JPH10504536A - 新規の抗腫瘍性および抗白血病物質、それらの製造方法およびそれらを含有する医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 式（Ｉ）で示される３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン−１−ビニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４−オン、および式（ＩＩ）で示される３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキシ−７−メチル−１−ビニルインダン、それらの立体異性型、それらを植物ミズオオバコ（Ｏｔｔｅｌｉａ ａｌｉｓｍｏｉｄｅｓ）から得る方法、および前記物質を含有する医薬組成物が記載される。式（Ｉ）または（ＩＩ）で示される新規な物質は顕著な抗腫瘍性および抗白血病特性を有する。

Description

【発明の詳細な説明】 新規の抗腫瘍性および抗白血病物質、それらの製造方法およびそれらを含有する 医薬組成物 本発明は、式（Ｉ） で示される３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン−１ −ビニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４−オン、お よび式（ＩＩ） で示される３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキシ− ７−メチル−１−ビニルインダン、ならびにそれらの立体異性型、それらを植物 ミズオオバコ（Ｏｔｔｅｌｉａ ａｌｉｓｍｏｉｄｅｓ）から製造する方法、お よびそれらを含有する医薬組成物に関する。 さらに詳しくは、本発明は、以下の特性： −比旋光度：［α］²⁰（Ｎａ ５８９）＝ −２０．８±１．０ （ジクロメタン、ｃ＝０．５） ［α］²⁰（Ｈｇ ４３６）＝ −３２．０±１．２ （ジクロメタン、ｃ＝０．５） −赤外スペクトル：主要な特性吸収帯、３４００、３０７０、２９２５、２８４ ０、１６６０、１５８０、１５００、１４３５、１２７０、１１２５および１０ ２５ｃｍ-1、 −マススペクトル （ＤＣＩ ＮＨ₃）：３２８（Ｍ ＋ ＮＨ₄）⁺ （ＥＩ）：（３１１）（Ｍ＋ＮＨ₄＝ＯＨ）⁺、 −プロトン核磁気共鳴スペクトル（６００ ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；δ（ｐｐｍ） ）：６．９９（ｄ，Ｊ＝９ Ｈｚ，１Ｈ）；６．８０（ｄ，Ｊ＝２ Ｈｚ，１Ｈ ）；６．７７（ｄ，Ｊ＝８ Ｈｚ，１Ｈ）；６．６９（ｄｄ，Ｊ＝２および８ Ｈｚ，１Ｈ）；５．９４（ｄ，Ｊ＝９ Ｈｚ，１Ｈ）５．７８（ｍ，１Ｈ）；５ ０５３（ｓ，１Ｈ）；５．３２（ｍ，２Ｈ）；４．９８（ｄ，Ｊ＝１０ Ｈｚ， １Ｈ）；４．９５（ｄ，Ｊ＝１７ Ｈｚ，１Ｈ）；３．８８（ｓ，３Ｈ）；３． ０７（ｍ，１Ｈ）；２．８８（ｄｄ，Ｊ＝６および８ Ｈｚ，１Ｈ）；２．８０ （ｔ，Ｊ＝８および８ Ｈｚ，１Ｈ）；２．６２（ｍ，１Ｈ）；２．５１（ｍ， ２Ｈ）；１．７４（ｍ，１Ｈ）；１．５８（ｍ，１Ｈ）、 を有する式（Ｉ）で示される生成物に関する。 さらに詳しくは、本発明は、以下の特性： −比旋光度：［α］²⁰（Ｎａ ５８９）＝ ＋３２．３±１．３ （ジクロメタン、ｃ＝０．５） ［α］²⁰（Ｈｇ ４３６）＝ ＋７５．０±１．８ （ジクロメタン、ｃ＝０．５）、 −赤外スペクトル：主要な特性吸収帯、３４１９、３０７４、１６３５、１５９ ２、１４９５、１２７１、１１２６および１０２９ ｃｍ^-1、 −マススペクトル （ＤＣＩ ＮＨ３）：３２８（Ｍ＋ＮＨ4）⁺ （ＥＩ）：３１０（Ｍ）⁺、 −プロトン核磁気共鳴スペクトル（６００ ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；δ（ｐｐｍ） ；結合定数 Ｊ（Ｈｚ））：１．９５（ｍ，１Ｈ）；２．０５（ｍ，Ｈ）；２． １８（ｓ，３Ｈ）；２．６２（ｄ，Ｊ＝８および１３，１Ｈ）；３．１６（ｄｄ ，Ｊ＝６および１３，１Ｈ）；３．５８（ｍ，１Ｈ）；３．８３（ｍ，１Ｈ）； ３．８８（ｍ，１Ｈ）；４．２５（ｓ，１Ｈ）；４．９８（ｄ，Ｊ＝８，１Ｈ） ；５．０１（ｄ，Ｊ＝１６，１Ｈ）；５．５８（ｓ，１Ｈ）；５．７８（ｄｄ， Ｊ＝８および１６，１Ｈ）；６．５３（ｄ，Ｊ＝７，１Ｈ）；６．６９（ｄｄ， Ｊ＝７および１，１Ｈ）；６．７９（ｄ，Ｊ＝７，１Ｈ）；６．８２（ｄｄ，Ｊ ＝１，１Ｈ）；６．８５（ｄ，Ｊ＝７，１Ｈ）、 −紫外スペクトル： λ ｍａｘ ＝ ２８２ｎｍ（ε＝４６５０）；２２５ｎｍ（肩）；２０７ｎ ｍ（ε＝４８８００）（ｃ＝１０．１ ｇ／ｃｍ³；メタノール） λ ｍａｘ ＝ ２８２ｎｍ；２２５ｎｍ（肩）；２０６ｎｍ（ｃ＝１０．１ ｍｇ／ｃｍ³；メタノール−塩酸） λ ｍａｘ ＝ ２９７ｎｍ（肩）；２８８ｎｍ；２４３ｎｍ（肩）；２１４ ｎｍ（ｃ＝１０．１ ｍｇ／ｃｍ³；メタノール−水酸化カリウム）、 を有する式（ＩＩ）で示される生成物に関する。 ３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン−１−ビニル −２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４− オンおよび３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキシ− ７−メチル−１−ビニルインダンは、植物ミズオオバコから、適切な溶媒によっ て抽出し、次いで得られた抽出物から３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベン ジル）−７−メチレン−１−ビニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒド ロインデン−４−オンまたは３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）− ４−ヒドロキシ−７−メチル−１−ビニルインダンを分離することによって、得 ることができる。 ミズオオバコは、トチカガミ（Ｈｙｄｒｏｃｈａｒｉｔａｃｅａｅ）科に属し 、浸水または一部浮遊する水生植物である。ミズオオバコは、浸水部分で縮んだ 冠部を形成する根生葉を有する。長い浮遊部分は有柄であり、長円形および槍先 形、楕円形または心臓形である。花は、雌雄同花で単生であり、長い花柄の肉穂 花序をもつ無柄であり、そして３枚の線形および楕円形の萼片並びに３枚の大き い卵形または球形の花弁からなる。 本発明によれば、一般的には乾燥し微細に粉砕した全植物体の形態のミズオオ バコを、１〜４個の炭素原子を含有する脂肪族アルコールおよび１〜６個の炭素 原子を含有する脂肪族エステルから選ばれた溶媒で一回または数回処理し、濃縮 後に乾燥抽出物を得て、該乾燥抽出物を５〜８個の炭素原子を含有する脂肪族炭 化水素または５〜７個の炭素原子を含有する脂環式炭化水素から選ばれた溶媒に 溶かして溶液を得て、該溶液から濾過によって不溶性物質を分離し、濃縮後に乾 燥抽出物を得て、該乾燥抽出物から３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジ ル）−７−メチレン−１−ビニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロ インデン−４−オンまたは３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジ ル）−４−ヒドロキシ−７−メチル−１−ビニルインダンをクロマトグラフィー 技術の応用によって分離する。 式（Ｉ）で示される生成物の製造のための本発明による方法を実施する場合、 エタノールによる全植物体の抽出を行い、そして得られた乾燥抽出物をヘキサン のような脂肪族炭化水素で処理することは特に有利である。 式（ＩＩ）で示される生成物の製造のための本発明による方法を実施する場合 、メチル＝ｔ−ブチル＝エーテルによって全植物体の抽出を行い、そして得られ た乾燥抽出物を、アセトニトリルのようなニトリルを加えたヘプタンのような脂 肪族炭化水素で処理することは特に有利である。 場合によりニトリルを加えた脂肪族炭化水素による処理から誘導された抽出物 から、３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン−１−ビ ニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４−オンまたは３ −（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキシ−７−メチル− １−ビニルインダンを分離することは一般的に、高速液体クロマトグラフィーに よってまたは遠心分配クロマトグラフィーによって行われる。 ３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン−１−ビニル −２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４−オンおよび３−（ ３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキシ−７−メチル−１− ビニルインダンは顕著な生物学的性質を有する。 試験管内で、３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７− メチレン−１−ビニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン− ４−オンおよび３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキ シ−７−メチル−１−ビニルインダンはチュ−ブリンの重合を阻害する性質を示 す。 ブタの脳から誘導されたチュ−ブリンは、Ｍ．Ｌ．ＳＨＥＬＡＮＳＫＩ等，Ｐ ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７０，７６５−７６８（１９７ ３）の方法に従って重合−解重合のサイクルを３回行い、次いでＭ．Ｄ．ＷＥＩ ＮＧＡＲＴＥＮ等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７２，１ ８５８−１８６２（１９７５）の方法に従ってホスホセルロース上のクロマトグ ラフィーを行うことによって精製される。 ０．０５Ｍ Ｍｅｓ緩衝液（ｐＨ＝６．８）、０．２５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、０ ．５ｍＭ ＥＧＴＡ、３．４Ｍグルセロールおよび１ｍＭ ＧＴＰ中の８．５μ Ｍの濃度のチュ−ブリンは、３７℃で、ＭｇＣｌ₂（６ｍＭ）および無水エタノ ール中の１ｍｇ／ｃｍ³の溶液中の３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジ ル）−７−メチレン−１−ビニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロ インデン−４−オンまたは３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４ −ヒドロキシ−７−メチル−１−ビニルインダンの０．８から１６μＭまでの増 加する濃度の添加後、３０分間で重合する。 チュ−ブリンがマイクロチュ−ブに集成すると、３５０ｎｍで分光光度計によ って観察される濁度が増加する。 ３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン−１−ビニル −２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４− オンおよび３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキシ− ７−メチル−１−ビニルインダンによってチュ−ブリンの重合が阻害され、その 結果重合の潜伏期間が増加し、重合の速度が低下し、並びに定常状態での濁度が 低下する。チュ−ブリンの重合を５０％阻害する式（Ｉ）で示される生成物の濃 度は、３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン−１−ビ ニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４−オンの場合、 ５μＭ未満および１μＭ未満までもの濃度を有する。 試験管内で、３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン −１−ビニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４−オン および３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキシ−７− メチル−１−ビニルインダンは、３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル ）−７−メチレン−１−ビニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロイ ンデン−４−オンの場合、マウス白血病細胞株Ｐ３８８並びに耐性株Ｐ３８８／ ＤＯＸに対して１μｇ／ｃｍ³未満および１μｇ／ｃｍ³未満までもの細胞毒性を 示す。 以下の実施例は本発明を説明するものである。実施例１ 乾燥し微細に粉砕した全植物体の形態のミズオオバコの８．８ｋｇを、Ｔｅｒ ｇａｌ（商標）布を備えた単板フィルター中で、シクロヘキサンで変性された９ ９．９％エタノールの６０リットルと１時間撹拌する。２バールの窒素圧下で濾 過した後、植物を再度６０リットルのエタノールで１時間抽出し、次いで３０リ ットルのエタノールで１２時間抽出する。次いで、植物を３０リットルのエタノ ールで洗浄する。 このようにして得たエタノール性溶液を、熱サイホン蒸発器中で１５リットル の容量まで濃縮し、次いで減圧下で４０℃で乾固まで濃縮する。 このようにして８０ｇの軟質の緑色の抽出物を得て、その抽出物を３リットル のヘキサン中に溶かす。不溶性物質（７ｇ）を濾過した後、濾液を乾固まで濃縮 する。このようにして、チュ−ブリンの重合に対する阻害活性（ＩＣ₅₀）が７５ μｇ／ｃｍ³である生成物（抽出物Ａ）の７３ｇを得る。 ９．４ｇの抽出物Ａを２００ｃｍ³のシクロヘキサン中に溶かす。不活性な不 溶性物質（２ｇ）を濾過した後、シクロヘキサン含有溶液を、直径／高さ比が１ ５に等しいＭｅｒｃｋシリカ（０．０４０−０．０６３ｍｍ）の２００ｇを充填 したカラムに通塔させる。溶出は、ジクロロメタンが５％ずつ増加する勾配をも つシクロヘキサン−ジクロロメタン混合物で行い、５００ｃｍ³のフラクション を収集する。シクロヘキサン−ジクロロメタン混合物４５：５５、４０：６０お よび３５：６５容量による溶出に対応するフラクションを一緒にして、減圧下で 、２０℃近辺の温度で、乾固まで濃縮する。このようにして、活性が２．５μｇ ／ｃｍ³である生成物の１．２ｇを得る。 このようにして得た生成物を５ｃｍ³のジクロロメタン−メタノール混合物（ ９９：１容量）中に溶かし、そして直径／高さ比が１５に等しい、Ｍｅｒｃｋ６ ０Ｈシリカの５０ｇを充填し、同一の溶媒で調製したカラム上でクロマトグラフ ィー処理する。溶出は、ジクロロメタン−メタノール混合物（９９−１容量）で 行い、２ｃｍ³のフラクションを収集する。フラクション４１−６８を一緒にし て、減圧下で乾固まで濃縮する。このようにして、活性が１μｇ／ｃｍ³である 生成物の７０ｍｇ を得て、その生成物を、ＢＩＯＲＡＤ Ｃ１８ ＨＬ−９０−１０カラム上の高 速液体クロマトグラフィーによって、アセトニトリル−水混合物で３ｃｍ³／分 の流速で溶出し、２５４ｎｍのＵＶ吸収による検出を行って、精製する。保持時 間１９分のピークに対応するピークを収集して、１４ｍｇの純粋の３−（３−ヒ ドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン−１−ビニル−２，３，３ａ ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４−オンを、淡黄色の半固体の形態で 得て、その特性は以下の通りである。即ち、 −比旋光度：［α］²⁰（Ｎａ ５８９）＝ −２０．８±１．０ （ジクロメタン、ｃ＝０．５） ［α］²⁰（Ｈｇ ４３６）＝ −３２．０±１．２ （ジクロメタン、ｃ＝０．５） −赤外スペクトル：主要な特性吸収帯、３４００、３０７０、２９２５、２８４ ０、１６６０、１５８０、１５００、１４３５、１２７０、１１２５および１０ ２５ｃｍ^-1、 −マススペクトル （ＤＣＩ ＮＨ₃）：３２８（Ｍ ＋ ＮＨ₄）⁺ （ＥＩ）：（３１１）（Ｍ ＋ＮＨ₄＝ ＯＨ）⁺、 −プロトン核磁気共鳴スペクトル（６００ ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；δ（ｐｐｍ） ）：６．９９（ｄ，Ｊ＝９ Ｈｚ，１Ｈ）；６．８０（ｄ，Ｊ＝２ Ｈｚ，１Ｈ ）；６．７７（ｄ，Ｊ＝８ Ｈｚ，１Ｈ）；６．６９（ｄｄ，Ｊ＝２および８ Ｈｚ，１Ｈ）；５．９４（ｄ，Ｊ＝９ Ｈｚ，１Ｈ）５．７８（ｍ，１Ｈ）；５ ０５３（ｓ，１Ｈ）；５．３２（ｍ，２Ｈ）；４．９８（ｄ，Ｊ＝１０ Ｈｚ， １Ｈ）；４．９５（ｄ，Ｊ＝１７ Ｈｚ，１Ｈ）；３．８８（ｓ，３Ｈ）；３． ０７（ｍ，１Ｈ）；２． ８８（ｄｄ，Ｊ＝６および８ Ｈｚ，１Ｈ）；２．８０（ｔ，Ｊ＝８および８ Ｈｚ，１Ｈ）；２．６２（ｍ，１Ｈ）；２．５１（ｍ，２Ｈ）；１．７４（ｍ， １Ｈ）；１．５８（ｍ，１Ｈ）。 得られた生成物は、Ｍｅｒｃｋ Ｆ２５４シリカ上の薄層クロマトグラフィー によって、ジクロロメタン−メタノール混合物（９９：１容量）で溶出し、プレ ートを１００℃に加熱した後エタノール中の０．１％の硫酸第二セリウムで発色 させて、可視化することができる。生成物は、Ｒｆ＝０．５の赤紫色のスポット の形態で、現われる。実施例２ 実施例１で得た２ｇの抽出物Ａを、１０ｃｍ³の酢酸エチル−ヘプタン−メタ ノール−水の混合物（１：２：２：１容量）中に溶かし、次いで２４５ｃｍ³の カラムを有するＣＰＣ ＳＡＮＫＩ装置で向流分配クロマトグラフィー法によっ てクロマトグラフィー処理し、操作は以下の条件下で行う。即ち −固定相 ：重相 −移動相 ：軽相 −方向 ：上昇 −回転速度 ：１００回転／分 −流速 ：３ｃｍ³／分 −保持 ：８０％ −方向の逆転：１７０分。 注入は２相の平衡状態で行う。フラクションは２分毎に収集する。薄層クロマ トグラフィーおよび分析の結果、フラクション５６〜８５が３−（３−ヒドロキ シ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン−１−ビ ニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４−オンを含有す ることが示される。得られた生成物を、実施例１に記載の条件下のＨＰＬＣによ って精製して、２ｍｇの純粋の３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル） −７−メチレン−１−ビニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロイン デン−４−オンを得る。実施例３ 乾燥し微細に粉砕した全植物体の形態のミズオオバコの８５ｋｇを、Ｔｅｒｇ ａｌ（商標）布を備えた単板フィルター中で、４００リットルのメチル＝ｔ−ブ チル＝エーテルと１時間撹拌し、次いで１２時間接触させたままにする。２バー ルの窒素圧下で濾過した後、植物を再度４００リットルのメチル＝ｔ−ブチル＝ エーテルで１時間抽出し、１２時間接触させたままにする。次いで、植物を２０ ０リットルのメチル＝ｔ−ブチル＝エーテルで洗浄する。 このようにして得たエーテル性溶液を、熱サイホン蒸発器中で１５リトルの容 量まで濃縮し、次いで減圧下で４０℃で乾固まで濃縮する。 このようにして７５ｇの軟質の緑色の抽出物を得て、その抽出物を３０リット ルのヘキサン−アセトニトリル混合物（１：１容量）中に溶かす。不活性な不溶 性物質を濾過した後、濾液を乾固まで濃縮する。このようにして、２７０ｇの油 状の緑−栗色の生成物を得る。 得られた１０ｇの生成物を１５０ｃｍ³の酢酸エチル−ヘプタン−メタノール −水の混合物（２：３：３：２容量）中に溶かし、次いで３つのカートリッジに 分かれている、２５００ｃｍ³の容量を有するＩＴＯ（商標）型ＳＦＣＣ８００ 装置中で、向流分配クロマトグラフィー法によってクロマトグラフィー処理し、 操作は以下の条件下で行う。即ち、 −固定相 ：重相 −移動相 ：軽相 −方向 ：上昇 −回転速度 ：３８０回転／分 −流速 ：８ｃｍ³／分 −保持 ：４６％ 注入は平衡した２相で行う。フラクションは８分毎に収集する。３０個のフラ クションを回収した後、分離を停止する。フラクション１９〜２６を一緒にして 、乾固まで濃縮する。このようにして、３．５ｇの油状の抽出物を得て、その抽 出物から、純粋の３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロ キシ−７−メチル−１−ビニルインダンを、高さ３ｃｍで直径１．２ｃｍのＡＭ ＩＣＯＮシリカカラム（０．０３０−０．０７０ｍｍ）上のクロマトグラフィー によって分離する。溶出は、増加するメチル＝ｔ−ブチル＝エーテルの勾配を使 用してヘプタンで行い、そして５ｃｍ³のフラクションを収集する。ヘプタン− メチル＝ｔ−ブチル＝エーテルの混合物（８：２容量）による溶出に対応するフ ラクション２２および２３を一緒にして、減圧下で乾固まで濃縮する。このよう にして、０．５ｍｇの３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒ ドロキシ−７−メチル−１−ビニルインダンを淡黄色の固体の形態で得て、その 特性は以下の通りである。即ち、 −比旋光度：［α］²⁰（Ｎａ ５８９）＝ ＋３２．３±１．３ （ジクロメタン、ｃ＝０．５） ［α］²⁰（Ｈｇ ４３６）＝ ＋７５．０±１．８ （ジクロメタン、ｃ＝０．５）、 −赤外スペクトル：主要な特性吸収帯、３４１９、３０７４、１６３５、１５９ ２、１４９５、１２７１、１１２６および１０２９ ｃｍ^-1、 −マススペクトル （ＤＣＩ ＮＨ₃）：３２８（Ｍ＋ＮＨ₄）⁺ （ＥＩ）：３１０（Ｍ）⁺、 −プロトン核磁気共鳴スペクトル（６００ ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；δ（ｐｐｍ） ；結合定数 Ｊ（Ｈｚ））：１．９５（ｍ，１Ｈ）；２．０５（ｍ，Ｈ）；２． １８（ｓ，３Ｈ）；２．６２（ｄ，Ｊ＝８および１３，１Ｈ）；３．１６（ｄｄ ，Ｊ＝６および１３，１Ｈ）；３．５８（ｍ，１Ｈ）；３．８３（ｍ，１Ｈ）； ３．８８（ｍ，１Ｈ）；４．２５（ｓ，１Ｈ）；４．９８（ｄ，Ｊ＝８，１Ｈ） ；５．０１（ｄ，Ｊ＝１６，１Ｈ）；５．５８（ｓ，１Ｈ）；５．７８（ｄｄ， Ｊ＝８および１６，１Ｈ）；６．５３（ｄ，Ｊ＝７，１Ｈ）；６．６９（ｄｄ， Ｊ＝７および１，１Ｈ）；６．７９（ｄ，Ｊ＝７，１Ｈ）；６．８２（ｄｄ，Ｊ ＝１，１Ｈ）；６．８５（ｄ，Ｊ＝７，１Ｈ）、 −紫外スペクトル： λ ｍａｘ ＝ ２８２ｎｍ（ε＝４６５０）；２２５ｎｍ（肩）；２０７ｎ ｍ（ε＝４８８００）（ｃ＝１０．１ ｇ／ｃｍ³；メタノール） λ ｍａｘ ＝ ２８２ｎｍ；２２５ｎｍ（肩）；２０６ｎｍ（ｃ＝１０．１ ｍｇ／ｃｍ³；メタノール−塩酸） λ ｍａｘ ＝ ２９７ｎｍ（肩）；２８８ｎｍ；２４３ｎｍ（肩）；２１４ ｎｍ（ｃ＝１０．１ ｍｇ／ｃｍ³；メタノール−水酸化カリウム）。 得られた生成物は、Ｍｅｒｃｋ Ｆ２５４シリカ上の薄層クロマトグ ラフィーによって、ジクロロメタン−メタノール混合物（９９：１容量）で溶出 し、フェノールに特異的であるＧＩＢＢＳ試薬で発色させて、可視化することが できる。生成物は、Ｒｆ＝０．４８の青色のスポットの形態で、現われる。 ３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン−１−ビニル −２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４−オンおよび３−（ ３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキシ−７−メチル−１− ビニルインダンは、異常な細胞増殖に関して顕著な阻害活性を示し、そして異常 な細胞増殖に関連する病理学的症状を有する患者の治療を可能にする治療特性を 有する。病理学的症状として、それらの限定されないが、筋肉、骨または結合組 織、皮膚、脳、肺臓、生殖器官、リンパ系または腎臓系、乳房または血液細胞、 肝臓、消化系、膵臓および甲状腺もしくは副腎を含んでなる種々の組織および／ または器官の悪性または非悪性細胞の異常な細胞増殖が挙げられる。これらの病 理学的症状として、乾癬、固形腫瘍、卵巣、乳房、脳、前立腺、結腸または胃癌 、腎臓の癌または精巣の癌、Ｋａｐｏｓｉ肉腫、胆管癌、絨毛癌、神経芽腫、Ｗ ｉｌｍｓ腫瘍、Ｈｏｄｇｋｉｎ病、黒色腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ球性白血 病、急性もしくは慢性顆粒球性リンパ腫を挙げることができる。本発明による新 規な生成物は、乳房、卵巣もしくは結腸癌または腎臓の癌の治療に特に有用であ る。本発明による生成物は、病理学的症状の出現または再出現を防止または遅延 させるか、またはこれらの病理学的症状を治療するのに使用することができる。 本発明による生成物は、好適には非経口経路である選択された投与経路に適し た種々の形態で、患者に投与することができる。非経口経路に よる投与は、静脈内、腹腔内、筋肉内または皮下投与を含んでなる。腹腔内また は静脈内投与がさらに特に好適である。 本発明はまた、３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレ ン−１−ビニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４−オ ンまたは３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキシ−７ −メチル−１−ビニルインダンを、医学または獣医学的治療での使用に適する十 分な量で、含有する医薬組成物を含んでなる。組成物は、一つまたはそれ以上の 薬学的に許容される補助剤、担体または補形剤を使用する通常の方法に従って製 造することができる。適切な担体として、希釈剤、無菌水性媒体および無毒性で ある各種溶媒が挙げられる。好適には、乳化剤、着色剤、保存剤または安定化剤 を含有することができる注射用溶液の組成物は、水性溶液または懸濁液の形態で 提供される。 補助剤または補形剤の選択は、生成物の溶解度および化学的性質、特定の投与 方式および医薬品製造基準によって決定することができる。 非経口投与の場合、水性または非水性無菌溶液または懸濁液が使用される。非 水性溶液または懸濁液の場合、オリーブ油、ゴマ油のような天然植物油もしくは パラフィン油またはオレイン酸エチルのような注射できる有機エステルを使用す ることができる。水性溶液は、ｐＨが適切に調節される限りそして等張性が例え ば塩化ナトリウムまたはグルコースの十分量で達成される場合、静脈内投与に適 する。滅菌は加熱によってかまたは組成物を損なわないいずれの他の手段によっ ても行うことができる。 本発明による組成物中に入るすべての生成物は純粋であり、そして使 用量において無毒性でなければならないことは良く理解される。 組成物は少なくとも０．００１％の治療的に活性な生成物を含有することがで きる。組成物中の活性生成物の量は、適切な用量が処方され得るような量である 。好適には、組成物は、非経口投与の場合、単位用量が約０．０１〜１００ｍｇ の活性生成物を含有するように製造される。 治療処置は、抗腫瘍性薬、モノクローン抗体、免疫学的治療もしくは放射線治 療または生物学的応答修飾因子を含む他の治療処置と同時に行うことができる。 応答修飾因子として、それらに限定されないが、リンホカイン、インターロイキ ンのようなサイトカイン、インターフェロン（α、βまたはδ）およびＴＮＦが 挙げられる。細胞の異常増殖による疾患の治療に有用である他の化学治療剤とし て、それらの限定されないが、メクロレタミン、シクロホスファミド、メルファ ランおよびクロランブシルのようなナイトロジェンマスタードのようなアルキル 化剤、ブスルファンのようなスルホン酸アルキル、カルムスチン、ロムスチン、 セムスチンおよびストレプトゾシンのようなニトロソ尿素、ダカルバジンのよう なトリアゼン、メトトレキサートのような葉酸類似体のような代謝拮抗物質、フ ルオロウラシルおよびシタラビンのようなピリミジン類似体、メルカプトプリン およびチオグアニンのようなプリン類似体、ビンブラスチン、ビンクリスチンお よびベンデスチンのようなビンカからのアルカロイドのような天然生成物、エト ポシドおよびテニポシドのようなエピポドフィロトキシン、ダクチノマイシン、 ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ピリカマイシンおよびマイ トマイシンのような抗生物質、Ｌ−アスパラギナーゼのような酵素、シスプラチ ンのような白金配位錯体のような各種試薬、ヒドロキシ尿素のような置 換尿素、プロカルバジンのようなメチルヒドラジン誘導体、ミトタンおよびアミ ノグルテチミドのような副腎皮質サプレッサー、プレジニソンのような副腎皮質 ステロイドのようなホルモンおよび拮抗物質、ヒドロキシプロゲステロン・カプ リン酸、メトキシプロゲステロン・酢酸およびメゲストロール・酢酸のようなプ ロゲスチン、ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオールのよ うなエストロゲン、タモクシフェンにようなアンチエストロゲン、テストステロ ン・プロピオン酸およびフルオキシメステロンのようなアンドロゲンが挙げられ る。 本発明による方法の実施のために使用される用量は、予防処置または最大の治 療的応答を可能にする量である。用量は、投与の形態および治療される被検者に 特有の特徴によって変化する。一般的に、用量は、異常な細胞増殖による疾患の 治療に治療的に有効である量である。本発明による生成物は、所望の治療的効果 を得るために必要である頻度で投与することができる。幾人かの患者は、比較的 に高いかまたは低い用量に対して迅速に応答し、次いで低い維持用量を要するか または全く要しない。一般的に、治療の開始時には低い用量が使用され、そして 必要に応じて、最適の効果が得られるまで、増加的に高い用量が投与される。他 の患者の場合、維持用量を、考慮される患者の生理学的要求に応じて、１日１〜 ８回、好適には１〜４回投与することが必要であり得る。ある一定の患者の場合 、１日１〜２回だけの投与を使用することが必要であり得ることも可能である。 ヒトの場合、静脈内経路を使用して、用量は、一般的に０．０５〜５０ｍｇ／ｋ ｇ、好適には０．０１〜５ｍｇ／ｋｇ、もっとさらに特別には０．１〜２ｍｇ／ ｋｇである。最も適切な用量を選択するためには、投与経路、患者の体重、全般 的健康状態、年 齢および治療法の効能に影響することができる要因のすべてを考慮すべきである ことは理解される。 以下の実施例は本発明による組成物を説明するものである。実施例 実施例１で得た生成物の４０ｍｇを、１ｃｍ³のＥｍｕｌｐｈｏｒ ＥＬ６２ ０および１ｃｍ³のエタノール中に溶解させ、次いで溶液を１８ｃｍ³の生理食塩 水の添加によって希釈する。 組成物は、生理食塩水中に導入することによって、１時間の輸液によって投与 する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９６年１月１２日 【補正内容】 ６．請求の範囲１、２および３のいずれか一項に記載の生成物を、純粋な状態 または一つもしくはそれ以上の希釈剤もしくは補助剤との組み合せで、場合によ りそれ自体治療的に活性である（空白）またはそれ以上の生成物と一緒に含有す ることを特徴とする医薬組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/12 ＡＤＶ Ａ６１Ｋ 31/12 ＡＤＶ 35/78 35/78 Ｘ Ｃ０７Ｃ 41/34 Ｃ０７Ｃ 41/34 45/79 45/79 49/753 49/753 Ｃ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，Ｃ Ｚ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，Ｓ Ｉ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式（Ｉ） で示される３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン−１ −ビニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４−オン、お よび式（ＩＩ） で示される３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキシ− ７−メチル−１−ビニルインダン、並びにそれらの立体異性型。 ２．以下の特性： −比旋光度：［α］²⁰（Ｎａ ５８９）＝ −２０．８±１．０ （ジクロメタン、ｃ＝０．５） ［α］²⁰（Ｈｇ ４３６）＝ −３２．０±１．２ （ジクロメタン、ｃ＝０．５） −赤外スペクトル：主要な特性吸収帯、３４００、３０７０、２９２５、２８４ ０、１６６０、１５８０、１５００、１４３５、１２７０、１１２５および１０ ２５ｃｍ^-1、 −マススペクトル （ＤＣＩ ＮＨ₃）：３２８（Ｍ ＋ ＮＨ4）⁺ （ＥＩ）：（３１１）（Ｍ＋ＮＨ₄＝ＯＨ）⁺、 −プロトン核磁気共鳴スペクトル（６００ ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；δ（ｐｐｍ） ）：６．９９（ｄ，Ｊ＝９ Ｈｚ，１Ｈ）；６．８０（ｄ，Ｊ＝２ Ｈｚ，１Ｈ ）；６．７７（ｄ，Ｊ＝８ Ｈｚ，１Ｈ）；６．６９（ｄｄ，Ｊ＝２および８ Ｈｚ，１Ｈ）；５．９４（ｄ，Ｊ＝９ Ｈｚ，１Ｈ）５．７８（ｍ，１Ｈ）；５ ０５３（ｓ，１Ｈ）；５．３２（ｍ，２Ｈ）；４．９８（ｄ，Ｊ＝１０ Ｈｚ， １Ｈ）；４．９５（ｄ，Ｊ＝１７ Ｈｚ，１Ｈ）；３．８８（ｓ，３Ｈ）；３． ０７（ｍ，１Ｈ）；２．８８（ｄｄ，Ｊ＝６および８ Ｈｚ，１Ｈ）；２．８０ （ｔ，Ｊ＝８および８ Ｈｚ，１Ｈ）；２．６２（ｍ，１Ｈ）：２．５１（ｍ， ２Ｈ）；１．７４（ｍ，１Ｈ）；１．５８（ｍ，１Ｈ）、 を有することを特徴とする３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７ −メチレン−１−ビニル−２，３，３ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン −４−オン。 ３．以下の特性： −比旋光度：［α］²⁰（Ｎａ ５８９）＝ ＋３２．３±１．３ （ジクロメタン、ｃ＝０．５） ［α］²⁰（Ｈｇ ４３６）＝ ＋７５．０±１．８ （ジクロメタン、ｃ＝０．５）、 −赤外スペクトル：主要な特性吸収帯、３４１９、３０７４、１６３５、１５９ ２、１４９５、１２７１、１１２６および１０２９ ｃｍ^-1、 −マススペクトル （ＤＣＩ ＮＨ₃）：３２８（Ｍ＋ＮＨ₄）⁺ （ＥＩ）：３１０（Ｍ）⁺、 −プロトン核磁気共鳴スペクトル（６００ ＭＨｚ；ＣＤＣｌ₃；δ（ｐ ｐｍ）；結合定数 Ｊ（Ｈｚ））：１．９５（ｍ，１Ｈ）；２．０５（ｍ，Ｈ） ；２．１８（ｓ，３Ｈ）；２．６２（ｄ，Ｊ＝８および１３，１Ｈ）；３．１６ （ｄｄ，Ｊ＝６および１３，１Ｈ）；３．５８（ｍ，１Ｈ）；３．８３（ｍ，１ Ｈ）；３．８８（ｍ，１Ｈ）；４．２５（ｓ，１Ｈ）；４．９８（ｄ，Ｊ＝８， １Ｈ）；５．０１（ｄ，Ｊ＝１６，１Ｈ）；５．５８（ｓ，１Ｈ）；５．７８（ ｄｄ，Ｊ＝８および１６，１Ｈ）；６．５３（ｄ，Ｊ＝７，１Ｈ）；６．６９（ ｄｄ，Ｊ＝７および１，１Ｈ）；６．７９（ｄ，Ｊ＝７，１Ｈ）；６．８２（ｄ ｄ，Ｊ＝１，１Ｈ）；６．８５（ｄ，Ｊ＝７，１Ｈ）、 −紫外スペクトル： λ ｍａｘ ＝ ２８２ｎｍ（ε＝４６５０）；２２５ｎｍ（肩）；２０７ｎ ｍ（ε＝４８８００）（ｃ＝１０．１ ｇ／ｃｍ³；メタノール） λ ｍａｘ ＝ ２８２ｎｍ；２２５ｎｍ（肩）；２０６ｎｍ（ｃ＝１０．１ ｍｇ／ｃｍ³；メタノール−塩酸） λ ｍａｘ ＝ ２９７ｎｍ（肩）；２８８ｎｍ；２４３ｎｍ（肩）；２１４ ｎｍ（ｃ＝１０．１ ｍｇ／ｃｍ³；メタノール−水酸化カリウム）、 を有することを特徴とする３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−４ −ヒドロキシ−７−メチル−１−ビニルインダン。 ４．植物ミズオオバコ（Ｏｔｔｅｌｉａ ａｌｉｓｍｏｉｄｅｓ）を適切な溶 媒によって抽出し、次いで得られた抽出物から請求の範囲１に記載の生成物を分 離することを特徴とする請求の範囲１、２および３のいずれか一項に記載の生成 物の製造方法。 ５．植物を１〜４個の炭素原子を含有する脂肪族アルコールおよび１〜６個の 炭素原子を含有する脂肪族エーテルから選ばれた溶媒によって抽出し、濃縮後に 乾燥抽出物を得て、該乾燥抽出物を５〜８個の炭素原子を含有する脂肪族炭化水 素または５〜７個の炭素原子を含有する脂環式炭化水素から選ばれた溶媒に溶か し、場合により１〜４個の炭素原子を含有するニトリルと合して溶液を得て、該 溶液を濃縮して不溶性物質を分離した後抽出物を得て、該抽出物から３−（３− ヒドロキシ−４−メトキシベンジル）−７−メチレン−１−ビニル−２，３，３ ａ，４，７，７ａ−ヘキサヒドロインデン−４−オンまたは３−（３−ヒドロキ シ−４−メトキシベンジル）−４−ヒドロキシ−７−メチル−１−ビニルインダ ンをクロマトグラフィー技術の応用によって分離することを特徴とする請求の範 囲４に記載の方法。 ６．請求の範囲１、２および３のいずれか一項に記載の生成物を、純粋な状態 または一つもしくはそれ以上の希釈剤もしくは補助剤との組み合せで、場合によ りそれ自体治療的に活性である（空白）またはそれ以上の生成物と一緒に含有す ることを特徴とする医薬組成物。