JPH10310602A - Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルを用いた線維芽細胞増殖因子（ｆｇｆ）活性化組成物、ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルの合成方法、該合成方法で合成したｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステル - Google Patents
Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルを用いた線維芽細胞増殖因子（ｆｇｆ）活性化組成物、ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルの合成方法、該合成方法で合成したｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルInfo
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- JPH10310602A JPH10310602A JP11964197A JP11964197A JPH10310602A JP H10310602 A JPH10310602 A JP H10310602A JP 11964197 A JP11964197 A JP 11964197A JP 11964197 A JP11964197 A JP 11964197A JP H10310602 A JPH10310602 A JP H10310602A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】線維芽細胞増殖因子を活性化する毒性の少ない
医薬組成物を提供する。 【解決手段】下記式（１）のＮ−アセチルノイラミン酸
ホモポリマーの硫酸エステル又はその薬学的に許容され
る塩を有効成分とする線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）活
性化組成物。 【化１】 （式中、Ｒは同一又は異なって水素原子又はＳＯ3 Ｈを
示し、ｎは１０―１０００の整数を示す。） 下記式（１）のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマー
の硫酸エステル又はその薬学的に許容される塩を有効成
分とする線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）活性化組成物。 【化２】 （式中、Ｒは同一又は異なって水素原子又はＳＯ3 Ｈを
示し、ｎは５―１０００の整数を示す。）
医薬組成物を提供する。 【解決手段】下記式（１）のＮ−アセチルノイラミン酸
ホモポリマーの硫酸エステル又はその薬学的に許容され
る塩を有効成分とする線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）活
性化組成物。 【化１】 （式中、Ｒは同一又は異なって水素原子又はＳＯ3 Ｈを
示し、ｎは１０―１０００の整数を示す。） 下記式（１）のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマー
の硫酸エステル又はその薬学的に許容される塩を有効成
分とする線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）活性化組成物。 【化２】 （式中、Ｒは同一又は異なって水素原子又はＳＯ3 Ｈを
示し、ｎは５―１０００の整数を示す。）
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、Ｎ−アセチルノイ
ラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルを用いた線維芽細
胞増殖因子（ＦＧＦ）活性化組成物、Ｎ−アセチルノイ
ラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルの合成方法、該合
成方法で合成したＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマ
ーの硫酸エステルに関する。
ラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルを用いた線維芽細
胞増殖因子（ＦＧＦ）活性化組成物、Ｎ−アセチルノイ
ラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルの合成方法、該合
成方法で合成したＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマ
ーの硫酸エステルに関する。
【０００２】
【従来の技術】線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ：Ｆｉｂｒ
ｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）は、細胞
表面のＦＧＦレセプターに結合して、細胞増殖を誘導す
るが、ＦＧＦの細胞増殖活性の増強には，硫酸基が必要
不可欠であると言われている（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，
Ｅ．，＆ Ｙａｍａｕｃｈｉ、Ｙ．，Ｃｅｌｌ，６４，
ｐｐ８６７−８６９（１９９１））。一方、カルボキシ
ル基だけを持った酸性ポリマーであるポリアクリル酸を
用いた場合にも線維芽細胞増殖因子の細胞増殖活性が増
強されることが確認された。
ｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）は、細胞
表面のＦＧＦレセプターに結合して、細胞増殖を誘導す
るが、ＦＧＦの細胞増殖活性の増強には，硫酸基が必要
不可欠であると言われている（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，
Ｅ．，＆ Ｙａｍａｕｃｈｉ、Ｙ．，Ｃｅｌｌ，６４，
ｐｐ８６７−８６９（１９９１））。一方、カルボキシ
ル基だけを持った酸性ポリマーであるポリアクリル酸を
用いた場合にも線維芽細胞増殖因子の細胞増殖活性が増
強されることが確認された。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、かかる
知見を念頭に置きつつ、Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモ
ポリマーが多数のカルボキシル基を有することに着目
し、かかるＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーのの
有効利用開発を検討した。その結果、従来は検討された
ことがなかったが、上記Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモ
ポリマーを硫酸化し、得られたＮ−アセチルノイラミン
酸の硫酸エステルを用いて線維芽細胞増殖因子を活性化
できることが判明した。即ち本発明の第１の視点は、優
れた線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）活性化作用を有しか
つ副作用の少ない組成物を提供することを目的とする。
知見を念頭に置きつつ、Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモ
ポリマーが多数のカルボキシル基を有することに着目
し、かかるＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーのの
有効利用開発を検討した。その結果、従来は検討された
ことがなかったが、上記Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモ
ポリマーを硫酸化し、得られたＮ−アセチルノイラミン
酸の硫酸エステルを用いて線維芽細胞増殖因子を活性化
できることが判明した。即ち本発明の第１の視点は、優
れた線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）活性化作用を有しか
つ副作用の少ない組成物を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】即ち、 本発明は、下記式
（１）のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸
エステル又はその薬学的に許容される塩を有効成分とす
る線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）活性化組成物に関す
る。
（１）のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸
エステル又はその薬学的に許容される塩を有効成分とす
る線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）活性化組成物に関す
る。
【化３】 （式中、Ｒは同一又は異なって水素原子又はＳＯ3 Ｈを
示し、ｎは１０―１０００の整数を示す。）
示し、ｎは１０―１０００の整数を示す。）
【０００５】また、発明者等は、Ｎ−アセチルノイラミ
ン酸ホモポリマーの硫酸エステルの製造方法について
は、例えば、特開平６−２７９５０３に記載された方法
があるが、この方法では、 Ｎ−アセチルノイラミン酸ホ
モポリマーは十分に硫酸化がなされていないことを発見
した。即ち、特開平６−２７９５０３には、Ｎ−アセチ
ルノイラミン酸ホモポリマーを硫酸化する方法としてＮ
−アセチルノイラミン酸ホモポリマーを有機溶剤存在下
又は不存在化において触媒中で硫酸化剤によって硫酸化
することが教示されている。
ン酸ホモポリマーの硫酸エステルの製造方法について
は、例えば、特開平６−２７９５０３に記載された方法
があるが、この方法では、 Ｎ−アセチルノイラミン酸ホ
モポリマーは十分に硫酸化がなされていないことを発見
した。即ち、特開平６−２７９５０３には、Ｎ−アセチ
ルノイラミン酸ホモポリマーを硫酸化する方法としてＮ
−アセチルノイラミン酸ホモポリマーを有機溶剤存在下
又は不存在化において触媒中で硫酸化剤によって硫酸化
することが教示されている。
【０００６】しかしながら、Ｎ−アセチルノイラミン酸
ホモポリマーはカルボキシル基を有し親水性であるの
で、特開平６−２７９５０３に記載された方法では有機
溶媒及び／または有機触媒中に均一に溶解せず、従っ
て、硫酸化が均一に起こらず均一な反応成生物得られな
いことが分かった。即ち、上記硫酸化方法では、有機溶
媒中でＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーがミセル
状態となって反応が進行するので、反応はミセル粒子の
表面のみで進み、界面近くのＮ−アセチルノイラミン酸
ホモポリマーのみが硫酸化され、合成された硫酸化Ｎ−
アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸化部位が均一
でないことが予想された。
ホモポリマーはカルボキシル基を有し親水性であるの
で、特開平６−２７９５０３に記載された方法では有機
溶媒及び／または有機触媒中に均一に溶解せず、従っ
て、硫酸化が均一に起こらず均一な反応成生物得られな
いことが分かった。即ち、上記硫酸化方法では、有機溶
媒中でＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーがミセル
状態となって反応が進行するので、反応はミセル粒子の
表面のみで進み、界面近くのＮ−アセチルノイラミン酸
ホモポリマーのみが硫酸化され、合成された硫酸化Ｎ−
アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸化部位が均一
でないことが予想された。
【０００７】本発明は、より均一かつ高密度にＮ−アセ
チルノイラミン酸ホモポリマーを硫酸化すべく研究を進
め、本発明に到達した。即ち、本発明の第２の目的は、
より均一かつ高密度にＮ−アセチルノイラミン酸ホモポ
リマーを硫酸化する方法を提供するものである。
チルノイラミン酸ホモポリマーを硫酸化すべく研究を進
め、本発明に到達した。即ち、本発明の第２の目的は、
より均一かつ高密度にＮ−アセチルノイラミン酸ホモポ
リマーを硫酸化する方法を提供するものである。
【０００８】即ち、 本発明の第２の視点は、Ｎ−アセチ
ルノイラミン酸ホモポリマーをトリブチルアミン塩と
し、Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーのトリブチ
ルアミン塩を有機溶媒に均一に溶解し、その後Ｎ−アセ
チルノイラミン酸ホモポリマーのトリブチルアミン塩を
硫酸化することを特徴とする下記一般式（１）のＮ−ア
セチルノイラミン酸ホモポリマー硫酸エステルの合成方
法に関する。
ルノイラミン酸ホモポリマーをトリブチルアミン塩と
し、Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーのトリブチ
ルアミン塩を有機溶媒に均一に溶解し、その後Ｎ−アセ
チルノイラミン酸ホモポリマーのトリブチルアミン塩を
硫酸化することを特徴とする下記一般式（１）のＮ−ア
セチルノイラミン酸ホモポリマー硫酸エステルの合成方
法に関する。
【化４】 （式中、Ｒは同一又は異なって水素原子又はＳＯ3 Ｈを
示し、ｎは５−１０００の整数を示す。但し，硫酸化度
は０．５−３である。）
示し、ｎは５−１０００の整数を示す。但し，硫酸化度
は０．５−３である。）
【０００９】本発明の合成方法によれば、Ｎ−アセチル
ノイラミン酸ホモポリマーをトリブチルアミン塩に変え
ることによって、Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマ
ーのトリブチルアミン塩を有機溶媒に均一に溶解するこ
とを可能とし、均一に溶解したＮ−アセチルノイラミン
酸ホモポリマーのトリブチルアミン塩を硫酸化するので
その硫酸化部位を均一なものとでき、また後述するよう
に立体構造等の理由で確率的にＮ−アセチルノイラミン
酸の９位に対して優先的に硫酸化を行うことができる。
本発明の合成方法で得られたＮ−アセチルノイラミン酸
ホモポリマー硫酸エステル又はその薬学的に許容される
塩を線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）活性化組成物の有効
成分として用いることによってより優れた活性化効果が
得られる。
ノイラミン酸ホモポリマーをトリブチルアミン塩に変え
ることによって、Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマ
ーのトリブチルアミン塩を有機溶媒に均一に溶解するこ
とを可能とし、均一に溶解したＮ−アセチルノイラミン
酸ホモポリマーのトリブチルアミン塩を硫酸化するので
その硫酸化部位を均一なものとでき、また後述するよう
に立体構造等の理由で確率的にＮ−アセチルノイラミン
酸の９位に対して優先的に硫酸化を行うことができる。
本発明の合成方法で得られたＮ−アセチルノイラミン酸
ホモポリマー硫酸エステル又はその薬学的に許容される
塩を線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）活性化組成物の有効
成分として用いることによってより優れた活性化効果が
得られる。
【００１０】本発明のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポ
リマーの硫酸エステルを有効成分とする線維芽細胞増殖
因子（ＦＧＦ）活性化組成物によれば、有効成分として
のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステ
ルの硫酸化度が高いので線維芽細胞増殖因子をより大き
く活性化できる。
リマーの硫酸エステルを有効成分とする線維芽細胞増殖
因子（ＦＧＦ）活性化組成物によれば、有効成分として
のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステ
ルの硫酸化度が高いので線維芽細胞増殖因子をより大き
く活性化できる。
【００１１】
【実施の態様】本発明のＮ−アセチルノイラミン酸ホモ
ポリマーの硫酸エステルの硫酸化度（Ｎ−アセチルノイ
ラミン酸残基１モルに対するＳＯ3 Ｈ残基の数）は、
０．５−３．０で、好ましくは１．０−３．０、最も好
ましくは１．５−３．０である。一般式（Ｉ）のＮ−ア
セチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルにおい
て重合度ｎは５から１０００の整数であり、好ましくは
１０−５００、最も好ましくは１０−１００である。本
発明のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エ
ステルは、ｎが１種類のみである単一化合物であっても
よく、また重合度ｎが５−１０００の範囲のｎ値が異な
る複数のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸
エステルの混合物でもよい。
ポリマーの硫酸エステルの硫酸化度（Ｎ−アセチルノイ
ラミン酸残基１モルに対するＳＯ3 Ｈ残基の数）は、
０．５−３．０で、好ましくは１．０−３．０、最も好
ましくは１．５−３．０である。一般式（Ｉ）のＮ−ア
セチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルにおい
て重合度ｎは５から１０００の整数であり、好ましくは
１０−５００、最も好ましくは１０−１００である。本
発明のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エ
ステルは、ｎが１種類のみである単一化合物であっても
よく、また重合度ｎが５−１０００の範囲のｎ値が異な
る複数のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸
エステルの混合物でもよい。
【００１２】本発明の上記一般式（１）のＮ−アセチル
ノイラミン酸ホモポリマー硫酸エステルは、以下の方法
によって合成することができる。即ち、原料であるＮ−
アセチルノイラミン酸ナトリウムをカチオン交換樹脂に
てフリー体にした後、トリブチルアミンでＮ−アセチル
ノイラミン酸トリブチルアミン塩を形成後，硫酸化剤と
してＳ０3 −ピリジンコンプレックス、Ｓ０3 −ジメチ
ルホルムアミドコンプレックス、ピペリジン硫酸、クロ
ロスルホン酸等を用い、また溶媒としてジメチルホルム
アミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド、ピリジン、
トルエン等を用いて０°Ｃ−１００°Ｃで０．５−５時
間程度反応させることによってＮ−アセチルノイラミン
酸ホモポリマー硫酸エステルを得る。なお、Ｎ−アセチ
ルノイラミン酸−トリブチルアミン塩を得る際に、反応
酸性溶液のｐＨをすばやく中性に戻すこと、また、その
溶液を洗浄する際にはジエチルエーテル等の溶媒を予め
十分に冷やして用いることによってＮ−アセチルノイラ
ミン酸−トリブチルアミン塩の酸及び温度による分解を
最小限にとどめることができる。また、Ｎ−アセチルノ
イラミン酸−トリブチルアミン塩をＤＭＦ中でＳＯ3 −
ピリジンコンプレックスと反応させる場合には、窒素気
流中で行い、無水ＤＭＦを使用するなど水分の混入につ
いて注意を払うことが好ましい。原料のＮ−アセチルノ
イラミン酸ホモポリマーは、特に限定されるものではな
いが、重合度ｎが一定であるホモポリマーを用いてもよ
く、例えばコロミン酸のような天然のアセチルノイラミ
ン酸ホモポリマーの混合物を用いても良い。
ノイラミン酸ホモポリマー硫酸エステルは、以下の方法
によって合成することができる。即ち、原料であるＮ−
アセチルノイラミン酸ナトリウムをカチオン交換樹脂に
てフリー体にした後、トリブチルアミンでＮ−アセチル
ノイラミン酸トリブチルアミン塩を形成後，硫酸化剤と
してＳ０3 −ピリジンコンプレックス、Ｓ０3 −ジメチ
ルホルムアミドコンプレックス、ピペリジン硫酸、クロ
ロスルホン酸等を用い、また溶媒としてジメチルホルム
アミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド、ピリジン、
トルエン等を用いて０°Ｃ−１００°Ｃで０．５−５時
間程度反応させることによってＮ−アセチルノイラミン
酸ホモポリマー硫酸エステルを得る。なお、Ｎ−アセチ
ルノイラミン酸−トリブチルアミン塩を得る際に、反応
酸性溶液のｐＨをすばやく中性に戻すこと、また、その
溶液を洗浄する際にはジエチルエーテル等の溶媒を予め
十分に冷やして用いることによってＮ−アセチルノイラ
ミン酸−トリブチルアミン塩の酸及び温度による分解を
最小限にとどめることができる。また、Ｎ−アセチルノ
イラミン酸−トリブチルアミン塩をＤＭＦ中でＳＯ3 −
ピリジンコンプレックスと反応させる場合には、窒素気
流中で行い、無水ＤＭＦを使用するなど水分の混入につ
いて注意を払うことが好ましい。原料のＮ−アセチルノ
イラミン酸ホモポリマーは、特に限定されるものではな
いが、重合度ｎが一定であるホモポリマーを用いてもよ
く、例えばコロミン酸のような天然のアセチルノイラミ
ン酸ホモポリマーの混合物を用いても良い。
【００１３】硫酸化反応が終了後は、公知の方法、例え
ば遠心分離法、濃縮ゲルろ過、濃縮ゲル、イオン交換等
の各種のクロマトグラフィー、再沈殿法、透析法等の方
法によって単離する。本発明において薬学的に許容され
る塩とは、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカ
リ金属塩、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類
金属塩等が挙げられる。これらの塩は、硫酸化反応液を
水酸化ナトリウム、炭酸カリウム等の塩で中和すること
によって製造でき、また、一旦硫酸化糖の遊離の酸とし
て得た後、それを用いて塩の形態としても良い。
ば遠心分離法、濃縮ゲルろ過、濃縮ゲル、イオン交換等
の各種のクロマトグラフィー、再沈殿法、透析法等の方
法によって単離する。本発明において薬学的に許容され
る塩とは、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカ
リ金属塩、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類
金属塩等が挙げられる。これらの塩は、硫酸化反応液を
水酸化ナトリウム、炭酸カリウム等の塩で中和すること
によって製造でき、また、一旦硫酸化糖の遊離の酸とし
て得た後、それを用いて塩の形態としても良い。
【００１４】本発明の一般式（１）のＮ−アセチルノイ
ラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルは、薬学的に許容
される種々の添化剤とともに線維芽細胞増殖因子活性化
組成物として用いることができる。該医薬組成物は、そ
の適用形態は特に限定されないが、例えば、 注射剤、 錠
剤、 カプセル剤、 顆粒剤、 細粒剤、 乳剤等の経口剤、 注
射剤、 座薬などの種々の形態で用いることができる。
ラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルは、薬学的に許容
される種々の添化剤とともに線維芽細胞増殖因子活性化
組成物として用いることができる。該医薬組成物は、そ
の適用形態は特に限定されないが、例えば、 注射剤、 錠
剤、 カプセル剤、 顆粒剤、 細粒剤、 乳剤等の経口剤、 注
射剤、 座薬などの種々の形態で用いることができる。
【００１５】本発明のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポ
リマーの硫酸エステルを有効成分とする線維芽細胞増殖
因子活性化組成物を注射剤として調整する場合，添加剤
としてはｐＨ調整剤、 緩衝剤、 安定化剤、 等張化剤、 局
所麻酔剤等が挙げられ、 これらを適量配合することによ
って注射剤用製剤とすることができる。該製剤は、 静脈
内、 筋肉内、 皮下又は腹腔内に投与される。
リマーの硫酸エステルを有効成分とする線維芽細胞増殖
因子活性化組成物を注射剤として調整する場合，添加剤
としてはｐＨ調整剤、 緩衝剤、 安定化剤、 等張化剤、 局
所麻酔剤等が挙げられ、 これらを適量配合することによ
って注射剤用製剤とすることができる。該製剤は、 静脈
内、 筋肉内、 皮下又は腹腔内に投与される。
【００１６】本発明の線維芽細胞増殖因子活性化組成物
を経口剤として調整する場合には，賦形剤、 崩壊剤、 滑
沢剤、 結合剤，矯臭剤、 矯味剤等が挙げられる。
を経口剤として調整する場合には，賦形剤、 崩壊剤、 滑
沢剤、 結合剤，矯臭剤、 矯味剤等が挙げられる。
【００１７】本発明の線維芽細胞増殖因子活性化組成物
を座薬として用いる場合には、基剤、界面活性剤等の添
加剤が用いられる。
を座薬として用いる場合には、基剤、界面活性剤等の添
加剤が用いられる。
【００１８】上記添加剤としては、個々の製剤を調整す
る際に通常用いられる添化剤を適宜選択して適当な量で
用いる。また、上記の各種製剤中に配合される有効成分
である本発明のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマー
の硫酸エステルの量は、投与すべき患者の年齢、性別、
体重、症状等により適宜変更して用いるが、一般には、
ヒト成人に対する１投与単位当たり、経口剤では１−８
０ｍｇ程度、注射剤では０．０５−１０ｍｇ程度、座剤
では１−５０ｍｇ程度であるのが好ましく、ヒト成人１
日当たりの投与量は剤の形態により異なるが、１−２０
０ｍｇ程度が好ましい。
る際に通常用いられる添化剤を適宜選択して適当な量で
用いる。また、上記の各種製剤中に配合される有効成分
である本発明のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマー
の硫酸エステルの量は、投与すべき患者の年齢、性別、
体重、症状等により適宜変更して用いるが、一般には、
ヒト成人に対する１投与単位当たり、経口剤では１−８
０ｍｇ程度、注射剤では０．０５−１０ｍｇ程度、座剤
では１−５０ｍｇ程度であるのが好ましく、ヒト成人１
日当たりの投与量は剤の形態により異なるが、１−２０
０ｍｇ程度が好ましい。
【００１９】
【実施例】以下に、製造実施例及び薬理試験例に基づき
本発明をより詳細に説明する。但し、本発明は、下記の
ものに限定されるものではない。
本発明をより詳細に説明する。但し、本発明は、下記の
ものに限定されるものではない。
【００２０】（製造実施例１）約２０ｍｇ／ｍｌのコロ
ミン酸ナトリウム（分子量（Ｍｎ）＝１４、０００、Ｍ
ｗ／Ｍｎ＝１．２）を含む水溶液５０ｍｌを１Ｎ−ＨＣ
ｌでＨ+ 型にしたカチオン交換樹脂（コロミン酸１ｇに
対し約２０ｇ）に４°Ｃにて通し、使用したコロミン酸
のカルボキシル基の当量分に当る量の１０％トリブチル
アミンーエタノール溶液中に滴下した。滴下した溶液に
対し上記と同じ１０％トリブチルアミンーエタノール溶
液を用いてｐＨを５．０に調整した。得られた溶液をジ
エチルエーテルで３回洗浄した後、凍結乾燥することに
よってコロミン酸―トリブチルアミン塩を得た。合成し
たトリブチルアミン塩１ｇを窒素気流下で、無水ＤＭＦ
１００ｍｌ中に溶解し、ＳＯ3 −ピリジン・コンプレッ
クス／無水ＤＭＦの混合溶液１００ｍｌを徐々に滴下
し、滴下終了後に６０分間攪拌し反応を行った。その
後、２０ｍｌの冷水を加えて反応を停止し、１Ｎ−Ｎａ
ＯＨで反応液をｐＨ９．０に調整した。得られた反応溶
液をアセトン中に注入したところ白色の沈殿物が析出し
た。反応溶液を１５００ｒｐｍで１５分間遠心分離にか
け、析出した沈殿物を回収した。得られた白色の沈殿物
を少量の水で溶かし、その溶液を蒸留水で２−３日透析
したのち、凍結乾燥してＮ−アセチルノイラミン酸硫酸
エステル（Ｓ−ｃｏｌ１. ８８）を得た。
ミン酸ナトリウム（分子量（Ｍｎ）＝１４、０００、Ｍ
ｗ／Ｍｎ＝１．２）を含む水溶液５０ｍｌを１Ｎ−ＨＣ
ｌでＨ+ 型にしたカチオン交換樹脂（コロミン酸１ｇに
対し約２０ｇ）に４°Ｃにて通し、使用したコロミン酸
のカルボキシル基の当量分に当る量の１０％トリブチル
アミンーエタノール溶液中に滴下した。滴下した溶液に
対し上記と同じ１０％トリブチルアミンーエタノール溶
液を用いてｐＨを５．０に調整した。得られた溶液をジ
エチルエーテルで３回洗浄した後、凍結乾燥することに
よってコロミン酸―トリブチルアミン塩を得た。合成し
たトリブチルアミン塩１ｇを窒素気流下で、無水ＤＭＦ
１００ｍｌ中に溶解し、ＳＯ3 −ピリジン・コンプレッ
クス／無水ＤＭＦの混合溶液１００ｍｌを徐々に滴下
し、滴下終了後に６０分間攪拌し反応を行った。その
後、２０ｍｌの冷水を加えて反応を停止し、１Ｎ−Ｎａ
ＯＨで反応液をｐＨ９．０に調整した。得られた反応溶
液をアセトン中に注入したところ白色の沈殿物が析出し
た。反応溶液を１５００ｒｐｍで１５分間遠心分離にか
け、析出した沈殿物を回収した。得られた白色の沈殿物
を少量の水で溶かし、その溶液を蒸留水で２−３日透析
したのち、凍結乾燥してＮ−アセチルノイラミン酸硫酸
エステル（Ｓ−ｃｏｌ１. ８８）を得た。
【００２１】（製造実施例２）下記表１に示す反応条件
（ＳＯ3 −ピリジン・コンプレックスの添加量、反応時
間）としたことを除き、製造実施例１と同一の条件で硫
酸化度の異なるアセチルノイラミン酸硫酸エステル（Ｓ
−ｃｏｌ ０. ８９）を得た。
（ＳＯ3 −ピリジン・コンプレックスの添加量、反応時
間）としたことを除き、製造実施例１と同一の条件で硫
酸化度の異なるアセチルノイラミン酸硫酸エステル（Ｓ
−ｃｏｌ ０. ８９）を得た。
【００２２】製造実施例１と２とのコロミン酸の硫酸化
の結果を表１に示す。
の結果を表１に示す。
【表１】
【００２３】測定は以下の方法によった。 （１）分子量（Ｍｎ），（Ｍｗ／Ｍｎ） 光散乱光度計によって測定した。 （２）糖残基当たりの硫酸基の数 元素分析の測定結果によって算出した。
【００２４】（３）ＩＲスペクトル（ＫＢｒ錠剤法）、
ＮＭＲスペクトル アセチルノイラミン酸硫酸エステル（Ｓ−ｃｏｌ １.
８８とＳ−ｃｏｌ ０.９）のおのおののＩＲスペクト
ル及びＮＭＲスペクトルをＮ−アセチルノイラミン酸
（Ｍｎ，Ｍｗ／Ｍｎの値はそれぞれ３７、５００と１．
２６）とともにそれぞれ図１と図２に示す。図１と図２
とから、ＫｒＢ錠剤法のＩＲスペクトルから、Ｎ−アセ
チルノイラミン酸を硫酸化することによって、１２３０
ｃｍ-1、１１００ｃｍ-1付近にピークが現れることこと
から、硫酸基が存在していることが確認できた。また、
ラクトンに特有なピーク（１１７０ｃｍ−１、１１９０
ｎｍ-1）が観察されなかったので、ラクトン化が起こら
なかったことが確認できた。また、ＮＭＲスペクトルか
らは、Ｎ−アセチルノイラミン酸を硫酸化することによ
って、９位のピークが消失していることから、９位の水
酸基が優先的に硫酸化されていることが分かった。
ＮＭＲスペクトル アセチルノイラミン酸硫酸エステル（Ｓ−ｃｏｌ １.
８８とＳ−ｃｏｌ ０.９）のおのおののＩＲスペクト
ル及びＮＭＲスペクトルをＮ−アセチルノイラミン酸
（Ｍｎ，Ｍｗ／Ｍｎの値はそれぞれ３７、５００と１．
２６）とともにそれぞれ図１と図２に示す。図１と図２
とから、ＫｒＢ錠剤法のＩＲスペクトルから、Ｎ−アセ
チルノイラミン酸を硫酸化することによって、１２３０
ｃｍ-1、１１００ｃｍ-1付近にピークが現れることこと
から、硫酸基が存在していることが確認できた。また、
ラクトンに特有なピーク（１１７０ｃｍ−１、１１９０
ｎｍ-1）が観察されなかったので、ラクトン化が起こら
なかったことが確認できた。また、ＮＭＲスペクトルか
らは、Ｎ−アセチルノイラミン酸を硫酸化することによ
って、９位のピークが消失していることから、９位の水
酸基が優先的に硫酸化されていることが分かった。
【００２５】（薬理実施例）Ｎ−アセチルノイラミン酸
ナトリウム（分子量（Ｍｎ）＝１４、０００、Ｍｗ／Ｍ
ｎ＝１．２）及び製造実施例１と２とで得たＮ−アセチ
ルノイラミン酸硫酸エステルＳ−ｃｏｌ １．８８及び
Ｓ−ｃｏｌ ０. ８９を種々の濃度で溶解し，滅菌して
使用した。線維芽細胞としては、マウス胎児由来の３Ｔ
３（Ｓｗｉｓｓ ａｌｂｉｎｏ）線維芽細胞から亜種と
して１９７４年に樹立された３Ｔ３−Ｌ１線維芽細胞
（ＡＴＣＣ ＣＣＬ９２．１）を用いた。また、線維芽
細胞増殖因子としては、等電点が酸性の酸性ＦＧＦ（ａ
ＦＧＦ）と塩基性ＦＧＦ（ｂＦＧＳ）とを用いた。
ナトリウム（分子量（Ｍｎ）＝１４、０００、Ｍｗ／Ｍ
ｎ＝１．２）及び製造実施例１と２とで得たＮ−アセチ
ルノイラミン酸硫酸エステルＳ−ｃｏｌ １．８８及び
Ｓ−ｃｏｌ ０. ８９を種々の濃度で溶解し，滅菌して
使用した。線維芽細胞としては、マウス胎児由来の３Ｔ
３（Ｓｗｉｓｓ ａｌｂｉｎｏ）線維芽細胞から亜種と
して１９７４年に樹立された３Ｔ３−Ｌ１線維芽細胞
（ＡＴＣＣ ＣＣＬ９２．１）を用いた。また、線維芽
細胞増殖因子としては、等電点が酸性の酸性ＦＧＦ（ａ
ＦＧＦ）と塩基性ＦＧＦ（ｂＦＧＳ）とを用いた。
【００２６】１）細胞の培養 a ： 血清培地 イーグルＭＥＭ培地（日水製薬株式会社製）４７５ｍｌ
（９. ４ｇ／４７５ｍｌ）を高圧蒸気で滅菌後、７．５
ｗ／ｖ％の炭酸水素ナトリウム水溶液１２−１５ｍｌを
加えてｐＨを７．２−７. ４に調整後、０．２３８ｇ／
ｍｌのＨＥＰＥＳ水溶液（５ｍｌ（最終濃度０．０１
Ｍ），グルタミン０．１５ｇ、ウシ胎児血清（ＧＩＢＣ
Ｏ）５０ｍｌを添加したものを用いた。
（９. ４ｇ／４７５ｍｌ）を高圧蒸気で滅菌後、７．５
ｗ／ｖ％の炭酸水素ナトリウム水溶液１２−１５ｍｌを
加えてｐＨを７．２−７. ４に調整後、０．２３８ｇ／
ｍｌのＨＥＰＥＳ水溶液（５ｍｌ（最終濃度０．０１
Ｍ），グルタミン０．１５ｇ、ウシ胎児血清（ＧＩＢＣ
Ｏ）５０ｍｌを添加したものを用いた。
【００２７】ｂ：細胞の継代 継代は培養フラスコ上で３Ｔ３−Ｌ１細胞が常にＣｏｎ
ｆｌｕｅｎｔ( 合流)になる前に行った。継代方法は、
培養フラスコ内の培地を全て取り除いた後、 ダルベッコ
ＰＢＳ（−）（Ｃａ2+，Ｍｇ2+フリー：日水製薬株式会
社製）で細胞表面を洗浄した。次に、 細胞表面全体に行
き渡るように、 トリプシンＥＤＴＡ溶液（ＳＩＧＭＡ）
を加えた。数分後、 培養フラスコの底面から細胞が剥が
れているのを確認後、 血清培地を約１２ｍｌ加えてピペ
ットで計量し、１２００ｒｐｍで３分間遠心分離した。
遠心分離操作後、 細胞が沈降しているのを確認し、 培地
を除去した。その後、 得られた沈殿物に血清培地を約２
ｍｌ加えた後ピペットで計量し、 細胞懸濁液を作り、 そ
の一部を取り血球計算板を用いて細胞数を数えた。新し
い培養フラスコに培地を２５ｍｌ加え、 約８０万個の」
細胞を含む細胞懸濁液をそのフラスコに移した。培養フ
ラスコを軽く攪拌後、３７°Ｃ，５％Ｃ０2下のインキ
ュベータ中で４８時間培養した。
ｆｌｕｅｎｔ( 合流)になる前に行った。継代方法は、
培養フラスコ内の培地を全て取り除いた後、 ダルベッコ
ＰＢＳ（−）（Ｃａ2+，Ｍｇ2+フリー：日水製薬株式会
社製）で細胞表面を洗浄した。次に、 細胞表面全体に行
き渡るように、 トリプシンＥＤＴＡ溶液（ＳＩＧＭＡ）
を加えた。数分後、 培養フラスコの底面から細胞が剥が
れているのを確認後、 血清培地を約１２ｍｌ加えてピペ
ットで計量し、１２００ｒｐｍで３分間遠心分離した。
遠心分離操作後、 細胞が沈降しているのを確認し、 培地
を除去した。その後、 得られた沈殿物に血清培地を約２
ｍｌ加えた後ピペットで計量し、 細胞懸濁液を作り、 そ
の一部を取り血球計算板を用いて細胞数を数えた。新し
い培養フラスコに培地を２５ｍｌ加え、 約８０万個の」
細胞を含む細胞懸濁液をそのフラスコに移した。培養フ
ラスコを軽く攪拌後、３７°Ｃ，５％Ｃ０2下のインキ
ュベータ中で４８時間培養した。
【００２８】２. 実験方法 a ：試料の調整 ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を１ｗｔ％濃度（ｗ／
ｖ）で含むように加えたＰＢＳ（−）溶液（１％ＢＳＡ
−ＰＢＳ）を用意した。Ｎ−アセチルノイラミン酸およ
びＮ−アセチルノイラミン酸硫酸エステルは、１％ＢＳ
Ａ−ＰＳＢに種々の濃度で溶解させ，不溶分をろ過した
後滅菌して使用した。
ｖ）で含むように加えたＰＢＳ（−）溶液（１％ＢＳＡ
−ＰＢＳ）を用意した。Ｎ−アセチルノイラミン酸およ
びＮ−アセチルノイラミン酸硫酸エステルは、１％ＢＳ
Ａ−ＰＳＢに種々の濃度で溶解させ，不溶分をろ過した
後滅菌して使用した。
【００２９】b ：無血清培地 イーグルＭＥＭ培地４７５ｍｌ（９．４ｇ/ ４７５ｍ
ｌ）を高圧蒸気で滅菌後、７．５ｗ／ｖ％炭酸水素ナト
リウム水溶液１２−１５ｍｌを加えてｐＨを７．２−
７．４に調整した後、０. ２３８ｇ／ｍｌのＨＥＰＥＳ
水溶液（最終濃度０．０１Ｍ）５ｍｌ、グルタミン酸
０．１５ｇ、ＧＭＳ−Ａ（インシュリン１．００ｇ・ｍ
ｌ、トランスフェリン０．５５ｇ／ｌ、亜セレン酸ナト
リウム０．０００６７ｇ／ｌ、ピルビン酸ナトリウム１
１．００ｇ／ｌ）５ｍｌを添加したものを用いた。
ｌ）を高圧蒸気で滅菌後、７．５ｗ／ｖ％炭酸水素ナト
リウム水溶液１２−１５ｍｌを加えてｐＨを７．２−
７．４に調整した後、０. ２３８ｇ／ｍｌのＨＥＰＥＳ
水溶液（最終濃度０．０１Ｍ）５ｍｌ、グルタミン酸
０．１５ｇ、ＧＭＳ−Ａ（インシュリン１．００ｇ・ｍ
ｌ、トランスフェリン０．５５ｇ／ｌ、亜セレン酸ナト
リウム０．０００６７ｇ／ｌ、ピルビン酸ナトリウム１
１．００ｇ／ｌ）５ｍｌを添加したものを用いた。
【００３０】３）細胞増殖測定法 継代の時と同様に細胞をトリプシンＥＤＴＡで剥離し、
血清培地を加えて浮遊させ、１２００ｒｐｍで３分間遠
心分離し、培地を除去した。次に無血清培地を加え、ピ
ペットで計量してから細胞を洗浄し、再び１２００ｒｐ
ｍで３分間遠心分離し培地を除去した。そして、その沈
殿物に対し無血清培地を約２ｍｌ加え細胞懸濁液を作製
した。血球計算板を用いて細胞数を数え必要な細胞濃度
となるように細胞懸濁液を無血清培地で希釈する。希釈
した細胞懸濁液を９６ウエル・マルチプレートに１００
μｌ／ウエルづつ幡種し、実験に用いたＮ−アセチルノ
イラミン酸および硫酸エステルＮ−アセチルノイラミン
酸硫酸エステルをそれぞれ書定量添加し、３７°Ｃ、５
％ＣＯ2 下で約２４時間培養した。
血清培地を加えて浮遊させ、１２００ｒｐｍで３分間遠
心分離し、培地を除去した。次に無血清培地を加え、ピ
ペットで計量してから細胞を洗浄し、再び１２００ｒｐ
ｍで３分間遠心分離し培地を除去した。そして、その沈
殿物に対し無血清培地を約２ｍｌ加え細胞懸濁液を作製
した。血球計算板を用いて細胞数を数え必要な細胞濃度
となるように細胞懸濁液を無血清培地で希釈する。希釈
した細胞懸濁液を９６ウエル・マルチプレートに１００
μｌ／ウエルづつ幡種し、実験に用いたＮ−アセチルノ
イラミン酸および硫酸エステルＮ−アセチルノイラミン
酸硫酸エステルをそれぞれ書定量添加し、３７°Ｃ、５
％ＣＯ2 下で約２４時間培養した。
【００３１】２４時間後、以下に説明するＭＴＴ法によ
って生細胞数を測定し、比較した。まず、各ウエルから
５０μｌずつ上澄を取り除き、ＭＴＴ溶液（５ｍｇ／ｍ
ｌｉｎＰＢＳ（−））を１０μｌ／ウエルずつ添加し、
３７°Ｃ、５％ＣＯ2 下で約４時間培養した。４時間
後、０．０４Ｍ ＨＣｌ−イソプロパノールを１００μ
ｌ／ウエルずつ加え、ピペット計量し、完全に溶解さ
せ、５７０ｎｍの吸光度（対照波長６３０ｎｍ）を測定
した。
って生細胞数を測定し、比較した。まず、各ウエルから
５０μｌずつ上澄を取り除き、ＭＴＴ溶液（５ｍｇ／ｍ
ｌｉｎＰＢＳ（−））を１０μｌ／ウエルずつ添加し、
３７°Ｃ、５％ＣＯ2 下で約４時間培養した。４時間
後、０．０４Ｍ ＨＣｌ−イソプロパノールを１００μ
ｌ／ウエルずつ加え、ピペット計量し、完全に溶解さ
せ、５７０ｎｍの吸光度（対照波長６３０ｎｍ）を測定
した。
【００３２】図３にＭＴＴ法による検量線を示す。同図
から、 細胞懸濁液の濃度が７０、０００セル／ｍｌ迄で
あれば、 測定して得られた吸光度をそのまま生存細胞数
に置き換えることができる。
から、 細胞懸濁液の濃度が７０、０００セル／ｍｌ迄で
あれば、 測定して得られた吸光度をそのまま生存細胞数
に置き換えることができる。
【００３３】４. 実験結果及びその考察 図４乃至図６に示す実験結果から、Ｎ−アセチルノイラ
ミン酸はＦＧＦに対し細胞増殖増強効果は示さなかった
が、Ｎ−アセチルノイラミン酸を硫酸化したもの用いる
ことによって線維芽細胞増殖因子ａＦＧＦとｂＦＧＦと
がともに活性化されることが分かる。また、Ｓ−ｃｏｌ
０. ８９に比べて硫酸化度の高いＳ−ｃｏｌ １. ８
８の方がより低濃度でａＦＧＦ及びｂＦＧＦを活性化し
ていることが分かる。
ミン酸はＦＧＦに対し細胞増殖増強効果は示さなかった
が、Ｎ−アセチルノイラミン酸を硫酸化したもの用いる
ことによって線維芽細胞増殖因子ａＦＧＦとｂＦＧＦと
がともに活性化されることが分かる。また、Ｓ−ｃｏｌ
０. ８９に比べて硫酸化度の高いＳ−ｃｏｌ １. ８
８の方がより低濃度でａＦＧＦ及びｂＦＧＦを活性化し
ていることが分かる。
【００３４】毒性については、Ｎ−アセチルノイラミン
酸硫酸エステルは、単独では添加量を増やしていっても
細胞増強活性が殆ど変化していない。即ち、添加量増加
に伴って毒性が強まり増強活性が減少するということが
ないことから、毒性は殆どないと考えれれる。また、 Ｎ
−アセチルノイラミン酸硫酸エステルは、３７°Ｃ、 ４
°Ｃにおける無血清培地中でのＮ−アセチルノイラミン
酸硫酸エステルの分解をしらべたところ、 分解は殆ど生
じてないことが分かった（図７参照）。このことから、
細胞培養条件下でのＮ−アセチルノイラミン酸硫酸エス
テルの分解は殆どなく, 低分子化による細胞増殖への影
響の違いは生じないと考えられる。
酸硫酸エステルは、単独では添加量を増やしていっても
細胞増強活性が殆ど変化していない。即ち、添加量増加
に伴って毒性が強まり増強活性が減少するということが
ないことから、毒性は殆どないと考えれれる。また、 Ｎ
−アセチルノイラミン酸硫酸エステルは、３７°Ｃ、 ４
°Ｃにおける無血清培地中でのＮ−アセチルノイラミン
酸硫酸エステルの分解をしらべたところ、 分解は殆ど生
じてないことが分かった（図７参照）。このことから、
細胞培養条件下でのＮ−アセチルノイラミン酸硫酸エス
テルの分解は殆どなく, 低分子化による細胞増殖への影
響の違いは生じないと考えられる。
【図１】Ｎ−アセチルノイラミン酸及びＮ−アセチルノ
イラミン酸硫酸エステルのＩＲスペクトルを示す。
イラミン酸硫酸エステルのＩＲスペクトルを示す。
【図２】Ｎ−アセチルノイラミン酸及びＮ−アセチルノ
イラミン酸硫酸エステルのＮＭＲスペクトルを示す。
イラミン酸硫酸エステルのＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】ＭＴＴ法による吸光度と細胞数の相関図を示
す。
す。
【図４】ＦＧＦの細胞増殖におけるＮ−アセチルノイラ
ミン酸の影響を示す。
ミン酸の影響を示す。
【図５】ＦＧＦの細胞増殖におけるＮ−アセチルノイラ
ミン酸硫酸エステル（Ｓ−ｃｏｌ １. ８８）の影響を
示す。
ミン酸硫酸エステル（Ｓ−ｃｏｌ １. ８８）の影響を
示す。
【図６】ＦＧＦの細胞増殖におけるＮ−アセチルノイラ
ミン酸硫酸エステル（Ｓ−ｃｏｌ ０. ８９）の影響を
示す。
ミン酸硫酸エステル（Ｓ−ｃｏｌ ０. ８９）の影響を
示す。
【図７】Ｎ−アセチルノイラミン酸硫酸エステルが、３
７°Ｃ、 ４°Ｃにおける無血清培地中では殆ど分解をし
ていないことを示す図である。
７°Ｃ、 ４°Ｃにおける無血清培地中では殆ど分解をし
ていないことを示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (54)【発明の名称】 Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルを用いた線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ) 活性化組成物、Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルの合成方法、該合成方法 で合成したＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステル
Claims (4)
- 【請求項１】下記式（１）のＮ−アセチルノイラミン酸
ホモポリマーの硫酸エステル又はその薬学的に許容され
る塩を有効成分とする線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）活
性化組成物。 【化１】 （式中、Ｒは同一又は異なって水素原子又はＳＯ3 Ｈを
示し、ｎは５−１０００の整数を示す。） - 【請求項２】前記式１において硫酸化度が１以上である
ことを特徴とする請求項１に記載した線維芽細胞増殖因
子（ＦＧＦ）活性化組成物。 - 【請求項３】Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーを
トリブチルアミン塩化し、Ｎ−アセチルノイラミン酸ホ
モポリマーのトリブチルアミン塩を有機溶媒に均一に溶
解し、その後Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの
トリブチルアミン塩を硫酸化することを特徴とする下記
一般式（１）のＮ−アセチルノイラミン酸ホモポリマー
硫酸エステルの合成方法。 【化２】 （式中、Ｒは同一又は異なって水素原子又はＳＯ3 Ｈを
示し、ｎは５―１０００の整数を示す。但し，硫酸化度
は０．５―３．０である。） - 【請求項４】請求項３に記載の合成方法で合成したＮ−
アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステル。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11964197A JPH10310602A (ja) | 1997-05-09 | 1997-05-09 | Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルを用いた線維芽細胞増殖因子（ｆｇｆ）活性化組成物、ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルの合成方法、該合成方法で合成したｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステル |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11964197A JPH10310602A (ja) | 1997-05-09 | 1997-05-09 | Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルを用いた線維芽細胞増殖因子（ｆｇｆ）活性化組成物、ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルの合成方法、該合成方法で合成したｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステル |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10310602A true JPH10310602A (ja) | 1998-11-24 |
Family
ID=14766485
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11964197A Withdrawn JPH10310602A (ja) | 1997-05-09 | 1997-05-09 | Ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルを用いた線維芽細胞増殖因子（ｆｇｆ）活性化組成物、ｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステルの合成方法、該合成方法で合成したｎ−アセチルノイラミン酸ホモポリマーの硫酸エステル |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10310602A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008510024A (ja) * | 2004-08-12 | 2008-04-03 | リポクセン テクノロジーズ リミテッド | 分別 |
| JP2014503674A (ja) * | 2011-01-27 | 2014-02-13 | サノフイ | Ｆｇｆ受容体活性化３−ｏ−アルキルオリゴ糖類、これの調製およびこれの治療的使用 |
-
1997
- 1997-05-09 JP JP11964197A patent/JPH10310602A/ja not_active Withdrawn
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008510024A (ja) * | 2004-08-12 | 2008-04-03 | リポクセン テクノロジーズ リミテッド | 分別 |
| JP2012082436A (ja) * | 2004-08-12 | 2012-04-26 | Lipoxen Technologies Ltd | 電荷を有する多糖の分別 |
| JP2014169451A (ja) * | 2004-08-12 | 2014-09-18 | Lipoxen Technologies Ltd | 電荷を有する多糖の分別 |
| US9200052B2 (en) | 2004-08-12 | 2015-12-01 | Lipoxen Technologies Limited | Fractionation of charged polysaccharide |
| US9790288B2 (en) | 2004-08-12 | 2017-10-17 | Lipoxen Technologies Limited | Fractionation of charged polysaccharide |
| US9828443B2 (en) | 2004-08-12 | 2017-11-28 | Lipoxen Technologies Limited | Fractionation of charged polysaccharide |
| JP2014503674A (ja) * | 2011-01-27 | 2014-02-13 | サノフイ | Ｆｇｆ受容体活性化３−ｏ−アルキルオリゴ糖類、これの調製およびこれの治療的使用 |
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