JPH10324699A - 抗ヒトＦａｓヒト化抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 自己免疫疾患および慢性関節リウマチの新し
い治療薬として有用なアポトーシス誘導活性を有する抗
ヒトＦａｓヒト化抗体並びに、該抗体のＨ鎖およびＬ鎖
の各可変領域をコードするＤＮＡを提供する。 【解決手段】 抗ヒトＦａｓヒト化抗体のＨ鎖およびＬ
鎖の各可変領域をコードするＤＮＡのヌクレオチド配列
を決定した。また、該抗体を遺伝子操作の手法を用いて
発現させ、該抗体がアポトーシス誘導活性を有すること
を見いだした。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はアポトーシスに関与
する細胞膜分子であるＦａｓ抗原を認識する抗ヒトＦａ
ｓヒト化抗体及びそのものをコードするＤＮＡ等に関す
る。

【０００２】さらに本発明は、抗ヒトＦａｓヒト化抗
体、または、該抗体と細胞増殖抑制作用を有する薬物と
の組み合わせを有効成分とする医薬、特に自己免疫疾患
治療剤、さらにはリウマチ治療剤に関するものである。

【０００３】さらに本発明は、潜在的なＨＡＭＡ反応を
最小化する抗体のヒト化方法に関するものである。

【０００４】

【従来の技術】免疫グロブリンＧ（以下、単に「 Ig G
」という。）は、分子量約２３０００の軽ポリペプチ
ド鎖（以下「Ｌ鎖」という。）、分子量約５００００の
重ポリペプチド鎖（以下「Ｈ鎖」という。）各２本づつ
から構成される。Ｈ鎖、Ｌ鎖とも約１１０残基から成
る、アミノ酸配列が保存されている領域のくり返し構造
を持ち、これらは Ig G の３次元構造の基本単位（以
下、「ドメイン」という。）を構成する。Ｈ鎖及びＬ鎖
は、それぞれ連続した４個、及び２個のドメインから構
成されている。Ｈ鎖、Ｌ鎖いずれにおいても、アミノ末
端のドメインは他のドメインに比べ各抗体分子間でのア
ミノ酸配列の変異が大きく、このドメインは可変ドメイ
ン（variable domain : 以下、「Ｖドメイン」とい
う。）と呼ばれる。 Ig G のアミノ末端においては、Ｈ
鎖、Ｌ鎖のＶドメインが相補的に会合し可変領域を形成
している。これに対し、残余のドメインは、全体として
定常領域を形成する。定常領域は、各動物種に特徴的な
配列を有し、例えば、マウス Ig G の定常領域はヒト I
g G の定常領域とは異なっているので、マウス Ig G は
ヒトの免疫系によって異物として認識され、その結果、
ヒト抗マウス抗体（ Human AntiMouse Antibody：以下
「HAMA」という。）応答が起こる（シュロッフら、Canc
erRes., 45, 879-85 (1985)参照）。従って、マウス抗
体はヒトに繰返し投与することはできない。このような
抗体をヒトに投与するためには、抗体の特異性を保持し
たまま HAMA 応答を起こさないように抗体分子を修飾す
る必要がある。

【０００５】Ｘ線結晶構造解析の結果によれば、一般
に、このようなドメインは３本から４本のβ鎖からなる
逆平行βシートが２層重なり合った長円筒状の構造をと
る。可変領域では、Ｈ鎖、Ｌ鎖のＶドメインそれぞれに
つき各３個のループが集合し、抗原結合部位を形成す
る。この各ループは相補性決定領域（complementarity
determining region : 以下、「ＣＤＲ」という。）と
呼ばれ、アミノ酸配列の変異が最も著しい。可変領域の
ＣＤＲ以外の部分は、一般に、ＣＤＲの構造を保持する
役割を有し、「フレームワーク」と呼ばれる。

【０００６】カバトらは、Ｈ鎖、Ｌ鎖の可変領域の一次
配列を多数収集し、配列の保存性に基づき、それぞれの
一次配列をＣＤＲ及びフレームワークに分類した表を作
成した（カバトら、SEQUENCES OF IMMUNOLOGICAL INTER
EST, 5th edition, NIH publication, No.91-3242, E.
A. Kabatt et al. 参照）。また、各フレームワーク
は、アミノ酸配列が共通の特徴を有する複数のサブグル
ープに分類された。さらに、ヒトとマウスの間で対応す
るフレームワークが存在することも見いだされた。

【０００７】このような Ig G 構造的特徴に関する研究
から以下のヒト化抗体の作製法が考案された。

【０００８】研究初期の段階では、マウス由来抗体の可
変領域をヒト由来の定常領域に接合したキメラ抗体が提
案された（Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81, 6851-6
855,(1984) 参照）。しかし、そのようなキメラ抗体
は、依然として、多くの非ヒトアミノ酸残基を含むの
で、特に長期間投与した場合にはHAMA応答を誘導しうる
（Begentら Br. J. Cancer, 62, 487, (1990) 参照）。

【０００９】ヒトに対し HAMA 応答を発現する可能性の
ある、非ヒトほ乳動物由来のアミノ酸残基を更に少なく
する方法として、ＣＤＲ部分のみをヒト由来の抗体に組
み込む方法が提案された（ Nature, 321, 522-525, (19
86) 参照）が、一般に、抗原に対する免疫グロブリン活
性を保持するにはＣＤＲのみの移植では不十分であっ
た。

【００１０】一方、チョッチアらは、1987年、Ｘ線結晶
構造解析データを用い、(i) ＣＤＲのアミノ酸配列中に
は、抗原に直接結合する部位とＣＤＲ自体の構造を維持
する部位とが存在し、ＣＤＲの取り得る三次元構造は、
複数の典型的なパターン（カノニカル構造）に分類され
ること、(ii)カノニカル構造のクラスは、ＣＤＲのみな
らずフレームワーク部分の特定の位置のアミノ酸の種類
によって決定されること、を見いだした（ J. Mol. Bio
l., 196, 901-917, (1987)参照）。

【００１１】この知見に基づき、ＣＤＲ移植法を用いる
場合、ＣＤＲの配列に加え一部のフレームワークのアミ
ノ酸残基もヒト抗体に移植する必要性が示唆された（特
表平4-502408号参照）。

【００１２】一般に、移植すべきＣＤＲを有する非ヒト
哺乳動物由来の抗体は「ドナー」、ＣＤＲが移植される
側のヒト抗体は「アクセプター」と定義されるが、本発
明もこの定義に従うことにする。

【００１３】ＣＤＲ移植法を実施する際に考慮すべき点
は、可能な限りＣＤＲの構造を保存し、免疫グロブリン
分子の活性を保持することにある。この目的を達成する
ため、 (i) アクセプターは、いずれのサブグループに属するも
のを選択すべきか。

【００１４】(ii)ドナーのフレームワークからいずれの
アミノ酸残基を選択すべきか。 の２点に留意する必要がある。

【００１５】クィーンらは、ドナーのフレームワークの
アミノ酸残基が、以下の基準の少なくともひとつに該当
する場合、ＣＤＲ配列とともにアクセプターに移植する
デザインの方法を提唱した（特表平4-502408号参照）： (a) アクセプターのフレームワーク領域中のアミノ酸が
その位置において稀であり、ドナーの対応するアミノ酸
がアクセプターの前記位置において普通である。 (b) 該アミノ酸がＣＤＲのひとつのすぐ近くである。

【００１６】(c) 該アミノ酸が三次元免疫グロブリンモ
デルにおいてＣＤＲの約３Å以内に側鎖原子を有し、そ
して抗原とまたはヒト化抗体のＣＤＲと相互作用するこ
とができると予想される。

【００１７】一方、免疫グロブリンＭ（以下、「 Ig M
」という。）は、通常Ｈ鎖及びＬ鎖各１０ずつに加え
て、分子の中心に位置するジョイニング鎖（以下、「Ｊ
鎖」という。）から構成される。マウス Ig M も定常領
域を有するので、マウス Ig Gと同様にヒトに繰り返し
投与することはできない。したがって、このものをヒト
に対する医薬として使用する場合は、上記で述べたＣＤ
Ｒ移植法により分子をデザインする必要がある。

【００１８】なお、Ig M 分子は通常Ｊ鎖を伴う５量体
として存在するが、Ｊ鎖を欠失した６量体として存在し
得ることが報告されており（ J. Biol. Chem,, 267, (2
5),18002-18007, (1992) ）、また、このようなＪ鎖欠
失型 Ig M の補体結合活性が増強することも報告されて
いる（ Eur. J. Immunol., 18, :1001-1008, (198
8)）。しかし、従来 Ig M の分子構造を維持しその免疫
グロブリン活性を保持するためにはＪ鎖の存在が必須と
考えられており、Ｊ鎖を保有しない Ig M が依然として
元の免疫グロブリン活性を保持し得るかについては、現
在まで知られていない。

【００１９】他方、生体内において、正常な細胞交代の
ために生じる生理的な細胞死はアポトーシスと呼ばれ、
病理的な細胞死である壊死（ネクローシス）とは区別さ
れている（Kerr, et al. (1972) Br. J. Cancer 26, 23
9 参照）。いわゆるプログラム細胞死は、生体内におい
て予め死滅するべくプログラム化されている、ある種の
細胞にみられる細胞死であるが、アポトーシスもそのひ
とつである。アポトーシスにおいては細胞表面の湾曲、
核クロマチンの凝縮、染色体ＤＮＡの断片化等の現象が
特徴的に観察される。

【００２０】アポトーシスは、リンパ球（Ｔ細胞および
Ｂ細胞）の分化において、自己抗原を認識する細胞を排
除する役割を果たしている。いわゆる自己免疫疾患の発
症は、リンパ球分化におけるアポトーシスの不全によっ
て自己反応性リンパ球が生じることによるものと考えら
れている（中山敬一ら （１９９５） Ｍｅｂｉｏ １
２ （１０）， ７９−８６参照）。

【００２１】最近、ある種の細胞膜画分を用いて作成し
たモノクローナル抗体（Ｙｏｎｅｈａｒａ，Ｓ．， ｅ
ｔ ａｌ． （１９８９） Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．
１６９， １７４７）が免疫担当細胞のアポトーシス
に関与することが見出され、それに対応する抗原として
Ｆａｓが同定された（前出Itoh, N., et al. 参照）。
これらの抗ヒトＦａｓ抗体はヒト由来の細胞のアポトー
シスを誘導する細胞障害活性を有することから、自己免
疫疾患、エイズおよび腫瘍の治療剤となり得ると報告さ
れている（特開平２−２３７９３５号および特表平５−
５０３２８１号参照）。

【００２２】一方リウマチ、特に慢性関節リウマチは、
内的および外的要因によって引き起こされる種々の免疫
学的異常を伴う、滑膜細胞の増殖を基礎病変とする疾患
であり、炎症性細胞浸潤および骨の侵食を伴う滑膜細胞
の増殖障害と考えられている。慢性関節リウマチにおけ
る罹患関節を中心とする組織破壊は、炎症性滑膜細胞か
らのサイトカインの産生異常がその成因であると考えら
れている。リウマチ患者の関節の状態を調べると、滑膜
細胞が異常に増殖しており、滑膜絨毛の増生や滑膜細胞
の多層化などが観察される（Daniel J. McCarty (1985)
in "Arthritisand allied conditions, A textbook of
rheumatology" 10th Edition, Lea &Febiger 参照）。
現在実施されているリウマチの薬物療法には、専らステ
ロイド等の抗炎症剤または免疫調節剤等が用いられてい
るが、こうした滑膜細胞の異常増殖を薬物で抑制するこ
とができれば、その薬物はリウマチ治療剤として有用で
あると考えられる。

【００２３】ところで、リウマチにおける滑膜細胞の増
殖は無制限に生じるものではなく、自発抑制することが
知られている（Daniel J. McCarty (1985) in "Arthrit
is and allied conditions, A textbook of rheumatolo
gy" 10th Edition, Lea & Febiger 参照）。さらに最
近、リウマチ患者の滑膜細胞にアポトーシスが起こるこ
と、滑膜細胞膜上にＦａｓ抗原が発現していることが明
らかとなった。中島ら（Nakajima, T., et al. (1995)
Arthritis Rheum. 38, 485-491参照）および青野ら（第
３８回日本リウマチ学会抄録集(1994) 487頁および平成
６年日本癌学会総会記事(1994) 338頁参照）は、細胞障
害活性を有する抗ヒトＦａｓ抗体をリウマチ患者由来の
異常増殖した滑膜細胞に加えることにより、滑膜細胞に
アポトーシスが誘導されるか否かについて検討した結
果、リウマチ患者の異常増殖した滑膜細胞はリウマチ患
者以外の滑膜細胞と比較してアポトーシスが起こる割合
が高いことを見いだしている。従って、抗ヒトＦａｓ抗
体は、リンパ球のみならず、異常増殖している滑膜細胞
も選択的にアポトーシスへと導くことができ、リウマチ
治療剤として有用であると考えられる。

【００２４】抗ヒトＦａｓマウスモノクローナル抗体は
既に数種得られており（Yonehara,S., et al. (1989)
J. Exp. Med. 169, 1747-1756, (1989) ；SCIENCE, 24
5, 301-305, (1989) などを参照）、また、前記のよう
に、該抗体がリウマチ患者の滑膜細胞にイン・ビトロで
アポトーシスを誘導することも報告されている（第３８
回日本リウマチ学会抄録集(1994) 487頁および平成６年
日本癌学会総会記事(1994) 338頁参照）。しかし、Ig G
型と Ig M 型の如何を問わず、抗ヒトＦａｓヒト化抗
体を製造した例はない。さらに、Ｊ鎖を有せず、アポト
ーシス誘導活性を有する Ig M 型抗ヒトＦａｓヒト化抗
体の取得に成功した例はない。

【００２５】非ヒト動物由来の抗体をヒト化するために
は、ヒト抗体アクセプターに移植されるべき可変領域中
アミノ酸配列を選択する必要がある。かかるアミノ酸配
列は想定されるＣＤＲ配列と、さらに、ＦＲ配列中の選
択されるアミノ酸配列を含まなければならない。

【００２６】従来、ヒト化抗体をデザインする場合、ア
クセプターのサブグループは以下の二つのうちのひとつ
の方法で選択されていた。

【００２７】(i) 公知の天然ヒト抗体の同一分子に由来
する重鎖及び軽鎖を使用する。

【００２８】(ii)ドナー鎖に高度の配列相同性を有する
かコンセンサス配列を共有する、天然ヒト抗体の異なっ
た分子に由来する重鎖及び軽鎖を使用する。ただし、ア
クセプター鎖のサブグループのコンビネーションとして
は天然に存在するものを維持する。上記規範の(ii)は、
従来から採用されており、天然に生じるコンビネーショ
ンを維持することは免疫グロブリン活性の維持のために
重要と考えられていた。

【００２９】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、この天
然に存在するサブグループのコンビネーションを維持す
ることも、または、同一の抗体よりのＨ鎖及びＬ鎖を使
用することも必須でないこと、すなわち、アクセプター
のＨ鎖及びＬ鎖は、サブグループの天然のコンビネーシ
ョンを無視して、ドナー及びアクセプターのフレームワ
ーク領域の相同性のみに基づき、ヒト抗体の一次配列の
ライブラリーから選択し得ること、かかる選択手段を用
いても、抗体の免疫グロブリン活性を維持できることを
見いだし、本発明を完成した。

【００３０】また、本発明者らは、Ig M 型である抗ヒ
トＦａｓマウスモノクローナル抗体を産生するハイブリ
ドーマより作製したｃＤＮＡライブラリーから、該抗体
のＨ鎖、Ｌ鎖をコードする遺伝子をそれぞれクローン化
し、その全ヌクレオチド配列を解明した。次いで、それ
らの遺伝子にコードされる該Ｈ鎖およびＬ鎖のアミノ酸
配列におけるＣＤＲのアミノ酸配列を決定した。次に、
既知のIg M 型ヒト免疫グロブリンのＨ鎖及びＬ鎖のア
ミノ酸配列へ該ＣＤＲのアミノ酸配列及びフレームワー
ク中の数種のアミノ酸残基を組み込むようにアミノ酸配
列のデザインを行い、抗ヒトＦａｓヒト化抗体のＨ鎖及
びＬ鎖のアミノ酸全配列を予め特定した。さらに、該Ｈ
鎖及びＬ鎖のアミノ酸全配列をコードするＤＮＡを製造
し、該ＤＮＡをそれぞれ含むことから成る複数の発現ベ
クターを作製した。さらに、これらのベクターで培養動
物細胞をコ・トランスフェクションして得られた形質転
換体の培養上清中に、抗ヒトＦａｓ抗体として機能しア
ポトーシス誘導活性を有するタンパク質が産生されてい
ることを見いだし、本発明を完成した。

【００３１】すなわち、本発明の目的は、ＨＡＭＡ反応
を最小化する、天然の非ヒト動物由来抗体のヒト化方法
を提供することにある。

【００３２】本発明の他の目的は、アポトーシス誘導活
性を有し、Ｊ鎖を有しない Ig M 型抗ヒトＦａｓモノク
ローナル抗体、及び、該抗体のＨ鎖及びＬ鎖をコードす
るＤＮＡ等を提供することにある。

【００３３】

【課題を解決するための手段】本発明において使用され
る「配列相同性」なる語は、ＤＮＡ配列相同性及びアミ
ノ酸配列相同性のいずれにも関する。「相同性」なる語
は、二つの配列間の類似性を意味し、本技術分野で標準
的な語である。アミノ酸配列相同性は、配列のデータ・
ベースのコンピューター検索を含む、一連の方法のいず
れによっても評価することができる。これらの方法は本
技術分野の当業者に周知である。

【００３４】本発明において用いられる「ＦＲ」なる語
は、イムノグロブリンＨ鎖またはＬ鎖サブユニットの可
変領域中に存在する、いわゆるフレームワーク領域を指
す。例えば、ＦＲＨ₁ はＨ鎖サブユニット可変領域中の
最もＮ末側に存在するフレームワーク領域を指し、ＦＲ
Ｌ₄ はＬ鎖サブユニット可変領域中のＮ末端から４番目
のフレームワーク領域を指す。同様に、例えばＣＤＲＨ
₁ はＨ鎖サブユニット可変領域中の最もＮ末端側に存在
するＣＤＲを指し、ＣＤＲＬ₃ はＬ鎖サブユニット可変
領域中のＮ末端から３番目のＣＤＲを指す。

【００３５】本発明は、（１）遺伝子操作によって得ら
れ、配列表の配列番号７８で示されるアミノ酸配列を含
むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋白質、配列表の配列
番号８０で示されるアミノ酸配列を含むことから成る軽
ポリペプチド鎖蛋白質、配列表の配列番号８２で示され
るアミノ酸配列を含むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋
白質又は配列表の配列番号８４で示されるアミノ酸配列
を含むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配
列表の配列番号８６で示されるアミノ酸配列を含むこと
から成る重ポリペプチド鎖蛋白質又は配列表の配列番号
８８で示されるアミノ酸配列を含むことから成る重ポリ
ペプチド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さ
ず、アポトーシス誘導活性を有することを特徴とする免
疫グロブリンＭ蛋白質、（２）遺伝子操作によって得ら
れ、配列表の配列番号７８で示されるアミノ酸配列を含
むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表
の配列番号８６で示されるアミノ酸配列を含むことから
成る重ポリペプチド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋
白質を有さず、アポトーシス誘導活性を有することを特
徴とする（１）記載の免疫グロブリンＭ蛋白質、（３）
遺伝子操作によって得られ、配列表の配列番号７８で示
されるアミノ酸配列を含むことから成る軽ポリペプチド
鎖蛋白質、及び、配列表の配列番号８８で示されるアミ
ノ酸配列を含むことから成る重ポリペプチド鎖蛋白質の
みから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、アポトーシス誘
導活性を有することを特徴とする（１）記載の免疫グロ
ブリンＭ蛋白質、（４）遺伝子操作によって得られ、配
列表の配列番号８０で示されるアミノ酸配列を含むこと
から成る軽ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表の配列
番号８６で示されるアミノ酸配列を含むことから成る重
ポリペプチド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を
有さず、アポトーシス誘導活性を有することを特徴とす
る（１）記載の免疫グロブリンＭ蛋白質、（５）遺伝子
操作によって得られ、配列表の配列番号８０で示される
アミノ酸配列を含むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋白
質、及び、配列表の配列番号８８で示されるアミノ酸配
列を含むことから成る重ポリペプチド鎖蛋白質のみから
構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、アポトーシス誘導活性
を有することを特徴とする（１）記載の免疫グロブリン
Ｍ蛋白質、（６）遺伝子操作によって得られ、配列表の
配列番号８２で示されるアミノ酸配列を含むことから成
る軽ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表の配列番号８
６で示されるアミノ酸配列を含むことから成る重ポリペ
プチド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さ
ず、アポトーシス誘導活性を有することを特徴とする
（１）記載の免疫グロブリンＭ蛋白質、（７）遺伝子操
作によって得られ、配列表の配列番号８２で示されるア
ミノ酸配列を含むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋白
質、及び、配列表の配列番号８８で示されるアミノ酸配
列を含むことから成る重ポリペプチド鎖蛋白質のみから
構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、アポトーシス誘導活性
を有することを特徴とする（１）記載の免疫グロブリン
Ｍ蛋白質、（８）遺伝子操作によって得られ、配列表の
配列番号８４で示されるアミノ酸配列を含むことから成
る軽ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表の配列番号８
６で示されるアミノ酸配列を含むことから成る重ポリペ
プチド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さ
ず、アポトーシス誘導活性を有することを特徴とする
（１）記載の免疫グロブリンＭ蛋白質、（９）遺伝子操
作によって得られ、配列表の配列番号８４で示されるア
ミノ酸配列を含むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋白
質、及び、配列表の配列番号８８で示されるアミノ酸配
列を含むことから成る重ポリペプチド鎖蛋白質のみから
構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、アポトーシス誘導活性
を有することを特徴とする（１）記載の免疫グロブリン
Ｍ蛋白質、（１０）配列表の配列番号７８で示されるア
ミノ酸配列を含むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋白質
をコードするＤＮＡ、（１１）配列表の配列番号８０で
示されるアミノ酸配列を含むことから成る軽ポリペプチ
ド鎖蛋白質をコードするＤＮＡ、（１２）配列表の配列
番号８２で示されるアミノ酸配列を含むことから成る軽
ポリペプチド鎖蛋白質をコードするＤＮＡ、（１３）配
列表の配列番号８４で示されるアミノ酸配列を含むこと
から成る軽ポリペプチド鎖蛋白質をコードするＤＮＡ、
（１４）配列表の配列番号８６で示されるアミノ酸配列
を含むことから成る重ポリペプチド鎖蛋白質をコードす
るＤＮＡ、（１５）配列表の配列番号８８で示されるア
ミノ酸配列を含むことから成る重ポリペプチド鎖蛋白質
をコードするＤＮＡ、（１６）配列表の配列番号７７で
示されるヌクレオチド配列を含むことから成る（１０）
記載のＤＮＡ、（１７）配列表の配列番号７９で示され
るヌクレオチド配列を含むことから成る（１１）記載の
ＤＮＡ、（１８）配列表の配列番号８１で示されるヌク
レオチド配列を含むことから成る（１２）記載のＤＮ
Ａ、（１９）配列表の配列番号８３で示されるヌクレオ
チド配列を含むことから成る（１３）記載のＤＮＡ、
（２０）配列表の配列番号８５で示されるヌクレオチド
配列を含むことから成る（１４）記載のＤＮＡ、（２
１）配列表の配列番号８７で示されるヌクレオチド配列
を含むことから成る（１５）記載のＤＮＡ、（２２）
（１０）乃至（１３）又は（１６）乃至（１９）のいず
れかひとつに記載のＤＮＡを含むことから成る組換えＤ
ＮＡベクター、（２３）（１４）、（１５）、（２０）
又は（２１）記載のＤＮＡを含むことから成る組換えＤ
ＮＡベクター、（２４）（２２）及び／又は（２３）記
載の組換えＤＮＡベクターで形質転換された宿主細胞、
（２５）形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨκＫＹ２−
５８（ＦＥＲＭ ＢＰ−５８６１）、（２６）形質転換
大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨκＫＦ２−１９（ＦＥＲＭ
ＢＰ−５８６０）、（２７）形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌ
ｉ ｐＨκＲＹ２−１０（ＦＥＲＭ ＢＰ−５８５
９）、（２８）形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨκＲ
Ｆ２−５２（ＦＥＲＭ ＢＰ−５８６２）、（２９）形
質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ μＨ５−１（ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−５８６３）、（３０）形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ
μＭ１−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−５８６４）、（３１）
（１）乃至（９）のいずれかひとつに記載の蛋白質を有
効成分とする医薬、（３２）以下の工程からなる、少な
くとも１本の軽鎖及び１本の重鎖を含み、ドナーとして
の非ヒト抗体が有する免疫グロブリン活性を維持するヒ
ト化抗体又はその誘導体を産生する方法： イ）少なくともひとつのＣＤＲを有する非ヒト抗体を選
択し、 ロ）ヒト抗体重鎖を選択し、 ハ）ヒト抗体軽鎖を選択し、 ニ）組換え重鎖を形成するために非ヒト抗体重鎖からヒ
ト抗体重鎖へ少なくとも一つのＣＤＲまたはその断片を
導入し、及び、 ホ）組換え軽鎖を形成するために非ヒト抗体軽鎖からヒ
ト抗体軽鎖へ少なくとも一つのＣＤＲまたはその断片を
導入する（ここで、ヒト抗体重鎖及び軽鎖の各々の選択
は、非ヒト抗体重鎖及び軽鎖各々とのアミノ酸配列相同
性によってのみ決定され、該少なくともひとつの非ヒト
ＣＤＲはこの非ヒトＣＤＲの少なくとも一つのフレーム
ワーク領域の少なくとも一つの重要なアミノ酸残基とと
もにこのヒト抗体に導入され、この少なくとも一つの重
要なアミノ酸残基はこのＣＤＲとともに非ヒトフレーム
ワーク領域から導入され、該アミノ酸残基は以下の要件
の少なくともひとつを具備する： (i) 該アミノ酸は、アクセプターのヒトフレームワー
ク領域の当該箇所においてまれにしか観察されず、一
方、ドナーにおける対応するアミノ酸はアクセプターの
当該箇所において通常観察される、(ii) 免疫グロブリ
ンの三次元モデルにおいて、該アミノ酸は抗原又はヒト
化抗体のＣＤＲと以下の規範のひとつに対応して結合を
形成すると判断される側鎖原子を有する、 側鎖原子間の距離が、それらのファン・デル・ワール
ス半径の総計に５Åを加えたものより短い、 側鎖原子が極性であり、２番目の極性原子から３．４
Å以内に存在する、又は 側鎖原子が荷電しており、逆に荷電している原子から
３．３５Å以内に存在する、(iii) 該アミノ酸は、ＣＤ
Ｒのカノニカル・クラス構造の決定に関与する箇所に観
察される、又は、(iv) 該アミノ酸の箇所は、重鎖及び
軽鎖の推定上の接触表面において観察される。）、（３
３）要件(ii)及び(iv)のアミノ酸の該箇所が、分子モデ
リングにより決定される、（３２）記載の方法、（３
４）アミノ酸の該箇所が、さらに、他の抗体のＸ線結晶
解析データとの比較から決定される、（３３）記載の方
法、（３５）フレームワーク領域からのアミノ酸が、分
子モデリングによりＣＤＲと接触すると推定され、ＣＤ
Ｒに接触することがＸ線結晶解析により実験的に高頻度
で観察される場合に導入される、（３２）記載の方法、
（３６）各々のヒト抗体鎖の該選択が、非ヒト抗体鎖と
フレームワーク領域において少なくとも７０％のアミノ
酸の同一性を共有することにより決定される、（３２）
記載の方法、（３７）各々の非ヒト抗体鎖からすべての
ＣＤＲがヒト抗体鎖に導入されることを特徴とする、
（３２）記載の方法、（３８）選択された非ヒト抗体が
マウスＣＨ１１抗体である、（３２）記載の方法、（３
９）（３２）乃至（３８）のいずれかひとつに記載の方
法で産生されるヒト化抗体、（４０）該抗体が抗Ｆａｓ
活性を有する、（３９）記載の抗体、（４１）該抗体が
抗Ｆａｓ活性を有するＩｇＭ分子である、（３９）又は
（４０）記載の抗体、（４２）該抗体がＪ鎖を欠損し抗
Ｆａｓ活性を有するＩｇＭ分子である、（３９）又は
（４０）記載の抗体、に関する。

【００３６】

【発明の実施の形態】抗ヒトＦａｓマウスモノクローナ
ル抗体ＣＨ１１をコードするＤＮＡは、該抗体を産生す
るマウスハイブリドーマ細胞よりポリ（Ａ）⁺ ＲＮＡを
調製し、該ポリ（Ａ）⁺ ＲＮＡを逆転写酵素でｃＤＮＡ
に変換してから、該抗体のＨ鎖およびＬ鎖をコードする
ＤＮＡを単離することにより得られる。ＣＨ１１産生ハ
イブリドーマは米原ら（Yonehara, S., et al. (1989)
J. Exp. Med. 169，1747参照）により、ヒト二倍体繊維
芽細胞ＦＳ−７で免疫して得られたマウスのリンパ球と
マウスミエローマ細胞とを細胞融合して得られたもので
ある。なお、ハイブリドーマ由来のＣＨ１１自体は
（株）医学生物学研究所より市販されている。

【００３７】細胞からのポリ（Ａ）⁺ ＲＮＡの調製は、
まず全ＲＮＡを調製し、該全ＲＮＡからオリゴ（ｄＴ）
セルロースやオリゴ（ｄＴ）ラテックスビーズ等のポリ
（Ａ）⁺ ＲＮＡ精製用担体を用いて精製する方法、また
は細胞ライセートから該担体を用いて直接精製する方法
により実施できる。全ＲＮＡの調製方法としては、アル
カリ蔗糖密度勾配遠心分離法（Dougherty, W. G. and H
iebert, E. (1980) Viology 101, 466-474参照）、グア
ニジンチオシアネート・フェノール法、グアニジンチオ
シアネート・トリフルオロセシウム法、フェノール・Ｓ
ＤＳ法等も採用し得るが、グアニジンチオシアネートお
よび塩化セシウムを用いる方法（Chirgwin, J. M., et
al. (1979) Biochemistry 18, 5294-5299 参照）が好適
である。

【００３８】前述の如くして得たポリ（Ａ）⁺ ＲＮＡを
鋳型として、逆転写酵素を用いて一本鎖ｃＤＮＡを合成
した後、この一本鎖ｃＤＮＡから二本鎖ｃＤＮＡを合成
することができる。この方法としてはＳ１ヌクレアーゼ
法（Efstratiadis, A., et al.(1976) Cell 7, 279-288
参照）、グブラー−ホフマン法（Gubler, U. and Hoffm
an, B. J. (1983) Gene 25, 263-269 参照）等を採用し
得るが、本発明においてはオカヤマ−バーグ法（Okayam
a, H. and Berg, P. (1982) Mol. Cell. Biol.2, 161-1
70 参照）が好適である。

【００３９】このようにして得られた二本鎖ｃＤＮＡを
クローニングベクターに組み込み、得られた組換えベク
ターを大腸菌等の微生物に導入して形質転換させ、テト
ラサイクリン耐性或いはアンピシリン耐性を指標として
形質転換体を選択することができる。大腸菌の形質転換
は、ハナハン法（Hanahan, D. (1983) J. Mol. Biol.16
6, 557-580 参照）、すなわち塩化カルシウムや塩化マ
グネシウムまたは塩化ルビジウムを共存させて調製した
コンピテント細胞に、該組換えＤＮＡベクターを加える
方法により実施することができる。なお、ベクターとし
てプラスミドを用いる場合は、上記の薬剤耐性遺伝子を
有することが必要である。また、プラスミド以外のクロ
ーニングベクター、例えばラムダ系のファージ等を用い
ることもできる。

【００４０】上記により得られる形質転換株から、抗ヒ
トＦａｓマウスモノクローナル抗体の各サブユニットを
コードするＤＮＡを有する株を選択する方法としては、
例えば以下に示す各種方法を採用できる。

【００４１】（１）合成オリゴヌクレオチドプローブを
用いるスクリーニング法 目的タンパク質のアミノ酸配列の全部または一部が解明
されている（該配列は、複数個連続した特異的配列であ
れば、目的タンパク質のどの領域のものでもよい）場
合、該アミノ酸配列に対応するオリゴヌクレオチドを合
成し（この場合、コドン使用頻度を参考に推測されるヌ
クレオチド配列、または考えられるヌクレオチド配列を
組合せた複数個のヌクレオチド配列のいずれも採用で
き、また後者の場合イノシンを含ませてその種類を減ら
すこともできる）、これをプローブ（³²Ｐ、³⁵Ｓあるい
はビオチン等で標識する）として、形質転換株のＤＮＡ
を変性固定したニトロセルロースフィルターとハイブリ
ダイズさせ、得られたポジティブ株を検索して、これを
選択する。

【００４２】（２）ポリメラーゼ連鎖反応を用いる方法 目的タンパク質のアミノ酸配列の全部または一部が解明
されている場合、該アミノ酸配列の一部に対応するセン
スストランドとアンチセンスストランドのオリゴヌクレ
オチドプライマーを合成し、これらを組合せてポリメラ
ーゼ連鎖反応（Saiki, R. K., et al.(1988) Science 2
39, 487-491 参照）を行ない、目的の抗ヒトＦａｓマウ
スモノクローナル抗体サブユニットをコードするＤＮＡ
断片を増幅する。ここで用いる鋳型ＤＮＡとしては、抗
ヒトＦａｓ抗体ＣＨ１１を産生するハイブリドーマのｍ
ＲＮＡより逆転写酵素反応にて合成したｃＤＮＡを用い
ることができる。このようにして調製したＤＮＡ断片
は、市販のキット等を利用して直接プラスミドベクター
に組み込むこともできるし、該断片を³²Ｐ、³⁵Ｓあるい
はビオチン等で標識し、これをプローブとして用いてコ
ロニーハイブリダイゼーションまたはプラークハイブリ
ダイゼーションを行なうことにより目的のクローンを選
択することもできる。

【００４３】マウスモノクローナル抗体ＣＨ１１は Ig
M 分子であり、Ｈ鎖、Ｌ鎖およびＪ鎖の各サブユニット
からなる複合体である。これら各サブユニットの部分ア
ミノ酸配列を調べる方法としては、電気泳動やカラムク
ロマトグラフィー等、当業者に周知の分離方法を用いて
各サブユニットを単離してから、自動プロテインシーク
エンサー（例えば、島津製作所（株）社製ＰＰＳＱ−１
０）等を利用してそれぞれのサブユニットのＮ末端アミ
ノ酸配列を解析する方法が好適である。

【００４４】上記のごとくして得られた目的の形質転換
株より抗ヒトＦａｓマウスモノクローナル抗体タンパク
質の各サブユニットをコードするＤＮＡを採取する方法
は、公知の方法（Maniatis, T., et al.(1982) in "Mol
ecular Cloning A Laboratory Manual" Cold Spring Ha
rbor Laboratory, NY.参照）に従い実施できる。例えば
細胞よりベクターＤＮＡに相当する画分を分離し、該プ
ラスミドＤＮＡより該サブユニットをコードするＤＮＡ
領域を切り出すことにより行い得る。

【００４５】なお、該組換えＤＮＡベクターで形質転換
された大腸菌株Ｅ． ｃｏｌｉ ｐＣＲ３−Ｈ１２３お
よびＥ． ｃｏｌｉ ｐＣＲ３−Ｌ１０３は平成８年
（１９９６年）２月２８日付で工業技術院生命工学工業
技術研究所に国際寄託され、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−
５４２７およびＦＥＲＭ ＢＰ−５４２８が付されてい
る。従って、該寄託菌株からプラスミドを単離するか、
もしくは該寄託菌株の抽出物を鋳型にしてポリメラーゼ
連鎖反応（ Polymerase Chain Reaction :以下、「ＰＣ
Ｒ」という。）を行うなどの方法により抗ヒトＦａｓマ
ウスモノクローナル抗体タンパク質の各サブユニットを
コードするＤＮＡを取得することができる。

【００４６】このようにして得られるＤＮＡの配列の決
定は、例えばマキサム−ギルバートの化学修飾法（Maxa
m, A. M. and Gilbert, W.(1980) in "Methods in Enzy
mology" 65, 499-276 参照）やＭ１３ファージを用いる
ジデオキシヌクレオチド鎖終結法（Messing, J. and Vi
eira, J.(1982) Gene 19, 269-276 参照）等により行う
ことができる。また近年、ＤＮＡのヌクレオチド配列を
決定するために、従来使用していたラジオアイソトープ
の代わりに蛍光色素を用いて、コンピュータの制御下で
ロボットにジデオキシ法を行わせ、電気泳動後のヌクレ
オチド配列の解読もコンピュータで行うシステムが普及
している（例えばパーキンエルマージャパン社製シーク
エンスロボット“ＣＡＴＡＬＹＳＴ ８００”およびモ
デル３７３ＡＤＮＡシークエンサー等）。こうしたシス
テムを利用することで、ＤＮＡヌクレオチド配列決定操
作を能率よく、かつ安全に行うことができる。

【００４７】このようにして決定されたヌクレオチド配
列およびＣＨ１１のＨ鎖およびＬ鎖の各Ｎ末端アミノ酸
配列データから、ＣＨ１１のＨ鎖およびＬ鎖の全アミノ
酸配列を決定することができる。

【００４８】本発明により明らかになったＣＨ１１のＨ
鎖およびＬ鎖の各アミノ酸配列と，カバトらにより決定
された、免疫グロブリンの公知のアミノ酸配列データと
を比較することにより、各アミノ酸配列におけるＣＤ
Ｒ、ＦＲ領域および定常領域の位置を決定することがで
きる。

【００４９】抗ヒトＦａｓマウスモノクローナル抗体を
ヒト化するためには、決定されたＣＤＲ配列全体及びＦ
Ｒ配列の一部のアミノ酸残基をヒト抗体へ移植するよう
に、可変領域のアミノ酸配列を設計する必要がある。こ
の設計は、以下の方法に従う。

【００５０】一般に、エピトープ結合領域を保持するた
めに、あるひとつのドナー抗体からすべてのＣＤＲがひ
とつのアクセプター抗体に移植されることが好ましいと
されているが、本発明では、ヒト化抗体の免疫グロブリ
ン活性が保持されるならば、全ＣＤＲでなくそれ未満の
個数のＣＤＲを移植することが好ましい場合もあり得
る。また、ヒト化抗体の免疫グロブリン活性が保持され
るならば、ＣＤＲの一部のみを移植する場合も考えられ
る。

【００５１】従来、ヒト化のデザインを行う場合、アク
セプターのサブグループとしては、ドナーのサブグルー
プに対応するものが選択されていた。本発明において
は、ドナーのサブグループを考慮することなく、ヒト抗
体の一次配列のライブラリーの中からドナーのＦＲと最
も相同性の高いＨ鎖、Ｌ鎖のＦＲを選択する。この選択
法により、ドナー及びアクセプター間での、ＦＲ部分の
アミノ酸の同一性が少なくとも７０％以上とすることが
可能となる。この方法を採用することによりドナーより
移植するアミノ酸残基の数をより少なくすることが可能
となり、HAMA 応答誘導を減少させることができる。ま
た、抗体分子の一次配列より三次構造を予測する操作
（以下、この操作を「分子モデリング」という。）はそ
の予測精度に限界があり、そのドナーが属するサブグル
ープにおいて稀にしか出現しないアミノ酸残基の役割を
十分に特定することができない。クィーンらの方法に従
い、かかる位置においてドナー、アクセプターのいずれ
のアミノ酸残基を選択すべきかを判断することは一般に
困難である。本発明の選択法によれば、このような判断
をする機会を著しく減少することができる。

【００５２】ドナーのＦＲより移植するアミノ酸残基の
同定法は、以下に従う。

【００５３】ドナーとアクセプターのアミノ酸配列を並
べ、両者のＦＲの対応する位置でアミノ酸残基が異なっ
ていた場合、どちらの残基を選択するべきかを決定する
必要があるが、この選択においては、ドナー由来のＣＤ
Ｒの三次元構造を損なわないよう選択を行う必要があ
る。

【００５４】クィーンらは前述の特表平4-502408号にお
いて、ＦＲ上のアミノ酸残基が、以下の基準の少なくと
もひとつに該当する場合、ＣＤＲ配列とともにアクセプ
ターに移植する方法を提唱した。

【００５５】１）アクセプターのＦＲ領域中のアミノ酸
がその位置において稀であり、ドナーの対応するアミノ
酸がアクセプターの前記位置において普通である。

【００５６】２）該アミノ酸がＣＤＲのひとつのすぐ近
くである。

【００５７】３）該アミノ酸が三次元免疫グロブリンモ
デルにおいてＣＤＲの約３Å以内に側鎖原子を有し、そ
して抗原とまたはヒト化抗体のＣＤＲと相互作用するこ
とができると予想される。

【００５８】ここで２）で示された残基はしばしば３）
の性質を示すことより、本発明ではこの２）の規範を削
除し、別に新たに３種の規範を設ける。すなわち、本発
明では、ＣＤＲと共に移植すべきドナーのＦＲ上のアミ
ノ酸残基については、 ａ）アクセプターのＦＲ中のアミノ酸がその位置におい
て稀でありドナーの対応するアミノ酸が当該位置におい
て普通であるか、 ｂ）該アミノ酸が三次元構造モデルにおいて、ＣＤＲの
構成アミノ酸原子と抗原又は移植すべきＣＤＲループと
の相互作用が予想されるか、 ｃ）当該位置がカノニカルクラス決定残基であるか、 ｄ）当該位置がＨ鎖とＬ鎖の接触面を構成するか、また
は、 ｅ）当該位置がドナー分子内部に存在する場合に、ドナ
ーのＦＲから当該アミノ酸残基を移植することにする。

【００５９】ａ）の規範では、前述したカバトの表に従
い、同一サブクラスの抗体について当該位置で９０％以
上の頻度で見いだされるアミノ酸を「普通」、１０％未
満の頻度で見いだされるアミノ酸を「稀」と定義する。

【００６０】ｃ）の規範では、「当該位置がカノニカル
クラス決定残基であるか」否かについては、前述したチ
ョッチアの表に従い、一義的に決定することができる。

【００６１】ｂ）、ｄ）及びｅ）の規範については、予
めの抗体可変領域の分子モデリングが必要となる。分子
モデリング用ソフトウェアとしては、市販のものならい
ずれのものも採用し得るが、好適には、ＡｂＭ（オック
スフォード・モレキュラー・リミティッド社製）を使用
することができる。

【００６２】分子モデリングの予測精度には一定の限界
があるので、本発明においては、種々の抗体の可変領域
のＸ線結晶解析の実験結果を参照することにより、分子
モデリングから得られる構造予測の確からしさを２段階
に区別する。

【００６３】本発明においては、ＡｂＭ等の分子モデリ
ング用ソフトウェアによって構築されたところの可変領
域の３次元構造において、２原子間の距離が、各々のフ
ァンデルワールス力半径の和に０．５Åを加えた値より
短いとき、当該２原子間はファンデルワールス接触して
いると推定した。主鎖及び側鎖のアミド窒素、カルボニ
ル酸素など極性の原子間距離が平均の水素結合距離であ
る２．９Åに０．５Å加えた距離より短い場合は、その
間に水素結合が存在すると推定した。さらに、相反する
電価を持つ原子間が、２．８５Åに０．５Å加えた距離
より短い場合は、その間にイオン対が形成されているも
のと推定した。

【００６４】一方、種々の抗体の可変領域のＸ線結晶構
造解析の実験結果から、サブグループと無関係に、高頻
度にＣＤＲとの接触が見いだされるＦＲ上の位置とし
て、カバトの表に従い、Ｌ鎖では、１、２、３、４、
５、２３、３５、３６、４６、４８、４９、５８、６
９、７１、８８番の位置、Ｈ鎖では、２、４、２７、２
８、２９、３０、３６、３８、４６、４７、４８、４
９、６６、６７、６９、７１、７３、７８、９２、９
３、９４、１０３番の位置が特定される。分子モデリン
グと同じ基準を適用した場合、これらの位置のアミノ酸
残基は、公知の抗体可変領域の３分の２においてＣＤＲ
のアミノ酸残基との接触が認められる。これらの知見に
基づき、ｂ）の「該アミノ酸が三次元構造モデルにおい
て、ＣＤＲの構成アミノ酸原子が抗原又は移植すべきＣ
ＤＲループとの相互作用が予想される」とは、以下の規
範を意味する。

【００６５】分子モデリングにおいて、ＦＲとＣＤＲと
の接触の可能性が予見されたＦＲの位置が、Ｘ線結晶解
析により実験的にＦＲとＣＤＲとの接触が高頻度に検出
される位置のいずれかに一致する場合は、ドナーのアミ
ノ酸残基の移植を優先する。それ以外の場合は、この規
範ｂ）は考慮しない。

【００６６】ｄ）の「当該位置がＨ鎖とＬ鎖の接触面を
構成する」とは、以下の規範を意味する。種々の抗体の
可変領域のＸ線結晶解析の実験結果から、カバトの表に
従い、Ｌ鎖においては、３６、３８、４３、４４、４
６、４９、８７、９８番目のアミノ酸残基、Ｈ鎖におい
ては、３７、３９、４５、４７、９１、１０３、１０４
番目のアミノ酸残基が、高頻度にＨ鎖−Ｌ鎖間接触をす
ることが認められている。分子モデリングにおいて、Ｈ
鎖−Ｌ鎖間接触の可能性が予見され、その位置が上述の
位置のいずれかに一致する場合は、ドナーのアミノ酸残
基の移植を優先する。それ以外の場合は、この規範ｄ）
は考慮しない。

【００６７】ｅ）の、「当該位置がドナー分子内部に存
在する」とは、ペーダーソンらの報告（J. Mol. Biol.
235, 959-973, (1994)参照）を参考にして、当該アミノ
酸残基の表面露出度が５０％以下であり、ドナー由来の
アミノ酸残基を使用しても当該アミノ酸残基が抗原性を
示さない場合をいう。すなわち、各位置の表面露出度を
（ J. Mol. Biol., 55, 379-400 (1971) ）記載の方法
により計算した場合、表面露出度が５０％以下となる共
通位置は、カバトの表に従い、Ｌ鎖では、２、４、６、
１１、１３、１９、２１、２３、３５、３７、４７、４
８、５８、６１、６２、７１、７３、７５、７８、８
２、８３、８４、８６、８８、１０２、１０４、１０６
番のアミノ酸残基であり、Ｈ鎖では、２、４、６、１
２、１８、２０、２２、２４、２７、２９、３６、３
８、４０、４６、４８、４９、６６、６７、６９、７
１、７３、７６、７８、８０、８２、８２ｃ、８６、８
８、９０、９２、９４、１０７、１０９、１１１番のア
ミノ酸残基である。これらの位置で、疎水性、極性、側
鎖の大きさ等のアミノ酸の性質が大幅に変化しない場合
は、ドナーのアミノ酸残基の移植を優先する。それ以外
の場合は、この規範ｅ）は考慮しない。

【００６８】本発明の抗ヒトＦａｓヒト化抗体のＨ鎖及
びＬ鎖の可変領域をコードするＤＮＡは、以下の方法で
製造することができる。

【００６９】例えば、６０乃至７０ヌクレオチドの、該
ＤＮＡの部分ヌクレオチド配列から成る複数のポリヌク
レオチド断片を、センス側及びアンチセンス側において
互い違いになるように化学合成し、その後各ポリヌクレ
オチド断片をアニーリングし、ＤＮＡリガーゼにより結
合し、所望の抗ヒトＦａｓヒト化抗体のＨ鎖及びＬ鎖の
可変領域をコードするＤＮＡを有するＤＮＡを得ること
ができる。

【００７０】別の方法として、アクセプターの可変領域
の全アミノ酸配列をコードするＤＮＡをヒトリンパ球よ
り分離し、ＣＤＲをコードする領域に当業者に周知の方
法でヌクレオチド置換を行うことにより、制限酵素切断
配列を導入する。対応する制限酵素で該領域を切断した
後、ドナーのＣＤＲを領域をコードするヌクレオチド配
列を合成し、ＤＮＡリガーゼにより結合して、所望の抗
ヒトＦａｓヒト化抗体のＨ鎖及びＬ鎖の可変領域をコー
ドするＤＮＡを得ることができる。

【００７１】さらに、本発明では、好適には以下に述べ
るオーバーラップ・エクステンション・ＰＣＲ法（ホル
トンら、Gene, 77, 61-68, (1989) 参照）に従い、所望
の抗ヒトＦａｓヒト化抗体のＨ鎖及びＬ鎖の可変領域を
コードするＤＮＡを得ることができる。

【００７２】すなわち、接続を所望する２種のアミノ酸
配列をそれぞれコードする２種のＤＮＡを、便宜的に
（Ａ）及び（Ｂ）とする。（Ａ）の５’側にアニールす
る２０乃至４０ヌクレオチドのセンスプライマ−（以
下、このプライマーを（Ｃ）とする。）及び（Ｂ）の
３’側にアニールする２０乃至４０ヌクレオチドのアン
チセンスプライマー（以下、このプライマーを（Ｄ）と
する。）を化学合成する。さらに、（Ａ）の３’側の２
０乃至３０ヌクレオチドと（Ｂ）の５’側２０乃至３０
ヌクレオチドを連結した、キメラ型のセンスプライマー
（以下、このプライマーを（Ｅ）とする。）及びこれに
相補的なアンチセンスプライマー（以下、このプライマ
ーを（Ｆ）とする。）を合成する。（Ａ）を含む適当な
ベクターＤＮＡを基質にして、センスプライマ−（Ｃ）
及びキメラ型アンチセンスプライマー（Ｆ）を用いたＰ
ＣＲを行うことにより、（Ａ）の３’末端に（Ｂ）の
５’末端側２０乃至３０ヌクレオチドが付加したＤＮＡ
を得ることができる（この新たに得られたＤＮＡを
（Ｇ）とする。）。同様に、（Ｂ）を含む適当なベクタ
ーＤＮＡを基質にして、アンチセンスプライマー（Ｄ）
及びキメラ型センスプライマー（Ｅ）を用いたＰＣＲを
行うことにより、（Ｂ）の５’末端に（Ａ）の３’末端
側２０乃至３０ヌクレオチドが付加したＤＮＡを得るこ
とができる（この新たに得られたＤＮＡを（Ｈ）とす
る。）。このようにして得られた（Ｇ）と（Ｈ）は、
（Ｇ）の３’側４０乃至６０ヌクレオチドと（Ｈ）の
５’側４０乃至６０ヌクレオチドにおいて相補的なヌク
レオチド配列を保持している。増幅された（Ｇ）及び
（Ｈ）を混合してＰＣＲを行った場合、１回目の変性反
応で（Ｇ）と（Ｈ）は１本鎖になり、その後のアニーリ
ング反応で殆どのＤＮＡは元に戻るが、一部のＤＮＡに
ついては相補的ヌクレオチド配列領域でアニーリングす
るヘテロＤＮＡ２本鎖を形成する。その後の伸長反応
で、突出した１本鎖部分が修復され、（Ａ）と（Ｂ）が
連結したキメラ型のＤＮＡ（以下、このＤＮＡを（Ｉ）
とする。）を得ることができる。さらにこの（Ｉ）を基
質として、センスプライマー（Ｃ）とアンチセンスプラ
イマー（Ｄ）を用いＰＣＲを行うことにより、（Ｉ）を
増幅することができる。本発明では、抗ヒトＦａｓマウ
スモノクローナル抗体のＨ鎖及びＬ鎖のＣＤＲ領域をコ
ードするＤＮＡ及びヒト免疫グロブリン Ig M のＦＲ領
域をコードするＤＮＡ、さらには、ヒト免疫グロブリン
Ig M の分泌シグナルをコードするＤＮＡを、それぞれ
ケース・バイ・ケースにより（Ａ）及び（Ｂ）として上
記の連結反応を行うことができる。

【００７３】なお、所望アミノ酸に対するコドンは、そ
れ自体公知であり、その選択も任意でよく、例えば使用
する宿主のコドン使用頻度を考慮して常法に従い決定で
きる。これらヌクレオチド配列コドンの一部改変は、常
法に従い、所望の改変をコードする合成オリゴヌクレオ
チドからなるプライマーを利用したサイトスペシフィッ
ク・ミュータジェネシス（site specific mutagenesis
）（Mark, D. F., etal.(1984) Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA 81, 5662-5666参照）等に従うことができる。し
たがって、各プライマーを化学合成する際に、予め点突
然変異を導入するように各プライマーを設計することに
より、所望の抗ヒトＦａｓヒト化抗体のＨ鎖及びＬ鎖の
可変領域をコードするＤＮＡを得ることができる。

【００７４】このようにして得られた本発明の各ＤＮＡ
をそれぞれ発現ベクターに組み込むことにより、原核生
物または真核生物の宿主細胞を形質転換させることがで
きる。さらに、これらベクターに適当なプロモーターお
よび形質発現に関わる配列を導入することにより、各々
の宿主細胞において各遺伝子を発現させることが可能で
ある。

【００７５】なお、本発明の抗ヒトＦａｓヒト化抗体の
Ｌ鎖の可変領域をコードするＤＮＡを組み込んだ、４種
の形質転換体、Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨκＫＹ２−５８株、
Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨκＫＦ２−１９株、Ｅ．ｃｏｌｉ
ｐＨκＲＹ２−１０株及びＥ．ｃｏｌｉ ｐＨκＲＦ２
−５２株、並びに、本発明の抗ヒトＦａｓヒト化抗体の
Ｈ鎖の可変領域をコードするＤＮＡを組み込んだ、２種
の形質転換体、Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨμＨ５−１株及び
Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨμＭ１−１株は、平成９年（１９９
７年）３月１１日に工業技術院生命工学工業技術研究所
に国際寄託され、それぞれ受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−５
８６１、ＢＰ−５８６０、ＢＰ−５８５９及びＢＰ−５
８６２、並びに、ＢＰ−５８６３およびＦＥＲＭ ＢＰ
−５８６４が付されている。従って、該寄託菌株からプ
ラスミドを単離するか、もしくは該寄託菌株の抽出物を
鋳型にしてポリメラーゼ連鎖反応（ Polymerase Chain
Reaction :以下、「ＰＣＲ」という。）を行うなどの方
法により抗ヒトＦａｓヒト化抗体タンパク質の各サブユ
ニットをコードするＤＮＡを取得することができる。

【００７６】原核細胞の宿主としては、例えば大腸菌
（Esherichia coli ）、や枯草菌（Bacillus subtilis
）等が挙げられる。目的の遺伝子をこれらの宿主細胞
内で形質発現させるには、宿主と適合し得る種由来のレ
プリコン、即ち複製起点およびｌａｃ ＵＶ５等のプロ
モーター配列を含んでいるプラスミドベクターで宿主細
胞を形質転換すれば良い。またベクターは、形質転換細
胞に表現形質（表現型）による選択性を付与することが
できる配列を持つものが望ましい。

【００７７】例えば大腸菌としては、Ｅ． ｃｏｌｉ
Ｋ１２株由来のＪＭ１０９株等がよく用いられ、ベクタ
ーとしては、一般にｐＢＲ３２２やｐＵＣ系のプラスミ
ドがよく用いられるが、これらに限定されず、公知の各
種の菌株およびベクターがいずれも使用できる。プロモ
ーターとしては、大腸菌に於いてはラクトースプロモー
ター（ｌａｃ）やトリプトファン・ラクトースプロモー
ター（ｔｒｃ）等が挙げられるが、これらに限定されな
い。

【００７８】枯草菌としては、例えば２０７−２５株が
好ましく、ベクターとしてはｐＴＵＢ２２８（Ohmura,
K., et al.(1984) J. Biochem. 95, 87-93参照）等が用
いられるが、これに限定されない。プロモーターとして
は、枯草菌α−アミラーゼ遺伝子の調節配列がよく用い
られ、さらに必要に応じてα−アミラーゼのシグナルペ
プチド配列をコードするＤＮＡ配列を連結することによ
り、菌体外への分泌も可能となる。

【００７９】真核生物の宿主細胞には、脊椎動物、酵母
等の細胞が含まれ、脊椎動物細胞としては、例えばサル
の細胞であるＣＯＳ細胞（Gluzman, Y. (1981) Cell 2
3, 175-182 参照）等が用いられる。酵母としては、パ
ン酵母（Saccharomyces cerevisiae）や分裂酵母（Schi
zosaccharomyces pombe ）等が用いられる。ここに例示
した細胞が一般に宿主細胞としてよく用いられている
が、これらに限定されない。

【００８０】脊椎動物細胞の発現ベクターとしては、通
常は発現しようとする遺伝子の上流に位置するプロモー
ター、ＲＮＡスプライスィング部位、該遺伝子の下流に
位置するポリアデニル化部位および転写終結配列等を有
するものを使用でき、これにはさらに必要により複製起
点を有してもよい。該発現ベクターの例としては、ＳＶ
４０の初期プロモーターを有するｐＳＶ２ｄｈｆｒ（Su
bramani, S., et al.(1981) Mol. Cell. Bio. 1, 854-8
64参照）等を例示できるが、これに限定されない。

【００８１】また真核微生物としては酵母が一般によく
用いられており、パン酵母（S. cerevisiae ）が例示で
きる。酵母の発現ベクターとしては、例えばアルコール
脱水素酵素遺伝子のプロモーター（Bennetzen, J. L. a
nd Hall, B. D.(1982) J. Biol. Chem. 257, 3018-3025
参照）や、カルボキシルペプチダーゼ−Ｙ（Ichikawa,
K., et al.(1993) Biosci. Biotech. Biochem. 57, 168
6-1690参照）等を利用できる。さらに、必要によりカル
ボキシルペプチダーゼ−Ｙのシグナルペプチド配列をコ
ードするＤＮＡ配列を連結することにより、細胞外への
分泌も可能となるが、これに限定されない。

【００８２】宿主細胞として、ＣＯＳ細胞を用いる場合
を例に挙げると、発現ベクターとしては、ＳＶ４０複製
起点を有し、ＣＯＳにおいて自立増殖が可能であり、さ
らに、転写プロモーター、転写終結シグナル、およびＲ
ＮＡスプライス部位を備えたものを用いることができ
る。該発現ベクターは、ＤＥＡＥ−デキストラン法（Lu
thman, H. and Magnusson, G. (1983) Nucleic Acids R
es. 11, 1295-1308 参照）、リン酸カルシウム−ＤＮＡ
共沈法（Graham, F. L. and van der Eb, A. J.(1973)
Virology 52, 456-457 参照）および電気パルス穿孔法
（Neumann, E., et al. (1982) EMBO J. 1, 841-845 参
照）などによりＣＯＳ細胞に取り込ませることができ、
かくして所望の形質転換細胞を得ることができる。特
に、本発明の抗ヒトＦａｓヒト化抗体のＨ鎖をコードす
るＤＮＡを含むことからなる発現ベクターおよび抗ヒト
Ｆａｓヒト化抗体のＬ鎖をコードするＤＮＡを含むこと
からなる発現ベクターでＣＯＳ細胞をコ・トランスフェ
クションすることにより、抗ヒトＦａｓヒト化抗体を産
生する形質転換体を得て、これらのＤＮＡを同時に発現
させることができる。

【００８３】上記で得られる所望の形質転換体は、当業
者に周知の方法に従って培養することができ、該培養に
より、形質転換体細胞内または細胞外に抗ヒトＦａｓヒ
ト化抗体が産生される。該培養に用いられる培地として
は、採用した宿主細胞に応じて慣用される各種のものを
適宜選択でき、例えば上記ＣＯＳ細胞の場合、ＲＰＭＩ
−１６４０培地やダルベッコ修正イーグル最小必須培地
（ＤＭＥＭ）などの培地に、必要に応じウシ胎児血清
（ＦＢＳ）などの血清成分を添加したものを使用でき
る。該形質転換体の培養の際の培養温度は、細胞内のタ
ンパク質合成能を著しく低下せしめない温度であればい
ずれでもよいが、好適には３２〜４２℃、最も好適には
３７℃で培養することが好ましい。また必要に応じて、
１〜１０％（ｖ／ｖ）の炭酸ガスを含む空気中で培養す
ることができる。

【００８４】上記により形質転換体の細胞内または細胞
外に生産される本発明の抗ヒトＦａｓヒト化抗体タンパ
ク質を含む画分は、該タンパク質の物理的性質や化学的
性質等を利用した各種公知の分離操作法により、分離・
精製することができる。かかる方法としては、具体的に
は例えば通常のタンパク質沈澱剤による処理、限外濾
過、分子ふるいクロマトグラフィー（ゲル濾過）、吸着
クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、
アフィニティークロマトグラフィー、高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）等の各種クロマトグラフィー、
透析法、およびこれらの組み合わせ等を採用できる。

【００８５】上記方法により、容易に高収率、高純度で
所望の抗ヒトＦａｓヒト化抗体を製造できる。該抗体
は、ハイブリドーマにより産生されるＣＨ１１と比較す
ると、ＩｇＭを構成するＪ鎖を欠いていても、ＣＨ１１
と同等の細胞傷害活性を有する。

【００８６】このようにして作製される本発明のタンパ
ク質がヒトＦａｓ抗原と特異的に結合することを確認す
る方法としては、例えば、９６穴プレートのウェル底面
に固相化された該抗原に被検検体を接触させ、ウェルを
洗浄後ヒトＩｇＭのＨ鎖（μ鎖）を特異的に認識する酵
素標識抗体を接触させ、再び洗浄した後、ウェルに残っ
た標識物を検出する酵素免疫測定法（以下「ＥＬＩＳＡ
法」という）を例示できる。ヒトＦａｓ抗原をコードす
るｃＤＮＡは既にクローニングされており、該ｃＤＮＡ
を動物細胞に導入し発現させる方法も公知となっている
（Itoh, N., etal. (1991) Cell 66, 233-243参照）。
また、このＥＬＩＳＡ法の抗原としては、ヒトＦａｓ抗
原の細胞外領域とマウスインターロイキン３受容体の細
胞外領域との融合タンパク質をコードする遺伝子を含む
発現ベクターで形質転換された細胞の培養上清を用いる
こともできる。

【００８７】また、本発明のタンパク質がアポトーシス
誘導活性を有することは、被検検体を添加した培地中で
細胞（例えば、ヒトリンパ球細胞株ＨＰＢ−ＡＬＬ（Mo
rikawa, S., et al. (1978) Int. J. Cancer 21, 166-1
70参照）またはＪｕｒｋａｔ（American Type Culture
No. TIB-152 ）等）を培養し、その生存率をＭＴＴアッ
セイ（Green, L. M., et al. (1984) J. Immunological
Methods 70, 257-268参照）等の方法で測定することに
より確認することができる。

【００８８】本発明のＤＮＡを用いて、Ｈ鎖およびＬ鎖
の可変領域のみから構成されるＦｖ断片や、Ｈ鎖とＬ鎖
を可撓性のあるペプチドで連結させた一本鎖Ｆｖ（ｓｃ
Ｆｖ）（Huston, J. S., et al. (1988) Proc. Natl. A
cad. Sci. USA 85, 5879参照）等を遺伝子工学的手法に
より作製することが可能である。

【００８９】本発明の抗ヒトＦａｓヒト化抗体は、この
ものを有効成分とする抗リウマチ剤として使用すること
ができる。かかる抗リウマチ剤は、種々の形態で投与す
ることができる。それらの投与形態としては、錠剤、カ
プセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投
与、または、注射剤、点滴剤、坐薬などによる非経口投
与をあげることができる。

【００９０】その投与量は、症状、年令、体重などによ
って異なるが、通常、経口投与では、成人に対して、1
日約0.1mg ないし1000mgであり、これらを1 回、または
数回に分けて投与することができる。また、非経口投与
では、1 回0.1mg ないし1000mgを皮下注射、筋肉注射、
または静脈注射によって投与することができる。

【００９１】本発明で使用される抗リウマチ剤は、いず
れも遺伝子操作によりヒト化した免疫グロブリンを使用
するものであり、それらの免疫原性に伴う毒性は低い。

【００９２】以下に参考例により、ヒトＦａｓに対する
マウスモノクローナル抗体（ＣＨ１１）をコードするＤ
ＮＡのクローニングについて説明する。

【００９３】参考例１． ヒトＦａｓに対するマウスモ
ノクローナル抗体（ＣＨ１１）の可変領域をコードする
ＤＮＡのクローニング （１）ポリ（Ａ）⁺ ＲＮＡの調製 ＣＨ１１産生ハイブリドーマからの全ＲＮＡの調製は、
公知の方法（Chirgwin, J. M., et al.(1979) Biochemi
stry 18, 5294 参照）に従い実施した。すなわち、まず
ＣＨ１１産生ハイブリドーマ（Yonehara, S., et al.
(1994) International Immunology 6, 1849-1856 参
照）を、１０％のウシ胎児血清（ギブコ社製）を含むＡ
ＳＦ１０４培地（味の素（株）社製）中で培養し、約
６．７×１０⁸個の細胞を回収し、遠心して上清を除去
した。該細胞に６０ｍｌの４Ｍグアニジンチオシアネー
ト（フルカ社製）溶液を加え、ただちに混合した。２１
ゲージの注射針を付けた注射筒で吸引・排出を３回繰り
返し、細胞を溶解させた。この細胞溶解液を、超遠心用
チューブ（１３ＰＡ；日立工機（株）社製）中に入れた
３ｍｌの５．７Ｍ 塩化セシウム／０．１Ｍ ＥＤＴＡ
（ｐＨ７．５）溶液に重層し、超遠心分離（日立製作所
製ＲＰＳ−４０Ｔローター、１３ＰＡチューブ、３００
００ｒｐｍ、２０℃、１８時間）することによりＲＮＡ
を沈澱させた。該沈澱を水に溶解し、クロロホルム／１
−ブタノール（４：１、ｖ／ｖ）抽出した後、エタノー
ル沈澱を行い、全ＲＮＡを回収した。

【００９４】上記のようにして得られた全ＲＮＡからの
ポリ（Ａ）⁺ ＲＮＡの精製は文献（Maniatis, T. et a
l. (1989) in "Molecular Cloning : A Laboratory Man
ual (2nd Edition), Cold Spring Harbor Lab., 7.26-
7.28参照）に掲載されている方法に従い実施した。すな
わち、ディスポーザブルポリスチレンカラム（φ０．７
ｃｍ）にオリゴｄＴセルロース（ファルマシア社製、タ
イプ７）１００ｍｇを充填し、ローディングバッファー
（２０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ７．６）、０．５Ｍ
塩化ナトリウム、１ｍＭ エチレンジアミン四酢酸（以
下「ＥＤＴＡ」という）、０．１％ ドデシル硫酸ナト
リウム（以下「ＳＤＳ」という））にて平衡化した。約
１．２ｍｇ／４００μｌのＲＮＡを６５℃で５分間加熱
した後、４００μｌの２倍濃度のローディングバッファ
ーを加え、室温まで冷却してからカラムに注入した。素
通り画分を回収し、６５℃、５分間加熱した後、再度カ
ラムに注入した。１０ｍｌのローディングバッファーで
カラム内を洗浄した後、さらに、塩化ナトリウム濃度を
０．１Ｍに調整したローディングバッファー５ｍｌでカ
ラム内を洗浄することにより、非吸着物および非特異的
吸着物を除去した。次いで５ｍｌの溶出用緩衝液（１０
ｍＭトリス−塩酸（ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、
０．０５％ ＳＤＳ）をカラムに注入して特異的吸着物
を溶出させ、溶出液を２００μｌ毎に容器を替えて回収
した。３番目と４番目の溶出画分（計４００μｌ）に４
０μｌの３Ｍ 酢酸ナトリウム（ｐＨ４．０）および１
ｍｌのエタノールを加え、−２０℃で一晩保存した。翌
日、遠心分離（１２０００ｒｐｍ、４℃、１０分間）を
行なって沈澱を回収し、ポリ（Ａ）⁺ ＲＮＡ試料として
使用時まで−８０℃で保存した。

【００９５】（２）可変領域をコードするＤＮＡのクロ
ーニング マウス抗Ｆａｓ抗体（ＣＨ１１）のＨ鎖およびＬ鎖をコ
ードするｃＤＮＡは、以下に記載する方法、すなわち逆
転写酵素（ＲＴ）反応およびＰＣＲを組み合わせて、上
記（１）で調製したＣＨ１１産生ハイブリドーマ由来の
ポリ（Ａ）⁺ ＲＮＡ画分より任意の配列を特異的に増幅
すること（以下、この操作を「ＲＴ−ＰＣＲ」とい
う。）によりクローニングした。なお、ＲＴ−ＰＣＲ用
のプライマーとしては、Ｉｇ−プライムセット（ノバジ
ェン社製）の中から、Ｈ鎖用としてＭｕＩｇＶ_H ５’−
ＢおよびＭｕＩｇＭＶ_H ３’−１、またＬ鎖用としてＭ
ｕＩｇκＶ_L ５’−ＧおよびＭｕＩｇＭＶ_L ３’−１の
２組のプライマーセットを用いた。以下、該Ｈ鎖用また
はＬ鎖用各プライマーセットを使用したＲＴ−ＰＣＲ反
応を個別に実施した。

【００９６】ａ）逆転写酵素反応 １０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ８．３）、５０ｍＭ 塩
化カリウム、０．１ｍＭ ｄＡＴＰ、０．１ｍＭ ｄＧ
ＴＰ、０．１ｍＭ ｄＣＴＰ、０．１ｍＭ ｄＴＴＰ、
１．５ｍＭ 塩化マグネシウム、２．５ｐｍｏｌのＨ鎖
用またはＬ鎖用３’側プライマー、上記（１）で調製し
たポリ（Ａ）⁺ ＲＮＡ ５０ｎｇおよび２０単位のＭＭ
ＬＶ（Moloney murine leukemia virus ）由来の逆転写
酵素（生化学工業（株）社製）を含有する逆転写酵素反
応溶液４４μｌを４２℃にて１時間保温した。

【００９７】ｂ）ＰＣＲによる増幅 上記ａ）の逆転写酵素反応液に２５ｐｍｏｌのＨ鎖用ま
たはＬ鎖用５’側プライマーおよび５単位のＴａｑＤＮ
Ａポリメラーゼ（ＡｍｐｌｉＴａｑＤＮＡポリメラー
ゼ：パーキンエルマー・ジャパン社製）を加えた反応溶
液１００μｌを、９４℃で２分間保持した。次に９４℃
で１分間、５０℃で１分間、７２℃で２分間の温度サイ
クルを３０回繰り返した後、さらに７２℃で１０分間保
温した。なお、参考例及び実施例中のすべてのＰＣＲの
反応温度調節にはジーンアンプＰＣＲシステム９６００
（パーキンエルマー・ジャパン社製）を使用した。

【００９８】ｃ）ＰＣＲ産物の検定 上記ｂ）のＰＣＲ反応液の一部をとり、１．５％アガロ
ース（ＦＭＣバイオプロダクツ社製）ゲル電気泳動を実
施した。同一ゲルで電気泳動した分子量マーカーのバン
ドと比較することにより、ＰＣＲ産物のバンドの鎖長を
見積もった結果、Ｈ鎖用またはＬ鎖用プライマーセット
のいずれを使用した場合も約４３０ｂｐであった。

【００９９】ｄ）ＰＣＲ産物のクローニング オリジナルＴＡクローニングキット（インビトロジェン
社製）を用いて、上記ｂ）で得られた各ＰＣＲ産物をプ
ラスミドベクターに組み込んだ。すなわち、該ＰＣＲ反
応液（電気泳動検定より目的とするＰＣＲ産物約１０ｎ
ｇ相当量）とｐＣＲＩＩベクター（キットに添付）５０
ｎｇを、リガーゼ反応緩衝液（６ｍＭトリス−塩酸（ｐ
Ｈ７．５）、６ｍＭ 塩化マグネシウム、５ｍＭ 塩化
ナトリウム、７ｍＭ β−メルカプトエタノール、０．
１ｍＭ ＡＴＰ、２ｍＭ ジチオスレイトール（以下
「ＤＴＴ」という）、１ｍＭ スペルミジン、０．１ｍ
ｇ／ｍｌ ウシ血清アルブミン）中で４単位のＴ４ＤＮ
Ａリガーゼ（キットに添付）を加え、１４℃で１５時間
保温した。

【０１００】次いで、０．５Ｍ β−メルカプトエタノ
ール２μｌを加えたコンピテント大腸菌ＴＯＰ１０Ｆ’
株（キットに添付）５０μｌに上記リガーゼ反応液２μ
ｌを混ぜ合わせ、氷上で３０分間、次いで４２℃にて３
０秒間、そして再び氷上で２分間静置した。ついでＳＯ
Ｃ培地（２％ トリプトン、０．５％ イーストエキス
トラクト、０．０５％ 塩化ナトリウム、２．５ｍＭ
塩化カリウム、１ｍＭ塩化マグネシウム、２０ｍＭ グ
ルコース）５００μｌを加え、１時間往復振とう培養
（３７℃、１１０ｒｐｍ）した。該培養液を１００μｇ
／ｍｌのアンピシリンを含有するＬ−ブロス寒天培地
（１％ トリプトン、０．５％ イーストエキストラク
ト、０．５％ 塩化ナトリウム、０．１％ グルコー
ス、０．６％バクト・アガー（ディフコ社製））プレー
ト上に塗り広げ、３７℃にて一晩静置培養した。プレー
ト上に現れた単一のアンピシリン耐性コロニーを選択
し、該コロニーを白金耳で掻き取って、１００μｇ／ｍ
ｌのアンピシリンを含有するＬ−ブロス培地５ｍｌ中で
３７℃にて一晩培養した後、該培養物を遠心分離して沈
澱した菌体を回収し、アルカリ法（Maniatis, T., et a
l. (1989) in "Molecular Cloning: A Laboratory Manu
al (2nd Edition), Cold Spring Harbor Laboratory, N
Y 参照）によりプラスミドＤＮＡを調製した。こうして
得られたプラスミドを、プラスミドｐＶＨ４（Ｈ鎖用プ
ライマーセットを使用して増幅された断片を含むプラス
ミド）およびｐＶＬ８（Ｌ鎖用プライマーセットを使用
して増幅された断片を含むプラスミド）と命名した。

【０１０１】参考例２． ＣＨ１１可変領域の部分アミ
ノ酸配列およびヌクレオチド配列の決定 （１）ＣＨ１１のＨ鎖およびＬ鎖の可変領域のＮ末部分
アミノ酸配列の決定 ａ）ＣＨ１１の調製 １０％のウシ胎児血清（ギブコ社製）を含むＡＳＦ１０
４培地（味の素（株）社製）中で２×１０⁸ 細胞数まで
増殖させたＣＨ１１産生ハイブリドーマを５００ｍｌの
無血清ＡＳＦ培地で３７℃、５日間培養した。遠心分離
（トミー精工（株）社製Ｎｏ．４ローター、８０００ｒ
ｐｍ、４℃、１５分間）により、培養上清を集めた。培
養上清からのＣＨ１１モノクローナル抗体の調製は、イ
ー・ズィー・セップ（Ｅ−Ｚ−Ｓｅｐ）抗体精製キット
（ファルマシアバイオテク社製）を用いた。

【０１０２】ｂ）上記ａ）で調製したＣＨ１１（ハイブ
リドーマ培養上清１００μｌ相当分）に、１０％（ｖ／
ｖ）のβ−メルカプトエタノールおよび４％（ｗ／ｖ）
ＳＤＳを含む１００ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
６．８）１０μｌを加え、９５℃、５分間加熱し変性さ
せた。次にＳＤＳにより変性させた試料を１２％ポリア
クリルアミドゲルで電気泳動した。泳動後のゲルを、転
写緩衝液（２５ｍＭ トリス−ホウ酸（ｐＨ９．５）、
１０％メタノール（ｖ／ｖ））中に浸し、室温で１５分
間振とうした後、セミドライブロッティング装置（岩城
硝子（株）社製）を用いてポリビニリデン・ジフルオリ
ド（以下「ＰＶＤＦ」という）膜（日本ミリポア社製）
に転写した（０．２Ａ定電流、４℃、１時間）。転写後
のＰＶＤＦ膜を、０．１％クマシーブリリアントブルー
溶液で染色し、１００％メタノールで脱色した後、Ｈ
鎖、Ｌ鎖に相当する泳動度のタンパク質の染色スポット
を切り出して、室温で乾燥させた。

【０１０３】ｃ）上記ｂ）でＰＶＤＦ膜上に転写したタ
ンパク質のアミノ酸配列分析を、気相式プロテインシー
ケンサー（ＰＰＳＱ−１０；島津製作所（株）社製）を
用いて、自動エドマン法（Edman, P., et al. (1967) E
ur. J. Biochem. 1, 80 参照）により行った。

【０１０４】このようにして決定されたＣＨ１１のＨ鎖
可変領域のＮ末端部分アミノ酸配列を配列表の配列番号
１３に、同Ｌ鎖可変領域のＮ末端部分アミノ酸配列を配
列番号１４にそれぞれ示す。

【０１０５】（２）ＤＮＡのヌクレオチド配列の決定 参考例１で作製されたプラスミドｐＶＨ４およびｐＶＬ
８に挿入されている、ＣＨ１１のＨ鎖およびＬ鎖の可変
領域をコードするｃＤＮＡの全ヌクレオチド配列を、以
下に記載する方法により解析した。ｐＣＲＩＩベクター
はクローニング部位の両側にＳＰ６プロモーター配列お
よびＴ７プロモーター配列を有するので、これらの配列
に対応するオリゴヌクレオチドプライマー（パーキンエ
ルマー・ジャパン社製）を利用することにより、クロー
ニング部位に挿入されたｃＤＮＡ配列を解析することが
できる。これらのプライマーおよびダイプライマーサイ
クルシークエンシングキット（パーキンエルマー・ジャ
パン社製）を用いて、ｐＶＨ４またはｐＶＬ８を鋳型と
した配列解析用サンプルをそれぞれ調製し、ＤＮＡシー
クエンサー（モデル３７３Ａ：パーキンエルマー・ジャ
パン社製）を用いて各ｃＤＮＡの配列を決定した。各ｃ
ＤＮＡのヌクレオチド配列を配列表の配列番号１５（Ｈ
鎖可変領域）および１６（Ｌ鎖可変領域）にそれぞれ示
す。

【０１０６】配列表の配列番号１３のアミノ酸番号１〜
１５で示されるＣＨ１１のＨ鎖のＮ末端部分アミノ酸配
列は、配列番号１５のヌクレオチド番号３２〜７６で示
されるヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列と完
全に一致しており、プラスミドｐＶＨ４はＣＨ１１のＨ
鎖可変領域をコードする遺伝子を含んでいることが確認
された。

【０１０７】配列表の配列番号１４のアミノ酸番号１〜
２１に示されるＣＨ１１のＬ鎖のＮ末端部分アミノ酸配
列は、配列番号１６のヌクレオチド番号２９〜９１に示
されるヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列と完
全に一致しており、プラスミドｐＶＬ８はＣＨ１１のＬ
鎖可変領域をコードする遺伝子を含んでいることが確認
された。 参考例３． ＣＨ１１Ｈ鎖、Ｌ鎖およびＪ鎖の全長をコ
ードするＤＮＡのクローニング （１）ｃＤＮＡライブラリーの作製 ｃＤＮＡライブラリーの作製は、オカヤマ−バーグ法
（Okayama, H., et al.(1987) Methods in Enzymology
154, 3-28参照）に従って実施した。すなわち、まず７
５単位のＡＭＶ（Avian myeloblastosis virus）由来逆
転写酵素（生化学工業（株）社製）を含む３０μｌの反
応液（５０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ８．３）、６ｍＭ
塩化マグネシウム、４０ｍＭ 塩化カリウム、２ｍＭ
ｄＡＴＰ、２ｍＭ ｄＧＴＰ、２ｍＭ ｄＣＴＰ、２
ｍＭ ｄＴＴＰ、２μｇベクタープライマー（３’−オ
リゴ（ｄＴ）−テイルド・ｐｃＤＶ−１；ファルマシア
社製）中に参考例１（１）で調製したＣＨ１１産生ハイ
ブリドーマ由来のポリ（Ａ）⁺ ＲＮＡ ５μｇを添加し
て、３７℃で３０分間保温した。

【０１０８】次いで、該反応液に等量のフェノール−ク
ロロホルム（１：１、ｖ／ｖ）を添加して混合し、遠心
分離（１２０００ｒｐｍ、室温、５分間）した後、水層
を回収した（以下、この操作を「フェノール−クロロホ
ルム抽出」という）。この水層に、３５μｌの４Ｍ 酢
酸アンモニウムと１４０μｌのエタノールを加え、−７
０℃で１５分間冷却した後、遠心分離（１２０００ｒｐ
ｍ、４℃、１５分間）して上清を除去し、７５％エタノ
ールで沈澱を洗った後、減圧乾燥した。

【０１０９】乾燥した沈澱を１３μｌの蒸留水に溶解
し、５．６μｌのターミナルトランスフェラーゼ反応液
（１４０ｍＭ カコジル酸ナトリウム、３０ｍＭ トリ
ス−塩酸（ｐＨ６．８）、１ｍＭ 塩化コバルト、０．
５ｍＭ ＤＴＴ、０．３μｇポリアデニル酸（ｐｏｌｙ
（Ａ）；ファルマシア社製）、０．２ｍＭ ｄＣＴＰ）
を加えた。この反応液を３７℃で５分間保温したのち、
２１単位のターミナルデオキシヌクレオチジルトランス
フェラーゼ（ファルマシア社製）を加え、５分間反応さ
せた。その後、該反応液に対してフェノール−クロロホ
ルム抽出を行い、水層を回収した。次いで、該水層に２
０μｌの４Ｍ酢酸アンモニウム、８０μｌのエタノール
を加え、−７０℃で１５分間冷却した後、遠心分離（１
２０００ｒｐｍ、４℃、１５分間）して上清を除去し
た。沈澱を７５％エタノールで洗った後、減圧乾燥し
た。

【０１１０】この沈澱を３０μｌの反応液中（１０ｍＭ
トリス−塩酸（ｐＨ７．５）、６０ｍＭ 塩化ナトリ
ウム、７ｍＭ 塩化マグネシウム）に溶解し、３０単位
の制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩを添加して、３７℃で一晩消
化した。次に、フェノール−クロロホルム抽出を行って
水層を回収した。ついで、該水層に、３５μｌの４Ｍ酢
酸アンモニウム、１４０μｌのエタノールを加え、−７
０℃で１５分間冷却した。次いで遠心分離（１２０００
ｒｐｍ、４℃、１５分間）により沈澱を回収し、７５％
エタノールで沈澱を洗った後、減圧乾燥したものをｃＤ
ＮＡ試料とした。

【０１１１】一方、プラスミドベクターｐｃＤＬ−ＳＲ
α２９６（武部 豊ら、(1989) 実験医学 ７巻、９５
−９９参照）を制限酵素ＰｓｔＩで消化し、さらにその
３’末端にターミナルデオキシヌクレオチジルトランス
フェラーゼ（ファルマシア社製）によりｄＧＴＰを付加
させた。次いで、このものを制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩで
消化することにより、ＳＲαプロモーターにオリゴ（ｄ
Ｇ）が付加されたオリゴ（ｄＧ）付きリンカーＤＮＡを
作製した。

【０１１２】上記 ｃＤＮＡ試料を１０μｌのＴＥ緩衝
液（１０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ７．５）、１ｍＭ
ＥＤＴＡ）に溶解した。この溶液の１μｌを上記オリゴ
（ｄＧ）付きリンカーＤＮＡ ０．０８ｐｍｏｌを含む
反応用緩衝液（１０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ７．
５）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１００ｍＭ 塩化ナトリウ
ム）に加え、６５℃、５分間加熱し、ついで４２℃、３
０分間保温した。該反応液に、１０μｌの１０倍濃度リ
ガーゼ緩衝液（１０ｍＭ ＡＴＰ、６６０ｍＭ トリス
−塩酸（ｐＨ７．５）、６６ｍＭ 塩化マグネシウム、
１００ｍＭ ＤＴＴ）、７６μｌの蒸留水、１μｌの１
０ｍＭ β−ニコチンアミド・アデニン・ジヌクレオチ
ド（以下「ＮＡＤ」という；ベーリンガー・マンハイム
社製）を加え、氷上で１０分間冷却した後、８．４μｇ
相当の大腸菌ＤＮＡリガーゼ（ファルマシア社製）を加
え、１２℃で一晩保温した。

【０１１３】次に、２μｌのヌクレオチド溶液（２ｍＭ
ｄＡＴＰ、２ｍＭ ｄＣＴＰ、２ｍＭ ｄＧＴＰ、２
ｍＭ ｄＴＴＰ）、０．５μｌの１０ｍＭ ＮＡＤ、４
２μｇ相当の大腸菌ＤＮＡリガーゼ（ファルマシア社
製）、４．１単位のＤＮＡポリメラーゼＩ（ファルマシ
ア社製）、５．５単位のリボヌクレアーゼＨ（ファルマ
シア社製）を加え、１２℃で１時間、次いで２２℃で１
時間反応させた。このようにして作製されたｃＤＮＡラ
イブラリーを使用時まで−２０℃で保存した。

【０１１４】（２）ＰＣＲによるクローニング ａ）プライマーの作製 Ｈ鎖： 参考例２において決定されたＣＨ１１のＨ鎖の
可変領域のアミノ酸配列について、カバトら（Kabat E.
A. et al., (1991) in "Sequences of Proteins of Im
munological Interest Vol.II", U.S. Department of H
ealth and Human Services参照）により作成された抗体
のアミノ酸配列データベースと比較検討したところ、Ｃ
Ｈ１１のＨ鎖（μ鎖）はサブクラス２ａであることが判
明した。そこで、まず該データベース中のマウスＨ鎖サ
ブクラス２ａ型をコードするＤＮＡの５’側非翻訳領域
の一部とハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライ
マー： 5'- CTAAGGGAAT TCCGCCTCTC CTCAGACACT GAA -3'（Ｈ５
−１；配列表の配列番号１７） を合成した。また、ゴールドバーグらにより報告された
マウスイムノグロブリンμ鎖定常領域をコードするＤＮ
Ａのヌクレオチド配列（Goldberg, I. G., et al. (198
1) Gene 15, 33-42 参照）を基に、その３’非翻訳領域
のヌクレオチド配列の一部とハイブリダイズするオリゴ
ヌクレオチドプライマー： 5'- TTTTACTCTA GAGACCCAAG GCCTGCCTGG TTGA -3' （Ｈ
３−１；配列表の配列番号１８） を合成した。

【０１１５】Ｌ鎖： 参考例２において決定されたＣＨ
１１のＬ鎖の可変領域のアミノ酸配列について、前記カ
バトらにより作成された抗体のアミノ酸配列データベー
スと比較検討したところ、ＣＨ１１のＬ鎖はサブクラス
κ２であることが判明した。そこで、まず該データベー
ス中のマウスＬ鎖サブクラスκ２型をコードするＤＮＡ
の５’側非翻訳領域の一部とハイブリダイズするオリゴ
ヌクレオチドプライマー： 5'- AAATAGGAAT TCCAGTCTCC TCAGGCTGTC TCC -3'（Ｌ５
−１；配列表の配列番号１９） を合成した。また、遺伝子配列データベースＧｅｎｂａ
ｎｋに登録名ＭＵＳＩＧＢ１Ｌ１（受入番号Ｄ１４６３
０）として登録されているマウスイムノグロブリンκ鎖
定常領域をコードするＤＮＡのヌクレオチド配列を基
に、その３’非翻訳領域のヌクレオチド配列の一部とハ
イブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー： 5'- ATGATCTCTA GAGTGGTGGC ATCTCAGGAC CT -3' （Ｌ３
−１；配列表の配列番号２０） を合成した。

【０１１６】Ｊ鎖： マウスＪ鎖は可変領域を有さず、
その全アミノ酸配列および該配列をコードするＤＮＡの
配列は公知である（Cann, G. M., et al. (1982) Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 79, 6656-6660 参照）。この知
見に基づき、Ｊ鎖をコードするＤＮＡの５’および３’
側の非翻訳領域の一部とハイブリダイズするオリゴヌク
レオチドプライマー： 5'- TTGCGGAATT CCTCACCTGT CCTGGGGTTA TT -3' （Ｊ５
−１；配列表の配列番号２１）および 5'- ATTGCCTCTA GAGCCTCTAA GGACAACGAG CT -3' （Ｊ３
−１；配列表の配列番号２２） を合成した。

【０１１７】これらのオリゴヌクレオチドプライマーは
すべて自動ＤＮＡ合成機３８０Ｂ（パーキンエルマー・
ジャパン社製）を用いて、ホスホアミダイド法（Mattru
cci,M. D. and Caruthers, M. H. (1981) J. Am. Che
m. Soc. 103, 3185-3191参照）で合成した。各プライマ
ーは合成終了後、支持体から開裂、脱保護したのち凍結
乾燥した。これらを蒸留水に溶解し、使用時まで−２０
℃にて保存した。

【０１１８】ｂ）ＰＣＲによる標的遺伝子の増幅 １０ｍＭ トリス−塩酸（ｐＨ８．３）、５０ｍＭ 塩
化カリウム、１．５ｍＭ 塩化マグネシウム、２．５ｍ
Ｍ ｄＡＴＰ、２．５ｍＭ ｄＧＴＰ、２．５ｍＭ ｄ
ＣＴＰ、２．５ｍＭ ｄＴＴＰ、参考例４（１）に記載
のｃＤＮＡライブラリー０．１μｌ、１単位のＴａｑ
ＤＮＡポリメラーゼ（パーキンエルマー・ジャパン社
製）および上記ａ）で作製した各１５ｐｍｏｌのオリゴ
ヌクレオチドプライマーを含有するＰＣＲ反応溶液１０
０μｌを、９４℃で２分間加熱した。次いで９４℃で１
分間、５５℃で１分間、７２℃で２分間の温度サイクル
を３０回繰り返した後、さらに７２℃で１０分間保温し
た。各反応のプライマーの組み合わせは以下の通りであ
った： Ｈ５−１とＨ３−１（Ｈ鎖用）； Ｌ５−１とＬ３−１（Ｌ鎖用）； Ｊ５−１とＪ３−１（Ｊ鎖用）。

【０１１９】ｃ）ＰＣＲ産物の検定 上記ｂ）のＰＣＲ終了後の反応液の一部をとり、それぞ
れ０．８％（Ｈ鎖）および１．５％（Ｌ鎖およびＪ鎖）
アガロース（ＦＭＣバイオプロダクツ社製）ゲル電気泳
動を実施した。同時に電気泳動した分子量マーカーのバ
ンドの泳動度から見積もった結果、それぞれのプライマ
ーの組み合わせによるＰＣＲ産物の鎖長は、約１９００
ｂｐ（Ｈ鎖）、８００ｂｐ（Ｌ鎖）および６５０ｂｐ
（Ｊ鎖）であった。

【０１２０】ｄ）ＰＣＲ産物のクローニング 上記ｂ）で得られたＰＣＲ産物をプラスミドベクターに
組み込むために、真核生物用ＴＡクローニングキット
（インビトロジェン社製）を用いた。すなわち、各ＰＣ
Ｒ反応液（電気泳動検定より目的とするＰＣＲ産物約１
０ｎｇ相当量）とｐＣＲ３ベクター（キットに添付）６
０ｎｇを含むリガーゼ反応緩衝液（６ｍＭトリス−塩酸
（ｐＨ７．５）、６ｍＭ 塩化マグネシウム、５ｍＭ
塩化ナトリウム、７ｍＭ β−メルカプトエタノール、
０．１ｍＭ ＡＴＰ、２ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭ スペル
ミジン、０．１ｍｇ／ｍｌ ウシ血清アルブミン）中に
４単位のＴ４ＤＮＡリガーゼを加え、１４℃で１５時間
保温した。

【０１２１】次いで０．５Ｍ β−メルカプトエタノー
ル ２μｌを加えたコンピテント大腸菌ＴＯＰ１０Ｆ’
株（キットに添付）５０μｌに上記リガーゼ反応液２μ
ｌを混ぜ合わせ、氷上に３０分間静置した後、４２℃で
３０秒間加温してから再び氷上に２分間静置した。この
ものにＳＯＣ培地５００μｌを加え、３７℃で１時間往
復振とう培養（１１０ｒｐｍ）した。この培養液を１０
０μｇ／ｍｌのアンピシリンを含有するＬ−ブロス寒天
培地プレート上に塗り広げ、３７℃にて一晩培養した。
プレート上に現れたアンピシリン耐性の単一コロニーを
白金耳で掻き取り、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを
含有するＬ−ブロス培地５ｍｌ中で３７℃にて一晩培養
した。該培養液を遠心分離して菌体を回収し、アルカリ
法に従ってプラスミドＤＮＡを調製した。

【０１２２】上記のごとくして得られたプラスミドはそ
れぞれｐＣＲ３−Ｈ１２３（Ｈ鎖をコードするｃＤＮＡ
を含む）、ｐＣＲ３−Ｌ１０３（Ｌ鎖をコードするｃＤ
ＮＡを含む）およびｐＣＲ３−Ｊ１１２３（Ｊ鎖をコー
ドするｃＤＮＡを含む）と命名された。また、これらの
プラスミドを保持する形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＣ
Ｒ３−Ｈ１２３、Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＣＲ３−Ｌ１０３お
よびＥ．ｃｏｌｉｐＣＲ３−Ｊ１１２３は、１９９６
（平成８）年２月２８日付で工業技術院生命工学工業技
術研究所に国際寄託され、それぞれ受託番号ＦＥＲＭ
ＢＰ−５４２７、ＦＥＲＭ ＢＰ−５４２８およびＦＥ
ＲＭ ＢＰ−５４２９が付された。従って、ＣＨ１１Ｈ
鎖、Ｌ鎖およびＪ鎖をコードするＤＮＡはそれぞれ該寄
託菌株から当業者に周知の方法を用いて調製することが
できる。

【０１２３】参考例４． ＣＨ１１Ｈ鎖、Ｌ鎖、Ｊ鎖を
コードするｃＤＮＡの全ヌクレオチド配列の決定 （１）ＤＮＡのヌクレオチド配列の決定 マウスイムノグロブリンμ鎖は、そのＮ末端から約１１
０残基の可変領域およびそれに隣接する約４７０残基の
定常領域からなる。またマウスイムノグロブリンκ鎖
は、そのＮ末端から約１１０残基の可変領域およびそれ
に隣接する１０７残基の定常領域からなる。これらのこ
とから、ＣＨ１１Ｈ鎖およびＬ鎖をコードするｃＤＮＡ
の全ヌクレオチド配列は、参考例２で明らかとなった各
鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列に、それぞ
れ既知の定常領域をコードするヌクレオチド配列（Kaba
t E. A. et al., (1991) in "Sequences of Proteins o
f Immunological Interest Vol.II", U.S. Department
of Health and Human Services参照）が連結しているも
のと推定された。また、Ｊ鎖をコードするヌクレオチド
配列は公知の配列と同一であると推定された。そこで、
これらの推定されるヌクレオチド配列を基に、６０乃至
２００ｂｐの間隔で、２０ヌクレオチドからなる配列に
対応するオリゴヌクレオチドプライマーを合成し、配列
解析サンプル調製のために使用した。以下に記載する各
ヌクレオチド配列を有するオリゴヌクレオチドプライマ
ーを合成した。： Ｈ鎖用： 5'- TGGGGCCTCA GTGAAGATAT -3' （SHF-2; 配列表の配列番号２３） 5'- CAATGGTGGT ACTGGCTACA -3' （SHF-3; 配列表の配列番号２４） 5'- TGACATCTGA GGACTCTGCA -3' （SHF-4; 配列表の配列番号２５） 5'- TCCTCAGAGA GTCAGTCCTT -3' （SHF-6; 配列表の配列番号２６） 5'- TCCTTCACCT GGAACTACCA -3' （SHF-7; 配列表の配列番号２７） 5'- TCCCAAGAGC ATCCTTGAAG -3' （SHF-8; 配列表の配列番号２８） 5'- AGATCTGCAT GTGCCCATTC -3' （SHF-9; 配列表の配列番号２９） 5'- TCTAAACTCA TCTGCGAGGC -3' （SHF-10; 配列表の配列番号３０） 5'- GGTGACCATC GAGAACAAAG -3' （SHF-11; 配列表の配列番号３１） 5'- AGGGGTCTCA CCTTCTTGAA -3' （SHF-12; 配列表の配列番号３２） 5'- TCCTTTGCCG ACATCTTCCT -3' （SHF-13; 配列表の配列番号３３） 5'- GTGTGTACTG TGACTCACAG -3' （SHF-15; 配列表の配列番号３４） 5'- AACTGAACCT GAGGGAGTCA -3' （SHF-16; 配列表の配列番号３５） 5'- AACTCTTGCC CCAAGAGAAG -3' （SHF-17; 配列表の配列番号３６） 5'- ATCCTGACTG TGACAGAGGA -3' （SHF-18; 配列表の配列番号３７） 5'- ACAAGTCCAC TGGTAAACCC -3' （SHF-19; 配列表の配列番号３８） 5'- AGGATATCTT CACTGAGGCC -3' （SHR-1; 配列表の配列番号３９） 5'- ATCCACTCAA GGCTCTTTCC -3' （SHR-2; 配列表の配列番号４０） 5'- ACTGCAGAGT CCTCAGATGT -3' （SHR-3; 配列表の配列番号４１） 5'- AGACGGTGAC TGAGGTTCTT -3' （SHR-4; 配列表の配列番号４２） 5'- CAGGTGAAGG AAATGGTGCT -3' （SHR-5; 配列表の配列番号４３） 5'- ATGCTCTTGG GAGACAGCAA -3' （SHR-6; 配列表の配列番号４４） 5'- CTCTGTTTTT GCCTCCGTAG -3' （SHR-7; 配列表の配列番号４５） 5'- TGGCCTCGCA GATGAGTTTA -3' （SHR-8; 配列表の配列番号４６） 5'- CCTTTGTTCT CGATGGTCAC -3' （SHR-9; 配列表の配列番号４７） 5'- TGTGGAGGAC ACGTTCTTCA -3' （SHR-10; 配列表の配列番号４８） 5'- ACTTTGAGAA GCCCAGGAGA -3' （SHR-12; 配列表の配列番号４９） 5'- AGATCCCTGT GAGTCACAGT -3' （SHR-13; 配列表の配列番号５０） 5'- AGCAGGTGGA TGTTTGTGCA -3' （SHR-14; 配列表の配列番号５１） 5'- TGAAGCCACT GCACACTGAT -3' （SHR-15; 配列表の配列番号５２） 5'- AGTTCCATTC CTCCTCTGTC -3' （SHR-16; 配列表の配列番号５３） 5'- TGTGTCAGAC ATGATCAGGG -3' （SHR-18; 配列表の配列番号５４） Ｌ鎖用： 5'- TGAAGTTGCC TGTTAGGCTG -3' （SLF-1; 配列表の配列番号５５） 5'- CTTGGAGATC AAGCCTCCAT -3' （SLF-2; 配列表の配列番号５６） 5'- GCTGAGGATC TGGGAGTTTA -3' （SLF-3; 配列表の配列番号５７） 5'- GATGCTGCAC CAACTGTATC -3' （SLF-4; 配列表の配列番号５８） 5'- CGACAAAATG GCGTCCTGAA -3' （SLF-5; 配列表の配列番号５９） 5'- ACGTTGACCA AGGACGAGTA -3' （SLF-6; 配列表の配列番号６０） 5'- ATCTGCAAGA GATGGAGGCT -3' （SLR-2; 配列表の配列番号６１） 5'- ACCCCAGAAA ATCGGTTGGA -3' （SLR-3; 配列表の配列番号６２） 5'- CCGGAGGAAC ATGTGTACTT -3' （SLR-4; 配列表の配列番号６３） 5'- TCGTTCATAC TCGTCCTTGG -3' （SLR-6; 配列表の配列番号６４） 5'- CATCTCAGGA CCTTTGTCTC -3' （SLR-7; 配列表の配列番号６５） Ｊ鎖用： 5'- CACCTGTCCT GGGGTTATTT -3' （SJF-1; 配列表の配列番号６６） 5'- AGACAAGATG AAGACCCACC -3' （SJF-2; 配列表の配列番号６７） 5'- AAGCGACCAT TCTTGCTGAC -3' （SJF-3; 配列表の配列番号６８） 5'- ATATCTCTGA TCCCACCTCC -3' （SJF-8; 配列表の配列番号６９） 5'- GAAATGCGAT CCTGTGGAAG -3' （SJF-5; 配列表の配列番号７０） 5'- CTATACCACT ATGGTCCCAC -3' （SJF-6; 配列表の配列番号７１） 5'- AGAAGCAGGT GGGTCTTCAT -3' （SJR-2; 配列表の配列番号７２） 5'- TAGAGGTAAC TCGGGTACAC -3' （SJR-3; 配列表の配列番号７３） 5'- AAGTTCCTTC TCAGTGGGGA -3' （SJR-8; 配列表の配列番号７４） 5'- GGTGGCAGTA ACAACCTGAT -3' （SJR-5; 配列表の配列番号７５） 5'- CATGATACCT AAGTGGGACC -3' （SJR-6; 配列表の配列番号７６） 各オリゴヌクレオチドプライマーは自動ＤＮＡ合成機
（モデル３８０Ｂ：パーキンエルマー・ジャパン社製）
により前出ホスホアミダイト法で合成された。プラスミ
ドｐＣＲ３−Ｈ１２３、プラスミドｐＣＲ３−Ｌ１０
３、またはプラスミドｐＣＲ３−Ｊ１１２３を鋳型と
し、上記プライマーおよびプリズム・レディ・リアクシ
ョン・ターミネーター・サイクル・シークエンシングキ
ット（パーキンエルマー・ジャパン社製）を用いて、配
列解析用サンプルを調製した。以下にその調製の一例を
記載する。

【０１２４】例： １．５μｇのｐＣＲ３−Ｈ１２３と
４．８ｐｍｏｌのプライマー（SHF-2 ）を混合し、１６
μｌに調整した。キット添付のプレミックス（ＴａｑＤ
ＮＡポリメラーゼを含む）１０．５μｌに、９．５μｌ
のｐＣＲ３−Ｈ１２３／プライマー混合液を加え、自動
反応装置（カタリスト：パーキンエルマー・ジャパン社
製）の所定の位置にセットして反応（９５℃で３０秒、
５０℃で１５秒、６０℃で４分の温度サイクルを２５サ
イクル繰り返す）を行わせた。反応終了後のサンプルに
滅菌水８０μｌを加えてから、フェノール・クロロホル
ム抽出を２回行った後、水層に２Ｍ酢酸ナトリウム１５
μｌおよびエタノール３００μｌを加え、遠心分離を行
って沈澱を回収した。この沈澱を７０％エタノールで洗
浄後、減圧乾燥してから、３μｌの試料溶液（０．２５
Ｍ ＥＤＴＡ ４μｌ、ホルムアミド １００μｌ、滅
菌水 １６μｌを混合したもの）に溶解した。

【０１２５】上記のようにして調製されたＨ鎖用３２サ
ンプル、Ｌ鎖用１１サンプルおよびＪ鎖用１１サンプル
の各配列解析用サンプルについて、ＤＮＡシークエンサ
ー（モデル３７３Ａ：パーキンエルマー・ジャパン社
製）を用いて配列を解析し、各サンプルの解析データを
統合することにより、ＣＨ１１の各サブユニットをコー
ドするＤＮＡのヌクレオチド配列を決定した。各プラス
ミドのｃＤＮＡヌクレオチド配列を配列表の配列番号
７、９および１１にそれぞれ示す。また、これらのヌク
レオチド配列より推定される各アミノ酸配列を配列表の
配列番号８、１０および１２にそれぞれ示す。

【０１２６】（２）ＣＨ１１のＨ鎖の一次構造 配列表の配列番号７のヌクレオチド番号５８〜４０５に
示されるヌクレオチド配列は、配列番号１５のヌクレオ
チド番号３２〜３７９に示されるＨ鎖可変領域のヌクレ
オチド配列と完全に一致していた。カバトら（Kabat E.
A. et al., (1991) in "Sequences of Proteins of Im
munological Interest Vol.II", U.S. Department of H
ealth and Human Services参照）による抗体のアミノ酸
配列のデータベースとの相同性を比較検討した結果、配
列番号８のアミノ酸番号１１７〜５７１に示されるアミ
ノ酸配列は、マウスＩｇＭ由来のＨ鎖定常領域のアミノ
酸配列と完全に一致していた。また、配列番号８のアミ
ノ酸番号−１９〜−１に示されるアミノ酸配列はＣＨ１
１のＨ鎖のシグナル配列と決定された。さらに配列番号
７のヌクレオチド番号４０６〜１７７０に示されるヌク
レオチド配列は、マウスＩｇＭ由来のＨ鎖定常領域のヌ
クレオチド配列と完全に一致していた。以上の結果よ
り、ＣＨ１１のＨ鎖の全アミノ酸配列が決定され、該ア
ミノ酸配列をコードするＤＮＡが提供された。

【０１２７】（３）ＣＨ１１Ｌ鎖の一次構造 配列表の配列番号１６のヌクレオチド番号２９〜３６４
に示されるＬ鎖可変領域のヌクレオチド配列は、配列番
号９のヌクレオチド番号５８〜３９３に示されるヌクレ
オチド配列と完全に一致していた。上記（２）と同様に
抗体のアミノ酸配列のデータベースとの相同性を比較検
討した結果、配列番号１０のアミノ酸番号１１３〜２１
９に示されるアミノ酸配列は、マウスのκＬ鎖定常領域
のアミノ酸配列と完全に一致していた。また、配列番号
１０のアミノ酸番号−１９〜−１に示されるアミノ酸配
列は、Ｌ鎖のシグナル配列と決定された。さらに配列番
号９のヌクレオチド番号３９４〜７１４に示されるヌク
レオチド配列は、マウスのκＬ鎖定常領域のヌクレオチ
ド配列と完全に一致していた。以上の結果より、ＣＨ１
１のＬ鎖の全アミノ酸配列が決定され、該アミノ酸配列
をコードするＤＮＡが提供された。

【０１２８】（４）ＣＨ１１のＪ鎖の一次構造 配列表の配列番号１２のアミノ酸番号１〜１３７に示さ
れるアミノ酸配列について、上記（２）および（３）と
同様に抗体のアミノ酸配列のデータベースとの相同性を
比較検討した結果、該アミノ酸配列は公知のマウスのＪ
鎖のアミノ酸配列と完全に一致していた。また同様に、
配列番号１１のヌクレオチド番号６７〜４７７に示され
るヌクレオチド配列は、公知のマウスのＪ鎖のヌクレオ
チド配列と完全に一致していた。さらに配列番号１２の
アミノ酸番号−２２〜−１に示されるアミノ酸配列は、
ＣＨ１１のＪ鎖のシグナル配列と決定された。以上より
ＣＨ１１Ｊ鎖のアミノ酸配列が決定され、該アミノ酸配
列をコードするＤＮＡが提供された。

【０１２９】（５）ＣＤＲの決定 上記のごとく決定されたＣＨ１１のＨ鎖およびＬ鎖の可
変領域のアミノ酸配列における、それぞれのＣＤＲの位
置および配列は、カバトらの文献（Kabat E. A. et a
l., (1991) in "Sequences of Proteins of Immunologi
cal Interest Vol.II", U.S. Department of Health an
d Human Services参照）による抗体のアミノ酸配列のデ
ータベースとの相同性を比較検討することによって決定
された。該文献によれば、異なる抗体間でもサブタイプ
が同じであれば可変領域中のフレームワーク領域の鎖長
はほぼ一定であり、またそのアミノ酸配列には共通性が
みられる。一方、ＣＤＲはそれらフレームワーク領域に
はさまれて存在する、各抗体に固有の配列である。ＣＨ
１１のＨ鎖の可変領域のアミノ酸配列を、該データベー
ス中のマウスμ２ａサブタイプの配列と比較した結果、
ＣＨ１１のＨ鎖のＣＤＲは配列表の配列番号８のアミノ
酸番号３１〜３５（ＣＤＲＨ₁ ：配列表の配列番号
１）、同アミノ酸番号５０〜６６（ＣＤＲＨ₂ ：配列表
の配列番号２）および同アミノ酸番号９９〜１０５（Ｃ
ＤＲＨ₃ ：配列表の配列番号３）で示されるアミノ酸配
列と決定された。また、ＣＨ１１のＬ鎖の可変領域のア
ミノ酸配列を、該データベース中のマウスκ２サブタイ
プの配列と比較した結果、Ｌ鎖のＣＤＲは配列表の配列
番号１０のアミノ酸番号２４〜３９（ＣＤＲＬ₁ ：配列
表の配列番号４）、同アミノ酸番号５５〜６１（ＣＤＲ
Ｌ₂ ：配列表の配列番号５）および同アミノ酸番号９４
〜１０２（ＣＤＲＬ₃ ：配列表の配列番号６）で示され
るアミノ酸配列と決定された。

【０１３０】

【実施例】以下実施例により本発明をさらに詳細に説明
するが、本発明はこれらに限定されない。

【０１３１】実施例１．ＣＨ１１の可変領域の分子モデ
リング ＣＨ１１の可変領域の分子モデリングは、一般にホモロ
ジーモデリングとして知られる手法（ Methods in Enzy
mology, 203, p121-153, (1991) 参照）を用いて行っ
た。すなわち、プロテイン・データ・バンク（ Protein
Data Bank : Chemistry Department, Building 555, B
rookheaven National Laboratory, P.O. BOX 5000, Upt
on, NY 11973-5000, U.S.A. 参照：以下、「ＰＤＢ」と
いう。）に登録されている、Ｘ線結晶構造解析が行われ
たヒト免疫グロブリンの可変領域の一次配列を、ＣＨ１
１のフレームワーク部分と比較し、相同性の最も高いフ
レームワークの３次元構造として、Ｌ鎖については１Ｎ
ＢＶ、Ｈ鎖として１ＩＧＩを選択した。両者を組み合わ
せて、フレームワーク部分の３次元構造（以下、「フレ
ームワークモデル」という。）を構築した。チョッチア
らの分類に従うと、ＣＨ１１のＣＤＲのうち、ＣＤＲＬ
₁ はカノニカルクラス４、以下、ＣＤＲＬ₂ はカノニカ
ルクラス１、ＣＤＲＬ₃ はカノニカルクラス１、ＣＤＲ
Ｈ₁ はカノニカルクラス１に分類された。ＣＤＲＨ₂ 、
ＣＤＲＨ₃ は、特定のカノニカルクラスに対応しなかっ
た。ＣＤＲＬ₁ 乃至ＣＤＲＬ₃ 及びＣＤＲＨ₁ のＣＤＲ
ループは、各カノニカルクラス固有のコンホメーション
に固定し、フレームワークモデルに組み込んだ。ＣＤＲ
Ｈ₂ 、ＣＤＲＨ₃ については、相同性の高い配列のコン
ホメーションをＰＤＢより検索し、エネルギー計算を併
用する事によって、もっとも確からしいＣＤＲループの
コンホメーションを構築し、フレームワークモデルに組
み込んだ。最終的には、エネルギー的に不利な原子間の
接触をなくすようにエネルギー計算を行い、ＣＨ１１の
分子モデルを得た。上述の操作は市販の一般的な分子モ
デリングシステムを用いて行い得るが、本発明では、Ａ
ｂＭ（オックスフォード・モレキュラー・リミティッド
社製）を用いた。

【０１３２】得られた分子モデルについては、ソフトウ
エアのプロチェック（ PROCHECK ：J. Appl. Cryst. (1
993) 26, 283-291）を用いて、構造の精度を評価した
後、各残基の表面露出度を計算し、原子間接触の有無を
検索した。

【０１３３】実施例２．アクセプターの選択 ＣＨ１１のＬ鎖、Ｈ鎖の配列は、ヒト抗体の個々のサブ
グループのコンセンサス配列と比較された。ＣＨ１１Ｌ
鎖はヒト・サブグループ・kappa IIと８３％、ＣＨ１１
Ｈ鎖はヒト・サブグループＩと７４％の同一性を示した
ので、配列相同性に基づき、アクセプターとして、それ
ぞれのサブグループに属するヒト抗体の中からＬ鎖とし
てはRPMI6410'CL 、Ｈ鎖としては21・28'CLを選択した。

【０１３４】実施例３．アクセプターに移植するドナー
残基の選択 ソフトウェアのカメレオン（オックスフォード・モレキ
ュラー・リミティッド社製）を用いて、ＣＨ１１のＬ
鎖、Ｈ鎖それぞれとアクセプターのアクセプターのアミ
ノ酸配列を整列し、先に述べたａ）からｅ）の規範に従
いヒト化配列をデザインした。抗ヒトFas ヒト化抗体及
びそれをコードするＤＮＡのヌクレオチド配列として、
以下の候補を選択した：L 鎖（κ鎖）としては、VL-KY
鎖と命名されるポリペプチド鎖（配列番号７８）及びそ
れをコードするＤＮＡヌクレオチド配列（配列番号７
７）。

【０１３５】VL-KF鎖と命名されるポリペプチド鎖（配
列番号８０）及びそれをコードするＤＮＡヌクレオチド
配列（配列番号７９）。

【０１３６】VL-RY鎖と命名されるポリペプチド鎖（配
列番号８２）及びそれをコードするＤＮＡヌクレオチド
配列（配列番号８１）。

【０１３７】VL-RF鎖と命名されるポリペプチド鎖（配
列番号８４）及びそれをコードするＤＮＡヌクレオチド
配列（配列番号８３）。

【０１３８】H 鎖（μ鎖）としては、H μH 鎖と命名さ
れるポリペプチド鎖（配列番号８６）及びそれをコード
するＤＮＡヌクレオチド配列（配列番号８５）。

【０１３９】H μM 鎖と命名されるポリペプチド鎖（配
列番号８８）及びそれをコードするＤＮＡヌクレオチド
配列（配列番号８７）。

【０１４０】実施例４．可変領域にサブグループ I型を
もつヒトH 鎖、及びサブグループ II型をもつヒトL 鎖
の全長をコードするDNA のクローニング、及びその全ヌ
クレオチド配列の決定 （１）プライマーの作製 a ）H 鎖 配列番号８９に示すマウスモノクローナル抗体CH11 H鎖
の可変領域のアミノ酸配列についてカバトらにより作製
された抗体のアミノ酸配列データベース（Kabat E. A.
et al., （1991）. in “Sequence of Proteins
of Immunological Interest Vol. II”U. S. Depart
ment of Health and Human Services. 参照）を検
索したところ、CH11のH 鎖（μ鎖）可変領域のフレーム
ワーク部分のアミノ酸配列と相同性のあるヒト型抗体H
鎖は、サブグループＩ型であることが判明した。そこ
で、まず該データベース中のヒト免疫グロブリンH 鎖サ
ブグループＩ型をコードするDNA の5'非翻訳領域の一部
とハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー：
5-GGGAATTCATGGACTGGACCTGGAGG(A/T)TCCT(C/T)TT-3'（
HVHI5-1とする：配列番号９０）を合成した。また、ド
ライらにより報告されたヒト免疫グロブリンＨ鎖定常領
域をコードするDNA のヌクレオチド配列（ Dorai,H. an
d Gillies,S.D.（1989）. Nucleic Acids Res. 17:641
2 参照）を基に、その3'非翻訳領域のヌクレオチド配列
の一部とハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライ
マー：5'-CCTCTAGAGGTTAGTTTGCATGCACACACAGA-3 ’（HC
μ3 -1とする：配列番号９１）を合成した。

【０１４１】b ）L 鎖 配列番号９２に示したマウスモノクローナル抗体CH11 L
鎖の可変領域のアミノ酸配列について、前記カバトらに
より作製された抗体のアミノ酸配列データベースを検索
したところ、CH11のL 鎖（κ鎖）可変領域のフレームワ
ーク部分のアミノ酸配列と相同性のあるヒト型抗体κ鎖
は、サブグループII型であることが判明した。そこで、
まず該データベース中のヒト免疫グロブリンL 鎖サブグ
ループII型をコードするDNA の5'非翻訳領域の一部とハ
イブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー：5'-G
CGAATTCTGCCTTGACTGATCAGAGTTTCCTCA-3'（HVK II5-4 と
する：配列番号９３）を合成した。またヒーターらによ
り報告されたヒト免疫グロブリンL 鎖定常領域をコード
するDNA のヌクレオチド配列（Hieter,P.A., et.al.
（1980）. Cell 22:197 参照）を基に、その3'非翻訳領
域のヌクレオチド配列の一部とハイブリダイズするオリ
ゴヌクレオチドプライマー：5'-GCTCTAGATGAGGTGAAAGAT
GAGCTGGAGGA-3'（HKCL3-3 とする：配列番号９４）を合
成した。

【０１４２】これらのオリゴヌクレオチドプライマーは
すべて自動DNA 合成機380B（パーキンエルマー社製）を
用いて、ホスホアミダイド法（Mattrucci, M.D. and C
aruthers, M.H.（1981）. J. Am.Chem.Soc. 103:3185
参照）で合成した。各プライマーは合成終了後、支持体
から開裂、脱保護したのち凍結乾燥した。これらを100
μl 蒸留水に溶解し、使用時まで -20℃にて保存した。

【０１４３】（２）PCR による標的遺伝子の増幅 CH11のH 鎖をコードするDNA 断片は、ヒトリンパ球ｃＤ
ＮＡライブラリーを出発材料として、ＰＣＲ法を用い
て、以下のように増幅・単離した。すなわち、94℃で下
記の反応液を２分間加熱した後、94℃で1 分間、55℃で
1 分間、72℃で2分間の温度サイクルを30回繰り返して
から、72℃で10分間加温した。

【０１４４】 反応液組成： ヒトリンパ球cDNAライブラリー（ライフテクノロジー社製） 25 ng オリゴヌクレオチドプライマー HVHI5-1 50 pmol オリゴヌクレオチドプライマー HCμ3 -1 50 pmol 25 mM dNTPs 混合液 10 μl 100 mM トリス- 塩酸緩衝液（pH8.5 ） 10 μl 1 M 塩化カリウム 5 μl 25 mM 塩化マグネシウム 10 μl Taq DNAポリメラーゼ（パーキンエルマー社製） 1 単位 （再蒸留水を加えて100 μl とした。なお、 dNTPs：デオキシヌクレオチド三リ ン酸は、 dATP ：デオキシアデノシン三リン酸、 dCTP ：デオキシシトシン三リ ン酸 、 dGTP ：デオキシグアノシン三リン酸、 dTTP ：デオキシチミジン三リ ン酸の混合液をいい、以下同様とする。） CH11のL 鎖をコードするDNA 断片は、ヒトリンパ球ｃＤ
ＮＡライブラリーを出発材料として、ＰＣＲ法を用い
て、以下のように増幅・単離した。すなわち、94℃で下
記の反応液を2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55℃で
1 分間、72℃で2分間の温度サイクルを30回繰り返して
から、72℃で10分間加温した。

【０１４５】 反応液組成： ヒトリンパ球cDNAライブラリー（ライフテクノロジー社製） 25 ng オリゴヌクレオチドプライマー HVKII5-4 50 pmol オリゴヌクレオチドプライマー HKCL3-3 50 pmol 25 mM dNTPs 混合液 10 μl 100 mM トリス- 塩酸緩衝液（ pH 8.5 ） 10 μl 1 M 塩化カリウム 5 μl 25 mM 塩化マグネシウム 10 μl Taq DNA ポリメラーゼ（パーキンエルマー社製） 1 単位 （再蒸留水を加えて100 μl とした。） （３）PCR 産物の検定 上記（２）のPCR 後の反応液の一部（100 μl ）をと
り、それぞれ 0.8% アガロースゲル電気泳動を実施し
た。同時に電気泳動した分子量マーカーのバンドの泳動
度から判定した結果、それぞれのPCR 産物の鎖長は、ヒ
ト免疫グロブリンH鎖では約2000塩基対（以下「bp」と
いう。）、ヒト免疫グロブリンL 鎖では約800bp であっ
た。

【０１４６】（４）PCR 産物のクローニング 上記（３）で合成が確認されたPCR 産物のプラスミドベ
クターへの組み込みは、真核生物用TAクローニングキッ
ト（登録商標：インビトロジェン社製）を用いて行なっ
た。すなわち、目的とするPCR 産物約10ng相当量を含む
各PCR 反応液とpCR3ベクターDNA （インビトロジェン社
TAクローニングキットに添付）60ngを含むリガーゼ反応
緩衝液［6mM トリス- 塩酸（pH7.5 ）、6mM 塩化マグネ
シウム、5mM 塩化ナトリウム、7mM β- メルカプトエタ
ノール、0.1mM ATP 、2mM DTT 、1mM スペルミジン、0.
1mg/mlウシ血清アルブミン］中に４単位の T4 DNA リガ
ーゼを加え、14℃で15時間保温した。

【０１４７】0.5 M のβ- メルカプトエタノール 2μl
を加えたコンピテント大腸菌 TOP10F ’株（インビトロ
ジェン社TAクローニングキットに予め添付） 50 μl
に、上記リガーゼ反応液2 μl を添加し、氷上に30分間
静置した。その後、SOC 培地（キットに予め添付）500
μl を加え、37℃で１時間振盪培養した。この培養液を
100μg/mlのアンピシリンを含むL-ブロス寒天培地プレ
ート［1%バクトトリプトン（ディフコ社製）、0.5%バク
トイーストエキストラクト（ディフコ社製）、0.1%グル
コース、0.5%塩化ナトリウム、1.2%バクトアガー（ディ
フコ社製）］上に塗布し、37℃にて一晩培養した。プレ
ート上に出現したアンピシリン耐性の単一コロニーを白
金耳で掻きとり、100 μg/mlのアンピシリンを含有する
L- ブロス液体培地［1%バクトトリプトン（ディフコ社
製）、0.5%バクトイーストエキストラクト（ディフコ社
製）、0.5%塩化ナトリウム］5ml に接種し、37℃下、一
晩、振盪培養した。得られた培養液より菌体を遠心分離
により回収し、アルカリ法（Sambrook,J. et. al.,（19
89）. "Molecular Cloning. A Laboratory manual.Sec
ond edition." Cold Spring Harbor Laboratory Press.
参照）に従ってプラスミドDNA を調製した。

【０１４８】調製したプラスミドDNA を制限酵素 EcoRI
で消化し、0.8%アガロースゲル電気泳動に供与した。同
時に電気泳動した分子量マーカーのバンドから判定し
て、ヒト免疫グロブリンH 鎖の場合約2000bp、ヒト免疫
グロブリンL 鎖の場合約800bpのDNA 断片を保持するク
ローンを選択した。

【０１４９】これにより、ヒト免疫グロブリンH 鎖をコ
ードするDNA 断片を保持した、可変領域にサブグループ
Ｉ型をもつヒト免疫グロブリンH 鎖をコードする cDNA
を含むプラスミドpHH1-5、及び、ヒト免疫グロブリンL
鎖をコードするDNA 断片を保持したプラスミドpHL15-27
（可変領域にサブグループII型をもつヒト免疫グロブリ
ンL 鎖をコードする cDNA を含む）を得た。

【０１５０】（５）クローニングしたヒト免疫グロブリ
ンH 鎖、ヒト免疫グロブリンL 鎖をコードする cDNA の
全ヌクレオチド配列の確認 ヒト免疫グロブリンH 鎖は、そのN 末端から約 110アミ
ノ酸残基の可変領域、及びそれに隣接する約510 残基の
定常領域からなる。またヒト免疫グロブリンL鎖は、そ
のN 末端から約 110残基の可変領域、及びそれに隣接す
る 107残基の定常領域からなる。これらのことから、上
記（４）でクローニングしたヒト免疫グロブリンH 鎖を
コードする cDNA のヌクレオチド配列は、既知のサブグ
ループＩ型ヒト免疫グロブリンH 鎖（たとえばクローン
21/28’CL；Kabat E. A. et al.（1991）. “Sequenc
e of Proteins of Immunological Interest Vol.
II”, U.S. Department of Health and Human Ser
vices.参照）可変領域をコードするヌクレオチド配列に
相同性の高いヌクレオチド配列に、既知のヒト免疫グロ
ブリンH 鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列（Ka
bat E. A. et al.（1991）. “Sequence of Proteins
of Immunological Interest Vol. II”, U.S. Dep
artment of Health and Human Services.参照）が
連結しているものと考えられた。また同様に上記（４）
でクローニングしたヒト免疫グロブリンL 鎖をコードす
る cDNA の全ヌクレオチド配列は、既知のサブグループ
II型ヒト免疫グロブリンL 鎖（たとえばクローン RPMI6
410'CL；前出 Kabat E.A. et.al.（1991）. 参照）可変
領域をコードするヌクレオチド配列に相同性の高いヌク
レオチド配列に、既知のヒト免疫グロブリンL 鎖定常領
域をコードするヌクレオチド配列（前出；Kabat E.A. e
t.al. （1991）. 参照）が連結しているものと考えられ
た。そこで可変領域中の、配列がよく保存されているフ
レームワーク部分の公知のヌクレオチド配列、及び定常
領域内の公知のヌクレオチド配列を基に、100 乃至200b
p の間隔で、20ヌクレオチドからなる複数のオリゴヌク
レオチドプライマーを合成し、（２）のPCR で用いたプ
ライマー HVHI5-1、 HC μ3 -1、HVKII5-4 、及びHKCL3
-3 と共にヌクレオチド配列解析用に使用した。合成し
たH鎖用のオリゴヌクレオチドプライマーの各配列を以
下に示す。：5'-CCTCGTCTCCTGTGAGAATT-3'（SHHF-1とす
る：配列番号９５）、5'-ACTCTGACATCAGCAGTACC-3'（SH
HF-2とする：配列番号９６）、5'-ACGAACACGTGGTGTGCAA
A-3'（SHHF-3とする：配列番号９７）、5'-AAGTCCAAGCT
CATCTGCCA-3'（SHHF-4とする：配列番号９８）、5'-TAC
AAGGTGACCAGCACACT-3'（SHHF-5とする：配列番号９
９）、5'-AATGCGTCCTCCATGTGTGT-3'（SHHF-6とする：配
列番号１００）、5'-AGACCTGACCACCTATGACA-3'（SHHF-7
とする：配列番号１０１）、5'-TCTGCGAGGATGACTGGAAT-
3'（SHHF-8とする：配列番号１０２）、5'-ATGTCTACTTG
CTGCCACCA-3'（SHHF-9とする：配列番号１０３）、5'-T
TGTCCCCGGAGAAGTATGT-3'（SHHF-10 とする：配列番号１
０４）、5'-GTGTCCGAAGAGGAATGGAA-3'（SHHF-11 とす
る：配列番号１０５）、5'-CTCAGTGAAGGTTTCCTGCA-3'
（SHHF-13 とする：配列番号１０６）、5'-AAAGGCTTGAG
TGGATGGGA-3'（SHHF-14 とする：配列番号１０７）、5'
-TGAGCAGCCTGAGATCTGAA-3'（SHHF-15 とする：配列番号
１０８）、5'-GGTACTGCTGATGTCAGAGT-3'（SHHR-1とす
る：配列番号１０９）、5'-AATCACTGGAAGAGGCACGT-3'
（SHHR-2とする：配列番号１１０）、5'-TGGCAGATGAGCT
TGGACTT-3'（SHHR-3とする：配列番号１１１）、5'-AGC
CAGTCGCTCTCTTTGAT-3'（SHHR-4とする：配列番号１１
２）、5'-AGGAAGATGCTGGCAAAGGA-3'（SHHR-5とする：配
列番号１１３）、5'-TGGTGTGGGTTTTCACAGCT-3'（SHHR-6
とする：配列番号１１４）、5'-TTCCAGTCATCCTCGCAGAT-
3'（SHHR-7とする：配列番号１１５）、5'-TGGTGGCAGCA
AGTAGACAT-3'（SHHR-8とする：配列番号１１６）、5'-A
CATACTTCTCCGGGGACAA-3'（SHHR-9とする：配列番号１１
７）、5'-GTGTTCCATTCCTCTTCGGA-3'（SHHR-10 とする：
配列番号１１８）、5'-TTTACCGGTGGACTTGTCCA-3'（SHHR
-11 とする：配列番号１１９）、5'-TATCCAGAAGCCTTGCA
GGA-3'（SHHR-12 とする：配列番号１２０）、5'-TGTGT
CCCTGGTAATGGTGA-3'（SHHR-13 とする：配列番号１２
１）、5'-CTCGCACAGTAATACCACGC-3'（SHHR-14 とする：
配列番号１２２）、5'-TATCCGACGGGGAATTCTCA-3'（SHHR
-15 とする：配列番号１２３）。

【０１５１】各プライマーが結合する位置を図３に示し
た。

【０１５２】合成したL 鎖用のオリゴヌクレオチドプラ
イマーの各配列を以下に示す。：5'-TGTCTTCATCTTCCCGC
CAT-3'（SHKF-1とする：配列番号１２４）、5'-ACGCTGA
GCAAAGCAGACTA-3'（SHKF-2とする：配列番号１２５）、
5'-TCCAGTGGGGATGTTGTGAT-3'（SHKF-4とする：配列番号
１２６）、5'-AGTGGGTCAGGCACTGATTT-3'（SHKF-5とす
る：配列番号１２７）、5'-TCTCCTGCAGGTCTAGTCAA-3'
（SHKF-6とする：配列番号１２８）、5'-GGGTAACTCCCAG
GAGAGTG-3'（SHKF-11 とする：配列番号１２９）、5'-A
GGGACCAAGGTGGAAATC-3' （SHKF-12 とする：配列番号１
３０）、5'-TACTTTGGCCTCTCTGTGAT-3'（SHKR-1とする：
配列番号１３１）、5'-ACTTCGCAGGCGTAGACTTT-3'（SHKR
-2とする：配列番号１３２）、5'-TCTCCCCTGTTGAAGCTCT
T-3'（SHKR-3とする：配列番号１３３）、5'-TTAAAGCCA
AGGAGGAGGAG-3'（SHKR-4とする：配列番号１３４）、5'
-CTCCACCCTGCTGATTTTCA-3'（SHKR-6とする：配列番号１
３５）、5'-TGCAGCCACAGTACGTTTGA-3'（SHKR-13 とす
る：配列番号１３６）。

【０１５３】各プライマーが結合する位置を図４に示し
た。

【０１５４】（４）記載のプラスミドpHH1-5 DNA、プラ
スミドpHL15-27DNA を鋳型として、上記プライマー、及
びプリズムレディ・リアクション・ターミネーター・サ
イクルシークエンシング・キット（パーキンエルマー社
製）を用いて、配列解析用サンプルを調製した。即ち、
精製した各プラスミドDNA 1.5 μg と、予め合成した4.
8pmol のプライマーのひとつを混合し、16μl に調製し
た（以下、この溶液を、「プラスミドDNA ・プライマー
混合液」とする。）。キットに添付されている、Taq DN
A ポリメラーゼを含むプレミックス溶液 10.5μl に、
それぞれのプライマーに対応するプラスミドDNA ・プラ
イマー混合液9.5 μl を加え、自動反応装置（カタリス
ト：パーキンエルマー社製）にセットし、反応（反応条
件：95℃で30秒間、50℃で15秒間、60℃で4 分間の温度
サイクルを25サイクル繰り返す）を行なった。反応終了
後のサンプルに蒸留水80μl を加えてから、フェノール
・クロロホルム抽出を2 回行い、水層を回収した。得ら
れた水層に2M酢酸ナトリウム15μl 、及びエタノール30
0 μl を加え、遠心分離を行って沈殿を回収した。この
沈殿を70% エタノールで洗浄後、真空乾燥し、3 μl の
試料溶液（0.25M EDTA 4μl 、ホルムアミド 100μl 、
蒸留水16μl を混合したもの）に溶解した。

【０１５５】上記のようにして調製した各配列解析用サ
ンプル（ヒト免疫グロブリンH 鎖用：30サンプル、ヒト
免疫グロブリンL 鎖用：17サンプル）を、DNA シークエ
ンサー（モデル 373A ：パーキンエルマー社製）に供与
し、ヌクレオチド配列を解析した。各サンプルより得ら
れた解析データにより、プラスミドpHH1-5は、可変領域
がサブグループ I型のヒト免疫グロブリンH 鎖をコード
するDNA を保持していることが確認された。一方、プラ
スミドpHL15-27は、可変領域がサブグループII型のヒト
免疫グロブリンL 鎖をコードするDNA を保持しているこ
とが確認された。プラスミドpHH1-5が保持するDNA のヌ
クレオチド配列を配列番号１３７に、プラスミドpHL15-
27が保持するDNA のヌクレオチド配列を配列番号１３８
に示した。

【０１５６】実施例５．CH11 L鎖をヒト化した発現ベク
ターの構築 （１）プライマーの作製 選択したVL-KY 鎖のポリペプチド鎖（配列番号７８）を
コードするDNA （配列番号７７）、 VL-KF鎖のポリペプ
チド鎖（配列番号８０）をコードするDNA （配列番号７
９）、 VL-RY鎖のポリペプチド鎖（配列番号８２）をコ
ードするDNA （配列番号８１）、またはVL-RF 鎖のポリ
ペプチド鎖（配列番号８４）をコードするDNA （配列番
号８３）の合成は、PCR 法を組み合わせて行なった。

【０１５７】PCR を行なうにあたり、以下の14種のプラ
イマーを作製した。作製した配列を以下に示す。：5'-A
GCCGGCCTCCATCTCCTGCAGATCTAGTAAGAGCCTTGT-3'（VL1Pと
する：配列番号１３９）、5'-ACAAGGCTCTTACTAGATCTGCA
GGAGATGGAGGCCGGCT-3'（VL1Nとする：配列番号１４
０）、5'-AAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAG-
3'（VL2Pとする：配列番号１４１）、5'-CTGAATCTGTCTG
GGACCCCAGAAAATCGGTTGGAAACTT-3'（VL2Nとする：配列番
号１４２）、5'-GGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCTCTCAAA
GTACACATGTTCCTC-3'（VL3TYRP とする：配列番号１４
３）、5'-GAGGAACATGTGTACTTTGAGAGCAGTAATAAACCCCAACA
TCCTCAGCC-3'（VL3TYRN とする：配列番号１４４）、5'
-GGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTTCTGCTCTCAAAGTACACATGTTCCT
C-3'（VL3PHEP とする：配列番号１４５）、5'-GAGGAAC
ATGTGTACTTTGAGAGCAGAAATAAACCCCAACATCCTCAGCC-3'（VL
3PHEN とする：配列番号１４６）、5'-CTCAAAGTACACATG
TTCCTCCGGCGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAAT-3'（VL4Pとす
る：配列番号１４７）、5'-ATTTCCACCTTGGTCCCTTGGCCGA
ACGCCGGAGGAACATGTGTACTTTGAG-3'（VL4Nとする：配列番
号１４８）、5'-GGGCTCGAGTGCCTTGACTGATCAGGACTCCTCAG
TTCAC-3'（VL5Pとする：配列番号１４９）、5'-GGCCAGT
CTCCAAGGCTCCTGATCTACAAAG-3'（VL50RPとする：配列番
号１５０）、5'-CTTTGTAGATCAGGAGCCTTGGAGACTGGCC-3'
（VL50RNとする：配列番号１５１）、5'-CCCTCTAGACTAA
CACTCTCCCCTGTTGAAG-3'（VLTERMとする：配列番号１５
２）。

【０１５８】（２）プラスミドpHκKY2-58、及びプラス
ミドpHκKF2-19の作製 a ）第一段階PCR 第一段階PCR の概要は図５に示した。

【０１５９】分泌シグナル配列、ＦＲＬ₁ 領域、及びＣ
ＤＲＬ₁ 領域のアミノ末端（以下、「N 末端」とする）
側をコードするDNA 断片（以下、「VL1 DNA 断片」とい
う。）は、ＰＣＲ法により、以下の条件で作製された。

【０１６０】 反応液組成：プラスミドpHL15-27 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマーVL5P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマーVL1N 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10 x Pfu 緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 （再蒸留水を加えて200 μl とする。10xPfu緩衝液はPfu DNA ポリメラーゼに予 め添付された緩衝液を用いた） 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１６１】ＦＲＬ₁ のカルボキシル末端（以下、「C
末端」とする）側、ＣＤＲＬ₁ 領域、及びＦＲＬ₂ 領域
のN 末端側をコードするDNA 断片（以下、「VL2 DNA 断
片」という。）は、以下の条件で作製された。

【０１６２】 反応液組成：プラスミドpCR3-L103 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VL1P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VL2N 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu 緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１６３】ＣＤＲＬ₂ 領域、87位のアミノ酸残基（カ
バトの番号による）をチロシン残基に変えたＦＲＬ₃ 領
域、及びＣＤＲＬ₃ 領域をコードする DNA断片（以下、
「VL3Y DNA断片」という。）は、以下の条件で作製され
た。

【０１６４】 反応液組成：プラスミドpHL15-27 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VL2P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VL3TYRN 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１６５】ＣＤＲＬ₂ 領域、87位のアミノ酸残基（カ
バトの番号による）をフェニルアラニン残基に変えたＦ
ＲＬ₃ 領域、及びＣＤＲＬ₃ 領域をコードする DNA断片
（以下、「VL3F DNA断片」という。）は、以下の条件で
作製された。

【０１６６】 反応液組成：プラスミドpHL15-27 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VL2P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VL3PHEN 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu 緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１６７】ＣＤＲＬ₃ 領域、ＦＲＬ₄ 領域、及び、定
常領域の一部であるCk領域をコードするDNA 断片（以
下、「VL4 DNA 断片」という。）は、以下の条件で作製
された。

【０１６８】 反応液組成：プラスミドpHL15-27 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VL4P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VLTERM 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu 緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１６９】PCR 後増幅されたVL1 、VL2 、VL3Y、VL3
F、及びVL4 DNA 断片は、フェノール抽出とエタノール
沈殿の後、5%ポリアクリルアミドゲル電気泳動され、1
μg/mlの濃度のエチジウムブロミドにより染色した後、
紫外線照射下で検出された。検出されたそれぞれのDNA
バンドを、剃刀により切り取り、セントリコン10（アミ
コン社製）を装着したセントリリューター（アミコン社
製）を用いて、電気的にDNA をアクリルアミドゲルより
溶出した。溶出したDNA を7,500xg 、約１時間の遠心分
離により濃縮し、エタノール沈殿の後、50μl の蒸留水
に溶解した。

【０１７０】b ）第二段階PCR 第二段階PCR の概要は図６に示した。

【０１７１】前出VL1 DNA 断片とVL2 DNA 断片を融合し
たDNA 断片（以下、「VL1-2 DNA 断片」という。）は、
以下の条件で作製された。

【０１７２】 反応液組成：第一段階PCR で作製したVL1 DNA 溶液 10 μl 第一段階PCR で作製したVL2 DNA 溶液 10 μl オリゴヌクレオチドプライマー VL5P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VL2N 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１７３】前出VL3Y DNA断片とVL4 DNA 断片を融合し
たDNA 断片（以下、「VL3Y-4 DNA断片」という。）
は、以下の条件で作製された。

【０１７４】 反応液組成：第一段階PCR で作製したVL3Y DNA溶液 10 μl 第一段階PCR で作製したVL4 DNA 溶液 10 μl オリゴヌクレオチドプライマー VL2P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VLTERM 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１７５】前記のVL3F DNA断片とVL4 DNA 断片を融合
したDNA 断片（以下、「VL3F-4 DNA 断片」という。）
は、以下の条件で作製された。

【０１７６】 反応液組成：第一段階PCR で作製したVL3F DNA溶液 10 μl 第一段階PCR で作製したVL4 DNA 溶液 10 μl オリゴヌクレオチドプライマー VL2P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VLTERM 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１７７】PCR 後の増幅されたVL1-2 、VL3Y-4、及び
VL3F-4 DNA断片は、フェノール抽出とエタノール沈殿の
後、5%ポリアクリルアミドゲル電気泳動され、1 μg/ml
の濃度のエチジウムブロミドにより染色した後、紫外線
照射下で検出された。検出したVL1-2 、VL3Y-4、及びVL
3F-4に相当する融合DNA 断片を、剃刀で切り出し、セン
トリコン、及びセントリリューターを用いてアクリルア
ミドゲルより溶出した。溶出したDNA を7,500xg 、約１
時間の遠心分離により濃縮し、エタノール沈殿の後、50
μl の蒸留水に溶解した。

【０１７８】c ）第三段階PCR 第三段階PCR の概要は図７に示した。

【０１７９】前出VL1-2 DNA 断片とVL3Y-4 DNA断片を融
合したDNA 断片（以下、「VL-KY DNA 断片」という。）
は、以下の条件で作製された。

【０１８０】 反応液組成：第二段階PCR で作製したVL1-2 DNA 溶液 10 μl 第二段階PCR で作製したVL3Y-4 DNA溶液 10 μl オリゴヌクレオチドプライマー VL5P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VLTERM 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１８１】前記のVL1-2 DNA 断片とVL3F-4 DNA断片を
融合したDNA 断片（以下、「VL-KFDNA 断片」とい
う。）は、以下の条件で作製された。

【０１８２】 反応液組成：第二段階PCR で作製したVL1-2 DNA 溶液 10 μl 第二段階PCR で作製したVL3F-4 DNA溶液 10 μl オリゴヌクレオチドプライマー VL5P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VLTERM 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１８３】PCR 後の増幅されたVL-KY 、及びVL-KF DN
A 断片は、フェノール抽出とエタノール沈殿の後、5%ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動され、1 μg/mlの濃度の
エチジウムブロミドにより染色した後、紫外線照射下で
検出された。検出したVL-KY、及びVL-KF に相当する融
合DNA 断片を、剃刀で切り出し、セントリコン、及びセ
ントリリューターを用いてアクリルアミドゲルより溶出
し回収した。

【０１８４】VL-KY 、或はVL-KF DNA 断片を保持するプ
ラスミドの作成方法の概要は図8 に示した。

【０１８５】得られたVL-KY 、及びVL-KF DNA を、フェ
ノール抽出とエタノール沈殿により、さらに精製した
後、制限酵素XhoIと制限酵素XbaIにより消化した。

【０１８６】プラスミドpME18S DNA （ Hara,T. and M
iyajima,A.（1992）. EMBO J. 11:1875 参照）1 μg
を、予め制限酵素XhoIとXbaIで消化し、アルカリンフォ
スファターゼ・カウフ・インテスティン（Alkaline Pho
sphatase Calf Intestine ：以下「CIP 」とする：宝酒
造社製）で脱リン酸化した。このようにして得られた脱
リン酸化プラスミドpME18S DNAと、予め制限酵素で消化
したVL-KY DNA 断片、またはVL-KF DNA 断片それぞれ
を、ライゲーションキット（宝酒造社製）を用いて連結
した後、大腸菌DH5 α株でクローニングした。これによ
りpME18SのSRαプロモーター下流に順方向にVL-KY DNA
断片、またはVL-KF DNA 断片が挿入されたプラスミドpH
κKY2-58（VL-KY DNA を保持する）とプラスミドpHκKF
2-19（VL-KFDNA を保持する）を得た。

【０１８７】（３）プラスミドpHκRY2-10、及びプラス
ミドpHκRF2-52の作製 得られたプラスミドpHκKY2-58 DNA、及びプラスミドpH
κKF2-19 DNAを鋳型として、更に2 種類の発現ベクター
を作製した。

【０１８８】a ）第一段階PCR 第一段階PCR の概要は図９に示した。

【０１８９】分泌シグナル配列、ＦＲＬ₁ 領域、ＣＤＲ
Ｌ₁ 領域、及び45位のアミノ酸残基（カバトの番号によ
る）をリジン残基からアルギニン残基に変えたＦＲＬ₂
領域をコードする DNA断片（以下、「VLR5'- DNA断片」
という。）は、以下の条件で作製された。

【０１９０】 反応液組成：プラスミドpHκKY2-58 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VL5P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VLRN 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１９１】45 位のアミノ酸残基（カバトの番号によ
る）をリジン残基からアルギニン残基に変えたＦＲＬ₂
領域、ＣＤＲＬ₂ 領域、87位がチロシン残基であるＦＲ
Ｌ₃領域、ＣＤＲＬ₃ 領域、ＦＲＬ₄ 領域、及びCk領域
をコードする DNA断片（以下、「VLR3'Y DNA断片」とい
う。）は、以下の条件で作製された。

【０１９２】 反応液組成：プラスミドpHκKY2-58 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VLRP 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VLTERM 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１９３】45 位のアミノ酸残基（カバトの番号によ
る）をリジン残基からアルギニン残基に変えたＦＲＬ₂
領域、ＣＤＲＬ₂ 領域、87位がフェニルアラニン残基で
あるＦＲＬ₃ 領域、ＣＤＲＬ₃ 領域、ＦＲＬ₄ 領域、及
びCk領域をコードする DNA断片（以下、「VLR3'F DNA断
片」という。）は、以下の条件で作製された。

【０１９４】 反応液組成：プラスミドpHκKF2-19 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VLRP 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VLTERM 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１９５】PCR 後の増幅されたVLR5' 、VLR3'Y、及び
VLR3'F DNA断片は、フェノール抽出とエタノール沈殿の
後、5%ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、1 μg/
mlの濃度のエチジウムブロミドにより染色した後、紫外
線照射下で検出された。検出したVLR5' 、VLR3'Y、及び
VLR3'Fに相当する融合DNA 断片を、剃刀で切り出し、セ
ントリコン、及びセントリリューターを用いてアクリル
アミドゲルより溶出した。溶出したDNA を7,500xg 、約
１時間の遠心分離により濃縮し、エタノール沈殿の後、
50μl の蒸留水に溶解した。

【０１９６】b ）第二段階PCR 第二段階PCR の概要は図１０に示した。

【０１９７】前出VLR5' DNA 断片、及びVLR3'Y DNA断片
を融合したDNA 断片（以下、「VL-RY DNA 断片」とい
う。）は、以下の条件で作製された。

【０１９８】 反応液組成：第一段階PCR で作製したVLR5' DNA 溶液 10 μl 第一段階PCR で作製したVLR3'Y DNA溶液 10 μl オリゴヌクレオチドプライマー VL5P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VLTERM 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０１９９】前出VLR5' DNA 断片、及びVLR3'F DNA断片
を融合した DNA断片（以下、「VL-RF DNA 断片」とい
う。）は、以下の条件で作製された。

【０２００】 反応液組成：第一段階PCR で作製したVLR5' DNA 溶液 10 μl 第一段階PCR で作製したVLR3'F DNA溶液 10 μl オリゴヌクレオチドプライマー VL5P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VLTERM 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl 10xPfu緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２０１】PCR 後の増幅されたVL-RY 、及びVL-RF DN
A 断片は、フェノール抽出とエタノール沈殿の後、5%ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動を行い、1 μg/mlの濃度
のエチジウムブロミドにより染色した後、紫外線照射下
で検出された。検出したVL-RY 、及びVL-RF に相当する
融合DNA 断片を、剃刀で切り出し、セントリコン、及び
セントリリューターを用いてアクリルアミドゲルより溶
出した。溶出したDNAを7,500xg 、約１時間の遠心分離
により濃縮し、エタノール沈殿の後、50μl の蒸留水に
溶解した。

【０２０２】VL-RY 、或はVL-RF DNA 断片を保持するプ
ラスミドの作製方法の概要は図１１に示した。

【０２０３】得られたVL-RY 、及びVL-RF DNA は、フェ
ノール抽出とエタノール沈殿により、さらに精製した
後、制限酵素XhoIと制限酵素XbaIにより消化した。

【０２０４】プラスミドpME18S DNA 1 μg を、予め制
限酵素XhoIとXbaIで消化し、CIP で脱リン酸化した。こ
のようにして得られた脱リン酸化プラスミドpME18SDNA
と予め制限酵素で消化したVL-RY またはVL-RF DNA をそ
れぞれライゲーションキットを用いて連結した後、大腸
菌DH5 α株でクローニングした。これによりプラスミド
pME18SのSRαプロモーター下流に順方向でVL-RY DNA が
挿入されたプラスミドpHκRY2-10、またはプラスミドpM
E18SのSRαプロモーター下流にVL-RF DNA が挿入された
プラスミドpHκRF2-52を得た。

【０２０５】（４）ヌクレオチド配列の確認 作製したプラスミドpHκKY2-58、プラスミドpHκKF2-1
9、プラスミドpHκRY2-10、及びプラスミドpHκRF2-52
の挿入DNA が、目的とするヌクレオチドの配列を保持し
ているかどうかを確認するため、挿入DNA のヌクレオチ
ド配列の決定を行なった。ヌクレオチドの配列を決定す
るにあたり、用いたプライマーは前出のSHKF-4、 SHKF-
5 、 SHKR-6 、 SHKF-12、 SHKR-13、 SHKF-11、 SHKF-
2 、及び SHKR-3 、の他に新たに3 種類を合成した。合
成したプライマーは5'-CTGCTCTAAAAGCTGCGGAA-3'（ PME
F2とする：配列番号１５３）、5'-TAGATCTGCAGGAGARGGA
G-3'（ SHKF-14とする：配列番号１５４）、及び5'-TAT
GTTTCAGGTTCAGGGGG-3'（ PMER2とする：配列番号１５
５）である。ヌクレオチド配列の決定は、アルカリSDS
法（Sambrook,J. et. al.,（1989）. in "Molecular Cl
oning. A Laboratory manual. Second edition." Cold
Spring Harbor Laboratory Press. 参照）と塩化セシウ
ム法（Sambrook,J. et. al.,（1989）. in "Molecular
Cloning. A Laboratory manual. Second edition." Col
d Spring Harbor Laboratory Press. 参照）により精製
した各プラスミドDNA を鋳型とし、ジデオキシヌクレオ
チド鎖終結法（Sanger,F.S. et. al.,（1977）. Pro. N
atl. Acad. Sci. USA. 74:5463参照）で行なった。即
ち、1 μg の精製したプラスミドDNA を16μl の再蒸留
水に溶解し、2 μl の2mM EDTAと2 μl の2N水酸化ナト
リウムを加え、室温で5 分間静置した。その後、4 μl
の10M 酢酸アンモニウム溶液と100 μl のエタノールを
加え、攪拌の後ドライアイス上で10分間静置した。15,0
00rpm 、５分間の遠心分離の後、得られた沈殿を80% エ
タノールで洗浄後、真空乾燥した。真空乾燥したDNA を
7 μl の再蒸留水に溶解し、ヌクレオチド配列決定に用
いた。ヌクレオチド配列決定の反応は7-デアザ- シーク
エナーゼ・バージョン2.0 ・キットフォアdCTP（アマシ
ャム社製）を用いた。前出プラスミド溶液7 μl に、予
め合成したプライマー1pmol と、1 μl の反応緩衝液
（キットに予め添付されている緩衝液）を加え、65℃で
2 分間保温した。その後、室温まで徐冷しプライマーと
アニーリングさせ、［α-³²P］dCTP（アマシャム社製）
で標識した。反応産物は、TBE緩衝液（100mM トリス、1
00mM ホウ酸、1mM EDTA、pH8.3 ）中、8M尿素を含む5%
ポリアクリルアミドを用いてゲル電気泳動された。ゲル
を乾燥した後、オートラジオグラフィーを行いヌクレオ
チド配列を解読した。

【０２０６】その結果、プラスミドpHκKY2-58の挿入DN
A 断片は、配列番号７７番に記載したヌクレオチド配列
を保持していた。得られた配列番号７７番のヌクレオチ
ド配列よりポリペプチド鎖の読み枠を探索したところ、
配列番号７８番に記載したポリペプチド鎖配列をコード
することを確認した。

【０２０７】プラスミドpHκKF2-19の挿入DNA 断片は、
配列番号７９番に記載したヌクレオチド配列を保持して
いた。得られた配列番号７９番のヌクレオチド配列より
ポリペプチド鎖の読み枠を探索したところ、配列番号８
０番に記載したポリペプチド鎖配列をコードすることを
確認した。プラスミドpHκRY2-10の挿入DNA 断片は、配
列番号８１番に記載したヌクレオチド配列を保持してい
た。得られた配列番号８１番のヌクレオチド配列よりポ
リペプチド鎖の読み枠を探索したところ、配列番号８２
番に記載したポリペプチド鎖配列をコードすることを確
認した。プラスミドpHκRF2-52の挿入DNA 断片は、配列
番号８３番に記載したヌクレオチド配列を保持してい
た。得られた配列番号８３番のヌクレオチド配列よりポ
リペプチド鎖の読み枠を探索したところ、配列番号８４
番に記載したポリペプチド鎖配列をコードすることを確
認した。

【０２０８】実施例６．CH11 H鎖のヒト化発現ベクター
の構築 （１）プライマーの作製 選択したH μH 鎖（ヒト化抗Fas 抗体CH11 H鎖）のポリ
ペプチド鎖（配列番号８６）をコードするDNA （配列番
号８５）、またはH μM 鎖（ヒト化抗Fas 抗体CH11 H
鎖）のポリペプチド鎖（配列番号８８）をコードするDN
A （配列番号８７）の合成は、PCR 法を組み合わせて行
なった。

【０２０９】PCRを行なうにあたり、28種のプライマー
を作製した。作製した各配列を以下に示す。：5'-GGGCT
CGAGCTAAGGGAATTCCGCCTCTCCTCAGACACTG-3'（VH1Pとす
る：配列番号１５６）、5'-GAACTGCAGGCGTCCACTCTGAGGT
GCAGCTTGTGCAGTC-3'（VHSPとする：配列番号１５７）、
5'-GACTGCACAAGCTGCACCTCAGAGTGGACGCCTGCAGTTC-3'（VH
SNとする：配列番号１５８）、5'-AATATGCATAAATTCGAAT
GGATGGGATATATTTATCCTTACAATGGTGG-3'（VH2Pとする：配
列番号１５９）、5'-CATCCATTCGAATTTATGCATATTATAGTCA
GTGAAGGTGTATCCAGAAG-3'（VH2Nとする：配列番号１６
０）、5'-CCACATTGACTGTTGACAATTCCGCGAGCACAGCCTACAT-
3'（VH3Pとする：配列番号１６１）、5'-ATGTAGGCTGTGC
TCGCGGAATTGTCAACAGTCAATGTGG-3'（VH3Nとする：配列番
号１６２）、5'-GAAGTTACTATGCTATGGACTACTGGGGCCAGGGA
ACCCT-3'（VH4Pとする：配列番号１６３）、5'-TAGTCCA
TAGCATAGTAACTTCTCGCACAGTAATACACAG-3'（VH4Nとする：
配列番号１６４）、5'-GGGCTCGAGGCCAAAGAGTCTGGGCCCAC
GACCTACAAG-3'（VHAPAPX とする：配列番号１６５）、
5'-CTTGTAGGTCGTGGGCCCAGACTCTTTGGC-3'（VHAPANとす
る：配列番号１６６）、5'-GGGTCTAGATCAGTAGCAGGTGCCA
GCTGTG-3'（VHTERMとする：配列番号１６７）、5'-TATG
CATTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGACAAGGACTCGAATGGATGGGATATAT
TTATCC-3'（HUMFR2P とする：配列番号１６８）、5'-CG
AGTCCTTGTCCGGGGGCCTGGCGCACCCAATGCATATTATAGTCAGTGAA
GGTGTATC-3'（HUMFR2N とする：配列番号１６９）、5'-
TATGCATTGGGTGAAGCAGGCCCATGGAAAGAGCCTCGAATGGATGGGAT
ATATTTATCC-3'（ MOUFR2Pとする：配列番号１７０）、
5'-CGAGGCTCTTTCCATGGGCCTGCTTCACCCAATGCATATTATAGTCA
GTGAAGGTGTATC-3'（ MOUFR2 とする：配列番号１７
１）、5'-GAGCGACTGGCTCAGCCAGAGCATGTTCAC-3'（GTOSP
とする：配列番号１７２）、5'-GTGAACATGCTCTGGCTGAGC
CAGTCGCTC-3'（GTOSN とする：配列番号１７３）、5'-A
CCTACATCTGCGTGGTGGCCCATGAGGCCCTGCCC-3'（TCVVAPとす
る：配列番号１７４）、5'-GGCCTCATGGGCCACCACGCAGATG
TAGGTCTCCCCCGTGTTCCATTCCT-3'（TCVVN1とする：配列番
号１７５）、5'- GCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTG-3'（ME1
8P とする：配列番号１７６）、5'-CATAGTAACTTCTCGCAC
AGTAAT-3'（VH06とする：配列番号１７８）。

【０２１０】（２）プラスミドpMEC22の構築 CH11ヒト化H 鎖発現ベクターを構築するために、まず、
ヒトIgM のH 鎖定常領域のカルボキシル末端（以下「C
末端」とする）側を保持するベクターを作製した。ヒト
IgM のH 鎖のC 末端側のアミノ酸配列をコードするDNA
断片（以下、「MEC DNA 断片」という。）はPCR により
作製した。作製法の概略を図１２に示す。

【０２１１】PCR は以下の条件で実施した。

【０２１２】 反応液組成：プラスミドpHH1-5 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VHAPAPX 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VHTERM 80 pmol dNTP混合液 20 μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２１３】PCR 後の増幅されたMEC DNA 断片は、フェ
ノール抽出とエタノール沈殿の後、5%ポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動を行い、1 μg/mlの濃度のエチジウムブ
ロミドにより染色した後、紫外線照射下で検出された。
検出したMEC DNA 断片を、剃刀で切り出し、セントリコ
ン、及びセントリリューターを用いてアクリルアミドゲ
ルより溶出した。溶出したDNA を7,500xg 、約１時間の
遠心分離により濃縮し、エタノール沈殿の後、50μl の
蒸留水に溶解した。

【０２１４】MEC DNA 断片を保持するプラスミドの作製
方法の概略を図１３に示した。得られたMEC DNA は、フ
ェノール抽出とエタノール沈殿によりさらに精製された
後、制限酵素XhoIと制限酵素XbaIにより消化された。

【０２１５】プラスミドpME18S DNA（ EMBO J. 11, 187
5, (1992) 参照） 1μg を、予め制限酵素XhoIとXbaIで
消化し、CIP で脱リン酸化した。このようにして得られ
た脱リン酸化プラスミドpME18S DNAと予め制限酵素で消
化されたMEC DNA 断片を、ライゲーションキットを用い
て連結した後、大腸菌JM109 株でクローニングした。こ
れによりpME18SのSRαプロモーター下流に順方向にMEC
DNA が挿入されたベクターpMEC22を得た。

【０２１６】（３）プラスミドpMEHC20 の作製 a ）第一段階PCR 第一段階PCR の概略を図１４に示した。

【０２１７】分泌シグナル配列、及びＦＲＨ₁ 領域のN
末端側をコードする DNA断片（以下、「HSEC DNA断片」
という。）は、以下の条件で作製された。

【０２１８】 反応液組成：プラスミドpCR3-H123 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VHSN 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VH1P 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２１９】ＦＲＨ₁ 領域、及びＣＤＲＨ₁ 領域のN 末
端側をコードするDNA 断片（以下、「VH1 DNA 断片」と
いう。）は、以下の条件で作製された。

【０２２０】 反応液組成：プラスミドpHH1-5 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VHSP 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VH2N 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２２１】ＣＤＲＨ₁ 領域、ＦＲＨ₂ 領域のC 末端
側、及びＣＤＲＨ₂ 領域のN 末端側をコードするDNA 断
片（以下、「VH2 DNA 断片」という。）は、以下の条件
で作製された。

【０２２２】 反応液組成：プラスミドpCR3-H123 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VH2P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VH3N 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２２３】ＣＤＲＨ₂ 領域のC 末端側、ＦＲＨ₃ 領
域、及びＣＤＲＨ₃ 領域をコードするDNA 断片（以下、
「VH3 DNA 断片」という。）は、以下の条件で作製され
た。

【０２２４】 反応液組成：プラスミドpHH1-5 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VH3P 80 pmol オリゴヌクレオチドプライマー VH4N 80 pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２２５】CDR-3領域、FR-4領域、及びH 鎖定常領域
のN 末端側をコードするDNA 断片（以下、「VH4 DNA 断
片」という。）は、以下の条件で作製された。

【０２２６】 反応液組成：プラスミドpHH1-5 DNA 1μg オリゴヌクレオチドプライマー VH4P 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー VHAPAN 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20 μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20 μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10 単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２２７】PCR 後の増幅されたHSEC、VH1 、VH2 、VH
3 、及びVH4 DNA 断片は、フェノール抽出とエタノール
沈殿の後、5%ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、
1 μg/mlの濃度のエチジウムブロミドにより染色した
後、紫外線照射下で検出された。検出した各 DNA断片
を、剃刀で切り出し、セントリコン、及びセントリリュ
ーターを用いてアクリルアミドゲルより溶出した。溶出
したDNA を7,500xg 、約１時間の遠心分離により濃縮
し、エタノール沈殿の後、50μl の蒸留水に溶解した。

【０２２８】b ）第二段階PCR 第二段階PCR の概要は図１５に示した。

【０２２９】前出HSEC DNA断片、 VH1 DNA断片、及びVH
2 DNA 断片を融合したDNA 断片（以下、「VHS12 DNA 断
片」という。）は、以下の条件で作製された。

【０２３０】 反応液組成：第一段階PCR で作製したHSEC DNA溶液 10μl 第一段階PCR で作製したVH1 DNA 溶液 10μl 第一段階PCR で作製したVH2 DNA 溶液 10μl オリゴヌクレオチドプライマー VH1P 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー VH3N 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２３１】前述のVH3 DNA 断片とVH4 DNA 断片を融合
した DNA断片（以下、「VH34 DNA断片」という。）は、
以下の条件で作製された。

【０２３２】 反応液組成：第一段階PCR で作製したVH3 DNA 溶液 10μl 第一段階PCR で作製したVH4 DNA 溶液 10μl オリゴヌクレオチドプライマー VH3P 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー VHAPAN 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２３３】PCR 後の増幅されたVHS12 、及びVH34 DNA
断片は、フェノール抽出とエタノール沈殿の後、5%ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動を行い、1 μg/mlの濃度の
エチジウムブロミドにより染色した後、紫外線照射下で
検出された。検出した各 DNA断片を、剃刀で切り出し、
セントリコン、及びセントリリューターを用いてアクリ
ルアミドゲルより溶出した。溶出したDNA を7,500xg 、
約１時間の遠心分離により濃縮し、エタノール沈殿の
後、50μl の蒸留水に溶解した。

【０２３４】c ）第三段階PCR 第三段階PCR の概要は図１６に示した。

【０２３５】前述のVHS12 DNA 断片とVH34 DNA断片を融
合したDNA 断片（以下、「VHS1234DNA 断片」とい
う。）は、以下の条件で作製された。

【０２３６】 反応液組成：第二段階PCR で作製したVHS12 DNA 溶液 10μl 第二段階PCR で作製したVH34 DNA溶液 10μl オリゴヌクレオチドプライマー VH1P 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー VHAPAN 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２３７】PCR後の増幅されたVHS1234 DNA 断片は、
フェノール抽出とエタノール沈殿の後、5%ポリアクリル
アミドゲル電気泳動を行い、1 μg/mlの濃度のエチジウ
ムブロミドにより染色した後、紫外線照射下で検出され
た。検出した各 DNA断片を、剃刀で切り出し、セントリ
コン、及びセントリリューターを用いてアクリルアミド
ゲルより溶出した。溶出したDNA を7,500xg 、約１時間
の遠心分離により濃縮し、エタノール沈殿の後、50μl
の蒸留水に溶解した。

【０２３８】VHS1234 DNA 断片を保持するプラスミド作
製方法の概要は図１７に示した。

【０２３９】得られたVHS1234 DNA は、フェノール抽出
とエタノール沈殿によりさらに精製した後、制限酵素Xh
oIと制限酵素ApaIにより消化した。

【０２４０】プラスミドpMEC22 DNA 1μg を、予め制限
酵素XhoIとApaIで消化し、CIP で脱リン酸化した。この
ようにして得られた脱リン酸化プラスミドpMEC22 DNA
と、予め制限酵素で消化したVHS1234 DNA をライゲーシ
ョンキットを用いて連結した後、大腸菌JM109 株でクロ
ーニングした。これによりpMHC22のSRαプロモーター下
流に順方向にVHS1234 DNA 断片が挿入されたプラスミド
pMEHC20 を得た。

【０２４１】（４）プラスミドpHFR3 、及びプラスミド
pHFR4 の作製 a ）第一段階PCR 第一段階PCR の概要は図１８に示した。

【０２４２】分泌シグナル配列、ＦＲＨ₁ 領域、ＣＤＲ
Ｈ₁ 領域、及び38位から44位までをアルギニン、グルタ
ミン、アラニン、プロリン、グリシン、グルタミン、グ
リシン残基に変えたＦＲＨ₂ 領域をコードするHUMFR5'
DNA 断片は、以下の条件で作製された。

【０２４３】 反応液組成：プラスミドpMEHC20 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VH1P 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー HUMFR2N 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２４４】38 位から44位までをそれぞれアルギニ
ン、グルタミン、アラニン、プロリン、グリシン、グル
タミン、グリシン残基に変えたＦＲＨ₂ 領域、ＣＤＲＨ
₂ 領域、ＦＲＨ₃ 領域、ＣＤＲＨ₃ 領域、ＦＲＨ₄ 領
域、及びH 鎖定常領域のN 末端側をコードするDNA 断片
（以下、「HUMFR3' DNA 断片」という。）は、以下の条
件で作製された。

【０２４５】 反応液組成：プラスミドpMEHC20 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VH06 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー HUMFR2P 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２４６】分泌シグナル配列、ＦＲＨ₁ 領域、ＣＤＲ
Ｈ₁ 領域、及び38位から44位までをそれぞれリジン、グ
ルタミン、アラニン、ヒスチジン、グリシン、リジン、
セリン残基に変えたＦＲＨ₂ 領域をコードするDNA 断片
（以下、「MOUFR5' DNA 断片」という。）は、以下の条
件で作製された。

【０２４７】 反応液組成：プラスミドpMEHC20 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VH1P 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー MOUFR2N 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２４８】38 位から44位までをそれぞれリジン、グ
ルタミン、アラニン、ヒスチジン、グリシン、リジン、
セリン残基に変えたＦＲＨ₂ 領域、ＣＤＲＨ₂ 領域、Ｆ
ＲＨ₃ 領域、ＣＤＲＨ₃ 領域、ＦＲＨ₄ 領域、及びH 鎖
定常領域のN 末端側をコードするDNA 断片（以下、「MO
UFR3' DNA 断片」という。）は、以下の条件で作製され
た。

【０２４９】 反応液組成：プラスミドpMEHC20 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー VH06 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー MOUFR2P 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２５０】PCR 後の増幅されたHUMFR5' 、HUMFR3' 、
MOUFR5' 、及びMOUFR3'DNA断片は、フェノール抽出とエ
タノール沈殿の後、5%ポリアクリルアミドゲル電気泳動
を行い、1 μg/mlの濃度のエチジウムブロミドにより染
色した後、紫外線照射下で検出された。検出した各 DNA
断片を、剃刀で切り出し、セントリコン、及びセントリ
リューターを用いてアクリルアミドゲルより溶出した。
溶出したDNA を7,500xg 、約１時間の遠心分離により濃
縮し、エタノール沈殿の後、50μl の蒸留水に溶解し
た。

【０２５１】b ）第二段階PCR 第二段階PCR の概要は図１９に示した。

【０２５２】前述のHUMFR5' DNA 断片、及び HUMFR3' D
NA断片を融合したDNA 断片（以下、「 HUMFR2 DNA 断
片」という。）は、以下の条件で作製された。

【０２５３】 反応液組成：第一段階PCR で作製したHUMFR5' DNA 溶液 10μl 第一段階PCR で作製したHUMFR3' DNA 溶液 10μl オリゴヌクレオチドプライマー VH1P 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー VH06 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２５４】前述のMOUFR5' DNA 断片、及び MOUFR3' D
NA断片を融合した DNA断片（以下、「MOUFR2 DNA断片」
という。）は、以下の条件で作製された。

【０２５５】 反応液組成：第一段階PCR で作製したMOUFR5' DNA 溶液 10μl 第一段階PCR で作製したMOUFR3' DNA 溶液 10μl オリゴヌクレオチドプライマー VH1P 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー VH06 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２５６】PCR 後の増幅されたHUMFR2、及びMOUFR2 D
NA断片は、フェノール抽出とエタノール沈殿の後、5%ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動を行い、1 μg/mlの濃度
のエチジウムブロミドにより染色した後、紫外線照射下
で検出された。検出した各 DNA断片を、剃刀で切り出
し、セントリコン、及びセントリリューターを用いてア
クリルアミドゲルより溶出した。溶出したDNA を7,500x
g 、約１時間の遠心分離により濃縮し、エタノール沈殿
の後、50μl の蒸留水に溶解した。

【０２５７】HUMFR5' 、或はMOUFR5' DNA 断片を保持す
るプラスミドの作成方法の概要は図２０に示した。

【０２５８】得られたHUMFR2、及びMOUFR2 DNAは、フェ
ノール抽出とエタノール沈殿によりさらに精製した後、
制限酵素XhoIと制限酵素BglII により消化した。

【０２５９】プラスミドpMEHC20 DNA 1 μg を、予め制
限酵素XhoIとBglII で消化し、CIPで脱リン酸化した。
このようにして得られた脱リン酸化プラスミドpMEHC20
DNAと、予め制限酵素で消化したHUMFR2、またはMOUFR2
DNA断片を、ライゲーションキットを用いて連結した
後、大腸菌JM109 株でクローニングした。これによりHU
MFR2 DNA断片を保持するプラスミドpHFR3 とMOUFR2 DNA
断片を保持するプラスミドpHFR4 を得た。

【０２６０】（５）プラスミドpMECW5の作製 プラスミドpMECW5は、プラスミドpMEC22を鋳型として、
PCR により作製された。

【０２６１】PCR の概要は図２１に示した。

【０２６２】a ）第一段階PCR プラスミドpMEC22の挿入DNA 断片の5'末端側領域である
HHC1 DNA断片は、以下の条件で作製された。

【０２６３】 反応液組成：プラスミドpMEC22 DNA 1μg オリゴヌクレオチドプライマー ME18P 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー GTOSN 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２６４】プラスミドpMEC22の挿入DNA 断片の中央領
域である DNA断片（以下、「HHC2 DNA断片」という。）
は、以下の条件で作製された。

【０２６５】 反応液組成：プラスミドpMEC22 DNA 1μg オリゴヌクレオチドプライマー GTOSP 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー TCVVN1 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２６６】プラスミドpMEC22の挿入DNA 断片の3'末端
側領域である DNA断片（以下、「HHC3 DNA断片」とい
う。）は、以下の条件で作製された。

【０２６７】 反応液組成：プラスミドpMEC22 DNA 1 μg オリゴヌクレオチドプライマー TCVVAP 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー VHTERM 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２６８】PCR 後の増幅されたHHC1、HHC2、及びHHC3
DNA断片は、フェノール抽出とエタノール沈殿の後、5%
ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、1 μg/mlの濃
度のエチジウムブロミドにより染色した後、紫外線照射
下で検出された。検出した各DNA断片を、剃刀で切り出
し、セントリコン、及びセントリリューターを用いてア
クリルアミドゲルより溶出した。溶出したDNA を7,500x
g 、約１時間の遠心分離により濃縮し、エタノール沈殿
の後、50μl の蒸留水に溶解した。

【０２６９】b ）第二段階PCR 第二段階PCR の概要は図２２に示した。

【０２７０】前述のHHC1 DNA断片、及びHHC2 DNA断片を
融合した DNA断片（以下、「HHC1-2DNA断片」とい
う。）は、以下の条件で作製された。

【０２７１】 反応液組成：第一段階PCR で作製したHHC1 DNA溶液 10μl 第一段階PCR で作製したHHC2 DNA溶液 10μl オリゴヌクレオチドプライマー ME18P 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー TCVVN 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２７２】PCR 後の増幅されたHHC1-2 DNA断片は、フ
ェノール抽出とエタノール沈殿の後、5%ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動を行い、1 μg/mlの濃度のエチジウム
ブロミドにより染色した後、紫外線照射下で検出され
た。検出したDNA 断片を、剃刀で切り出し、セントリコ
ン、及びセントリリューターを用いてアクリルアミドゲ
ルより溶出した。溶出したDNA を7,500xg 、約１時間の
遠心分離により濃縮し、エタノール沈殿の後、50μl の
蒸留水に溶解した。

【０２７３】c ）第三段階PCR 第三段階PCR の概要は図２３に示した。

【０２７４】前述のHHC1-2 DNA断片、及びHHC3 DNA断片
を融合した DNA断片（以下、「HHC123 DNA断片」とい
う。）は、以下の条件で作製された。

【０２７５】 反応液組成：第一段階PCR で作製したHHC3 DNA溶液 10μl 第二段階PCR で作製したHHC1-2 DNA溶液 10μl オリゴヌクレオチドプライマー ME18P 80pmol オリゴヌクレオチドプライマー VHTERM 80pmol 25 mM dNTPs 混合液 20μl １０倍Ｐｆｕ緩衝液 20μl Pfu DNA ポリメラーゼ（ストラタジーン社製） 10単位 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０２７６】PCR 後の増幅されたHHC123 DNA断片は、フ
ェノール抽出とエタノール沈殿の後、5%ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動を行い、1 μg/mlの濃度のエチジウム
ブロミドにより染色した後、紫外線照射下で検出され
た。検出したDNA 断片を、剃刀で切り出し、セントリコ
ン、及びセントリリューターを用いてアクリルアミドゲ
ルより溶出した。溶出したDNA を7,500xg 、約１時間の
遠心分離により濃縮し、エタノール沈殿の後、50μl の
蒸留水に溶解した。

【０２７７】HHC123 DNA断片を保持するプラスミドの作
成方法の概要は図２４に示した。

【０２７８】得られたHHC123 DNAは、フェノール抽出と
エタノール沈殿によりさらに精製した後、制限酵素XhoI
と制限酵素XbaIにより消化した。

【０２７９】プラスミドpME18S DNA 1μg を、予め制限
酵素XhoIとXbaIで消化し、CIP で脱リン酸化した。この
ようにして得られた脱リン酸化pME18S DNAと予め制限酵
素で消化したHHC123 DNAを、ライゲーションキットを用
いて連結した後、大腸菌JM109 株でクローニングした。
これによりHHC123 DNAを保持するpMECW5を得た。

【０２８０】（６）CH11 H鎖のヒト化発現プラスミドpH
μH5-1、及びプラスミドpHμM1-1の作製 最終的に目的とする発現プラスミドpHμH5-1、及び発現
プラスミドpHμM1-1は、前作のプラスミドpHFR3 DNA 、
プラスミドpHFR4 DNA 、及びpMECW5 DNAを用いて行なっ
た。作製法の概要は図２５に示した。

【０２８１】HFR3 DNA断片は、プラスミドpHFR3 DNA 30
μg を、制限酵素ApaI、及びXhoIにより二重消化し、5%
ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離した。泳動後の
ゲルを1 μg/mlの濃度のエチジウムブロミドにより染色
した後、紫外線照射下で検出された。分子量約950bp の
目的DNA 断片を含むバンドを剃刀にて切り出し、セント
リコン、及びセントリリューターを用いてアクリルアミ
ドゲルより溶出し回収した。

【０２８２】HFR4 DNA 断片は、プラスミドpHFR4 DNA 3
0μg を、制限酵素ApaI、及びXhoIにより二重消化し、5
%ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離した。泳動後
のゲルを1 μg/mlの濃度のエチジウムブロミドにより染
色した後、紫外線照射下で検出された。分子量約950bp
の目的DNA 断片を含むバンドを剃刀にて切り出し、セン
トリコン、及びセントリリューターを用いてアクリルア
ミドゲルより溶出し回収した。

【０２８３】プラスミドpMECW5 DNAを、予め制限酵素Xh
oIとApaIで消化し、CIP で脱リン酸化した。このように
して得られた脱リン酸化プラスミドpMECW5 DNAと回収し
たHFR3 DNA、またはHFR4 DNAを、ライゲーションキット
を用いて連結した後、大腸菌DH5 α株でクローニングし
た。これによりHFR3 DNA断片を保持するプラスミドpHμ
H5-1と、HFR4 DNA断片を保持するプラスミドpHμM1-1を
得た。

【０２８４】（７）ヌクレオチド配列の確認 作製したプラスミドpHμH5-1、及びプラスミドpHμM1-1
それぞれの挿入DNA が、目的とするヌクレオチドの配列
を保持しているかどうかを確認するため、ヌクレオチド
配列の決定を行なった。ヌクレオチドの配列を決定する
にあたり、先に作製したプライマーME18P （配列番号１
７６）、及びプライマーVH06（配列番号１７８）に加
え、更に8 種類のプライマーを作製した。作製したプラ
イマーは、5'-CTAGATCAGTAGCAGGTGCCAGCTGTGTCG-3'（ME
18RVとする：配列番号１７７）、5'-GATACACCTTCACTGAC
TATAAT-3' （ VH05 とする：配列番号１７９）、5'-CGT
CGGATACGAGCAGCGTG-3'（ VH07 とする：配列番号１８
０）、5'-CACCCCGCGACGGCTTCTT-3' （ VH08 とする：配
列番号１８１）、5'-GGATCACAGGGGCCTGACCT-3'（ VH01
とする：配列番号１８２）、5'-CTGTGAAAACCCACACCAAC-
3'（ VH02 とする：配列番号１８３）、5'-GCTGAACCTGC
GGGAGTCGG-3'（ VH03 とする：配列番号１８４）、5'-G
TGGCCCATGAGGCCCTGCC-3'（ VH04 とする：配列番号１８
５）である。

【０２８５】ヌクレオチド配列の決定は、アルカリSDS
法（Sambrook,J. et. al.,（1989）. in "Molecular Cl
oning. A Laboratory manual. Second edition." Cold
Spring Harbor Laboratory Press. 参照）と塩化セシウ
ム法（Sambrook,J. et. al.,（1989）. in "Molecular
Cloning. A Laboratory manual. Second edition." Col
d Spring Harbor Laboratory Press. 参照）により精製
した各プラスミドDNAを鋳型とし、ジデオキシヌクレオ
チド鎖終結法（Sanger,F.S. et. al.,（1977）. Pro. N
atl. Acad. Sci. USA. 74:5463参照）で行なった。

【０２８６】ヌクレオチドの配列を確認した結果、pHμ
H5-1は配列番号８６に示したポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列を、pHμM1-1は配列番号８８に示した
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を保持して
いることを確認した。

【０２８７】実施例７．ヒト化 CH11 の各サブユニット
をコードする遺伝子のCOS-7 細胞での発現 作製したヒト化H 鎖DNA 、及びヒト化L 鎖DNA の発現
は、サル腎臓由来細胞株（以下、「COS-7 」とする）を
用いて行なった。上記で得られたヒト化H 鎖発現プラス
ミド、及びヒト化L 鎖発現プラスミドのCOS-7 細胞への
形質導入は、遺伝子導入装置 ECM600 Ｍ（BTX 社製）を
用いて、電気穿孔法により行った。即ち、COS-7 細胞
（American Type Culture Collection No. CRL-1651 ）
を、10% のウシ胎児血清（CSL 社製）を含むダルベッコ
改変イーグル最小必須培地（以下、「DMEM」とする：日
水製薬社製）を入れた細胞培養用フラスコ（大角、培養
面積 225cm² ：住友ベークライト製）中でセミコンフル
エントになるまで培養した。その後、培地を除去し、3m
l のトリプシン-EDTA 溶液（シグマ社製）中、 37 ℃、
３分間処理することによりCOS-7 細胞をフラスコから遊
離させた。遊離した細胞は、800rpm、2 分間の遠心分離
により回収し、リン酸緩衝液［0.02% 塩化カリウム、0.
02% リン酸２水素カリウム、0.8%塩化ナトリウム、1.15
% リン酸水素２ナトリウム、以下、「PBS （- ）緩衝
液」とする；日水製薬社製］で２回洗浄した。洗浄した
COS-7細胞を PBS（- ）緩衝液で 4x10⁶細胞数／mlとな
るよう調製し、COS-7 細胞懸濁液とした。

【０２８８】一方、プラスミド大量調製キット（マキシ
プレップDNA ピュリフィケーションキット：プロメガ社
製）を用いて調製したH 鎖発現プラスミド DNA 40 μg
、及びL 鎖発現プラスミド DNA 40 μg を混合した
後、同一チューブ内でエタノール沈殿し、 PBS（- ）緩
衝液 40 μl に懸濁した。得られたプラスミド懸濁液40
μl を、先に調製したCOS-7 細胞懸濁液500 μl （2x10
⁶ 細胞数）と混合し、電極間隔 4mmのチャンバー（バイ
オラッド社製）に移し、遺伝子導入装置に装着した。そ
の後、150V-900μF の減衰波型パルスを与えることによ
り、目的とするプラスミドDNA をCOS-7 細胞内に導入し
た。パルスを与えた後のチャンバー内の細胞-DNA 混合
液を、10% ウシ胎児血清を含むDMEM 20ml に懸濁し、細
胞培養用フラスコ（中角、培養面積 75cm²：住友ベーク
ライト社製）に移した。7.5% CO₂下、37℃、 24 時間培
養した後、培養上清を除き、無血清DMEM培地で細胞を洗
浄した。新しい無血清DMEM培地20mlを加え、7.5% CO
₂下、37℃、24時間培養した後に培養上清を回収した。

【０２８９】上記の方法により、以下に記載する［Ａ］
から［Ｉ］のプラスミドの組み合わせでそれぞれCOS-7
細胞を形質転換し、培養上清を回収した。

【０２９０】［Ａ］：pME18S ［Ｂ］：pHμM1-1、及び pH κKY2-58 ［Ｃ］：pHμM1-1、及び pH κKF2-19 ［Ｄ］：pHμM1-1、及び pH κRY2-10 ［Ｅ］：pHμM1-1、及び pH κRF2-52 ［Ｆ］：pHμH5-1、及び pH κKY2-58 ［Ｇ］：pHμH5-1、及び pH κKF2-19 ［Ｈ］：pHμH5-1、及び pH κRY2-10 ［Ｉ］：pHμH5-1、及び pH κRF2-52 試験例１．抗ヒト Fasヒト化抗体の検出 本発明により得られる抗ヒト Fasヒト化抗体の検出は、
SDS- ポリアクリルアミドゲル電気泳動（以下「SDS-PA
GE」とする）後、分離した蛋白質をニトロセルロース膜
へ電気的に転写・固定し、抗体により検出する方法（ウ
エスタンブロッティング法）により行なった。

【０２９１】（１）SDS-PAGEによる分離 実施例７で得られた培養上清を1ml を、5Lの純水に対し
て、排除限界12,000〜14,000の透析チュ−ブを用いて４
℃で１５時間透析した後、遠心濃縮機（CC-101：トミー
精工社製）を用いて減圧乾燥させた。これにサンプル緩
衝液［2%（w/v） SDS（電気泳動用グレード：バイオラ
ッド社製）、5%（v/v ）β- メルカプトエタノール（シ
グマ社製）、10% （v/v ）グリセロール、0.1%ブロモフ
ェノール・ブルー］10μl を加えよく懸濁した後、100
℃で５分間加熱し、電気泳動用試料とした。得られた電
気泳動用試料全量を、SDS-PAGE（4 〜20% グラジエント
ゲル：岩城硝子社製）に重層し、20mA定電流下で電気泳
動した（室温下、１時間）。

【０２９２】（２）蛋白質の転写・固定 電気泳動終了後、ゲル内で分離した蛋白質をセミドライ
ブロッティング法（Towbin, H., et.al.（1979）. Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA 76:4350参照）によりニトロ
セルロース膜（トランスブロットトランスファーメンブ
レン：バイオラット社製）に電気的に転写した。転写
は、以下の条件で実施した。

【０２９３】転写用緩衝液： 20mMトリス、150mM グリ
シン、10% （v/v ）メタノール ブロッティング装置：ブロッティング装置（TF03-050：
岩城硝子社製） 実施条件： 4 ℃下、0.2A（定電流）、1 時間 H 鎖、及びL 鎖を個別に検出するため、SDS-PAGE、及び
ウェスタンブロッティングは、同時に二回行なった。こ
れにより、同一条件下で転写されたニトロセルロース膜
を二枚得た。得られたセルロース膜のうち、一方はH 鎖
検出用、残る一方をL 鎖検出用として用いた。

【０２９４】（３）抗体による検出 転写終了後のニトロセルロース膜を 3% （w/v ）ゼラチ
ン（日本バイオラッド社製）を含む20mMトリス−塩酸緩
衝液（pH7.5 ）、500mM 塩化ナトリウム（以下、「TBS
」とする）溶液に浸し、室温下、１時間、穏やかに振
盪した（以下、この操作を「ブロッキング」とする）。

【０２９５】ヒト化抗体H 鎖の検出は、抗ヒトIgM H 鎖
ペルオキシダーゼ標識抗体（ペルオキシダーゼ−コンジ
ュゲーティド アフィニピュア ヤギ抗ヒトIgM 、Fc5
μフラグメント（Peroxidase-conjugated AffiniPure G
oatAnti-Human IgM, Fc5μ Fragment Specific）：ジャ
クソンイムノリサーチラボラトリー社製）を用いて行な
った。抗ヒトIgM H 鎖標識抗体5 μl を含む10mlの緩衝
液（1%（w/v ）ゼラチンを含むTBS 溶液）中で、ブロッ
キングを終えたニトロセルロース膜を、室温下、4 時間
振盪した。反応後、取り出したニトロセルロース膜を、
2%の Tween20（バイオラッド社製）を含むTBS 溶液20ml
中に浸し、室温下、20分間、穏やかに振盪し洗浄した。
同様の洗浄操作を再び繰り返した後、洗浄されたニトロ
セルロース膜の水分をペーパータオルで吸い取った。抗
体と反応した蛋白質は、抗体に予め結合させているペル
オキシダーゼの活性として検出することができる。そこ
で、ペルオキシダーゼ活性は化学発光基質を用いたECL
ウエスタンブロッティングシステム（アマシャム社製）
を用いて検出した。即ち、洗浄を終えたニトロセルロー
ス膜を、本システムに添付されている発光基質に浸し、
抗体の反応した蛋白質バンドを発光させた。発光は、イ
ンスタントフィルム（タイプ667 ：ポラロイド社製）を
装着したECL ミニカメラ（アマシャム社製）により検出
した。ゲルに残存した蛋白質については、銀染色法にて
染色した。得られた写真と銀染色したゲルを照合するこ
とにより、各抗体と特異的に結合したバンドを同定し
た。

【０２９６】なお、実施例７で得られる発現産物の定量
は、上述方法により行った。すなわち、ウェスタンブロ
ッティング法により特異的に検出された各培養上清中に
含まれるバンドと、各濃度に調整したヒトIgM （ピアス
社製）のバンドを、デンシトメーター（アトー社製）で
比較することにより行った。

【０２９７】ヒト化抗体L 鎖の検出は、抗ヒトIgM L 鎖
ペルオキシダーゼ標識抗体（ペルオキシダーゼ標識抗ヒ
トκL 鎖モノクローナル抗体HP6156（Peroxidase-Label
ledMonoclonal Antibody to Human Kappa Light Chain
HP6156 ）：キルケガードアンド ペリー ラボラトリ
ー社製）を用いて行なった。抗ヒトIgM L 鎖標識抗体10
μl を含む10mlの緩衝液（1%（w/v ）ゼラチンを含むTB
S 溶液）中で、ブロッキングを終えたニトロセルロース
膜を、室温下、4 時間振盪した。反応後、取り出したニ
トロセルロース膜を、0.05% の Tween20を含むTBS 溶液
20ml中に浸し、室温下、20分間、穏やかに振盪し洗浄し
た。同様の洗浄操作を再び繰り返した後、洗浄されたニ
トロセルロース膜の水分をペーパータオルで吸い取っ
た。抗体が反応した蛋白質バンドは、ヒト化H 鎖同様、
ECL ウエスタンブロッティング検出システム（アマシャ
ム社製）を用い発光させ、インスタントフィルムを装着
したECL カメラにて検出した。得られた写真と銀染色し
たゲルを照合することにより、各抗体と特異的に結合し
たバンドを同定した。

【０２９８】その結果、プラスミドpHμM1-1、或はプラ
スミドpHμH5-1を含む複数のプラスミドで形質転換した
COS-7細胞の培養上清由来の試料（実施例７記載の
［Ｂ］、［Ｃ］、［Ｄ］、［Ｅ］、［Ｆ］、［Ｇ］、
［Ｈ］、及び［Ｉ］）のレーンには、ヒトH 鎖を特異的
に認識する抗体により、分子量約 78,000 のシグナルバ
ンドが検出された。またプラスミドpHκKY2-58、プラス
ミドpHκKF2-19、プラスミドpHκRY2-10、またはプラス
ミド pH κRF2-52を含む複数のプラスミドで形質転換し
た COS-7細胞の培養上清由来の試料（実施例７の
［Ｂ］、［Ｃ］、［Ｄ］、［Ｅ］、［Ｆ］、［Ｇ］、
［Ｈ］、及び［Ｉ］）のレーンには、ヒトL 鎖を特異的
に認識する抗体により、分子量約25,000のシグナルバン
ドが検出された。

【０２９９】試験例２．抗Fas 抗体のFas 抗原に対する
結合活性の測定 本発明で得られる抗Fas 抗体のFas 抗原に対する結合能
の検定は、可溶性のヒトFas 抗原融合蛋白質を作製し、
これに対する結合能を検出する方法（以下「ELISA 法」
とする）により行なった。

【０３００】（１）可溶性ヒトFas 抗原融合蛋白質の発
現 可溶性ヒトFas 抗原を得るため、ヒトFas 抗原の細胞外
領域とマウス・インターロイキン3 受容体の細胞外領域
とを融合した融合蛋白質（以下、「ヒトFas 融合蛋白
質」とする）発現プラスミドベクターを作製した。

【０３０１】ヒトFas 融合蛋白質をコードするDNA は、
PCR 法により作製した。

【０３０２】a ）鋳型プラスミドDNA PCR を行なうにあたり、鋳型として用いたプラスミドDN
A は、マウス Fas抗原の細胞外領域（Watanabe-Fukunag
a,R., et.al.（1992）. J.Immunol. 148:1274参照）と
マウスインターロイキン3 受容体の細胞外領域（Gorma
n,D., et.al. （1990）. Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 87:
5459, Hara,T. and Miyajima,A.（1992）. EMBO J. 11:
1875 参照）との融合蛋白質をコードするDNA の発現プ
ラスミドベクター pME18S-mFas-AIC（Nishimura, Y., e
t.al. （1995） J. Immunol. 154:4395 参照）、ヒト
Fas抗原をコードするcDNAを保持するプラスミドベクタ
ーpCEV4 （Itoh, N., et.al.（1991）. Cell 66:233 ）
である。

【０３０３】b ）プライマーの作製 PCR を行なうにあたり、4 種のヌクレオチドプライマー
を作製した。作製した配列は、5'- GGGGAATTCCAGTACGGA
GTTGGGGAAGCTCTTT-3' （N1とする：配列番号１８６）、
5'-GTTTCTTCTGCCTCTGTCACCAAGTTAGATCTGGA-3' （C3N と
する：配列番号１８７）、5'-TCCAGATCTAACTTGGTGACAGA
GGCAGAAGAAAC-3' （N3N とする：配列番号１８８）、及
び5'- CCCTCTAGACGCGTCACGTGGGCATCAC-3' （CTN2とす
る：配列番号１８９）である。

【０３０４】c ）第一段階PCR 第一段階PCR の概略を図２６に示した。

【０３０５】ヒトFas 抗原の細胞外領域をコードするHF
AS DNA断片は、LA PCRキット（宝酒造社製）を用いて、
以下の条件で作製された。

【０３０６】 反応液組成：プラスミドpCEV4 DNA 20 ng オリゴヌクレオチドプライマーN1 0.5 μg オリゴヌクレオチドプライマーC3N 0.5 μg dNTPmix 25 μl 10xLA PCR 緩衝液 25 μl LA Taqポリメラーゼ（宝酒造社製） 12.5 単位 （再蒸留水を加えて250 μl とする。dNTPmix 、10x LA PCR緩衝液、及びLA Taq ポリメラーゼは、キットに添付されている物を用いた。） 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０３０７】マウスインターロイキン3 受容体の細胞外
領域をコードするMAIC DNA断片は、LA PCRキット（宝酒
造社製）を用いて、以下の条件で作製された。

【０３０８】 反応液組成：プラスミドpME18S-mFas-AIC DNA 20 ng オリゴヌクレオチドプライマーN3N 0.5 μg オリゴヌクレオチドプライマーCTN2 0.5 μg dNTPmix 25 μl 10xLA PCR 緩衝液 25 μl LA Taqポリメラーゼ（宝酒造社製） 12.5 単位 （再蒸留水を加えて250 μl とする。dNTPmix 、10x LA PCR緩衝液、及びLA Taq ポリメラーゼは、キットに添付されている物を用いた。） 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０３０９】PCR 後の増幅されたHFAS DNA、及びMAIC D
NA断片は、フェノール抽出とエタノール沈殿の後、5%ポ
リアクリルアミドケル電気泳動を行い、1 μg/mlの濃度
のエチジウムブロミドにより染色した後、紫外線照射下
で検出された。検出した各 DNA断片を、剃刀で切り出
し、セントリコン、及びセントリリューターを用いてア
クリルアミドゲルより溶出した。溶出したDNA を7,500x
g の遠心分離により濃縮し、エタノール沈殿の後、20μ
l の蒸留水に溶解した。

【０３１０】d ）第二段階PCR 第二段階PCR の概要は図２７に示した。

【０３１１】ヒトFas 融合蛋白質をコードするFASAIC D
NA断片は、 LA PCR キット（宝酒造社製）を用いて、以
下の条件で作製された。

【０３１２】 反応液組成：第一段階PCR で作製したHFAS DNA溶液 20 μｌ 第一段階ＰＣＲ で作製したMAIC DNA溶液 20 μl オリゴヌクレオチドプライマー N1 0.5 μg オリゴヌクレオチドプライマー CTN2 0.5 μg dNTPmix 25 μl 10xLA PCR 緩衝液 25 μl LA Taqポリメラーゼ（宝酒造社製） 12.5 単位 （再蒸留水を加えて250 μl とする。dNTPmix 、10x LA PCR緩衝液、及びLA Taq ポリメラーゼは、キットに添付されている物を用いた。） 温度条件：94℃で2 分間加熱した後、94℃で1 分間、55
℃で1 分間、72℃で2 分間の温度サイクルを30回繰り返
してから、72℃で10分間加温した。

【０３１３】PCR 後増幅されたFASAIC DNA断片は、フェ
ノール抽出とエタノール沈殿の後、1%アガロースゲル電
気泳動を行い、1 μg/mlの濃度のエチジウムブロミドに
より染色した後、紫外線照射下で検出された。検出した
各 DNA断片を、剃刀で切り出し、セントリコン、及びセ
ントリリューターを用いてアガロースゲルより溶出し
た。溶出したDNA を7,500xg の遠心分離により濃縮し、
エタノール沈殿の後、50μl の蒸留水に溶解した。

【０３１４】FASAIC DNA 断片を保持するプラスミドの
作製方法の概略を図２８に示した。得られたFASAIC DNA
は、フェノール抽出とエタノール沈殿によりさらに精製
した後、制限酵素EcoRI と制限酵素XbaIにより消化し
た。

【０３１５】プラスミドpME18S-mFas-AIC DNA 2 μg
を、予め制限酵素EcoRI とXbaIで消化し、0.8%アガロー
スゲル電気泳動を行なった。エチジウムブロミド1 μg/
mlにより染色した後、紫外線照射下で検出された約3000
bpのDNA バンドを剃刀で切り出し、DNA を回収した。こ
のようにして得られた制限酵素消化プラスミドpME18S-m
Fas-AIC DNA と、予め制限酵素で消化したFASAIC DNA断
片をライゲーションキットを用いて連結した後、大腸菌
DH5 α株でクローニングした。これによりSRαプロモー
ター下流に順方向にヒトFas 融合蛋白質をコードするFA
SAIC DNA断片が挿入されたプラスミドphFas-AIC2を得
た。

【０３１６】e ）COS-7 細胞での発現 上記で得られたヒトFas 融合蛋白質発現プラスミドphFa
s-AIC2のCOS-7 細胞への形質導入は、遺伝子導入装置EC
M600M （BTX 社製）を用いて、電気穿孔法により行っ
た。即ち、COS-7 細胞を、10% のウシ胎児血清（CSL 社
製）を含むDMEM（日水製薬社製）を入れた細胞培養用フ
ラスコ（大角、培養面積 225cm² ：住友ベークライト
製）中でセミコンフルエントになるまで培養した。その
後、培地を除去し、3ml のトリプシン-EDTA 溶液（シグ
マ社製）中、 37 ℃、３分間処理することによりCOS-7
細胞をフラスコから遊離させた。遊離した細胞は、800r
pm、2分間の遠心分離により回収し、PBS （- ）緩衝液
（日水製薬社製）で２回洗浄した。洗浄した COS-7細胞
を PBS（- ）緩衝液で 4x10⁶細胞数／mlとなるよう調製
し、COS-7 細胞懸濁液とした。

【０３１７】一方、プラスミド大量調製キット（マキシ
プレップ・DNA ピューリフィケーションシステム；プロ
メガ社製）を用いて調製したプラスミドphFas-AIC2 DNA
100μg をエタノール沈殿した後、PBS （- ）緩衝液 1
00μl に懸濁した。得られたプラスミド懸濁液100 μl
を、先に調製したCOS-7 細胞懸濁液500 μl （2x10⁶細
胞数）と混合し、電極間隔 4mmのチャンバー（バイオラ
ッド社製）に移し、遺伝子導入装置にセットした。その
後、150V-900μF の減衰波型パルスを与えることによ
り、目的とするプラスミドDNA は、COS-7 細胞内に導入
した。パルスを与えた後のチャンバー内の細胞-DNA混合
液を、10% ウシ胎児血清を含むDMEM 20mlに懸濁し、細
胞培養用フラスコ（中角、培養面積 75cm²：住友ベーク
ライト社製）に移した。7.5% CO₂ 下、37℃、 24 時間
培養した後、培養上清を除き、無血清DMEM培地で細胞を
洗浄した。新しい無血清DMEM培地20mlを加え、7.5% CO₂
下、37℃、24時間培養した後に培養上清を回収した。

【０３１８】（２）ELISA 法による Fas抗原への結合能
の検定 ELISA 法によるFas 抗原への結合能の検定は、以下の方
法によった。即ち、96ウエル E.I.A. プレート（コースタ
ー社製：3690 底面積 0.16cm²）の各ウエルに、上記
（１）で調製した COS-7培養上清と 50mM 炭酸- 重炭酸
緩衝液（pH9.5）を 1:5で混合した溶液を50μl ずつ入
れ、４℃で一晩保温することにより、ウエル表面にヒト
Fas抗原融合蛋白質を吸着させた。吸着の後、各ウエル
を 0.05%の Tween-20 （EIA グレード：バイオラッド社
製）を含む PBS（- ）緩衝液（以下、「PBS-T 」とす
る）で洗浄した。洗浄後、スーパーブロックブロッキン
グバッファー イン PBS （SuperBlock Blocking Buff
er in PBS ：ピアス社製）を各ウエル当たり50μl ずつ
添加し、室温で２時間静置することによりブロッキング
した。再び、各ウエルをPBS-T で洗浄したのち、実施例
７で調製した培養上清希釈液 50 μl を各ウエルに添加
し、37℃下、2 時間保温した。その後、PBS-Tで洗浄し
たのち、10000 倍希釈したペルオキシダーゼ標識ヤギ抗
ヒト IgMモノクローナル抗体（ジャクソンイムノリサー
チラボラトリー社製）50μl を各ウエルに分注し、37℃
下、2 時間保温した。PBS-T で洗浄したのち、50μl の
基質溶液（ペルオキシダーゼ基質セット・ABTS：バイオ
ラッド社製）を各ウエルに分注し、発色反応を行った。
各培養上清中に含まれる発現産物のヒト Fas抗原融合蛋
白質に対する結合活性は、マイクロプレートリーダー
（モデル 3550UV ：バイオラッド社製）を用いて各ウエ
ルの 405nm、及び 492nmにおける吸光度を測定し、評価
した。

【０３１９】その結果、実施例７の［Ｂ］、［Ｃ］、
［Ｄ］、［Ｅ］、［Ｆ］、［Ｇ］、［Ｈ］及び［Ｉ］で
調製したヒト化発現産物に、ヒトFas 抗原融合蛋白質と
の結合性が認められた（図２９及び３０）。

【０３２０】試験例３．アポトーシス誘導活性の検定 上記の実施例７で調製した COS-7細胞培養上清の細胞障
害活性は、「Cell counting kit 」（和光純薬（株）
製）を使用し、該培養上清存在下で培養したヒトリンパ
球細胞株ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞（以下、「HPB-ALL 細胞」
とする）の生存率を計測することにより算定した（ Mor
ikawa, S., et al. (1978). Int. J. Cancer 21:166 参
照）。

【０３２１】HPB-ALL 細胞を、20mM HEPES、50μM 2-メ
ルカプトエタノール、0.33% 重炭酸ナトリウム（シグマ
社製）、及び10% ウシ胎児血清（CSL 社製）を含むRPMI
1640培地（日水製薬社製）（以下、「RPMI培地」とす
る）にて、5 ％ CO₂下、37℃で培養した。対数増殖期に
あるＨＰＢ−ＡＬＬ細胞を回収し、５×１０⁶ 細胞／ｍ
ｌになるようにRPMI培地にて懸濁し、ＨＰＢ−ＡＬＬ細
胞懸濁液とした。

【０３２２】96ウエル培養プレート（住友ベークライト
社製）の各ウエルに、実施例７で調製された COS-7細胞
培養上清又はマウス抗ヒトＦａｓ抗体ＣＨ１１（ＭＢＬ
社）を50μl と、先に作製した HPB-ALL細胞懸濁液
（２．５×１０⁵ 細胞／50μl ）を50μl を分注し、5
％ CO₂下、37℃、20時間培養した。培養後、各ウエル
に、キットに含まれているＷＳＴ−１溶液を10μl 添加
し、５％ CO₂下、37℃で２時間加温した。次に、マイク
ロプレートリーダーＭｏｄｅｌ３５５０−ＵＶ（Ｂｉｏ
Ｒａｄ社製）で各ウェルの４５０ｎｍ及び７５０ｎｍ
の２波長の吸光度を測定した。各 COS-7細胞培養上清及
びＣＨ１１溶液の IgM の濃度は、試験例１記載のウェ
スタン・ブロッティング試験におけるデンシトメーター
を用いた解析により算定された。

【０３２３】ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞の％生存率は、下記式
を用いて算定された。

【０３２４】 生存率（％）＝（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）×１００ ［ここで、 Ａ＝ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞をＣＨ１１または COS-7細胞培
養上清存在下で培養した場合の残存細胞数、 Ｂ＝（ＣＨ１１または COS-7細胞培養上清非存在下で）
ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞のみを培養した場合の残存細胞数、 Ｃ＝（上記Ａ又はＢと同様に２０時間インキュベートし
た場合の）ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞が存在しない場合のRPMI
培地単独の数値を表す。］ この結果は、図３１に図示されている。細胞障害活性の
指標であるＥＤ₅₀値は各実験において算定された。ＥＤ
₅₀は細胞生存率が５０％になるＩｇＭの濃度を表す。

【０３２５】以下にその結果を示す。

【０３２６】 検体 ＥＤ₅₀(ng/ml) ［Ｂ］ １．１ ［Ｃ］ １．０ ［Ｄ］ １．７ ［Ｅ］ １．５ ［Ｇ］ ２．４ ［Ｉ］ ３．４ ＣＨ１１ １０．７ この結果より、Ｊ鎖を欠損する組換えＩｇＭ分子は、Ｃ
Ｈ１１分子に比較して３ないし１０倍高い細胞障害活性
を有することが明らかである。

【０３２７】製剤例１．本発明の抗ヒトＦａｓヒト化モ
ノクローナル抗体は、水またはそれ以外の薬理学的に許
容し得る溶液に溶解した無菌性溶液または懸濁液のアン
プルとして使用に供され、また無菌粉末製剤（抗ヒトＦ
ａｓヒト化モノクローナル抗体溶液を凍結乾燥するのが
好ましい。）をアンプルに充填しておき、同時に薬理学
的に許容し得る溶液で希釈してもよい。

【０３２８】

【発明の効果】本発明の抗ヒトＦａｓヒト化抗体はヒト
Ｆａｓ抗原に対し結合能を有し、優れたアポトーシス誘
導活性を有する。したがって、本抗体は、優れた抗リウ
マチ剤として有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＣＨ１１の各サブユニットの全長をコードする
ＤＮＡのクローニングのためのｃＤＮＡライブラリーの
構築図。

【図２】ＣＨ１１の各サブユニットの全長をコードする
ＤＮＡのクローニングの工程を示した図。

【図３】Ｈ鎖ヌクレオチド配列決定戦略図。

【図４】Ｌ鎖ヌクレオチド配列決定戦略図。

【図５】ＶＬ−ＫＹ及びＶＬ−ＫＦＤＮＡ断片の第一段
階ＰＣＲ作成図

【図６】ＶＬ−ＫＹ及びＶＬ−ＫＦＤＮＡ断片の第二段
階ＰＣＲ作成図

【図７】ＶＬ−ＫＹ及びＶＬ−ＫＦＤＮＡ断片の第三段
階ＰＣＲ作成図

【図８】プラスミドｐＨκＫＹ２−５８及びｐＨκＫＦ
２−１９の構築図

【図９】ＶＬ−ＲＹ及びＶＬ−ＲＦＤＮＡ断片の第一段
階ＰＣＲ作成図

【図１０】ＶＬ−ＲＹ及びＶＬ−ＲＦＤＮＡ断片の第二
段階ＰＣＲ作成図

【図１１】プラスミドｐＨκＲＹ２−１０及びｐＨκＲ
Ｆ２−５２の構築図

【図１２】ＭＥＣ ＤＮＡ断片作成図

【図１３】プラスミドｐＭＥＣ２２の構築図

【図１４】ＶＨ１２３４ＤＮＡ断片の第一段階ＰＣＲ作
成図

【図１５】ＶＨ１２３４ＤＮＡ断片の第二段階ＰＣＲ作
成図

【図１６】ＶＨ１２３４ＤＮＡ断片の第三段階ＰＣＲ作
成図

【図１７】プラスミドｐＭＥＨＣ２０の構築図

【図１８】ＨＵＭＥＲ２ＤＮＡ及びＨＵＭＥＲ２ＤＮＡ
断片の第一段階ＰＣＲ作成図

【図１９】ＨＵＭＥＲ２ＤＮＡ及びＨＵＭＥＲ２ＤＮＡ
断片の第二段階ＰＣＲ作成図

【図２０】プラスミドｐＨＦＲ３及びｐＨＦＲ４の構築
図

【図２１】ＨＨＣ１２３ＤＮＡ断片の第一段階ＰＣＲ作
成図

【図２２】ＨＨＣ１２３ＤＮＡ断片の第二段階ＰＣＲ作
成図

【図２３】ＨＨＣ１２３ＤＮＡ断片の第三段階ＰＣＲ作
成図

【図２４】プラスミドｐＭＥＣＷ５の構築図

【図２５】プラスミドｐＨＣμＨ及びｐＨＣμＭの構築
図

【図２６】ＦＡＳＡＩＣＤＮＡ断片の第一段階ＰＣＲ作
成図

【図２７】ＦＡＳＡＩＣＤＮＡ断片の第二段階ＰＣＲ作
成図

【図２８】プラスミドphＦａｓ−ＡＩＣ２の構築図

【図２９】ＥＬＩＳＡ法によるＦａｓ結合活性測定図

【図３０】ＥＬＩＳＡ法によるＦａｓ結合活性測定図

【図３１】ＨＰＢ−ＡＬＬ細胞における細胞障害活性測
定図

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 フラグメント型：中間部フラグメント 配列番号：２ 配列の長さ：１７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 フラグメント型：中間部フラグメント 配列 Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser 配列番号：３ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 フラグメント型：中間部フラグメント 配列番号：４ 配列の長さ：１６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 フラグメント型：中間部フラグメント 配列 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 配列番号：５ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 フラグメント型：中間部フラグメント 配列番号：６ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 フラグメント型：中間部フラグメント 配列番号：７ 配列の長さ：1773 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 起源 生物名：マウス（Mus musculus） 細胞の種類：ハイブリドーマ セルライン：ＣＨ１１ 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置:1..1770 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号: mat peptide 存在位置:58..1770 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号: sig peptide 存在位置:1..57 特徴を決定した方法：S 配列 ATG GGA TGG AGC TGG ATC TTT CTC TTC CTC CTG TCA GGA ACT GCA GGC 48 Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly -19 -15 -10 -5 GTC CAC TCT GAG GTC CAG CTT CAG CAG TCA GGA CCT GAG CTG GTG AAA 96 Val His Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys 1 5 10 CCT GGG GCC TCA GTG AAG ATA TCC TGC AAG GCT TCT GGA TAC ACA TTC 144 Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 15 20 25 ACT GAC TAC AAC ATG CAC TGG GTG AAG CAG AGC CAT GGA AAG AGC CTT 192 Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu 30 35 40 45 GAG TGG ATT GGA TAT ATT TAT CCT TAC AAT GGT GGT ACT GGC TAC AAC 240 Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn 50 55 60 CAG AAG TTC AAG AGC AAG GCC ACA TTG ACT GTT GAC AAT TCC TCC AGC 288 Gln Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser 65 70 75 ACA GCC TAC ATG GAG CTC CGC AGC CTG ACA TCT GAG GAC TCT GCA GTC 336 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 80 85 90 TAT TAC TGT GCA AGA AGT TAC TAT GCT ATG GAC TAC TGG GGT CAG GGA 384 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 95 100 105 ACC TCA GTC ACC GTC TCC TCA GAG AGT CAG TCC TTC CCA AAT GTC TTC 432 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Gln Ser Phe Pro Asn Val Phe 110 115 120 125 CCC CTC GTC TCC TGC GAG AGC CCC CTG TCT GAT AAG AAT CTG GTG GCC 480 Pro Leu Val Ser Cys Glu Ser Pro Leu Ser Asp Lys Asn Leu Val Ala 130 135 140 ATG GGC TGC CTG GCC CGG GAC TTC CTG CCC AGC ACC ATT TCC TTC ACC 528 Met Gly Cys Leu Ala Arg Asp Phe Leu Pro Ser Thr Ile Ser Phe Thr 145 150 155 TGG AAC TAC CAG AAC AAC ACT GAA GTC ATC CAG GGT ATC AGA ACC TTC 576 Trp Asn Tyr Gln Asn Asn Thr Glu Val Ile Gln Gly Ile Arg Thr Phe 160 165 170 CCA ACA CTG AGG ACA GGG GGC AAG TAC CTA GCC ACC TCG CAG GTG TTG 624 Pro Thr Leu Arg Thr Gly Gly Lys Tyr Leu Ala Thr Ser Gln Val Leu 175 180 185 CTG TCT CCC AAG AGC ATC CTT GAA GGT TCA GAT GAA TAC CTG GTA TGC 672 Leu Ser Pro Lys Ser Ile Leu Glu Gly Ser Asp Glu Tyr Leu Val Cys 190 195 200 205 AAA ATC CAC TAC GGA GGC AAA AAC AGA GAT CTG CAT GTG CCC ATT CCA 720 Lys Ile His Tyr Gly Gly Lys Asn Arg Asp Leu His Val Pro Ile Pro 210 215 220 GCT GTC GCA GAG ATG AAC CCC AAT GTA AAT GTG TTC GTC CCA CCA CGG 768 Ala Val Ala Glu Met Asn Pro Asn Val Asn Val Phe Val Pro Pro Arg 225 230 235 GAT GGC TTC TCT GGC CCT GCA CCA CGC AAG TCT AAA CTC ATC TGC GAG 816 Asp Gly Phe Ser Gly Pro Ala Pro Arg Lys Ser Lys Leu Ile Cys Glu 240 245 250 GCC ACG AAC TTC ACT CCA AAA CCG ATC ACA GTA TCC TGG CTA AAG GAT 864 Ala Thr Asn Phe Thr Pro Lys Pro Ile Thr Val Ser Trp Leu Lys Asp 255 260 265 GGG AAG CTC GTG GAA TCT GGC TTC ACC ACA GAT CCG GTG ACC ATC GAG 912 Gly Lys Leu Val Glu Ser Gly Phe Thr Thr Asp Pro Val Thr Ile Glu 270 275 280 285 AAC AAA GGA TCC ACA CCC CAA ACC TAC AAG GTC ATA AGC ACA CTT ACC 960 Asn Lys Gly Ser Thr Pro Gln Thr Tyr Lys Val Ile Ser Thr Leu Thr 290 295 300 ATC TCT GAA ATC GAC TGG CTG AAC CTG AAT GTG TAC ACC TGC CGT GTG 1008 Ile Ser Glu Ile Asp Trp Leu Asn Leu Asn Val Tyr Thr Cys Arg Val 305 310 315 GAT CAC AGG GGT CTC ACC TTC TTG AAG AAC GTG TCC TCC ACA TGT GCT 1056 Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Leu Lys Asn Val Ser Ser Thr Cys Ala 320 325 330 GCC AGT CCC TCC ACA GAC ATC CTA ACC TTC ACC ATC CCC CCC TCC TTT 1104 Ala Ser Pro Ser Thr Asp Ile Leu Thr Phe Thr Ile Pro Pro Ser Phe 335 340 345 GCC GAC ATC TTC CTC AGC AAG TCC GCT AAC CTG ACC TGT CTG GTC TCA 1152 Ala Asp Ile Phe Leu Ser Lys Ser Ala Asn Leu Thr Cys Leu Val Ser 350 355 360 365 AAC CTG GCA ACC TAT GAA ACC CTG AAT ATC TCC TGG GCT TCT CAA AGT 1200 Asn Leu Ala Thr Tyr Glu Thr Leu Asn Ile Ser Trp Ala Ser Gln Ser 370 375 380 GGT GAA CCA CTG GAA ACC AAA ATT AAA ATC ATG GAA AGC CAT CCC AAT 1248 Gly Glu Pro Leu Glu Thr Lys Ile Lys Ile Met Glu Ser His Pro Asn 385 390 395 GGC ACC TTC AGT GCT AAG GGT GTG GCT AGT GTT TGT GTG GAA GAC TGG 1296 Gly Thr Phe Ser Ala Lys Gly Val Ala Ser Val Cys Val Glu Asp Trp 400 405 410 AAT AAC AGG AAG GAA TTT GTG TGT ACT GTG ACT CAC AGG GAT CTG CCT 1344 Asn Asn Arg Lys Glu Phe Val Cys Thr Val Thr His Arg Asp Leu Pro 415 420 425 TCA CCA CAG AAG AAA TTC ATC TCA AAA CCC AAT GAG GTG CAC AAA CAT 1392 Ser Pro Gln Lys Lys Phe Ile Ser Lys Pro Asn Glu Val His Lys His 430 435 440 445 CCA CCT GCT GTG TAC CTG CTG CCA CCA GCT CGT GAG CAA CTG AAC CTG 1440 Pro Pro Ala Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu 450 455 460 AGG GAG TCA GCC ACA GTC ACC TGC CTG GTG AAG GGC TTC TCT CCT GCA 1488 Arg Glu Ser Ala Thr Val Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Ser Pro Ala 465 470 475 GAC ATC AGT GTG CAG TGG CTT CAG AGA GGG CAA CTC TTG CCC CAA GAG 1536 Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu Gln Arg Gly Gln Leu Leu Pro Gln Glu 480 485 490 AAG TAT GTG ACC AGT GCC CCG ATG CCA GAG CCT GGG GCC CCA GGC TTC 1584 Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gly Ala Pro Gly Phe 495 500 505 TAC TTT ACC CAC AGC ATC CTG ACT GTG ACA GAG GAG GAA TGG AAC TCC 1632 Tyr Phe Thr His Ser Ile Leu Thr Val Thr Glu Glu Glu Trp Asn Ser 510 515 520 525 GGA GAG ACC TAT ACC TGT GTT GTA GGC CAC GAG GCC CTG CCA CAC CTG 1680 Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Gly His Glu Ala Leu Pro His Leu 530 535 540 GTG ACC GAG AGG ACC GTG GAC AAG TCC ACT GGT AAA CCC ACA CTG TAC 1728 Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr 545 550 555 AAT GTC TCC CTG ATC ATG TCT GAC ACA GGC GGC ACC TGC TAT TGA 1773 Asn Val Ser Leu Ile Met Ser Asp Thr Gly Gly Thr Cys Tyr 560 565 570 配列番号：８ 配列の長さ: 590 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly -19 -15 -10 -5 Val His Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys 1 5 10 Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 15 20 25 Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu 30 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn 50 55 60 Gln Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser 65 70 75 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 80 85 90 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Gln Ser Phe Pro Asn Val Phe 110 115 120 125 Pro Leu Val Ser Cys Glu Ser Pro Leu Ser Asp Lys Asn Leu Val Ala 130 135 140 Met Gly Cys Leu Ala Arg Asp Phe Leu Pro Ser Thr Ile Ser Phe Thr 145 150 155 Trp Asn Tyr Gln Asn Asn Thr Glu Val Ile Gln Gly Ile Arg Thr Phe 160 165 170 Pro Thr Leu Arg Thr Gly Gly Lys Tyr Leu Ala Thr Ser Gln Val Leu 175 180 185 Leu Ser Pro Lys Ser Ile Leu Glu Gly Ser Asp Glu Tyr Leu Val Cys 190 195 200 205 Lys Ile His Tyr Gly Gly Lys Asn Arg Asp Leu His Val Pro Ile Pro 210 215 220 Ala Val Ala Glu Met Asn Pro Asn Val Asn Val Phe Val Pro Pro Arg 225 230 235 Asp Gly Phe Ser Gly Pro Ala Pro Arg Lys Ser Lys Leu Ile Cys Glu 240 245 250 Ala Thr Asn Phe Thr Pro Lys Pro Ile Thr Val Ser Trp Leu Lys Asp 255 260 265 Gly Lys Leu Val Glu Ser Gly Phe Thr Thr Asp Pro Val Thr Ile Glu 270 275 280 285 Asn Lys Gly Ser Thr Pro Gln Thr Tyr Lys Val Ile Ser Thr Leu Thr 290 295 300 Ile Ser Glu Ile Asp Trp Leu Asn Leu Asn Val Tyr Thr Cys Arg Val 305 310 315 Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Leu Lys Asn Val Ser Ser Thr Cys Ala 320 325 330 Ala Ser Pro Ser Thr Asp Ile Leu Thr Phe Thr Ile Pro Pro Ser Phe 335 340 345 Ala Asp Ile Phe Leu Ser Lys Ser Ala Asn Leu Thr Cys Leu Val Ser 350 355 360 365 Asn Leu Ala Thr Tyr Glu Thr Leu Asn Ile Ser Trp Ala Ser Gln Ser 370 375 380 Gly Glu Pro Leu Glu Thr Lys Ile Lys Ile Met Glu Ser His Pro Asn 385 390 395 Gly Thr Phe Ser Ala Lys Gly Val Ala Ser Val Cys Val Glu Asp Trp 400 405 410 Asn Asn Arg Lys Glu Phe Val Cys Thr Val Thr His Arg Asp Leu Pro 415 420 425 Ser Pro Gln Lys Lys Phe Ile Ser Lys Pro Asn Glu Val His Lys His 430 435 440 445 Pro Pro Ala Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu 450 455 460 Arg Glu Ser Ala Thr Val Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Ser Pro Ala 465 470 475 Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu Gln Arg Gly Gln Leu Leu Pro Gln Glu 480 485 490 Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gly Ala Pro Gly Phe 495 500 505 Tyr Phe Thr His Ser Ile Leu Thr Val Thr Glu Glu Glu Trp Asn Ser 510 515 520 525 Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Gly His Glu Ala Leu Pro His Leu 530 535 540 Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr 545 550 555 Asn Val Ser Leu Ile Met Ser Asp Thr Gly Gly Thr Cys Tyr 560 565 570 配列番号：９ 配列の長さ：717 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 起源 生物名：マウス（Mus musculus） 細胞の種類：ハイブリドーマ セルライン：ＣＨ１１ 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..714 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：58..714 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：1..57 特徴を決定した方法：S 配列 ATG AAG TTG CCT GTT AGG CTG TTG GTG CTG ATG TTC TGG ATT CCT GCT 48 Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala -19 -15 -10 -5 TCC AGC AGT GAT GTT GTG ATG ACC CAA AGT CCA CTC TCC CTG CCT GTC 96 Ser Ser Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val 1 5 10 AGT CTT GGA GAT CAA GCC TCC ATC TCT TGC AGA TCT AGT AAG AGC CTT 144 Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu 15 20 25 GTA CAC AGT AAT GGA AAC ACC TAT TTA CAT TGG TAC CTG CAG AAG CCA 192 Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro 30 35 40 45 GGC CAG TCT CCA AAG CTC CTG ATC TAC AAA GTT TCC AAC CGA TTT TCT 240 Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 50 55 60 GGG GTC CCA GAC AGG TTC AGT GGC AGT GGA TCA GGG ACA GAT TTC ACA 288 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70 75 CTC AAG ATC AGC AGA GTG GAG GCT GAG GAT CTG GGA GTT TAT TTC TGC 336 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys 80 85 90 TCT CAA AGT ACA CAT GTT CCT CCG GCG TTC GGT GGA GGC ACC AAG CTG 384 Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 95 100 105 GAA ATC AAA CGG GCT GAT GCT GCA CCA ACT GTA TCC ATC TTC CCA CCA 432 Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro 110 115 120 125 TCC AGT GAG CAG TTA ACA TCT GGA GGT GCC TCA GTC GTG TGC TTC TTG 480 Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu 130 135 140 AAC AAC TTC TAC CCC AAA GAC ATC AAT GTC AAG TGG AAG ATT GAT GGC 528 Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly 145 150 155 AGT GAA CGA CAA AAT GGC GTC CTG AAC AGT TGG ACT GAT CAG GAC AGC 576 Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser 160 165 170 AAA GAC AGC ACC TAC AGC ATG AGC AGC ACC CTC ACG TTG ACC AAG GAC 624 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp 175 180 185 GAG TAT GAA CGA CAT AAC AGC TAT ACC TGT GAG GCC ACT CAC AAG ACA 672 Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr 190 195 200 205 TCA ACT TCA CCC ATT GTC AAG AGC TTC AAC AGG AAT GAG TGT TAG 717 Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 215 配列番号：１０ 配列の長さ：２３８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala -19 -15 -10 -5 Ser Ser Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val 1 5 10 Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu 15 20 25 Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro 30 35 40 45 Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70 75 Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys 80 85 90 Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 95 100 105 Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro 110 115 120 125 Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu 130 135 140 Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly 145 150 155 Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser 160 165 170 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp 175 180 185 Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr 190 195 200 205 Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 215 配列番号：１１ 配列の長さ：480 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 起源 生物名：マウス（Mus musculus） 細胞の種類：ハイブリドーマ セルライン：ＣＨ１１ 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..477 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：67..477 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：1..66 特徴を決定した方法：S 配列 ATG AAG ACC CAC CTG CTT CTC TGG GGA GTC CTC GCC ATT TTT GTT AAG 48 Met Lys Thr His Leu Leu Leu Trp Gly Val Leu Ala Ile Phe Val Lys -22 -20 -15 -10 GCT GTC CTT GTA ACA GGT GAC GAC GAA GCG ACC ATT CTT GCT GAC AAC 96 Ala Val Leu Val Thr Gly Asp Asp Glu Ala Thr Ile Leu Ala Asp Asn -5 1 5 10 AAA TGC ATG TGT ACC CGA GTT ACC TCT AGG ATC ATC CCT TCC ACC GAG 144 Lys Cys Met Cys Thr Arg Val Thr Ser Arg Ile Ile Pro Ser Thr Glu 15 20 25 GAT CCT AAT GAG GAC ATT GTG GAG AGA AAT ATC CGA ATT GTT GTC CCT 192 Asp Pro Asn Glu Asp Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Val Val Pro 30 35 40 TTG AAC AAC AGG GAG AAT ATC TCT GAT CCC ACC TCC CCA CTG AGA AGG 240 Leu Asn Asn Arg Glu Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Arg 45 50 55 AAC TTT GTA TAC CAT TTG TCA GAC GTC TGT AAG AAA TGC GAT CCT GTG 288 Asn Phe Val Tyr His Leu Ser Asp Val Cys Lys Lys Cys Asp Pro Val 60 65 70 GAA GTG GAG CTG GAA GAT CAG GTT GTT ACT GCC ACC CAG AGC AAC ATC 336 Glu Val Glu Leu Glu Asp Gln Val Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile 75 80 85 90 TGC AAT GAG GAC GAT GGT GTT CCT GAG ACC TGC TAC ATG TAT GAC AGA 384 Cys Asn Glu Asp Asp Gly Val Pro Glu Thr Cys Tyr Met Tyr Asp Arg 95 100 105 AAC AAG TGC TAT ACC ACT ATG GTC CCA CTT AGG TAT CAT GGT GAG ACC 432 Asn Lys Cys Tyr Thr Thr Met Val Pro Leu Arg Tyr His Gly Glu Thr 110 115 120 AAA ATG GTG CAA GCA GCC TTG ACC CCC GAT TCT TGC TAC CCT GAC TAG 480 Lys Met Val Gln Ala Ala Leu Thr Pro Asp Ser Cys Tyr Pro Asp 125 130 135 配列番号：１２ 配列の長さ：159 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Lys Thr His Leu Leu Leu Trp Gly Val Leu Ala Ile Phe Val Lys -22 -20 -15 -10 Ala Val Leu Val Thr Gly Asp Asp Glu Ala Thr Ile Leu Ala Asp Asn -5 1 5 10 Lys Cys Met Cys Thr Arg Val Thr Ser Arg Ile Ile Pro Ser Thr Glu 15 20 25 Asp Pro Asn Glu Asp Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Val Val Pro 30 35 40 Leu Asn Asn Arg Glu Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg Arg 45 50 55 Asn Phe Val Tyr His Leu Ser Asp Val Cys Lys Lys Cys Asp Pro Val 60 65 70 Glu Val Glu Leu Glu Asp Gln Val Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn Ile 75 80 85 90 Cys Asn Glu Asp Asp Gly Val Pro Glu Thr Cys Tyr Met Tyr Asp Arg 95 100 105 Asn Lys Cys Tyr Thr Thr Met Val Pro Leu Arg Tyr His Gly Glu Thr 110 115 120 Lys Met Val Gln Ala Ala Leu Thr Pro Asp Ser Cys Tyr Pro Asp 125 130 135 配列番号：１３ 配列の長さ：15 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 フラグメント型：Ｎ末端フラグメント 配列 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly 1 5 10 15 配列番号：１４ 配列の長さ：21 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 フラグメント型：Ｎ末端フラグメント 配列 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile 20 配列番号：１５ 配列の長さ：391 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：Ｎｏ 起源 生物名：マウス（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ） 細胞の種類：ハイブリドーマ セルライン：ＣＨ１１ 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：2..391 特徴を決定した方法：P 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：2..31 特徴を決定した方法：P 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：32..391 特徴を決定した方法：P 配列 C CTC CTG TCA GGA ACT GCA GGC GTC CAC TCT GAG GTC CAG CTT CAG 46 Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly Val His Ser Glu Val Gln Leu Gln -10 -5 1 5 CAG TCA GGA CCT GAG CTG GTG AAA CCT GGG GCC TCA GTG AAG ATA TCC 94 Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser 10 15 20 TGC AAG GCT TCT GGA TAC ACA TTC ACT GAC TAC AAC ATG CAC TGG GTG 142 Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val 25 30 35 AAG CAG AGC CAT GGA AAG AGC CTT GAG TGG ATT GGA TAT ATT TAT CCT 190 Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Pro 40 45 50 TAC AAT GGT GGT ACT GGC TAC AAC CAG AAG TTC AAG AGC AAG GCC ACA 238 Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr 55 60 65 TTG ACT GTT GAC AAT TCC TCC AGC ACA GCC TAC ATG GAG CTC CGC AGC 286 Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser 70 75 80 85 CTG ACA TCT GAG GAC TCT GCA GTC TAT TAC TGT GCA AGA AGT TAC TAT 334 Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Tyr Tyr 90 95 100 GCT ATG GAC TAC TGG GGT CAA GGA ACC TCA GTC ACC GTC TCC TCA GAG 382 Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Glu 105 110 115 AGT CAG TCC 391 Ser Gln Ser 120 配列番号：１６ 配列の長さ：388 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 起源 生物名：マウス（Mus Musculus） 細胞の種類：ハイブリドーマ セルライン：ＣＨ１１ 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：2..388 特徴を決定した方法：Ｐ 特徴を表す記号：ｓｉｇ ｐｅｐｔｉｄｅ 存在位置：2..28 特徴を決定した方法：P 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：29..388 特徴を決定した方法：P 配列 G ATG TTC TGG ATT CCT GCT TCC AGC AGT GAT GTT GTG ATG ACC CAA 46 Met Phe Trp Ile Pro Ala Ser Ser Ser Asp Val Val Met Thr Gln -9 -5 1 5 AGT CCA CTC TCC CTG CCT GTC AGT CTT GGA GAT CAA GCC TCC ATC TCT 94 Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser 10 15 20 TGC AGA TCT AGT AAG AGC CTT GTA CAC AGT AAT GGA AAC ACC TAT TTA 142 Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu 25 30 35 CAT TGG TAC CTG CAG AAG CCA GGC CAG TCT CCA AAG CTC CTG ATC TAC 190 His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 40 45 50 AAA GTT TCC AAC CGA TTT TCT GGG GTC CCA GAC AGG TTC AGT GGC AGT 238 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 55 60 65 70 GGA TCA GGG ACA GAT TTC ACA CTC AAG ATC AGC AGA GTG GAG GCT GAG 286 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu 75 80 85 GAT CTG GGA GTT TAT TTC TGC TCT CAA AGT ACA CAT GTT CCT CCG GCG 334 Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Ala 90 95 100 TTC GGT GGA GGC ACC AAG CTG GAA ATC AAA CGG GCT GAT GCT GCA CCA 382 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro 105 110 115 ACT GTA 388 Thr Val 120 配列番号：１７ 配列の長さ：33 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CTAAGGGAAT TCCGCCTCTC CTCAGACACT GAA 33 配列番号：１８ 配列の長さ：34 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TTTTACTCTA GAGACCCAAG GCCTGCCTGG TTGA 34 配列番号：１９ 配列の長さ：33 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AAATAGGAAT TCCAGTCTCC TCAGGCTGTC TCC 33 配列番号：２０ 配列の長さ：32 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ATGATCTCTA GAGTGGTGGC ATCTCAGGAC CT 32 配列番号：２１ 配列の長さ：32 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TTGCGGAATT CCTCACCTGT CCTGGGGTTA TT 32 配列番号：２２ 配列の長さ：32 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ATTGCCTCTA GAGCCTCTAA GGACAACGAG CT 32 配列番号：２３ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGGGGCCTCA GTGAAGATAT 20 配列番号：２４ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CAATGGTGGT ACTGGCTACA 20 配列番号：２５ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGACATCTGA GGACTCTGCA 20 配列番号：２６ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCCTCAGAGA GTCAGTCCTT 20 配列番号：２７ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCCTTCACCT GGAACTACCA 20 配列番号：２８ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCCCAAGAGC ATCCTTGAAG 20 配列番号：２９ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGATCTGCAT GTGCCCATTC 20 配列番号：３０ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCTAAACTCA TCTGCGAGGC 20 配列番号：３１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGTGACCATC GAGAACAAAG 20 配列番号：３２ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGGGGTCTCA CCTTCTTGAA 20 配列番号：３３ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCCTTTGCCG ACATCTTCCT 20 配列番号：３４ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GTGTGTACTG TGACTCACAG 20 配列番号：３５ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AACTGAACCT GAGGGAGTCA 20 配列番号：３６ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：Ｎｏ 配列 ＡＡＣＴＣＴＴＧＣＣ ＣＣＡＡＧＡＧＡＡＧ
20 配列番号：３７ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ATCCTGACTG TGACAGAGGA 20 配列番号：３８ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ACAAGTCCAC TGGTAAACCC 20 配列番号：３９ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：Noアンチセンス :No 配列 AGGATATCTT CACTGAGGCC 20 配列番号：４０ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ATCCACTCAA GGCTCTTTCC 20 配列番号：４１ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ACTGCAGAGT CCTCAGATGT 20 配列番号：４２ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGACGGTGAC TGAGGTTCTT 20 配列番号：４３ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CAGGTGAAGG AAATGGTGCT 20 配列番号：４４ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ATGCTCTTGG GAGACAGCAA 20 配列番号：４５ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CTCTGTTTTT GCCTCCGTAG 20 配列番号：４６ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGGCCTCGCA GATGAGTTTA 20 配列番号：４７ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CCTTTGTTCT CGATGGTCAC 20 配列番号：４８ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGTGGAGGAC ACGTTCTTCA 20 配列番号：４９ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ACTTTGAGAA GCCCAGGAGA 20 配列番号：５０ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGATCCCTGT GAGTCACAGT 20 配列番号：５１ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGCAGGTGGA TGTTTGTGCA 20 配列番号：５２ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGAAGCCACT GCACACTGAT 20 配列番号：５３ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGTTCCATTC CTCCTCTGTC 20 配列番号：５４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGTGTCAGAC ATGATCAGGG 20 配列番号：５５ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGAAGTTGCC TGTTAGGCTG 20 配列番号：５６ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CTTGGAGATC AAGCCTCCAT 20 配列番号：５７ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：Noアンチセンス：No 配列 GCTGAGGATC TGGGAGTTTA 20 配列番号：５８ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GATGCTGCAC CAACTGTATC 20 配列番号：５９ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CGACAAAATG GCGTCCTGAA ２０ 配列番号：６０ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ACGTTGACCA AGGACGAGTA 20 配列番号：６１ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ATCTGCAAGA GATGGAGGCT 20 配列番号：６２ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ACCCCAGAAA ATCGGTTGGA 20 配列番号：６３ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CCGGAGGAAC ATGTGTACTT 20 配列番号：６４ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCGTTCATAC TCGTCCTTGG 20 配列番号：６５ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：Ｎｏ 配列 ＣＡＴＣＴＣＡＧＧＡ ＣＣＴＴＴＧＴＣＴＣ
20 配列番号：６６ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CACCTGTCCT GGGGTTATTT 20 配列番号：６７ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGACAAGATG AAGACCCACC 20 配列番号：６８ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：Noアンチセンス :No 配列 AAGCGACCAT TCTTGCTGAC 20 配列番号：６９ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ATATCTCTGA TCCCACCTCC 20 配列番号：７０ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GAAATGCGAT CCTGTGGAAG 20 配列番号：７１ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CTATACCACT ATGGTCCCAC 20 配列番号：７２ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGAAGCAGGT GGGTCTTCAT 20 配列番号：７３ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TAGAGGTAAC TCGGGTACAC 20 配列番号：７４ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AAGTTCCTTC TCAGTGGGGA 20 配列番号：７５ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGTGGCAGTA ACAACCTGAT 20 配列番号：７６ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成DNA ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CATGATACCT AAGTGGGACC 20 配列番号：77 配列の長さ：720 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..717 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：61..717 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：1..60 特徴を決定した方法：S 配列 ATG AGG CTC CCT GCT CAG CTC CTG GGG CTG CTA ATG CTC TGG GTC CCA 48 Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro -20 -15 -10 -5 GGA TCC AGT GGG GAT GTT GTG ATG ACT CAG TCT CCA CTC TCC CTG CCC 96 Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 1 5 10 GTC ACC CTT GGA CAG CCG GCC TCC ATC TCC TGC AGA TCT AGT AAG AGC 144 Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 15 20 25 CTT GTA CAC AGT AAT GGA AAC ACC TAT TTA CAT TGG TAC CTG CAG AAG 192 Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys 30 35 40 CCA GGC CAG TCT CCA AAG CTC CTG ATC TAC AAA GTT TCC AAC CGA TTT 240 Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 45 50 55 60 TCT GGG GTC CCA GAC AGA TTC AGC GGC AGT GGG TCA GGC ACT GAT TTC 288 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 ACA CTG AAA ATC AGC AGG GTG GAG GCT GAG GAT GTT GGG GTT TAT TAC 336 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 80 85 90 TGC TCT CAA AGT ACA CAT GTT CCT CCG GCG TTC GGC CAA GGG ACC AAG 384 Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys 95 100 105 GTG GAA ATC AAA CGT ACT GTG GCT GCA CCA TCT GTC TTC ATC TTC CCG 432 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 110 115 120 CCA TCT GAT GAG CAG TTG AAA TCT GGA ACT GCC TCT GTT GTG TGC CTG 480 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 125 130 135 140 CTG AAT AAC TTC TAT CCC AGA GAG GCC AAA GTA CAG TGG AAA GTG GAT 528 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 145 150 155 AAC GCC CTC CAA TCG GGT AAC TCC CAG GAG AGT GTC ACA GAG CAG GAC 576 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 160 165 170 AGC AAG GAC AGC ACC TAC AGC CTC AGC AGC ACC CTG ACG CTG AGC AAA 624 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 175 180 185 GCA GAC TAC GAG AAA CAC AAA GTC TAC GCC TGC GAA GTC ACC CAT CAG 672 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 190 195 200 GGC CTG AGC TCG CCC GTC ACA AAG AGC TTC AAC AGG GGA GAG TGT 717 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 205 210 215 TAG 720 配列番号：78 配列の長さ：239 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro -20 -15 -10 -5 Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 1 5 10 Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 15 20 25 Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys 30 35 40 Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 45 50 55 60 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 80 85 90 Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys 95 100 105 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 110 115 120 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 125 130 135 140 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 145 150 155 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 160 165 170 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 175 180 185 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 190 195 200 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 205 210 215 配列番号：79 配列の長さ：720 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..717 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：61..717 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：ｓｉｇ ｐｅｐｔｉｄｅ 存在位置：１．．６０ 特徴を決定した方法：S 配列 ATG AGG CTC CCT GCT CAG CTC CTG GGG CTG CTA ATG CTC TGG GTC CCA 48 Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro -20 -15 -10 -5 GGA TCC AGT GGG GAT GTT GTG ATG ACT CAG TCT CCA CTC TCC CTG CCC 96 Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 1 5 10 GTC ACC CTT GGA CAG CCG GCC TCC ATC TCC TGC AGA TCT AGT AAG AGC 144 Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 15 20 25 CTT GTA CAC AGT AAT GGA AAC ACC TAT TTA CAT TGG TAC CTG CAG AAG 192 Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys 30 35 40 CCA GGC CAG TCT CCA AAG CTC CTG ATC TAC AAA GTT TCC AAC CGA TTT 240 Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 45 50 55 60 TCT GGG GTC CCA GAC AGA TTC AGC GGC AGT GGG TCA GGC ACT GAT TTC 288 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 ACA CTG AAA ATC AGC AGG GTG GAG GCT GAG GAT GTT GGG GTT TAT TTC 336 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe 80 85 90 TGC TCT CAA AGT ACA CAT GTT CCT CCG GCG TTC GGC CAA GGG ACC AAG 384 Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys 95 100 105 GTG GAA ATC AAA CGT ACT GTG GCT GCA CCA TCT GTC TTC ATC TTC CCG 432 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 110 115 120 CCA TCT GAT GAG CAG TTG AAA TCT GGA ACT GCC TCT GTT GTG TGC CTG 480 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 125 130 135 140 CTG AAT AAC TTC TAT CCC AGA GAG GCC AAA GTA CAG TGG AAA GTG GAT 528 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 145 150 155 AAC GCC CTC CAA TCG GGT AAC TCC CAG GAG AGT GTC ACA GAG CAG GAC 576 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 160 165 170 AGC AAG GAC AGC ACC TAC AGC CTC AGC AGC ACC CTG ACG CTG AGC AAA 624 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 175 180 185 GCA GAC TAC GAG AAA CAC AAA GTC TAC GCC TGC GAA GTC ACC CAT CAG 672 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 190 195 200 GGC CTG AGC TCG CCC GTC ACA AAG AGC TTC AAC AGG GGA GAG TGT 717 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 205 210 215 TAG 720 配列番号：80 配列の長さ：239 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro -20 -15 -10 -5 Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 1 5 10 Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 15 20 25 Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys 30 35 40 Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 45 50 55 60 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe 80 85 90 Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys 95 100 105 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 110 115 120 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 125 130 135 140 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 145 150 155 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 160 165 170 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 175 180 185 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 190 195 200 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 205 210 215 配列番号：81 配列の長さ：720 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..717 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：61..717 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：1..60 特徴を決定した方法：S 配列 ATG AGG CTC CCT GCT CAG CTC CTG GGG CTG CTA ATG CTC TGG GTC CCA 48 Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro -20 -15 -10 -5 GGA TCC AGT GGG GAT GTT GTG ATG ACT CAG TCT CCA CTC TCC CTG CCC 96 Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 1 5 10 GTC ACC CTT GGA CAG CCG GCC TCC ATC TCC TGC AGA TCT AGT AAG AGC 144 Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 15 20 25 CTT GTA CAC AGT AAT GGA AAC ACC TAT TTA CAT TGG TAC CTG CAG AAG 192 Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys 30 35 40 CCA GGC CAG TCT CCA AGG CTC CTG ATC TAC AAA GTT TCC AAC CGA TTT 240 Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 45 50 55 60 TCT GGG GTC CCA GAC AGA TTC AGC GGC AGT GGG TCA GGC ACT GAT TTC 288 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 ACA CTG AAA ATC AGC AGG GTG GAG GCT GAG GAT GTT GGG GTT TAT TAC 336 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 80 85 90 TGC TCT CAA AGT ACA CAT GTT CCT CCG GCG TTC GGC CAA GGG ACC AAG 384 Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys 95 100 105 GTG GAA ATC AAA CGT ACT GTG GCT GCA CCA TCT GTC TTC ATC TTC CCG 432 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 110 115 120 CCA TCT GAT GAG CAG TTG AAA TCT GGA ACT GCC TCT GTT GTG TGC CTG 480 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 125 130 135 140 CTG AAT AAC TTC TAT CCC AGA GAG GCC AAA GTA CAG TGG AAA GTG GAT 528 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 145 150 155 AAC GCC CTC CAA TCG GGT AAC TCC CAG GAG AGT GTC ACA GAG CAG GAC 576 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 160 165 170 AGC AAG GAC AGC ACC TAC AGC CTC AGC AGC ACC CTG ACG CTG AGC AAA 624 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 175 180 185 GCA GAC TAC GAG AAA CAC AAA GTC TAC GCC TGC GAA GTC ACC CAT CAG 672 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 190 195 200 GGC CTG AGC TCG CCC GTC ACA AAG AGC TTC AAC AGG GGA GAG TGT 717 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 205 210 215 TAG 720 配列番号：82 配列の長さ：239 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro -20 -15 -10 -5 Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 1 5 10 Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 15 20 25 Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys 30 35 40 Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 45 50 55 60 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 80 85 90 Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys 95 100 105 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 110 115 120 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 125 130 135 140 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 145 150 155 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 160 165 170 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 175 180 185 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 190 195 200 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 205 210 215 配列番号：83 配列の長さ：720 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：１．．７１７ 特徴を決定した方法：Ｓ 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：61..717 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：1..60 特徴を決定した方法：S 配列 ATG AGG CTC CCT GCT CAG CTC CTG GGG CTG CTA ATG CTC TGG GTC CCA 48 Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro -20 -15 -10 -5 GGA TCC AGT GGG GAT GTT GTG ATG ACT CAG TCT CCA CTC TCC CTG CCC 96 Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 1 5 10 GTC ACC CTT GGA CAG CCG GCC TCC ATC TCC TGC AGA TCT AGT AAG AGC 144 Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 15 20 25 CTT GTA CAC AGT AAT GGA AAC ACC TAT TTA CAT TGG TAC CTG CAG AAG 192 Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys 30 35 40 CCA GGC CAG TCT CCA AGG CTC CTG ATC TAC AAA GTT TCC AAC CGA TTT 240 Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 45 50 55 60 TCT GGG GTC CCA GAC AGA TTC AGC GGC AGT GGG TCA GGC ACT GAT TTC 288 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 ACA CTG AAA ATC AGC AGG GTG GAG GCT GAG GAT GTT GGG GTT TAT TTC 336 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe 80 85 90 TGC TCT CAA AGT ACA CAT GTT CCT CCG GCG TTC GGC CAA GGG ACC AAG 384 Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys 95 100 105 GTG GAA ATC AAA CGT ACT GTG GCT GCA CCA TCT GTC TTC ATC TTC CCG 432 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 110 115 120 CCA TCT GAT GAG CAG TTG AAA TCT GGA ACT GCC TCT GTT GTG TGC CTG 480 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 125 130 135 140 CTG AAT AAC TTC TAT CCC AGA GAG GCC AAA GTA CAG TGG AAG GTG GAT 528 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 145 150 155 AAC GCC CTC CAA TCG GGT AAC TCC CAG GAG AGT GTC ACA GAG CAG GAC 576 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 160 165 170 AGC AAG GAC AGC ACC TAC AGC CTC AGC AGC ACC CTG ACG CTG AGC AAA 624 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 175 180 185 GCA GAC TAC GAG AAA CAC AAA GTC TAC GCC TGC GAA GTC ACC CAT CAG 672 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 190 195 200 GGC CTG AGC TCG CCC GTC ACA AAG AGC TTC AAC AGG GGA GAG TGT 717 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 205 210 215 TAG 720 配列番号：84 配列の長さ：239 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Met Arg Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Pro -20 -15 -10 -5 Gly Ser Ser Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 1 5 10 Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 15 20 25 Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys 30 35 40 Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 45 50 55 60 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe 80 85 90 Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys 95 100 105 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 110 115 120 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 125 130 135 140 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 145 150 155 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 160 165 170 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 175 180 185 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 190 195 200 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 205 210 215 配列番号：85 配列の長さ：1768 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..1764 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：58..1764 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：1..57 特徴を決定した方法：S 配列 ATG GGA TGG AGC TGG ATC TTT CTC TTC CTC CTG TCA GGA ACT GCA GGC 48 Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly -19 -15 -10 -5 GTC CAC TCT GAG GTG CAG CTT GTG CAG TCT GGG GCT GAG GTG AAG AAG 96 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 1 5 10 CCT GGG GCC TCA GTG AAG GTT TCC TGC AAG GCT TCT GGA TAC ACC TTC 144 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 15 20 25 ACT GAC TAT AAT ATG CAT TGG GTG CGC CAG GCC CCC GGA CAA GGA CTC 192 Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 30 35 40 45 GAA TGG ATG GGA TAT ATT TAT CCT TAC AAT GGT GGT ACT GGC TAC AAC 240 Glu Trp Met Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn 50 55 60 CAG AAG TTC AAG AGC AAG GCC ACA TTG ACT GTT GAC AAT TCC GCG AGC 288 Gln Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ala Ser 65 70 75 ACA GCC TAC ATG GAG CTG AGC AGC CTG AGA TCT GAA GAC ACG GCT GTG 336 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 80 85 90 TAT TAC TGT GCG AGA AGT TAC TAT GCT ATG GAC TAC TGG GGC CAG GGA 384 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 95 100 105 ACC CTG GTC ACC GTC TCC TCA GGG AGT GCA TCC GCC CCA ACC CTT TTC 432 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe 110 115 120 125 CCC CTC GTC TCC TGT GAG AAT TCC CCG TCG GAT ACG AGC AGC GTG GCC 480 Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala 130 135 140 GTT GGC TGC CTC GCA CAG GAC TTC CTT CCC GAC TCC ATC ACT TTC TCC 528 Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser 145 150 155 TGG AAA TAC AAG AAC AAC TCT GAC ATC AGC AGT ACC CGG GGC TTC CCA 576 Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro 160 165 170 TCA GTC CTG AGA GGG GGC AAG TAC GCA GCC ACC TCA CAG GTG CTG CTG 624 Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu 175 180 185 CCT TCC AAG GAC GTC ATG CAG GGC ACA GAC GAA CAC GTG GTG TGC AAA 672 Pro Ser Lys Asp Val Met Gln Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys 190 195 200 205 GTC CAG CAC CCC AAC GGC AAC AAA GAA AAG AAC GTG CCT CTT CCA GTG 720 Val Gln His Pro Asn Gly Asn Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val 210 215 220 ATT GCC GAG CTG CCT CCC AAA GTG AGC GTC TTC GTC CCA CCC CGC GAC 768 Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp 225 230 235 GGC TTC TTC GGC AAC CCC CGC AAG TCC AAG CTC ATC TGC CAG GCC ACG 816 Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr 240 245 250 GGT TTC AGT CCC CGG CAG ATT CAG GTG TCC TGG CTG CGC GAG GGG AAG 864 Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys 255 260 265 CAG GTG GGG TCT GGC GTC ACC ACG GAC CAG GTG CAG GCT GAG GCC AAA 912 Gln Val Gly Ser Gly Val Thr Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys 270 275 280 285 GAG TCT GGG CCC ACG ACC TAC AAG GTG ACC AGC ACA CTG ACC ATC AAA 960 Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys 290 295 300 GAG AGC GAC TGG CTC AGC CAG AGC ATG TTC ACC TGC CGC GTG GAT CAC 1008 Glu Ser Asp Trp Leu Ser Gln Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His 305 310 315 AGG GGC CTG ACC TTC CAG CAG AAT GCG TCC TCC ATG TGT GTC CCC GAT 1056 Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp 320 325 330 CAA GAC ACA GCC ATC CGG GTC TTC GCC ATC CCC CCA TCC TTT GCC AGC 1104 Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser 335 340 345 ATC TTC CTC ACC AAG TCC ACC AAG TTG ACC TGC CTG GTC ACA GAC CTG 1152 Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu 350 355 360 365 ACC ACC TAT GAC AGC GTG ACC ATC TCC TGG ACC CGC CAG AAT GGC GAA 1200 Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu 370 375 380 GCT GTG AAA ACC CAC ACC AAC ATC TCC GAG AGC CAC CCC AAT GCC ACT 1248 Ala Val Lys Thr His Thr Asn Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr 385 390 395 TTC AGC GCC GTG GGT GAG GCC AGC ATC TGC GAG GAT GAC TGG AAT TCC 1296 Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser 400 405 410 GGG GAG AGG TTC ACG TGC ACC GTG ACC CAC ACA GAC CTG CCC TCG CCA 1344 Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro 415 420 425 CTG AAG CAG ACC ATC TCC CGG CCC AAG GGG GTG GCC CTG CAC AGG CCC 1392 Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro 430 435 440 445 GAT GTC TAC TTG CTG CCA CCA GCC CGG GAG CAG CTG AAC CTG CGG GAG 1440 Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu 450 455 460 TCG GCC ACC ATC ACG TGC CTG GTG ACG GGC TTC TCT CCC GCG GAC GTC 1488 Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val 465 470 475 TTC GTG CAG TGG ATG CAG AGG GGG CAG CCC TTG TCC CCG GAG AAG TAT 1536 Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr 480 485 490 GTG ACC AGC GCC CCA ATG CCT GAG CCC CAG GCC CCA GGC CGG TAC TTC 1584 Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe 495 500 505 GCC CAC AGC ATC CTG ACC GTG TCC GAA GAG GAA TGG AAC ACG GGG GAG 1632 Ala His Ser Ile Leu Thr Val Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu 510 515 520 525 ACC TAC ATC TGC GTG GTG GCC CAT GAG GCC CTG CCC AAC AGG GTC ACC 1680 Thr Tyr Ile Cys Val Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr 530 535 540 GAG AGG ACC GTG GAC AAG TCC ACC GGT AAA CCC ACC CTG TAC AAC GTG 1728 Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val 545 550 555 TCC CTG GTC ATG TCC GAC ACA GCT GGC ACC TGC TAC TGA 1767 Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Cys Tyr 560 565 配列番号：86 配列の長さ：588 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly -19 -15 -10 -5 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 1 5 10 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 15 20 25 Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 30 35 40 45 Glu Trp Met Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn 50 55 60 Gln Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ala Ser 65 70 75 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 80 85 90 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe 110 115 120 125 Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala 130 135 140 Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser 145 150 155 Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro 160 165 170 Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu 175 180 185 Pro Ser Lys Asp Val Met Gln Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys 190 195 200 205 Val Gln His Pro Asn Gly Asn Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val 210 215 220 Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp 225 230 235 Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr 240 245 250 Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys 255 260 265 Gln Val Gly Ser Gly Val Thr Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys 270 275 280 285 Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys 290 295 300 Glu Ser Asp Trp Leu Ser Gln Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His 305 310 315 Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp 320 325 330 Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser 335 340 345 Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu 350 355 360 365 Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu 370 375 380 Ala Val Lys Thr His Thr Asn Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr 385 390 395 Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser 400 405 410 Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro 415 420 425 Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro 430 435 440 445 Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu 450 455 460 Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val 465 470 475 Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr 480 485 490 Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe 495 500 505 Ala His Ser Ile Leu Thr Val Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu 510 515 520 525 Thr Tyr Ile Cys Val Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr 530 535 540 Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val 545 550 555 Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Cys Tyr 560 565 配列番号：87 配列の長さ：1768 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..1764 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：58..1764 特徴を決定した方法：Ｓ 特徴を表す記号：ｓｉｇ ｐｅｐｔｉｄｅ 存在位置：1..57 特徴を決定した方法：S 配列 ＡＴＧ ＧＧＡ ＴＧＧ ＡＧＣ ＴＧＧ ＡＴＣ ＴＴＴ ＣＴＣ ＴＴＣ
ＣＴＣ ＣＴＧ ＴＣＡ ＧＧＡ ＡＣＴ ＧＣＡ ＧＧＣ ４８ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ｔｒｐ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｐｈｅ
Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ −１９ −１５
−１０ −５ ＧＴＣ ＣＡＣ ＴＣＴ ＧＡＧ ＧＴＧ ＣＡＧ ＣＴＴ ＧＴＧ ＣＡＧ
ＴＣＴ ＧＧＧ ＧＣＴ ＧＡＧ ＧＴＧ ＡＡＧ ＡＡＧ ９６ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｇｌｎ
Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ １ ５
１０ ＣＣＴ ＧＧＧ ＧＣＣ ＴＣＡ ＧＴＧ ＡＡＧ ＧＴＴ ＴＣＣ ＴＧＣ
ＡＡＧ ＧＣＴ ＴＣＴ ＧＧＡ ＴＡＣ ＡＣＣ ＴＴＣ １４４ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｃｙｓ
Ｌｙｓ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｐｈｅ １５ ２０
２５ ＡＣＴ ＧＡＣ ＴＡＴ ＡＡＴ ＡＴＧ ＣＡＴ ＴＧＧ ＧＴＧ ＡＡＧ
ＣＡＧ ＧＣＣ ＣＡＴ ＧＧＡ ＡＡＧ ＡＧＣ ＣＴＣ １９２ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｔｒｐ Ｖａｌ Ｌｙｓ
Ｇｌｎ Ａｌａ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｌｅｕ ３０ ３５
４０ ４５ ＧＡＡ ＴＧＧ ＡＴＧ ＧＧＡ ＴＡＴ ＡＴＴ ＴＡＴ ＣＣＴ ＴＡＣ
ＡＡＴ ＧＧＴ ＧＧＴ ＡＣＴ ＧＧＣ ＴＡＣ ＡＡＣ ２４０ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ｔｙｒ
Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ａｓｎ ５０
５５ ６０ ＣＡＧ ＡＡＧ ＴＴＣ ＡＡＧ ＡＧＣ ＡＡＧ ＧＣＣ ＡＣＡ ＴＴＧ
ＡＣＴ ＧＴＴ ＧＡＣ ＡＡＴ ＴＣＣ ＧＣＧ ＡＧＣ ２８８ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｌｅｕ
Ｔｈｒ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｓｅｒ ６５ ７０
７５ ＡＣＡ ＧＣＣ ＴＡＣ ＡＴＧ ＧＡＧ ＣＴＧ ＡＧＣ ＡＧＣ ＣＴＧ
ＡＧＡ ＴＣＴ ＧＡＡ ＧＡＣ ＡＣＧ ＧＣＴ ＧＴＧ ３３６ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｖａｌ ８０ ８５
９０ ＴＡＴ ＴＡＣ ＴＧＴ ＧＣＧ ＡＧＡ ＡＧＴ ＴＡＣ ＴＡＴ ＧＣＴ
ＡＴＧ ＧＡＣ ＴＡＣ ＴＧＧ ＧＧＣ ＣＡＧ ＧＧＡ ３８４ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ａｌａ
Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｔｒｐ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｇｌｙ ９５ １００
１０５ ＡＣＣ ＣＴＧ ＧＴＣ ＡＣＣ ＧＴＣ ＴＣＣ ＴＣＡ ＧＧＧ ＡＧＴ
ＧＣＡ ＴＣＣ ＧＣＣ ＣＣＡ ＡＣＣ ＣＴＴ ＴＴＣ ４３２ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ
Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐｈｅ １１０ １１５
１２０ １２５ ＣＣＣ ＣＴＣ ＧＴＣ ＴＣＣ ＴＧＴ ＧＡＧ ＡＡＴ ＴＣＣ ＣＣＧ
ＴＣＧ ＧＡＴ ＡＣＧ ＡＧＣ ＡＧＣ ＧＴＧ ＧＣＣ ４８０ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｐｒｏ
Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ａｌａ １３０
１３５ １４０ ＧＴＴ ＧＧＣ ＴＧＣ ＣＴＣ ＧＣＡ ＣＡＧ ＧＡＣ ＴＴＣ ＣＴＴ
ＣＣＣ ＧＡＣ ＴＣＣ ＡＴＣ ＡＣＴ ＴＴＣ ＴＣＣ ５２８ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｌｅｕ
Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ １４５ １５０
１５５ ＴＧＧ ＡＡＡ ＴＡＣ ＡＡＧ ＡＡＣ ＡＡＣ ＴＣＴ ＧＡＣ ＡＴＣ
ＡＧＣ ＡＧＴ ＡＣＣ ＣＧＧ ＧＧＣ ＴＴＣ ＣＣＡ ５７６ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｉｌｅ
Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｐｒｏ １６０ １６５
１７０ ＴＣＡ ＧＴＣ ＣＴＧ ＡＧＡ ＧＧＧ ＧＧＣ ＡＡＧ ＴＡＣ ＧＣＡ
ＧＣＣ ＡＣＣ ＴＣＡ ＣＡＧ ＧＴＧ ＣＴＧ ＣＴＧ ６２４ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ａｌａ
Ａｌａ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｌｅｕ １７５ １８０
１８５ ＣＣＴ ＴＣＣ ＡＡＧ ＧＡＣ ＧＴＣ ＡＴＧ ＣＡＧ ＧＧＣ ＡＣＡ
ＧＡＣ ＧＡＡ ＣＡＣ ＧＴＧ ＧＴＧ ＴＧＣ ＡＡＡ ６７２ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｍｅｔ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｃｙｓ Ｌｙｓ １９０ １９５
２００ ２０５ ＧＴＣ ＣＡＧ ＣＡＣ ＣＣＣ ＡＡＣ ＧＧＣ ＡＡＣ ＡＡＡ ＧＡＡ
ＡＡＧ ＡＡＣ ＧＴＧ ＣＣＴ ＣＴＴ ＣＣＡ ＧＴＧ ７２０ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｕ
Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｖａｌ ２１０
２１５ ２２０ ＡＴＴ ＧＣＣ ＧＡＧ ＣＴＧ ＣＣＴ ＣＣＣ ＡＡＡ ＧＴＧ ＡＧＣ
ＧＴＣ ＴＴＣ ＧＴＣ ＣＣＡ ＣＣＣ ＣＧＣ ＧＡＣ ７６８ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｓｅｒ
Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ａｓｐ ２２５ ２３０
２３５ ＧＧＣ ＴＴＣ ＴＴＣ ＧＧＣ ＡＡＣ ＣＣＣ ＣＧＣ ＡＡＧ ＴＣＣ
ＡＡＧ ＣＴＣ ＡＴＣ ＴＧＣ ＣＡＧ ＧＣＣ ＡＣＧ ８１６ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｓｅｒ
Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｔｈｒ ２４０ ２４５
２５０ ＧＧＴ ＴＴＣ ＡＧＴ ＣＣＣ ＣＧＧ ＣＡＧ ＡＴＴ ＣＡＧ ＧＴＧ
ＴＣＣ ＴＧＧ ＣＴＧ ＣＧＣ ＧＡＧ ＧＧＧ ＡＡＧ ８６４ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｖａｌ
Ｓｅｒ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ ２５５ ２６０
２６５ ＣＡＧ ＧＴＧ ＧＧＧ ＴＣＴ ＧＧＣ ＧＴＣ ＡＣＣ ＡＣＧ ＧＡＣ
ＣＡＧ ＧＴＧ ＣＡＧ ＧＣＴ ＧＡＧ ＧＣＣ ＡＡＡ ９１２ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｓｐ
Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｌｙｓ ２７０ ２７５
２８０ ２８５ ＧＡＧ ＴＣＴ ＧＧＧ ＣＣＣ ＡＣＧ ＡＣＣ ＴＡＣ ＡＡＧ ＧＴＧ
ＡＣＣ ＡＧＣ ＡＣＡ ＣＴＧ ＡＣＣ ＡＴＣ ＡＡＡ ９６０ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｌｙｓ ２９０
２９５ ３００ ＧＡＧ ＡＧＣ ＧＡＣ ＴＧＧ ＣＴＣ ＡＧＣ ＣＡＧ ＡＧＣ ＡＴＧ
ＴＴＣ ＡＣＣ ＴＧＣ ＣＧＣ ＧＴＧ ＧＡＴ ＣＡＣ １００８ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｍｅｔ
Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｈｉｓ ３０５ ３１０
３１５ ＡＧＧ ＧＧＣ ＣＴＧ ＡＣＣ ＴＴＣ ＣＡＧ ＣＡＧ ＡＡＴ ＧＣＧ
ＴＣＣ ＴＣＣ ＡＴＧ ＴＧＴ ＧＴＣ ＣＣＣ ＧＡＴ １０５６ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ａｌａ
Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｃｙｓ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｓｐ ３２０ ３２５
３３０ ＣＡＡ ＧＡＣ ＡＣＡ ＧＣＣ ＡＴＣ ＣＧＧ ＧＴＣ ＴＴＣ ＧＣＣ
ＡＴＣ ＣＣＣ ＣＣＡ ＴＣＣ ＴＴＴ ＧＣＣ ＡＧＣ １１０４ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ａｌａ
Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｓｅｒ ３３５ ３４０
３４５ ＡＴＣ ＴＴＣ ＣＴＣ ＡＣＣ ＡＡＧ ＴＣＣ ＡＣＣ ＡＡＧ ＴＴＧ
ＡＣＣ ＴＧＣ ＣＴＧ ＧＴＣ ＡＣＡ ＧＡＣ ＣＴＧ １１５２ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ ３５０ ３５５
３６０ ３６５ ＡＣＣ ＡＣＣ ＴＡＴ ＧＡＣ ＡＧＣ ＧＴＧ ＡＣＣ ＡＴＣ ＴＣＣ
ＴＧＧ ＡＣＣ ＣＧＣ ＣＡＧ ＡＡＴ ＧＧＣ ＧＡＡ １２００ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ
Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｕ ３７０
３７５ ３８０ ＧＣＴ ＧＴＧ ＡＡＡ ＡＣＣ ＣＡＣ ＡＣＣ ＡＡＣ ＡＴＣ ＴＣＣ
ＧＡＧ ＡＧＣ ＣＡＣ ＣＣＣ ＡＡＴ ＧＣＣ ＡＣＴ １２４８ Ａｌａ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｓｅｒ
Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｌａ Ｔｈｒ ３８５ ３９０
３９５ ＴＴＣ ＡＧＣ ＧＣＣ ＧＴＧ ＧＧＴ ＧＡＧ ＧＣＣ ＡＧＣ ＡＴＣ
ＴＧＣ ＧＡＧ ＧＡＴ ＧＡＣ ＴＧＧ ＡＡＴ ＴＣＣ １２９６ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｉｌｅ
Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｓｅｒ ４００ ４０５
４１０ ＧＧＧ ＧＡＧ ＡＧＧ ＴＴＣ ＡＣＧ ＴＧＣ ＡＣＣ ＧＴＧ ＡＣＣ
ＣＡＣ ＡＣＡ ＧＡＣ ＣＴＧ ＣＣＣ ＴＣＧ ＣＣＡ １３４４ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ
Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｐｒｏ ４１５ ４２０
４２５ ＣＴＧ ＡＡＧ ＣＡＧ ＡＣＣ ＡＴＣ ＴＣＣ ＣＧＧ ＣＣＣ ＡＡＧ
ＧＧＧ ＧＴＧ ＧＣＣ ＣＴＧ ＣＡＣ ＡＧＧ ＣＣＣ １３９２ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ｌｙｓ
Ｇｌｙ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ａｒｇ Ｐｒｏ ４３０ ４３５
４４０ ４４５ ＧＡＴ ＧＴＣ ＴＡＣ ＴＴＧ ＣＴＧ ＣＣＡ ＣＣＡ ＧＣＣ ＣＧＧ
ＧＡＧ ＣＡＧ ＣＴＧ ＡＡＣ ＣＴＧ ＣＧＧ ＧＡＧ １４４０ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｒｇ
Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｇｌｕ ４５０
４５５ ４６０ ＴＣＧ ＧＣＣ ＡＣＣ ＡＴＣ ＡＣＧ ＴＧＣ ＣＴＧ ＧＴＧ ＡＣＧ
ＧＧＣ ＴＴＣ ＴＣＴ ＣＣＣ ＧＣＧ ＧＡＣ ＧＴＣ １４８８ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｓｐ Ｖａｌ ４６５ ４７０
４７５ ＴＴＣ ＧＴＧ ＣＡＧ ＴＧＧ ＡＴＧ ＣＡＧ ＡＧＧ ＧＧＧ ＣＡＧ
ＣＣＣ ＴＴＧ ＴＣＣ ＣＣＧ ＧＡＧ ＡＡＧ ＴＡＴ １５３６ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｔｒｐ Ｍｅｔ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｎ
Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｙｒ ４８０ ４８５
４９０ ＧＴＧ ＡＣＣ ＡＧＣ ＧＣＣ ＣＣＡ ＡＴＧ ＣＣＴ ＧＡＧ ＣＣＣ
ＣＡＧ ＧＣＣ ＣＣＡ ＧＧＣ ＣＧＧ ＴＡＣ ＴＴＣ １５８４ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｐｒｏ
Ｇｌｎ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｐｈｅ ４９５ ５００
５０５ ＧＣＣ ＣＡＣ ＡＧＣ ＡＴＣ ＣＴＧ ＡＣＣ ＧＴＧ ＴＣＣ ＧＡＡ
ＧＡＧ ＧＡＡ ＴＧＧ ＡＡＣ ＡＣＧ ＧＧＧ ＧＡＧ １６３２ Ａｌａ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｕ
Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｕ ５１０ ５１５
５２０ ５２５ ＡＣＣ ＴＡＣ ＡＴＣ ＴＧＣ ＧＴＧ ＧＴＧ ＧＣＣ ＣＡＴ ＧＡＧ
ＧＣＣ ＣＴＧ ＣＣＣ ＡＡＣ ＡＧＧ ＧＴＣ ＡＣＣ １６８０ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｃｙｓ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｈｉｓ Ｇｌｕ
Ａｌａ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ ５３０
５３５ ５４０ ＧＡＧ ＡＧＧ ＡＣＣ ＧＴＧ ＧＡＣ ＡＡＧ ＴＣＣ ＡＣＣ ＧＧＴ
ＡＡＡ ＣＣＣ ＡＣＣ ＣＴＧ ＴＡＣ ＡＡＣ ＧＴＧ １７２８ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｖａｌ ５４５ ５５０
５５５ ＴＣＣ ＣＴＧ ＧＴＣ ＡＴＧ ＴＣＣ ＧＡＣ ＡＣＡ ＧＣＴ ＧＧＣ
ＡＣＣ ＴＧＣ ＴＡＣ ＴＧＡＴ １７６８ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｙｒ ５６０ ５６５
配列番号：８８ 配列の長さ：588 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly -19 -15 -10 -5 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 1 5 10 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 15 20 25 Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Lys Gln Ala His Gly Lys Ser Leu 30 35 40 45 Glu Trp Met Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn 50 55 60 Gln Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ala Ser 65 70 75 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 80 85 90 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 95 100 105 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe 110 115 120 125 Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala 130 135 140 Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser 145 150 155 Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro 160 165 170 Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu 175 180 185 Pro Ser Lys Asp Val Met Gln Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys 190 195 200 205 Val Gln His Pro Asn Gly Asn Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val 210 215 220 Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp 225 230 235 Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr 240 245 250 Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys 255 260 265 Gln Val Gly Ser Gly Val Thr Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys 270 275 280 285 Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys 290 295 300 Glu Ser Asp Trp Leu Ser Gln Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His 305 310 315 Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp 320 325 330 Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser 335 340 345 Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu 350 355 360 365 Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu 370 375 380 Ala Val Lys Thr His Thr Asn Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr 385 390 395 Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser 400 405 410 Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro 415 420 425 Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro 430 435 440 445 Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu 450 455 460 Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val 465 470 475 Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr 480 485 490 Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe 495 500 505 Ala His Ser Ile Leu Thr Val Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu 510 515 520 525 Thr Tyr Ile Cys Val Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr 530 535 540 Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val 545 550 555 Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Cys Tyr 560 565 配列番号：89 配列の長さ：116 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Asn Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 配列番号：90 配列の長さ：34 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ＧＧＧＡＡＴＴＣＡＴ ＧＧＡＣＴＧＧＡＣＣ ＴＧＧＡＧＧＷＴＣＣ ＴＹＴ
Ｔ ３４ 配列番号：９１ 配列の長さ：32 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CCTCTAGAGG TTAGTTTGCA TGCACACACA GA 32 配列番号：92 配列の長さ：112 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 配列番号：93 配列の長さ：34 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GCGAATTCTG CCTTGACTGA TCAGAGTTTC CTCA 34 配列番号：94 配列の長さ：32 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GCTCTAGATG AGGTGAAAGA TGAGCTGGAG GA 32 配列番号：95 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CCTCGTCTCC TGTGAGAATT 20 配列番号：96 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ACTCTGACAT CAGCAGTACC 20 配列番号：97 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ACGAACACGT GGTGTGCAAA 20 配列番号：98 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AAGTCCAAGC TCATCTGCCA 20 配列番号：99 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TACAAGGTGA CCAGCACACT 20 配列番号：100 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AATGCGTCCT CCATGTGTGT 20 配列番号：101 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGACCTGACC ACCTATGACA 20 配列番号：102 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCTGCGAGGA TGACTGGAAT 20 配列番号：103 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：Ｎｏ アンチセンス：No 配列 ATGTCTACTT GCTGCCACCA 20 配列番号：104 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TTGTCCCCGG AGAAGTATGT 20 配列番号：105 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GTGTCCGAAG AGGAATGGAA 20 配列番号：106 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CTCAGTGAAG GTTTCCTGCA 20 配列番号：107 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AAAGGCTTGA GTGGATGGGA 20 配列番号：108 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGAGCAGCCT GAGATCTGAA 20 配列番号：109 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGTACTGCTG ATGTCAGAGT 20 配列番号：110 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AATCACTGGA AGAGGCACGT 20 配列番号：１１１ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGGCAGATGA GCTTGGACTT 20 配列番号：112 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGCCAGTCGC TCTCTTTGAT 20 配列番号：113 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：Ｎｏ 配列 ＡＧＧＡＡＧＡＴＧＣ ＴＧＧＣＡＡＡＧＧＡ
２０ 配列番号：114 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGGTGTGGGT TTTCACAGCT 20 配列番号：115 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TTCCAGTCAT CCTCGCAGAT 20 配列番号：116 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGGTGGCAGC AAGTAGACAT 20 配列番号：117 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ACATACTTCT CCGGGGACAA 20 配列番号：118 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ＧＴＧＴＴＣＣＡＴＴ ＣＣＴＣＴＴＣＧＧＡ
２０ 配列番号：１１９ 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TTTACCGGTG GACTTGTCCA 20 配列番号：120 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TATCCAGAAG CCTTGCAGGA 20 配列番号：121 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：Noアンチセンス :No 配列 TGTGTCCCTG GTAATGGTGA 20 配列番号：122 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CTCGCACAGT AATACCACGC 20 配列番号：123 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TATCCGACGG GGAATTCTCA 20 配列番号：124 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGTCTTCATC TTCCCGCCAT 20 配列番号：125 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ACGCTGAGCA AAGCAGACTA 20 配列番号：126 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCCAGTGGGG ATGTTGTGAT 20 配列番号：127 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGTGGGTCAG GCACTGATTT 20 配列番号：128 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCTCCTGCAG GTCTAGTCAA 20 配列番号：129 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGGTAACTCC CAGGAGAGTG 20 配列番号：130 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGGGACCAAG GTGGAAATCA 20 配列番号：131 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TACTTTGGCC TCTCTGTGAT 20 配列番号：１３２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ACTTCGCAGG CGTAGACTTT 20 配列番号：133 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCTCCCCTGT TGAAGCTCTT 20 配列番号：134 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：Ｎｏ 配列 ＴＴＡＡＡＧＣＣＡＡ ＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧ
２０ 配列番号：135 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CTCCACCCTG CTGATTTTCA 20 配列番号：136 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TGCAGCCACA GTACGTTTGA 20 配列番号：137 配列の長さ：1869 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 起源 生物名：ヒト(Homo sapiens) 細胞の種類： 配列 ATGGACTGGA CCTGGAGGAT CCTCTTTTTG GTGGCAGCAG CCACAGGTGC CCACTCCCAG 60 GTCCAACTTG TGCAGTCTGG GGCTGAGGTG AAGAAGCCTG GGGCCTCAGT GAAGGTTTCC 120 TGCAAGGCTT CTGGATACAC CTTCACTACC TATGCTATGC ATTGGGTGCG CCAGGCCCCC 180 GGACAAAGGC TTGAGTGGAT GGGATGGATC AACGCTGGCA ATGGTAACAC AAAATATTCA 240 CAGAAGTTCC AGGGCAGAGT CACCATTACC AGGGACACAT CCGCGAGCAC AGCCTACATG 300 GAGCTGAGCA GCCTGAGATC TGAAGACACG GCTGTGTATT ACTGTGCGAG AGGCGAGGAG 360 ATGGGAGCTA CTTCAGGTCC CGGGCGGTAC TACTTTGACT ACTGGGGCCA GGGAACCCTG 420 GTCACCGTCT CCTCAGGGAG TGCATCCGCC CCAACCCTTT TCCCCCTCGT CTCCTGTGAG 480 AATTCCCCGT CGGATACGAG CAGCGTGGCC GTTGGCTGCC TCGCACAGGA CTTCCTTCCC 540 GACTCCATCA CTTTCTCCTG GAAATACAAG AACAACTCTG ACATCAGCAG CACCCGGGGC 600 TTCCCATCAG TCCTGAGAGG GGGCAAGTAC GCAGCCACCT CACAGGTGCT GCTGCCTTCC 660 AAGGACGTCA TGCAGGGCAC AGACGAACAC GTGGTGTGCA AAGTCCAGCA CCCCAACGGC 720 AACAAAGAAA AGAACGTGCC TCTTCCAGTG ATTGCTGAGC TGCCTCCCAA AGTGAGCGTC 780 TTCGTCCCAC CCCGCGACGG CTTCTTCGGC AACCCCCGCA AGTCCAAGCT CATCTGCCAG 840 GCCACGGGTT TCAGTCCCCG GCAGATTCAG GTGTCCTGGC TGCGCGAGGG GAAGCAGGTG 900 GGGTCTGGCG TCACCACGGA CCAGGTGCAG GCTGAGGCCA AAGAGTCTGG GCCCACGACC 960 TACAAGGTGA CCAGCACACT GACCATCAAA GAGAGCGACT GGCTCAGCCA GAGCATGTTC 1020 ACCTGCCGCG TGGATCACAG GGGCCTGACC TTCCAGCAGA ATGCGTCCTC CATGTGTGTC 1080 CCCGATCAAG ACACAGCCAT CCGGGTCTTC GCCATCCCCC CATCCTTTGC CAGCATCTTC 1140 CTCACCAAGT CCACCAAGTT GACCTGCCTG GTCACAGACC TGACCACCTA TGACAGCGTG 1200 ACCATCTCCT GGACCCGCCA GAATGGCGAA GCTGTGAAAA CCCACACCAA CATCTCCGAG 1260 AGCCACCCCA ATGCCACTTT CAGCGCCGTG GGTGAGGCCA GCATCTGCGA GGATGACTGG 1320 AATTCCGGGG AGAGGTTCAC GTGCACCGTG ACCCACACAG ACCTGCCCTC GCCACTGAAG 1380 CAGACCATCT CCCGGCCCAA GGGGGTGGCC CTGCACAGGC CCGATGTCTA CTTGCTGCCA 1440 CCAGCCCGGG AGCAGCTGAA CCTGCGGGAG TCGGCCACCA TCACGTGCCT GGTGACGGGC 1500 TTCTCTCCCG CGGACGTCTT CGTGCAGTGG ATGCAGAGGG GGCAGCCCTT GTCCCCGGAG 1560 AAGTATGTGA CCAGCGCCCC AATGCCTGAG CCCCAGGCCC CAGGCCGGTA CTTCGCCCAC 1620 AGCATCCTGA CCGTGTCCGA AGAGGAATGG AACACGGGGG AGACCTACAT CTGCGTGGTG 1680 GCCCATGAGG CCCTGCCCAA CAGGGTCACC GAGAGGACCG TGGACAAGTC CACCGGTAAA 1740 CCCACCCTGT ACAACGTGTC CCTGGTCATG TCCGACACAG CTGGCACCTG CTACTGACCC 1800 TGCTGGCCTG CCCACAGGCT CGGGGCGGCT GGCCGCTCTG TGTGTGCATG CAAACTAACC 1860 CGTGTCAAC 1869 配列番号：138 配列の長さ：891 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 起源 生物名：ヒト(Homo sapiens) 細胞の種類： 配列 TGCCTTGACT GATCAGGACT CCTCAGTTCA CCTTCTCACA ATGAGGCTCC CTGCTCAGCT 60 CCTGGGGCTG CTAATGCTCT GGGTCCCAGG ATCCAGTGGG GATGTTGTGA TGACTCAGTC 120 TCCACTCTCC CTGCCCGTCA TCCCTGGACA GCCGGCCTCC ATCTCCTGCA GCTCTAGTCA 180 AGGCCTCGTA TTCAGTGATG GAAACACCTA CGTGAATTGG TTTCATCAGA GGCCAGGCCA 240 ACCTCCAAGG CGCCTAATTT ATGAGGTTTC TCACCGGGAC TCTGGGGTCC CAGACAGATT 300 CAGCGGCAGT GGGTCAGGCA CTGATTTCAC ACTGAAAATC AGCAGGGTGG AGGCTGAGGA 360 TGTTGGGGTT TATTACTGCA TGCAAGGTAC ACAGTGGCCG TGGACGTTCG GCCAAGGGAC 420 GAAGGTGGAA ACCAAACGAA CTGTGGCTGC ACCATCTGTC TTCATCTTCC CGCCATCTGA 480 TGAGCAGTTG AAATCTGGAA CTGCCTCTGT TGTGTGCCTG CTGAATAACT TCTATCCCAG 540 AGAGGCCAAA GTACAGTGGA AAGTGGATAA CGCCCTCCAA TCGGGTAACT CCCAGGAGAG 600 TGTCACAGAG CAGGACAGCA AGGACAGCAC CTACAGCCTC AGCAGCACCC TGACGCTGAG 660 CAAAGCAGAC TACGAGAAAC ACAAACTCTA CGCCTGCGAA GTCACCCATC AGGGCCTGAG 720 CTCGCCCGTC ACAAAGAGCT TCAACAGGGG AGAGTGTTAG AGGGAGAAGT GCCCCCACCT 780 GCTCCTCAGT TCCAGCCTGA CCCCCTCCCA TCCTTTGGCC TCTGACCCTT TTTCCACAGG 840 GGACCTACCC CTATTGCGGT CCTCCAGCTC ATCTTTCACC TCATCTAGAG C 891 配列番号：139 配列の長さ：40 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AGCCGGCCTC CATCTCCTGC AGATCTAGTA AGAGCCTTGT 40 配列番号：140 配列の長さ：40 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：Noアンチセンス :No 配列 ACAAGGCTCT TACTAGATCT GCAGGAGATG GAGGCCGGCT 40 配列番号：141 配列の長さ：40 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AAGTTTCCAA CCGATTTTCT GGGGTCCCAG ACAGATTCAG 40 配列番号：142 配列の長さ：40 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CTGAATCTGT CTGGGACCCC AGAAAATCGG TTGGAAACTT 40 配列番号：143 配列の長さ：50 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGCTGAGGAT GTTGGGGTTT ATTACTGCTC TCAAAGTACA CATGTTCCTC 50 配列番号：144 配列の長さ：50 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GAGGAACATG TGTACTTTGA GAGCAGTAAT AAACCCCAAC ATCCTCAGCC 50 配列番号：145 配列の長さ：50 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGCTGAGGAT GTTGGGGTTT ATTTCTGCTC TCAAAGTACA CATGTTCCTC 50 配列番号：146 配列の長さ：50 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GAGGAACATG TGTACTTTGA GAGCAGAAAT AAACCCCAAC ATCCTCAGCC 50 配列番号：147 配列の長さ：52 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CTCAAAGTAC ACATGTTCCT CCGGCGTTCG GCCAAGGGAC CAAGGTGGAA AT 52 配列番号：148 配列の長さ：52 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ATTTCCACCT TGGTCCCTTG GCCGAACGCC GGAGGAACAT GTGTACTTTG AG 52 配列番号：149 配列の長さ：40 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGGCTCGAGT GCCTTGACTG ATCAGGACTC CTCAGTTCAC 40 配列番号：150 配列の長さ：31 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGCCAGTCTC CAAGGCTCCT GATCTACAAA G 31 配列番号：151 配列の長さ：３１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：Ｎｏ アンチセンス：No 配列 CTTTGTAGAT CAGGAGCCTT GGAGACTGGC C 31 配列番号：152 配列の長さ：31 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CCCTCTAGAC TAACACTCTC CCCTGTTGAA G 31 配列番号：153 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CTGCTCTAAA AGCTGCGGAA 20 配列番号：154 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TAGATCTGCA GGAGARGGAG 20 配列番号：155 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TATGTTTCAG GTTCAGGGGG 20 配列番号：156 配列の長さ：40 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGGCTCGAGC TAAGGGAATT CCGCCTCTCC TCAGACACTG 40 配列番号：157 配列の長さ：40 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GAACTGCAGG CGTCCACTCT GAGGTGCAGC TTGTGCAGTC 40 配列番号：158 配列の長さ：40 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GACTGCACAA GCTGCACCTC AGAGTGGACG CCTGCAGTTC 40 配列番号：１５９ 配列の長さ：５０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AATATGCATA AATTCGAATG GATGGGATAT ATTTATCCTT ACAATGGTGG 50 配列番号：160 配列の長さ：50 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CATCCATTCG AATTTATGCA TATTATAGTC AGTGAAGGTG TATCCAGAAG 50 配列番号：161 配列の長さ：40 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：Ｎｏ 配列 ＣＣＡＣＡＴＴＧＡＣ ＴＧＴＴＧＡＣＡＡＴ ＴＣＣＧＣＧＡＧＣＡ ＣＡＧ
ＣＣＴＡＣＡＴ ４０ 配列番号：162 配列の長さ：40 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ATGTAGGCTG TGCTCGCGGA ATTGTCAACA GTCAATGTGG 40 配列番号：163 配列の長さ：40 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GAAGTTACTA TGCTATGGAC TACTGGGGCC AGGGAACCCT 40 配列番号：164 配列の長さ：40 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TAGTCCATAG CATAGTAACT TCTCGCACAG TAATACACAG 40 配列番号：165 配列の長さ：39 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGGCTCGAGG CCAAAGAGTC TGGGCCCACG ACCTACAAG 39 配列番号：166 配列の長さ：30 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CTTGTAGGTC GTGGGCCCAG ACTCTTTGGC 30 配列番号：１６７ 配列の長さ：３１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGGTCTAGAT CAGTAGCAGG TGCCAGCTGT G 31 配列番号：168 配列の長さ：60 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TATGCATTGG GTGCGCCAGG CCCCCGGACA AGGACTCGAA TGGATGGGAT ATATTTATCC 60 配列番号：169 配列の長さ：60 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：Ｎｏ 配列 ＣＧＡＧＴＣＣＴＴＧ ＴＣＣＧＧＧＧＧＣＣ ＴＧＧＣＧＣＡＣＣＣ ＡＡＴ
ＧＣＡＴＡＴＴ ＡＴＡＧＴＣＡＧＴＧ ＡＡＧＧＴＧＴＡＴＣ ６０ 配列番号：170 配列の長さ：60 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TATGCATTGG GTGAAGCAGG CCCATGGAAA GAGCCTCGAA TGGATGGGAT ATATTTATCC 60 配列番号：171 配列の長さ：60 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CGAGGCTCTT TCCATGGGCC TGCTTCACCC AATGCATATT ATAGTCAGTG AAGGTGTATC 60 配列番号：172 配列の長さ：30 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GAGCGACTGG CTCAGCCAGA GCATGTTCAC 30 配列番号：173 配列の長さ：30 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GTGAACATGC TCTGGCTGAG CCAGTCGCTC 30 配列番号：174 配列の長さ：36 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴ ＧＣＧＴＧＧＴＧＧＣ ＣＣＡＴＧＡＧＧＣＣ ＣＴＧ
ＣＣＣ ３６ 配列番号：１７５ 配列の長さ：50 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGCCTCATGG GCCACCACGC AGATGTAGGT CTCCCCCGTG TTCCATTCCT 50 配列番号：176 配列の長さ：26 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GCTTTATTTG TAACCATTAT AAGCTG 26 配列番号：177 配列の長さ：30 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：Noアンチセンス :No 配列 CTAGATCAGT AGCAGGTGCC AGCTGTGTCG 30 配列番号：178 配列の長さ：24 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CATAGTAACT TCTCGCACAG TAAT 24 配列番号：179 配列の長さ：23 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GATACACCTT CACTGACTAT AAT 23 配列番号：180 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CGTCGGATAC GAGCAGCGTG 20 配列番号：181 配列の長さ：19 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CACCCCGCGA CGGCTTCTT 19 配列番号：182 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGATCACAGG GGCCTGACCT 20 配列番号：183 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CTGTGAAAAC CCACACCAAC 20 配列番号：184 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GCTGAACCTG CGGGAGTCGG 20 配列番号：185 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GTGGCCCATG AGGCCCTGCC 20 配列番号：186 配列の長さ：37 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GGGGAATTCC AGTACGGAGT TGGGGAAGAA GCTCTTT 37 配列番号：187 配列の長さ：35 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GTTTCTTCTG CCTCTGTCAC CAAGTTAGAT CTGGA 35 配列番号：188 配列の長さ：３５ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：Ｎｏ アンチセンス：No 配列 TCCAGATCTA ACTTGGTGAC AGAGGCAGAA GAAAC 35 配列番号：189 配列の長さ：28 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ） ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CCCTCTAGAC GGGTCACGTG GGCATCAC 28

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成１０年３月３１日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項３２

【補正方法】変更

【補正内容】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 16/46 Ｃ０７Ｋ 16/46 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｎ Ｇ０１Ｎ 33/53 33/531 Ａ 33/531 33/564 Ｂ 33/564 33/577 Ｂ 33/577 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 中原 かおり 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 米原 伸 京都府京都市西京区松尾井戸町９−５

Claims (42)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】遺伝子操作によって得られ、配列表の配列
   番号７８で示されるアミノ酸配列を含むことから成る軽
   ポリペプチド鎖蛋白質、配列表の配列番号８０で示され
   るアミノ酸配列を含むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋
   白質、配列表の配列番号８２で示されるアミノ酸配列を
   含むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋白質又は配列表の
   配列番号８４で示されるアミノ酸配列を含むことから成
   る軽ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表の配列番号８
   ６で示されるアミノ酸配列を含むことから成る重ポリペ
   プチド鎖蛋白質又は配列表の配列番号８８で示されるア
   ミノ酸配列を含むことから成る重ポリペプチド鎖蛋白質
   のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、アポトーシス
   誘導活性を有することを特徴とする免疫グロブリンＭ蛋
   白質。
2. 【請求項２】遺伝子操作によって得られ、配列表の配列
   番号７８で示されるアミノ酸配列を含むことから成る軽
   ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表の配列番号８６で
   示されるアミノ酸配列を含むことから成る重ポリペプチ
   ド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、ア
   ポトーシス誘導活性を有することを特徴とする請求項１
   記載の免疫グロブリンＭ蛋白質。
3. 【請求項３】遺伝子操作によって得られ、配列表の配列
   番号７８で示されるアミノ酸配列を含むことから成る軽
   ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表の配列番号８８で
   示されるアミノ酸配列を含むことから成る重ポリペプチ
   ド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、ア
   ポトーシス誘導活性を有することを特徴とする請求項１
   記載の免疫グロブリンＭ蛋白質。
4. 【請求項４】遺伝子操作によって得られ、配列表の配列
   番号８０で示されるアミノ酸配列を含むことから成る軽
   ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表の配列番号８６で
   示されるアミノ酸配列を含むことから成る重ポリペプチ
   ド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、ア
   ポトーシス誘導活性を有することを特徴とする請求項１
   記載の免疫グロブリンＭ蛋白質。
5. 【請求項５】遺伝子操作によって得られ、配列表の配列
   番号８０で示されるアミノ酸配列を含むことから成る軽
   ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表の配列番号８８で
   示されるアミノ酸配列を含むことから成る重ポリペプチ
   ド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、ア
   ポトーシス誘導活性を有することを特徴とする請求項１
   記載の免疫グロブリンＭ蛋白質。
6. 【請求項６】遺伝子操作によって得られ、配列表の配列
   番号８２で示されるアミノ酸配列を含むことから成る軽
   ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表の配列番号８６で
   示されるアミノ酸配列を含むことから成る重ポリペプチ
   ド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、ア
   ポトーシス誘導活性を有することを特徴とする請求項１
   記載の免疫グロブリンＭ蛋白質。
7. 【請求項７】遺伝子操作によって得られ、配列表の配列
   番号８２で示されるアミノ酸配列を含むことから成る軽
   ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表の配列番号８８で
   示されるアミノ酸配列を含むことから成る重ポリペプチ
   ド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、ア
   ポトーシス誘導活性を有することを特徴とする請求項１
   記載の免疫グロブリンＭ蛋白質。
8. 【請求項８】遺伝子操作によって得られ、配列表の配列
   番号８４で示されるアミノ酸配列を含むことから成る軽
   ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表の配列番号８６で
   示されるアミノ酸配列を含むことから成る重ポリペプチ
   ド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、ア
   ポトーシス誘導活性を有することを特徴とする請求項１
   記載の免疫グロブリンＭ蛋白質。
9. 【請求項９】遺伝子操作によって得られ、配列表の配列
   番号８４で示されるアミノ酸配列を含むことから成る軽
   ポリペプチド鎖蛋白質、及び、配列表の配列番号８８で
   示されるアミノ酸配列を含むことから成る重ポリペプチ
   ド鎖蛋白質のみから構成され、Ｊ鎖蛋白質を有さず、ア
   ポトーシス誘導活性を有することを特徴とする請求項１
   記載の免疫グロブリンＭ蛋白質。
10. 【請求項１０】配列表の配列番号７８で示されるアミノ
    酸配列を含むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋白質をコ
    ードするＤＮＡ。
11. 【請求項１１】配列表の配列番号８０で示されるアミノ
    酸配列を含むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋白質をコ
    ードするＤＮＡ。
12. 【請求項１２】配列表の配列番号８２で示されるアミノ
    酸配列を含むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋白質をコ
    ードするＤＮＡ。
13. 【請求項１３】配列表の配列番号８４で示されるアミノ
    酸配列を含むことから成る軽ポリペプチド鎖蛋白質をコ
    ードするＤＮＡ。
14. 【請求項１４】配列表の配列番号８６で示されるアミノ
    酸配列を含むことから成る重ポリペプチド鎖蛋白質をコ
    ードするＤＮＡ。
15. 【請求項１５】配列表の配列番号８８で示されるアミノ
    酸配列を含むことから成る重ポリペプチド鎖蛋白質をコ
    ードするＤＮＡ。
16. 【請求項１６】配列表の配列番号７７で示されるヌクレ
    オチド配列を含むことから成る請求項１０記載のＤＮ
    Ａ。
17. 【請求項１７】配列表の配列番号７９で示されるヌクレ
    オチド配列を含むことから成る請求項１１記載のＤＮ
    Ａ。
18. 【請求項１８】配列表の配列番号８１で示されるヌクレ
    オチド配列を含むことから成る請求項１２記載のＤＮ
    Ａ。
19. 【請求項１９】配列表の配列番号８３で示されるヌクレ
    オチド配列を含むことから成る請求項１３記載のＤＮ
    Ａ。
20. 【請求項２０】配列表の配列番号８５で示されるヌクレ
    オチド配列を含むことから成る請求項１４記載のＤＮ
    Ａ。
21. 【請求項２１】配列表の配列番号８７で示されるヌクレ
    オチド配列を含むことから成る請求項１５記載のＤＮ
    Ａ。
22. 【請求項２２】請求項１０乃至１３又は１６乃至１９の
    いずれかひとつに記載のＤＮＡを含むことから成る組換
    えＤＮＡベクター。
23. 【請求項２３】請求項１４、１５、２０又は２１記載の
    ＤＮＡを含むことから成る組換えＤＮＡベクター。
24. 【請求項２４】請求項２２及び／又は請求項２３記載の
    組換えＤＮＡベクターで形質転換された宿主細胞。
25. 【請求項２５】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨκＫ
    Ｙ２−５８（ＦＥＲＭ ＢＰ−５８６１）。
26. 【請求項２６】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨκＫ
    Ｆ２−１９（ＦＥＲＭ ＢＰ−５８６０）。
27. 【請求項２７】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨκＲ
    Ｙ２−１０（ＦＥＲＭ ＢＰ−５８５９）。
28. 【請求項２８】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨκＲ
    Ｆ２−５２（ＦＥＲＭ ＢＰ−５８６２）。
29. 【請求項２９】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨμＨ
    ５−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−５８６３）。
30. 【請求項３０】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ ｐＨμＭ
    １−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−５８６４）。
31. 【請求項３１】請求項１乃至９のいずれかひとつに記載
    の蛋白質を有効成分とする医薬。
32. 【請求項３２】以下の工程からなる、少なくとも１本の
    軽鎖及び１本の重鎖を含み、ドナーとしての非ヒト抗体
    が有する免疫グロブリン活性を維持するヒト化抗体又は
    その誘導体を産生する方法： イ）少なくともひとつのＣＤＲを有する非ヒト抗体を選
    択し、 ロ）ヒト抗体重鎖を選択し、 ハ）ヒト抗体軽鎖を選択し、 ニ）組換え重鎖を形成するために非ヒト抗体重鎖からヒ
    ト抗体重鎖へ少なくとも一つのＣＤＲまたはその断片を
    導入し、及び、 ホ）組換え軽鎖を形成するために非ヒト抗体軽鎖からヒ
    ト抗体軽鎖へ少なくとも一つのＣＤＲまたはその断片を
    導入する（ここで、ヒト抗体重鎖及び軽鎖の各々の選択
    は、非ヒト抗体重鎖及び軽鎖各々とのアミノ酸配列相同
    性によってのみ決定され、該少なくともひとつの非ヒト
    ＣＤＲはこの非ヒトＣＤＲの少なくとも一つのフレーム
    ワーク領域の少なくとも一つの重要なアミノ酸残基とと
    もにこのヒト抗体に導入され、この少なくとも一つの重
    要なアミノ酸残基はこのＣＤＲとともに非ヒトフレーム
    ワーク領域から導入され、該アミノ酸残基は以下の要件
    の少なくともひとつを具備する： (i) 該アミノ酸は、アクセプターのヒトフレームワー
    ク領域の当該箇所においてまれにしか観察されず、一
    方、ドナーにおける対応するアミノ酸はアクセプターの
    当該箇所において通常観察される、(ii) 免疫グロブリ
    ンの三次元モデルにおいて、該アミノ酸は抗原又はヒト
    化抗体のＣＤＲと以下の規範のひとつに対応して結合を
    形成すると判断される側鎖原子を有する、 側鎖原子間の距離が、それらのファン・デル・ワール
    ス半径の総計に５Åを加えたものより短い、 側鎖原子が極性であり、２番目の極性原子から３．４
    Å以内に存在する、又は 側鎖原子が荷電しており、逆に荷電している原子から
    ３．３５Å以内に存在する、(iii) 該アミノ酸は、ＣＤ
    Ｒのカノニカル・クラス構造の決定に関与する箇所に観
    察される、又は、(iv) 該アミノ酸の箇所は、重鎖及び
    軽鎖の推定上の接触表面において観察される。）。
33. 【請求項３３】要件(ii)及び(iv)のアミノ酸の該箇所
    が、分子モデリングにより決定される、請求項３２記載
    の方法。
34. 【請求項３４】アミノ酸の該箇所が、さらに、他の抗体
    のＸ線結晶解析データとの比較から決定される、請求項
    ３３記載の方法。
35. 【請求項３５】フレームワーク領域からのアミノ酸が、
    分子モデリングによりＣＤＲと接触すると推定され、Ｃ
    ＤＲに接触することがＸ線結晶解析により実験的に高頻
    度で観察される場合に導入される、請求項３２記載の方
    法。
36. 【請求項３６】各々のヒト抗体鎖の該選択が、非ヒト抗
    体鎖とフレームワーク領域において少なくとも７０％の
    アミノ酸の同一性を共有することにより決定される、請
    求項３２記載の方法。
37. 【請求項３７】各々の非ヒト抗体鎖からすべてのＣＤＲ
    がヒト抗体鎖に導入されることを特徴とする、請求項３
    ２記載の方法。
38. 【請求項３８】選択された非ヒト抗体がマウスＣＨ１１
    抗体である、請求項３２記載の方法。
39. 【請求項３９】請求項３２乃至３８のいずれかひとつに
    記載の方法で産生されるヒト化抗体。
40. 【請求項４０】該抗体が抗Ｆａｓ活性を有する、請求項
    ３９記載の抗体。
41. 【請求項４１】該抗体が抗Ｆａｓ活性を有するＩｇＭ分
    子である、請求項３９又は４０記載の抗体。
42. 【請求項４２】該抗体がＪ鎖を欠損し抗Ｆａｓ活性を有
    するＩｇＭ分子である、請求項３９又は４０記載の抗
    体。