JPH1045618A

JPH1045618A - アポトーシス誘導剤

Info

Publication number: JPH1045618A
Application number: JP8198196A
Authority: JP
Inventors: Keiichi Shimazaki; 敬一島崎; Shikiko Watanabe; 市紀子渡邊; Ichiro Azuma; 市郎東; Nagaharu Ryu; 永春劉; Ryosuke Watanabe; 亮介渡辺
Original assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Current assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date: 1996-07-26
Filing date: 1996-07-26
Publication date: 1998-02-17
Anticipated expiration: 2016-07-26
Also published as: JP3859270B2

Abstract

(57)【要約】【課題】副作用が少なく、安全性の高い新規なアポト
ーシス誘導剤を提供する。【解決手段】ラクトフェリン類の加水分解物由来のペ
プチド、このペプチドと同一もしくは相同のアミノ酸配
列を有するペプチド、これらのペプチドの薬学的に許容
される誘導体、これらのペプチドの薬学的に許容される
塩類、またはこれらの混合物を有効成分として含有する
アポトーシス誘導剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、特定のアミノ酸
配列を有するペプチドを有効成分として含有するアポト
ーシス誘導剤に関するものである。さらに詳しくは、こ
の発明は、自己免疫疾患患者の自己反応性リンパ球、癌
細胞等を排除するのに有効な、副作用の少ない安全なア
ポトーシス誘導剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】生物個体を構成する細胞の死滅（細胞
死）は、アポトーシス（apoptosis)とネクローシス（ne
crosis：壊死）の２つに大別される［別冊日経サイエン
ス、免疫の最前線、第６６ページ、日経サイエンス社、
１９９４年］。ネクローシスは、環境の悪化または細胞
の物理的障害により惹起される細胞死であり、一方、ア
ポトーシスはこれとは異なり、積極的に制御されている
細胞死のことである。

【０００３】近年、このアポトーシスによる細胞死が、
生物学および医学等の基礎研究分野、医薬品製造等の工
業分野において注目を集めている。その理由は、アポトーシスが個体形成において重要な役割を演じて
いること、生体内での内的、外的要因による細胞死が多くの場合
アポトーシスによること、エイズそのほかの疾病において、その病因となる体細
胞（リンパ系細胞）の減少にアポトーシスが深く関わっ
ていること、各種の抗癌剤がアポトーシスでの癌細胞破壊を行うこ
と、および最近の遺伝子研究の進展に伴い、アポトーシスそのも
のがどのような遺伝子で制御されており、アポトーシス
に至る情報がどのようにして伝達されるかについての知
見が蓄積され、細胞生物学上の基本的興味がもたれたこ
と、等である［実験医学、第１１巻、第１７号（増刊）、第
１１ページ、１９９３年] 。

【０００４】電子顕微鏡を用いた形態学的観察によれ
ば、アポトーシスによる細胞死では、染色体の凝集、細
胞核の断片化、細胞表面の微絨毛の消失、細胞質の凝縮
が観察され、アポトーシスにより死滅した細胞は、速や
かにマクロファージ等に貧食されて処理されることが明
らかにされている。また、染色体ＤＮＡの断片化等の生
化学的特徴を伴うアポトーシスが観察されることが多い
こともよく知られている。

【０００５】アポトーシスとの関連が最も深い生体機能
の一つは、免疫系である［別冊日経サイエンス、免疫の
最前線、第６７ページ、日経サイエンス社、１９９４
年］。免疫系を調節するリンパ球は、数多くの抗原分子
と反応できるように多様な抗原レセプターのレパートリ
ーを有しており、この中には、自己抗原に強く反応する
ものも存在する。自己に強く反応するＴ細胞またはＢ細
胞が生体内で増殖した場合、自己組織を攻撃するように
なり自己免疫疾患に罹患する。そのため、自己に対する
免疫反応が抑制される免疫寛容(tolerance）と呼ばれる
状態に誘導される必要がある。

【０００６】Ｔ細胞が寛容になる機構は、Ｔ細胞が分化
する場である胸腺において認められることは古くから知
られていたが、分化したＴ細胞が存在する末梢において
も免疫寛容が誘導されることが明らかになってきてい
る。免疫寛容に導く機構としては、クローン除去(clona
l deletion）とクローン麻痺(clonal anergy）が知られ
ている。これは、自己に強く反応するＴ細胞またはＢ細
胞が、それぞれ排除または不活性化されることである。
クローン除去において、アポトーシスによる細胞死が惹
起され、自己反応性リンパ球が排除されているのであ
る。

【０００７】アポトーシスに係わる物質の検索も行なわ
れている。最もよく知られているものはＦａｓと呼ばれ
る細胞表面分子である［別冊日経サイエンス、免疫の最
前線、第６８ページ、日経サイエンス社、１９９４
年］。自己免疫疾患のモデルマウスとして有名なｌｐｒ
マウスでは、リンパ節にｌｐｒ細胞［ｌｐｒは、lympho
proliferation （リンパ球の異常増殖）の略］と呼ばれ
る特殊なＴリンパ球が蓄積し、自己成分に結合する抗体
が産生され、さらに、糸球体腎炎等のヒトの全身性自己
免疫疾患である全身性エリテマトーデスで見られる疾患
が発症するのであるが、この原因がＦａｓ分子の欠損に
よることが示された［ネイチャー(Nature)、第３５６
巻、第３１４ページ、１９９２年］。すなわち、ｌｐｒ
マウスではＦａｓ分子が欠損しているので、Ｆａｓを介
する刺激が伝達されず、自己反応性リンパ球を含むすべ
ての細胞がクローン除去（アポトーシス）を免れ、これ
により自己免疫疾患が発症するのである。Ｆａｓを刺激
してアポトーシスを惹起するものも明らかにされてお
り、Ｆａｓリガンドと呼ばれている［実験医学、第１３
巻、第１６号（増刊）、第５１ページ、１９９５年］。

【０００８】また、多くの抗癌剤が癌細胞に対してアポ
トーシスを引き起こすことが明らかにされてきた。それ
らの例として、ＶＰ−１６、ＡＤＭ、ＤＮＲ、ＣＰＴ、
Ａｃａ−Ｃ、Ａｃｔ−Ｄ、ＣＯＬ、ＳＰＭ、ＳＴＳ、Ｃ
ＨＸ等の抗癌剤が知られ［実験医学、第１３巻、第１６
号（増刊）、第２０９ページ、１９９５年］、腫瘍壊死
因子（ＴＮＦ−α）がアポトーシスを惹起することも明
らかにされている［実験医学、第１３巻、第１６号（増
刊）、第２１６ページ、１９９５年］。

【０００９】以上のような知見は、アポトーシスを誘導
することによって、その存在が生体にとって望ましくな
い細胞、例えば、自己免疫疾患患者の自己反応性リンパ
球、アレルギー患者のアレルゲンに感作されたリンパ
球、癌細胞等を排除することが可能であることを示して
おり、そのためにアポトーシス誘導剤の果たす役割が期
待されている。

【００１０】一方、ラクトフェリン（lactoferrin 。以
下Ｌｆと記載することがある）は、母乳中に極めて多量
に含まれている分子量約８０，０００の鉄結合性糖蛋白
質であり、大腸菌、カンジダ菌、クロストリジウム菌、
ブドウ球菌等の有害微生物に対して抗菌作用を示すこと
が知られている［ジャーナル・オブ・ペディアトリクス
（Journal of Pediatrics)、第９４巻、第１ページ、１
９７９年、およびジャーナル・オブ・デイリー・サイエ
ンス(Journal of Dairy Science)、第６７巻、第６０ペ
ージ、１９８４年］。

【００１１】また、感染モデル動物におけるＬｆの効果
も報告されており、ザグルスキ（Zagulski）らは、ラッ
トを用い、致死量の大腸菌を投与する２４時間前にＬｆ
を静脈内に投与した群および無投与群について生存率を
比較し、Ｌｆに感染防御作用があることを立証している
［ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・エクスペリメン
タル・パソロジー（British Journal of Experimantal
Pathology ）、第７０巻、第６９７ページ、１９８９
年］。さらに、ウィルス感染実験においてもＬｆに感染
防御効果があることは知られている［キャンサー・リサ
ーチ（Cancer Research ）、第４７巻、第４１８４ペー
ジ、１９８７年］。これらの感染動物で認められた効果
は、Ｌｆのin vitro（試験管内）で認められた抗菌作用
によるものと考えるよりも、Ｌｆが宿主の免疫力を賦活
したためであると考えられている。

【００１２】すなわち、Ｌｆには、抗菌作用の他に免疫
賦活作用があると理解されている。このＬｆの免疫賦活
作用を抗癌に応用した例として、ベザウルト（Bezaul
t）らは、癌モデルマウスにＬｆを静脈内投与し、Ｌｆ
が癌の成長および転移を抑制する効果を有することを確
認しているが、このＬｆの抗癌作用は、その免疫賦活作
用の観点からナチュラル・キラー細胞の活性化作用によ
るものと考えられている［キャンサー・リサーチ（Canc
er Research ）、第５４巻、第２３１０ページ、１９９
４年］。

【００１３】なお、疾病の治療剤にラクトフェリンを応
用した例として、抗腫瘍剤（特公平５−８６９３２号公
報）および抗リウマチ剤（特開平５−１８６３６８号公
報）が知られている。また、Ｌｆの分解物については、
抗菌性およびチロシナーゼ活性阻害（ヨーロッパ特許公
開第４３８７５０号）、細胞への病原菌付着防止（特開
平３−２２０１３０号公報）、抗ウイルス作用（特開平
１−２３３２２６号公報）等が知られている。

【００１４】さらに、この発明の発明者等は、ラクトフ
ェリンの加水分解物から強い抗菌活性を有するペプチド
を単離、またはそれらのペプチドと同一のアミノ酸配列
を有するペプチドまたはそれらのペプチドの誘導体を合
成し、２０個のアミノ酸残基からなる抗菌ペプチド（特
開平５−９２９９４号公報）、１１個のアミノ酸残基か
らなる抗菌ペプチド（特開平５−７８３９２号公報）、
５個のアミノ酸残基からなる抗菌ペプチド（特開平５−
１４９８２９６号公報）、３〜６個のアミノ酸残基から
なる抗菌ペプチド（特開平５−１４８２９５号公報）
を、それぞれ既に特許出願した。さらに、ラクトフェリ
ンの加水分解物から得られる特定のアミノ酸配列を有す
る２種以上のペプチド混合物を有効成分とする非経口用
抗腫瘍剤（特開平７−３０９７７１号公報）も特許出願
している。

【００１５】しかしながら、これらのラクトフェリン由
来のペプチドがアポトーシス誘導作用を有することは知
られておらず、文献にも記載されていない。

【００１６】

【発明が解決しようとする課題】従来より、抗癌剤をは
じめとして種々のアポトーシス誘導物質が見い出されて
きたが、それらの多くのものは化学合成品、微生物由来
等であるため、長期間使用した場合の副作用の問題等、
安全性については必ずしも十分ではなかった。この発明
は、以上の事情に鑑みてなされたものであって、食品で
ある乳由来のラクトフェリンの加水分解物から得られる
特定のアミノ酸配列を有するペプチドがアポトーシスを
誘導するという新規な事実に基づき、副作用が少なく安
全なアポトーシス誘導剤を提供することを目的としてい
る。

【００１７】

【課題を解決するための手段】この発明は、前記の課題
を解決するものとして、ラクトフェリン類の加水分解物
由来のペプチド、このペプチドと同一もしくは相同のア
ミノ酸配列を有するペプチド、これらのペプチドの薬学
的に許容される誘導体、これらのペプチドの薬学的に許
容される塩類、またはそれらの混合物を有効成分として
含有するアポトーシス誘導剤を提供する。

【００１８】また、この発明のアポトーシス誘導剤にお
いては、前記有効成分を製剤１ｇ当たり０．１μｇ〜１
００ｍｇ含有することを望ましい態様としている。さら
に、有効成分の一つであるペプチドとしては、配列番号
１から配列番号３１のいずれかに記載されたアミノ酸配
列を有するペプチドを例示することができる。

【００１９】

【発明の実施の形態】この発明のアポトーシス誘導剤の
有効成分の一つであるペプチドを製造する場合の出発物
質として使用するラクトフェリン類は、市販のＬｆ、獣
乳または人乳から常法により分離されるＬｆ、これらの
Ｌｆから常法により鉄を除去したアポラクトフェリン、
アポラクトフェリンに常法により鉄、銅、亜鉛、マンガ
ン等の金属を完全にもしくは一部キレートさせた金属飽
和もしくは金属部分飽和ラクトフェリン、またはこれら
の混合物のいずれであってもよい。

【００２０】この発明のアポトーシス誘導剤の有効成分
は、前記ラクトフェリン類の分解物から公知の分離手段
によって得られるペプチド、このペプチドと同一のアミ
ノ酸配列、相同なアミノ酸配列を有するペプチド、これ
らのペプチドの薬学的に許容される誘導体、これらのペ
プチドの薬学的に許容される塩類、またはこれらの任意
の混合物（以下、これらをペプチド類と記載することが
ある。）であり、同一または相同のペプチド、誘導体お
よび塩類は公知の方法により化学的に合成することもで
きる。これらのペプチド類は、例えば、特開平５−９２
９９４号公報、特開平５−７８３９２号公報、特開平５
−１４８２９７号公報、特開平５−１４９８２９６号公
報および特開平５−１４８２９５号公報の各発明に記載
された方法によって得ることができる。

【００２１】前記の方法によって得られるペプチド類
は、次のアミノ酸配列を有するペプチド、その誘導体ま
たは塩類を望ましい態様として例示できる。例えば、配
列番号１、２および２７のアミノ酸配列を有するペプチ
ド、その塩類またはその誘導体（特開平５−７８３９２
号公報）、配列番号３、４、５および６のアミノ酸配列
を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平
５−１４８２９７号公報）、配列番号７、８、９および
３１のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類または
その誘導体（特開平５−１４９８２９６号公報）、配列
番号１０から２１のアミノ酸配列を有するペプチド、そ
の塩類またはその誘導体（特開平５−１４８２９５号公
報）、配列番号２２から２６、２８、２９および３０の
アミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘
導体（特開平５−９２９９４号公報）である。

【００２２】前記ペプチドの薬学的に許容される塩類と
しては、塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩クエン酸塩、乳酸
塩、酒石酸塩等の酸付加塩を、前記ペプチドの薬学的に
許容される誘導体としては、カルボキシル基をアミド化
またはアシル化した誘導体を、それぞれ例示することが
できる。この発明のアポトーシス誘導剤は、前記ペプチ
ド類を有効成分として含有する一般的な医薬製剤の形態
で実用に供することができる。また、使用目的に応じて
各種の剤形を適宜選択可能であり、例えば、ローション
剤、エアゾール剤（スプレー）、液状塗布剤、軟膏剤等
の外用剤、点眼剤、坐剤、錠剤、丸剤、散剤、カプセル
剤、注射剤等を例示することができる。

【００２３】この発明のアポトーシス誘導剤の有効成分
の配合量は、特に制限されず、疾患の種類、症状等によ
り適宜選択できるが、望ましい含量は、製剤１ｇ当たり
０．１μｇ〜１００ｍｇの範囲である。また、この発明
のアポトーシス誘導剤の有効成分は、食品に由来する天
然物であるから、それらの安全性について問題がないこ
とは明らかである。

【００２４】次に試験例を示してこの発明のアポトーシ
ス誘導剤の作用効果について詳しく説明する。試験例１この試験は、ラクトフェリン類の加水分解物に由来する
ペプチドが、ヒト白血病細胞株であるＴＨＰ−１細胞に
対してアポトーシスを誘導するか否かを調べるために行
なった。（１）試料の調製参考例２と同一の方法により調製したラクトフェリン類
の加水分解物に由来するペプチド（試料１）を、５％ウ
シ胎児血清および２ｍＭグルタミンを含むＲＰＭＩ−１
６４０培養液（大日本製薬社製）に表１の各種濃度で溶
解した。（２）試験方法ＴＨＰ−１細胞（大日本製薬より購入）を２４穴カルチ
ャープレート（ファルコン社製）に１穴当たり５×１０
⁵個ずつ蒔き、各種濃度の試料を含む培養液（１ｍｌ）
で培養し、１５時間後、細胞を核染色した。透過型顕微
鏡を用い、１５０個の細胞のうちアポトーシスで死滅し
た細胞数を計数し、アポトーシスで死滅した細胞の割合
を求めた。（３）試験結果この試験の結果は表１に示すとおりである。１２．５〜
１００μｇ／ｍｌの濃度範囲において、用量依存的にア
ポトーシスが誘導され、１００μｇ／ｍｌの濃度では７
７％の細胞がアポトーシスで死滅した。すなわち、参考
例２と同一の方法により調製したラクトフェリン類の加
水分解物に由来するペプチドには、白血病細胞のアポト
ーシスを誘導する活性があることが認められた。なお、
他のＬｆに由来するペプチドについても試験を行った
が、ほぼ同様の結果が得られた。

【００２５】

【表１】

【００２６】参考例１ウシ・ラクトフェリン（以下ｂＬｆと記載することがあ
る）を出発原料として使用し、ラクトフェリン類の加水
分解物（以下ｂＬｆ−Ｈｙと記載することがある）を、
次の方法により調製した。市販のｂＬｆ（ミライ社製）
５００ｇを、精製水９．５ｌに溶解し、得られた溶液に
塩酸を添加してｐＨを３．０に調整し、のち市販の豚ペ
プシン（和光純薬社製）を１０ｇ添加し、３７℃で６時
間加水分解した。次に６規定の水酸化ナトリウムを添加
してｐＨを７．０に調整し、８０℃で１０分間加熱して
酵素を失活させ、室温に冷却し、セライト濾過し、濾液
を凍結乾燥し、粉末状のＬｆ加水分解物約４７０ｇを得
た。参考例２市販のｂＬｆ（シグマ社製）５０ｍｇを精製水０．９ｍ
ｌに溶解し、０．１規定の塩酸を添加してｐＨを２．５
に調整し、のち市販のブタペプシン（シグマ社製）１ｍ
ｇを添加し、３７℃で６時間加水分解した。次いで０．
１規定の水酸化ナトリウムを添加してｐＨを７．０に調
整し、８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、室温
に冷却し、１５，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、
透明な上清を得た。この上清１００μｌをＴＳＫゲルＯ
ＤＳ−１２０Ｔ（東ソー社製）を用いた高速液体クロマ
トグラフィーにかけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入
後１０分間０．０５％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を含
む２０％アセトニトリルで溶出し、のち３０分間０．０
５％ＴＦＡを含む２０〜６０％のアセトニトリルのグラ
ジエントで溶出し、２４〜２５分の間に溶出する画分を
集め、真空乾燥したこの乾燥物を２％（Ｗ／Ｖ）の濃度
で精製水に溶解し、再度ＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ
（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマトグラフィーに
かけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０分間０．
０５％ＴＦＡを含む２４％アセトニトリルで溶出し、の
ち３０分間０．０５％ＴＦＡを含む２４〜３２％のアセ
トニトリルのグラジエントで溶出し、３３．５〜３５．
５分の間に溶出する画分を集めた上記の操作を２５回反
復し、真空乾燥し、ペプチド約１．５ｍｇを得た。

【００２７】上記のペプチドを６Ｎ塩酸で加水分解し、
アミノ酸分析計を用いて常法によりアミノ酸組成を分析
した。同一の試料を気相シークェンサー（アプライド・
バイオシステムズ社製）を用いて２５回のエドマン分解
を行ない、２５個のアミノ酸残基の配列を決定した。ま
たＤＴＮＢ［５，５−ジチオ−ビス（２−ニトロベンゾ
イック・アシド）］を用いたジスルフィド結合分析法
［アナリティカル・バイオケミストリー（Analytical B
iochemistry ）、第６７巻、第４９３頁、１９７５年］
によりジスルフィド結合が存在することを確認した。

【００２８】その結果、このペプチドは、２５個のアミ
ノ酸残基からなり、３番目と２０番目のシステイン残基
がジスルフィド結合し、３番目のシステイン残基からＮ
−末端側に２個のアミノ酸残基が、２０番目のシステイ
ン残基からＣ−末端側に５個のアミノ酸がそれぞれ結合
した、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を有している
ことが確認された。参考例３ペプチド自動合成装置（ファルマシアＬＫＢバイオテク
ノロジ−社製。ＬＫＢＢｉｏｌｙｎｘ４１７０）を用
い、シェパ−ド等による固相ペプチド合成法［ジャ−ナ
ル・オブ・ケミカル・ソサイエティ−・パ−キンＩ（Jo
urnal ofChemical Society Perkin Ｉ）、第５３８
頁、１９８１年］に基づいてペプチドを次のようにして
合成した。

【００２９】アミン官能基を９−フルオレニルメトキシ
カルボニル基で保護したアミノ酸［以下Fmoc−アミノ酸
またはFmoc−固有のアミノ酸の名称（例えば、Fmoc−ア
スパラギン）と記載することがある］に、Ｎ，Ｎ−ジシ
クロヘキシルカルボジイミドを添加して所望のアミノ酸
の無水物を生成させ、このFmoc−アミノ酸無水物を合成
に用いた。ペプチド鎖を製造するためにＣ−末端のアス
パラギン残基に相当するFmoc−アスパラギン無水物を、
そのカルボキシル基を介し、ジメチルアミノピリジンを
触媒としてウルトロシンＡ樹脂（ファルマシアＬＫＢバ
イオテクノロジ−社製）に固定する。次いでこの樹脂を
ピペリジンを含むジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ−
末端アミノ酸のアミン官能基の保護基を除去する。のち
アミノ酸配列のＣ−末端から２番目に相当するFmoc−ア
ルギニン（Pmc:2,2,5,7,8-Pentamethyl-chroman-6-sulp
honyl 基）無水物を前記Ｃ−末端アミノ酸残基を介して
樹脂に固定されたアスパラギンの脱保護アミン官能基に
カップリングさせた。以下同様にして順次グルタミン、
トリプトファン、グルタミン、およびフェニルアラニン
を固定した。全部のアミノ酸のカップリングが終了し、
所望のアミノ酸配列のペプチド鎖が形成された後、９４
％ＴＦＡ、５％フェノール、および１％エタンジオール
からなる溶媒で保護基の除去およびペプチドの脱離を行
ない、高速液体クロマトグラフイーによりペプチドを精
製し、この溶液を濃縮し、乾燥し、ペプチド粉末を得
た。

【００３０】前記のペプチドについてアミノ酸分析計を
用いて常法によりアミノ酸組成を分析し、配列番号１０
に記載のアミノ酸配列を有することを確認した。

【００３１】

【実施例】次に実施例を示してこの発明をさらに具体的
に説明するが、この発明は以下の例に限定されるもので
ない。実施例１ラクトフェリン加水分解物から得られたペプチド（参考例２と同一の方法により製造）５０（ｍｇ）結晶セルロース１７０コーンスターチ６６タルク１１ステアリン酸マグネシウム３１錠当り前記の割合の各原料を常法により均一に混合
し、造粒し、乾燥し、打錠し、錠剤を得た。なお、ラク
トフェリン加水分解物から得られたペプチド以外の原料
はいずれも市販品を用いた。実施例２ラクトフェリン加水分解物から得られたペプチド（参考例２と同一の方法により製造）５５（ｇ）結晶セルロース４１２コーンスターチ６３２前記各材料を均一に混合し、常法により散剤１０００袋
を調製した。なお、ラクトフェリンの加水分解物から得
られたペプチド以外の原料はいずれも市販品を用いた。実施例３ラクトフェリン加水分解物に由来する合成ペプチド（参考例３と同一の方法により製造）１０（ｍｇ）乳糖１２０結晶セルロース４２カルボキシメチルセルロース１０タルク１５ステアリン酸マグネシウム３１錠当り前記の割合の各原料を、常法により均一に混合
し、カプセル充填機を用いてカプセル剤を調製した。な
お、ラクトフェリン加水分解物に由来する合成ペプチド
以外の原料はいずれも市販品を用いた。実施例４ラクトフェリン加水分解物に由来する合成ペプチド（参考例３と同一の方法により製造）１０（ｍｇ）プロピレングリコール５００リン酸水素二ナトリウム１０ホウ酸１３００塩化ナトリウム９００前記の割合の割合の各原料を精製水１００ｍｌに溶解
し、滅菌フィルタ−を通し、点眼剤を調製した。なお、
ラクトフェリン加水分解物に由来する合成ペプチド以外
の原料はいずれも市販品を用いた。

【００３２】

【発明の効果】以上詳しく説明したとおり、この発明に
よって、食品である乳に由来のペプチド類を有効成分と
するため、副作用の少ないアポトーシス誘導剤が提供さ
れる。これによって、自己免疫疾患、アレルギー性疾
患、癌性疾患等の安全かつ有効な治療が可能となる。

【００３３】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：１１配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００３４】配列： Lys R01 R01 R01 R01 Gln R01 R01 Met Lys Lys 1 5 10 配列番号：２配列の長さ：１１配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００３５】配列： Lys R01 R01 R01 R01 Gln R01 R01 Met Arg Lys 1 5 10 配列番号：３配列の長さ：６配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００３６】配列： Arg R01 R01 R01 R01 Arg 1 5 配列番号：４配列の長さ：６配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００３７】配列： Lys R01 R01 R01 R01 Arg 1 5 配列番号：５配列の長さ：６配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００３８】配列： Lys R01 R01 R01 R01 Lys 1 5 配列番号：６配列の長さ：６配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００３９】配列： Arg R01 R01 R01 R01 Lys 1 5 配列番号：７配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００４０】配列： Arg R01 R01 R01 Arg 1 5 配列番号：８配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００４１】配列： Lys R01 R01 R01 Arg 1 5 配列番号：９配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００４２】配列： Arg R01 R01 R01 Lys 1 5 配列番号：１０配列の長さ：６配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００４３】配列： Phe Gln Trp Gln Arg Asn 1 5 配列番号：１１配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００４４】配列： Phe Gln Trp Gln Arg 1 5 配列番号：１２配列の長さ：４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００４５】配列： Gln Trp Gln Arg 1 配列番号：１３配列の長さ：３配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００４６】配列： Trp Gln Arg 1 配列番号：１４配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００４７】配列： Arg Arg Trp Gln Trp 1 5 配列番号：１５配列の長さ：４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００４８】配列： Arg Arg Trp Gln 1 配列番号：１６配列の長さ：４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００４９】配列： Trp Gln Trp Arg 1 配列番号：１７配列の長さ：３配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００５０】配列： Gln Trp Arg 1 配列番号：１８配列の長さ：６配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００５１】配列： Leu Arg Trp Gln Asn Asp 1 5 配列番号：１９配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００５２】配列： Leu Arg Trp Gln Asn 1 5 配列番号：２０配列の長さ：４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００５３】配列： Leu Arg Trp Gln 1 配列番号：２１配列の長さ：３配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００５４】配列： Arg Trp Gln 1 配列番号：２２配列の長さ：２０配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、２番
の Cysと１９番の Cysがジスルフィド結合している。

【００５５】配列： Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro 1 5 10 15 Ser Ile Thr Cys Val 20 配列番号：２３配列の長さ：２０配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列においてCys*
は、ジスルフィド結合の形成を防止するため、チオ−ル
基を化学的に修飾したシステインを示す。

【００５６】配列： Lys Cys* Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro 1 5 10 15 Ser Ile Thr Cys* Val 20 配列番号：２４配列の長さ：２０配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、２番
の Cysと１９番の Cysがジスルフィド結合している。

【００５７】配列： Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly Pro 1 5 10 15 Pro Val Ser Cys Ile 20 配列番号：２５配列の長さ：２０配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列においてCys*
は、ジスルフィド結合の形成を防止するため、チオ−ル
基を化学的に修飾したシステインを示す。

【００５８】配列： Lys Cys* Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly Pro 1 5 10 15 Pro Val Ser Cys* Ile 20 配列番号：２６配列の長さ：２５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、３番
の Cysと２０番の Cysがジスルフィド結合している。

【００５９】配列： Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala 1 5 10 15 Pro Ser Ile Thr Cys Val Arg Arg Ala Phe 20 25 配列番号：２７配列の長さ：１１配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００６０】配列： Lys Thr Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys 1 5 10 配列番号：２８配列の長さ：３８配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、１６
番の Cysと３３番の Cysとがジスルフィド結合してい
る。

【００６１】配列： Lys Asn Val Arg Trp Cys Thr Ile Ser Gln Pro Glu Trp Phe Lys 1 5 10 15 Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro Ser 20 25 30 Ile Thr Cys Val Arg Arg Ala Phe 35 配列番号：２９配列の長さ：３２配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、１０
番の Cysと２７番の Cysとがジスルフィド結合してい
る。

【００６２】配列： Thr Ile Ser Gln Pro Glu Trp Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp 1 5 10 15 Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro Ser Ile Thr Cys Val Arg Arg 20 25 30 Ala Phe 配列番号：３０配列の長さ：４７配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、配列
の長さ３６であって９番、２６番、及び３５番に Cysを
有するペプチドの、９番の Cysと２６番の Cysとがジス
ルフィド結合し、上記配列の長さ３６のペプチドの３５
番の Cysが、配列の長さ１１であって１０番にCysを有
するペプチドの１０番の Cysとがジスルフィド結合して
いる。

【００６３】配列： Val Ser Gln Pro Glu Ala Thr Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn 1 5 10 15 Met Arg Lys Val Arg Gly Pro Pro Val Ser Cys Ile Lys Arg Asp 20 25 30 Ser Pro Ile Gln Cys Ile 35 Gly Arg Arg Arg Arg Ser Val Gln Trp Cys Ala 1 5 10 配列番号：３１配列の長さ：５配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
は Cysを除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００６４】配列： Lys R01 R01 R01 Lys 1 5

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ０７Ｋ 5/11 Ｃ０７Ｋ 7/06 5/113 7/08 5/117 14/79 7/06 Ａ６１Ｋ 37/14 ＡＥＤ 7/08 37/18 ＡＤＳ 14/79 ＡＧＺ (72)発明者劉永春北海道札幌市北区北二十三条西13丁目文部省用地南新川公務員宿舎10棟104号 (72)発明者渡辺亮介北海道小樽市オタモイ三丁目３番105号

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ラクトフェリン類の加水分解物由来のペ
プチド、このペプチドと同一もしくは相同のアミノ酸配
列を有するペプチド、これらのペプチドの薬学的に許容
される誘導体、これらのペプチドの薬学的に許容される
塩類、またはそれらの混合物を有効成分として含有する
アポトーシス誘導剤。
【請求項２】有効成分を、製剤１ｇ当たり０．１μｇ
〜１００ｍｇ含有する請求項１のアポトーシス誘導剤。
【請求項３】ペプチドが、配列番号１から配列番号３
１のいずれかに記載されたアミノ酸配列を有する請求項
１または２のアポトーシス誘導剤。