JPH10506886A - コラーゲンの成熟及び構造の障害の処置のための２，４−ジアミノピリミジン−３−オキシド又はその塩の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 製薬又は獣医学的用途の治療用組成物の製造のための、２，４−ジアミノピリミジン−３−オキシド又はその塩の作用物質としての使用を提供する。該組成物はコラーゲンの成熟及び構造の障害の処置に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】 コラーゲンの成熟及び構造の障害の処置のための２，４−ジアミノピリミジン− ３−オキシド又はその塩の使用技術分野 本発明は、コラーゲンの成熟及び構造の障害の処置を目的とする、製薬又は獣 医学的用途の治療用組成物の製造のための、２，４−ジアミノピリミジン−３− オキシド又はその塩の作用物質としての使用に関する。背景技術 天然のプロコラーゲンの束を得るためには、自然の小胞体中のプリプロコラー ゲンの特定の数のプロリル及びリシル残基をヒドロキシル化し、次いでゴルジ体 中のヒドロキシリシル残基をグリコシル化する必要がある。このコラーゲンの成 熟が多数の研究の対象とされてきた。 かくして、ミノキシジル、即ち、２，４−ジアミノ−６−ピペリジノピリミジ ン−３−オキシドは、既にある種の高血圧の処置及び男性的脱毛症の処置に関連 して文献に記載され、使用され、コラーゲンの成熟に寄与する酵素であるリシル ヒドロキシラーゼの特異的阻害剤として、多数の研究の対象とされてきた。 これに関連して、Arch．of Biochem．Biophys.第292巻１号234〜238頁（1992 年）及び第308巻１号42〜47頁（1994年）に掲載されているMuradらの研究では、 効果に関して、リシルヒドロキシラーゼを阻害することが可能であるためには、 ２，４−ジアミノピリミジン環のＮ−オキシド基に対してパラ位にある３級アミ ン基の存在が必要であり、この基はミノキシジルの場合のようにピペリジンであ ることが好ましいということが示されている。発明の開示 驚くべきことに、かつ予期し得ないことではあるが、２，４−ジアミノピリミ ジン−３−オキシド、即ち２，４−ＤＰＯ（以下本明細書中ではこのように言う ） が、２，４−ジアミノピリミジン環のＮ−オキシド基に対してパラ位にある３級 アミン基を有しないにもかかわらず、リシルヒドロキシラーゼを特異的に阻害し 得ることが見いだされた。 この化合物は、国際特許出願第92/01437号明細書に、局所適用することにより 脱毛を処置するための作用物質として既に開示されている。しかしながら、ミノ キシジルとは異なり、２，４−ＤＰＯはいかなる抗高血圧効果をも有さず、従っ て特に安全性の観点から望ましい一方、ミノキシジルと同等又はそれ以上のリシ ルヒドロキシラーゼに対する阻害活性を有する。 従って、本発明の目的は、ヒト又は動物におけるコラーゲンの成熟の障害の処 置を目的とする、製薬又は獣医学的用途の治療用組成物の製造のための、２，４ −ＤＰＯ又はその塩の作用物質としての使用にある。発明を実施するための最良の形態 以下本明細書中では、「２，４−ＤＰＯ」の語は、２，４−ＤＰＯ自体のみな らず、以下に規定するその塩をも意味する。 コラーゲンの成熟の障害（maturation disorder）とは、本発明に関しては、 任意の望ましくないコラーゲンの蓄積を意味し、特に、皮膚細胞又は球状結膜（ bulbar conjunctiva）のコラーゲンマトリクスの任意の構造的な障害であって、 その起源が自発的、外傷性又は術後性であってよい障害を意味すると解されるべ きである。このような障害としては、特に硝子体網膜症、全身性強皮症、紫外線 により誘導された皮膚厚化及び瘢痕性ケロイドを挙げることができる。 従って、本発明による２，４−ＤＰＯの使用は、特に、処置を受けている患者 の美観上の改善を可能にする。 本発明において、処置は治療に関するものであってもよいが、予防策として、 即ち、コラーゲンの構造化及びそれに続く瘢痕化の際に起きる蓄積化の間に使用 するのも同様に好ましい。 ２，４−ＤＰＯを、局所的、経皮的又は皮内的に投与し得る剤形の治療用組成 物の製造に使用してよい。生理的に許容されうる塩とは、本発明においては、硫 酸、塩酸、リン酸、酢酸、安息香酸、サリチル酸、グリコール酸、アセツル酸、 コハク酸、ニコチン酸、酒石酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、ピクリン酸及 び乳酸等の酸の付加塩を意味する。 該治療用組成物が局所的に投与し得る剤形の場合には、２，４−ＤＰＯの割合 は、組成物の全重量に対して一般に0.0001〜５重量％、好ましくは0.01〜２重量 ％である。 ベヒクルの性質は様々なものであってよいが、生理的に許容されうる局所投与 用の媒質であって、言うまでもなく作用物質と適合性のあるものが好ましい。 ２，４−ＤＰＯはこの媒質中に溶解しているか、又は分散、特に微分散してい てよい。 生理的に許容されうる媒質は、水又は水と溶媒との混合物あるいは溶媒混合物 から構成されていてよい。使用可能な溶媒のうち、エタノール、イソプロパノー ル及びtert- ブタノール等のＣ₁−Ｃ₄低級アルコール類、アルキレングリコール 類、及び、エチレングリコールモノエチルエーテル、プロピレングリコールモノ メチルエーテル等のアルキレングリコール又はジアルキレングリコールのアルキ ルエーテル類が、特に好ましい。このような局所的投与用の組成物はまた、１種 以上の従来の添加剤又は作用成分を含んでいてもよい。 このようなものとして、メトキシシンナメート類及びベンゾフェノン誘導体等 のＵＶ−Ａ及びＵＶ−Ｂスクリーニング剤、ＤＭＳＯ、αートコフェロール、Ｂ ＨＡ、ＢＨＴ及び超過酸化物不均化酵素等の抗酸化剤及び／又はフリーラジカル 掃去剤、尿素、グリセロール、乳酸、ヒドロキシ酸、チアモルホリノン及びその 誘導体及びピロリドンカルボン酸の誘導体（特にそのナトリウム及びカリウム塩 ）等の水和剤、ヒドロコルチゾン、β−メタゾン−デキサメタゾン、アセチルサ リチル酸、インドメタシン、イブプロフェン、ビタミンＤ又はニフルミン酸（ni flumic acid）等のステロイド系及び非ステロイド系の抗炎症剤、エリスロマイ シン等のマクロライド系、ピラノサイド系及びテトラシクリン系に属する抗菌剤 を、特に挙げることができる。 該組成物はまた、防腐剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、浸透圧改良剤及び乳化剤を 含んでいてもよい。 ２，４−ＤＰＯをベースとする局所投与用組成物は、例えばローション、ゲル 、 フォーム、小胞分散体（vesicular dispersions）、スプレー又はエアロゾルフ ォーム等の、様々な形態であってよい。 該組成物はまた、ゲル化又は濃厚化した組成物の形態であってもよい。ゲル化 組成物のうち、実質的に、キサンタンガム、硬グルカン類又はセルロース誘導体 （特にセルロースエーテル）等のヘテロバイオポリサッカライド類でゲル化した 水性組成物、又はポリヒドロキシエチルアクリレート類又はメタクリレート類で ゲル化した水性アルコール組成物からなるものが、特に好ましい。濃厚化した水 市販されているもの等の多官能剤で架橋したポリアクリル酸を使用して得られる ものが好ましい。しかしながら、言うまでもなく、調剤又は皮膚科調剤で通常使 用される任意の薬剤を濃厚化剤として使用することが可能である。 局所的に投与する場合、一般に、２，４−ＤＰＯを処置すべき体の部位に0.00 01〜５mg/kg/日の割合で、好ましくは0.001〜１mg/kg/日の割合で適用する。処 置は通常、コラーゲンの蓄積が起きている間継続し、また、必要により、該期間 経過後９０日間継続してもよい。 本発明によれば、２，４−ＤＰＯを経皮的に投与することを目的とする治療用 組成物の製造に使用することも可能である。 この場合、２，４−ＤＰＯの割合は一般に、該組成物の全重量に対して0.001 〜５重量％、好ましくは0.01〜２重量％である。 該組成物に使用する賦形剤は、一般にビニルポリマー類又はコポリマー類から 選ばれ、必要により浸透促進剤をこれに添加する。 経皮投与用組成物を、特に自己接着システムを使用して投与してよい。自己接 着システムは皮膚に接着し、連続的に一定期間（２４時間以上）、所定量の作用 物質を皮膚を通して血流中に供給する。 該システムのうち、フランス特許出願第88/11685号（2,635,979 号）明細書に 記載のもの、並びにTilderm社により市販されているものが、特に好ましい。 ２，４−ＤＰＯを皮内的に投与することを目的とする治療用組成物の製造に使 用してもよい。 この場合、２，４−ＤＰＯの割合は一般に、該組成物の全重量に対して0.0001 〜５重量％、好ましくは0.01〜１重量％である。 この場合、２，４−ＤＰＯは、生理食塩水等の生理的に許容されうるベヒクル に可溶な形態である。 該皮内投与用組成物は更に、例えば抗菌剤、抗酸化剤及びステロイド系及び非 ステロイド系の抗炎症剤等の様々な治療用剤を含んでいてよい。 ２，４−ＤＰＯを皮内的に投与する場合、一般に５mg/kg/日を超えず、好まし くは0.0001〜１mg/kg/日の投与量とする。処置は通常、コラーゲンの蓄積が起き ている間継続し、また、必要により、該期間経過後３０日間継続してもよい。 製薬用途を目的とする組成物について比較的詳細に記載したが、該組成物を獣 医学用途、特にウマ等のウマ科の動物の処置に好適な形態に配合してもよいこと は、自明である。 組成物の投与又は適用の態様によらず、本発明の組成物は公知の方法により製 造することができる。 説明のため、以下に２，４−ＤＰＯの効力を示す実験、並びに治療用組成物の 様々な例を示す。実施例 Ｉ − リシル ヒドロキシラーゼ（ＬＨ）をコードするｍＲＮＡの発現の阻害 についての実験 最初の（firth）サブカルチャーでのヒトの毛髪の外部接続細胞鞘由来の線維 芽細胞のカルチャーから、２×１０⁵の線維芽細胞を、直径６０mmのペトリ皿に 入ったダルベッコ改良イーグル培地であって、２ｍＭのＬ−グルタミン、１ｍＭ のピルビン酸ナトリウム、100単位／mlのペニシリンＧ、100 μg/mlのテプトマ イシンＳ、250 mg／mlのアンホテリシン及び１０％のウシ胎児血清（Gibco BRL 社製）を追加したものに接種した。 空気９５％／二酸化炭素５％の雰囲気のインキュベーター中で、カルチャーを ３７℃に２４時間保持した後、同様の培地であるがウシ胎児血清を含まないもの に培地を交換した。次いで、５ｍＭのミノキシジル、５ｍＭの２，４−ＤＰＯあ るいは５ｍＭの硫酸ミノキシジルの存在下で、細胞を３７℃で３時間（図１Ａ） 及び１８時間（図１Ｂ）温置した。 「分子生物学における短いプロトコル」（ハーバード・メディカル・スクール 、Ｊ．ワイリー・アンド・サンズ出版（1992年））に記載の方法に従い、各細胞 試料から全ＲＮＡを抽出し、次いで280 nmのＵＶ分光光度測定によって定量した 。 ｍＲＮＡの発現の分析を可能とするため、重合連鎖反応（ＰＣＲ）によりその 増幅を行った。 ファルマシアLKBバイオテクノロジーAB社により「第１鎖Ｃ−ＤＮＡ合成キッ ト」の商品名で販売されている逆転写キットを使用して、上記により各細胞試料 について得られた２μｇの全ＲＮＡから、インビトロで相補的ＤＮＡを合成した 。リシル ヒドロキシラーゼ（ＬＨ）及びプロリル ヒドロキシラーゼ（ＰＨ） についての次の特定のプライマーの存在下で、上記により得られた相補的ＤＮＡ のアリコート分画を、次いで実際のＰＣＲ法により増幅し、最終体積を５０μｌ とした： ＰＣＲ後に得られた２０μｌの混合物を、0.５μg/mlの臭化エチジウム及び１ ×トリスーアセテートＥＤＴＡ（ＴＡＥ）電気泳動バッファーの存在下で、２％ のアガロース電気泳動ゲルに添加した。 100Ｖの電場中で１時間泳動させた後、Vilbert Lourmat社により「バイオプ て、各々リシル ヒドロキシラーゼ及びプロリル ヒドロキシラーゼをコードす るｍＲＮＡに対応するバンドの強度を分析し、定量した。 上記と同様の手順により、何ら処理することなく３時間及び１８時間線維芽細 胞を培養した後のリシル ヒドロキシラーゼ及びプロリル ヒドロキシラーゼを コードするｍＲＮＡの相対的発現のレベルについても測定した。 結果を図１Ａ及び図１Ｂに示す。 結果から、ミノキシジル又は硫酸ミノキシジルの存在下で線維芽細胞を３時間 温置すると、リシル ヒドロキシラーゼをコードするｍＲＮＡの相対的発現のレ ベルは0.75に低下することがわかる。 ２，４−ＤＰＯの存在下で３時間温置した場合には、リシル ヒドロキシラー ゼをコードするｍＲＮＡの相対的発現のレベルは0.55となる。 従って、２，４−ＤＰＯは、ミノキシジル又はその硫酸化した類縁体よりも更 にリシル ヒドロキシラーゼをコードするｍＲＮＡの発現を阻害する。 テストした様々な阻害剤の存在下で１８時間培養した場合も、同様の結果が観 察された。 更に、ミノキシジル又は硫酸ミノキシジルの存在下で３時間培養した場合には 、プロリル ヒドロキシラーゼをコードするｍＲＮＡの相対的発現のレベルは、 各々1.25及び1.85に達した。 ２，４−ＤＰＯの存在下で３時間培養した場合にも、プロリル ヒドロキシラ ーゼをコードするｍＲＮＡの相対的発現のレベルは比較的高く、そのレベルは1. 3のオーダーであった。 ミノキシジル、硫酸ミノキシジル又は２，４−ＤＰＯの存在下で１８時間培養 した場合には、プロリル ヒドロキシラーゼをコードするｍＲＮＡの相対的発現 のレベルは、各々1.6、1.3及び1.15であった。 従って、これら３種類の化合物によるプロリル ヒドロキシラーゼをコードす るｍＲＮＡの相対的発現の阻害は観察されなかった。 即ち、テストした化合物は、リシル ヒドロキシラーゼに対する特異的な阻害 活性を示した。II − カルチャー中の線維芽細胞の細胞外マトリクス中に存在するコラーゲン ネットワークに対する２，４−ＤＰＯの効果の実験 １０％のウシ胎児血清を添加したＤＭＥＭ培地中で、乳房形成術において得ら れた材料由来のヒト皮膚線維芽細胞の１次カルチャーに、１０μＭの２，４−Ｄ ＰＯを添加した。 ３日後、低浸透圧ショックにより細胞を溶菌し、５％のグルタルアルデヒド溶 液を用いて蓄積したコラーゲンを固定した。 次いで、走査型電子顕微鏡を使用して、線維芽細胞の細胞外マトリクスを観察 した。 更に、未処理の線維芽細胞の１次カルチャーの細胞外マトリクスも、走査型電 子顕微鏡を使用して観察した。 写真を図２及び３に示す。 図２及び３の写真から明らかなように、未処理の線維芽細胞の細胞外マトリク スでは、広い範囲のコラーゲンネットワークの欠陥を取り囲む大きな線維状のク ランプが認められたのに対して、２，４−ＤＰＯで処理した線維芽細胞の細胞外 マトリクスでは、はるかに規則正しい組織であって、大きな線維状のクランプは 認められず、コラーゲンネットワークの欠陥がはるかに小さい組織が認められた 。 従って、線維芽細胞カルチャーに対する２，４−ＤＰＯの適用は、コラーゲン 線維のマイクロ−ネットワークーへの空間的認識をもたらす。実施例１： スキンクリーム 次の成分を混合して、スキンクリームを製造した： − ２，４−ＤＰＯ ０．５ｇ − Ceteareth 30 ７ｇ − ステアリン酸グリセリル ２ｇ − セチルアルコール １．５ｇ − ポリジメチルシロキサン １．５ｇ − 液体パラフィン １５ｇ − グリセロール コーデックス （精製） ２０ｇ − 防腐剤 （十分量） − 脱ミネラル化水 （十分量） １００ｇ実施例２： スプレー用スキンローション 次の成分を混合して、スプレー用スキンローションを製造した： − ２，４−ＤＰＯ ０．２５ｇ − エタノール ３０ｇ − 脱ミネラル化水 （十分量） １００ｇ実施例３： 注射液 次の成分を混合して、皮膚内注射用液を製造した： − ２，４−ＤＰＯ ０．７mg − 生理食塩水 （９ｇの塩化ナトリウム／十分量の水100 ml） （十分量） １ml

【手続補正書】 【提出日】１９９７年９月１日 【補正内容】 請求の範囲 １．コラーゲンの成熟及び構造の障害の処置のための医薬組成物であって、２， ４−ジアミノピリミジン−３−オキシド（２，４−ＤＰＯ）又はその生理的に許 容されうる塩を作用物質として含有する、前記組成物。 ２．前記塩が、硫酸、塩酸、リン酸、酢酸、安息香酸、サリチル酸、グリコール 酸、アセツル酸、コハク酸、ニコチン酸、酒石酸、マレイン酸、メタンスルホン 酸、ピクリン酸及び乳酸からなる群から選ばれる酸の付加塩であることを特徴と する、請求項１記載の組成物。 ３．前記組成物が局所的、経皮的又は皮内的に投与し得る剤形であることを特徴 とする、請求項１又は２に記載の組成物。 ４．前記組成物が局所的に投与し得る剤形であって、２，４−ＤＰＯの割合が組 成物の全重量に対して0.0001〜５重量％であることを特徴とする、請求項１〜３ のいずれか１項に記載の組成物。 ５．２，４−ＤＰＯの割合が組成物の全重量に対して0.01〜２重量％であること を特徴とする、請求項４記載の組成物。 ６．前記組成物が経皮的に投与し得る剤形であって、２，４−ＤＰＯの割合が組 成物の全重量に対して0.001〜５重量％であることを特徴とする、請求項１〜３ のいずれか１項に記載の組成物。 ７．２，４−ＤＰＯの割合が組成物の全重量に対して0.01〜２重量％であること を特徴とする、請求項６記載の組成物。 ８．前記組成物が皮内的に投与し得る剤形であって、２，４−ＤＰＯの割合が組 成物の全重量に対して0.0001〜５重量％であることを特徴とする、請求項１〜３ のいずれか１項に記載の組成物。 ９．２，４−ＤＰＯの割合が組成物の全重量に対して0.01〜１重量％であること を特徴とする、請求項８記載の組成物。 10．前記組成物がヒトのコラーゲンの成熟の障害を処置するためのものであるこ とを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。 11．前記組成物が動物のコラーゲンの成熟の障害を処置するためのものであるこ とを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。 12．前記動物がウマ科の動物であることを特徴とする、請求項11記載の組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｋ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ガレイ ジャン バプティスト フランス国 エフ−93600 オルネイ ス ー ボワ リュー シャルル ドルダン 12 (72)発明者 ベルナール ブルーノ フランス国 エフ−92200 ヌイリー ス ュール セーヌ アベニュー ド ブレッ トヴィル 13

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．２，４−ジアミノピリミジン−３−オキシド（２，４−ＤＰＯ）又はその塩 の作用物質としての使用であって、コラーゲンの成熟及び構造の障害の処置を目 的とする製薬又は獣医学的用途の治療用組成物の製造のための前記使用。 ２．前記塩が、硫酸、塩酸、リン酸、酢酸、安息香酸、サリチル酸、グリコール 酸、アセツル酸、コハク酸、ニコチン酸、酒石酸、マレイン酸、メタンスルホン 酸、ピクリン酸及び乳酸からなる群から選ばれる酸の付加塩であることを特徴と する、請求項１記載の使用。 ３．前記組成物が局所的、経皮的又は皮内的に投与し得る剤形であることを特徴 とする、請求項１又は２に記載の使用。 ４．前記組成物が局所的に投与し得る剤形であって、２，４−ＤＰＯの割合が組 成物の全重量に対して0.0001〜５重量％であることを特徴とする、請求項１〜３ のいずれか１項に記載の使用。 ５．２，４−ＤＰＯの割合が組成物の全重量に対して0.01〜２重量％であること を特徴とする、請求項４記載の使用。 ６．前記組成物が経皮的に投与し得る剤形であって、２，４−ＤＰ０の割合が組 成物の全重量に対して0.00１〜５重量％であることを特徴とする、請求項１〜３ のいずれか１項に記載の使用。 ７．２，４−ＤＰＯの割合が組成物の全重量に対して0.01〜２重量％であること を特徴とする、請求項６記載の使用。 ８．前記組成物が皮内的に投与し得る剤形であって、２，４−ＤＰＯの割合が組 成物の全重量に対して0.0001〜５重量％であることを特徴とする、請求項１〜３ のいずれか１項に記載の使用。 ９．２，４−ＤＰＯの割合が組成物の全重量に対して0.01〜１重量％であること を特徴とする、請求項８記載の使用。 10．前記組成物がヒトのコラーゲンの成熟の障害を処置することを目的とするも のであることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。 11．前記組成物が動物のコラーゲンの成熟の障害を処置することを目的とするも のであることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。 12．前記動物がウマ科の動物であることを特徴とする、請求項11記載の使用。