JPH10502958A

JPH10502958A - 化学発光信号の増強

Info

Publication number: JPH10502958A
Application number: JP8505017A
Authority: JP
Inventors: マリー，エイドリアン・ジヨン; グロウト，ジヨナサン; セイント・ジヨン，シエリ・ジエイ; サツト，デイーシルド
Original assignee: アボツト・ラボラトリーズ
Priority date: 1994-07-15
Filing date: 1995-06-16
Publication date: 1998-03-17
Also published as: WO1996002839A1; EP0774121A1; CA2191613A1; AU2775395A

Abstract

(57)【要約】本発明は、アクリジニウム化合物から、増強した化学発光信号を発生させる方法を提供し、増強物質を添加しない状態で発生させる方法よりも、より強い化学発光信号が得られるよう、増強物質を含むトリガー液とアクリジニウムスルフォナミドを接触させるという工程からなる。増強物質は、非イオン界面活性剤、双性イオン界面活性剤、および陰イオン界面活性剤のうちの少なくとも一つの物質からなる。

Description

【発明の詳細な説明】化学発光信号の増強発明の背景１．技術分野本発明は、化学発光化合物を利用したイムノアッセイに関し、とくにアクリジンスルフォナミドの化学発光信号を増強させるような界面活性剤の利用に関する。２．発明の背景信号を発生する化合物として化学発光標識を利用するイムノアッセイが知られている。例えば、イムノアッセイにおける化学発光の発生や検出法として、Ｗ．Ｒ．Ｓｅｉｔｚに開示された、「ＩｍｍｕｎｏａｓｓｅｙＬａｂｅｌＢａｓｅｄｏｎＣｈｅｍｉｌｕｎｉｎｅｓｃｅｎｃｅａｎｄＢｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ」（ＣｌｉｎｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１７：ｐ１２０−１２６（１９８４））」がある。イムノアッセイの標識としてアクリジニウムエステルを使用し、これらの標識から短寿命の化学発光信号を発生させるというものは、Ｉ．Ｗｅｅｋｓらにより、「ＡｃｒｉｄｉｎｉｕｍＥｓｔｅｒｓａｓＨｉｇｈｌｙＳｐｅｃｉｆｉｃＡｃｔｉｖｉｔｙＬａｂｅｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ（ＣｌｉｎｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９：ｐ１４７４−１４７８（１９８４））」に開示された。イムノアッセイにおいてアクリジニウムエステルや他を標識して、発生する化学発光信号の強度を高める方法もこれまでに知られている。例えば、アメリカ合衆国特許第４，９５９，１８２号がそれで、アルカリ性フォスファターゼを触媒として１，２−ジオキシエタンに界面活性剤や蛍光物質を付加することにより、化学発光信号を増幅させるという方法をとる。また、アメリカ合衆国特許第４，９２７，７６９号では、アクリジニウムエステル複合物質から発生する化学発光信号を高めるよう、ある種の界面活性剤を使用するという方法が開示されている。この方法では、酸性条件下で第一信号発生試薬を使用した後、さらにｐＨを上げて化学信号を誘発させるような第二信号発生試薬を使用する。アクリジニウムエステルの場合、信号を効率的に発するよう二段階の工程で行われる必要がある。しかし、抗体を複合したアクリジニウムエステルは、あるｐＨ以上では加水分解を受けて不安定になるため、これには問題がある。この問題を解決するために、さらに化学発光標識が開発された。例えば、イムノアッセイ用標識として、安定したアクリジニウムスルフォナミドがあり、Ｍａｔｔｉｎｇｌｙらにより一般に譲渡され公告されたヨーロッパ特許出願第２７３，１１５号に記載されている。しかし、アクリジニウムスルフォナミドは、化学発光試薬として有用であるが、化学信号を増強してイムノアッセイの感度や効率を改善する必要性は残されたままである。このため、本発明の主な目的はアクリジニウムスルフォナミドの化学信号の増強を提供することである。本発明のその他の目的は、当業者にとり以下の記載から明らかとなるであろう。発明の要約本発明は、アクリジニウムスルフォナミドから、増強した化学信号を発生させる方法に関する。この方法は、増強剤（増感剤）の存在下でトリガー溶液とアクリジンスルフォナミド化合物を接触させる工程より成るが、増強剤を使わない他の方法より、約１．５から８倍強い化学発光信号が得られる。これに関連し、本発明は、アクリジニウムスルフォナミド化合物から、増強した化学信号を発生させる方法に関し、増強剤の存在下でトリガー物質とアクリジンスルフォナミドを接触させる工程より成り、ここにおいて増強剤は、（ｉ）非イオン界面活性剤、（ii）双性イオン界面活性剤、（iii）陰イオン界面活性剤のうちの少なくともいずれかひとつの物質である。さらに本発明は、アクリジニウムスルフォナミドからの化学発光信号を発生させるトリガー溶液を提供する。トリガー溶液には酸化剤と増強剤が含まれる。増強剤には、アクリジニウムスルフォナミドからの化学発光信号の強度を高めるよう、効果的な界面活性剤が含まれる。本発明のトリガー溶液には酸化剤と増強剤が含まれ、アクリジニウムスルフォナミド化合物を別に含む、イムノアッセイ検査キットの試薬として提供され得る。従って、本発明でイムノアッセイ検査キットを作製する場合、試薬として（ａ）アクリジニウムスルフォナミド化合物、（ｂ）アクリジニウムスルフォナミドとは別に、トリガー溶液、さらに（３）少なくとも、（ｉ）非イオン界面活性剤、（ii）双性イオン界面活性剤、（iii）陰イオン界面活性剤、のいずれかひとつの物質を含む増強剤からなる。各種イムノアッセイ検査キットの形で利用する場合、アクリジニウムスルフォナミド化合物は、アクリジニウムスルフォナミドを標識した複合体として提供され得る。検査キットの望ましい具体例は、本発明の増強剤がトリガー溶液中で安定である、という本発明者らの発見により可能となった。アクリジニウムスルフォナミド複合体は、第一の試薬として供与され、酸化剤や増強剤を混合したトリガー溶液は、第二の試薬として供与され得る。また、トリガー溶液と増強剤を別々に供与することも可能である。さらに、増強剤をアクリジニウムスルフォナミド化合物と混合して供与することも可能である。詳細の記述ここで用いられる「アクリジニウムスルフォナミド化合物」は、以下のような構造式を持つ化学発光化合物を意味する。ここで、Ｒ、Ｒ’、Ｒ”、Ｘ¹、およびＸ²は、化学発光化合物により提供される化学発光信号を干渉しないような置換基であり、Ｒ”−Ｘ¹ やＲ−Ｘ²を夫々独立に水素に置き換えることも出来る。特に、ＲやＲ”はスペーサーとなる部分で、Ｘ¹やＸ²は夫々独立に、水素、カルボキシル基、カルボアルコキシル基、カルボキサミド基、カルボアリールオキシ基、シアノ基、カルボキシイミド基、イソシアネート基、イソチオシアネート基、スルフォ基、ハロゲン化スルフォニル基、ハロゲン化カルボニル基、Ｎ−スクシニミジルオキシカルボニル基、およびＮ−スクシニミジルオキシスルフォニル基のいずれかの官能基からなる。Ｙ^-は適当な対イオンで、硫酸塩、硫酸アルキル、ハロ硫酸塩、ハロホウ酸塩、ハロ酢酸塩、ハロリン酸塩、リン酸塩、ハロゲン化物のいずれかの物質から選ばれる。望ましい対イオンは、硫酸塩、もしくはハロゲン化物である。Ｒ、Ｒ’、およびＲ”は夫々独立に、アルキル基、アルキレン基、アリール基、または、上記官能基の一つ以上の水素原子を、アルキル基、アリール基、アルキレン基、置換アルキル基、置換アルキレン基、置換アリール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、ハロゲン、アミノ基、保護アミノ基、置換アミノヒドロキシ基、保護水酸基、オキソ基、チオ基、イミノ基、メルカプト基、もしくは置換メルカプト基で置き換えた置換アルキル基、置換アルキレン基、置換アリール基であり、あるいは上記官能基の一つ以上の炭素原子をヘテロ原子で置き換えたものから選ばれる。ヘテロ原子は、窒素、リン、硫黄、酸素の中から選ばれる。ＲやＲ”は、夫々独立して式−（ＣＨ₂）_n−で表されるスペーサー鎖（アーム）であってもよく、ここでｎは０から５０である。本発明における使用に適したアクリジニウムスルフォナミド化合物は、１０− メチル−Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミド、および１０−（スルフォプロピル）−Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミドである。最も望ましいアクリジニウムスルフォナミドは、１０−（３−スルフォプロピル）−Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミドである。本発明の使用に適するアクリジニウムスルフォナミドとしては、ここで本発明記載の１部分として参照のＭｏｌｚらによるヨーロッパ特許出願第２５７，５４１号（１９８８年３月２日に公告）が参照される。Ｍｏｌｚらにより議論されたアクリジニウムスルフォナミド化合物は、次の一般式を持つ。ここで、Ｒ¹は、水素、アルキル基、炭素原子数１〜１０のアルケニルまたはアルキニル基、ベンジルまたはアリール基のいずれかであり、Ｒ²とＲ³は、水素、炭素原子数１〜４のアルキル基、置換もしくは非置換のアミノ基、カルボキシル基、アルコキシル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲンのいずれかであり、Ｒ⁴は、スルフォナミド基が窒素、又は（ＩＩ）式に表されるようなチオアルキル基やチオアリール基を通して直接カルボニル基に結合しているような官能基で表される。 −Ｓ・Ｘ・Ｒ⁵ （II）ここで、Ｘは分枝状、または非分枝状の脂肪族または芳香族基で、ヘテロ原子を含むこともある。Ｒ⁵は、反応性のある官能基で、穏やかな条件でアミノ基、カルボキシチオール基、その他生物学的に重要な物質の機能的官能基と選択的に結合され得る。Ａ^-は、化学発光に干渉しない陰イオンである。本発明のアクリジニウムスルフォナミド化合物の有用な調製法は、参考文献に記載されているが、Ｍａｔｔｉｎｇｌｙらにより１９８８年７月６日に公告された、ヨーロッパ特許出願第２７３，１１５号に開示されている。また、Ｍｏｌｚらにより公告されたヨーロッパ特許出願第２５７，５４１号にも、アクリジニウムスルフォナミドの調製法が議論されている。両文献は本明細書の１部とみなされる。アクリジニウムスルフォナミドは、電子的に励起した状態の生成物を産するアクリジニウムスルフォナミドと反応するものであれば、いずれの酸化剤によっても酸化され得る。基底状態に戻る時、生成物は化学発光反応を起こして、光としてエネルギーを放出する。ここで用いられる「トリガー溶液」とは、化学発光を開始、または触媒する酸化剤を含む溶液を意味する。望ましいトリガー溶液としては、希アルカリ溶液に溶かした過酸化水素溶液がある。ここで用いられる「増強剤（増感剤）」とは、本発明により提供された試薬による化学発光の全発光量の増加、および／または増強剤無添加状態でのバックグランド・ノイズに対するアクリジニウムスルフォナミドによる化学発光量の比の増加を意味する。増強剤は、非イオン界面活性剤、双性イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤より成る群から選択される少なくとも１種の物質より成る。非イオン界面活性剤は、ニューヨーク州、ＶＣＨＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃより発行された「ＳｕｒｆａｃｔａｎｔＳｃｉｅｎｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」（１９８８）においてＤｒｅｗＭｙｅｒｓにより議論されている。望ましい非イオン界面活性剤としては、ポリオキシエチレン化アルキレン化アルキルフェノール、ポリオキシエチレン化直鎖状アルコール、ポリオキシエチレン化ソルビトールエステル、およびアルカノーラミン−脂肪酸縮合物がある。市販されている非イオン界面活性剤で、本発明に適したものは、ＴＲＩＴＯＮＸ−１００、ＴＷＥＥＮ−２０およびＢＲＩＪ−３５である。双性イオン界面活性剤は、Ｍｙｅｒｓ（前述）で議論されている。望ましい双性イオン界面活性剤は、以下の構造式で表される。ここで、Ｒ¹はＣ_14-16の脂肪族、Ｒ²とＲ⁴はメチルまたはエチル、Ｒ³は、Ｃ_1-3 の脂肪族である。その他の適当な双性イオン界面活性剤としては、Ｒ¹がＣ_8-20 、Ｒ²、Ｒ⁴、Ｒ³がＣ_1-4の脂肪族で表されたものがある。市販の双性イオン界面活性剤には、Ｔｅｔｒａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ、Ｈｅｘａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ、およびＣＨＡＰＳがある。陰イオン界面活性剤もまた、Ｍｙｅｒｓ（前述）で議論されている。望ましい陰イオン界面活性剤としては、ドデシル硫酸リチウム、ドデシル硫酸ナトリウム、およびコール酸がある。アメリカ合衆国特許第４，９２７，７６９号で開示された陽イオン界面活性剤、ＭｅｒｑｕａｔやＣｙａｓｔａｔは、ほとんど、または全くアクリジニウムスルフォナミドの増強作用が無いことを確認している。本発明で使用する増強剤として適したものは、一般に化学発光が起きる状態下で試薬に溶解しなければならない。本発明で増強剤として使用を指示した界面活性剤は、増強剤無添加の状態に比べ、アクリジニウムスルフォナミドからの化学発光信号の強度を約１．５から８倍にも増加させた。また、望ましい使用例では、約３から８倍にも増加させた。アクリジニウムスルフォナミド中では、界面活性剤の全てが増強作用を示すわけではなく、多かれ少なかれ発光信号の強度はそれらを欠く場合と同程度であり、本発明の結果は予想外であった。さらに本発明で指示した界面活性剤による増強作用は、限界を有しないことおよび応答程度の点を含めて、アクリジニウムエステルの場合に見られた増強作用からは予測もつかない結果であった。例えば、陽イオン界面活性剤ＭｅｒｑｕａｔおよびＣｙａｓｔａでは、本発明で使用されたアクリジニウムスルフォナミド化合物に対する増強作用は、ほとんど、または全く認められなかった。信号の増強程度に影響する二次的反応条件は、ｐＨ、温度、試薬濃度を含む。以下に示したように、イムノアッセイ化学発光反応に加える望ましい増強剤濃度範囲は、化学発光を起こす（即ち、増強剤、トリガー溶液およびアクリジニウムスルフォナミド化合物を含む）溶液全量に対し、重量で約０．２５％から約５％である。尚、増強剤を約２％重量含む溶液は、より望ましい。本発明の増強剤は、アクリジニウムスルフォナミド化合物により発生する信号を増幅することで、検査試料のアクリジニウムスルフォナミドの定量を容易にする。本発明の特に有効な適用法として、イムノアッセイによるアクリジニウムスルフォナミド複合体の定量がある。つまり、増強した信号を発生するよう、分析物を含む可能性があるイムノアッセイ検査試料を、（ｉ）アクリジニウムスルフォナミド化合物（即ちアクリジニウムスルフォナミドと抗原、ハプテン、抗体、核酸等との複合体）、（ii）トリガー溶液、（iii）本発明に基づく増強剤、と接触させれば良い。トリガー剤と増強剤を、アクリジニウムスルフォナミドに加える前に混合しても良い。アクリジニウムスルフォナミド溶液と、トリガーおよび増強剤溶液とを分析物（アナライト）と連続してまたは同時に接触させ得る。イムノアッセイで使用するアクリジニウムスルフォナミド複合体を調製する手法は、参考文献として示したようにＭａｔｔｉｎｇｌｙらのヨーロッパ特許出願第２７３，１１５号に記述されている。本発明は、これまで知られた様々な不均質、および均質イムノアッセイ系で利用できる。このようなイムノアッセイ系として、競合的免疫測定法があるが、これに限定されない。一般に、イムノアッセイ系は、結合部位、例えばイムノグロブリン（即ち抗体全部、または分画）のような検査試料から特異的な分析物質に結合するものの能力に左右され、前記アクリジニウムスルフォナミドのような化学発光物質を標識した結合部位を含む標識試薬は、結合量を決定するために使用される。典型的には、イムノアッセイ系での結合量は、分析物質との結合反応に関っている場合もそうでない場合も、標識試薬に存在する化学発光化合物の総量で決定される。前記化学発光化合物による信号は、検出された後、検査試料中の分析物質量に換算される。検査試料は、分析物質（アナライト）を含む可能性があるどんな材料であってもよい。検査試料は、材料源から得られたものを直接使用するか、試料の性質を変えるような前処理を施した後に使用する。典型的には、均質イムノアッセイは、抗体が分析物質と結合する抗体の受容体に限りがあることから、検査試料の分析物質と標識試薬とを競合させるような競合イムノアッセイとして実施される。標識試薬とは、分析物質、又は化学発光物質を標識した分析物質や、その類似物である。検査試料の分析物質濃度により、抗体に特異的に結合する標識試薬の量を決定する。このような結合で生成する標識試薬と抗体の複合物の量は、定量的に測定され、検査試料に含まれる分析物の量に反比例する。不均質イムノアッセイは、標識試薬、又はトレーサーを利用する。これらは、化学発光化合物で標識した分析物質、分析類似物質、またはそれらの抗体より成る。このアッセイでは、遊離体と結合体が形成されている。検査試料に存在する分析物量として、このどちらかひとつのトレーサー量を換算するために、遊離体は、初めに結合体と分離しなければならない。これは従来法に従い、抗体、分析類似物質、分析物質などの結合反応に関与する物質を固定するために、固相を用いて実施する。ここで、結合関与物質のひとつは、従来法に従い、試験管、ビーズ、粒子、微粒子、繊維素材などの固相に固定される。固相物質とは、結合関与物質が固定、または含有されるようなあらゆる固体を指し、ビーズや磁性粒子、常磁性粒子、微粒子、巨大粒子、試験管、ミクロタイタープレートなどがあるが、これに限定されない。この固相材料は、合成素材、天然素材、または自然素材を合成的に改良した物質から製造することが可能である。紙やセルロースなどのセルロース材料、セルロースアセテートやニトロセルロースのようなセルロース誘導体、ガラス繊維、綿のような天然織物、ナイロンのような合成織物、シリカ、アガロース、デキストラン、ゼラチンのような多孔性ゲル、多孔性繊維質、架橋性デキストランのような澱粉を主成分とする素材、セラミック素材、ポリビニルクロライド、ポリエチレン、ポリビニルアセテート、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリスチレン、ビニルアセテートとビニルクロライドのコポリマー、ポリビニルクロライドとシリカとの複合体等々のオレフィン又は熱可塑性材料などから成り得るが、これらに限定されない。不均質イムノアッセイは、競合的イムノアッセイ法として実施される。例えば、抗体を固相材料に固定し、分離に際して結合型、または遊離型の化学発光化合物から発生する信号を検出し、検査試料中の分析物質の量に換算する。固相材料を利用する不均質イムノアッセイの別の例としては、サンドイッチイムノアッセイが参照される。これは、例えば抗原などを含む検査試料と、抗体等のタンパク質、または抗原と結合する可能性のある他の物質を接触させるもので、これらを固相に固定して行う。固相材料は、典型的には化学発光化合物を標識した第二の抗原または抗体と処理される。第二の抗原または抗体は、固相上の対応する抗原または抗体と結合し、結合型または遊離型の化学発光化合物による信号を検出して、検査試料中の分析物質の量に換算する。ここで用いられる「検査試料」とは、例えば血液、唾液、涙、脊髄液、汗、尿、乳、腹水、粘液、髄液、腹膜液、羊水など、生理的溶液等の任意の生物学的材料源（原料）を指す。処理方法は、ろ過、蒸留、濃縮、干渉物質の不活性化、試薬の添加等を包含し得る。生理的液体以外の溶液、例えば、環境分析や食品分析のための水や食品等の液体試料もまた使用され得る。加えて、分析物質を含む可能性がある固体材料でも、検査試料として利用可能である。場合によっては、溶液媒体を形成するように、または分析物質を遊離するように、固体検査試料を改良処理してもかまわない。分析物質は、検出、または測定を受ける任意の化合物または組成物であって、少なくとも一つのエピトープ、または結合部位をもつものであればよい。ここで用いられる「分析物質」とは、自然に結合を起こすような部位を持つものや、結合部位を調製できる物質を指す。分析物質とは、毒素、有機化合物、蛋白質、ペプチド、微生物、アミノ酸、、核酸、ホルモン、ステロイド、ビタミン、薬物（不法投与するものだけでなく、治療目的で投与されるものも含む）、ウィルス、又は、上記物質の代謝産物や抗体などがあるが、これらに限定されない。特にこのような分析物質は、フェリチン、クレアチニンキナーゼＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）、ダイオキシン、フェニトイン、フェノバルビタール、カルバマゼピン、バンコマイシン、ゲンタマイシン、セオフィリン、バルポン酸、キニジン、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、エストラジオール、プロゲステロン、ＩｇＥ抗体、ビタミンＢ１２ミクログロブリン、グリコヘモグロビン（ＧｌｙＨｂ）、コルチゾール、ジギトキシン、Ｎ−アセチルプロカイナミド（ＮＡＰＡ）、プロカイナミド、風疹抗体、風疹ＩｇＧや風疹ＩｇＭ、トキソプラズマ抗体、トキソプラズマＩｇＧ（Ｔｏｘｏ−ＩｇＧ）やトキソプラズマＩｇＭ（Ｔｏｘｏ−ＩｇＭ）、テストステロン、サリチル酸、アセタミノフェン、Ｂ型肝炎ウィルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ｂ型肝炎ウィルスコア抗原抗体、抗Ｂ型肝炎ウィルスコア抗原ＩｇＧとＩｇＭ（Ａｎｔｉ−ＨＢＣ）、ヒト免疫欠損症ウィルス１および２（ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２）、ヒトＴ細胞白血病ウィルス１および２（ＨＴＬ−１およびＨＴＬ−２）、肝炎Ｂｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）、肝炎Ｂｅ抗原の抗体（Ａｎｔｉ−ＨＢｅ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、総チロキシン（ｔｏｔａｌＴ４）、遊離チロキシン（ｆｒｅｅＴ４）、総トリヨードチロニン（ＴｏｔａｌＴ３）、遊離トリヨードチロニン（ｆｒｅｅＴ３）、癌胚抗原（ＣＥＡ）、アルファ胎児蛋白質（ＡＦＰ）などがあるが、これらに限定されない。乱用される薬物や、制御物質として、アンフェタミン、メタンフェタミン、アモバルビタール、セコバルビタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール、バルビタールなどのバルビツール酸、リブリウム、バリウムなどのベンゾジアゼピン、ハシッシュやマリファナのようなカンナビノイド、コカイン、フェンタニル、ＬＳＤ、メタクアロン、ヘロインやモルフィネ、コデイン、ハイドロモルフォン、ハイドロコドン、メタドン、オキシコドン、オキシモルフォン、アヘンのようなアヘン剤、フェンシクリジン、プロポキシヘンがあるが、これらに限定されない。分析物質はまた、任意の抗原物質、ハプテン、抗体、巨大分子およびそれらの組み合わせを包含する。しかしながら、この定義に限定されるものではない。ここで用いられる「分析類似物質（アナライト・アナログ）」とは、分析物質と特異的に結合する物質（メンバー）と交差反応する任意の物質を意味するが、交差反応の程度は分析物質より多くても小さくてもかまわない。分析類似物質は、対応する分析物質と共通する少なくとも一つのエピトープ部位を有するという特性を持っている限り、分析物分子の断片または合成した部分だけでなく、修飾した分析物も含まれる。分析類似物質の例として、分析類似物質が分析物全分子の少なくとも一つのエピトープを繰り返しているような合成ペプチド配列があり、その結果、分析類似物質は分析物質と特異結合性物質と結合し得る。結合物質（メンバー）は、結合対のメンバー、即ち二種の異なる分子であって第一の分子が第二の分子に、化学的、または物理的方法で特異的に結合しているようなものを言う。抗原と抗体の結合対メンバー以外の結合対メンバーとしては、（非限定的に）例えばビオチンとアビジン、石炭酸塩とレクチン、相補性のヌクレオチド配列、相補性のペプチド配列、エフェクターとレセプター分子、酵素のコファクターと酵素、酵素阻害剤と酵素、ペプチド配列とその配列か蛋白質全体に特異的な抗体、重合した酸と塩基、染色液と蛋白質結合剤、ペプチドと特異的な蛋白質結合剤（例えば、リボヌクレアーゼＳ−ペプチドやリボヌクレアーゼＳ−蛋白質）などを包含し得る。更に結合対としては、本来の結合対メンバーの類似物をも含む。例えば組替え技術や分子工学で作られる分析類似物質、または結合メンバーがあるが、これらに限定されない。当業者に周知のとおり、結合メンバーが免疫反応性を有し得るものである場合、例えばモノクローナル、又はポリクローナル抗体、組替え蛋白質、または組替え抗体、キメラ抗体、またはこれらの混合物又は断片等は、それらの抗体、ペプチドおよびヌクレオチドと同様に、結合メンバーとして好適である。上記発明は、アクリジニウムスルフォナミドによる化学発光信号を増強させるのに有用である。本発明で行われるイムノアッセイとしては、例示的には甲状腺ホルモン、癌マーカー、ウィルス抗原又はウィルス抗体、治療薬物などの分析が挙げられるが、これに限定されない。本発明は、過去に発表された方法に比べ、簡単で、感度もよく、便利な化学発光イムノアッセイを提供する。簡便化により、増強剤試薬を一段階で添加でき、効果的な化学発光イムノアッセイとなった。本発明の更なる利点は、著しく分析効率が改善されたことにある。効率を改善したために、アクリジニウムスルフォナミド複合体の利用量を減少することが可能となった。この利点により、分析感度を下げることなくコストダウンさせることが出来る。以下に具体的な実施例を示すが、本発明はこれらに限定されない。実施例１材料ヒト甲状腺刺激ホルモン（ｈ−ＴＳＨ）の抗体を、１０−（３−スルフォプロピル）−Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミドで標識する。簡便化のために、アクリジニウムスルフォナミドで置換したスルフォプロピルを、以下「アクリジニウムスルフォナミド（スルフォプロピル）」と記載する。同様に前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）ヤギ抗体も、１０−メチル−Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミドと、１０−（３−スルフォプロピル）−Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミドで別々に標識する。このメチル置換アクリジニウムスルフォナミドは、以下「アクリジニウムスルフォナミド（メチル）」と記載する。アクリジニウムスルフォナミド（メチル）とアクリジニウムスルフォナミド（スルフォプロピル）で標識した抗体の調製法は、本明細書の参考文献とするＭａｔｔｉｎｇｌｙらのヨーロッパ特許出願第２７３，１１５号に記載されている。検査した増強剤は次の通りである。Ｍｅｒｑｕａｔ（陽イオン界面活性剤、ジメチルジアリルアンモニウムクロライド）は、ペンシルバニア州、ピッツバーグのＣａｌｇｏｎＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから購入した。ＴＷＥＥＮ−２０（ソルビタンモノオリエートポリオキシエチレン）とＢＲＩＪ−３５（ラウリルアルコールエーテルポリオキシエチレン）は、ニュージャージー州フェアローンのＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した。ＴＲＩＴＯＮＸ−１００（ａ−［４−（１，１，３，３，テトラメチル−ブチル）フェニル］−ｗ−ヒドロキシポリ（オキシ−１、２−エタネジル）、ＣＨＡＰＳ（３−［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパン−スルフォネート）、およびＬＤＳ（ドデシル硫酸リチウム）は、ミズーリ州セントルイスのＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙから購入した。ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）は、カリフォルニア州リッチモンドのＢｉｏ−ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。ＣＹＡＳＴＡＴ（陽イオン界面活性剤、３−ローラミドプロピルトリメチルアンモニウムエチルサルフェート）は、ノースカロライナ州シャーロットにあるＡｍｅｒｉｃａｎＣｙａｎａｍｉｄｅＣｏｍｐａｎｙから購入した。コール酸は、ウィスコンシン州ミルウォーキーにあるＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙから購入した。モデルＬＢ９５０１発光測定器は、ドイツのワイルドバッドにあるＬａｂｏｒａｔｏｒｉｕｍＢｅｒｔｈｏｌｄから購入した。トリガー剤は、アルカリ性過酸化水素溶液で、０．６％の過酸化水素と０．０１％の消泡剤を含む０．２５規定水酸化ナトリウムである。消泡剤は、ＡｎｔｉｆｏａｍＣＥｍｕｌｓｉｏｎＳｉｇｍａＮｏ．Ａ−８０１１で、ミズーリ州セントルイスのＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙから購入した。消泡剤による信号強度への影響は認められなかった。方法アクリジニウムスルフォナミド複合体は、約２５０，０００カウントになるよう蒸留水で希釈し、バイアルに１００μｌ加えて発光測定器に設置した。バイアルが測定位置にある時に、選んだ増強剤を１％含むトリガー試薬３００μｌを、バイアルに注入した。対照液として、増強剤を含まないトリガー溶液を測定した。２秒間の発光量を発光測定器で計測した。結果表１に示したのは、ＣＨＡＰＳ、Ｍｅｒｑｕａｔ（陽イオン界面活性剤）、ＳＤＳ、ＬＤＳ、ＴＷＥＥＮ−２０、ＢＲＩＪ−３５、ＴＲＩＴＯＮＸ−１００、ＣＹＡＳＴＡＴ（陽イオン界面活性剤）、およびコール酸添加、もしくは無添加の状態で、アクリジニウムスルフォナミド（スルフォプロピル）を標識したｈ −ＴＳＨ抗体、アクリジニウムスルフオォミド（スルフォプロピル）を標識したＰＳＡ抗体、およびアクリジニウムスルフォナミド（メチル）を標識したＰＳＡ抗体における２秒間の化学発光反応での信号強度の増強比である。実施例２材料増強剤には、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙから購入したＨｅｘａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ（Ｎ−ヘキサデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル１ −３−アンモニオ−１−プロパンスルフォネート）やＴｅｔｒａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ（Ｎ− テトラデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル１−３−アンモニオ−１−プロパンスルフォネート）と同様に、ＴＲＩＴＯＮＸ−１００，ＳＤＳ，ＢＲＩＪ−３５およびＴＷＥＥＮ−２０を使用した。アクリジニウムエステルで標識した葉酸塩を、マサチューセッツ州メッドフィールドにあるＣＩＢＡＣｏｒｎｉｎｇＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｃｏｒｐ．から購入した。アクリジニウムスルフォナミド（スルフォプロピル）を標識したｈ−ＴＳＨ抗体は、実施例１に記載された方法で調製した。アクリジニウムスルフォナミド（メチル）を標識したｈ−ＴＳＨ抗体も、同様に調製した。トリガー試薬は、実施例１に記載された通りである。方法アクリジニウムスルフォナミド複合体は、蒸留水で希釈し、増強剤無添加で誘発した場合に、約７、０００カウントとなるよう調製した。希釈した複合体５０ｕｌと、０．０３規定の硫酸５０μｌを、バイアルに加えた。エステル複合体で発光させるために酸が必要であった。誘発の工程は、実施例１に記載した。結果表２に示したのは、ＴＲＩＴＯＮＸ−１００、ＳＤＳ、ＢＲＩＪ−３５、ＴＷＥＥＮ−２０、Ｈｅｘａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ、およびＴｅｔｒａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ添加、もしくは無添加状態で行った、エステルを標識した葉酸、アクリジニウムスルフォナミド（スルフォプロピル）を標識したｈ−ＴＳＨ抗体（ａｂ）、およびアクリジニウムスルフォナミド（メチル）を標識したｈ−ＴＳＨ抗体の化学発光反応について２秒間の信号強度の増強比である。実施例３材料参考文献とする合衆国特許第３，８５７，９３１号（Ｈａｇｅｒ，Ｈ．１９７４年）の記述に従い、ＥＤＡＣ（１−エチル−３（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロライド）カップリングを利用して、磁性微粒子にＰＳＡモノクローナル抗体をコートする。次いで、約０．１５％容量となるよう希釈する。１００ｎｇ／ｍｌのＰＳＡを含む標準液（ＡｂｂｏｔｔＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，イリノイ州アボットパーク）を利用した。実施例１に記載したアクリジニウムスルフォナミド（スルフォプロピル）を標識したヤギＰＳＡ抗体を使用し、２種の増強剤の試験を行った。増強剤には、ＴＲＩＴＯＮＸ−１００とＴｅｔｒａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔを使用した。洗浄液は、ＡｂｂｏｔｔＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ製の微粒子酵素イムノアッセイ（ＭＥＩＡ）希釈バッファーを使用した。方法次のプロトコールのように、ＰＳＡ分析を行った。磁性微粒子の固相５０μｌとＰＳＡ標準液５０μｌを含む懸濁液を、３７℃で１０分間インキュベートした。微粒子は、磁場に置いて、２回洗浄した。微粒子のペレットを、アクリジニウムスルフォナミド（スルフォプロピル）を標識したＰＳＡ抗体溶液１５０ｕｌで、再懸濁した。微粒子を磁場で４回洗浄した後、この懸濁液を３７℃で２０分間インキュベートした。洗浄した微粒子は、蒸留水４００ｕｌと混合し、トリガー液と接触させてから発光測定器に設置した。信号の読み取りは、実施例１に記載された通りである。トリガー液としてＴＲＩＴＯＮＸ−１００およびＴｅｔｒａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔを、０．０％、０．５％、１．０％、２．０％含んだものが、発光における増強剤濃度の影響を調べるために使われた。結果表３に示したのは、ＰＳＡ分析での発光における、ＴＲＩＴＯＮＸ−１００およびＴｅｔｒａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ増強剤の濃度の影響である。その影響を、信号強度の増強比として表した。実施例４材料磁性微粒子は、実施例３の記載通りにＰＳＡ抗体、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体、ｈ−ＴＳＨ抗体、およびトリヨードチロニン抗原（Ｔ₃）抗体でコートした。使用した検量物質は、以下のとおりである。ＨＢｓＡｇの検量物質は、０．５ｎｇ／ｍｌの表面抗原を加えた、カルシウム再沈着化血漿であった。ＰＳＡは、実施例３で述べた。ｈ−ＴＳＨとＴ₃の検量物質は、ＡｂｂｏｔｔＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから得た。実施例１に示したように、ｈ−ＴＳＨ抗体は、アクリジニウムスルフォナミド（スルフォプロピル）を標識した。同様に、ＰＳＡ抗体、ＨＢｓＡｇ抗体、およびＴ₃抗体は、それぞれ別に、アクリジニウムスルフォナミド（スルフォプロピル）で標識した。試験した増強剤は、ＴＲＩＴＯＮＸ−１００およびＴｅｔｒａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔであった。トリガー試薬は、アルカリ性過酸化溶液で、０．４５％の過酸化水素と０．０１％の消泡剤（実施例１に記載）を含む０．２５規定水酸化ナトリウムである。方法増強剤およびトリガー剤濃度の最適範囲は、４種の異なる試験で決定した。次の事項以外は、実施例３と同様に標準試験を行った。ＨＢｓＡｇとｈ−ＴＳＨの試料の量は、５０μｌではなく２００μｌとした。Ｔ₃検査での第二インキュベーション時間は、２０分ではなく、１０分で行った。増強剤の濃度は、０．５％、２．３％、４．０％とした。結果表４に、２種の増強剤で様々な濃度を設定して４種の検査の化学発光反応を行った際の相対光単位（ＲＬＵ’ｓ）を示した。実施例５材料アクリジニウムスルフォナミド複合体、磁性微粒子、および検量物質は、実施例４と同様の方法で調製した。増強剤として、ＴｅｔｒａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔおよびＴＲＩＴＯＮＸ−１００を試験した。トリガー液はアルカリ性過酸化溶液で、０．０１％の消泡剤と２％の増強剤および０．３％の過酸化水素を含む０．２５規定水酸化ナトリウムである。方法実施例３の検査と同様の標準プロトコールを利用した。唯一異なる点は複合体濃度で、非増強検査に対し選ばれた濃度の０．２５ｘ、０．５ｘ、および１ｘとして実施した。結果表５に、様々な濃度のｈ−ＴＳＨ、ＨＢｓＡｇ、ＰＳＡ抗体、およびＴ₃にスルフォプロピルを標識した複合体について、ＴＲＩＴＯＮＸ−１００およびＴｅｔｒａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ添加、または無添加状態での２秒間測定のＲＬＵ’ｓを示した。対照液には、増強剤は含まれていない。実施例６材料複合体のｐＨの影響を調べた。実施例４に従い４種の異なる検査を設定して試験した。増強剤としてＴＲＩＴＯＮＸ−１００を使用した。トリガー剤は、アルカリ性過酸化溶液で、０．０１％の消泡剤と２％の増強剤および０．３％の過酸化水素を含む０．２５規定水酸化ナトリウムである。方法実施例１と同様の標準プロとコールを使用した。唯一異なる点は、同じトリガー剤でｐＨを１２．３から１３．２に設定した４種の検査を行ったことである。結果異なるｐＨにおいて、増強剤を含むトリガー液と、含まないトリガー液の比を表６に示した。スルフォプロピルアクリジニウムの、ｈ−ＴＳＨ、ＨＢｓＡｇ、ＰＳＡ抗体、およびＴ₃との複合体を、２％ＴＲＩＴＯＮＸ−１００添加、または無添加状態で２秒間測定した。簡便に行うために、イムノアッセイで本発明の化学発光増強法を実施する際、、感受性が最適となるよう、必要な試薬の割合を予め決定して含む試薬キットにして提供できる。試薬は、液体でも乾燥品でも良い。乾燥品を使用する場合は、試薬が望ましい濃度となるよう使用に先立ち再構成しておく。試薬に様々な補助剤、例えば信号の発生系の一部やバッファーなどを加えても良い。本発明に従う試薬キットでは、トリガー液はアクリジニウムとは別に保存しておく。増強剤は、独立したものでも、トリガー液、またはアクリジニウムに添加した状態でも良い。化学発光反応は、トリガー液とアクリジニウムを混合することで開始する。本発明での特別な例、および適用を具体的に示したが、本出願に開示した厳密な構成や成分に限定されず、付随した請求の範囲や意図を離れない程度で、ここで開示された調製法や操作など構成の細かい部分に、技術の熟達により明らかになる様々な改良、変更、変動を加えられることを理解すべきである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者グロウト，ジヨナサンアメリカ合衆国、イリノイ・60048、グリーン・オークス、ウイルトン・コート・ 1682 (72)発明者セイント・ジヨン，シエリ・ジエイアメリカ合衆国、イリノイ・60085、ウオークガン、レイクハースト・ドライブ・ 1062、アパートメント・202 (72)発明者サツト，デイーシルドアメリカ合衆国、イリノイ・60004、アーリントン・ハイツ、パートリツジ・コート・1604

Claims

【特許請求の範囲】１．アクリジニウムスルフォナミド化合物から、化学発光信号を増強発生する方法であり、前記方法は、アクリジニウムスルフォナミド化合物を、増強剤を添加しなかった場合に得られると想定される信号よりも約１．５から８倍も強い化学発光信号を得るために、増強剤の存在下にトリガー液と接触させる工程からなる方法。２．前記増強剤が界面活性剤からなる請求項１記載の方法。３．前記界面活性剤が、非イオン表面活性剤からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質からなる請求項２記載の方法。４．前記非イオン界面活性剤が、ポリオキシエチレン化アルキレン化アルキルフェノール類、ポリオキシエチレン化直鎖アルコール類、ポリオキシエチレン化ソルビトールエステル類、および、アルカノラミン脂肪酸濃縮物からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質からなる請求項３記載の方法。５．前記界面活性剤がＴＲＩＴＯＮＸ−１００である請求項４記載の方法。６．前記界面活性剤が、双性イオン表面活性剤からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質からなる請求項２記載の方法。７．前記双性イオン界面活性剤が、（ここで、Ｒ¹はＣ₈−Ｃ₂₀の脂肪族部分（ｍｏｉｅｔｙ）であり、かつ、Ｒ²，Ｒ³、および、Ｒ⁴はそれぞれ独立にＣ₁−Ｃ₄の脂肪族部分（ｍｏｉｅｔｙ）である）で表される請求項６記載の方法。８．前記界面活性剤が、ヘキサデシル双性イオン発生体、テトラデシル双性イオン発生体、および、その混合物からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質である請求項７記載の方法。９．前記界面活性剤が陰イオン活性剤である請求項２記載の方法。１０．前記界面活性剤が、ドデシル硫酸リチウム、および、ドデシル硫酸ナトリウムからなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質からなる請求項９記載の方法。１１．アクリジニウムスルフォナミド化合物から、化学発光信号を強調発生する方法であり、前記方法は、アクリジニウムスルフォナミド化合物を、増強剤の存在下にトリガー液と接触させる工程からなり、前記増強剤は、（ｉ）非イオン表面活性剤、（ii）双性イオン界面活性剤、および、（iii）陰イオン活性剤からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質からなる方法。１２．前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン化アルキレン化アルキルフェノール類、ポリオキシエチレン化直鎖アルコール類、ポリオキシエチレン化ソルビトールエステル類、アルカノラミン脂肪酸濃縮物、および、その混合物からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質からなる非イオン界面活性剤である請求項１１記載の方法。１３．前記増強剤のない場合に得られると想定される信号よりも、約１．５から８倍強い化学発光信号が生成される請求項１２記載の方法。１４．前記非イオン界面活性剤がＴＲＩＴＯＮＸ−１００である請求項１２記載の方法。１５．前記界面活性剤が、（ここで、Ｒ₁はＣ₈−Ｃ₂₀の脂肪族部分（ｍｏｉｅｔｙ）であり、かつ、Ｒ²、Ｒ³、および、Ｒ⁴はそれぞれ独立にＣ₁−Ｃ₄の脂肪族部分（ｍｏｉｅｔｙ）である）で表される双性イオン界面活性剤からなる請求項１１記載の方法。１６．前記増強剤のない場合に得られると想定される信号よりも、約１．５から８倍強い化学発光信号が生成される請求項１５記載の方法。１７．前記界面活性剤が、ヘキサデシル双性イオン発生体、および、テトラデシル双性イオン発生体からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質からなる請求項１５記載の方法。１８．界面活性剤が、ドデシル硫酸リチウム、ドデシル硫酸ナトリウム、および、その混合物からなるグループから選ばれた一つの陰イオン活性剤からなる請求項１１記載の方法。１９．前記増強剤のない場合に得られると想定される信号よりも、約１．５から８倍強い化学発光信号が生成される請求項１８記載の方法。２０．前記アクリジニウムスルフォナミド化合物が、１０−メチル−Ｎ−（２ −カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミド、および、１０−（３−スルフォプロピル）−Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミドからなるグループから選ばれた少なくとも一つの化合物からなる請求項１１記載の方法。２１．前記トリガー液が、希アルカリ過酸化水素液からなる請求項１１記載の方法。２２．前記アクリジニウムスルフォナミド化合物が、他の化合物との複合体として存在する請求項１１記載の方法。２３．前記アクリジニウムスルフォナミド化合物が、１０−メチル−Ｎ−（２ −カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミド、および、１０−（３−スルフォプロピル）−Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミドからなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質から成り、前記トリガー液は、アクリジニウムスルフォナミドを酸化できる化合物を含み、前記接触工程により、前記増強剤のない場合に得られると想定される信号よりも、約１．５から８倍強い化学蛍光信号が生成される請求項１１記載の方法。２４．前記増強剤がＴＲＩＴＯＮＸ−１００を含む請求項２３記載の方法。２５．前記増強剤が、ヘキサデシル双性イオン発生体、および、テトラデシル双性イオン発生体からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質からなる請求項２３記載の方法。２６．アクリジニウムスルフォナミド化合物から化学発光信号を生成させるためのトリガー液であって、前記溶液は、酸化剤と増強剤を含み、前記増強剤は、アクリジニウムスルフォナミドによって生成される化学発光信号の強度を上げるのに有効な界面活性剤を含むトリガー液。２７．アクリジニウムスルフォナミド化合物と接触すると、前記増強剤のない状態で、前記トリガー液が、前記アクリジニウムスルフォナミド化合物と接触した場合に得られると想定される信号よりも、約１．５から８倍強い化学発光信号を生成する請求項２６記載のトリガー液。２８．前記界面活性剤が、（ｉ）非イオン界面活性剤、（ii）双性イオン界面活性剤、および、（iii）陰イオン活性剤からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質からなる請求項２６記載のトリガー液。２９．前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン化アルキレン化アルキルフェノール類、ポリオキシエチレン化直鎖アルコール類、ポリオキシエチレン化ソルビトールエステル類、アルカノラミン脂肪酸濃縮物、および、その混合物からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質からなる非イオン界面活性剤である請求項２８記載のトリガー液。３０．前記界面活性剤が、（ここで、Ｒ¹はＣ₈−Ｃ₂₀の脂肪族部分（ｍｏｉｅｔｙ）であり、かつ、Ｒ²、Ｒ³、および、Ｒ⁴はそれぞれ独立にＣ₁−Ｃ₄の脂肪族部分（ｍｏｉｅｔｙ）である）で表される双性イオン界面活性剤からなる請求項２８記載のトリガー液。３１．前記界面活性剤が、ドデシル硫酸リチウム、および、ドデシル硫酸ナトリウムからなるグループから選ばれた少なくとも一つの陰イオン活性剤からなる請求項２８記載のトリガー液。３２．１０−メチル−Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミド、および、１０−（３−スルフォプロピル）−Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミドからなるグループから選ばれた少なくとも一つのアクリジニウムスルフォナミド化合物と接触させる請求項２７記載のトリガー液。３３．ａ）アクリジニウムスルフォナミド化合物；ｂ）前記アクリジニウムスルフォナミド化合物から選ばれたトリガー液；およびｃ）（ｉ）非イオン界面活性剤、（ii）双性イオン界面活性剤、および、（ii i）陰イオン活性剤からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質からなる増強剤からなる試薬を持つイムノアッセイ検査キット。３４．前記アクリジニウムスルフォナミド化合物が、１０−メチル−Ｎ−（２ −カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミド、および、１０−（３−スルフォプロピル）−Ｎ−（２−カルボキシエチル）−Ｎ−トシル−９−アクリジニウムカルボキサミドからなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質である請求項３３記載の検査キット。３５．前記トリガー液が、希アルカリ液に溶かした過酸化水素からなる請求項３４記載の検査キット。３６．前記界面活性剤が、ＴＲＩＴＯＮＸ−１００、ＴＷＥＥＮ−２０、およびＢＲＩＪ−３５からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質である請求項３４記載の検査キット。３７．前記界面活性剤が、Ｈｅｘａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ、およびＴｅｒａｄｅｃｙｌｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔからなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質である請求項３４記載の検査キット。３８．前記界面活性剤が、ドデシル硫酸リチウム、ドデシル硫酸ナトリウム、およびコール酸からなるグループから選ばれた少なくとも一つの物質である請求項３４記載の検査キット。３９．前記増強剤が、上記試薬の少なくとも一方と混合した形で提供される請求項３３記載の検査キット。４０．前記混合液がトリガー液からなる請求項３９記載の検査キット。４１．前記混合液が、アクリジニウムスルフォナミド化合物からなる請求項３９記載の検査キット。