Ｓ.チャグノンら；アドバンスト・マ グネティックス）に記載されており、これは本発明の引用文献である。磁性粒子 をシラン化すれば、常磁性キレートの場合に開示した手段と同じ手段によって、 それらを走化性ペプチドにカップリングさせることができる。 磁性粒子に関する他の具体例では、親油性部分（ＰＯＰ）および親水性部分（ ＰＦＧ）を有するリン脂質および両親媒性コポリマーでフェライトおよびマグネ タイトをコーティングする（ＥＰ−Ａ−６０７４０１を参照；この文献は本発明 の引用文献である）。タンパク質および本発明の走化性ペプチドなどのペプチド に結合しうる官能基をもつようにブロックコポリマーを誘導する。ＷＯ−Ａ−９ ５０６２５１（ユニバーシティ・オブ・ユタ）に、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標 ）およびＳｙｎｅｒｏｎｉｃ（登録商標）などの誘導ブロックコポリマーが記載 されており、該文献には、ＰＥＧブロックの末端に反応性基を有する誘導Ｐｌｕ ｒｏｎｉｃおよびＴｅｔｒｏｎｉｃ（登録商標）化合物が開示されている。この 文献では、疎水性表面（ポリスチレンビーズおよび同様の担体）が吸着作用によ って該誘導コポリマーでコーティングされており、次いで、このようにコーティ ン グされた表面がタンパク質および同様の物質を固定するための基質として機能す る。 本発明においては、次の誘導両親媒性コポリマーを合成した： ［ここで、Ｆ１０８という記号はＰｌｕｒｏｎｉｃ（両親媒性ポリオキシエチレ ン−ポリオキシプロピレンコポリマー）を意味する］。これらの誘導両親媒体を 式(Ｆ)におけるリンカーＡとして用い、ホスファチジン酸および走化性ペプチド でコーティングしたマグネタイト粒子にカップリングする。 次に述べる実施例でさらに本発明を説明する。 実施例１ Ｎ(γ)−[[[４−[[[１,４,７−トリス(カルボキシメチル)−１,４,７,１０− テトラアザシクロドデカン−１０−イル]アセチル]アミノ]フェニル]アミン]チ オカルボニル]−Ｎ−(Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フ ェ ニルアラニル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−チロシル)−Ｌ−リシン・モノガドリニ ウム塩 [Ｇｄ(ｆｏｒ−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−(Ｎ(γ))Ｌ ｙｓ−ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の合成 Ａ．１０−[Ｎ−(４−ニトロフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テト ラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸の製造 ＤＭＳＯ(３０ml)中の２−クロロ−４'−ニトロアセトアニリド(３.０g、１４ ミリモル)の溶液を１,４,７,１０−テトラアザドデカン−１,４,７−トリ酢酸（ ＤＯ３Ａ）(５．８g、１６．８ミリモル)の水溶液(３０ml)にゆっくりと加える 。１０ＭのＮａＯＨを加えて反応混合物をｐＨ±０．５にし、５０〜６０℃で５ ４時間維持する。得られる黄色沈殿を濾去し、水(１５０ml)に溶解する。１．０ ＮのＨＣｌを加えて水溶液のｐＨを約２に調節する。次いで、得られる溶液をＣ ＨＰ−２０Ｐカラム（湿容積，６００ml）に通す。水(３Ｌ)、５％（１Ｌ）、１ ０％（１Ｌ）および２０％（１．５Ｌ）のＥｔＯＨで順にカラムを溶離する。生 成物含有分画（２０％エタノールで溶出する）を合わせ、減圧濃縮する。１０− [Ｎ−(４−ニトロフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロ ドデカン−１,４,７−トリ酢酸(２．６ｇ、収率３５．４％）を黄色固体で得る 。 元素分析（Ｃ22Ｈ32Ｎ6Ｏ9・１.３０Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ４８.２３；Ｈ６.３６；Ｎ１５.３４； 実測値：Ｃ４７.９４；Ｈ６.４８；Ｎ１５.７２；Ｈ2Ｏ：４.２６％（脱着カー ルフィッシャー）；1ＨＮＭＲ（ｄ6−ＤＭＳＯ）：δ２．７−３．７（ｍ，２４ Ｈ，環および酢酸メチレン）、４−７（非常に幅広，ＣＯＯＨ）、８．０１（ｄ ，２Ｈ，オルトＨ'Ｓ）、８．１７（ｄ，２Ｈ，メタＨ'Ｓ）、１１．０３８ｓ， １Ｈ，ＣＯＮＨ）；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｅ：５２５（Ｍ＋Ｈ）+、５０９（Ｍ− Ｏ）+；ＩＲ（ＫＢｒ）：３４２４、１６３１、１５０５および１３３３ｃｍ-1 。 Ｂ．１０−[Ｎ−(４−ニトロフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テト ラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩の製造 酢酸ガドリニウム(６０２mg、１．４８ミリモル、１．３３当量)の水溶液(３ ．５ml)を水(５ml)中の１０−[Ｎ−(４−ニトロフェニル)アセトアミド]−１,４ ,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸(５８０mg、１．１ １４ミリモル)の懸濁液に６５℃にて加える。まず、透明な溶液が得られるが、 ２５分後、淡黄色の固体が沈殿する。該固体を濾過し、水(２×２ml)で洗浄し、 ガドリニウムキレート(４７０mg、収率６２％)を得る。濾液をＣＨＰ２０クロマ トグラフィーに付し、さらに生成物(２１０mg)を得る。最終的な合計収率は９０ ％である。 元素分析（Ｃ22Ｈ29Ｎ6Ｏ9Ｇｄ・０.６９Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ３８.２３；Ｈ４.４３；Ｎ１２.１６； 実測値：Ｃ３８.３４；Ｈ４.４８；Ｎ１２.０９；Ｈ2Ｏ：１.８０％（脱着カー ルフィッシャー）；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｅ：６７９［（Ｍ＋Ｈ）+，158Ｇｄ］、 ３４０［（Ｍ＋２Ｈ+）2+，158Ｇｄ］。 Ｃ．１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テト ラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩の製造 メタノール(９５ml)および水(１８ml)中の１０−[Ｎ−(４−ニトロフェニル) アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢 酸・モノガドリニウム塩(３．３９g、５ミリモル)の溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ触 媒（５０％水−デガッサ（Degussa）タイプ、１．０６g、Ｐｄ０．５ミリモル） を加える。水雰囲気下、室温にて溶液に１０時間水素添加する（２０〜２５ｐｓ ｉ）。反応混合物を濾過して触媒を除去し、濾液を蒸発乾固する。残渣をメタノ ールから結晶化して生成物(３．０４g、収率９３．６％)を得る。 元素分析（Ｃ22Ｈ33Ｎ7Ｏ7Ｇｄ・４.１８Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ３６.４９；Ｈ５.４８；Ｎ１１.６１； 実測値：Ｃ３６.２２；Ｈ５.４１；Ｎ１１.４１；Ｈ2Ｏ：１０.４％（脱着カー ルフィッシャー）；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｅ：６５０［（Ｍ＋Ｈ）+，158Ｇｄ］； ＩＲ（ＫＢｒ）：３４２４、１６１６ｃｍ-1。 Ｄ．１０−[Ｎ−(４−イソチオシアナトフェニル)アセトアミド]−１,４,７, １０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩の 製造 １０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラア ザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩(１００mg、０． １５ミリモル)の水溶液(４ml)に、ＣＨＣｌ3(３ml)中のチオホスゲン(７０．９m g、０．６２ミリモル)の溶液を加える。２相混合物を室温で撹拌し、反応の進行 をヌクレオシルＣ18カラムを用いるＨＰＬＣでモニターする。予測される生成物 への変換が完了したとき、水層を分離し、１．０ＮＮａＯＨを加えて、この溶液 のｐＨを５．２に調節する。次いで、この溶液ＣＨＰ２０カラム（２．５×１５ ｃｍ）に供する。２．５、５．０、７．５、１０、２０および４０％のＥｔＯＨ を含む水で順にカラムを溶離する。生成物含有画分を合わせ、周囲温度にて減圧 蒸発してＥｔＯＨを除去し、次いで凍結乾燥して生成物(７５mg、収率７０．５ ％)を白色固体で得る。 元素分析（Ｃ23Ｈ29Ｎ6Ｏ7ＳＧｄ・５.３５Ｈ2Ｏ・０．１６Ｇｄ（ＡＰＡ−Ｄ Ｏ３Ａ）として） 計算値：Ｃ３５.１５；Ｈ５.１６；Ｎ１０.７６；Ｓ３.４９； 実測値：Ｃ３５.２３；Ｈ５.０３；Ｎ１０.５６；Ｓ３.０３；Ｈ2Ｏ：１２.２４ ％（脱着カールフィッシャー）；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｅ：６９２［（Ｍ＋Ｈ）+ ，158Ｇｄ］、６４８［（Ｍ−ＣＯ2）+，158Ｇｄ］；ＩＲ（ＫＢｒ）：３４２４ 、２１１４（Ｎ＝Ｃ＝Ｓ）および１６０９ｃｍ-1。 Ｅ．Ｎ(γ)−[[[４−[[[１,４,７−トリス(カルボキシメチル)−１,４,７,１ ０−テトラアザシクロドデカン−１０−イル]アセチル]アミノ]フェニル]アミン ] チオカルボニル]−Ｎ−(Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ− フェニルアラニル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−チロシル)−Ｌ−リシン・モノガド リニウム塩の製造 チオホスゲン(１００ml)をクロロホルム(０．５ml)に懸濁し、１０−[Ｎ−(４ −アミノフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン −１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩(５３．０６mg、０．０７９８ミリ モル)を混合する。２相混合物を室温で９０分間激しく撹拌する。水相をクロロ ホルム層から分離し、水酸化ナトリウムでｐＨを７に調節する。クロロホルム層 を水で十分に洗浄し、水性抽出物を合わせる。逆相ＨＰＬＣ分析によって、１０ −[Ｎ−(４−イソチオシアナトフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テト ラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩の形成を確認 する。 Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ −ノルロイシル−Ｌ−チロシル−Ｌ−リシン(７９．８mg、０．０７４ミリモル) をジメチルホルムアミド／トリエチルアミン（９９：１、８．１ml）に溶解し、 ペプチドのｐＨを９．０に調節する。該ペプチドをイソチオシアナト化合物の水 溶液と混合する。反応が進行するにつれて幾らかの不溶物質が見られるようにな るので、さらなる塩基および／またはＤＭＦを加えて溶解する。反応混合物を１ ８時間撹拌する。この期間の終わりに、反応混合物をＨＰＬＣ法で分析し、反応 の完了を確認する。粗物質をＰＬＲＰ−Ｓを用いるセミプレップＨＰＬＣ勾配法 にて精製する。分画を集め、４０℃、窒素気流下で純物質の体積を減らす。濃縮 された溶液を凍結乾燥して固体物質(６０mg、全収率５１．４％)を得、マススペ クトル分析を行う。 ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ：１５１５［（Ｍ＋Ｈ）+，ガドリニウムパターン］； 元素分析（Ｃ66Ｈ34Ｎ13Ｏ16ＳＧｄ・６Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ４８.１２；Ｈ６.５０；Ｎ１１.０５； 実測値：Ｃ４０.２１；Ｈ６.７２；Ｎ１０.９６； ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｅ：１５１５［（Ｍ＋Ｈ）+，158Ｇｄ］。 実施例２ Ｎ(γ)−[[[４−[[[１,４,７−トリス(カルボキシメチル)−１,４,７,１０− テトラアザシクロドデカン−１０−イル]アセチル]アミノ]フェニル]アミン]チ オカルボニル]−Ｎ−(Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フ ェニルアラニル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−チロシル)−Ｌ−リシン・モノガドリ ニウム−１５３塩 [Ｇｄ−１５３(ｆｏｒ−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ− Ｔｙｒ−(Ｎ(γ))Ｌｙｓ−ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の合成 Ａ．１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テト ラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノトリエチルアンモニウム塩の 製造 水(１５０ml)中の１０−[Ｎ−(４−ニトロフェニル)アセトアミド]−１,４,７ ,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸(実施例１Ａで製造、５ ．３g、１０．１ミリモル)の溶液を調製し、ｐＨを７．０に調節する。この溶液 に、１０％Ｐｄ／Ｃ触媒（５０％水−デガッサ（Degussa）タイプ、２．１７g、 Ｐｄ１．０ミリモル）を加える。水雰囲気下、室温にて溶液に３時間水素添加す る（２０〜２５ｐｓｉ）。反応混合物を濾過して触媒を除去する。濾液から溶媒 除去後に得られる残渣をＤＥＡＥセファデックスカラム（５×２０ｃｍ）に供す る。５，１０，２５，４０，８０および１００ｍＭの炭酸水素トリエチルアンモ ニウム（ＴＥＡＢ）緩衝液（各溶液１Ｌ）でカラムを溶離する。各分画をＨＰＬ Ｃおよび導電率でモニターする。所望の化合物を含む分画（１００ｍＭのＴＥＡ Ｂで溶出したもの）から緩衝液を除去し、生成物(４．２g、収率７０％)をモノ トリエチル アンモニウム塩で得る。 元素分析(Ｃ28Ｈ49Ｎ7Ｏ7・１．９１Ｈ2Ｏ・０．３４Ｎ（Ｃ2Ｈ5）3として) 計算値：Ｃ５４.２９；Ｈ８.７８；Ｎ１５.４７； 実測値：Ｃ５３.９２；Ｈ９.１８；Ｎ１５.５８；Ｈ2Ｏ：５.４５％（脱着カー ルフィッシャー）；1ＨＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：δ１．２５（ｔ，ＣＨ3ＣＨ2Ｎ）、３ ．１５（ｔ，ＣＨ2ＣＨ3Ｎ）、３．０−３．９（ｍ，２４Ｈ，環および酢酸メチ レン）、６．８４（ｄ，２Ｈ，メタＨ'Ｓ）、７．２７（ｄ，２Ｈ，オルトＨ'Ｓ ）；13ＣＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：８．０４（ＣＨ3ＣＨ2Ｎ）、４６．４４（ＣＨ3 ＣＨ2 Ｎ）、４８．０５、５０．４８、５１．６０、５５．２４、５５．６７、５６ ．２０（環および酢酸メチレン）；１１６．７８（Ｃ３）、１２３．３０（Ｃ２ ）、１２８．７０（Ｃ４）、１４２．７３（Ｃ１）；１６９．６５、１７０．２ ５、１７７．７６（ＣＯ）；ＭＳ（ＦＡＢ）：ｍ／ｅ：４９５（Ｍ＋Ｈ）+、１ ０２［ＨＮ（Ｃ2Ｈ5）3］+；ＩＲ（ＫＢｒ）：３４３７、２９７６、２９４０、 １６２８、１５１４および１３９８ｃｍ-1。 Ｂ．１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テト ラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム−１５３塩の製 造 153ＧｄＣｌ3（５０４ｍＣｉ、０．１２６ミリモル）を含むキャリヤーの溶液 を１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラア ザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノトリエチルアンモニウム塩（実施 例２Ａ、７６．４３mg、０．１２ミリモル）と混合する。反応混合物を加熱し、 溶液のｐＨを非常にゆっくりと７まで上げる。反応混合物を逆相ＨＰＬＣ／分析 法によって分析し、生成物の形成を確認する（実施例１Ｃの化合物と比較して） 。反応混合物の体積を約３mlまで減少させ、バイアルに移す。 Ｃ．Ｎ(γ)−[[[４−[[[１,４,７−トリス(カルボキシメチル)−１,４,７,１ ０−テトラアザシクロドデカン−１０−イル]アセチル]アミノ]フェニル]アミン ]チオカルボニル]−Ｎ−(Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ −フェニルアラニル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−チロシル)−Ｌ−リシン・モノガ ド リニウム−１５３塩の製造 チオホスゲン(１５０ml)とクロロホルム(２ml)の混合物に、１０−[Ｎ−(４− アミノフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン− １,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム−１５３塩（実施例２Ｂ）を加える。２ 相混合物を室温で４０分間激しく撹拌する。水相をクロロホルム層から分離し、 水酸化ナトリウムでｐＨを７に調節する。クロロホルム層をさらに水で洗浄する 。逆相ＨＰＬＣ分析によって、１０−[Ｎ−（４−イソチオシアナトフェニル） アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢 酸・モノガドリニウム−１５３塩の形成を確認する。この変換の回収率は９５％ である。 Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ −ノルロイシル−Ｌ−チロシル−Ｌ−リシン(６４．８１mg、０．０７９５ミリ モル)をジメチルホルムアミド／トリエチルアミン（９９：１、１０．０ml）に 溶解し、ペプチドのｐＨを９．１に調節する。該ペプチドをイソチオシアナト化 合物と混合し、反応混合物を１８時間撹拌する。この期間の終わりに、反応混合 物をＨＰＬＣ法で分析し、反応の完了を確認する。粗物質をＰＬＲＰ−Ｓを用い るセミプレップＨＰＬＣ勾配法にて精製する。分画を集め、４０℃、窒素気流下 で純物質の体積をほとんど乾固するまで減らす。純生成物の回収率は３０％であ る。 実施例３ Ｎ(γ)−[[[４−[[[１,４,７−トリス(カルボキシメチル)−１,４,７,１０− テトラアザシクロドデカン−１０−イル]アセチル]アミノ]フェニル]アミノ]チ オカルボニル]−Ｎ−(Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェ ニルアラニル)−Ｌ−リシン・モノガドリニウム塩 [Ｇｄ(ｆｏｒ−Ｍｅｔ−Ｌ ｅｕ−Ｐｈｅ−(Ｎ(γ))Ｌｙｓ−ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の合成 実施例１Ｅに記載した手順にしたがって、１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル) アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢 酸・モノガドリニウム塩(３３．８mg、０．０５ミリモル)をクロロホルム(２． ０ml)中のチオホスゲン(２００ml)で処理し、１０−[Ｎ−(４−イソチオシアナ トフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４ ,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩を調製する。Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニ ル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−リシン(４１.４８mg、０．０５ ミリモル)を、ｐＨ１０．１にて、イソチオシアナト化合物に加える。水酸化ナ トリウムでｐＨを１０．１に調節し、反応混合物を周囲温度で一夜撹拌する。反 応の進行をＨＰＬＣでチェックする。生成物をセミプレップＨＰＬＣ法にて精製 する。生成物含有分画をすべて集め、最小体積に濃縮する。サンプルを凍結乾燥 して固体物質(３０mg、収率５５％)を得る。ＨＰＬＣ／分析法により、固体物質 をその純度に関してアッセイした結果は純度９７％である。 元素分析(Ｃ50Ｈ71Ｎ11Ｏ13Ｓ2ＧｄＮａ・１５Ｈ2Ｏとして) 計算値：Ｃ３８.７８；Ｈ６.５５；Ｎ９.９４；Ｓ４.１４； 実測値：Ｃ３８.８７；Ｈ５.６８；Ｎ９.５４；Ｓ４.０６； ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ/ｅ：１２５７．２５(Ｍ＋Ｈ)+および１２７９(ｍ＋Ｎａ)+。 実施例４ Ｎ(γ)−[[[４−[[[１,４,７−トリス(カルボキシメチル)−１,４,７,１０− テトラアザシクロドデカン−１０−イル]アセチル]アミノ]フェニル]アミノ]チ オカルボニル]−Ｎ−(Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェ ニルアラニル)−Ｌ−リシン・モノガドリニウム−１５３塩 [Ｇｄ−１５３(ｆ ｏｒ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−(Ｎ(γ))Ｌｙｓ−ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の合成 実施例２Ｂ／Ｃに記載した手順にしたがって、セミ−プレップＨＰＬＣ法によ り、１０−[Ｎ−(４−イソチオシアナトフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１ ０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム−１５ ３塩を調製し、精製する。この調製は、下記の量で行う：すなわち、ＧｄＣｌ3 溶液(０．３６Ｍ、０．６ml、０．２１６ミリモル)、153ＧｄＣｌ3(5００mＣｉ ，０．７３mＣｉ／ml，０．３２９mＣｉ／mgＧｄ2Ｏ3、０．００８３ミリモル) および１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テト ラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・トリエチルアンモニウム塩(１３ ３mg、０．２ミリモル)。実施例２Ｃに記載した手順にしたがって、このキレー ト化合物を１０−[Ｎ−（４−イソチオシアナトフェニル）アセトアミド]−１, ４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウ ム−１５３塩に変換する。 ｐＨ９．５のＮ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルア ラニル−Ｌ−リシン（重量、０．１６７ミリモル）の水溶液(５ml)を、Ｇｄ−１ ５３イソチオシアナト化合物の溶液に加える。反応混合物を一夜撹拌する。生成 物含有分画をすべて集め、窒素気流下、４０℃にて、ほとんど乾固するまで濃縮 する。サンプルの放射活性および純度をアッセイする。精製の回収率は４７．３ ％である。サンプルのＨＰＬＣ分析ではひとつのピークが現れる。 実施例５ １０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ(Ｄ)−フェニ ルアラニル)−Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テト ラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩 [Ｇｄ(ｆｏ ｒ−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ＡＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の合成 Ａ．１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テト ラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル・５塩酸塩の製造 無水メタノール(１５０ml)中の１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミ ド−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸(実施例２ Ａ、５．０g、１０．１２ミリモル)の懸濁液に、０℃にて、溶液が透明になるま で乾燥ＨＣｌガスを通す。反応混合物を撹拌しながら２０℃以下で一夜保持する 。溶媒を蒸発させて濃厚なペーストを得、これを水に溶解し、凍結乾燥して１０ −［Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド−１,４,７,１０−テトラアザシク ロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル・５塩酸塩を無色固体で得る。収量 ７．２０g（９８％）；m.p.２１０〜２１５℃；1ＨＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ２．８０ −４．４０（ｂｍ）、３．７１（ｓ，ＣＯＯＣＨ3）および７．３２＆７．５５ （２ｄ，Ａｒ−Ｈ）；ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｅ５３７（Ｍ＋Ｈ）+。 Ｂ．１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−(Ｄ，Ｌ)− フェニルアラニル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１ ０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチルの製造 無水ＣＨ2Ｃｌ2(１０ml)中のＮ−ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ(０．４ ０g、０．９５ミリモル)、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメ チル−アミノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート(ＢＯＰ、０．４６g 、１．０４ミリモル)および１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド−１ ,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル・５ 塩酸塩(０．７６g、１．０４ミリモル)の混合物をトリエチルアミンで処理し、 窒素雰囲気下、室温で６時間撹拌する。次いで、反応混合物を水に注ぎ入れ、Ｋ ＨＳＯ4溶液でｐＨを〜４．００に調節した後、水層をＣＨ2Ｃｌ2(３×５０ml) で抽出する。有機相を水で洗浄し、乾燥および蒸発し、ペーストを得る。さらに 精製するために、シリカゲルカラムに充填し、ＣＨ2Ｃｌ2−ＣＨ3ＯＨ（９８： ２）で溶離する。化合物含有分画を合わせ、減圧蒸発して標記化合物(０．７０g 、収率７８．３％)を泡状固体で得る。m.p.１２０〜１２４℃。ＴＬＣ［シリカ ゲル、ＣＨ2Ｃｌ2：ＣＨ3ＯＨ＝９：１］Ｒｆ＝０．５２。 ＨＰＬＣでは、ラセミ化を示す保持時間が〜２．２分異なる２つのピークが現 れる。ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ９３８（Ｍ＋Ｈ）+。 Ｃ．１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ(Ｄ)−フ ェニルアラニル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０ −テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸の製造 ジオキサン−水(５ml、４：１)中のＬｉＯＨの溶液を実施例５Ｂの生成物(０ ．７０g、０．７５ミリモル)に加え、室温で４時間撹拌する。反応混合物を水で 〜１０mｌに希釈しＫＨＳＯ4溶液でｐＨ〜４．００に調節する。溶液を減圧蒸発 して泡状固体を得る。次いで、該固相を、溶離剤として水−アセトニトリル（０ ．１％ＴＦＡ）を用いるプレパラティブ逆相ＨＰＬＣ精製に付し、フェニルアラ ニンのＤ体およびＬ体から得られるジアステレオマーを分離する。純粋な立体異 性体（純度＞９９％）を含有する分画を合わせ、凍結乾燥する。プレパラティブ ＨＰＬＣの実施条件は次のとおりである：Ｖydac Ｃカラム８２．２×２５ｃｍ ）；直線勾配、３０％ＡＣＮ（０．１％ＴＦＡ）／Ｈ2Ｏ（０．１％ＴＦＡ）か ら開始；波長２３０ｎｍ；流速１０ｍｌ／分。 Ｌ異性体：m.p.１３５〜１４０℃（モノＣＦ3ＣＯＯＨ塩）； 元素分析(Ｃ43Ｈ65Ｎ9Ｏ11・２.６６Ｈ2Ｏ・１.０６ＣＦ3ＣＯＯＨとして) 計算値：Ｃ５０.０９；Ｈ６.５６；Ｎ１１.４３；Ｓ７.７５； 実測値：Ｃ５０.０９；Ｈ６.７３；Ｎ１１.０２；Ｓ７.５３；Ｈ2Ｏ４.３４％（ 脱着カールフィッシャー）；ＭＳ ｍ/ｚ８９６(Ｍ＋Ｈ)+。 Ｄ異性体：m.p.１３５〜１４０℃（モノＣＦ3ＣＯＯＨ塩）； 元素分析(Ｃ43Ｈ65Ｎ9Ｏ11・２.７２Ｈ2Ｏ・１.０５ＣＦ3ＣＯＯＨとして) 計算値：Ｃ５０.０４；Ｈ６.５７；Ｎ１１.４２；Ｓ７.７２； 実測値：Ｃ５０.０４；Ｈ６.６０；Ｎ１１.２１；Ｓ７.５４；Ｈ2Ｏ３.５３％（ 脱着カールフィッシャー）；ＭＳ ｍ/ｅ８９６(Ｍ＋Ｈ)+。 実施例６ １０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラ ニル)−（−アミノフェニル）−Ｎ−４−アセトアミド]−１,４,７,１０−テト ラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩 [Ｇｄ(ｆｏ ｒ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ＡＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の合成 Ａ．１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニル アラニル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テト ラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチルの製造 ＤＭＦ(２ml)中の１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド−１,４,７, １０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル・５塩酸塩( １７２．４mg、０．２４ミリモル、実施例５Ａ)をＥｔ3Ｎ(１２１．４mg、１． ２ミリモル)と２０分間反応させる。Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ(１ ０５mg、０．２４ミリモル)、ＢＯＰ(１２２mg、０．２８ミリモル)およびＥｔ3 Ｎ (７８ml、０．５６ミリモル)を加えた後、混合物を室温で２０時間撹拌する。反 応混合物を蒸発乾固する。残渣をＭｅＯＨ(１ml)に溶解し、次いで、ＨＰＬＣで 精製する。生成物含有分画を合わせ、凍結乾燥して生成物(９１mg、収率４０％) を白色固体で得る。m.p.１２５〜１２８℃。ＨＰＬＣ：保持時間１４．３分；Ｖ ydac（４．６×２５０ｍｍ）；アイソクラティック、３０％アセトニトリル（０ ．１％ＴＦＡ）／Ｈ2Ｏ（０．１％ＴＦＡ）（ｐＨ２．０）；波長２３０ｎｍ； 流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０．７０−０．８１（ｍ）、１．５ ２＆２．４８（ｍ）、１．９８（ｓ）、３．１８−４．１５（ｍ）４．２８＆４ ．３９（ｍ）、７．１８−７．５８（ｍ）および８．０８（ｓ）；ＦＡＢ−ＭＳ ：ｍ／ｅ９５６．７（Ｍ＋Ｈ）+および９７８．７（Ｍ＋Ｎａ）+。 Ｂ．１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニル アラニル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テト ラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸の製造 １０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラ ニル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラア ザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル(６６．９mg、０．０７ミリ モル)を１Ｎ ＮａＯＨ（ＭｅＯＨ、３ml）に加え、混合物を室温で７時間撹拌す る。反応混合物を蒸発乾固してＭｅＯＨを除去し、次いで残渣を水(３．５ml)に 溶解する。ＫＨＳＯ4を加えて溶液をｐＨ４．５に調節する。水(８０ml)を加え て、中和中に形成したすべての固体を溶解する。濾過後、生成物を含む濾液を合 わせ、凍結乾燥して生成物(１１mg、収率１７％)を白色固体で得る。m.p.１３５ 〜１３８℃。ＨＰＬＣ：保持時間７．１分；Ｖydac−Ｃ１８（４．６×２５０ｍ ｍ）カラム；アイソクラティック、３０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）／ Ｈ2Ｏ（０．１％ＴＦＡ）（ｐＨ２．０）；波長２３０ｎｍ：流速１ｍｌ／分。1 ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０．６７−０．７１（ｍ，３Ｈ，ＣＨ 3）、１．３＆２ ．４（ｍ，１０Ｈ，ＣＨ2）、１．９（Ｓ，３Ｈ，ＳＣＨ2）、３．１９−４．２ ２（ｍ，２４Ｈ，大員環プロトンおよびＣＨ 2）、４．０５＆４．４５（ｍ，３ Ｈ，ＣＨ）、７．２６−７．６（ｍ，９Ｈ，ベンゼン環）および８．０３（ｓ， ＣＨ Ｏ）；１Ｒ（ＫＢｒ）：３４３４、１６７８、１５１６および１２０４ｃｍ-1； ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｅ９１４（Ｍ＋Ｈ）+。 元素分析(Ｃ43Ｈ63Ｎ9Ｏ11Ｓ1・１．４５ＣＦ3ＣＯＯＨ・４.７Ｈ2Ｏとして) 計算値：Ｃ４７.２９；Ｈ６.４０；Ｎ１０.８１；Ｓ２.７５；Ｆ７.０９； 実測値：Ｃ４７.２９；Ｈ６.２１；Ｎ１０.５６；Ｓ３.００；Ｆ７.０９；脱着 カールフィッシャー）。 Ｃ．１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニル アラニル)−（４−アミノフェニル）−Ｎ−４−アセトアミド]−１,４,７,１０ −テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩の製造 ＧｄＣｌ3(９．９４５ｍＭ溶液３．６ml、０．０３５８ミリモル)を１０−[(( Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル)−Ｎ− （４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデ カン−１,４,７−トリ酢酸(４０mg、０．０３５８ミリモル)の水溶液と混合する 。反応混合物を６０℃で加熱する。反応混合物を加熱しながら、ｐＨをゆっくり と７まで上げる。反応混合物がｐＨ７になった後、サンプルを放冷し、生成物を セミ−プレパラティブＨＰＬＣ法で精製する。生成物含有分画をすべて集め、窒 素気流下、４０℃にて濃縮する。最終溶液を凍結乾燥する(３０mg、収率８８％) 。 元素分析(Ｃ43Ｈ60Ｎ9Ｏ11ＧｄＳ・７.３Ｈ2Ｏとして) 計算値：Ｃ４３.０４；Ｈ６.２７；Ｎ１０.５０；Ｓ２.６７； 実測値：Ｃ４３.１５；Ｈ６.０５；Ｎ１０.３９；Ｓ２.７３； ＦＡＢ Ｍａｓｓ：ｍ／ｅ１０５１．２（ｍ＋Ｈ）+。 実施例７ １０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラ ニル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０ −テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩 [Ｇ ｄ(ｆｏｒ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＡＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の合成 Ａ．１０−[((Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセ トアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸ト リメチルの製造 無水ＣＨ2Ｃｌ2(２０ml)中の１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド] −１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル ・5塩酸塩(２．００g、２．７５ミリモル)、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ(０．５３g、３．０ ３ミリモル、実施例５Ａ)およびＢＯＰ試薬(１．３４g、３．０３ミリモル)の混 合物に、トリエチルアミン(２．１４g、２１．１５ミリモル)を加え、窒素雰囲 気下、室温にて９時間撹拌する。次いで、反応混合物を水に注ぎ入れ、ＫＨＳＯ4 溶液を用いて溶液のｐＨを〜４．００に調節し、ＣＨ2Ｃｌ2(３×１００ml)で 抽出する。次いで、有機層を合わせ、水で洗浄し、乾燥し、回転蒸発器で蒸発し て標記化合物の泡状固体を得る。さらに精製を行うために、固体をジクロロメタ ン溶液としてシリカゲルカラムに充填し、カラムをＣＨ2Ｃｌ2−ＣＨ3ＯＨ（９ ８：２）混合物で溶離する。生成物含有分画を集め、減圧蒸発して、生成物(１ ．６８g、収率８０％)を黄色固体で得る。m.p.１３５〜１３９℃。ＨＰＬＣ：保 持時間２２．４分；Ｖydac−Ｃ１８（４．６×２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、 ０．１％ＴＦＡを含有する水およびアセトニトリル０〜５０％アセトニトリル， ５０分；波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０．３７ （ｓ）、２．１０−２．３５（ｍ）、３．６２（２ｓ）、３．８９（ｄ）、５． ６２（ｂｓ）、７．３８（ｍ）、８．５２（ｂｓ）および８．６１（ｂｓ）；Ｆ ＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ７１６（Ｍ＋Ｎａ）+。 Ｂ．１０−[グリシル−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７ ,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル・ＴＦＡ塩 の製造 無水ＣＨ2Ｃｌ2(５ml)中の１０−[((Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−グリシル)−Ｎ−（４− アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン− １,４,７−トリ酢酸トリメチル(１．６g、２．１６ミリモル)の溶液をトリフル オロ酢酸(５ml)で処理し、窒素雰囲気下、室温にて１時間撹拌する。減圧蒸発に て溶媒を除去した反応混合物は濃厚なペースト状であり、これを無水エーテルで トリチュレートして標記化合物をオフホワイトの固体で得る（定量的収量）。m. p.１７８〜１８１℃。ＨＰＬＣ：保持時間１７．１３分；Ｖydac−Ｃ１８（４． ６×２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、０．１％ＴＦＡを含有する水およびアセト ニトリル０〜５０％アセトニトリル，５０分；波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分 。1ＨＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ２．１９−４．３８（ｍ）、３．６９（ｓ）および７． ４２（ｓ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ５９４.５（Ｍ＋Ｈ）+。 Ｃ．１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−フェニルアラ ニル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０ −テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチルの製造 ＡＣＮ(２０ml)中の１０−[グリシル−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトア ミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメ チル・ＴＦＡ塩(１．１９g、２ミリモル)、ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ( ４３７．６mg、１ミリモル)およびＢＯＰ(８８５mg、８ミリモル)の混合物を室 温にて２時間Ｅｔ3Ｎで処理する。反応混合物を蒸発乾固する。生成物含有分画 を合わせ、蒸発して黄色固体(１．０８g、収率１００％)を得る。m.p.１２５〜 １２８℃。ＰＬＣ：保持時間１７．２分；Ｖydac−Ｃ１８（４．６×２５０ｍｍ ）カラム；直線勾配、０．１％ＴＦＡを含有する水およびアセトニトリル２０〜 ５０％アセトニトリル，３０分；波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ （ＣＤ3ＯＤ）δ０．８１−０．９２（ｍ）、１．５２＆２．４１（ｍ）、１． ９２（ｓ）、３．２１−４．１１（ｍ）、４．２１〜４．４５（ｍ）および８． ０８ （ｓ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ１０１３（Ｍ＋Ｈ）+および１０３５（Ｍ＋Ｎａ）+ 。 Ｄ．１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニル アラニル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７, １０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸の製造 １０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−フェニルァラニル −グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テ トラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル(１．０１g、１ミリモ ル)をジオキサンおよび水（１：１）(１２ml)中の水酸化リチウム(２４０mg、５ ．７ミリモル)の溶液に加える。反応は室温で２時間行う。反応物に水(２０ml) を加え、ＫＨＳＯ4溶液を加えて溶液のｐＨを３〜４に調節する。反応混合物を 蒸発乾固する。次いで、残渣を水(３００ml)に溶解し、プレパラティブＨＰＬＣ で精製する。生成物含有分画を合わせ、凍結乾燥して生成物(２７４mg、収率２ ３％)を白色固体で得る。m.p.１３８〜１４０℃。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１８（ｎ −ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ2Ｏ＝１３：２：５）。ＨＰＬＣ：保持時間１２．２ 分；Ｖydac−Ｃ１８（４．６×２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、０．１％ＴＦＡ を含有する水およびアセトニトリル０〜５０％アセトニトリル，５０分；波長２ ３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０．７−０．８（ｍ，ＣＨ 3 ）、１．５＆２．４（ｍ，ＣＨ2）、１．９（ｓ，ＳＣＨ3）、３．１９−４ ．０（ｍ，大員環プロトンおよびＣＨ 2）、４．２および４．４（ｍ，ＣＨ）、 ７．２−７．６（ｍ，ベンゼン環）、８．０（ｓ，ＣＨＯ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ ／ｅ９７１（Ｍ＋Ｈ）+、９９３（Ｍ＋Ｎａ）+および１００９（Ｍ＋Ｋ）+。 元素分析(Ｃ45Ｈ66Ｎ10Ｏ12Ｓ1・１．００ＣＦ3ＣＯＯＨ・４．３１Ｈ2Ｏとし て） 計算値：Ｃ４６.３２；Ｈ６.０９；Ｎ１１.０７；Ｓ２.５３；Ｆ８.５６ 実測値：Ｃ４６.６；Ｈ６.０１；Ｎ１０.９０；Ｓ２.８８；Ｆ８.５２。（脱着 カールフィッシャー）。 Ｅ．１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニル アラニル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７, １０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩の 製造 実施例６Ｃに記載した方法にしたがってガドリニウム塩を調製する。収率６ ５％。 元素分析(Ｃ45Ｈ63Ｎ10Ｏ12ＧｄＳ・５．７Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ４４.０２；Ｈ６.１１；Ｎ１１.４１；Ｓ２.６１； 実測値：Ｃ４３.９４；Ｈ５.８０；Ｎ１１.４９；Ｓ２.８３。 ＦＡＢ Ｍａｓｓ：ｍ／ｅ１１２６（Ｍ＋Ｈ）+。 実施例８ １０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラ ニル−Ｌ−イソロイシニル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１, ４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウ ム塩 [Ｇｄ(ｆｏｒ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−ＡＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の 合成 Ａ．１０−[((Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−イソロイシニル)−Ｎ−（４−アミノフェ ニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７− トリ酢酸トリメチルの製造 無水アセトニトリル(２０ml)中のｔ−Ｂｏｃ−イソロイシン(１．００g、４． １６ミリモル)、１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１ ０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル・５塩酸塩(３ ．３０g、４．５９ミリモル)およびＢＯＰ試薬(２．００g、４．５２ミリモル) の混合物に、トリエチルアミン(２．２９g、２２．６ミリモル)を加え、窒素雰 囲気下、室温にて８時間撹拌する。次いで、反応混合物を水(１０ml)で処理し、 回転蒸発器で蒸発して溶媒を除去し、濃厚なペーストを得る。該ペーストをジク ロロメタン溶液としてシリカゲルカラムに充填し、カラムをＣＨ2Ｃｌ2−ＣＨ3 ＯＨ（９５：５）混合物で溶離する。生成物含有分画を集め、蒸発して、生成物 (２．８０g、収率８８．８％)をオフホワイトの固体で得る。m.p.１２３〜１２ ５℃。ＨＰＬＣ：保持時間１６．５分；Ｖydac−Ｃ１８（４．６×２５０ｍｍ） カラム；直線勾配、０．１％ＴＦＡを含有する水およびアセトニトリル２０〜５ ０％アセトニトリル，３０分；ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭ Ｒ（ＣＤＣｌ3）δ０．８９＆１．３２（２ｓ）、１．９５（ｍ）、２．１５− ４．２５（ｍ）、５．２１（ｂｄ，ＢｏｃＮＨ）、７．３５（ｍ，Ａｒ−Ｈ）お よび８．３１−８．９１（ｍ，アミド−ＮＨ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ７５９（ Ｍ＋Ｈ）+。 Ｂ．１０−[Ｌ−イソロイシニル−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド] −１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル の製造 ＣＨ2Ｃｌ2(１０ml)中の１０−[((Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−イソロイシニル)−Ｎ −（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロド デカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル(２．００g、２．６４ミリモル)の溶液 にトリフルオロ酢酸(５ml)を加え、室温にて３０分間撹拌する。反応混合物を減 圧蒸発して濃厚なペースト状物を得、これを無水エーテルでトリチュレートして 生成物をオフホワイトの固体で得る（ほとんど定量的収量）。m.p.１４８〜１４ ７℃。ＨＰＬＣ：保持時間５．２分；Ｖydac-Ｃ１８（４．６×２５０ｍｍ）カ ラム；直線勾配、０．１％ＴＦＡを含有する水およびアセトニトリル２０〜５０ ％アセトニトリル，３０分；ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ （Ｄ2Ｏ）δ０．８０−１．０１（ｍ）、２．０５（ｍ）、２．８９−４．２０ （ｍ＆ｓ）、７．３８（ｓ，Ａｒ−Ｈ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ６９４（Ｍ＋ Ｈ）+。 Ｃ．１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−フェニルアラ ニル−Ｌ−イソロイシニル)−Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド]−１,４, ７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチルの製造 無水アセトニトリル(１０ml)中の１０−[Ｌ−イソロイシニル−Ｎ−（４−ア ミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１ ,４,７−トリ酢酸トリメチル(０．５０g、０．６２ミリモル)、ＢＯＰ試薬(０． ２８g、０．６３ミリモル)およびＮ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ(０． ２７g、０．６２ミリモル)の混合物にトリエチルアミン(０．３２g、３．１６ミ リモル)を加え、窒素雰囲気下、室温にて５時間撹拌する。次いで、反応混合物 を水(１０ml)で処理し、回転蒸発器にて蒸発して溶媒を除去する。このようにし て得られたペースト状物をジクロロメタン溶液としてシリカゲルカラムに充填し 、カラムをＣＨ2Ｃｌ2−ＣＨ3ＯＨ（９５：５）混合物で溶離する。化合物含有 分画を合わせ、蒸発して生成物(０．４０g、収率６１％)を明黄色味をおびたペ ースト状物で得る。ＨＰＬＣ：保持時間１２．２分；Ｖydac−Ｃ１８（４．６× ２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、０．１％ＴＦＡを含有する水およびアセトニト リル２０〜５０％アセトニトリル，３０分；ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／ 分。1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ０．７−０．９（ｍ，ＣＨ3）、１．５および２ ．５（ｍ，ＣＨ2）、１．８２（ｓ，ＳＣＨ3）、３．１９−４．０（ｍ，大員環 部分およびＣＨ2）、４．２１および４．５４（ｍ，ＣＨ）、７．２１−７．６ ５（ｍ，Ａｒ−Ｈ）、８．０５（ｓ，ＣＨＯ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ１０６９ （Ｍ＋Ｈ）+。 Ｄ．１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニル アラニル−Ｌ−イソロイシニル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]− １,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸の製造 Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−フェニルアラニル−Ｌ−イソ ロイシニル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テ トラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル(０．３５g、０．３３ ミリモル)をジオキサン−水（３：１）(１５ml)中の水酸化リチウム(５０mg、１ ．２０１０ミリモル)の溶液に加える。反応混合物を室温で３時間撹拌する。反 応混合物に水(２０ml)を加え、ＫＨＳＯ4溶液を加えて溶液のｐＨを４．００に 調節する。溶液を凍結乾燥して得られる固体を次いで水に溶解し、プレパラティ ブ逆相（Ｃ18）ＨＰＬＣで精製する。純度＞９９％の標記化合物含有分画を合わ せ、凍結乾燥して生成物(１１２mg、収率２３．１％)を無色羽毛状固体で得る。 m.p.１３１〜１４３℃。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２２（ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ2 Ｏ＝１３：２：５）。ＨＰＬＣ：保持時間１６．８分；Ｖydac−Ｃ１８（４． ６×２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、０．１％ＴＦＡを含有する水およびアセト ニトリル，２０〜５０％アセトニトリル，３０分；波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ ／分。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０．７−０．８（ｍ，ＣＨ 3）、１．５＆２． ４（ｍ，ＣＨ2）、１．９（ｓ，ＳＣＨ3）、３．１９−４．０（ｍ，大員環プロ トンおよびＣＨ 2）、４．２および４．４（ｍ，ＣＨ）、７．２−７．６（ｍ， ベンゼン環）、８．０（ｓ，ＣＨＯ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ１０２７（Ｍ＋Ｈ ）+。 元素分析(Ｃ49Ｈ74Ｎ10Ｏ12Ｓ1・１．０５ＣＦ3ＣＯＯＨ・５．７０Ｈ2Ｏとし て) 計算値：Ｃ４６.４５；Ｈ６.３９；Ｎ１０.１４；Ｓ２.３２；Ｆ９.０８ 実測値：Ｃ４６.５４；Ｈ６.１６；Ｎ１０.００；Ｓ２.５２；Ｆ８.８５。（脱 着カールフィッシャー）。 Ｅ．１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニル アラニル−Ｌ−イソロイシニル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]− １,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリ ニウム塩の製造 ＧｄＣｌ3(９．９４５ｍＭ溶液３．６ml、０．０３４８ミリモル)を１０−[(( Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−イ ソロイシニル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０− テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸(４０mg、０．０３１９ミリモ ル)と混合する。反応混合物を４０℃で加熱する。反応混合物を加熱しながら、 ｐＨを ゆっくりと７まで上げる。生成物をセミ−プレパラティブＨＰＬＣ法で単離する 。生成物含有分画をすべて集め、窒素気流下、４０℃にて濃縮する。最終溶液を 凍結乾燥する(２１.３mg、収率５７％)。 元素分析(Ｃ49Ｈ71Ｎ10Ｏ12ＧｄＳ・４.８Ｈ2Ｏとして) 計算値：Ｃ４６.４４；Ｈ６.４０；Ｎ１１.０５；Ｓ２.５３； 実測値：Ｃ４６.５２；Ｈ６.３２；Ｎ１０.９７；Ｓ２.４７； ＦＡＢ Ｍａｓｓ：ｍ／ｅ１１７９−１１８５（ｍ＋Ｈ）+。 実施例９ １０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラ ニル−Ｌ−アスパルチル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４, ７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム 塩 [Ｇｄ(ｆｏｒ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−ＡＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の合 成 Ａ.１０−[((Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−β−ｔ−ブトキシアスパルチル)−Ｎ−（ ４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカ ン−１,４,７−トリ酢酸トリメチルの製造 無水アセトニトリル(１５ml)中のβ−ｔ−ブチル−ｔ−Ｂｏｃ−アスパルテー ト(１.００g、３.４６ミリモル)、１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミ ド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチ ル・５塩酸塩(２.７３g、３.８０ミリモル)およびＢＯＰ試薬(１.６８g、３.８ ０ミリモル)の混合物に、トリエチルアミン(１.９２g、８１.９７ミリモル)を 加え、窒素雰囲気下、室温にて９時間撹拌する。次いで、反応混合物を水(１５m l)で処理し、回転蒸発器で溶媒を除去して濃厚なペースト状物を得る。次いで該 ペースト状物をジクロロメタン溶液としてシリカゲルカラムに充填し、カラムを ＣＨ2Ｃｌ2−ＣＨ3ＯＨ（９５：５）混合物で溶離する。生成物含有分画を集め 、蒸発して、標記化合物(２.４０g、収率８６％)をオフホワイト色の固体で得る 。m.p.１０４〜１０７℃。ＨＰＬＣ：保持時間１２.５分；Ｖydac−Ｃ１８（４. ６×２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、０.１％ＴＦＡを含有する水およびアセト ニトリル，２０〜５０％アセトニトリル，３０分；ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3Ｃｌ3）δ１.５２（２ｓ，ｂｏｃ基）、２.６３− ３.５２（ｍ，大員環−ＨおよびＣＨ2）、４.５５（ｍ，１Ｈ）、５.８７（ｂｄ ，１Ｈ）、７.４５（ｍ，Ａｒ−Ｈ）、および８.７７（２ｓ）；ＦＡＢ ＭＳ： ｍ／ｅ８０８（Ｍ＋Ｈ）+。 Ｂ.１０−[Ｌ−アスパルチル−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]− １,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチルの 製造 無水ＣＨ2Ｃｌ2中の実施例９Ａの生成物(２.０g、０.１５ミリモル)の溶液に トリフルオロ酢酸を加え、反応混合物を室温にて４時間撹拌する。反応混合物を 減圧蒸して溶媒を除去し、トリチュレートして標記化合物(１.９６g、収率９２ ％)をオフホワイトの固体で得る。このようにして得られる生成物をさらに精製 することなく次工程に用いる。m.p.１７８〜１８１℃。ＨＰＬＣ：保持時間１３ .１分；Ｖydac−Ｃ１８（４.６×２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、０.１％ＴＦ Ａを含有する水およびアセトニトリル０〜５０％，アセトニトリル，５０分；Ｕ Ｖ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ２.３８（ｍ）、２. ９５−３.３８（ｍ）、３.７４（ｍ）および７.２５−７.４８（ｍ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ６５２（Ｍ＋Ｈ）+。 Ｃ.１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−フェニルアラニ ル−Ｌ−アスパルチル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７ ,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチルの製造 ＤＭＦ(５ml)中の実施例９Ｂの生成物(０.３０g、０.４６ミリモル)の溶液を 減圧蒸発して２ｍｌ以下にする。別のフラスコにて、Ｎ−ｆｏｒ−Ｍｅｔ−Ｌｅ ｕ−Ｐｈｅ(０.２０g、０.４５ミリモル)を、窒素雰囲気下、室温にて、無水Ｄ ＭＦ(５ml)１，１−カルボニルジイミダゾール(０.０８g、０.４５ミリモル)で １０分間処理する。この溶液に、ＤＭＦ中の１０−[Ｌ−アスパルチル−Ｎ−（ ４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカ ン−１,４,７−トリ酢酸トリメチルを加え、混合物を室温で２時間撹拌する。次 いで、水(５ml)を加え、溶媒を減圧除去して標記化合物を濃厚なペースト状物で 得る。さらに精製するために、粗物質をＣＨ2Ｃｌ2溶液としてシリカゲルカラム に充填し、カラムをＣＨ2Ｃｌ2−ＣＨ3ＯＨ（９５：５）混合物で溶離する。生 成物含有分画を集め、蒸発して、生成物(０.３５ｇ、収率７１％)を濃厚な無色 のペースト状物で得る。ＨＰＬＣ：保持時間１５.６分；Ｖydac−Ｃ１８（４.６ ×２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、０.１％ＴＦＡを含有する水およびアセトニ トリル２０〜５０％アセトニトリル，３０分；ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ ／分。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０.７５（２ｄ）、１.４２（ｍ）、１.８４（ ｍ）、２.３８（ｍ）、２.９２−３.３４（ｓ＆ｍ）、３.７４（ｍ）、４.１５ −４.７３（ｍ）、７.２５（ｍ）、７.４８（ｍ）および８.０５（ｓ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ１０７１（Ｍ＋Ｈ）+。 Ｄ.１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルア ラニル−Ｌ−アスパルチル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１, ４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸の製造 ジオキサン(１０ml)中の１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイ シル−フェニルアラニル−Ｌ−アスパルチル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）ア セトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸 トリメチル(０.３０g、０.２８ミリモル)の溶液を水酸化リチウム(０.０５g、１ .２ミリモル)の水溶液で処理し、室温にて３０分間撹拌する。次いで、反応物の ｐＨを、ＫＨＳＯ4溶液で４.０に調節する。次いで、溶液を水(１００ml)で希釈 し、逆相カラムに付し、２０％アセトニトリル−水（０.１％ＴＦＡ）混合物で 溶離する。生成物含有分画を合わせ、凍結乾燥して生成物(０.３５g、収率７１ ％)を無色羽毛状固体で得る。m.p.１３８〜１４０℃。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０.１５（ ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ2Ｏ＝１３：２：５）。ＨＰＬＣ：保持時間１０.７ 分；Ｖydac−Ｃ１８（４.６×２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、０.１％ＴＦＡを 含有する水およびアセトニトリル，２０〜５０％アセトニトリル，３０分；ＵＶ 波長２３０ｎｍ;流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０.７５（２ｄ）、 １.４２（ｍ）、１.８４（ｍ）、２.３８（ｍ）、２.９２−３.３４（ｓ＆ｍ） 、３.７４（ｍ）、４.１５−４.７３（ｍ）、７.２５（ｍ）、７.４８（ｍ）お よび８.０５（ｓ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ１０７１（Ｍ＋Ｈ）+。 元素分析(Ｃ47Ｈ68Ｎ10Ｏ14Ｓ1・１.０５ＣＦ3ＣＯＯＨ・５.７０Ｈ2Ｏとして ) 計算値：Ｃ５４.８５；Ｈ６.６６；Ｎ１３.６１；Ｓ３.１２；Ｆ７.８８ 実測値：Ｃ５４.９５；Ｈ６.３６：Ｎ１３.４１；Ｓ３.０１；Ｆ７.６５。（脱 着カールフィッシャー）。 Ｅ.１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルア ラニル−Ｌ−アスパルチル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１, ４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガドリニウ ム塩の製造 実施例６Ｃに記載した方法にしたがってガドリニウム塩を調製する。収率７ ５％。 元素分析(Ｃ47Ｈ64Ｎ10Ｏ14ＧｄＳ・３Ｎａ.５.７Ｈ2Ｏとして) 計算値：Ｃ４２.４２；Ｈ５.９１；Ｎ１０.５３； 実測値：Ｃ４１.９５；Ｈ５.３１；Ｎ１０.４３。 ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ１１８４.３（Ｍ＋Ｈ）+。 実施例１０ １０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラ ニル−グリシル−グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル ）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ 酢酸・モノガドリニウム塩 [Ｇｄ(ｆｏｒ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ− Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＡＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の合成 Ａ.Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルテトラグリシンの製造 ＤＭＦ−水(５０ml、１：２)中のテトラグリシンの溶液をジ−ｔ−ブチルカー ボネート(０.９７g、４.４５ミリモル)およびトリエチルアミン(１.０g、９.８ ８ミリモル)で処理し、反応混合物を室温で１５分間撹拌する。1Ｎ ＨＣｌを加 えて反応混合物のｐＨを４に調節し、蒸発乾固する。このようにして得られる固 体をクロロホルムで洗浄して、ほとんど定量的収量(１.５g)の生成物をオフホワ イトの固体で得る。m.p.１６８〜１７１℃。ＨＰＬＣ：保持時間１６.４５分； Ｖydac−Ｃ１８（４.６×２５０ｍｍ）カラム：直線勾配、０.１％ＴＦＡを含有 する水およびアセトニトリル０〜３５％アセトニトリル，３５分；ＵＶ波長２３ ０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ１.４５（ｓ）、２.８１（ ｓ）、３.８４（ｓ）および４.１４（ｓ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ３４７（Ｍ＋ Ｈ）+。 Ｂ.１０−[((Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−グリシル−グリシル−グリシ ル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０− テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチルの製造 無水ＤＭＦ(２０ml)中のＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニルテトラグリシン(１. ０g、２.８９ミリモル)、１０−[Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド]−１, ４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル・５塩 酸塩(１.７１g、３.１９ミリモル)およびＢＯＰ試薬(１.４１g、３.１８ミリモ ル)の混合物に、トリエチルアミン(０.６５g、６.４２ミリモル)を加え、室温に て１５時間撹拌する。塩化アンモニウム(２ｇ)の水溶液(５ml)を加え、５分間撹 拌する。溶媒を減圧蒸発した後、得られる粗固体を溶離剤としてＨ2Ｏ−アセト ニトリル（０.１％ＴＦＡ）を用いるセミープレパラティブＣ１８カラムで精製 する。生成物含有分画を集め、凍結乾燥しして、生成物(１.４０g、収率６０％) を無色羽毛状固体で得る。m.p.１２０〜１２２℃。ＨＰＬＣ：保持時間２０.２ 分；Ｖydac−Ｃ１８（４.６×２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、０.１％ＴＦＡを 含有する水およびアセトニトリル２０〜５０％アセトニトリル，３０分；ＵＶ波 長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０.７６（２ｄ）、 １.２１（ｓ）、１.４３（ｍ）、１.８８（ｍ）、２.３９（ｍ）、２.９２−３. ３４（ｍ）、３.７２（ｍ）、４.１５−４.７３（３ｍ）、７.１５（ｍ）；ＦＡ Ｂ ＭＳ：ｍ／ｅ８６５（Ｍ＋Ｈ）+。 Ｃ.１０−[グリシル−グリシル−グリシル−グリシル−Ｎ−(４−アミノフェ ニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７− トリ酢酸トリメチルの製造 メタノール(１０ml)中の１０−[((Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−グリシ ル−グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミ ド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチ ル(１.４０g、１.６２ミリモル)をＨＣｌで飽和したメタノール(５ml)で処理し 、室温で１０分間撹拌する。回転蒸発器にて溶媒を蒸発した後、得られるペース ト状物をエーテルでトリチュレートして標記化合物(１.４０g；ほぼ定量収量)を オフホワイト固体で得る。m.p.１４５〜１４８℃。ＨＰＬＣ：保持時間６.２８ 分；Ｖydac−Ｃ１８（４.６×２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、０.１％ＴＦＡを 含有する水およびアセトニトリル２０〜５０％アセトニトリル，３０分；ＵＶ波 長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０.７６（２ｄ）、 １.４５（ｍ）、１.８９（ｍ）、２.４２（ｍ）、２.７２−３.５４（ｍ）、３. ８２（ｍ）、４.１５−４.７３（３ｍ）、７.１５（ｍ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ ７６５（Ｍ＋Ｈ）+。 Ｄ.１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルア ラニル−グリシル−グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニ ル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−ト リ酢酸トリメチルの製造 無水ＤＭＦ(１５ml)中の、１０−[グリシル−グリシル−グリシル−グリシル −Ｎ−(４−アミノフェニル)アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロ ドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリメチル(１.０g、１.３１ミリモル)、Ｎ−ホ ルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ(０.６３g、１.４４ミリモル)およびＢＯＰ試 薬(０.６４g、１.４４ミリモル)の混合物に、トリエチルアミン(０.３０g、２. ９６ミリモル)を加え、窒素雰囲気下、室温にて１５分間撹拌する。塩化アンモ ニウム(２g)の水溶液(５ml)を加え、５分間撹拌する。溶媒を減圧蒸発した後、 得られる粗固体を、溶離剤としてＨ2Ｏ−アセトニトリル（０.１％ＴＦＡ）を用 いるセミープレパラティブＣ１８カラムで精製する。生成物含有分画を集め、凍 結乾燥しして、生成物(０.６２g、収率４０％)を得る。m.p.１１８〜１２１℃。 ＨＰＬＣ：保持時間１４.２１分；Ｖydac-Ｃ１８（４.６×２５０ｍｍ）カラム ；直線勾配、０.１％ＴＦＡを含有する水およびアセトニトリル２０〜５０％ア セトニトリル，３０分；ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（Ｃ Ｄ3ＯＤ）δ０.７５（２ｄ）、１.４３（ｍ）、１.８２（ｍ）、２.３９（ｍ） 、２.６２−３.４４（ｍ）、３.６２（ｍ）、４.１５−４.７３（３ｍ）、７.１ ５（ｍ）、７.４８（ｍ）および８.０４（ｓ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ１１８４. ５（Ｍ＋Ｈ）+。 Ｅ.１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルア ラニル−グリシル−グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニ ル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−ト リ酢酸の製造 ジオキサン−水(５０ml、３：１)中の１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニ ル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−グリシル−グリシル−グリシル−グ リシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラ アザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸(０.６０g、０.５１ミリモル)にＬｉ ＯＨ(８５mg、２.０２ミリモル）を加え、室温で撹拌する。６０分後、反応混合 物を１ＮＨＣｌで処理してｐＨ４.０に調節し、水で希釈して２００mlにする。 次いで、溶液を、水−アセトニトリル（０.１％ＴＦＡ）で溶離するセミ−プレ パラティブＨＰＬＣに付す。生成物含有分画を合わせ、凍結乾燥して生成物(０. ２５g、収率５１％)を無色羽毛状固体で得る。m.p.１４０〜１４３℃。ＴＬＣ： Ｒｆ＝０.１５（ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ2Ｏ＝１３：２：５）。ＨＰＬＣ： 保持時間９.０９分；Ｖydac−Ｃ１８（４.６×２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、 ０.１％ＴＦＡを含有する水およびアセトニトリル，２０〜５０％アセトニトリ ル，３０分；ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ ０.７９（２ｄ）、１.４１（ｍ）、１.８４（ｍ）、２.３８（ｍ）、２.９２− ３.３４（ｓ＆ｍ）、３.７４（ｍ）、４．１０−４.７２（４ｍ）、７.２４（ｍ ）、７.４７（ｍ）および８.０７（ｓ）；ｍ／ｅ１１４２.４（Ｍ＋Ｈ）+。 元素分析(Ｃ51Ｈ75Ｎ13Ｏ15Ｓ・２.０８ＣＦ3ＣＯＯＨ・０.６１Ｈ2Ｏとして) 計算値：Ｃ４７.６８；Ｈ５.６１；Ｎ１３.１１；Ｓ２.３１；Ｆ８.８３； 実測値：Ｃ４７.６８；Ｈ５.６５；Ｎ１３.０４；Ｓ１.９９；Ｆ８.５２。（脱 着カールフィッシャー）。 Ｆ.１０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルア ラニル−グリシル−グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニ ル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−ト リ酢酸・モノガドリニウム塩の製造 ＧｄＣｌ3(４９.７ｍＭ溶液０.９３ml、０.０４６２ミリモル)を１０−[((Ｎ −ホルミル−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−グリシル −グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド] −１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸のトリエチ ルアミン塩(６４.８２mg、０.０４６６５ミリモル)の水溶液と混合する。反応混 合物を５０℃で加熱する。反応混合物を加熱しながら、ｐＨをゆっくりと７まで 上げる。反応混合物がｐＨ７になった後、サンプルを放冷し、生成物をセミ−プ レパラティブＨＰＬＣ法で精製する。生成物含有分画をすべて集め、窒素気流下 、 ４０℃にて濃縮する。最終溶液を凍結乾燥する(５０mg、収率３９％)。 元素分析(Ｃ51Ｈ72Ｎ13Ｏ15ＧｄＳ・６.０Ｈ2Ｏとして) 計算値：Ｃ４３.５７；Ｈ６.０３；Ｎ１２.９５；Ｓ２.２８； 実測値：Ｃ４３.６９；Ｈ５.９５；Ｎ１２.８３；Ｓ２.１４； ＦＡＢ Ｍａｓｓ：ｍ／ｅ１２９４.４→１３００（ｍ＋Ｈ）+ガドリニウムパタ ーン。 実施例１１ １０−[((Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−グリシル −グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド] −１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノガド リニウム塩 [Ｇｄ（Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌ ｙ−ＡＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の合成 Ａ．１０−[((Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−グリ シル−グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトア ミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸の製造 メタノール中のＮ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇ ｌｙ−Ｇｌｙ−ＡＰＡ−ＤＯ３Ａ(実施例１０Ｄ、０．４５g、０．０８ミリモル )の溶液を２ＮＨＣｌで処理し、４０℃で４時間撹拌し、反応の進行を出発物質 の消滅としてＨＰＬＣ法でモニターする。反応混合物のｐＨを炭酸ナトリウム溶 液で５に調節する。サンプルをＨＰＬＣ法で精製する。生成物含有分画を合わせ 、凍結乾燥して生成物(０.２０g、収率５１％)を無色羽毛状固体で得る。m.p.１ ２ ４〜１２６℃。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０.１０（ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ2Ｏ＝１３ ：２：５）。ＨＰＬＣ：保持時間９.０９分；Ｖydac−Ｃ１８（４.６×２５０ｍ ｍ）カラム；直線勾配、０．１％ＴＦＡを含有する水およびアセトニトリル，２ ０〜５０％アセトニトリル，３０分：ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1 ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０.９０（２ｄ）、１.４２（ｍ）、１.８４（ｍ）、２ .４０（ｍ）、２.８２−３.３４（ｓ＆ｍ）、３.７４（ｍ）、４.１０−４.７２ （４ｍ）、７.２５（ｍ）、７.４４（ｍ）；ＭＳｍ／ｚ１１１４.２（Ｍ＋Ｈ）+ 。 元素分析(Ｃ50Ｈ74Ｎ13Ｏ14Ｓ・２.０６ＣＦ3ＣＯＯＨ・０.５１Ｈ2Ｏとして) 計算値：Ｃ４７.５７；Ｈ５.５１；Ｎ１３.２２；Ｓ２.４５；Ｆ８.６８； 実測値：Ｃ４７.６８；Ｈ５.３９；Ｎ１３.４１；Ｓ２.２１；Ｆ８.４９。（脱 着カールフィッシャー）。 Ｂ．１０−[((Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−グリ シル−グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトア ミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・モノ ガドリニウム塩の製造 ＧｄＣｌ3(４９.７ｍＭ溶液０.６５ml、０.０３２３ミリモル)を１０−[((Ｎ −Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−グリシル−グリシル −グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]−１,４,７ ,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸(４３.３mg、０.０３１ ９ミリモル)の水溶液と混合する。反応混合物を５０℃で数時間加熱する。反応 混合物を加熱しながら、ｐＨをゆっくりと７．５まで上げる。反応混合物がｐＨ ７．５になった後、サンプルを放冷し、生成物をセミ−プレパラティブＨＰＬＣ 法で精製する。生成物含有分画をすべて集め、窒素気流下、４０℃にて濃縮する 。最終溶液を凍結乾燥する(３０mg、収率７３％)。 元素分析(Ｃ50Ｈ71Ｎ13Ｏ15ＧｄＳ・１１Ｈ2Ｏとして） 計算値：Ｃ４０.９７；Ｈ６.４４；Ｎ１２.２７；Ｓ２.１７； 実測値：Ｃ４１.０７；Ｈ５.４５；Ｎ１１.６５；Ｓ１.９４； ＦＡＢ Ｍａｓｓ：ｍ/ｅ１２６７→１２７１(ｍ＋Ｈ)+ガドリニウムパターン。 実施例１２ １０−[((ｔ−Ｂｏｃ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル− グリシル−グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセ トアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸・ モノガドリニウム塩 [Ｇｄ(ｔ−Ｂｏｃ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇ ｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＡＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の合成 Ａ．１０−[((ｔ−Ｂｏｃ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニ ル−グリシル−グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル） アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢 酸の製造 ＤＭＦ／水(２：１、１０ml)中のＭｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ− Ｇｌｙ−Ｇｌｙ(０．２g、０．０４ミリモル)の溶液に、ジ−ｔ−ブチルジカー ボネートおよびトリエチルアミンを加え、室温で１５分間撹拌する。次いで、反 応混合物を１Ｎ ＨＣｌで処理し、ｐＨ４．０に調節する。反応混合物をＨＰＬ Ｃで精製し、すべての生成物含有分画を合わせ、凍結乾燥して硬い羽毛状固体( ０．１８g、収率５８％)を得る。m.p.１４８〜１５１℃。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０.２ ５（ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ2Ｏ＝１３：２：５）。ＨＰＬＣ：保持時間１ ９.４５分；Ｖydac−Ｃ１８（４.６×２５０ｍｍ）カラム；直線勾配、０.１％ ＴＦＡを含有する水およびアセトニトリル，２０〜５０％アセトニトリル，３０ 分；ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）δ０.７８ （２ ｄ）、０.９８（ｓ）、１.４６(m)、１.８５（ｍ）、２．３８（ｍ）、２.９４ −３.３８（ｓ＆ｍ）、３.７８（ｍ）、４.１０−４.７４（４ｍ）、７.２９（ ｍ）、７.４９（ｍ）および８．０７（ｓ）；ＭＳ ｍ／ｚ１２１４.５（Ｍ＋Ｈ ）+。 元素分析(Ｃ55Ｈ82Ｎ13Ｏ16Ｓ・２.０９ＣＦ3ＣＯＯＨ・１.２６Ｈ2Ｏとして) 計算値：Ｃ４８.２１；Ｈ５.９２；Ｎ１２.３５；Ｓ２.１７；Ｆ８.０８； 実測値：Ｃ４８.２１；Ｈ５.７９；Ｎ１２.０５；Ｓ２.４１；Ｆ８.０９。（脱 着カールフィッシャー）。 Ｂ．１０−[((ｔ−Ｂｏｃ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニ ル−グリシル−グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル） アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢 酸・モノガドリニウム塩の製造 ＧｄＣｌ3(４９.７ｍＭ溶液０.７４ml、０.０３６７ミリモル)を１０−[((ｔ −Ｂｏｃ−Ｌ−メチオニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−グリシル− グリシル−グリシル−グリシル)−Ｎ−（４−アミノフェニル）アセトアミド]− １,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸(５３．１０mg 、０.０３６７ミリモル)の水溶液と混合する。反応混合物を５０℃で数時間加熱 する。反応混合物を加熱しながら、ｐＨをゆっくりと７まで上げる。反応混合物 がｐＨ７になった後、サンプルを放冷し、生成物をセミ−プレパラティブＨＰＬ Ｃ法で精製する。生成物含有分画をすべて集め、窒素気流下、４０℃にて濃縮す る。最終溶液を凍結乾燥する(６２mg、収率９５％)。 元素分析(Ｃ55Ｈ78Ｎ13Ｏ16ＧｄＳ・８．５Ｈ2Ｏとして) 計算値：Ｃ４３.４７；Ｈ６.０５；Ｎ１１.９８；Ｓ２.１１； 実測値：Ｃ４３.５２；Ｈ６.０５；Ｎ１１.６３；Ｓ２.０５； ＦＡＢ Ｍａｓｓ：ｍ／ｅ１３６６．３→１３７１（ｍ＋Ｈ）+ガドリニウムパタ ーン。 実施例１３ １０−[((Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルア ラニル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−チロシル)−Ｌ−リシン−Ｎ−Ｎ−（４−アミ ノフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１, ４,７−トリ酢酸・モノガドリニウム塩 [Ｇｄ(ｆｏｒ−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈ ｅ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−ＡＰＡ−ＤＯ３Ａ)]の合成 Ａ．ｐ−Ｎ−クロロアセチルフェニル酢酸の製造 ジメチルアセトアミド(４０ml)にｐ−アミノフェニル酢酸(３．０g、２０ミリ モル)を加え、０℃で冷却する。激しく撹拌しながら塩化クロロアセチル(３．１ g、２８ミリモル)を加える。次いで、反応混合物を室温で１時間撹拌する。反応 混合物を蒸発乾固し、残渣に水(３０ml)を激しく撹拌しながら加える。濾過後、 標記化合物の粗生成物(４．５g)を得る。さらに精製するために、６５％ＥｔＯ Ｈから再結晶して生成物(２．８３g、収率６２％)を得る。m.p.１４１〜１４２ ℃。ＨＰＬＣ：保持時間９．７５分；Ｖydac−Ｃ１８（４.６×２５０ｍｍ）カ ラム；アイソクラティック、０.１％ＴＦＡを含有する水およびアセトニトリル ，１５％アセトニトリル；ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ ＤＭＤＯ−ｄ6）δ２．９１＆４．２８（ｓ）および７．１８−７．４５（ｍ） ；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ２２８（Ｍ＋Ｈ）+および２４５（Ｍ＋ＮＨ4）+。 Ｂ．１０−[（４−カルボキシメチルフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１ ０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリｔ−ブチルの製造 １,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリｔ−ブ チル(３．３g、５．５ミリモル)およびＫ2ＣＯ3(３g)をジメチルアセトアミド( ２５ml)に加える。ジメチルアセトアミド(１０ml)中のｐ−ｎ−クロロアセチル フェ ニル酢酸(１．１g、５ミリモル)を加え、反応混合物を４５℃で２９時間撹拌す る。反応混合物を濾過し、蒸発乾固する。残渣をプレパラティブＨＰＬＣで精製 して、生成物(１．６４g、収率４６．５％)を得る。m.p.１３８〜１４０℃。Ｈ ＰＬＣ：保持時間５．１８分；Ｖydac−Ｃ１８（４．６×２５０ｍｍ）カラム； アイソクラティック、０.１％ＴＦＡを含有する水およびアセトニトリル，４０ ％アセトニトリル；ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ＤＭＤ Ｏ−ｄ6）δ１．３２（ｍ）、２．７１−４．０２（ｍ）、７．３１−７．８１ （ｍ）および９．０１（ｓ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ７０６（Ｍ＋Ｈ）+。 Ｃ．Ｎ（γ）−[[４−[[[１,４,７−トリス(ｔ−ブトキシカルボキシメチル) −１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１０−イル]アセチル]アミノ]フ ェニル]アセチル]−Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェ ニルアラニル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−チロシル)−Ｌ−リシンの製造 １０−[（４−カルボキシメチルフェニル）アセトアミド]−１,４,７,１０− テトラアザシクロドデカン−１,４,７−トリ酢酸トリｔ−ブチル(１０５mg、純 度６０％)およびカルボニルジイミダゾール(１６．２mg、０．１ミリモル)をＤ ＭＦ(０．１ml)中で混合し、窒素雰囲気下、１０分間撹拌する。ＤＭＦ(１ml)中 のＮ−ホルミル−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ(６１．８m g、０．０７５ミリモル)およびＥｔ3Ｎの混合物（１：１）を加える。次いで、 窒素雰囲気下、反応混合物を室温で２２時間撹拌する。反応混合物を蒸発乾固す る。激しく撹拌しながら水(１０ml)を加える。不溶生成物を濾過して単離し、洗 浄および乾燥する。収量７９．８mg(収率７０％)。m.p.１６８〜１７１℃。ＨＰ ＬＣ：保持時間１４．２分；Ｖydac−Ｃ１８（４．６×２５０ｍｍ）カラム；ア イソクラティック、０.１％ＴＦＡを含有する水およびアセトニトリル，４０％ アセトニトリル；ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ＤＭＤＯ −ｄ6）δ０．７０−１．８４（ｍ）、２．３８（ｍ）、２．９２−３．５８（ ｍ）、３．７４（ｍ）、４．１０−４．７２（ｍ）および８．１０（ｓ）；ＦＡ Ｂ ＭＳ：ｍ／ｅ１５１０．２（Ｍ−Ｈ）-、１５１１．６（Ｍ＋Ｈ）+および１ ５３３．６（Ｍ＋Ｎａ）+。 Ｄ．Ｎ（γ）−[[４−[[[１,４,７−トリス(カルボキシメチル)−１,４,７,１ ０−テトラアザシクロドデカン−１０−イル]アセチル]アミノ]フェニル]アセチ ル]−Ｎ−(Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラ ニル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−チロシル)−Ｌ−リシンの製造 トリフルオロ酢酸(０．５ml)中のＮ（γ）−[[４−[[[１,４,７−トリス(ｔ− ブトキシカルボキシメチル)−１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン−１０ −イル]アセチル]アミノ]フェニル]アセチル]−Ｎ−(Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロ イシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−チロシ ル)−Ｌ−リシン(１３３mg、０．０８８ミリモル)の溶液にアニソール(３１．３ mg、０．２９ミリモル)を加え、室温で２４時間撹拌する。溶媒を減圧蒸発した 後、残渣を５０％アセトニトリル−水(２５０ ３０ml)に溶解し、逆相プレパラ ティブＨＰＬＣにて精製する。生成物含有分画を合わせ、凍結乾燥して標記化合 物(３６．８mg、収率３１．２％)を白色羽毛状固体で得る。m.p.１５９〜１６２ ℃；ＨＰＬＣ：保持時間４．６１分；Ｖydac−Ｃ１８（４.６×２５０ｍｍ）カ ラム；直線勾配、４０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）／Ｈ2Ｏ（０．１％ ＴＦＡ）（ｐＨ２．０）；ＵＶ波長２３０ｎｍ；流速１ｍｌ／分。1ＨＮＭＲ（ Ｄ2Ｏ）：δ０．８３−０．８９（ＣＨ3）、３．１１−３．４６（大員環プロト ン）、１．３２−１．６８（ＣＨ2）、７．２４−７．５１（ベンゼン環）、８ ．１５（ＣＨＯ）；ＦＡＢ ＭＳ：ｍ／ｅ６７２．６（Ｍ＋２Ｈ）2+および（Ｍ ＋Ｈ）+。 元素分析(Ｃ67Ｈ97Ｎ12Ｏ17・１.２７Ｈ2Ｏ・１.９７ＴＦＡとして) 計算値：Ｃ５３.５９；Ｈ６.４３；Ｎ１０.５７； 実測値：Ｃ５３.１４：Ｈ６.３７；Ｎ１０.４３；Ｈ2Ｏ１．４４％，ＴＦＡ１４ ．１３％（脱着カールフィッシャー）。 Ｅ．Ｎ（γ）−[[４−[[[１,４,７−トリス(カルボキシメチル)−１,４,７,１ ０−テトラアザシクロドデカン−１０−イル]アセチル]アミノ]フェニル]アセチ ル]−Ｎ−(Ｎ−ホルミル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラ ニル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−チロシル)−Ｌ−リシン・ガドリニウム塩の製 造 ＧｄＣｌ3(４９.７ｍＭ溶液０.６７ml、０.０３３４ミリモル)をＮ（γ）−[[ ４−[[[１,４,７トリス(カルボキシメチル)−１,４,７,１０−テトラアザシクロ ドデカン−１０−イル]アセチル]アミノ]フェニル]アセチル]−Ｎ−(Ｎ−ホルミ ル−Ｌ−ノルロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ノルロイシ ル−Ｌ−チロシル)−Ｌ−リシン(５３．１１mg、０.０３３４ミリモル)の水溶液 と混合する。反応混合物を４０℃で加熱する。反応混合物を加熱しながら、ｐＨ をゆっくりと７まで上げる。反応混合物がｐＨ７になった後、サンプルを放冷し 、生成物をセミ−プレパラティブＨＰＬＣ法で精製する。生成物含有分画をすべ て集め、窒素気流下、４０℃にて濃縮する。最終溶液を凍結乾燥する(２８mg、 収率５４％)。 元素分析(Ｃ67Ｈ94Ｎ12Ｏ17Ｇｄ・１１．３Ｈ2Ｏとして) 計算値：Ｃ４７.３１；Ｈ６.９１；Ｎ９.９８； 実測値：Ｃ４７.７５；Ｈ６.５７；Ｎ９.４１； ＦＡＢ Ｍａｓｓ：ｍ／ｅ１４９５．４→１５０２（ｍ＋Ｈ）+ガドリニウムパタ ーン。 実施例１４ Ａ．天然およびＧｄ標識走化性ペプチドの結合親和性（Ｋｄ） 腹腔内滲出液由来のウサギ多形核白血球（ＰＭＮｓ）を用いて競合結合実験を 行った。単離したＰＭＮをアッセイ緩衝液で１×１０7細胞／ｍｌに希釈するが 、これは総結合を最適化する条件を同定する目的で最初に変化させた。アッセイ 緩衝液には、１５ｍＭのＨｅｐｅｓ，ｐＨ７．３、１４８ｍＭのＮａＣｌ、０． １５ｍＭのＣａＣｌ2および０．１％のＢＳＡ（脂肪酸フリー）を含まれる。天 然およびＧｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫの溶解度が小さいと いう理由から、これら２つのペプチドを１．５％のＢＳＡを含む緩衝液に溶解し た。放射性リガンドのスタンダードであるｆＭＬ3ＨＦを標準的アッセイ緩衝液 で希釈し、その２５ｍｌを、種々の被検ペプチドの公知の解離定数に応じて１０-13 Ｍ〜１０-3Ｍに希釈した走化性ペプチド(２５ml)を入れたポリプロピレンチ ュー ブに入れた。ペプチド混合物を入れたチューブを１５℃の水浴に入れ、平衡化し た。各チューブに、１００ｍｌのＰＭＮｓ（１×１０6）を加えて反応を開始す る。１５℃にて４５分後、氷冷アッセイ緩衝液(３ml)を加えて反応を終了する。 減圧濾過によりＧＦ／Ｃフィルター上に細胞を集める。フィルターをアッセイ緩 衝液(２×３ml)で洗浄し、次いで液体シンチレーションカウント用Ｅｃｏ−Ｓｃ ｉｎｔに置く。下記式を用いて特異的結合（％）を算出する： データを“リガンド”分析に付し、ｆＭＬＦのＫｄに対する競合ペプチドのＫｄ （１／Ｋａ）を決定する。図１は、５種の天然の走化性ペプチド−ｆＭＬＦ，ｆ ｎＬＬＦ，ｆＭＬＦＫ，ｆｎＬＬＦｎＬＹＫＤＤＤおよびｆｎＬＬＦｎＬＹＫ（ 白抜き記号）および５種のＧｄ標識誘導体（黒色記号）における結果を示す。図 １に示されるように、Ｇｄ標識および非標識走化性ペプチドの両方がｆＭＬ3Ｈ Ｆに競合する。 ペプチドは、結合親和性が最高である天然のペプチドｆＭＬＦからなるメジャ ーグループおよび結合親和性が低い２つのガドリニウムペプチドＧｄ−ｆＭＬＦ とＧｄ−ｆｎＬＬＦからなるマイナーグループという２つのグループに分けられ る。“リガンド”プログラムにより得られた結合親和性をまとめて表Ｉとして示 す。 Ｂ．ペプチドの鎖長と結合親和性との関連性 表１は、キレート形成によって、テトラペプチドの方がトリペプチドよりも大 きく結合親和性が低下したことも示す。特に、Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆ ＭＬＦＫは、ｆＭＬＦと同じオーダーの大きさの結合親和性を有する。このこと は、後記図２において、コンピューター創製分子モデル（Ｈｙｐｅｒｃｈｅｍ） から決定されたＧｄ−ホルミル原子間距離に対して、会合定数（Ｋａ）のｌｏｇ10 をプロットしたグラフとして示される。このグラフには、天然のペプチドのＧ ｄ−ＡＰＡ−ＤＯ３Ａ誘導体のＧｄ−ホルミル原子間距離によって決定されるｘ 軸上の位置も示される。図２は、Ｇｄ−ホルミル原子間距離の関数としてのｌｏ ｇ10Ｋａを示すものである。 このグラフ（図２）は、走化性ペプチドのガドリニウムキレートとホルミル基 間の距離（伸長された直線アレンジメントに基づいたもの）が増加するにつれて 結合強度（Ｇｄ−ペプチドのＰＭＮｓに対する）も増加することを示す。比較す ると、天然のペプチドは、長さに対する結合の異なる程度がより小さいという傾 向を示す。Ｇｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆ−ＭＬＦＫの結合は、その天然のペプ チドよりも大きい。この増加の理由は、この段階では明らかではないが、リシン のイオン化しうるアミンが非荷電（およびより脂質親和性の大きい）のフェニル チオウレア部位へ変換することによるものかもしれない。いずれの場合において も、影響の大きさは、トリおよびテトラペプチドの間の差異と比べて大きくはな い。 実施例１５ Ａ．ｆＭＬＦおよびＧｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆ−ＭＬＦＫに応答したＰＭ Ｎの走化性のリアルタイムビデオ分析 理想的には、受容体の活性化を回避することが、感染部位への血管外遊出およ び化学無定位運動性のために、血液中の標識されたＰＭＮｓを保存するので、Ｇ ｄキレート形成走化性ペプチドは、受容体のアンタゴニストとなるべきである。 ジグモンドチェインバー(Zigmond Chamber)およびリアルタイムビデオ顕微鏡を 用い、種々のＰＭＮｓの配向の度合を決定する。滲出液ＰＭＮｓまたは指刺し血 液〜１００μｌから得たヒト末梢ＰＭＮｓをカバーガラスに載せ、５％ＣＯ2雰 囲気下、３７．５℃で２０分間インキュベートし、ＰＭＮｓをグラスに付着させ る。カバーガラスを全血サンプルの場合と同様に洗浄し、次いで細胞をジグモン ドチェインバーのブリッジおよびウエルに入れる。インキュベーション緩衝液（ １０ｍＭのＨＥＰＥＳで緩衝されたハンクス液、１％ゼラチン）中の所定の濃度 のペプチドをブリッジのいずれかの側の２つのウエルのうちのひとつに入れ、イ ンキュベーション緩衝液を第２のウエルに入れる。得られる勾配における細胞の 配向をウエル充填後２０分間記録する。ペプチドを収容するチェインバーへの配 向をカウントされた全ＰＭＮｓのパーセントによって走化性を決定する。 このデータ（表３）から、天然のペプチドｆＭＬＦがアゴニストであること； およびＧｄ−標識誘導体であるＧｄ−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫおよびＧｄ−ｆＭＬＦ Ｋもまたアゴニストであることが確認される。ＰＭＮｓがジグモンドチェインバ ーにおいて最大に配向する濃度は、特定のペプチドに対するＰＭＮｓ上の受容体 のおよそのＫｄに対応するので、ジグモンドチェインバーの結果から、競合結合 実験から決定されたように、天然およびＧｄ−標識ペプチドのＫｄも確認される 。これらのデータは、Ｇｄ−キレート形成ペプチドに応答した公知のＰＭＮ走化 性に関する第１の説明となる。 これらのデータから、ヒト、ウサギ、マウスおよびラット由来のＰＭＮｓ上の ホルミルペプチド受容体の結合親和性における差異も説明される。マウスＰＭＮ ｓ上の受容体のｆＭＬＦに対するＫｄは、およそ１０-6Ｍであり、これは、ササ ガワらのＩmmunopharmacol Immunotoxicol.１９９２．１４：６２５〜６３５の 結果と一致する。ヒトおよびウサギＰＭＮ受容体のＫｄ値は〜１０-9Ｍであり、 マウスＰＭＮｓの値よりも３オーダー低い。 実施例１６ Ａ．Ｇｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＫＹ、Ｇｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ ）−ｆＭＬＦＫおよびＰｒｏＨａｎｃｅ（登録商標）を用いたインビトロＭＲＩ 実験 ウサギ末梢ＰＭＮｓを用いて試験管ＭＲＩ実験を行う。非タンパク質Ｇｄ−コ ントロールとして、ＰｒｏＨａｎｃｅ（ガドテリドール，ＨＰ−ＤＯ３Ａ）を用 い、ＰＭＮｓを含まないブランクをコントロールとして用いる。 試験管ＭＲＩ実験では、（血小板および他のタイプの白血球が含まれるのを避 けるために）ラット末梢血液ＰＭＮｓよりもウサギ腹腔ＰＭＮｓを使用する。非 タンパク質Ｇｄ−コントロールとしてＰｒｏＨａｎｃｅを使用し、ゲル化／沈殿 Ｇｄ−ペプチドによって生じる画像を検出するためのＰＭＮｓを含まないネガテ ィブコントロールもまた使用する。細胞と上清の間の物質の分散の分析を慎重に 行う。受容体結合実験によって１．５％ＢＳＡの存在下にＰＭＮｓがｆＭＬ3Ｈ Ｆを結合しうることがわかったので、Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦ ｎＬＹＫおよびＧｄ−(ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ)−ｆＭＬＫの両方に対する一連の試験 管(ビューレット管)実験をアッセイ緩衝液中に１．５％のＢＳＡを加えて行う。 ペプチド、細胞および緩衝液を含む最終容量１ml中において所望の濃度が得ら れるように、放射標識および非標識Ｇｄ−ペプチドの量を算出する。揺り子プレ ート上、室温にて３０分間結合実験を行う。５００ｘｇで２分間の遠心分離にて 細胞を集める。試験管を磁石内に置き、ペレットをイメージングする。上清液を 除去し、細胞を緩衝液で２回洗浄し、ペレットを再度イメージングする。トレー サー量の153Ｇｄ−ペプチドを加えて、ペレットおよび洗液中の総ペプチド濃度 を測定する。各実験サンプルの特異的活性（ｃｐｍ／ミリモル）が得られる。す べての実験において同じ条件を用いて上清と最終ペレットの両方のシグナル強度 （ＳＩ）を測定する。最初のイメージングで、ペレットの上の試験管の先細の端 において（イメージングスライスが５ｍｍなので）、上清の初期シグナル強度を 測定する。すべての洗浄工程を終えた後、最後のＭＲＩから最終ペレットのシグ ナル強度を測定する。ＰＭＮの受容能は各細胞プレパレーションによって異なり 、この変異性が試験管実験の結果に重要な影響を与える。ｆＭＬ3ＨＦを用いて 測定した特異的結合が反応時間５分間で５〜８％である場合のみ実験を開始する 。Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫ、Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３ Ａ）−ｆＭＬＦＫおよびＰｒｏＨａｎｃｅを用いた実験の詳細およびイメージン グの結果を表４、５および６に示す。 Ｂ．ペレット濃度の関数としての細胞ペレットのシグナル強度 ガドリニウム錯体のペレット濃度の関数としてのペレットのシグナル強度は最 大約４に到達する（図３）。２つのペプチド、Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆ ｎＬＬＦｎＬＹＫおよびＧｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆＭＬＦＫは類似してお り、同じ濃度のＰｒｏＨａｎｃｅの４倍以上のシグナルである。これは、おそら く、これらの２つのクラスの化合物の異なる緩和度の関数であろう。２つのペプ チドのシグナル強度とペレット濃度間の関係が類似していることから、それらが 同じ状況にあることが示唆される。Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆＭＬＦＫが 試験したすべての濃度において可溶性であると考えられるので、ペレット中に存 在するＧｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫは、細胞ペレット内部 に物質的にに捕捉された沈殿としてよりもむしろインターナライズされた物質と して存在すると考えられる。これらの細胞ペレットを洗浄すると、物質の６７％ が細胞から洗い出すことができないが、イヌリンでは９６％を洗い出すことがで きることがわかる。Ｇｄ−ペプチドとインキュベーションした後のペレットのシ グナル強度は、同じ濃度のＰｒｏＨａｎｃｅのシグナル強度よりも高いことが図 ３に示される。 Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫは、初期濃度１５ｍＭにお いてイメージング可能なペレットを作製するが（ＳＩはバックグラウンドの３． ９倍）、Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆＭＬＦＫで同じ相対シグナル強度を得 るために必要な初期濃度は３００μＭである。ＰｒｏＨａｎｃｅの最高シグナル 強度は初期濃度１０５０ｍＭにおける１．６である（このシグナル強度は１ｍＭ のＧｄ−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫにおいて達成される）。 実施例１７ Ａ．Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫと細胞の会合 Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫとＰＭＮｓとの会合を研究 することによって、取り込みのメカニズムへの洞察が得られ、取り込みが受容体 によって媒介されるかどうか、あるいはＰＭＮ表面との非特異的会合が非特異的 相互作用によるものかどうかについて評価をすることができる。下記実験は、ウ サギＰＭＮｓへの取り込みについてＧｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎ ＬＹＫとＧｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆＭＬＫを比較するものであり、ウサギ 末梢ＰＭＮｓとＧｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆＭＬＦＫおよびＧｄ−（ＩＰＡ −ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫの会合（分子／細胞）を図４に示す。総結合 を比較するために、ウサギＰＭＮｓの２つのアリコートを０．１％ＢＳＡ含有、 脂肪酸フリーのＨＢＳＳ５ｍｌに懸濁し、〜３．８×１０9ＰＭＮｓ／アリコー トとする。両方のペプチドを加えて最終濃度２０９ｎＭにする。室温にて３０分 間ペプチドを細胞と反応させる。細胞を遠心分離によって集め、ＨＢＳＳで洗浄 し、次いで、ペレットに会合した放射活性をガンマカウンターで測定する。実験 の終了時における細胞に会合した放射活性はＧｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎ ＬＬＦｎＬＹＫで８．６５％、Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆＭＬＦＫで０． ３３％である。 ＰＭＮｓに会合するＧｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫ（ヘキ サ）は、Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆＭＬＦＫ（テトラ）の約６倍以上であ る。これらのデータは、Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫにお いて、より低い初期インキュベーション濃度（すなわち、１５ｍＭ）で、より高 いシグナル強度が得られた試験管ＭＲＩ実験の結果をサポートするものであり、 すべての被検Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫ濃度において、 Ｇｄ−（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆＭＬＦＫと比較して、より多い量のＧｄ−（Ｉ ＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫが、ＰＭＮペレットと会合する。 実施例１８ Ｇｄ−１５３（ｆｏｒ−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−(Ｎ(ｇ)) Ｌｙｓ−ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）の生体分散と血管外トレーサーの生体分散の比較 実験の２０時間前に、９匹のスプラーグ−ドーリーラット（２５０〜３５０ｇ ）の左直腸筋にヒト大腸菌（１０9）を植える。ラットをペントバルビタールナ トリウムで麻酔し、５ｍＣｉ(３．８×１０-7モル)のＧｄ−１５３（ｆｏｒ−Ｎ ｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−（Ｎ（ｇ））Ｌｙｓ−ＩＰＡ−ＤＯ３ Ａ）を約９ｍＣｉの99mＴｃ−ＤＴＰＡとともに静脈内注射する。注射の１、２ および４時間後に、動物を毎回３匹ずつ屠殺する。各動物から特定の臓器を除去 し、Ｔｃ−９９ｍについてアッセイする。屠殺の５日後（Ｔｃ−９９ｍが崩壊し た後）、組織をＧｄ−１５３についてアッセイする。結果は、注射後２時間まで は、非感染筋に対する感染筋のＧｄ−ペプチドの割合が、Ｔｃ−９９ｍの割合よ り大きい値であることを実証している。このことは、感染部位におけるＧｄ−ペ プチドの取り込みが、血管浸透性が増加することに基づいて予測される取り込み よりも多いことを示すので重要である。 実施例１９ Ｇｄ−１５３（ｆｏｒ−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−(Ｎ(ｇ)) Ｌｙｓ−ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）とＴｃ−９９ｍ標識白血球細胞（ＷＢＣｓ）の生体 分散の比較 正常および感染ラット（オス、スプラーグ−ドーリー、８５〜１００ｇ）にお いてＧｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫを用いる生体分散実験を行 うと、ＩＤ％が、注射後６時間で０．１６％まで経時増加することが示される。 これは、正常脚にみられるＧｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫの量 の約４倍であり、感染脚にみられる99mＴｃ−ＤＴＰＡの量の２倍である。感染 および非感染筋における99mＴｃ−ＤＴＰＡおよびＧｄ−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫの 取り込みを図５に示す。 実施例２０ Ｇｄ（ｆｏｒ−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−(Ｎ(ｇ))Ｌｙｓ− ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）の緩和度の測定 Ｇｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫの濃度の異なる数種の溶液の Ｔ1sを２０ＭＨｚおよび３７℃にて測定することによって、緩和度を測定する。 ビス−トリス緩衝液、ヒト血漿、ラット血漿およびラット全血などの種類の異な る培地にて実験を行う。すべての場合において、培地のｐＨをビス−トリス緩衝 液で７．４に調節し、イオン強度を０．１に調節する。ラット血漿を用いる実験 の場合、２つのタイプの実験を行う。第１の実験では、血漿をまず全血から分離 し、Ｇｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫのサンプルを異なる濃度で 調製し、Ｔ1sを測定する。第２の実験では、全血でサンプルを調製し、血漿を分 離し、ストック溶液のカウント数および特異的活性の知識から濃度を測定し、次 いで、Ｔ1sを測定する。両方の実験において同じ結果が得られる。１／Ｔ1対濃 度のプロットの傾斜から緩和度が測定される。データを表７に示す。 Ｇｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫがＷＢＣｓに結合することが 証明されるので、ＷＢＣｓの存在下に複合体Ｇｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬ ＬＦｎＬＹＫの緩和度を測定する。次の操作を行う：６匹のラットからの全血( ４２ml)を集め、白血球細胞を分離し、０．１２ｍｌの等張食塩水に懸濁する。 それにＧｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆｎＬＬＦｎＬＹＫのサンプルを加え、最終 容量を０．５ｍｌ以下に調製し、Ｔ1を測定する。サンプルを等張食塩水で希釈 して種々の濃度の混合液を調製し、Ｔ1sを測定する。サンプルの放射活性をカウ ントし、これを用いて複合体の濃度を算出する。観測されたＴ1sは、結合および 非結合複合体によるものである。データの線形回帰分析を行って緩和度１０．７ ５ｍＭ-1ｓ-1を得る。先行実験から非結合複合体Ｇｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）−ｆ ｎ ＬＬＦｎＬＹＫの緩和度は明らかであるので、結合複合体と非結合複合体の比率 の値および白血球細胞への結合複合体の緩和度を算出することができる。算出し た緩和度を表７に示す。 実施例２１ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ１０８ジクロリドの調製 ＣＣｌ4(８０ml)中のＰｌｕｒｏｎｉｃＦ１０８（ＢＡＳＦ）(２１g、３ｍＥ ｑ)の濾過溶液に、室温にてトリブチルアミン(１ml、４．２ｍＥｑ)を加える。 冷却後、塩化チオニル(２．２ml、３０ミリモル)を加え、混合物を４時間還流す ると溶液は赤色に変わる。濾過し、溶媒を除去し、残渣を６０℃にてＣＣｌ4(８ ０ml)に再溶解し、エーテル(２００ml)を加えると固体の沈殿(２０．３g)が生成 する；沈殿を活性炭で漂白したＡｃＯＥｔ(８０ml)に溶解し、濾過し、エーテル (２００ml)を添加して結晶化させる。所望のＦ１０８ジクロリドの結晶(１９． ０６g)を集める。反応工程式を下記に示す。 実施例２２ 実施例２１のＦ１０８ジクロリド(２g、０．２８ｍＥｑ)を無水ＤＭＦ(８ml) に溶解し、カリウムフタルイミド(０．５４g、２．９ミリモル)を加える。混合 物を９０℃で一夜撹拌した後冷却し、セライトで濾過する。溶液を５０℃に過熱 し、冷却しながらエーテル(３０ml)を加え、固体を形成する；ＥｔＯＨ(２０ml) ／エーテル(５０ml)から結晶化した後の収量１．４６ｇ。カリウムフタルイミド をホルムアミドの溶液として加える場合に生成物が最良の収量および純度で得ら れる。 実施例２３ 実施例２２の化合物(１．４６g、０．２ｍＥｑ)をＥｔＯＨ(９ml)に溶解し、 次いで水素化ヒドラジン(０．１ml、２ミリモル)を加える。室温で一夜後、溶液 をＥｔＯＨ(１０ml)で希釈し、３時間還流する。次いで、溶媒を減圧除去し、残 渣をＥｔＯＨ(８ml)に溶解し、エーテル(４０ml)を加えて固体を得る。固体を集 め、エーテルで洗浄し、エタノール(８ml)に溶解し、ＡｃＯＨ(０．１１ml、２ ミリモル)を加える。混合物を５０℃に加熱し、エーテル(５０ml)を加え、放置 して結晶化させる。ジアミノ−Ｆ１０８の白色結晶(１．２４g)を集め、分析す る。−ＮＨ2基の滴定により、置換が実質的に１００％であることが示される。 実施例２４ （ａ）（ＡＦＷ）リンカー−マグネタイト粒子の製造 水(４０ml)にＦｅＣｌ3・６Ｈ2Ｏ(８１．１mg、０．３ミリモル)およびＦｅＣ ｌ2・４Ｈ2Ｏ(５６．９mg、０．３ミリモル)を溶解する（合計Ｆｅ＝０．６ミリ モルまたは３３．５mg）。この溶液に０．１ｍＣｉの59Ｆｅ（トレーサー量）を ＦｅＣｌ3形体で加える。 混合物を撹拌し、アンモニアの７．５％水溶液をｐＨ８．６で安定するまで滴 下する。黒色粒子の懸濁液が形成され、該懸濁液を７５℃で５分間加熱し、次い で、室温で粒子を沈殿させる。沈殿物を水で傾瀉して洗浄し(１００ml×３)、次 いで撹拌しながら水(６０ml)に再度懸濁させる。この懸濁液の鉄濃度は０．５ｍ ｇ／ｍｌである。 この懸濁液（鉄５ｍｇ）(１０ml)に成分（ａ）としてジパルミトイルホスファ チジル酸のナトリウム塩（ＤＰＰＡ・Ｎａ）を加え、２０分間音波処理する［Ｂ ＲＡＮＳＯＮ２５０ソニファイアー；１／８Ｆマイクロプローブ；アウトプット ２０（１５〜２０ｗ）］。音波処理中、温度を約６８℃に昇温し、その後室温ま で放冷し、次いで成分（ｂ）として、実施例２３で製造されたＰｌｕｒｏｎｉｃ −（ＮＨ2）2、またはＳｙｎｐｅｒｏｎｉｃ（登録商標）（ＩＣＩ）またはＰｏ ｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）−３８などの同様に修飾された両親媒性物質を加え る。次いで、前記条件下に音波処理を再開し１５分間継続する。 したがって、得られるコーティング粒子の懸濁液［サンプルＳＢＰＡ−ＮＨ2 （またはＳＢＰＡ−０．５／１０／１０）］には、１ｍｌあたり０．５ｍｇのＦ ｅ、１０ｍｇのＤＰＰＡおよび１０ｍｇの誘導Ｐｌｕｒｏｎｉｃ−（ＮＨ2）2界 面活性剤（（ａ）と（ｂ）の重量比＝１：１）が含まれる。粒子計数装置［Ｎｉ ｃｏｍｐ３７０、ＨＤＬ−ＮＰＳＳの粒子径測定システム，サンタバーバラ，カ リフォルニア，ＵＳＡ］を用いて測定すると、平均粒径が５０〜１００ｎｍ（± ２０〜４０％）であることが示される。 実施例２５ ＳＢＰＡ−マレインイミドフェニル−ブチルアミドの製造 サンプルＳＢＰＡ−０．５／１０／１０（上記ａ参照）(１０ml)を２７０００ ｇで１時間遠心分離する。沈殿を１０００ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０） で処理し、２ｍｇ／ｍｌのＦｅとなるように希釈する。これに２．５μＭのスル ホスクシンイミジル−４−［ｐ−マレインイミドフェニル］−ブチレート（スル ホＳＭＰＢ）を加え、混合物を室温で２時間インキュベートする。ＥＤＴＡ（１ ０ｍＭ）を加え、遠心分離して過剰の試薬を排除する（２分、１００ｇ）。残渣 をＨＥＰＥＳに懸濁する（２．５ｍｇＦｅ／ｍｌ）。 実施例２６ ヘキサペプチド ｆ−Ｎｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｎｌｅ−Ｔｙｒ−ＬｙｓのＳ −アセチルチオアセテートの製造 ヘキサペプチド（６μＭ）をＤＭＳＯに溶解して濃度を１０ｍｇ／ｍｌにし、 １当量のＮ−ヒドロキシスクシンイミジル−Ｓ−チオアセテート（ＳＡＴＡ）を １４ｍｇ／ｍｌＤＭＳＯ溶液の形体で混合する。その後、Ｎ−エチルモルホリン を加えてみかけのｐＨを８にする（湿潤ｐＨストリップ）。１時間後、混合物を Ｈ2Ｏで２０倍に希釈し、水で平衡化したＨＰＬＣクロマトグラフィーカートリ ッジに充填する［Ｃ１８ Ｂｏｎｄ Ｅｌｕｔカートリッジ，８０％水性アセトニ トリルで溶離］。チオアセチル化ペプチドが１８．７７分の分画に現れ、これを 乾燥して固体を得る。固体を少量のＤＭＳＯに再溶解する。 実施例２７ ＳＢＰＡマグネタイト粒子にカップリングしたヘキサペプチドの製造 ヘキサペプチドＳ−アセチルチオアセテート(２mg)のＤＭＳＯ溶液を、実施例 ２５で製造したＳＢＰＡ−マレインイミド誘導酸化鉄粒子（２．５ｍｇＦｅ）の ＨＥＰＥＳ溶液に加える。用いるＨＥＰＥＳ緩衝液にはＥＤＴＡ粒（２．５ｍＭ ）およびヒドロキシルアミン(５０ｍＭ)も含まれる；ヒドロキシルアミンは脱ア セチル試薬として働く。混合物を室温に２時間保持し、次いで酸化鉄粒子を遠心 分離によって単離し、緩衝液に再懸濁し、精製のために広範囲で透析する。 実施例２８ マグネタイト−化学誘引剤ペプチド複合体の顆粒球との親和性の試験 細菌感染による組織損傷および炎症は、感染部位に生じる走化性ペプチドに応 答した顆粒球（ＰＭＮ）および単核食細胞の形成を誘発する。顆粒球はＯ2 -ラジ カルを産生することが知られており、これは染色剤ニトロブルーテトラゾリウ ム（ＮＢＴ）の還元による５４０ｎｍにおける吸光によってアッセイすることが できる。 好中球を新鮮な軟膜から単離し、Ｍａｇｎ．Ｒｅｓ．Ｉｍａｇｉｎｇ１３（１ ９９５），３９３〜４００にしたがって培養する。ＮＢＴの還元速度をマイクロ プレートで培養した細胞内で直接測定する。アッセイ培地は、１５０μｌのＭＢ Ｔ溶液（２ｍｇ／ｍｌ）；１００μｌの複合体溶液（これには種々の濃度のサン プルが含まれる）を含み、これに５０μｌのＰＭＮ（２．５・１０5細胞）を加 える。ヨードアセトアミド（酸化バーストの阻害剤）を光度計対照ウエル中の培 地に加える（最終濃度１０ｍＭ）。細胞は１０ｍＭのヨードアセトアミド中、３ ７℃で１０分間プレインキュベートしたもの。アッセイの詳細は“メソッズ・イ ン・エンザイモロジー”１３２（１９９５），４１７に記載されている。 図６のグラフ（ａ）には、種々に希釈された（鉄濃度が異なる）ＳＢＰＡ−化 学誘引性合成ペプチドに応じた顆粒球によるＯ2 -産生の速度が示される。ＳＢＰ Ａ−ヘキサペプチドによって用量−依存的に刺激されるＰＭＮの能力によって、 該化学誘引剤にカップリングするマグネタイト粒子が存在することが証明される 。コントロール（ｂ）においては、ペプチドにカップリングしていない単独の磁 性粒子単独の影響は実質ゼロである。図６（ａ）および（ｂ）。 前記の結果は、放射活性（59Ｆｅ−標識複合体）およびＴ2プロトン緩和パラ メーター（ＮＭＲ）を測定することにより、さらに確認される。これらの実験の ために、新たに精製したヒトＰＭＮを種々のＳＢＰＡ−ペプチド複合体とともに ３７℃でインキュベートし、次いで、冷ＰＢＳ中で洗浄する。Ｔ2の測定により 、複合体からの鉄の結合／会合が、非カップリングマグネタイト粒子よりも６〜 ４３倍大きいことが示される。 実験室ラットにおいて、の59Ｆｅ−ＳＢＰＡ−ヘキサペプチドサンプルを静脈 内注射後にトレーサー測定することによって、外傷部位へ循環によって輸送され る鉄の優先順位が示される。 実施例２９ 直鎖ポリアミノカルボキシレート（ＤＴＰＡおよびＤＴＰＡ．ＢＭＡ）とＧｄ （ＩＩＩ）錯体の走化性エペプチドとの複合体形成 イソチオシアネートＤＴＰＡ誘導体（ＩＴＣ−ＤＴＰＡ，構造式Ｉ）をＭ／Ｗ ．ブレヒビールらのＩｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２５（１９８６），２７７２または Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．２（１９９１），１８７にしたがって合成する。等 モル量のリガンドとＧｄＣｌ3を適当な溶媒中で混合し、混合物のｐＨをゆっく りと上昇させながら混合することによってインサイトゥでＩＴＣ−ＤＴＰＡのＧ ｄ（ＩＩＩ）錯体を製造する。キレートと走化性ペプチドの複合（前記実施例参 照）およびその最終的精製は、Ｇｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）の複合体形成について 記載した次の実施例に記載した方法にしたがって行う。ＩＴＣ−ＤＴＰＡ（構造 式ＩＩ）は対応するアニリンから通例の方法によって製造する。 上記構造式の化合物を得るために、（１）アニリン誘導体のアミノ基をＢＯＣ などで保護し、次いで（２）Ｗ．Ｃ．エッケルマンらのＪ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ ．６４（１９７５），７０４にしたがって、５酢酸をそのビス無水物に変換する 。次いで、（３）本発明の引用文献であるＵＳ−Ａ−５，０８７，４３９（Ｓ． Ｃ．クウェイ）にしたがって、ビス無水物をアルキルアミンＲＮＨ2（ここでＲ はＣ1-6アルキル）と反応させてビスアルキルアミドを得、次いで、保護基を除 去して構造式ＩＩＩの化合物を得る。 次いで、前述した方法でＧｄ（ＩＩＩ）とキレート形成するためのリガンドと して用いる対応するイソチオシアネートに変換し、次の実施例３０に記載した一 般操作によって該錯体を走化性ペプチドに複合させる。 実施例３０ 走化性ペプチドとアミノデンドリマーとの複合体形成 上記反応工程式は次のステップからなる：（１）ｐ−ニトロベンゾイルクロリ ドと走化性ペプチドの反応；（２）触媒を用いるニトロ基への水素添加による対 応アニリンへの変換；および（３）アニリンとのチオホスゲンとの反応によるイ ソシアナト誘導体の形成。次いで、活性化されたペプチドを塩基の存在下にアミ ノ末端デンドリマーと反応させて（Ｍｅｄｉｃｉｎｅ３１（１９９４）の磁気共 鳴を参照）、２，３個のデンドリマーのアミノ官能基に反応を起こす（チオウレ ア結合）。デンドリマーの残りの末端部位を活性化Ｇｄキレート形成部分、たと えＧｄ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）と複合させてポリ標的化ポリキレート形成デンドリ マー、すなわち、受容体に結合しうるペプチドに付加されている多重シグナルジ ェネレーターを得る。 実施例３１ 走化性ペプチドと超常磁性鉄粒子との複合体形成 デキストラン被覆メグネタイト粒子がＵＳ−Ａ−５,２１９,５５４（Ｅ．Ｖ． グローマンら）に開示されている。Ｊ．Ｓ．マンらのＢｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ ．３（１９９２），１５４の記載にしたがって、誘導体１−［（４−イソチオシ アナトフェネチル）アミノ］ジヒドロデキストラン（構造式ＩＶ）を合成し、前 記実施例に概要を記載した複合操作を用いて、この活性デキストランを所望の長 さおよびアミノ酸組成の走化性ペプチドに結合することができる。 次いで、ペプチド誘導体化されたデキストランでマグネタイト粒子を被覆する ことによって、受容体生成部位に対して標的化されたマグネタイト粒子が得られ る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 イートン，スティーブン アメリカ合衆国08525ニュージャージー州 ホープウェル、ハート・アベニュー87番

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １．一般式（Ｆ）： Ｎ(Ｘ)−Ｙ−Ｌeu−Ｐhe−Ｚ−Ａ−Ｗ （Ｆ） ［式中、Ｘは水素またはホルミル、アセチルまたはｔ−Ｂｏｃなどの保護基；Ｙ はノルロイシンまたはメチオニン；Ｚは化学結合、(Ｎ(γ))Ｌys、Ｉle、Ａsp、 Ｎle-Ｔyr−Ｌysまたは(Ｇly)ｎ（ｎは１〜４）などのアミノ酸またはオリゴペ プチド；Ａは結合またはリンカー；およびＷは適当に誘導された常磁性大員環キ レート化合物または磁性粒子である］ で示されるヒトおよび動物における疾患または不調部位の検出および検査用マー カー標識走化性ペプチド化合物。 ２．大員環（Ｗ）が （ａ）式(Ｉ)： ［式中、Ｘは１個またはそれ以上の酸素含有官能基を有するアルキル置換基であ る］ で示される１,４,７,１０−テトラアザシクロドデカン環化合物；または （ｂ）構造式(ＩＩ)： ［式中、少なくともひとつのＲは式(Ｆ)のＡであり、他のＲは常磁性金属のキレ ート［たとえば、イソチオシアナト−ＤＴＰＡ（ＩＴＣ−ＤＴＰＡ）、ＳＣＮ− Ｐｈ−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ2−ＤＯ３Ａ（ＩＰＡ−ＤＯ３Ａ）または式： （ここで、Ａｃはアセチルである） で示される基］と誘導体を形成する］ で示されるスターバーストデンドリマーである請求項１に記載の化合物。 ３．式（Ｉ）： で示されるキレートが、表： ４．常磁性イオンが、Ｇｄなどのランタニド類およびＣｕ、Ｍｎ、Ｃｒ、Ｃｏ 、Ｎｉ、Ｃｒ、Ｆｅ、Ｐｄなどの適当な遷移元素から選ばれる請求項１に記載の 化合物。 ５．Ｗが、ポリマーコーティングまたはシラン化されたサブミクロンのフェラ イトまたはマグネタイトから選ばれる請求項１に記載の化合物。 ６．リンカーＡが、ペプチドと大員環キレート分子の間に架橋が得られるよう に必要な官能基を有する化学結合ユニットまたは配列から選択される請求項１に 記載の化合物。 ７．結合ユニットが、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＨＮ＝、ＮＨＣＯＮＨＮ＝、− ＣＯＮＨ−Ｐｈ−ＮＨ−ＣＯ−、ＮＨＣＳＮＨＮ＝、 から選ばれる請求項６に記載の化合物。 ８．標的化走化性ペプチドからなる第１部分と磁気応答標識および架橋化合物 からなる第２部分を反応させて、第１部分と第２部分の間にリンカーＡを形成す る請求項１に記載の化合物の製造法であって、反応が該部分および／または酸ハ ライド、無水物、アミド、イミド、エステル、アミン、カルボジイミド、イソシ アネート、イソチオシアネート、マレイミド誘導体およびスクシンイミドなどか ら選ばれる架橋化合物の官能基で起こることを特徴とする方法。 ９．下記反応工程式（ａ） または反応工程式（ｂ） から選ばれる１種または２種以上の反応を特徴とする請求項８に記載の方法。 １０．ａ）ペプチドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドカルボン酸エステル とアミノ誘導キレート分子であるＨ2−Ｒ’； ｂ）スルホ−ＳＭＢＰ「４−（４−マレイミドフェニル）−Ｎ−スルホスクシ アミノ誘導キレート分子Ｈ2Ｒ’およびＨＳ−ペプチド； ｃ）無水物Ｒ’−ＣＯ−Ｏ−ＣＯ−Ｒ’混合キレート分子（キレート分子テト ラメチルグアニジン塩およびクロロギ酸イソブチルから得たもの）およびリシン 官能性−ＮＨ2を有するペプチド； 導キレート分子Ｈ2−Ｒ’およびスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレインイミド メチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート ｅ）分子内または分子間の環状無水物Ｒ’−ＣＯ−Ｏ−ＣＯ−Ｒ’とアルキレ ンジアミンとの反応によるキレート分子Ｒ’の誘導、Ｎ−スクシンイミジル−３ −（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）と２−ピリジルジスル フィド基の導入、およびチオラート化走化性ペプチドとのカップリングによる共 有チア結合複合体の形成、すなわち から選ばれる１種または２種以上の経路を特徴とする請求項８に記載の方法。 １１．イソシアナトアルキルシラン、イソチオシアナトアルキルシラン、３− アミノプロピルトリメトキシシラン、ヒドロキシプロピルトリエトキシシランお よび４−クロロブチルトリメトキシシランなどから選ばれる１種または２種以上 のトリアルキルシランを用いてシラン化されたサブミクロンの粒子によって磁気 応答標識が成立する請求項８に記載の方法。 １２．請求項１に記載の標識ペプチドを用いることを特徴とするインビボ注射 またはエクスビボラベリングのいずれかによるＭＲＩ検査方法。
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