JP3830179B2 - 抗寄生虫剤 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、抗寄生虫剤に関するものである。さらに詳しくは、この発明は、ヒトおよび家畜、ペット等の動物に寄生する蠕虫あるいは原虫によってそれらの動物に発生する各種疾病を予防および治療する薬剤に関するものである。
なお、以下の記載において、寄生虫とは細菌、真菌、ウィルス等の微生物以外の寄生性生物を意味し、抗菌活性という用語は、細菌、真菌、ウィルス等の微生物を静菌または殺菌する作用を意味する。
【０００２】
【従来の技術】
寄生虫症（原虫症、蠕虫症）は、世界的視野より見れば、感染率も高く、特定の地域または衛生設備の整っていない地域では、未だに多くの犠牲者を出している。また、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ニワトリ等の家畜、イヌ、ネコ等の愛玩動物も寄生虫による疾患に罹患しやすい。寄生虫による疾患には、蛔虫、線虫、鉤虫、蟯虫、鞭虫、線毛虫、条虫、吸虫等による蠕虫症、またはマラリア、トキソプラズマ、ニューモシスチカリニ、アメーバ等による原虫症があり、それぞれの寄生虫によって、その宿主または寄生場所には特徴がある。
【０００３】
寄生虫が宿主にとって深刻な生命的危機を与えないとしても、特に家畜業界等においては、動物の飼料効率および成長速度が減少し、牛乳、羊毛等の生産に打撃を与える等、経済的損害は甚大である。また、愛玩動物への寄生虫の侵入は、愛玩動物と密接に関わる人々にとって大きな問題である。
現在これらの寄生虫症に対して、パモ酸ピランテル等のピリミジン誘導体、アルベンダゾール、メベンダゾール等のベンツイミダゾール誘導体、プラジカンテル等のイソキノリン誘導体、リン酸ピペラジン、クエン酸ジメチルカルバマジン等のピペラジン誘導体等の駆虫剤、メトロニダゾール等のニトロイミダゾール誘導体、スルファメトキサゾール・トリメトプリム等のピリミジン誘導体、キニーネ等のアルカロイド系物質、イセチオン酸ペンタミジン等のジアミジン系物質、８−アミノキノリン等のキノリン系物質、テトラサイクリン等の抗生物質等の抗原虫剤が使用されている（日本臨床、第５１３ページ〜第５２０ページ、１９９１年および「１９９１年版動物用医薬品用具要覧」、社団法人日本動物薬事協会、第２１７〜２１８ページ、１９９１年）。しかしながら、これらの薬剤は腹痛、悪心、下痢、嘔吐等の副作用、妊婦への使用厳禁等好ましくない欠点を有している。
【０００４】
一方、ラクトフェリンは、乳汁および唾液、涙、粘膜分泌液等のヒトを含む哺乳動物の体液に存在する鉄結合性タンパク質であり、大腸菌、カンジタ菌、クロストリジウム菌等の有害微生物に対して抗菌作用を示すことが知られている［ジャーナル・オブ・ペディアトリクス(Journal of Pediatrics) 、第９４巻、第１ページ、１９７９年］。また、ブドウ球菌および腸球菌に対して、０．５〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度で抗菌作用を有することが知られている［ジャーナル・オブ・デイリー・サイエンス(Journal of Dairy Science)、第６７巻、第６０６ページ、１９８４年］。
【０００５】
この発明の発明者らは、ラクトフェリンの抗菌性に着目し、哺乳類のラクトフェリン、アポラクトフェリン、または金属飽和ラクトフェリン（以下、これらをまとめて「ラクトフェリン類」と記載することがある）を酸または酵素により加水分解した物質が、望ましくない副作用（例えば抗原性）等がなく、しかも未分解のラクトフェリン類よりも強い耐熱性および抗菌性を有することを見い出し、既に特許出願を行った（特開平５−３２００６８号公報）。
【０００６】
また、この発明の発明者らは、ラクトフェリンの分解物から強い抗菌活性を有するペプチドを単離し、それらのペプチドと同一のアミノ酸配列を有するペプチドまたはそれらのペプチドの誘導体を合成し２０個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−９２９９４号公報）、１１個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−７８３９２号公報）、６個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８２９７号公報）、５個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８２９６号公報）、３〜６個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８２９５号公報）を、それぞれ既に特許出願した。
【０００７】
さらに、この発明の発明者らは、ラクトフェリン類を酸または酵素により加水分解した物質と同一のアミノ酸配列を有するペプチドまたはこれらペプチドの誘導体に脳の保護作用（特願平４−３２７７３８号公報）、ラクトフェリン加水分解物に上皮細胞増殖因子による繊維芽細胞増殖を促進する作用（特開平６−４８９５５号公報）および神経成長因子産生促進作用（特開平５−２３５５７号公報）があることを見い出し、それぞれ既に特許出願した。また、ラクトフェリンがヘパリンに結合する性質を利用して乳からラクトフェリンを分離精製する方法（特願昭６３−２５５２９９号公報）も開示されている。
【０００８】
さらに、この発明の発明者らは、ラクトフェリン類およびラクトフェリン類を酸または酵素により加水分解した物質と同一のアミノ酸配列を有するペプチドが、水生動物の寄生生物性疾患に対して予防および治療効果を有することを見い出し既に特許出願した（特開平７−１４５０６９号公報）。
ただし、これらのラクトフェリン類、その分解物および分解物と同一のアミノ酸配列を有するペプチドが、ヒトおよびウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ニワトリ等の家畜、イヌ、ネコ等の愛玩動物に寄生する原虫または蠕虫等による寄生虫疾患に有効であることは従来知られておらず、またそのような事実を記載した刊行物も皆無である。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
前記従来技術から明らかなように、副作用の少ない抗寄生虫剤が待望されているが、未だ優れた物質は知られていないのが現状であった。
この発明は、以上のとおりの事情に鑑みてなされたものであり、ヒトおよび家畜、ペット等の寄生虫疾患に対して、少量で有効な予防および治療効果を有し、かつ副作用が少ない抗寄生虫剤を提供することを目的としている。
【0010】
【課題を解決するための手段】
この発明は、前記の課題を解決するものとして、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を有するペプチド、薬学的に許容されるこのペプチドの塩類（以下、これらをまとめて「ペプチド類」と記載することがある）、またはこれらの少なくとも１種を有効成分として含有する抗トキソプラズマ剤を提供する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
この発明の抗寄生虫剤の有効成分であるペプチド類をラクトフェリン類から製造する場合、出発物質として使用するラクトフェリン類は、市販のラクトフェリン、哺乳類（例えば、ヒト、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ）の初乳、移行乳、常乳、末期乳等、またはこれらの乳の処理物である脱脂乳、ホエー等から常法（例えば、イオン交換クロマトグラフィー）により分離したラクトフェリン、それらを塩酸、クエン酸等により脱鉄したアポラクトフェリン、アポラクトフェリンを鉄、銅、亜鉛、マンガン等の金属をキレートさせた金属飽和または部分飽和ラクトフェリンであり、市販品または公知の方法により製造した調製品を使用することもできる。
【００１２】
この発明において使用するペプチド類は、ラクトフェリン類の分解物から分離手段によって得られるペプチド、これらのペプチドと同一のアミノ酸配列、相同なアミノ酸配列を有するペプチド、これらのペプチドの誘導体、これらのペプチドの薬学的に許容される塩類またはこれらの任意の混合物であり、公知の方法により化学的に合成することもできる。これらのペプチド類は、例えば、前記特開平５−９２９９４号公報、特開平５−７８３９２号公報、特開平５−１４８２９７号公報、特開平５−１４９８２９６号公報および特開平５−１４８２９５号公報の各発明に記載された方法によって得ることができる。
【００１３】
前記の方法によって得られるペプチドは次のアミノ酸配列を有するペプチド、その誘導体または塩類を望ましい態様として例示できる。例えば、配列番号１、２および２７のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−７８３９２号公報）、配列番号３、４、５および６のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−１４８２９７号公報）、配列番号７、８、９および３１のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−１４８２９６号公報）、配列番号１０から２１のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−１４８２９５号公報）、配列番号２２から２６、２８、２９および３０のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−９２９９４号公報）である。
【００１４】
前記ペプチドの薬学的に許容される塩類としては、塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩等の酸付加塩を例示でき、誘導体としては、カルボキシル基をアミド化またはアミノ基をアシル化した誘導体を例示することができる。
得られたペプチド類は、試験例４に示すように毒性が極めて低く、公知の方法により、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、シロップ剤、顆粒剤、散剤、注射剤等の薬剤として適宜使用することができ、また軟膏剤、液状塗布剤、ローション剤、エアゾール（スプレー）剤、座剤等としても使用できる。さらにまた、食品、飼料、飲料水等に適宜混合することによっても投与可能である。
【００１５】
この発明の抗寄生虫剤の有効成分であるペプチド類の配合量は、症状等により適宜選択できるが、経口剤の場合体重１ｋｇ当たり少なくとも０．１ｍｇ、望ましくは１ｍｇ以上、注射剤の場合体重１ｋｇ当たり少なくとも０．０２ｍｇ、望ましくは０．２ｍｇ以上、外用剤の場合１ｇ当たり０．０５〜１００ｍｇである。
【００１６】
次に試験例を示し、この発明の抗寄生虫剤の有効成分であるペプチド類の効果等について詳しく説明する。
試験例１
この試験は、ペプチド類の殺寄生虫効果を調べるために行った。
１）試験方法
参考例１の方法により製造した配列番号２６のペプチドを０μｇ／ｍｌ（対照）、１００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌの各濃度で含有するＤ−ＭＥＭ１％ＢＳＡ（１％ＢＳＡを含むDulbeccoの改変最小必要培地）にトキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma gondii)懸濁液（Corrnelisen らの方法［パラサイトロジー（Parasitology）、第８３巻、第１０３ページ〜第１０８ページ、１９８１年］により分離）を添加し、３７℃で、３０分、または１時間、２時間、４時間培養を行った。培養終了後、それぞれの培養液を１，２００×ｇ、１０分間遠心分離して寄生虫を集め、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）で３回洗浄を行い、再びＤ−ＭＥＭ１％ＢＳＡに１×１０6 個／ｍｌの寄生虫濃度で懸濁した。これらの懸濁液５μｌに対し、等量の０．５％トリパンブルーを含有するＰＢＳを添加し、検鏡下トキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma gondii)の生残率の計数を行った。
２）試験結果
この試験の結果は、図１に示すとおりである。図１は、トキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma gondii)の生残率を示し、縦軸および横軸は、それぞれ寄生虫の生残率（染色されない寄生虫の割合）および培養時間を示し、○、●および▲は、それぞれ対照、配列番号２６のペプチドを１００μｇ／ｍｌ含む培養液および配列番号２６のペプチドを１０００μｇ／ｍｌ含む培養液を示す。
【００１７】
図１から明らかなように、対照群では培養４時間後まで寄生虫の生残率に変化がないのに対し、配列番号２６のペプチドを１００μｇ／ｍｌ含む培養液中では、１、２、および４時間後の寄生虫の生残率が、それぞれ６４％、５１％、および５％であり、また配列番号２６のペプチドを１０００μｇ／ｍｌ含む培養液中では、３０分後以上の寄生虫の生残率がいずれも５％以下であった。この結果から、配列番号２６のペプチドに殺寄生虫効果があることが認められた。なお、ペプチドの種類を変更して試験したが、ほぼ同様な結果が得られた。
試験例２
この試験は、マウス胚細胞を用い、ペプチド類の寄生虫細胞内侵入阻止効果を調べるために行った。
１）試験方法
マウス胚細胞（Omata らの方法［パラサイトロジー・リサーチ(Parasitology Research) 、第７５巻、第１８９ページ〜第１９３ページ、１９９０年］により調製）をＤ−ＭＥＭ１０％ＦＢＳ（１０％ＦＢＳを含むDulbeccoの改変最小必要培地）中で培養後、０．０２５％トリプシンを含むＰＢＳ中で保温し、８００×ｇ、１０分間の遠心分離によって細胞を集め、再びＤ−ＭＥＭ１０％ＦＢＳに５×１０4 細胞／ｍｌの濃度で懸濁し、これをそれぞれ２００μｌずつ培養プレート（直径１５ｍｍ。松波ガラス社製）にまき、３７℃で１昼夜培養した。このマウス胚細胞の培養液中に、試験例１と同様の方法により配列番号２６のペプチドで０時間、または１５分、３０分、１時間、２時間、４時間処理を行ったトキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma gondii)の培養液を０．１ｍｌ添加し、さらに３７℃で培養を行った。この１８時間後に、プレートをＰＢＳにて洗浄し、メタノールにより固定化の後、ギムザ染色を行った。マウス胚細胞５００個に対するトキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma gondii)寄生細胞の割合を計数し、感染率を求めた。
２）試験結果
この試験の結果は、図２に示すとおりである。図２は、トキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma gondii)によるマウス胚細胞の感染率を示し、縦軸および横軸は、それぞれマウス胚細胞の感染率および寄生虫の配列番号２６のペプチドによる処理時間を示し、○、●および▲は、それぞれ対照、配列番号２６のペプチドを１００μｇ／ｍｌ含む培養液および配列番号２６のペプチドを１０００μｇ／ｍｌ含む培養液を示す。
【００１８】
図２から明らかなように、対照群では処理時間４時間まで寄生虫の感染率が７８％以上であるのに対し、配列番号２６のペプチド１００μｇ／ｍｌで、１５分、３０分、１、２、および４時間処理した後の寄生虫による感染率は、それぞれ８０％、５８％、３５％、２０％および８％であり、また配列番号２６のペプチド１０００μｇ／ｍｌで、３０分、および１時間以上処理した後の寄生虫による感染率は、それぞれ１６％、および１０％以下であった。この結果から、配列番号２６のペプチドに、寄生虫の細胞内侵入阻止効果があることが認められた。なお、ペプチドの種類を変更して試験したが、ほぼ同様な結果が得られた。
試験例３
この試験は、マウスを用い、試験例２と同様にペプチド類の寄生虫感染防止効果を調べるために行った。
１）試験方法
試験例１の試験方法と同様の方法で、トキソプラズマ ゴンディー
（Toxoplasma gondii)懸濁液を配列番号２６のペプチド０μｇ／ｍｌ（対照）、１００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌで４時間処置した後、各群５匹のマウスの腹腔に、それぞれ１００個のトキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma
gondii)を注入した。その後、３０日間にわたりマウスの生存をモニターした。２）試験結果
この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１は、寄生虫注入後のマウスの生存数の変化を示す。
【００１９】
表１から明らかなように、ペプチド無処理の寄生虫を注入した群（対照群）では注入９日後までに５匹全例が死亡したのに対し、配列番号２６のペプチド１００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌで４時間処置した寄生虫を注入した群では、注入９日後までそれぞれ全例が生存しており、さらに１０００μｇ／ｍｌ処置群では、注入３０日後まで５例中４例が生存していた。この結果から、配列番号２６のペプチドに、殺寄生虫効果があることが、実際の生体を用いて確認された。なお、ペプチドの種類を変更して試験したが、ほぼ同様な結果が得られた。
【００２０】
【表１】
【００２１】
試験例４
この試験は、ペプチド類の急性毒性を調べるために行った。
１）試験方法
６週齢のＣＤ（ＳＤ）系のラット（日本ＳＬＣから購入）の両性を用い、雄および雌を無作為にそれぞれ４群（１群５匹）に分けた。
【００２２】
体重１ｋｇ当り１０００または２０００ｍｇの割合で参考例１と同一の方法で製造した配列番号２６のペプチドを注射用水（大塚製薬社製）に溶解し、体重１００ｇ当たり４ｍｌの割合で金属製玉付き針を用いて単回強制経口投与し、急性毒性を試験した。
２）試験結果
この試験の結果、このペプチドを１０００ｍｇ／ｋｇ体重または２０００ｍｇ／ｋｇ体重の割合で投与した群に死亡例は認められなかった。従って、このペプチドのＬＤ50は、２０００ｍｇ／ｋｇ体重以上であり、毒性は極めて低いことが判明した。なお、他のペプチド類についても同様の試験を行ったが、ほぼ同様な結果が得られた。
参考例１
市販のウシ・ラクトフェリン（シグマ社製）５０ｍｇを精製水０．９ｍｌに溶解し、０．１規定の塩酸でｐＨを２．５に調整し、のち市販のブタペプシン（シグマ社製）１ｍｇを添加し、３７℃で６時間加水分解した。次いで０．１規定の水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に調整し、８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、室温に冷却し、１５，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、透明な上清を得た。この上清１００μｌをＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマトグラフィーにかけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０分間０．０５％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を含む２０％アセトニトリルで溶出し、のち３０分間０．０５％ＴＦＡを含む２０〜６０％のアセトニトリルのグラジエントで溶出し、２４〜２５分の間に溶出する画分を集め、真空乾燥した。この乾燥物を２％（Ｗ／Ｖ）の濃度で精製水に溶解し、再度ＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ（東ソー社製）を用いた高速液体クロマトグラフィーにかけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０分間０．０５％ＴＦＡを含む２４％アセトニトリルで溶出し、のち３０分間０．０５％ＴＦＡを含む２４〜３２％のアセトニトリルのグラジエントで溶出し、３３．５〜３５．５分の間に溶出する画分を集めた。上記の操作を２５回反復し、真空乾燥し、ペプチド約１．５ｍｇを得た。
【００２３】
上記のペプチドを６Ｎ塩酸で加水分解し、アミノ酸分析計を用いて常法によりアミノ酸組成を分析した。同一の試料を気相シークェンサー（アプライド・バイオシステムズ社製）を用いて２５回のエドマン分解を行ない、２５個のアミノ酸残基の配列を決定した。またＤＴＮＢ［５，５−ジチオ−ビス（２−ニトロベンゾイック・アシド）］を用いたジスルフィド結合分析法［アナリティカル・バイオケミストリー（Analytical Biochemistry ）、第６７巻、第４９３頁、１９７５年］によりジスルフィド結合が存在することを確認した。
【００２４】
その結果、このペプチドは、２５個のアミノ酸残基からなり、３番目と２０番目のシステイン残基がジスルフィド結合し、３番目のシステイン残基からＮ−末端側に２個のアミノ酸残基が、２０番目のシステイン残基からＣ−末端側に５個のアミノ酸がそれぞれ結合した、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を有していることが確認された。
参考例２
ペプチド自動合成装置（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー社製。ＬＫＢＢｉｏｌｙｎｘ４１７０）を用い、シェパード等による固相ペプチド合成法［ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサイエティー・パーキンＩ（Journal of Chemical Society Perkin Ｉ）、第５３８頁、１９８１年］に基づいてペプチドを次のようにして合成した。
【００２５】
アミン官能基を９−フルオレニルメトキシカルボニル基で保護したアミノ酸［以下Fmoc−アミノ酸またはFmoc−固有のアミノ酸の名称（例えば、Fmoc−アスパラギン）と記載することがある］に、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミドを添加して所望のアミノ酸の無水物を生成させ、このFmoc−アミノ酸無水物を合成に用いた。ペプチド鎖を製造するためにＣ−末端のアスパラギン残基に相当するFmoc−アスパラギン無水物を、そのカルボキシル基を介し、ジメチルアミノピリジンを触媒としてウルトロシンＡ樹脂（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー社製）に固定する。次いでこの樹脂をピペリジンを含むジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ−末端アミノ酸のアミン官能基の保護基を除去する。のちアミノ酸配列のＣ−末端から２番目に相当するFmoc−アルギニン無水物を前記Ｃ−末端アミノ酸残基を介して樹脂に固定されたアルギニンの脱保護アミン官能基にカップリングさせた。以下同様にして順次グルタミン、トリプトファン、グルタミン、およびフェニルアラニンを固定した。全部のアミノ酸のカップリングが終了し、所望のアミノ酸配列のペプチド鎖が形成された後、９４％ＴＦＡ、５％フェノール、および１％エタンジオールからなる溶媒でアセトアミドメチル以外の保護基の除去およびペプチドの脱離を行ない、高速液体クロマトグラフイーによりペプチドを精製し、この溶液を濃縮し、乾燥して、ペプチド粉末を得た。
【００２６】
前記のペプチドについてアミノ酸分析計を用いて常法によりアミノ酸組成を分析し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有することを確認した。
次に実施例を示してこの発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、この発明は以下の例に限定されるものではない。
【００２７】
【実施例】
実施例１
１錠当たり次の配合割合の錠剤を製造した。
参考例２と同一の方法により製造した
配列番号１０のペプチド １０．０（ｍｇ）
乳糖一水和物 ３０．０
トウモロコシデンプン １９．８
結晶セルロース ２８．０
ケイ酸マグネシウム五水和物 ２．０
ステアリン酸マグネシウム ０．２
配列番号１０のペプチド、乳糖一水和物、トウモロコシデンプンおよび結晶セルロースの混合物に滅菌水を適宜添加しながら均一に混練し、５０℃で３時間乾燥し、得られた乾燥物にケイ酸マグネシウム五水和物およびステアリン酸マグネシウムを添加して混合し、常法により打錠機で打錠した。なお、ペプチド以外の原料はいずれも市販品を用いた。
実施例２
注射用水（大塚製薬社製）１ｍｌに、参考例１と同一の方法により製造した配例番号２６のペプチド粉末１０ｍｇおよび塩化ナトリウム（和光純薬工業社製）９ｍｇの割合で溶解し、水酸化ナトリウム（和光純薬工業社製）および塩酸（和光純薬工業社製）でｐＨを約７に調整し、濾過滅菌し、常法により１ｍｌずつアンプルに充填し、注射用の抗寄生虫剤を製造した。
実施例３
注射用水（大塚製薬社製）１０ｍｌに、参考例２と同一の方法により製造した配例番号１０のペプチド粉末１ｍｇおよびＤ−マンニット（和光純薬工業社製）４９．５ｍｇの割合で溶解し、リン酸緩衝剤粉末（和光純薬工業社製）の水溶液でｐＨを約７に調整し、濾過滅菌し、常法により１ｍｌずつバイアル瓶に充填し、凍結乾燥し、注射用の抗寄生虫剤を製造した。
実施例４
１００ｇ当たり次の配合割合の軟膏を常法により製造した。なお、ペプチド以外の原料はいずれも市販品を用いた。
【００２８】
参考例１と同一の方法により製造した
配列番号２６のペプチド ０．１（ｇ）
スクワラン １０．０
白色ワセリン ８．０
セトステアリルアルコール ８．０
グリセリンモノステアレート ２．０
ポリオキシエチレンモノステアレート １．０
パラオキシ安息香酸メチル ０．２
パラオキシ安息香酸プロピル ０．１
１，３−ブチレングリコール ２．５
滅菌精製水 ６８．１
【００２９】
【発明の効果】
以上詳しく説明したとおり、この発明は、ペプチド類を有効成分として含有する抗寄生虫剤に係るものであり、この発明によって秦せられる効果は次のとおりである。
（１）副作用が少ない。
（２）耐熱性があり、水に可溶性で、水溶液中で安定なため、薬剤として安定である。
（３）ペプチドは抗菌作用を有するので、製剤化に当たり防腐剤を使用する必要がない。
（４）正常細胞に対しては細胞毒性を示さず、寄生虫に対してのみ毒性を示す。
【００３０】
【配列表】
【００３１】
【００３２】
【００３３】
【００３４】
【００３５】
【００３６】
【００３７】
【００３８】
【００３９】
【００４０】
【００４１】
【００４２】
【００４３】
【００４４】
【００４５】
【００４６】
【００４７】
【００４８】
【００４９】
【００５０】
【００５１】
【００５２】
【００５３】
【００５４】
【００５５】
【００５６】
【００５７】
【００５８】
【００５９】
【００６０】
【００６１】
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、寄生虫の生残率と培養時間との関係を示す。
【図２】図２は、トキソプラズマよるマウス胚細胞の感染率と処理時間との関係を示す。
【発明の属する技術分野】
この発明は、抗寄生虫剤に関するものである。さらに詳しくは、この発明は、ヒトおよび家畜、ペット等の動物に寄生する蠕虫あるいは原虫によってそれらの動物に発生する各種疾病を予防および治療する薬剤に関するものである。
なお、以下の記載において、寄生虫とは細菌、真菌、ウィルス等の微生物以外の寄生性生物を意味し、抗菌活性という用語は、細菌、真菌、ウィルス等の微生物を静菌または殺菌する作用を意味する。
【０００２】
【従来の技術】
寄生虫症（原虫症、蠕虫症）は、世界的視野より見れば、感染率も高く、特定の地域または衛生設備の整っていない地域では、未だに多くの犠牲者を出している。また、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ニワトリ等の家畜、イヌ、ネコ等の愛玩動物も寄生虫による疾患に罹患しやすい。寄生虫による疾患には、蛔虫、線虫、鉤虫、蟯虫、鞭虫、線毛虫、条虫、吸虫等による蠕虫症、またはマラリア、トキソプラズマ、ニューモシスチカリニ、アメーバ等による原虫症があり、それぞれの寄生虫によって、その宿主または寄生場所には特徴がある。
【０００３】
寄生虫が宿主にとって深刻な生命的危機を与えないとしても、特に家畜業界等においては、動物の飼料効率および成長速度が減少し、牛乳、羊毛等の生産に打撃を与える等、経済的損害は甚大である。また、愛玩動物への寄生虫の侵入は、愛玩動物と密接に関わる人々にとって大きな問題である。
現在これらの寄生虫症に対して、パモ酸ピランテル等のピリミジン誘導体、アルベンダゾール、メベンダゾール等のベンツイミダゾール誘導体、プラジカンテル等のイソキノリン誘導体、リン酸ピペラジン、クエン酸ジメチルカルバマジン等のピペラジン誘導体等の駆虫剤、メトロニダゾール等のニトロイミダゾール誘導体、スルファメトキサゾール・トリメトプリム等のピリミジン誘導体、キニーネ等のアルカロイド系物質、イセチオン酸ペンタミジン等のジアミジン系物質、８−アミノキノリン等のキノリン系物質、テトラサイクリン等の抗生物質等の抗原虫剤が使用されている（日本臨床、第５１３ページ〜第５２０ページ、１９９１年および「１９９１年版動物用医薬品用具要覧」、社団法人日本動物薬事協会、第２１７〜２１８ページ、１９９１年）。しかしながら、これらの薬剤は腹痛、悪心、下痢、嘔吐等の副作用、妊婦への使用厳禁等好ましくない欠点を有している。
【０００４】
一方、ラクトフェリンは、乳汁および唾液、涙、粘膜分泌液等のヒトを含む哺乳動物の体液に存在する鉄結合性タンパク質であり、大腸菌、カンジタ菌、クロストリジウム菌等の有害微生物に対して抗菌作用を示すことが知られている［ジャーナル・オブ・ペディアトリクス(Journal of Pediatrics) 、第９４巻、第１ページ、１９７９年］。また、ブドウ球菌および腸球菌に対して、０．５〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度で抗菌作用を有することが知られている［ジャーナル・オブ・デイリー・サイエンス(Journal of Dairy Science)、第６７巻、第６０６ページ、１９８４年］。
【０００５】
この発明の発明者らは、ラクトフェリンの抗菌性に着目し、哺乳類のラクトフェリン、アポラクトフェリン、または金属飽和ラクトフェリン（以下、これらをまとめて「ラクトフェリン類」と記載することがある）を酸または酵素により加水分解した物質が、望ましくない副作用（例えば抗原性）等がなく、しかも未分解のラクトフェリン類よりも強い耐熱性および抗菌性を有することを見い出し、既に特許出願を行った（特開平５−３２００６８号公報）。
【０００６】
また、この発明の発明者らは、ラクトフェリンの分解物から強い抗菌活性を有するペプチドを単離し、それらのペプチドと同一のアミノ酸配列を有するペプチドまたはそれらのペプチドの誘導体を合成し２０個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−９２９９４号公報）、１１個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−７８３９２号公報）、６個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８２９７号公報）、５個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８２９６号公報）、３〜６個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８２９５号公報）を、それぞれ既に特許出願した。
【０００７】
さらに、この発明の発明者らは、ラクトフェリン類を酸または酵素により加水分解した物質と同一のアミノ酸配列を有するペプチドまたはこれらペプチドの誘導体に脳の保護作用（特願平４−３２７７３８号公報）、ラクトフェリン加水分解物に上皮細胞増殖因子による繊維芽細胞増殖を促進する作用（特開平６−４８９５５号公報）および神経成長因子産生促進作用（特開平５−２３５５７号公報）があることを見い出し、それぞれ既に特許出願した。また、ラクトフェリンがヘパリンに結合する性質を利用して乳からラクトフェリンを分離精製する方法（特願昭６３−２５５２９９号公報）も開示されている。
【０００８】
さらに、この発明の発明者らは、ラクトフェリン類およびラクトフェリン類を酸または酵素により加水分解した物質と同一のアミノ酸配列を有するペプチドが、水生動物の寄生生物性疾患に対して予防および治療効果を有することを見い出し既に特許出願した（特開平７−１４５０６９号公報）。
ただし、これらのラクトフェリン類、その分解物および分解物と同一のアミノ酸配列を有するペプチドが、ヒトおよびウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ニワトリ等の家畜、イヌ、ネコ等の愛玩動物に寄生する原虫または蠕虫等による寄生虫疾患に有効であることは従来知られておらず、またそのような事実を記載した刊行物も皆無である。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
前記従来技術から明らかなように、副作用の少ない抗寄生虫剤が待望されているが、未だ優れた物質は知られていないのが現状であった。
この発明は、以上のとおりの事情に鑑みてなされたものであり、ヒトおよび家畜、ペット等の寄生虫疾患に対して、少量で有効な予防および治療効果を有し、かつ副作用が少ない抗寄生虫剤を提供することを目的としている。
【0010】
【課題を解決するための手段】
この発明は、前記の課題を解決するものとして、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を有するペプチド、薬学的に許容されるこのペプチドの塩類（以下、これらをまとめて「ペプチド類」と記載することがある）、またはこれらの少なくとも１種を有効成分として含有する抗トキソプラズマ剤を提供する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
この発明の抗寄生虫剤の有効成分であるペプチド類をラクトフェリン類から製造する場合、出発物質として使用するラクトフェリン類は、市販のラクトフェリン、哺乳類（例えば、ヒト、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ）の初乳、移行乳、常乳、末期乳等、またはこれらの乳の処理物である脱脂乳、ホエー等から常法（例えば、イオン交換クロマトグラフィー）により分離したラクトフェリン、それらを塩酸、クエン酸等により脱鉄したアポラクトフェリン、アポラクトフェリンを鉄、銅、亜鉛、マンガン等の金属をキレートさせた金属飽和または部分飽和ラクトフェリンであり、市販品または公知の方法により製造した調製品を使用することもできる。
【００１２】
この発明において使用するペプチド類は、ラクトフェリン類の分解物から分離手段によって得られるペプチド、これらのペプチドと同一のアミノ酸配列、相同なアミノ酸配列を有するペプチド、これらのペプチドの誘導体、これらのペプチドの薬学的に許容される塩類またはこれらの任意の混合物であり、公知の方法により化学的に合成することもできる。これらのペプチド類は、例えば、前記特開平５−９２９９４号公報、特開平５−７８３９２号公報、特開平５−１４８２９７号公報、特開平５−１４９８２９６号公報および特開平５−１４８２９５号公報の各発明に記載された方法によって得ることができる。
【００１３】
前記の方法によって得られるペプチドは次のアミノ酸配列を有するペプチド、その誘導体または塩類を望ましい態様として例示できる。例えば、配列番号１、２および２７のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−７８３９２号公報）、配列番号３、４、５および６のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−１４８２９７号公報）、配列番号７、８、９および３１のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−１４８２９６号公報）、配列番号１０から２１のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−１４８２９５号公報）、配列番号２２から２６、２８、２９および３０のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−９２９９４号公報）である。
【００１４】
前記ペプチドの薬学的に許容される塩類としては、塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩等の酸付加塩を例示でき、誘導体としては、カルボキシル基をアミド化またはアミノ基をアシル化した誘導体を例示することができる。
得られたペプチド類は、試験例４に示すように毒性が極めて低く、公知の方法により、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、シロップ剤、顆粒剤、散剤、注射剤等の薬剤として適宜使用することができ、また軟膏剤、液状塗布剤、ローション剤、エアゾール（スプレー）剤、座剤等としても使用できる。さらにまた、食品、飼料、飲料水等に適宜混合することによっても投与可能である。
【００１５】
この発明の抗寄生虫剤の有効成分であるペプチド類の配合量は、症状等により適宜選択できるが、経口剤の場合体重１ｋｇ当たり少なくとも０．１ｍｇ、望ましくは１ｍｇ以上、注射剤の場合体重１ｋｇ当たり少なくとも０．０２ｍｇ、望ましくは０．２ｍｇ以上、外用剤の場合１ｇ当たり０．０５〜１００ｍｇである。
【００１６】
次に試験例を示し、この発明の抗寄生虫剤の有効成分であるペプチド類の効果等について詳しく説明する。
試験例１
この試験は、ペプチド類の殺寄生虫効果を調べるために行った。
１）試験方法
参考例１の方法により製造した配列番号２６のペプチドを０μｇ／ｍｌ（対照）、１００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌの各濃度で含有するＤ−ＭＥＭ１％ＢＳＡ（１％ＢＳＡを含むDulbeccoの改変最小必要培地）にトキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma gondii)懸濁液（Corrnelisen らの方法［パラサイトロジー（Parasitology）、第８３巻、第１０３ページ〜第１０８ページ、１９８１年］により分離）を添加し、３７℃で、３０分、または１時間、２時間、４時間培養を行った。培養終了後、それぞれの培養液を１，２００×ｇ、１０分間遠心分離して寄生虫を集め、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）で３回洗浄を行い、再びＤ−ＭＥＭ１％ＢＳＡに１×１０6 個／ｍｌの寄生虫濃度で懸濁した。これらの懸濁液５μｌに対し、等量の０．５％トリパンブルーを含有するＰＢＳを添加し、検鏡下トキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma gondii)の生残率の計数を行った。
２）試験結果
この試験の結果は、図１に示すとおりである。図１は、トキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma gondii)の生残率を示し、縦軸および横軸は、それぞれ寄生虫の生残率（染色されない寄生虫の割合）および培養時間を示し、○、●および▲は、それぞれ対照、配列番号２６のペプチドを１００μｇ／ｍｌ含む培養液および配列番号２６のペプチドを１０００μｇ／ｍｌ含む培養液を示す。
【００１７】
図１から明らかなように、対照群では培養４時間後まで寄生虫の生残率に変化がないのに対し、配列番号２６のペプチドを１００μｇ／ｍｌ含む培養液中では、１、２、および４時間後の寄生虫の生残率が、それぞれ６４％、５１％、および５％であり、また配列番号２６のペプチドを１０００μｇ／ｍｌ含む培養液中では、３０分後以上の寄生虫の生残率がいずれも５％以下であった。この結果から、配列番号２６のペプチドに殺寄生虫効果があることが認められた。なお、ペプチドの種類を変更して試験したが、ほぼ同様な結果が得られた。
試験例２
この試験は、マウス胚細胞を用い、ペプチド類の寄生虫細胞内侵入阻止効果を調べるために行った。
１）試験方法
マウス胚細胞（Omata らの方法［パラサイトロジー・リサーチ(Parasitology Research) 、第７５巻、第１８９ページ〜第１９３ページ、１９９０年］により調製）をＤ−ＭＥＭ１０％ＦＢＳ（１０％ＦＢＳを含むDulbeccoの改変最小必要培地）中で培養後、０．０２５％トリプシンを含むＰＢＳ中で保温し、８００×ｇ、１０分間の遠心分離によって細胞を集め、再びＤ−ＭＥＭ１０％ＦＢＳに５×１０4 細胞／ｍｌの濃度で懸濁し、これをそれぞれ２００μｌずつ培養プレート（直径１５ｍｍ。松波ガラス社製）にまき、３７℃で１昼夜培養した。このマウス胚細胞の培養液中に、試験例１と同様の方法により配列番号２６のペプチドで０時間、または１５分、３０分、１時間、２時間、４時間処理を行ったトキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma gondii)の培養液を０．１ｍｌ添加し、さらに３７℃で培養を行った。この１８時間後に、プレートをＰＢＳにて洗浄し、メタノールにより固定化の後、ギムザ染色を行った。マウス胚細胞５００個に対するトキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma gondii)寄生細胞の割合を計数し、感染率を求めた。
２）試験結果
この試験の結果は、図２に示すとおりである。図２は、トキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma gondii)によるマウス胚細胞の感染率を示し、縦軸および横軸は、それぞれマウス胚細胞の感染率および寄生虫の配列番号２６のペプチドによる処理時間を示し、○、●および▲は、それぞれ対照、配列番号２６のペプチドを１００μｇ／ｍｌ含む培養液および配列番号２６のペプチドを１０００μｇ／ｍｌ含む培養液を示す。
【００１８】
図２から明らかなように、対照群では処理時間４時間まで寄生虫の感染率が７８％以上であるのに対し、配列番号２６のペプチド１００μｇ／ｍｌで、１５分、３０分、１、２、および４時間処理した後の寄生虫による感染率は、それぞれ８０％、５８％、３５％、２０％および８％であり、また配列番号２６のペプチド１０００μｇ／ｍｌで、３０分、および１時間以上処理した後の寄生虫による感染率は、それぞれ１６％、および１０％以下であった。この結果から、配列番号２６のペプチドに、寄生虫の細胞内侵入阻止効果があることが認められた。なお、ペプチドの種類を変更して試験したが、ほぼ同様な結果が得られた。
試験例３
この試験は、マウスを用い、試験例２と同様にペプチド類の寄生虫感染防止効果を調べるために行った。
１）試験方法
試験例１の試験方法と同様の方法で、トキソプラズマ ゴンディー
（Toxoplasma gondii)懸濁液を配列番号２６のペプチド０μｇ／ｍｌ（対照）、１００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌで４時間処置した後、各群５匹のマウスの腹腔に、それぞれ１００個のトキソプラズマ ゴンディー（Toxoplasma
gondii)を注入した。その後、３０日間にわたりマウスの生存をモニターした。２）試験結果
この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１は、寄生虫注入後のマウスの生存数の変化を示す。
【００１９】
表１から明らかなように、ペプチド無処理の寄生虫を注入した群（対照群）では注入９日後までに５匹全例が死亡したのに対し、配列番号２６のペプチド１００μｇ／ｍｌ、１０００μｇ／ｍｌで４時間処置した寄生虫を注入した群では、注入９日後までそれぞれ全例が生存しており、さらに１０００μｇ／ｍｌ処置群では、注入３０日後まで５例中４例が生存していた。この結果から、配列番号２６のペプチドに、殺寄生虫効果があることが、実際の生体を用いて確認された。なお、ペプチドの種類を変更して試験したが、ほぼ同様な結果が得られた。
【００２０】
【表１】
試験例４
この試験は、ペプチド類の急性毒性を調べるために行った。
１）試験方法
６週齢のＣＤ（ＳＤ）系のラット（日本ＳＬＣから購入）の両性を用い、雄および雌を無作為にそれぞれ４群（１群５匹）に分けた。
【００２２】
体重１ｋｇ当り１０００または２０００ｍｇの割合で参考例１と同一の方法で製造した配列番号２６のペプチドを注射用水（大塚製薬社製）に溶解し、体重１００ｇ当たり４ｍｌの割合で金属製玉付き針を用いて単回強制経口投与し、急性毒性を試験した。
２）試験結果
この試験の結果、このペプチドを１０００ｍｇ／ｋｇ体重または２０００ｍｇ／ｋｇ体重の割合で投与した群に死亡例は認められなかった。従って、このペプチドのＬＤ50は、２０００ｍｇ／ｋｇ体重以上であり、毒性は極めて低いことが判明した。なお、他のペプチド類についても同様の試験を行ったが、ほぼ同様な結果が得られた。
参考例１
市販のウシ・ラクトフェリン（シグマ社製）５０ｍｇを精製水０．９ｍｌに溶解し、０．１規定の塩酸でｐＨを２．５に調整し、のち市販のブタペプシン（シグマ社製）１ｍｇを添加し、３７℃で６時間加水分解した。次いで０．１規定の水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に調整し、８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、室温に冷却し、１５，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、透明な上清を得た。この上清１００μｌをＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマトグラフィーにかけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０分間０．０５％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を含む２０％アセトニトリルで溶出し、のち３０分間０．０５％ＴＦＡを含む２０〜６０％のアセトニトリルのグラジエントで溶出し、２４〜２５分の間に溶出する画分を集め、真空乾燥した。この乾燥物を２％（Ｗ／Ｖ）の濃度で精製水に溶解し、再度ＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ（東ソー社製）を用いた高速液体クロマトグラフィーにかけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０分間０．０５％ＴＦＡを含む２４％アセトニトリルで溶出し、のち３０分間０．０５％ＴＦＡを含む２４〜３２％のアセトニトリルのグラジエントで溶出し、３３．５〜３５．５分の間に溶出する画分を集めた。上記の操作を２５回反復し、真空乾燥し、ペプチド約１．５ｍｇを得た。
【００２３】
上記のペプチドを６Ｎ塩酸で加水分解し、アミノ酸分析計を用いて常法によりアミノ酸組成を分析した。同一の試料を気相シークェンサー（アプライド・バイオシステムズ社製）を用いて２５回のエドマン分解を行ない、２５個のアミノ酸残基の配列を決定した。またＤＴＮＢ［５，５−ジチオ−ビス（２−ニトロベンゾイック・アシド）］を用いたジスルフィド結合分析法［アナリティカル・バイオケミストリー（Analytical Biochemistry ）、第６７巻、第４９３頁、１９７５年］によりジスルフィド結合が存在することを確認した。
【００２４】
その結果、このペプチドは、２５個のアミノ酸残基からなり、３番目と２０番目のシステイン残基がジスルフィド結合し、３番目のシステイン残基からＮ−末端側に２個のアミノ酸残基が、２０番目のシステイン残基からＣ−末端側に５個のアミノ酸がそれぞれ結合した、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を有していることが確認された。
参考例２
ペプチド自動合成装置（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー社製。ＬＫＢＢｉｏｌｙｎｘ４１７０）を用い、シェパード等による固相ペプチド合成法［ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサイエティー・パーキンＩ（Journal of Chemical Society Perkin Ｉ）、第５３８頁、１９８１年］に基づいてペプチドを次のようにして合成した。
【００２５】
アミン官能基を９−フルオレニルメトキシカルボニル基で保護したアミノ酸［以下Fmoc−アミノ酸またはFmoc−固有のアミノ酸の名称（例えば、Fmoc−アスパラギン）と記載することがある］に、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミドを添加して所望のアミノ酸の無水物を生成させ、このFmoc−アミノ酸無水物を合成に用いた。ペプチド鎖を製造するためにＣ−末端のアスパラギン残基に相当するFmoc−アスパラギン無水物を、そのカルボキシル基を介し、ジメチルアミノピリジンを触媒としてウルトロシンＡ樹脂（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー社製）に固定する。次いでこの樹脂をピペリジンを含むジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ−末端アミノ酸のアミン官能基の保護基を除去する。のちアミノ酸配列のＣ−末端から２番目に相当するFmoc−アルギニン無水物を前記Ｃ−末端アミノ酸残基を介して樹脂に固定されたアルギニンの脱保護アミン官能基にカップリングさせた。以下同様にして順次グルタミン、トリプトファン、グルタミン、およびフェニルアラニンを固定した。全部のアミノ酸のカップリングが終了し、所望のアミノ酸配列のペプチド鎖が形成された後、９４％ＴＦＡ、５％フェノール、および１％エタンジオールからなる溶媒でアセトアミドメチル以外の保護基の除去およびペプチドの脱離を行ない、高速液体クロマトグラフイーによりペプチドを精製し、この溶液を濃縮し、乾燥して、ペプチド粉末を得た。
【００２６】
前記のペプチドについてアミノ酸分析計を用いて常法によりアミノ酸組成を分析し、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有することを確認した。
次に実施例を示してこの発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、この発明は以下の例に限定されるものではない。
【００２７】
【実施例】
実施例１
１錠当たり次の配合割合の錠剤を製造した。
参考例２と同一の方法により製造した
配列番号１０のペプチド １０．０（ｍｇ）
乳糖一水和物 ３０．０
トウモロコシデンプン １９．８
結晶セルロース ２８．０
ケイ酸マグネシウム五水和物 ２．０
ステアリン酸マグネシウム ０．２
配列番号１０のペプチド、乳糖一水和物、トウモロコシデンプンおよび結晶セルロースの混合物に滅菌水を適宜添加しながら均一に混練し、５０℃で３時間乾燥し、得られた乾燥物にケイ酸マグネシウム五水和物およびステアリン酸マグネシウムを添加して混合し、常法により打錠機で打錠した。なお、ペプチド以外の原料はいずれも市販品を用いた。
実施例２
注射用水（大塚製薬社製）１ｍｌに、参考例１と同一の方法により製造した配例番号２６のペプチド粉末１０ｍｇおよび塩化ナトリウム（和光純薬工業社製）９ｍｇの割合で溶解し、水酸化ナトリウム（和光純薬工業社製）および塩酸（和光純薬工業社製）でｐＨを約７に調整し、濾過滅菌し、常法により１ｍｌずつアンプルに充填し、注射用の抗寄生虫剤を製造した。
実施例３
注射用水（大塚製薬社製）１０ｍｌに、参考例２と同一の方法により製造した配例番号１０のペプチド粉末１ｍｇおよびＤ−マンニット（和光純薬工業社製）４９．５ｍｇの割合で溶解し、リン酸緩衝剤粉末（和光純薬工業社製）の水溶液でｐＨを約７に調整し、濾過滅菌し、常法により１ｍｌずつバイアル瓶に充填し、凍結乾燥し、注射用の抗寄生虫剤を製造した。
実施例４
１００ｇ当たり次の配合割合の軟膏を常法により製造した。なお、ペプチド以外の原料はいずれも市販品を用いた。
【００２８】
参考例１と同一の方法により製造した
配列番号２６のペプチド ０．１（ｇ）
スクワラン １０．０
白色ワセリン ８．０
セトステアリルアルコール ８．０
グリセリンモノステアレート ２．０
ポリオキシエチレンモノステアレート １．０
パラオキシ安息香酸メチル ０．２
パラオキシ安息香酸プロピル ０．１
１，３−ブチレングリコール ２．５
滅菌精製水 ６８．１
【００２９】
【発明の効果】
以上詳しく説明したとおり、この発明は、ペプチド類を有効成分として含有する抗寄生虫剤に係るものであり、この発明によって秦せられる効果は次のとおりである。
（１）副作用が少ない。
（２）耐熱性があり、水に可溶性で、水溶液中で安定なため、薬剤として安定である。
（３）ペプチドは抗菌作用を有するので、製剤化に当たり防腐剤を使用する必要がない。
（４）正常細胞に対しては細胞毒性を示さず、寄生虫に対してのみ毒性を示す。
【００３０】
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、寄生虫の生残率と培養時間との関係を示す。
【図２】図２は、トキソプラズマよるマウス胚細胞の感染率と処理時間との関係を示す。
Claims (1)
- 配列番号２６に記載のアミノ酸配列を有するペプチド、薬学的に許容されるこのペプチドの塩、またはこれらの少なくとも１種を有効成分として含有する抗トキソプラズマ剤。
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