JPH1033196A - 試験片 - Google Patents
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- JPH1033196A JPH1033196A JP8193071A JP19307196A JPH1033196A JP H1033196 A JPH1033196 A JP H1033196A JP 8193071 A JP8193071 A JP 8193071A JP 19307196 A JP19307196 A JP 19307196A JP H1033196 A JPH1033196 A JP H1033196A
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- dehydrogenase
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 高感度で、かつ高精度で測定することがで
き、さらに、保存安定性に優れた試験片を提供する。 【解決手段】 デヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼ、ＮＡ
Ｄ又はＮＡＤＰ及び蛍光色原体と担体とからなることを
特徴とする試験片。
き、さらに、保存安定性に優れた試験片を提供する。 【解決手段】 デヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼ、ＮＡ
Ｄ又はＮＡＤＰ及び蛍光色原体と担体とからなることを
特徴とする試験片。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、試料中の微量成分
を測定するための試験片に関するものであり、さらに詳
しくは、蛍光発色法により、生体から採取した試料中の
微量成分を感度よく、簡便に定量するための試験片に関
するものである。
を測定するための試験片に関するものであり、さらに詳
しくは、蛍光発色法により、生体から採取した試料中の
微量成分を感度よく、簡便に定量するための試験片に関
するものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、病態の検査、診断を行うための試
薬として、従来から用いられている有機化学試薬に代わ
って、酵素反応を利用した試薬が広く利用されている。
酵素反応を利用した試薬は、酵素が生体中の特定の成分
を特異的に検出可能物質に変換する性質を利用したもの
であり、通常、測定しようとする測定対象物質（Ａ）
を、これに特異的な酵素（ａ）を用いて中間生成物（Ｉ
−１）に変換し、さらにこの中間生成物（Ｉ−１）に特
異的な酵素（ｉ−１）を作用させて中間生成物（Ｉ−
２）に変換するという反応を繰り返して、最終的に検出
可能物質（Ｆ）に変化し、この検出可能物質（Ｆ）を分
光光度計や蛍光光度計を用いて又は肉眼等による色調の
変化から定量するものである。
薬として、従来から用いられている有機化学試薬に代わ
って、酵素反応を利用した試薬が広く利用されている。
酵素反応を利用した試薬は、酵素が生体中の特定の成分
を特異的に検出可能物質に変換する性質を利用したもの
であり、通常、測定しようとする測定対象物質（Ａ）
を、これに特異的な酵素（ａ）を用いて中間生成物（Ｉ
−１）に変換し、さらにこの中間生成物（Ｉ−１）に特
異的な酵素（ｉ−１）を作用させて中間生成物（Ｉ−
２）に変換するという反応を繰り返して、最終的に検出
可能物質（Ｆ）に変化し、この検出可能物質（Ｆ）を分
光光度計や蛍光光度計を用いて又は肉眼等による色調の
変化から定量するものである。
【０００３】
【化１】
【０００４】このような試薬において、検出可能物質
（Ｆ）としては、ＮＡＤやその還元型（ＮＡＤＨ）及び
これらの類縁化合物であるＮＡＤＰやその還元型（ＮＡ
ＤＰＨ）等が広く利用されており（以下、これらの化合
物を総称する場合、ニコチンヌクレオチド類と称す
る）、これらのニコチンヌクレオチド類は紫外部（３４
０ｎｍ付近）で吸光度の変化が認められることから、生
成又は減少したニコチンヌクレオチド類を分光器を用い
て測定する試薬が提案されている。また、生成したＮＡ
ＤＨ又はＮＡＤＰＨにジアホラーゼを作用させること
で、テトラゾリウムをホルマザンに変換させて可視領域
で測定する試薬も数多く報告されている〔例えば、胆汁
酸（特開昭６０−２１４９００号公報、臨床化学第１９
巻、２９０〜２９９頁（１９９０））、トリグリセリド
（特開昭５５−１４８９９号公報）、アルコール（特公
平４−３９４７号公報）、アミラーゼ（特公昭６３−３
７６４０号公報）、クレアチンキナーゼ（特開昭５８−
１６６９９号公報、特公平４−７００００号公報）、ポ
リアミン（特公平６−６８４９０号公報）、グルコース
（特公平７−３４７５７号公報）、ベンジルアミン（特
開平７−１８４６９３号公報）〕。
（Ｆ）としては、ＮＡＤやその還元型（ＮＡＤＨ）及び
これらの類縁化合物であるＮＡＤＰやその還元型（ＮＡ
ＤＰＨ）等が広く利用されており（以下、これらの化合
物を総称する場合、ニコチンヌクレオチド類と称す
る）、これらのニコチンヌクレオチド類は紫外部（３４
０ｎｍ付近）で吸光度の変化が認められることから、生
成又は減少したニコチンヌクレオチド類を分光器を用い
て測定する試薬が提案されている。また、生成したＮＡ
ＤＨ又はＮＡＤＰＨにジアホラーゼを作用させること
で、テトラゾリウムをホルマザンに変換させて可視領域
で測定する試薬も数多く報告されている〔例えば、胆汁
酸（特開昭６０−２１４９００号公報、臨床化学第１９
巻、２９０〜２９９頁（１９９０））、トリグリセリド
（特開昭５５−１４８９９号公報）、アルコール（特公
平４−３９４７号公報）、アミラーゼ（特公昭６３−３
７６４０号公報）、クレアチンキナーゼ（特開昭５８−
１６６９９号公報、特公平４−７００００号公報）、ポ
リアミン（特公平６−６８４９０号公報）、グルコース
（特公平７−３４７５７号公報）、ベンジルアミン（特
開平７−１８４６９３号公報）〕。
【０００５】さらに、ニコチンジヌクレオチド類の測定
精度を挙げるために、レザズリンを用いてジアホラーゼ
の作用で蛍光発色性のレゾルフィンに変換して蛍光強度
で測定する試薬も提案されており、例えば、ｐＨ９．０
の炭酸緩衝液中にＮＡＤ、レザズリンナトリウム塩、ジ
アホラーゼ及びアラニンデヒドロゲナーゼを溶解したア
ラニン測定用試薬〔ジャーナル・オブ・バイオケミスト
リー誌、９６巻、１〜８頁（１９８４）〕や、３α−Ｏ
Ｈステロイドデヒドロゲナーゼ、ＮＡＤ、レザズリンナ
トリウム塩及びジアホラーゼをｐＨ３〜１３の緩衝液に
溶解した胆汁酸測定用試薬（特公昭５６−３９１９９号
公報）等が提案されている。
精度を挙げるために、レザズリンを用いてジアホラーゼ
の作用で蛍光発色性のレゾルフィンに変換して蛍光強度
で測定する試薬も提案されており、例えば、ｐＨ９．０
の炭酸緩衝液中にＮＡＤ、レザズリンナトリウム塩、ジ
アホラーゼ及びアラニンデヒドロゲナーゼを溶解したア
ラニン測定用試薬〔ジャーナル・オブ・バイオケミスト
リー誌、９６巻、１〜８頁（１９８４）〕や、３α−Ｏ
Ｈステロイドデヒドロゲナーゼ、ＮＡＤ、レザズリンナ
トリウム塩及びジアホラーゼをｐＨ３〜１３の緩衝液に
溶解した胆汁酸測定用試薬（特公昭５６−３９１９９号
公報）等が提案されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかし、このような蛍
光発色物質を用いた試薬でも、定量性は十分ではなく、
さらに、定量性を上げるために、測定対象の胆汁酸を含
む試料を高温処理（例えば、６７℃、２０分）した後、
上記の試薬で測定する方法〔特公昭５６−３９１１９号
公報及び臨床化学誌、４巻、３１２〜３１８頁（１９７
６）〕が提案されているが、このような方法によって
も、胆汁酸の回収率は９０％程度であり、さらに測定に
蛍光物質を使用しているために、試料中の不純物や用い
る試薬により測定上の妨害を受けやすく、測定値のバラ
ツキが大きいことが指摘されている（特公昭５９−１３
１９７号公報）。
光発色物質を用いた試薬でも、定量性は十分ではなく、
さらに、定量性を上げるために、測定対象の胆汁酸を含
む試料を高温処理（例えば、６７℃、２０分）した後、
上記の試薬で測定する方法〔特公昭５６−３９１１９号
公報及び臨床化学誌、４巻、３１２〜３１８頁（１９７
６）〕が提案されているが、このような方法によって
も、胆汁酸の回収率は９０％程度であり、さらに測定に
蛍光物質を使用しているために、試料中の不純物や用い
る試薬により測定上の妨害を受けやすく、測定値のバラ
ツキが大きいことが指摘されている（特公昭５９−１３
１９７号公報）。
【０００７】本発明は、測定対象物質の回収率を上げ、
さらに高感度で、かつ高精度で測定対象物質を測定する
ことのできる試験片を提供することを目的とするもので
ある。
さらに高感度で、かつ高精度で測定対象物質を測定する
ことのできる試験片を提供することを目的とするもので
ある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意検討の結果、従来液状で構成され
ていた蛍光試薬を試験片に加工することにより、測定対
象物質を極めて高感度で、かつ高精度で測定することが
できるということを見出し、本発明に到達した。すなわ
ち、本発明は、デヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼ、ＮＡ
Ｄ又はＮＡＤＰ及び蛍光色原体と担体とからなることを
特徴とする試験片を要旨とするものである。
を解決するために鋭意検討の結果、従来液状で構成され
ていた蛍光試薬を試験片に加工することにより、測定対
象物質を極めて高感度で、かつ高精度で測定することが
できるということを見出し、本発明に到達した。すなわ
ち、本発明は、デヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼ、ＮＡ
Ｄ又はＮＡＤＰ及び蛍光色原体と担体とからなることを
特徴とする試験片を要旨とするものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に用いられるデヒドロゲナーゼとしては、測定対
象物質（Ａ）又は測定対象物質（Ａ）から１段又は数段
の酵素反応によって誘導された中間生成物に特異的に作
用するものであることが必要であり、これらの組み合わ
せとしては、例えば、グルコース６−リン酸に対してグ
ルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グリセロリン酸
に対してグリセロール３−リン酸デヒドロゲナーゼ、グ
リセロールに対してグリセロールデヒドロゲナーゼ、フ
ェニルアラニンに対してフェニルアラニンデヒドロゲナ
ーゼ、ロイシンに対してロイシンデヒドロゲナーゼ、ア
ラニンに対してアラニンデヒドロゲナーゼ、アンドロス
テロンに対してヒドロキシステロイドデヒドロゲナー
ゼ、コレステノンに対してコレステロールデヒドロゲナ
ーゼ、フコースに対してフコースデヒドロゲナーゼ等が
挙げられる。
本発明に用いられるデヒドロゲナーゼとしては、測定対
象物質（Ａ）又は測定対象物質（Ａ）から１段又は数段
の酵素反応によって誘導された中間生成物に特異的に作
用するものであることが必要であり、これらの組み合わ
せとしては、例えば、グルコース６−リン酸に対してグ
ルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グリセロリン酸
に対してグリセロール３−リン酸デヒドロゲナーゼ、グ
リセロールに対してグリセロールデヒドロゲナーゼ、フ
ェニルアラニンに対してフェニルアラニンデヒドロゲナ
ーゼ、ロイシンに対してロイシンデヒドロゲナーゼ、ア
ラニンに対してアラニンデヒドロゲナーゼ、アンドロス
テロンに対してヒドロキシステロイドデヒドロゲナー
ゼ、コレステノンに対してコレステロールデヒドロゲナ
ーゼ、フコースに対してフコースデヒドロゲナーゼ等が
挙げられる。
【００１０】本発明に用いられる蛍光色原体としては、
ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの存在下、ジアホラーゼの作用
により、還元されて蛍光を発生するものであれば特に限
定されるものではないが、レザズリン、アラマーブルー
は、蛍光強度が強く、さらに酸化型、還元型共に空気中
で安定であることから、これらを用いることが特に好ま
しい。
ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの存在下、ジアホラーゼの作用
により、還元されて蛍光を発生するものであれば特に限
定されるものではないが、レザズリン、アラマーブルー
は、蛍光強度が強く、さらに酸化型、還元型共に空気中
で安定であることから、これらを用いることが特に好ま
しい。
【００１１】本発明に用いられるにジアホラーゼとして
は、上述の反応を触媒するものであれば、その供給源と
なる生物種等は特に限定されるものではなく、例えば、
バチルス・ステアロサーモフィルス、クロストリジウム
・クルイベリ等の微生物由来のものや、ブタ心臓由来の
もの等が挙げられる。なかでも、好熱性微生物由来のジ
アホラーゼは保存安定性に優れていることから好まし
く、具体的には、バチルス・ステアロサーモフィルス由
来のジアホラーゼを用いることが好ましい。
は、上述の反応を触媒するものであれば、その供給源と
なる生物種等は特に限定されるものではなく、例えば、
バチルス・ステアロサーモフィルス、クロストリジウム
・クルイベリ等の微生物由来のものや、ブタ心臓由来の
もの等が挙げられる。なかでも、好熱性微生物由来のジ
アホラーゼは保存安定性に優れていることから好まし
く、具体的には、バチルス・ステアロサーモフィルス由
来のジアホラーゼを用いることが好ましい。
【００１２】また、本発明に用いられるジアホラーゼと
しては、測定対象物質（Ａ）の定量性及び回収率を向上
させるために、下式で算出される酸化型蛍光色原体と還
元型アデニンヌクレオチド（ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨ）
から還元型蛍光色原体と酸化型アデニンヌクレオチド
（ＮＡＤ又はＮＡＤＰ）への方向の反応平衡定数（Ｋ
値）が１以上、好ましくは１０以上、さらに好ましくは
１００以上のものを用いることが好ましく、例えば、バ
チルス・ステアロサーモフィルス由来のジアホラーゼＩ
又はジアホラーゼIIを用いることが好ましい。
しては、測定対象物質（Ａ）の定量性及び回収率を向上
させるために、下式で算出される酸化型蛍光色原体と還
元型アデニンヌクレオチド（ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨ）
から還元型蛍光色原体と酸化型アデニンヌクレオチド
（ＮＡＤ又はＮＡＤＰ）への方向の反応平衡定数（Ｋ
値）が１以上、好ましくは１０以上、さらに好ましくは
１００以上のものを用いることが好ましく、例えば、バ
チルス・ステアロサーモフィルス由来のジアホラーゼＩ
又はジアホラーゼIIを用いることが好ましい。
【００１３】
【化２】
【００１４】これらの成分は、測定対象物質（Ａ）から
還元型蛍光色原体への酵素反応が９０％以上、好ましく
は９７％以上、さらに好ましくは９９％以上進行するよ
うに配合することが好ましく、ジアホラーゼとしては、
０．１〜１００万ユニット／ｌ、好ましくは０．１〜１
万ユニット／ｌ、さらに好ましくは１〜１０００ユニッ
ト／ｌの濃度の酵素液を試験片１００ｃｍ2 当り０．１
〜１万μｌ、好ましくは１〜１０００μｌ、さらに好ま
しくは１〜１００μｌ含有させればよい。また、デヒド
ロゲナーゼとしては、ジアホラーゼの濃度と同じ程度で
よい。ＮＡＤ又はＮＡＤＰとしては、０．００１〜２０
０ｍＭ、さらに好ましくは０．１ｎＭ〜５０ｍＭの溶液
を、試験片１００ｃｍ2 当り０．１〜１万μｌ、好まし
くは１〜１０００μｌ、さらに好ましくは１〜１００μ
ｌ含有させればよい。
還元型蛍光色原体への酵素反応が９０％以上、好ましく
は９７％以上、さらに好ましくは９９％以上進行するよ
うに配合することが好ましく、ジアホラーゼとしては、
０．１〜１００万ユニット／ｌ、好ましくは０．１〜１
万ユニット／ｌ、さらに好ましくは１〜１０００ユニッ
ト／ｌの濃度の酵素液を試験片１００ｃｍ2 当り０．１
〜１万μｌ、好ましくは１〜１０００μｌ、さらに好ま
しくは１〜１００μｌ含有させればよい。また、デヒド
ロゲナーゼとしては、ジアホラーゼの濃度と同じ程度で
よい。ＮＡＤ又はＮＡＤＰとしては、０．００１〜２０
０ｍＭ、さらに好ましくは０．１ｎＭ〜５０ｍＭの溶液
を、試験片１００ｃｍ2 当り０．１〜１万μｌ、好まし
くは１〜１０００μｌ、さらに好ましくは１〜１００μ
ｌ含有させればよい。
【００１５】蛍光色原体としては、試験片１００ｃｍ2
当り０．０１〜５００ｍｇ、好ましくは０．１〜１００
ｍｇ、さらに好ましくは０．１〜５０ｍｇ含有させれば
よい。このとき、蛍光色原体の量が少なすぎると蛍光発
光が低くなり、過剰であると不溶性となって精度低下を
きたすことがあるので好ましくない。
当り０．０１〜５００ｍｇ、好ましくは０．１〜１００
ｍｇ、さらに好ましくは０．１〜５０ｍｇ含有させれば
よい。このとき、蛍光色原体の量が少なすぎると蛍光発
光が低くなり、過剰であると不溶性となって精度低下を
きたすことがあるので好ましくない。
【００１６】本発明においては、測定対象物質（Ａ）が
デヒドロゲナーゼの基質でない物質の場合には、測定対
象物質（Ａ）をデヒドロゲナーゼの基質となる物質に変
換するために必要な各種酵素類（ｉ−１，ｉ−２等）を
試験片に含有させればよい。
デヒドロゲナーゼの基質でない物質の場合には、測定対
象物質（Ａ）をデヒドロゲナーゼの基質となる物質に変
換するために必要な各種酵素類（ｉ−１，ｉ−２等）を
試験片に含有させればよい。
【００１７】具体的に、測定対象物質（Ａ）と各種酵素
類の組合わせを例示すると、グルコースを測定する場合
には、例えば以下の反応式（１）に従ってグルコースが
定量できるように酵素類を含有させればよい。
類の組合わせを例示すると、グルコースを測定する場合
には、例えば以下の反応式（１）に従ってグルコースが
定量できるように酵素類を含有させればよい。
【００１８】
【化３】
【００１９】グリセロールを測定する場合には、例えば
下記の反応式（２）又は（３）に従ってグリセロールが
定量できるように酵素類を含有させればよい。
下記の反応式（２）又は（３）に従ってグリセロールが
定量できるように酵素類を含有させればよい。
【００２０】
【化４】
【００２１】
【化５】
【００２２】トリグリセリドを測定する場合には、例え
ば下記の反応式（４）に従ってグリセロールを生成さ
せ、生成したグリセロールを上記の反応式（２）又は
（３）に従って定量できるように酵素類を含有させれば
よい。
ば下記の反応式（４）に従ってグリセロールを生成さ
せ、生成したグリセロールを上記の反応式（２）又は
（３）に従って定量できるように酵素類を含有させれば
よい。
【００２３】
【化６】
【００２４】フェニルアラニンを測定する場合には、例
えば下記の反応式（５）に従ってフェニルアラニンを定
量できるように酵素類を含有させればよい。
えば下記の反応式（５）に従ってフェニルアラニンを定
量できるように酵素類を含有させればよい。
【００２５】
【化７】
【００２６】ロイシンを測定する場合には、例えば下記
の反応式（６）に従ってロイシンを定量できるように酵
素類を含有させればよい。
の反応式（６）に従ってロイシンを定量できるように酵
素類を含有させればよい。
【００２７】
【化８】
【００２８】アラニンを測定する場合には、例えば下記
の反応式（７）に従ってアラニンを定量できるように酵
素類を含有させればよい。
の反応式（７）に従ってアラニンを定量できるように酵
素類を含有させればよい。
【００２９】
【化９】
【００３０】コレステノンを測定する場合には、例えば
下記の式（８）に従ってコレステノンを定量できるよう
に酵素類を含有させればよい。
下記の式（８）に従ってコレステノンを定量できるよう
に酵素類を含有させればよい。
【００３１】
【化１０】
【００３２】フコースを測定する場合には、例えば下記
の式（９）に従ってフコースを定量できるように酵素類
を含有させればよい。
の式（９）に従ってフコースを定量できるように酵素類
を含有させればよい。
【００３３】
【化１１】
【００３４】この場合、試験片に共存させる各酵素の濃
度としては、ジアホラーゼの濃度と同じ範囲でよい。ま
た、ＡＴＰ等の濃度としては、０．１〜１００ｍＭ、好
ましくは０．１〜２０ｍＭの範囲の溶液を、試験片１０
０ｃｍ2 当り０．１〜１万μｌ、好ましくは１〜１００
０μｌ、さらに好ましくは１〜１００μｌ含有させれば
よい。
度としては、ジアホラーゼの濃度と同じ範囲でよい。ま
た、ＡＴＰ等の濃度としては、０．１〜１００ｍＭ、好
ましくは０．１〜２０ｍＭの範囲の溶液を、試験片１０
０ｃｍ2 当り０．１〜１万μｌ、好ましくは１〜１００
０μｌ、さらに好ましくは１〜１００μｌ含有させれば
よい。
【００３５】本発明においては、ｐＨを調整するための
緩衝剤、活性化剤、安定化剤、増粘剤その他添加剤を試
験片に含有させてもよい。緩衝剤としては、トリス、リ
ン酸カリウム、イミダゾール、トリエタノールアミン、
グリシン等が挙げられ、項目によっては、２−モルホリ
ンエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス−（２−
ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（Ｂ
ＥＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホ
ン酸（ＣＨＥＳ）等のグッド緩衝液が挙げられる。
緩衝剤、活性化剤、安定化剤、増粘剤その他添加剤を試
験片に含有させてもよい。緩衝剤としては、トリス、リ
ン酸カリウム、イミダゾール、トリエタノールアミン、
グリシン等が挙げられ、項目によっては、２−モルホリ
ンエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス−（２−
ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（Ｂ
ＥＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホ
ン酸（ＣＨＥＳ）等のグッド緩衝液が挙げられる。
【００３６】活性化剤としては、例えばトリトンＸ−１
００、ツイン２０等のノニオン系又はアニオン系、カチ
オン系の界面活性剤が用いられる。このような活性化剤
は、蛍光色原体とその他の水溶性成分との相溶性の改善
作用があり、その結果、試験片の保存安定性やブランク
値の低下に寄与する。これらの活性化剤の濃度として
は、０．００１〜２０％、好ましくは０．０１〜５％の
溶液を、試験片１００ｃｍ2 当り０．１〜１万μｌ、好
ましくは１〜１０００μｌ、さらに好ましくは１〜１０
０μｌ含有させればよい。
００、ツイン２０等のノニオン系又はアニオン系、カチ
オン系の界面活性剤が用いられる。このような活性化剤
は、蛍光色原体とその他の水溶性成分との相溶性の改善
作用があり、その結果、試験片の保存安定性やブランク
値の低下に寄与する。これらの活性化剤の濃度として
は、０．００１〜２０％、好ましくは０．０１〜５％の
溶液を、試験片１００ｃｍ2 当り０．１〜１万μｌ、好
ましくは１〜１０００μｌ、さらに好ましくは１〜１０
０μｌ含有させればよい。
【００３７】また、安定化剤としては、例えばウシ血清
アルブミン等のタンパク質やマルトース、グルコース、
スクロース等の糖類、ポリエチレングリコール等の高分
子化合物、マグネシウム、カリウム、カルシウム等の金
属イオンが用いられる。また金属イオンは酵素の活性化
剤としても働く。さらに、エチレンジアミン四酢酸（Ｅ
ＤＴＡ）、エチレングリコール（βーアミノエチルエー
テル）四酢酸（ＥＧＴＡ）等を用いることもできる。こ
れらの安定化剤の濃度としては、糖は０．１〜５０％、
好ましくは１〜２５％の範囲、タンパク質は０．００１
〜５０％、好ましくは０．１〜２５％の範囲、金属イオ
ンは０．００１〜１０ｍＭ、好ましくは０．１〜１０ｍ
Ｍの範囲、ＥＤＴＡやＥＧＴＡは０．００１〜１０ｍ
Ｍ、好ましくは０．１〜２ｍＭの範囲の溶液を、試験片
１００ｃｍ2 当り０．１〜１万μｌ、好ましくは１〜１
０００μｌ、さらに好ましくは１〜１００μｌ含有させ
ればよい。
アルブミン等のタンパク質やマルトース、グルコース、
スクロース等の糖類、ポリエチレングリコール等の高分
子化合物、マグネシウム、カリウム、カルシウム等の金
属イオンが用いられる。また金属イオンは酵素の活性化
剤としても働く。さらに、エチレンジアミン四酢酸（Ｅ
ＤＴＡ）、エチレングリコール（βーアミノエチルエー
テル）四酢酸（ＥＧＴＡ）等を用いることもできる。こ
れらの安定化剤の濃度としては、糖は０．１〜５０％、
好ましくは１〜２５％の範囲、タンパク質は０．００１
〜５０％、好ましくは０．１〜２５％の範囲、金属イオ
ンは０．００１〜１０ｍＭ、好ましくは０．１〜１０ｍ
Ｍの範囲、ＥＤＴＡやＥＧＴＡは０．００１〜１０ｍ
Ｍ、好ましくは０．１〜２ｍＭの範囲の溶液を、試験片
１００ｃｍ2 当り０．１〜１万μｌ、好ましくは１〜１
０００μｌ、さらに好ましくは１〜１００μｌ含有させ
ればよい。
【００３８】本発明の試験片に用いられる担体として
は、高分子素材からなる公知の担体を用いることがで
き、具体的には、天然繊維や合成繊維からなる抄紙や不
織布、メンブレンフィルター等が挙げられる。メンブレ
ンフィルターとしては、孔径が０．１〜０．５ミクロン
程度のニトロセルロース系の膜、酢酸セルロース系の膜
やポリビニルアルコール系の膜等が挙げられる。
は、高分子素材からなる公知の担体を用いることがで
き、具体的には、天然繊維や合成繊維からなる抄紙や不
織布、メンブレンフィルター等が挙げられる。メンブレ
ンフィルターとしては、孔径が０．１〜０．５ミクロン
程度のニトロセルロース系の膜、酢酸セルロース系の膜
やポリビニルアルコール系の膜等が挙げられる。
【００３９】本発明の試験片は、例えば、次のようにし
て作製すればよい。すなわち、上記の成分のうち、水溶
性の成分を水等に溶解して担体に含浸させた後、凍結乾
燥等によって担体の水分を十分に除き、次に、担体に水
難溶性の蛍光色原体をメタノール、エタノール、酢酸エ
チル、エーテル等の揮発性の有機溶媒に溶解して塗布
し、速やかに乾燥することにより作製することができ
る。また、上記の成分を緩衝液に溶解して、担体に含浸
させて、速やかに乾燥させることによっても作製するこ
とができる。
て作製すればよい。すなわち、上記の成分のうち、水溶
性の成分を水等に溶解して担体に含浸させた後、凍結乾
燥等によって担体の水分を十分に除き、次に、担体に水
難溶性の蛍光色原体をメタノール、エタノール、酢酸エ
チル、エーテル等の揮発性の有機溶媒に溶解して塗布
し、速やかに乾燥することにより作製することができ
る。また、上記の成分を緩衝液に溶解して、担体に含浸
させて、速やかに乾燥させることによっても作製するこ
とができる。
【００４０】このようにして作製した試験片は、小片に
カットして用いることもできるし、また、別の担体上に
貼付してカセットのような形状にして用いることもでき
る。さらに、パッド上に加工することも可能である。
カットして用いることもできるし、また、別の担体上に
貼付してカセットのような形状にして用いることもでき
る。さらに、パッド上に加工することも可能である。
【００４１】本発明の試験片を用いて生体成分を定量す
るには、例えば以下のようにして測定することができ
る。すなわち、（１）測定対象物質を含む検体の一定量
を試験片上へ滴下する。（２）検体滴下から一定時間経
過した後、十分に検体が試験片に染み込むことを確認
し、適当な蛍光測定装置を用いて、一定の波長の光を照
射し、蛍光強度を測定する。（３）ブランク値との蛍光
強度の差（Δ蛍光強度）を計算する。（４）標準となる
量の測定対象物質を同様に測定して検量線を作成し、こ
の検量線から検体中の測定対象物質の濃度を算出する
（計算式を予め演算子の形で蛍光測定値に組み込むこと
も可能である）。
るには、例えば以下のようにして測定することができ
る。すなわち、（１）測定対象物質を含む検体の一定量
を試験片上へ滴下する。（２）検体滴下から一定時間経
過した後、十分に検体が試験片に染み込むことを確認
し、適当な蛍光測定装置を用いて、一定の波長の光を照
射し、蛍光強度を測定する。（３）ブランク値との蛍光
強度の差（Δ蛍光強度）を計算する。（４）標準となる
量の測定対象物質を同様に測定して検量線を作成し、こ
の検量線から検体中の測定対象物質の濃度を算出する
（計算式を予め演算子の形で蛍光測定値に組み込むこと
も可能である）。
【００４２】
【実施例】次に、本発明を実施例によって具体的に説明
する。本発明で使用したバチルス・ステアロサーモフィ
ルス由来のジアホラーゼＩ（製品番号１００４３６）及
びＩＩ（製品番号１００４３７）は生化学工業社より購
入した。クロストリジウム・クルイベリ由来のジアホラ
ーゼ（製品番号Ｄ５５４０）及びブタ心臓由来のジアホ
ラーゼ（製品番号Ｄ３７５２）はシグマ社より購入し
た。なお、これらのジアホラーゼのＫ値は１００以上
（ｐＨ８．０のトリス塩酸緩衝液中で、ジクロロフェノ
ールインドフェノールを基質として測定）であった。
する。本発明で使用したバチルス・ステアロサーモフィ
ルス由来のジアホラーゼＩ（製品番号１００４３６）及
びＩＩ（製品番号１００４３７）は生化学工業社より購
入した。クロストリジウム・クルイベリ由来のジアホラ
ーゼ（製品番号Ｄ５５４０）及びブタ心臓由来のジアホ
ラーゼ（製品番号Ｄ３７５２）はシグマ社より購入し
た。なお、これらのジアホラーゼのＫ値は１００以上
（ｐＨ８．０のトリス塩酸緩衝液中で、ジクロロフェノ
ールインドフェノールを基質として測定）であった。
【００４３】ヘキソキナーゼ／グルコース１−リン酸デ
ヒドロゲナーゼ（製品番号７３７２７５）、グリセロキ
ナーゼ（製品番号６９１８３６又は７３７２６７）、グ
リセロール３−リン酸デヒドロゲナーゼ（製品番号１２
７７７９）、グリセロールデヒドロゲナーゼ（製品番号
２５８５５５）、リパーゼ（製品番号４１４５９０）、
ガラクトースデヒドロゲナーゼ（製品番号１０４９８
１）はベーリンガー・マンハイム社より購入した。フェ
ニルアラニンデヒドロゲナーゼ（製品番号Ｐ４７９
８）、アラニンデヒドロゲナーゼ（製品番号Ａ６４２
５）、フコースデヒドロゲナーゼ（製品番号Ｈ０４０
０）はシグマ社より購入した。ロイシンデヒドロゲナー
ゼ（製品番号２０４−３６）はナカライテスク社より購
入した。コレステロールデヒドロゲナーゼは天野製薬社
製のものを使用した。それぞれの酵素活性は、購入時の
添付書又はラベルに記載してある値をそのまま用いた。
ヒドロゲナーゼ（製品番号７３７２７５）、グリセロキ
ナーゼ（製品番号６９１８３６又は７３７２６７）、グ
リセロール３−リン酸デヒドロゲナーゼ（製品番号１２
７７７９）、グリセロールデヒドロゲナーゼ（製品番号
２５８５５５）、リパーゼ（製品番号４１４５９０）、
ガラクトースデヒドロゲナーゼ（製品番号１０４９８
１）はベーリンガー・マンハイム社より購入した。フェ
ニルアラニンデヒドロゲナーゼ（製品番号Ｐ４７９
８）、アラニンデヒドロゲナーゼ（製品番号Ａ６４２
５）、フコースデヒドロゲナーゼ（製品番号Ｈ０４０
０）はシグマ社より購入した。ロイシンデヒドロゲナー
ゼ（製品番号２０４−３６）はナカライテスク社より購
入した。コレステロールデヒドロゲナーゼは天野製薬社
製のものを使用した。それぞれの酵素活性は、購入時の
添付書又はラベルに記載してある値をそのまま用いた。
【００４４】ニトロテトラゾリウムブルー（製品番号２
９８−８３−９）は同人化学研究所社より購入した。レ
ザズリン（製品番号Ｒ２１２７）はシグマ社より購入し
た。アラマーブルー（製品番号５３７−３３４５２）は
和光純薬工業社より購入した。セルロース粉末（製品番
号０７５−４１）はナカライテスク社より購入した。ヒ
ト由来コレステロール（製品番号２５０１２０）は生化
学工業社より購入した。その他の試薬は市販の特級を用
いた。
９８−８３−９）は同人化学研究所社より購入した。レ
ザズリン（製品番号Ｒ２１２７）はシグマ社より購入し
た。アラマーブルー（製品番号５３７−３３４５２）は
和光純薬工業社より購入した。セルロース粉末（製品番
号０７５−４１）はナカライテスク社より購入した。ヒ
ト由来コレステロール（製品番号２５０１２０）は生化
学工業社より購入した。その他の試薬は市販の特級を用
いた。
【００４５】参考例１、比較例１ ５０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）に、最終濃
度で１０Ｕ／ｍｌのグリセロールデヒドロゲナーゼと、
５Ｕ／ｍｌのジアホラーゼ、１０μｇ／ｍｌのレザズリ
ンを溶解した。この溶液１０マイクロリットルをワット
マン社製の濾紙（Ｎｏ．２）に含浸させた後、凍結乾燥
した。この凍結乾燥した濾紙を３×３ｍｍの小片に切り
出して試験片を得た。この試験片を４×４５ｍｍのポリ
スチレンフィルム製のスティックに両端で固定した。得
られた試験片に所定の濃度のＮＡＤＨを含む水溶液２μ
ｌを滴下し、２分後に蛍光測定装置（島津ＲＦ−１５０
０）に試験片を装着し、入射光の９０°の方向での蛍光
強度（５８０ｎｍ）を測定した（参考例１）。
度で１０Ｕ／ｍｌのグリセロールデヒドロゲナーゼと、
５Ｕ／ｍｌのジアホラーゼ、１０μｇ／ｍｌのレザズリ
ンを溶解した。この溶液１０マイクロリットルをワット
マン社製の濾紙（Ｎｏ．２）に含浸させた後、凍結乾燥
した。この凍結乾燥した濾紙を３×３ｍｍの小片に切り
出して試験片を得た。この試験片を４×４５ｍｍのポリ
スチレンフィルム製のスティックに両端で固定した。得
られた試験片に所定の濃度のＮＡＤＨを含む水溶液２μ
ｌを滴下し、２分後に蛍光測定装置（島津ＲＦ−１５０
０）に試験片を装着し、入射光の９０°の方向での蛍光
強度（５８０ｎｍ）を測定した（参考例１）。
【００４６】また、比較のため、１０μｇ／ｍｌのレザ
ズリンを１０ｍｇ／ｍｌのニトロテトラゾリウムブルー
に代える以外は参考例１と同様にして試験片を得た。得
られた試験片に所定の濃度のＮＡＤＨを含む水溶液２μ
ｌを滴下し、２分後に蛍光測定装置に試験片を装着し、
入射光の９０°の方向での反射光強度（４７５ｎｍ）を
測定した（比較例１）。その結果を表１に示す。なお、
表中の値は、蛍光強度又は反射光強度のブランクとの差
の６回の平均±標準偏差を示している。
ズリンを１０ｍｇ／ｍｌのニトロテトラゾリウムブルー
に代える以外は参考例１と同様にして試験片を得た。得
られた試験片に所定の濃度のＮＡＤＨを含む水溶液２μ
ｌを滴下し、２分後に蛍光測定装置に試験片を装着し、
入射光の９０°の方向での反射光強度（４７５ｎｍ）を
測定した（比較例１）。その結果を表１に示す。なお、
表中の値は、蛍光強度又は反射光強度のブランクとの差
の６回の平均±標準偏差を示している。
【００４７】
【表１】
【００４８】表１から明らかなように、レザズリンを発
色剤とする試験片を用いると従来から用いられているニ
トロテトラゾリウムブルーを発色剤とする試験片に比べ
て約１００倍の感度が達成された。
色剤とする試験片を用いると従来から用いられているニ
トロテトラゾリウムブルーを発色剤とする試験片に比べ
て約１００倍の感度が達成された。
【００４９】実施例１ 以下のようにして、グリセロール定量用試験片を作製し
た。すなわち、５０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．
７）に、最終濃度で２ｍＭのＮＡＤ、１０ｍＭの塩化マ
グネシウム、１５ｍＭの硫酸アンモニウム、１５Ｕ／ｍ
ｌのグリセロールデヒドロゲナーゼ、５Ｕ／ｍｌのジア
ホラーゼ、１０μｇ／ｍｌのレザズリン、１ｍｇ／ｍｌ
のポリエチレングリコール、１０ｍｇ／ｍｌのウシ血清
アルブミン、０．００１ｍｌ／ｍｌのトリトンＸ１００
をそれぞれ含む溶液を調製した。この溶液をペリスタリ
ックポンプを用いて５ｍｍ幅のポリウレタン製フィルム
上に約１ｃｍ間隔で１滴（約２０μｌ）ずつ滴下した。
このフィルムを、約５０℃の熱風乾燥ゾーンを通過させ
て（通過時間約２分）乾燥した後、滴下した箇所を中心
として５×５ｍｍの大きさに切断して試験片を得た。こ
の試験片を３×３ｍｍの大きさの窓をあけた型枠基板に
両端で接着した。
た。すなわち、５０ｍＭのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．
７）に、最終濃度で２ｍＭのＮＡＤ、１０ｍＭの塩化マ
グネシウム、１５ｍＭの硫酸アンモニウム、１５Ｕ／ｍ
ｌのグリセロールデヒドロゲナーゼ、５Ｕ／ｍｌのジア
ホラーゼ、１０μｇ／ｍｌのレザズリン、１ｍｇ／ｍｌ
のポリエチレングリコール、１０ｍｇ／ｍｌのウシ血清
アルブミン、０．００１ｍｌ／ｍｌのトリトンＸ１００
をそれぞれ含む溶液を調製した。この溶液をペリスタリ
ックポンプを用いて５ｍｍ幅のポリウレタン製フィルム
上に約１ｃｍ間隔で１滴（約２０μｌ）ずつ滴下した。
このフィルムを、約５０℃の熱風乾燥ゾーンを通過させ
て（通過時間約２分）乾燥した後、滴下した箇所を中心
として５×５ｍｍの大きさに切断して試験片を得た。こ
の試験片を３×３ｍｍの大きさの窓をあけた型枠基板に
両端で接着した。
【００５０】得られた試験片に所定の濃度のグリセロー
ルを含む水溶液２μｌを滴下し、５分後に蛍光測定装置
に試験片を装着して５４０ｎｍの光を照射し、入射光の
９０°の方向で、５８０ｎｍの蛍光強度を測定した。得
られた蛍光強度から、表１の値を用いて検量線を作成
し、グリセロールの量を算出した。また、試験片を４０
℃、５５％の相対湿度で７日間保存した後、同様にして
グリセロールの定量を行った。その結果を表２に示す。
ルを含む水溶液２μｌを滴下し、５分後に蛍光測定装置
に試験片を装着して５４０ｎｍの光を照射し、入射光の
９０°の方向で、５８０ｎｍの蛍光強度を測定した。得
られた蛍光強度から、表１の値を用いて検量線を作成
し、グリセロールの量を算出した。また、試験片を４０
℃、５５％の相対湿度で７日間保存した後、同様にして
グリセロールの定量を行った。その結果を表２に示す。
【００５１】
【表２】
【００５２】表２からわかるように、本発明の試験片を
用いるとグリセロールの回収率は８５〜１０６％であ
り、グリセロールを高精度に定量できることが確認され
た。また、本発明の試験片は、保存安定性に優れている
ことがわかる。
用いるとグリセロールの回収率は８５〜１０６％であ
り、グリセロールを高精度に定量できることが確認され
た。また、本発明の試験片は、保存安定性に優れている
ことがわかる。
【００５３】実施例２ 以下のようにして、フェニルアラニン定量用試験片を作
製した。すなわち、２００ｍＭのグリシン水酸化カリウ
ム緩衝液（ｐＨ９．５）に、最終濃度で２００ｍＭの塩
化カリウム、２．５ｍＭのＮＡＤ、２０Ｕ／ｍｌのフェ
ニルアラニンデヒドロゲナーゼ、５Ｕ／ｍｌのジアホラ
ーゼ、４０μｌ／ｍｌのアラマーブルー、０．０１ｍｌ
／ｍｌのトリトンＸ１００、５ｍｇ／ｍｌのゼラチンを
含む溶液を調製した。この溶液をピペットマンを用い
て、ポリエチレンテレフタレート膜上に滴下し、風乾
後、ビニルピロリドン酢酸ビニルコポリマー（重量比で
２０：８０）の１容量％メタノールを塗布し、速やかに
セルロース粉末を５０容量％メタノールに懸濁し、小量
塗布した。これを４０〜５０℃で乾燥してポリエチレン
テレフタレート支持膜の試験片を得た。この試験片にフ
ェニルアラニンの水溶液を５μｌ滴下し、１０分後に蛍
光強度を測定した（励起波長５３０ｎｍ、蛍光波長５７
０ｎｍ）。その結果を表３に示す。なお、表中の値は、
ブランクとの蛍光強度の差（Δ蛍光強度）の５回の平均
±標準偏差を示している。
製した。すなわち、２００ｍＭのグリシン水酸化カリウ
ム緩衝液（ｐＨ９．５）に、最終濃度で２００ｍＭの塩
化カリウム、２．５ｍＭのＮＡＤ、２０Ｕ／ｍｌのフェ
ニルアラニンデヒドロゲナーゼ、５Ｕ／ｍｌのジアホラ
ーゼ、４０μｌ／ｍｌのアラマーブルー、０．０１ｍｌ
／ｍｌのトリトンＸ１００、５ｍｇ／ｍｌのゼラチンを
含む溶液を調製した。この溶液をピペットマンを用い
て、ポリエチレンテレフタレート膜上に滴下し、風乾
後、ビニルピロリドン酢酸ビニルコポリマー（重量比で
２０：８０）の１容量％メタノールを塗布し、速やかに
セルロース粉末を５０容量％メタノールに懸濁し、小量
塗布した。これを４０〜５０℃で乾燥してポリエチレン
テレフタレート支持膜の試験片を得た。この試験片にフ
ェニルアラニンの水溶液を５μｌ滴下し、１０分後に蛍
光強度を測定した（励起波長５３０ｎｍ、蛍光波長５７
０ｎｍ）。その結果を表３に示す。なお、表中の値は、
ブランクとの蛍光強度の差（Δ蛍光強度）の５回の平均
±標準偏差を示している。
【００５４】
【表３】
【００５５】表３に示した値より、フェニルアラニン濃
度（Ｘ）に対して、Δ蛍光強度（Ｙ）はＹ＝−１．２＋
２１．２Ｘ（相関係数０．９９９）の良好な直線関係が
得られた。この結果より、本発明の試験片を用いること
により、フェニルアラニンを高感度で、かつ高精度に定
量できることがわかる。
度（Ｘ）に対して、Δ蛍光強度（Ｙ）はＹ＝−１．２＋
２１．２Ｘ（相関係数０．９９９）の良好な直線関係が
得られた。この結果より、本発明の試験片を用いること
により、フェニルアラニンを高感度で、かつ高精度に定
量できることがわかる。
【００５６】実施例３ 以下のようにして、コレステロール定量用試験片を作製
した。すなわち、２００ｍＭのグリシン水酸化カリウム
緩衝液（ｐＨ８．５）に、最終濃度で５ｍＭのＮＡＤ、
２０Ｕ／ｍｌのコレステロールデヒドロゲナーゼ、５Ｕ
／ｍｌのジアホラーゼ、４０μｌ／ｍｌのアラマーブル
ー、０．０１ｍｌ／ｍｌのトリトンＸ１００を含む溶液
を調製した。この溶液をワットマン社製の濾紙（Ｎｏ．
５Ｃ）の３×３ｍｍの小片にピペットマンを用いて２μ
ｌ滴下し、凍結乾燥して、試験片を得た。この試験片を
台紙に両面テープで張り付けた。健丈人男子（３５才）
のボランティアの血漿にヒト由来のコレステロールを適
当量添加し、この血漿２μｌをこの試験片に滴下し、１
０分後に蛍光強度を測定した（励起波長５３０ｎｍ、蛍
光波長５７０ｎｍ）。また、別に作成した検量線を用い
て、これらの血漿中のコレステロール濃度を算出した。
その結果を表４に示す。なお、表中のコレステロール濃
度は５回の平均±標準偏差を示している。
した。すなわち、２００ｍＭのグリシン水酸化カリウム
緩衝液（ｐＨ８．５）に、最終濃度で５ｍＭのＮＡＤ、
２０Ｕ／ｍｌのコレステロールデヒドロゲナーゼ、５Ｕ
／ｍｌのジアホラーゼ、４０μｌ／ｍｌのアラマーブル
ー、０．０１ｍｌ／ｍｌのトリトンＸ１００を含む溶液
を調製した。この溶液をワットマン社製の濾紙（Ｎｏ．
５Ｃ）の３×３ｍｍの小片にピペットマンを用いて２μ
ｌ滴下し、凍結乾燥して、試験片を得た。この試験片を
台紙に両面テープで張り付けた。健丈人男子（３５才）
のボランティアの血漿にヒト由来のコレステロールを適
当量添加し、この血漿２μｌをこの試験片に滴下し、１
０分後に蛍光強度を測定した（励起波長５３０ｎｍ、蛍
光波長５７０ｎｍ）。また、別に作成した検量線を用い
て、これらの血漿中のコレステロール濃度を算出した。
その結果を表４に示す。なお、表中のコレステロール濃
度は５回の平均±標準偏差を示している。
【００５７】
【表４】
【００５８】表４から、本発明の試験片を用いることに
よりコレステロールを高感度で、高精度に定量できるこ
とがわかる。
よりコレステロールを高感度で、高精度に定量できるこ
とがわかる。
【００５９】実施例４ 以下のようにして、ガラクトース定量用試験片を作製し
た。すなわち、１００ｍＭのリン酸水酸化カリウム緩衝
液（ｐＨ７．５）に、最終濃度で２．５ｍＭのＮＡＤ、
１０Ｕ／ｍｌのガラクトースデヒドロゲナーゼ、１０μ
ｇ／ｍｌのレザズリンを含む溶液を調製した。この溶液
をワットマン社製の濾紙（Ｎｏ．２）の３×３ｍｍの小
片にピペットマンを用いて２μｌ滴下し、凍結乾燥し
て、試験片を得た。この試験片を台紙に両面テープで張
り付けた。この試験片にガラクトースの水溶液を２μｌ
滴下し、蛍光強度を測定した（励起波長５４０ｎｍ、蛍
光波長５８０ｎｍ）。その結果を表５に示す。なお、表
中の値は、ブランクとの蛍光強度の差（Δ蛍光強度）の
５回の平均±標準偏差を示している。
た。すなわち、１００ｍＭのリン酸水酸化カリウム緩衝
液（ｐＨ７．５）に、最終濃度で２．５ｍＭのＮＡＤ、
１０Ｕ／ｍｌのガラクトースデヒドロゲナーゼ、１０μ
ｇ／ｍｌのレザズリンを含む溶液を調製した。この溶液
をワットマン社製の濾紙（Ｎｏ．２）の３×３ｍｍの小
片にピペットマンを用いて２μｌ滴下し、凍結乾燥し
て、試験片を得た。この試験片を台紙に両面テープで張
り付けた。この試験片にガラクトースの水溶液を２μｌ
滴下し、蛍光強度を測定した（励起波長５４０ｎｍ、蛍
光波長５８０ｎｍ）。その結果を表５に示す。なお、表
中の値は、ブランクとの蛍光強度の差（Δ蛍光強度）の
５回の平均±標準偏差を示している。
【００６０】
【表５】
【００６１】表５に示した値より、ガラクトース濃度
（Ｘ）に対して、Δ蛍光強度（Ｙ）はＹ＝−１．１＋１
３．１Ｘ（相関係数１．０００）の良好な直線関係が得
られた。この結果より、本発明の試験片を用いることに
より、ガラクトースを高感度で、高精度に定量できるこ
とがわかる。
（Ｘ）に対して、Δ蛍光強度（Ｙ）はＹ＝−１．１＋１
３．１Ｘ（相関係数１．０００）の良好な直線関係が得
られた。この結果より、本発明の試験片を用いることに
より、ガラクトースを高感度で、高精度に定量できるこ
とがわかる。
【００６２】実施例５ 以下のようにして、フコース定量用試験片を測定した。
すなわち、１００ｍＭのリン酸水酸化カリウム緩衝液
（ｐＨ７．５）に、最終濃度で２．５ｍＭのＮＡＤ、１
０Ｕ／ｍｌのフコースデヒドロゲナーゼ、１０μｇ／ｍ
ｌのレザズリンを含む溶液を調製した。この溶液をワッ
トマン社製の濾紙（Ｎｏ．２）の３×３ｍｍの小片にピ
ペットマンを用いて２μｌ滴下し、凍結乾燥して、試験
片を得た。この試験片を台紙に両面テープで張り付け
た。この試験片にフコースの水溶液を２μｌ滴下し、１
０分後に蛍光強度を測定した（励起波長５４０ｎｍ、蛍
光波長５８０ｎｍ）。その結果を表６に示す。なお、表
中の値は、ブランクとの蛍光強度の差（Δ蛍光強度）の
５回の平均±標準偏差を示している。
すなわち、１００ｍＭのリン酸水酸化カリウム緩衝液
（ｐＨ７．５）に、最終濃度で２．５ｍＭのＮＡＤ、１
０Ｕ／ｍｌのフコースデヒドロゲナーゼ、１０μｇ／ｍ
ｌのレザズリンを含む溶液を調製した。この溶液をワッ
トマン社製の濾紙（Ｎｏ．２）の３×３ｍｍの小片にピ
ペットマンを用いて２μｌ滴下し、凍結乾燥して、試験
片を得た。この試験片を台紙に両面テープで張り付け
た。この試験片にフコースの水溶液を２μｌ滴下し、１
０分後に蛍光強度を測定した（励起波長５４０ｎｍ、蛍
光波長５８０ｎｍ）。その結果を表６に示す。なお、表
中の値は、ブランクとの蛍光強度の差（Δ蛍光強度）の
５回の平均±標準偏差を示している。
【００６３】
【表６】
【００６４】表６に示した値より、フコース濃度（Ｘ）
に対して、Δ蛍光強度（Ｙ）はＹ＝−１９．２＋１５．
３Ｘ（相関係数０．９９７）の良好な直線関係が得られ
た。この結果より、本発明の試験片を用いることによ
り、フコースを高感度で、高精度に定量できることがわ
かる。
に対して、Δ蛍光強度（Ｙ）はＹ＝−１９．２＋１５．
３Ｘ（相関係数０．９９７）の良好な直線関係が得られ
た。この結果より、本発明の試験片を用いることによ
り、フコースを高感度で、高精度に定量できることがわ
かる。
【００６５】実施例６ 以下のようにして、アラニン定量用試験片を作製した。
すなわち、１００ｍＭのリン酸水酸化カリウム緩衝液
（ｐＨ７．５）に、最終濃度で２．５ｍＭのＮＡＤ、１
０Ｕ／ｍｌのアラニンデヒドロゲナーゼ、１０μｇ／ｍ
ｌのレザズリンを含む溶液を調製した。この溶液をワッ
トマン社製の濾紙（Ｎｏ．２）の３×３ｍｍの小片にピ
ペットマンを用いて２μｌ滴下し、凍結乾燥して、試験
片を得た。この試験片を台紙に両面テープで張り付け
た。この試験片にアラニンの水溶液を２μｌ滴下し、蛍
光強度を測定した（励起波長５４０ｎｍ、蛍光波長５８
０ｎｍ）。その結果を表７に示す。なお、表中の値は、
ブランクとの蛍光強度の差（Δ蛍光強度）の５回の平均
±標準偏差を示している。
すなわち、１００ｍＭのリン酸水酸化カリウム緩衝液
（ｐＨ７．５）に、最終濃度で２．５ｍＭのＮＡＤ、１
０Ｕ／ｍｌのアラニンデヒドロゲナーゼ、１０μｇ／ｍ
ｌのレザズリンを含む溶液を調製した。この溶液をワッ
トマン社製の濾紙（Ｎｏ．２）の３×３ｍｍの小片にピ
ペットマンを用いて２μｌ滴下し、凍結乾燥して、試験
片を得た。この試験片を台紙に両面テープで張り付け
た。この試験片にアラニンの水溶液を２μｌ滴下し、蛍
光強度を測定した（励起波長５４０ｎｍ、蛍光波長５８
０ｎｍ）。その結果を表７に示す。なお、表中の値は、
ブランクとの蛍光強度の差（Δ蛍光強度）の５回の平均
±標準偏差を示している。
【００６６】
【表７】
【００６７】表７に示した値より、アラニン濃度（Ｘ）
に対して、Δ蛍光強度（Ｙ）はＹ＝１４．１＋１４．４
Ｘ（相関係数０．９９８）の良好な直線関係が得られ
た。この結果より、本発明の試験片を用いることによ
り、アラニンを高感度で、高精度に定量できることがわ
かる。
に対して、Δ蛍光強度（Ｙ）はＹ＝１４．１＋１４．４
Ｘ（相関係数０．９９８）の良好な直線関係が得られ
た。この結果より、本発明の試験片を用いることによ
り、アラニンを高感度で、高精度に定量できることがわ
かる。
【００６８】実施例７ 以下のようにして、ロイシン定量用試験片を作製した。
すなわち、５０ｍＭのリン酸水酸化カリウム緩衝液（ｐ
Ｈ７．５）に、最終濃度で２．５ｍＭのＮＡＤ、１０Ｕ
／ｍｌのロイシンデヒドロゲナーゼ、１０μｇ／ｍｌの
レザズリンを含む溶液を調製した。この溶液をワットマ
ン社製の濾紙（Ｎｏ．２）の３×３ｍｍの小片にピペッ
トマンを用いて２μｌ滴下し、凍結乾燥して試験片を得
た。この試験片を台紙に両面テープで張り付けた。この
試験片にロイシンを溶解した水溶液を２μｌ滴下し、１
０分後に蛍光強度を測定した（励起波長５４０ｎｍ、蛍
光波長５８０ｎｍ）。その結果を表８に示す。なお、表
中の値は、ブランクとの蛍光強度の差（Δ蛍光強度）の
５回の平均±標準偏差を示している。
すなわち、５０ｍＭのリン酸水酸化カリウム緩衝液（ｐ
Ｈ７．５）に、最終濃度で２．５ｍＭのＮＡＤ、１０Ｕ
／ｍｌのロイシンデヒドロゲナーゼ、１０μｇ／ｍｌの
レザズリンを含む溶液を調製した。この溶液をワットマ
ン社製の濾紙（Ｎｏ．２）の３×３ｍｍの小片にピペッ
トマンを用いて２μｌ滴下し、凍結乾燥して試験片を得
た。この試験片を台紙に両面テープで張り付けた。この
試験片にロイシンを溶解した水溶液を２μｌ滴下し、１
０分後に蛍光強度を測定した（励起波長５４０ｎｍ、蛍
光波長５８０ｎｍ）。その結果を表８に示す。なお、表
中の値は、ブランクとの蛍光強度の差（Δ蛍光強度）の
５回の平均±標準偏差を示している。
【００６９】
【表８】
【００７０】表８に示した値より、ロイシン濃度（Ｘ）
に対して、Δ蛍光強度（Ｙ）はＹ＝３０．２＋１７．８
Ｘ（相関係数０．９９９）の良好な直線関係が得られ
た。この結果より、本発明の試験片を用いることによ
り、ロイシンを高感度で、高精度に定量できることがわ
かる。
に対して、Δ蛍光強度（Ｙ）はＹ＝３０．２＋１７．８
Ｘ（相関係数０．９９９）の良好な直線関係が得られ
た。この結果より、本発明の試験片を用いることによ
り、ロイシンを高感度で、高精度に定量できることがわ
かる。
【００７１】実施例８ 以下のようにして、グルコース定量用試験片を作製し
た。すなわち、１００ｍＭのリン酸水酸化カリウム緩衝
液（ｐＨ７．５）に、最終濃度で２．５ｍＭのＮＡＤ、
２．５ｍＭのＡＴＰ、１０Ｕ／ｍｌのヘキソキナーゼ／
グルコース１−リン酸デヒドロゲナーゼ、１０μｇ／ｍ
ｌのレザズリンを含む溶液を調製した。この溶液をワッ
トマン社製の濾紙（Ｎｏ．２）の３×３ｍｍの小片にピ
ペットマンを用いて２μｌを滴下し、凍結乾燥して、試
験片を得た。この試験片を台紙に両面テープで張り付け
た。この試験片にグルコースの水溶液を２μｌ滴下し、
１０分後に蛍光強度を測定した（励起波長５４０ｎｍ、
蛍光波長５８０ｎｍ）。その結果を表９に示す。なお、
表中の値は、ブランクとの蛍光強度の差（Δ蛍光強度）
の５回の平均±標準偏差を示している。
た。すなわち、１００ｍＭのリン酸水酸化カリウム緩衝
液（ｐＨ７．５）に、最終濃度で２．５ｍＭのＮＡＤ、
２．５ｍＭのＡＴＰ、１０Ｕ／ｍｌのヘキソキナーゼ／
グルコース１−リン酸デヒドロゲナーゼ、１０μｇ／ｍ
ｌのレザズリンを含む溶液を調製した。この溶液をワッ
トマン社製の濾紙（Ｎｏ．２）の３×３ｍｍの小片にピ
ペットマンを用いて２μｌを滴下し、凍結乾燥して、試
験片を得た。この試験片を台紙に両面テープで張り付け
た。この試験片にグルコースの水溶液を２μｌ滴下し、
１０分後に蛍光強度を測定した（励起波長５４０ｎｍ、
蛍光波長５８０ｎｍ）。その結果を表９に示す。なお、
表中の値は、ブランクとの蛍光強度の差（Δ蛍光強度）
の５回の平均±標準偏差を示している。
【００７２】
【表９】
【００７３】表９に示した値より、グルコース濃度
（Ｘ）に対して、Δ蛍光強度（Ｙ）はＹ＝３０．２＋１
７．８Ｘ（相関係数０．９９９）の良好な直線関係が得
られた。この結果より、本発明の試験片を用いることに
より、グルコースを高感度で、高精度に定量できること
がわかる。
（Ｘ）に対して、Δ蛍光強度（Ｙ）はＹ＝３０．２＋１
７．８Ｘ（相関係数０．９９９）の良好な直線関係が得
られた。この結果より、本発明の試験片を用いることに
より、グルコースを高感度で、高精度に定量できること
がわかる。
【００７４】
【発明の効果】本発明の試験片は、高感度で、かつ高精
度で測定することができる。また、本発明の試験片は保
存安定性に優れている。
度で測定することができる。また、本発明の試験片は保
存安定性に優れている。
Claims (1)
- 【請求項１】 デヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼ、ＮＡ
Ｄ又はＮＡＤＰ及び蛍光色原体と担体とからなることを
特徴とする試験片。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8193071A JPH1033196A (ja) | 1996-07-23 | 1996-07-23 | 試験片 |
| US08/897,626 US5912139A (en) | 1996-07-23 | 1997-07-21 | Test strip |
| EP97112642A EP0821069A1 (en) | 1996-07-23 | 1997-07-23 | Test strip using fluorescent chromogen |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8193071A JPH1033196A (ja) | 1996-07-23 | 1996-07-23 | 試験片 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1033196A true JPH1033196A (ja) | 1998-02-10 |
Family
ID=16301729
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8193071A Pending JPH1033196A (ja) | 1996-07-23 | 1996-07-23 | 試験片 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5912139A (ja) |
| EP (1) | EP0821069A1 (ja) |
| JP (1) | JPH1033196A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008029920A1 (fr) * | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Toyama Prefecture | Procédé d'analyse de la l-méthionine dans un échantillon biologique à l'aide d'une phénylalanine déshydrogénase à fonction modifiée |
| JPWO2008117816A1 (ja) * | 2007-03-28 | 2010-07-15 | 悦朗 伊藤 | タンパク質および核酸の超高感度測定法 |
| US7879567B2 (en) | 2004-10-05 | 2011-02-01 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Method for stabilizing coenzyme and composition therefor |
| JP2017513487A (ja) * | 2014-04-17 | 2017-06-01 | ユニバーシティー オブ メリーランド，カレッジ パーク | アミノ酸代謝異常の検出のためのデバイス、及びデバイスを使用する方法 |
Families Citing this family (37)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1138762A1 (en) * | 1998-12-10 | 2001-10-04 | Takara Shuzo Co, Ltd. | Method for immobilizing oligonucleotide on a carrier |
| JP4472823B2 (ja) * | 2000-02-04 | 2010-06-02 | パナソニック株式会社 | クロマトグラフィー試験片、及びその製造方法 |
| US6540675B2 (en) * | 2000-06-27 | 2003-04-01 | Rosedale Medical, Inc. | Analyte monitor |
| US6617123B1 (en) * | 2000-06-29 | 2003-09-09 | Jack V. Smith | Method for detection of 4-hydroxybutyric acid and its precursor(s) in fluids |
| EP1370680B1 (en) * | 2000-09-13 | 2006-04-12 | MERCK PATENT GmbH | Method for the detection and measurement of biomass |
| US6844149B2 (en) | 2001-06-29 | 2005-01-18 | International Business Machines Corporation | Method, system, and apparatus for measurement and recording of blood chemistry and other physiological measurements |
| US6508956B1 (en) * | 2001-07-25 | 2003-01-21 | Lexmark International, Inc | Paper coating test method and composition |
| AU2002366025B2 (en) * | 2001-11-21 | 2007-08-23 | Unitika Ltd | ATP measurement method allowing visual judgement and reagent therefore |
| US7004928B2 (en) * | 2002-02-08 | 2006-02-28 | Rosedale Medical, Inc. | Autonomous, ambulatory analyte monitor or drug delivery device |
| EP1520037A4 (en) * | 2002-02-27 | 2006-06-07 | Miragene Inc | CHEMICAL COMPOSITION WITH IMPROVED SUBSTRATE FOR IMMOBILIZATION OF PROTEIN ON RIGID SUPPORT |
| US6703216B2 (en) | 2002-03-14 | 2004-03-09 | The Regents Of The University Of California | Methods, compositions and apparatuses for detection of gamma-hydroxybutyric acid (GHB) |
| US6982152B2 (en) * | 2002-04-17 | 2006-01-03 | Promega Corporation | Cytotoxicity assay |
| DE10303265A1 (de) * | 2003-01-28 | 2004-07-29 | Roche Diagnostics Gmbh | Fluorimetrische Bestimmung von Analyten durch ein intramolekulares Quencher-Fluorophor-Konjugat |
| DE10304448A1 (de) | 2003-02-04 | 2004-08-12 | Roche Diagnostics Gmbh | Fluorimetrische Bestimmung von Analyten durch Amin-N-Oxide als Redoxindikatoren |
| US7052652B2 (en) | 2003-03-24 | 2006-05-30 | Rosedale Medical, Inc. | Analyte concentration detection devices and methods |
| JP2006524509A (ja) * | 2003-04-15 | 2006-11-02 | メットジェン インコーポレイテッド | 血中フェニルアラニン濃度をモニタリングするための医療装置 |
| JP2004343275A (ja) * | 2003-05-14 | 2004-12-02 | Murata Mach Ltd | 画像処理システム及びスキャナ装置 |
| JP4643212B2 (ja) * | 2003-11-28 | 2011-03-02 | シスメックス株式会社 | コレステロール脱水素酵素の安定化方法、コレステロール脱水素酵素含有組成物及びコレステロール測定試薬 |
| WO2006094104A2 (en) * | 2005-03-01 | 2006-09-08 | Molecular Probes, Inc. | Chemical probe compounds that become fluorescent upon reduction, and methods for their use |
| US20060281187A1 (en) | 2005-06-13 | 2006-12-14 | Rosedale Medical, Inc. | Analyte detection devices and methods with hematocrit/volume correction and feedback control |
| JP4786451B2 (ja) * | 2005-07-28 | 2011-10-05 | エフ ホフマン−ラ ロッシュ アクチェン ゲゼルシャフト | Ｎａｄ／ｎａｄｈの安定化 |
| DE102006035020B4 (de) | 2005-07-28 | 2018-08-23 | Roche Diabetes Care Gmbh | Stabilisierung von NAD/NADH |
| EP3461406A1 (en) | 2005-09-30 | 2019-04-03 | Intuity Medical, Inc. | Multi-site body fluid sampling and analysis cartridge |
| US8801631B2 (en) | 2005-09-30 | 2014-08-12 | Intuity Medical, Inc. | Devices and methods for facilitating fluid transport |
| US20070077168A1 (en) * | 2005-10-05 | 2007-04-05 | Szalczyk Bryarly A | Alcohol-in-breast milk analysis test kit |
| US7541610B2 (en) * | 2006-06-12 | 2009-06-02 | 3M Innovative Properties Company | LED device with re-emitting semiconductor construction and converging optical element |
| JP5816080B2 (ja) | 2008-05-30 | 2015-11-17 | インテュイティ メディカル インコーポレイテッド | 体液採取装置及び採取部位インターフェイス |
| JP5642066B2 (ja) | 2008-06-06 | 2014-12-17 | インテュイティ メディカル インコーポレイテッド | 体液の試料内に含まれている検体の存在または濃度を決定する検定を行う方法および装置 |
| EP2299904B1 (en) | 2008-06-06 | 2019-09-11 | Intuity Medical, Inc. | Medical measurement method |
| US8500990B2 (en) * | 2009-04-22 | 2013-08-06 | Nova Biomedical Corporation | Electrochemical biosensors based on NAD(P)-dependent dehydrogenase enzymes |
| EP2506768B1 (en) | 2009-11-30 | 2016-07-06 | Intuity Medical, Inc. | Calibration material delivery devices and methods |
| US10330667B2 (en) | 2010-06-25 | 2019-06-25 | Intuity Medical, Inc. | Analyte monitoring methods and systems |
| CA2843945C (en) | 2011-08-03 | 2022-06-21 | Intuity Medical, Inc. | Devices and methods for body fluid sampling and analysis |
| CA2888743C (en) | 2012-10-17 | 2024-01-02 | University Of Maryland, Office Of Technology Commercialization | Device and methods of using device for detection of aminoacidopathies |
| JP2016522070A (ja) | 2013-06-21 | 2016-07-28 | インテュイティ メディカル インコーポレイテッド | 可聴フィードバックを用いた分析物モニタリングシステム |
| US10494665B2 (en) * | 2014-08-20 | 2019-12-03 | Huawei Yang | Test kit and method for testing target nucleic acid in sample |
| EP3865874B1 (en) * | 2020-02-13 | 2022-10-05 | Zhejiang Orient Gene Biotech Co., LTD | Distinguishing smoking e-cigarettes from smoking cigarettes |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3992158A (en) * | 1973-08-16 | 1976-11-16 | Eastman Kodak Company | Integral analytical element |
| JPS53101490A (en) * | 1977-02-17 | 1978-09-04 | Toshiaki Oosuge | Reagent for fluoroscent determination of bile acid |
| JPS5961777A (ja) * | 1982-09-30 | 1984-04-09 | Shimadzu Corp | 胆汁酸の分析システム |
| EP0154409A3 (en) * | 1984-02-06 | 1988-03-02 | Unitika Ltd. | Testing material for detecting alcohols |
| JPS6131097A (ja) * | 1984-07-23 | 1986-02-13 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規な高感度酵素的測定法 |
| JPS61260896A (ja) * | 1985-05-15 | 1986-11-19 | Sekisui Chem Co Ltd | 胆汁酸の分析方法 |
| US4786589A (en) * | 1986-08-18 | 1988-11-22 | Huntington Medical Research Institute | Immunoassay utilizing formazan-prelabeled reactants |
| US4774192A (en) * | 1987-01-28 | 1988-09-27 | Technimed Corporation | A dry reagent delivery system with membrane having porosity gradient |
| JP2739473B2 (ja) * | 1987-12-26 | 1998-04-15 | 天野製薬株式会社 | Ｄ−乳酸の高感度測定量法 |
| US5170799A (en) * | 1988-02-20 | 1992-12-15 | Showa Yakuhin Kako Co., Ltd. | Test strip for measuring tear production |
| DE4015157A1 (de) * | 1990-05-11 | 1991-11-14 | Miles Inc | Asymetrische sandwich-membranen fuer diagnose-teststreifen |
| JP3203268B2 (ja) * | 1991-07-12 | 2001-08-27 | デイド・ベーリング・マルブルク・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | カンジダ感染の検出方法 |
| EP0556725A3 (en) * | 1992-02-20 | 1993-10-06 | Miles Inc. | Diagnosis of candida vaginitis by detecting d-arabinitol in vaginal fluid |
| US5290683A (en) * | 1992-11-19 | 1994-03-01 | Yedy Israel | Rapid analysis of ethanol in body fluids |
| WO1995008639A1 (en) * | 1993-09-24 | 1995-03-30 | North American Science Associates, Inc. | Biologically relevant methods for the rapid determination of sterility |
-
1996
- 1996-07-23 JP JP8193071A patent/JPH1033196A/ja active Pending
-
1997
- 1997-07-21 US US08/897,626 patent/US5912139A/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-23 EP EP97112642A patent/EP0821069A1/en not_active Withdrawn
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7879567B2 (en) | 2004-10-05 | 2011-02-01 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Method for stabilizing coenzyme and composition therefor |
| US8026075B2 (en) | 2004-10-05 | 2011-09-27 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Method for stabilizing coenzyme and composition thereof |
| WO2008029920A1 (fr) * | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Toyama Prefecture | Procédé d'analyse de la l-méthionine dans un échantillon biologique à l'aide d'une phénylalanine déshydrogénase à fonction modifiée |
| JPWO2008117816A1 (ja) * | 2007-03-28 | 2010-07-15 | 悦朗 伊藤 | タンパク質および核酸の超高感度測定法 |
| JP5500985B2 (ja) * | 2007-03-28 | 2014-05-21 | 悦朗 伊藤 | タンパク質および核酸の超高感度測定法 |
| JP2017513487A (ja) * | 2014-04-17 | 2017-06-01 | ユニバーシティー オブ メリーランド，カレッジ パーク | アミノ酸代謝異常の検出のためのデバイス、及びデバイスを使用する方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5912139A (en) | 1999-06-15 |
| EP0821069A1 (en) | 1998-01-28 |
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