JPH04279527A

JPH04279527A - リジン又はアルギニン誘導体

Info

Publication number: JPH04279527A
Application number: JP3262791A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Kiyokawa; 清川　博; Takashi Miyauchi; 宮内　俊; Yasuo Yanagihara; 康夫柳原; Makoto Komatsu; 真小松; Shinichi Taira; 伸一平良
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1991-01-18
Filing date: 1991-02-27
Publication date: 1992-10-05

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規なリジン又はアルギ
ニン誘導体に関する。

【０００２】

【従来技術とその課題】本発明誘導体は文献未載の新規
化合物であり、血管新生抑制作用を有している。

【０００３】しかして、血管新生は、胚の成長、炎症性
の反応、糖尿病性網膜症、創傷治癒過程、癌や腫瘍の増
殖等に重要な役割を果たしていることが広く知られてい
る。例えば癌や腫瘍の増殖過程においては、その組織に
血管新生を伴う癌や腫瘍の増殖は、新生された血管によ
り栄養、酸素の供給、老廃物の排泄を必要とし、血管新
生に依存しているといえる。従って、血管新生を抑制す
ることにより、癌や腫瘍の増殖を抑制あるいは退縮させ
ることができるものと期待されている（Ｄｅｎｅｋａｍ
ｐ　Ｊ．，　１９８４，　Ａｃｔａ　Ｒａｄｉｏｌｏｇ
ｉｃａ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，　２３，　２１７−２２５
，　：　Ｆｏｌｋｍａｎ　Ｊ．，　１９７６，Ｓｃｉ．
　Ａｍ．，　２３４，　５８−　７８）。また、癌や腫
瘍以外においても、血管の異常増殖によって発症したり
、血管新生を伴う疾患である例えばリウマチ性関節炎、
糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、老人性黄斑部変性、創
傷時の過剰瘢痕形成等に対しても血管新生の抑制により
治療が期待される。

【０００４】本発明はかかる血管新生抑制作用を有する
新規なリジン又はアルギニン誘導体を提供することをそ
の目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明によれば、下記一
般式（１）

【０００６】

【化８】で表わされる構造単位と一般式（２）

【０００７】

【化９】〔各式中、ｌ及びｍはそれぞれ１〜５の整数を示し、ｐ
は３又は４を示す。Ｒ１　はアミノ基、基

【０００８】

【化１０】又は基

【０００９】

【化１１】を示す。〕で表わされる構造単位とを含有し、分子量が２０００〜
２００００の範囲にある共重合体であることを特徴とす
るリジン又はアルギニン誘導体並びに上記一般式（１）
で表わされる構造単位、一般式（３）

【００１０】

【化１２】で表わされる構造単位及び一般式（２ａ）

【００１１】

【化１３】〔各式中、ｌ及びｍはそれぞれ１〜５の整数を示す。〕
で表わされる構造単位を有し、分子量が２０００〜２０
０００の範囲にある共重合体であることを特徴とするリ
ジン又はアルギニン誘導体が提供される。

【００１２】本発明の上記リジン又はアルギニン誘導体
は、血管新生抑制作用を有しており、上記のように、血
管の異常増殖により発症したり、血管新生を伴う疾患で
ある、例えばリウマチ性関節炎、糖尿病性網膜症、未熟
児網膜症、老人性黄斑部変性、創傷時の過剰瘢痕形成等
の予防及び治療剤として、また癌や腫瘍の治療剤として
有用である。

【００１３】以下、本発明誘導体の製造法につき詳述す
れば、該誘導体は例えば一般式（４）

【００１４】

【化１４】〔式中ｑは１〜５の整数を示し、ｎは５〜５０の整数を
示す。〕で表わされるスチレン−無水マレイン酸共重合
体に、Ｌ−（−）−α−アミノ−ε−カプロラクタムを
反応させて得られる共重合体を加水分解し、しかる後に
反応生成物をゲル濾過することにより製造される。上記
一般式（４）で表わされるスチレン−無水マレイン酸共
重合体としては、分子量が約１０００〜２００００（ｎ
が約５〜５０）のものがよく、特に分子量が約１６００
〜１００００のもの（ｎが約７〜２０で且つｑが１〜３
の整数）が好ましい。

【００１５】上記スチレン−無水マレイン酸共重合体と
Ｌ−（−）−α−アミノ−ε−カプロラクタムとの反応
は、適当な溶媒中で実施される。ここで使用される溶媒
としては、例えばジオキサン、テトラヒドロフラン、ジ
エチルエーテル等のエーテル類、ベンゼン、トルエン、
キシレン等の芳香族炭化水素類、クロロホルム、ジクロ
ロメタン、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、
ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メ
チルピロリドン等の非プロトン性極性溶媒等を例示でき
る。

【００１６】上記反応は、通常０〜１５０℃程度、好ま
しくは室温〜１２０℃付近の温度条件下に、１〜１０時
間程度を要して行なわれる。該反応におけるスチレン−
無水マレイン酸共重合体の使用量は、Ｌ−（−）−α−
アミノ−ε−カプロラクタムに対して、通常０．５〜１
０倍重量程度、好ましくは０．５〜２倍重量程度とする
のがよい。かくして、所望の共重合体を収得できる。

【００１７】上記に引き続く共重合体の加水分解反応は
、適当な溶媒中、塩基性化合物の存在下に実施できる。用いられる溶媒としては、例えば水、メタノール、エタ
ノール、イソプロパノール等の低級アルコール類、アセ
トン、メチルエチルケトン等のケトン類、ジオキサン、
テトラヒドロフラン、エチレングリコールジメチルエー
テル等のエーテル類、之等の混合溶媒等を例示できる。また塩基性化合物としては、例えば炭酸ナトリウム、炭
酸カリウム等の金属炭酸塩や水酸化ナトリウム、水酸化
カリウム、水酸化カルシウム等の金属水酸化物等を例示
できる。

【００１８】上記加水分解反応は、通常室温〜２００℃
程度、好ましくは室温〜１５０℃付近の温度条件下に好
適に進行し、一般に０．５〜１０時間程度で終了する。該反応条件では、反応時間によっては前記構造単位（１
）と（２ａ）と（３）とからなる共重合体が主に生成す
る。

【００１９】また上記に引き続く加水分解反応生成物の
ゲル濾過は、適当な担体を用いて通常の方法に従い実施
できる。ここでゲル濾過担体としては排除限界分子量が
球状蛋白で約５００００〜１５００００、好ましくは約
６００００〜１０００００であるものの中から選ばれる
のがよく、特に本発明のリジン又はアルギニン誘導体の
分離に適した上記担体の市販品としては、セファデック
スＧ−７５及び同Ｇ−１００（いずれもファルマシア社
製）を例示できる。上記ゲル濾過は基本的には常法に従
うことができ、その条件は溶出液のクロマトグラムによ
って分離状態を判断して、好ましいものを任意に選定す
ればよい。

【００２０】かくして本発明誘導体を収得できる。

【００２１】また本発明誘導体は、以下の方法によって
も製造できる。即ち、上記方法で用いられると同様のス
チレン−無水マレイン酸共重合体に、一般式（５）

【０
０２２】

【化１５】又は一般式（６）

【００２３】

【化１６】〔各式中、Ｒ２　はフェニル低級アルコキシカルボニル
基を、Ｒ３　はフェニル低級アルキル基を、またＲ４　
はニトロ基、フェニル低級アルコキシカルボニル基、フ
ェニル環上に低級アルキル基及び低級アルコキシ基なる
群より選ばれる基を有することのあるフェニルスルホニ
ル基をそれぞれ示す。〕で表わされる化合物を反応させ、得られる共重合体を脱
保護基反応させ、しかる後に反応生成物をゲル濾過する
ことによっても本発明誘導体を収得できる。

【００２４】上記一般式（５）及び（６）において、Ｒ
２　、Ｒ３　及びＲ４　で示される各基としては、より
具体的にはそれぞれ次の通りである。

【００２５】即ち、フェニル低級アルキコキシカルボニ
ル基としては、例えばフェニルメトキシカルボニル、２
−フェニルエトキシカルボニル、１−フェニルエトキシ
カルボニル、３−フェニルプロポキシカルボニル、４−
フェニルブトキシカルボニル、５−フェニルペンチルオ
キシカルボニル、６−フェニルヘキシルオキシカルボニ
ル、１，１−ジメチル−２−フェニルエトキシカルボニ
ル、２−メチル−３−フェニルプロポキシカルボニル基
等のアルコキシカルボニル部分が炭素数１〜６の直鎖も
しくは分岐鎖状アルコキシ基を有するものであるフェニ
ルアルコキシカルボニル基を例示できる。

【００２６】またフェニル低級アルキル基としては、例
えばベンジル、２−フェニルエチル、１−フェニルエチ
ル、３−フェニルプロピル、４−フェニルブチル、５−
フェニルペンチル、６−フェニルヘキシル、１，１−ジ
メチル−２−フェニルエチル、２−メチル−３−フェニ
ルプロピル基等のアルキル部分が炭素数１〜６の直鎖も
しくは分岐鎖状アルキル基であるフェニルアルキル基を
例示できる。

【００２７】フェニル環上に低級アルキル基及び低級ア
ルコキシ基なる群より選ばれる基を有することのあるフ
ェニルスルホニル基としては、例えばフェニルスルホニ
ル、ｐ−トルエンスルホニル、ｐ−メトキシベンゼンス
ルホニル、メシチレン−２−スルホニル、４−メトキシ
−２，６−ジメチルベンゼンスルホニル基等のフェニル
環上に炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖状アルキル基
及び炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖状アルコキシ基
なる群より選ばれる基を１〜３個有することのあるフェ
ニルスルホニル基を例示できる。

【００２８】上記方法におけるスチレン−無水マレイン
酸共重合体と化合物（５）又は化合物（６）との反応は
、前記スチレン−無水マレイン酸共重合体とＬ−（−）
−α−アミノ−ε−カプロラクタムとの反応と同様の条
件下に実施できる。

【００２９】上記で得られる共重合体の脱保護基反応は
、一般的な加水分解反応又は還元反応により実施できる
。該加水分解反応はより詳しくは、例えば適当な溶媒中
で又は無溶媒で、酸の存在下に実施される。ここで用い
られる溶媒としては例えば水、メタノール、エタノール
、イソプロパノール等の低級アルコール類、アセトン、
メチルエチルケトン等のケトン類、ジオキサン、テトラ
ヒドロフラン、ジエチレングリコールジメチルエーテル
等のエーテル類、酢酸、蟻酸、トリフルオロ酢酸等の脂
肪酸類、之等の混合溶媒等を例示できる。酸としては例
えば塩酸、硫酸、臭化水素酸等の鉱酸や蟻酸、酢酸、ト
リフルオロメタンスルホン酸、芳香族スルホン酸等の有
機酸を例示できる。反応は、通常０〜１００℃程度、好
ましくは０〜７０℃程度にて好適に進行し、一般に０．
５〜１０時間程度で終了する。尚、上記加水分解反応に
は、カチオンラジカルスカベンジャー及び切断促進剤と
してチオアニソール、アニソール、エタンジオール等や
之等の混合物を添加利用するのがよい。

【００３０】また還元反応はより詳しくは、例えば適当
な溶媒中、触媒の存在下に実施される。ここで用いられ
る溶媒としては例えば水、酢酸、メタノール、エタノー
ル、イソプロパノール等のアルコール類、ヘキサン、シ
クロヘキサン等の炭化水素類、ジオキサン、テトラヒド
ロフラン、ジエチルエーテル、ジエチレングリコールジ
メチルエーテル等のエーテル類、酢酸エチル、酢酸メチ
ル等のエステル類、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の
非プロトン性極性溶媒、之等の混合溶媒等を例示できる
。触媒としては例えばパラジウム、パラジウム−黒、パ
ラジウム−炭素、白金、酸化白金、亜クロム酸銅、ラネ
ーニッケル等を例示できる。上記触媒は出発原料に対し
て一般に０．０２〜１倍重量程度用いるのがよい。

【００３１】尚、上記還元反応は、蟻酸、シクロヘキセ
ン、抱水ヒドラジン、蟻酸アンモニウム等の水素供与剤
を用いて、通常室温〜１５０℃程度、好ましくは室温〜
１００℃程度にて、１〜６時間程度反応させることによ
っても実施できる。

【００３２】上記脱保護反応に引き続くゲル濾過は、前
記したそれと同様の条件下に行ない得る。

【００３３】かくして本発明の目的とするリジン又はア
ルギニン誘導体を収得できる。

【００３４】本発明誘導体は血管新生阻害剤として有効
であり、該誘導体を有効成分とする血管新生阻害剤は、
通常上記有効成分化合物と共に、適当な製剤担体を用い
て、一般的な医薬製剤組成物の形態とされ実用される。

【００３５】上記医薬製剤組成物は、該製剤の使用形態
に応じて、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付
湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤等の希釈剤あるいは
賦形剤を用いて調製される。この医薬製剤としては各種
の形態が治療目的に応じて選択でき、その代表的なもの
としては例えば錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤
、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤等
）等を例示できる。錠剤の形態に成形するに際しては、
担体としてこの分野で従来よりよく知られている各種の
ものを広く使用できる。その例としては、例えば乳糖、
白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭
酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、リ
ン酸カリウム等の賦形剤、水、エタノール、プロパノー
ル、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶
液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピル
セルロース、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリ
ビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメチルセルロ
ースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウ
ム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、乾燥デン
プン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン
末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム等の崩壊剤、
ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウ
リル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド等の
界面活性剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添
加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウリ
ル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプ
ン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイ
ト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステア
リン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢
剤等を使用できる。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を
施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠
、フイルムコーテイング錠あるいは二重錠、多層錠とす
ることもできる。丸剤の形態に成形するに際しては、担
体としてこの分野で従来公知のものを広く使用できる。その例としては、例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カ
カオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、ア
ラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等
の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を例示で
きる。坐剤の形態に成形するに際しては、担体として従
来公知のものを広く使用できる。その例としては、例え
ばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール
、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリ
セライド等を例示できる。カプセル剤は常法に従い、通
常本発明の有効成分化合物を、上記で例示した各種の製
剤担体と混合して、硬質ゼラチンカプセル、軟質カプセ
ル等に充填して調製される。本発明薬剤が液剤、乳剤、
懸濁剤等の注射剤として調製される場合、之等は殺菌さ
れ且つ血液と等張であるのが好ましく、之等の形態に成
形するに際しては、希釈剤としてこの分野において慣用
されているものをすべて使用できる。その例としては、
例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレ
ングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、
ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエ
チレンソルビタン脂肪酸エステル類等を例示できる。尚
、この場合等張性の溶液を調製するのに充分な量の食塩
、ブドウ糖、グリセリン等を、本発明薬剤中に含有させ
ることもでき、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化
剤等を添加してもよい。更に、本発明薬剤中には、必要
に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他
の医薬品を含有させることもできる。

【００３６】本発明の血管新生阻害剤中に含有されるべ
き有効成分化合物の量は、特に限定されず広範囲から適
宜選択されるが、通常製剤組成物中に約１〜７０重量％
、好ましくは約５〜５０重量％含有される量とするのが
よい。

【００３７】本発明血管新生阻害剤の投与方法は、特に
制限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の
条件、疾患の程度等により適宜選択される。例えば錠剤
、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤等の
場合には、経口投与される。また注射剤の場合には単独
でもしくはブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合し
て静脈内投与され、更に必要に応じて単独で筋肉内、皮
内、皮下もしくは腹腔内投与される。坐剤の場合には直
腸内投与される。

【００３８】本発明血管新生阻害剤の投与量は、用法、
患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等により適
宜選択されるが、通常有効成分である本発明誘導体の量
が一日当り体重１ｋｇ当り約０．６〜１００ｍｇ程度と
するのがよく、また投与単位形態の製剤中には上記有効
成分化合物が約１０〜１０００ｍｇ程度の範囲で含有さ
れるのが望ましい。該製剤は１日に１〜４回に分けて投
与することができる。

【００３９】

【実施例】以下、本発明を更に詳しく説明するため、本
発明誘導体の製造例を実施例として挙げ、次いで実施例
で得た誘導体を有効成分とした薬理試験例を挙げる。

【００４０】

【実施例１】スチレン−無水マレイン酸共重合体（一般
式（４）：ｑ＝１、ｎ＝平均８、商品名：ＳＭＡ−１０
００、ＡＲＣＯ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　社製）２．０ｇを
ジオキサン５０ｍｌに溶解し、これにＬ−ε−ベンジル
エステルカルボニルリジンベンジルエステル（Ｌ−Ｌｙ
ｓ（Ｚ）−ＯＢｎ）４．０ｇを加え、４時間還流した。溶媒を留去し、残渣にジエチルエーテルを加えて結晶化
後、結晶を濾取し、乾燥して、白色粉末として４．６ｇ
の付加体を得た。以下これを「ＳＭＡ−１０００−Ｌｙ
ｓ（Ｚ）−ＯＢｎ　」という。融点：９２〜１１０℃、
ＩＲスペクトル：図１に示す。

【００４１】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図２に示す。元素分析値（％）：Ｈ６．４３　　Ｃ６８．６３　　Ｎ
４．３５ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３３５０（ｍ
）、１７２０（ｓ）、１６７０（ｍ）、１５３０（ｓ）
、１２５０（ｓ）、７０５（ｓ）　１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３　）δ（ｐｐｍ　）：０．
９−２．１（ｍ）、２．７−３．２（ｍ）、４．１−４
．７（ｍ）、４．７−５．４（ｍ）、６．５−７．５（
ｍ）上記付加体　［ＳＭＡ−１０００−Ｌｙｓ（Ｚ）−
ＯＢｎ　］　の４．０ｇをトリフルオロ酢酸５０ｍｌに
溶解し、氷冷下、チオアニソール６．２ｇ及びトリフル
オロメタンスルホン酸７．５ｇを加え、同温度にて２時
間攪拌した。反応液にジエチルエーテルを加え、析出晶
を濾取した。得られた粗結晶を水に溶解し、水酸化ナト
リウムでアルカリ性として濾過後、濾液を１Ｎ　　ＨＣ
ｌでｐＨ＝４．０とし、析出晶を濾取し、水洗、乾燥し
て、白色粉末として１．６ｇのＳＭＡ−１０００のリジ
ン付加体を得た。以下これを「ＳＭＡ−１０００−Ｌｙ
ｓ−１」という。融点：３００℃以上、ＩＲスペクトル
：図３に示す。

【００４２】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図４に示す。１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：図５に示す。ＵＶスペクトル：図６に示す。元素分析値（％）：Ｈ６．５６　　Ｃ５７．１０　　Ｎ
５．８０ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３４００（ｓ
）、１７２０（ｓ）、１６４０（ｓ）、１５８０（ｓ）
、７１０（ｍ）　１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ槇Ｏ＋ＮａＯＤ）δ（ｐｐｍ　）：
０．５−１．７（ｍ）、１．７−２．７（ｍ）、３．２
−４．１（ｍ）、６．３−７．７（ｍ）１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）：δ（ｐｐｍ　）
：２２．２、２６．２、３１．４、３９．１、４４．９
、５４．５、１２８．４、１４０．５、１７４．３、１
７７．９ＵＶ（１Ｎ　　ＮａＯＨ）λｍａｘ　（ｎｍ）
：２５０、２２０

【００４３】

【実施例２】ＳＭＡ−１０００の１４．３ｇをジオキサ
ン２８６ｍｌに溶解し、１００℃にて攪拌下、これにＬ
−（−）−α−アミノカプロラクタム９．０ｇのジオキ
サン４２８ｍｌ懸濁液を加えた。同温度にて３時間攪拌
後、冷却し、ジエチルエーテル１５００ｍｌを加え、結
晶を濾取し、乾燥して、白色粉末として２３．５ｇの付
加体を得た。以下これを「ＳＭＡ−１０００−ｌａｃｔ
ａｍ　」という。融点：３００℃以上、ＩＲスペクトル
：図７に示す。

【００４４】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図８に示す。元素分析値（％）：Ｈ６．７９　　Ｃ６０．５５　　Ｎ
７．４５ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３３７５（ｍ
）、１７２０（ｍ）、１６５０（ｓ）、７００（ｍ）　
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２　Ｏ＋ＮａＯＤ）δ（ｐｐｍ　）：
０．８−２．６（ｍ）、２．７−３．２（ｍ）、４．０
−４．３（ｍ）、６．２−７．４（ｍ）上記付加体　［ＳＭＡ−１０００−ｌａｃｔａｍ］の３
４．０ｇを０．５ＭＫ２　ＣＯ３　４５０ｍｌに加え、
１時間還流した。冷却後、４Ｎ　　ＨＣｌで酸性とし、
析出晶を濾取し、水洗、乾燥して、白色粉末として１９
．０ｇのＳＭＡ−１０００のリジン付加体を得た。以下
これを「ＳＭＡ−１０００−Ｌｙｓ−２」という。

【００４５】このＳＭＡ−１０００−Ｌｙｓ−２は、前
記式（３）の部分構造を有することがＩＲスペクトルよ
り推定できる。融点：３００℃以上、ＩＲスペクトル：図９に示す。

【００４６】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図１０に示す
。ＵＶスペクトル：図１１に示す。元素分析値（％）：Ｈ６．６６　　Ｃ６１．４６　　Ｎ
６．８２ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３３７５（ｓ
）、１７２０（ｓ）、１６５０（ｓ）、７１０（ｍ）　
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２　Ｏ＋ＮａＯＤ）δ（ｐｐｍ　）：
０．８−２．８（ｍ）、２．８−３．３（ｍ）、４．０
−４．３（ｍ）、６．１−７．３（ｍ）ＵＶ（１Ｎ　　ＮａＯＨ）λｍａｘ　（ｎｍ）：２５８
、２２５

【００４７】

【実施例３】ＳＭＡ−１０００の２．０ｇをジオキサン
５０ｍｌに溶解し、これにＬ−ω−ニトロアルギニンベ
ンジルエステル（Ａｒｇ（ＮＯ２　）−ＯＢｎ　）３．
０ｇを加え、５時間還流した。溶媒を留去し、残渣にジ
エチルエーテルを加えて結晶化後、結晶を濾取し、乾燥
して、白色粉末として３．４ｇの付加体を得た。以下こ
れを「　ＳＭＡ−１０００−Ａｒｇ（ＮＯ２　）−ＯＢ
ｎ　」という。融点：１８５〜２００℃、ＩＲスペクト
ル：図１２に示す。

【００４８】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図１３に示す
。元素分析値（％）：Ｈ５．８２　　Ｃ６１．２０　　Ｎ
９．６２ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３４００（ｍ
）、３３００（ｍ）、１７４０（ｓ）、１６３０（ｓ）
、１６００（ｓ）、１２７０（ｓ）、７０５（ｍ）　１
Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）δ（ｐｐｍ　）：０．
９−３．６（ｍ）、３．７−４．５（ｍ）、４．７−５
．３（ｍ）、６．３−７．６（ｍ）、７．６−８．７（
ｍ）上記付加体［ＳＭＡ−１０００−Ａｒｇ（ＮＯ２　
）−ＯＢｎ］３．０ｇをジメチルホルムアミド５０ｍｌ
に溶解し、これに１０％パラジウム−炭素１．０ｇを加
えて攪拌下、蟻酸アンモニウム８．０ｇを一度に加えた
後、室温にて４時間攪拌した。触媒を濾去し、濾液を濃縮後、水を加え、塩酸酸性（ｐ
Ｈ＝１）とし、析出晶を濾取し、乾燥して、白色粉末と
して１．７ｇのＳＭＡ−１０００のニトロアルギニン付
加体を得た。以下これを「　ＳＭＡ−１０００−Ａｒｇ
（ＮＯ２　）　」という。融点：３００℃以上、ＩＲスペクトル：図１４に示す。

【００４９】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図１５に示す
。１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：図１６に示す。ＵＶスペクトル：図１７に示す。セファデックスＧ−７５（ファルマシア社製）ゲル濾過
溶出パターン：図１８に示す。尚、上記ゲル濾過条件は
次の通りである。カラムサイズ：１．５径×９７ｃｍ溶出溶媒：ＰＢＳ−（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　Ｂｕｆｆｅ
ｒ　Ｓａｌｉｎｅ　、ｐＨ７．４、Ｃａ＋＋及びＭｇ＋
＋なし）ＳＭＡ−１０００−Ａｒｇ（ＮＯ２　）　：ＰＢＳ−に
懸濁し、１Ｎ−ＮａＯＨにて溶解し、５０ｍｇ／ｍｌに
調製した。その１ｍｌをカラムにアプライし、カラム壁
を溶媒で洗浄後、溶出した。マーカー：ＳＯＤＩＵＭ　ＰＯＬＹ（ＳＴＹＲＥＮＥ　
ＳＵＬＦＯＮＡＴＥ），ＭＷ＝４０００，　１６０００
，　８８０００　マーカーはそのままＰＢＳ−　に溶解
して溶出した。流速：１０分／フラクション（２．６ｍｌ）方法：　Ｓ
ＭＡ−１０００−Ａｒｇ（ＮＯ槇）　はフラクション当
り２．６ｍｌ、１０分にて分取し、日立２００型分光光
度計（ＯＤ２２０　ｎｍ）にて測定した。マーカーは３
つ混合し、ＳＭＡ−１０００−Ａｒｇ（ＮＯ２　）　と
は別に溶出した。元素分析値（％）：Ｈ５．９１　　Ｃ５７．７５　　Ｎ
１０．８７ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３４００（ｍ
）、３３００（ｍ）、１７２０（ｓ）、１６４０（ｓ）
、１６００（ｓ）、１２７０（ｓ）、７０５（ｍ）　１
Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２　Ｏ＋ＮａＯＤ）δ（ｐｐｍ　）：０
．８−２．７（ｍ）、２．７−３．２（ｍ）、３．３−
４．２（ｍ）、６．０−７．５（ｍ）１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）：δ（ｐｐｍ　）
：２４．８、２８．４、３５．０、４２．８、５２．０
、１２６．０、１２７．９、１４０．５、１６０．３、
１７２．９ＵＶ（１Ｎ　　ＮａＯＨ）λｍａｘ　（ｎｍ）：２５２
、２２４

【００５０】

【実施例４】スチレン−無水マレイン酸共重合体［一般
式（４）：ｑ＝２、ｎ＝平均８、商品名：ＳＭＡ−２０
００、ＡＲＣＯ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　社製］の４．０ｇ
をジオキサン１００ｍｌに溶解し、これにＬ−ω−ニト
ロアルギニンベンジルエステル（Ａｒｇ（ＮＯ２　）−
ＯＢｎ　）４．１ｇを加え、５時間還流した。その後、
実施例３と同様に処理して、白色粉末として７．０ｇの
付加体を得た。以下これを「　ＳＭＡ−２０００−Ａｒ
ｇ（ＮＯ２　）−ＯＢｎ」という。融点：１７５〜１９０℃、ＩＲスペクトル：図１９に示
す。

【００５１】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図２０に示す
。元素分析値（％）：Ｈ６．１４　　Ｃ６２．９５　　Ｎ
１０．７９ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３４００（ｍ
）、３３２０（ｍ）、１７４０（ｓ）、１６３０（ｓ）
、１６００（ｓ）、１２６５（ｓ）、７０５（ｓ）　１
Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）δ（ｐｐｍ　）：０．
７−２．７（ｍ）、２．８−３．７（ｍ）、３．７−４
．４（ｍ）、４．８−５．３（ｍ）、６．２−８．８（
ｍ）上記付加体［ＳＭＡ−２０００−Ａｒｇ（ＮＯ２　
）−ＯＢｎ］６．０ｇをジメチルホルムアミド１２０ｍ
ｌに溶解し、これに１０％パラジウム−炭素２．８ｇを
加えて攪拌下、蟻酸アンモニウム１５ｇを一度に加えた
後、室温にて３時間攪拌した。その後、実施例３と同様
に処理して、白色粉末として３．８ｇのＳＭＡ−２００
０のニトロアルギニン付加体（以下これを「　ＳＭＡ−
２０００−Ａｒｇ（ＮＯ２　）　」という）を得た。融点：２００〜２２０℃、ＩＲスペクトル：図２１に示
す。

【００５２】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図２２に示す
。１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：図２３に示す。元素分析値（％）：Ｈ６．１４　　Ｃ５９．０２　　Ｎ
１２．１６ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３４００（ｓ
）、３３２０（ｓ）、１７２０（ｓ）、１６４０（ｓ）
、１６０５（ｓ）、１２７０（ｓ）、７０５（ｓ）　１
Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）δ（ｐｐｍ　）：０．
７−２．６（ｍ）、２．６−３．３（ｍ）、３．３−４
．６（ｍ）、６．０−８．８（ｍ）１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）：δ（ｐｐｍ　）
：２４．８、２８．６、３４．４、４２．８、５１．９
、１２５．８、１２７．８、１４０．８、１４４．０、
１５９．３、１７２．８

【００５３】

【実施例５】スチレン−無水マレイン酸共重合体［一般
式（４）：ｑ＝３、ｎ＝平均７、商品名：ＳＭＡ−３０
００、ＡＲＣＯ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　社製］の５．４ｇ
をジオキサン１００ｍｌに溶解し、これにＬ−ω−ニト
ロアルギニンベンジルエステル（Ａｒｇ（ＮＯ２　）−
ＯＢｎ　）４．１ｇを加え、５時間還流した。その後、
実施例３と同様に処理して、白色粉末として７．８ｇの
付加体を得た。以下これを「　ＳＭＡ−３０００−Ａｒ
ｇ（ＮＯ２　）−ＯＢｎ」という。融点：１８０〜１９０℃、ＩＲスペクトル：図２４に示
す。

【００５４】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図２５に示す
。元素分析値（％）：Ｈ６．４０　　Ｃ６６．６３　　Ｎ
９．１１ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３４００（ｍ
）、３３３０（ｍ）、１７４０（ｓ）、１６３０（ｓ）
、１６００（ｓ）、１４５０（ｓ）、１２６５（ｓ）、
７０５（ｓ）　１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）δ（ｐｐｍ　）：
０．９−２．６（ｍ）、２．８−３．３（ｍ）、３．７
−４．４（ｍ）、４．８−５．３（ｍ）、６．３−７．
５（ｍ）、７．６−８．７（ｍ）上記付加体［ＳＭＡ−３０００−Ａｒｇ（ＮＯ２　）−
ＯＢｎ］６．５ｇをジメチルホルムアミド１２０ｍｌに
溶解し、これに１０％パラジウム−炭素３．０ｇを加え
て攪拌下、蟻酸アンモニウム１５ｇを一度に加えた後、
室温にて３時間攪拌した。その後、実施例３と同様に処
理して、白色粉末として３．９ｇのＳＭＡ−３０００の
ニトロアルギニン付加体（以下これを「　ＳＭＡ−３０
００−Ａｒｇ（ＮＯ２　）　」という）を得た。融点：２００〜２２０℃、ＩＲスペクトル：図２６に示
す。

【００５５】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図２７に示す
。１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：図２８に示す。元素分析値（％）：Ｈ６．４２　　Ｃ６４．１０　　Ｎ
１０．４２ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３４００（ｍ
）、３３２０（ｍ）、１７２０（ｓ）、１６３５（ｓ）
、１６０５（ｓ）、１２７０（ｓ）、７０５（ｓ）　１
Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）δ（ｐｐｍ　）：０．
８−２．７（ｍ）、２．７−３．４（ｍ）、３．４−４
．５（ｍ）、４．６−５．２（ｍ）、６．０−７．６（
ｍ）、７．６−８．８（ｍ）１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）：δ（ｐｐｍ　）
：２４．８、２８．３、３４．３、４２．８、５１．６
、１２５．５、１２７．８、１４２．０、１４４．０、
１５９．３、１７２．６

【００５６】

【実施例６】ＳＭＡ−１０００の１．８ｇとＬ−ω−ｐ
−トルエンスルホニルアルギニンベンジルエステル（Ａ
ｒｇ（ｐ−Ｔｓ）−ＯＢｎ　）５．２ｇとをジオキサン
１００ｍｌに溶解し、４時間還流した。溶媒を留去し、
残渣にジエチルエーテルを加えて結晶化後、結晶を濾取
し、乾燥して、白色粉末として６．３ｇの付加体を得た
。以下これを「ＳＭＡ−１０００−Ａｒｇ（ｐ−Ｔｓ）
−ＯＢｎ」という。融点：１４０〜１５５℃、ＩＲスペクトル：図２９に示
す。

【００５７】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図３０に示す
。元素分析値（％）：Ｈ５．９２　　Ｃ６１．７０　　Ｎ
８．２６ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３４００（ｍ
）、３３３０（ｍ）、１７５０（ｓ）、１６４０（ｓ）
、１５６５（ｓ）、１２８０（ｍ）、１１９０（ｍ）、
１１５０（ｓ）、７１０（ｍ）　１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）δ（ｐｐｍ　）：
０．９−２．２（ｍ）、２．３（ｓ）、２．４−３．３
（ｍ）、３．６−４．５（ｍ）、４．８−５．３（ｍ）
、６．２−７．５（ｍ）、７．５−７．８（ｍ）上記付
加体［ＳＭＡ−１０００−Ａｒｇ（ｐ−Ｔｓ）−ＯＢｎ
］の５．０ｇをトリフルオロ酢酸５０ｍｌに溶解し、氷
冷下にこれにチオアニソール７．０ｇ及びトリフルオロ
メタンスルホン酸８．５ｇを加え、同温度にて１時間、
次いで室温にて２時間攪拌した。反応液にジエチルエー
テルを加えて析出晶を濾取した。得られた粗結晶を水酸
化ナトリウム水溶液に懸濁させ、１Ｎ−ＨＣｌでｐＨ＝
５とし、攪拌後、結晶を濾取し、水洗し、乾燥して、白
色粉末として２．９ｇのアルギニン付加体を得た。以下
これを「ＳＭＡ−１０００−Ａｒｇ」という。融点：３００℃以上、ＩＲスペクトル：図３１に示す。

【００５８】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図３２に示す
。元素分析値（％）：Ｈ５．５０　　Ｃ５２．７２　　Ｎ
９．４２ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３４００（ｓ
）、１６６０（ｓ）　１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）δ（ｐｐｍ　）：
０．８−２．４（ｍ）、２．４−４．５（ｍ）、６．２
−８．０（ｍ）

【００５９】

【実施例７】ＳＭＡ−２０００の２．８ｇとＡｒｇ（ｐ
−Ｔｓ）−ＯＢｎ　５．２ｇとを用いて、実施例６と同
様にして、白色粉末として６．８ｇの付加体を得た。以
下これを「ＳＭＡ−２０００−Ａｒｇ（ｐ−Ｔｓ）−Ｏ
Ｂｎ」という。融点：１４０〜１５５℃、ＩＲスペクトル：図３３に示
す。

【００６０】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図３４に示す
。元素分析値（％）：Ｈ６．０７　　Ｃ６５．１４　　Ｎ
７．１４ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３４００（ｍ
）、３３００（ｍ）、１７６０（ｓ）、１６４０（ｓ）
、１５７０（ｓ）、１２８０（ｍ）、１１９０（ｍ）、
１１５５（ｓ）、７１０（ｓ）　１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）δ（ｐｐｍ　）：
０．９−２．２（ｍ）、２．３（ｓ）、２．４−３．２
（ｍ）、３．８−４．４（ｍ）、４．８−５．３（ｍ）
、６．２−７．４（ｍ）、７．５−７．８（ｍ）上記付
加体［ＳＭＡ−２０００−Ａｒｇ（ｐ−Ｔｓ）−ＯＢｎ
］５．５ｇをトリフルオロ酢酸５５ｍｌに溶解し、これ
にチオアニソール６．６ｇ及びトリフルオロメタンスル
ホン酸８．０ｇを加え、以下、実施例６と同様に処理す
ることにより、白色粉末として３．４ｇの付加体を得た
。以下これを「ＳＭＡ−２０００−Ａｒｇ」という。融点：３００℃以上、ＩＲスペクトル：図３５に示す。

【００６１】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図３６に示す
。元素分析値（％）：Ｈ６．１５　　Ｃ６１．０４　　Ｎ
８．３７ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３３７０（ｓ
）、１６６５（ｓ）、７０５（ｓ）　１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）δ（ｐｐｍ　）：
０．７−２．４（ｍ）、２．４−４．５（ｍ）、６．０
−８．２（ｍ）

【００６２】

【実施例８】ＳＭＡ−３０００の３．８ｇとＡｒｇ（ｐ
−Ｔｓ）−ＯＢｎ　５．２ｇとを用いて、実施例６と同
様にして、白色粉末として７．５ｇの付加体を得た。以
下これを「ＳＭＡ−３０００−Ａｒｇ（ｐ−Ｔｓ）−Ｏ
Ｂｎ」という。融点：１４０〜１５５℃、ＩＲスペクト
ル：図３７に示す。

【００６３】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図３８に示す
。元素分析値（％）：Ｈ６．２８　　Ｃ６７．８９　　Ｎ
６．３８ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３３８０（ｍ
）、３３００（ｍ）、１７６０（ｓ）、１６４５（ｓ）
、１５７５（ｓ）、１２８０（ｓ）、１１９０（ｓ）、
７１５（ｓ）　１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）δ（ｐｐｍ　）：
０．９−２．２（ｍ）、２．３（ｓ）、２．４−３．５
（ｍ）、３．７−４．６（ｍ）、４．８−５．３（ｍ）
、６．１−７．４（ｍ）、７．５−７．８（ｍ）上記付
加体［ＳＭＡ−３０００−Ａｒｇ（ｐ−Ｔｓ）−ＯＢｎ
］６．３ｇをトリフルオロ酢酸６０ｍｌに溶解し、これ
とチオアニソール６．３ｇ及びトリフルオロメタンスル
ホン酸７．６ｇとを用いて、実施例６と同様に処理する
ことにより、白色粉末として４．３ｇの付加体を得た。以下これを「ＳＭＡ−３０００−Ａｒｇ」という。融点：３００℃以上、ＩＲスペクトル：図３９に示す。

【００６４】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図４０に示す
。元素分析値（％）：Ｈ６．１５　　Ｃ６２．５１　　Ｎ
７．２２ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３３
５０（ｓ）、１６７０（ｓ）、７０５（ｓ）　１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）δ（ｐｐｍ　）：
０．７−２．７（ｍ）、２．７−４．４（ｍ）、６．０
−８．２（ｍ）

【００６５】

【実施例９】実施例３と同様にして得られた　ＳＭＡ−
１０００−Ａｒｇ（ＮＯ２　）　の５ｇを５０ｍｌのＰ
ＢＳ−に懸濁させ、これに１Ｎ　　ＮａＯＨを１５．５
ｍｌ加えて溶解させ、ＰＢＳ−で１００ｍｌにメスアッ
プした（ｐＨ７．２）。これをセファデックスＧ−７５
（ファルマシア社製）を詰めたカラムサイズ１３径×９
５ｃｍのカラムにアプライし、ＰＢＳ−にて溶出した。流速は１０分／フラクション（２２５ｍｌ）とし、各フ
ラクションは、日立２００型分光光度計（ＯＤ２２０　
ｎｍ）にて測定した。之等のフラクションの内、活性フ
ラクションＮｏ．４３〜５２（液量２３４０ｍｌ）を集
めた。図４１にこの時のゲル濾過溶出パターンと分取し
たフラクションの範囲を示す。集めたフラクションは１
ＮＨＣｌを滴下してｐＨを３．５とし、沈殿物を１００
００ｒｐｍ　で１０分間遠心して集め、水：エタノール
＝１：１で洗浄後、乾燥することにより、白色粉末１．
１ｇを得た。以下これを「　ＳＭＡ−１０００−Ａｒｇ
（ＮＯ２　）−Ｆｒ．Ａ」という。融点：２３０〜３００℃（発泡）、ＩＲスペクトル：図
４２に示す。

【００６６】　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：図４３に示す
。１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：図４４に示す。ＵＶスペクトル：図４５に示す。セファデックスＧ−７５（ファルマシア社製）ゲル濾過
溶出パターン：図４６に示す。

【００６７】尚、上記のゲル濾過条件は実施例３に記し
た方法に準じて、カラムサイズ２．５径×４６ｃｍ、流
速１０分／フラクション（３．２ｍｌ）とした。また、
「　ＳＭＡ−１０００−Ａｒｇ（ＮＯ２　）−Ｆｒ．Ａ
」は、５０ｍｇ／ｍｌを１ｍｌアプライし、溶出した。別に対照として「　ＳＭＡ−１０００−Ａｒｇ（ＮＯ２
　）　」を同様にして５０ｍｇ／ｍｌを１．１ｍｌアプ
ライし溶出した。元素分析値（％）：Ｈ５．６７　　Ｃ５１．７８　　Ｎ
１３．６０ＩＲ（ＫＢｒ）νｍａｘ　（ｃｍ−１）：３４００（ｍ
）、３３００（ｍ）、１７２０（ｓ）、１６３０（ｓ）
、１６００（ｓ）、１２７０（ｓ）、７００（ｍ）　１
Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２　Ｏ＋ＮａＯＤ）δ（ｐｐｍ　）：０
．８−２．７（ｍ）、２．７−３．２（ｍ）、３．３−
４．２（ｍ）、６．０−７．５（ｍ）１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６　）δ（ｐｐｍ　）：
２４．６、２７．３、２８．５、３５．０、４３．０、
５２．０、１２６．０、１２７．８、１２８．３、１４
０．５、１５９．２、１７３．０ＵＶ（１Ｎ　　ＮａＯＨ）λｍａｘ　（ｎｍ）：２４６
、２２１

【００６８】薬理試験例Ｉ〈血管新生阻害作用試験〉（１）培養内皮細胞（Ｆｅｔａｌ　ｂｏｖｉｎｅ　ｈｅ
ａｒｔ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃ
ｅｌｌ，　ＦＢＨＥ　）の調製ＦＢＨＥは、ＡＴＣＣか
ら購入したものを、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ，　Ｆ
ａｔａｌ　ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　）を添加したダ
ルベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥ、　Ｄｕｌｂｅｃｃ
ｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｍｅｄｉｕｍ
，日水製薬社製）に、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ、Ｆ
ｉｂｒｏｂｌａｓｔ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ，　
Ｒ＆Ｄ社製）４ｎｇ／ｍｌを加えた培養液で継代培養維
持して利用した。

【００６９】実験開始２日前に培養液からＦＧＦを抜き
、上記１０％ＦＢＳ加ＤＭＥで培養し、実験開始時に、
まず培養液を抜取り、そこにリン酸緩衝生理食塩水溶液
（ＰＢＳ（−）　，　Ｐｏｓｐｈｓａｔｅ　　ｂｕｆｆ
ｅｒ　ｓａｌｉｎｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ，　日水製薬社
製）を加え軽くリンスした。次にそのＰＢＳ（−）　を
抜取り、続いて０．１％ＥＤＴＡ−０．２％トリプシン
溶液を適宜加えて軽くリンスした後、抜取り、細胞を剥
がした。剥がした細胞を１０％ＦＢＳ加ＤＭＥを加えて
よくピペッティングした後、遠心管に移し、遠心（１２
００ｒｐｍ　、５分間）洗浄した。

【００７０】生細胞数は、トリパンブルーにて死細胞を
染色し差引いて、血球計算板を用いてカウントした。細
胞濃度は３×１０３　細胞／ウェルとなるように１０％
ＦＢＳ加ＤＭＥにて調製した。かくして細胞懸濁液を調
製した。（２）供試薬物の調製供試化合物は、ナトリウム塩として生理食塩水に溶解さ
せた後、１０％ＦＢＳ加ＤＭＥで希釈して用いた。

【００７１】供試薬物濃度は、１０μｇ／ｍｌ又は１０
０μｇ／ｍｌから段階的に倍々希釈して用いた。（３）実験操作次の手順で行なった。即ち、まず９６穴マルチプレート
（コーニング社製）に５０μｌずつ１０％ＦＢＳ加ＤＭ
Ｅを入れ、次に最終最高濃度が１０μｇ／ｍｌになるよ
うに調製した供試薬物溶液５０μｌを最高濃度のウェル
に入れ、そこから段階的にプレート上で希釈を行なった
。更に５０μｌのＦＧＦ（２ｎｇ／ｍｌ）を各ウェルに加
え、最後に細胞懸濁液を１００μｌずつ加えた（ＦＧＦ
の最終濃度１．０ｎｇ／ｍｌ）。以上の操作で作成した
プレートを炭酸ガスインキュベーター内で３日間培養し
た。

【００７２】培養３日目に各ウェルにニュートラルレッ
ドを加え、２時間炭酸ガスインキュベーターに入れ、細
胞に色素を取込ませた。色素を取込ませた後、ウェルに
１％グルタールアルデヒドを５０μｌずつ加えて室温で
１５分間固定した。生理食塩水で２回洗浄し、最後にア
シッドアルコール（０．１モルリン酸１ナトリウム水溶
液とエタノールとの１：１混合液）を１００μｌずつウ
ェルに加え、取込ませた色素を溶出させ、その吸光度を
吸光度計（波長５４０ｎｍ）　で測定した。（４）効果判定とＩＣ５０値の測定ＦＧＦ添加及びＦＧＦ無添加（正常状態）のそれぞれに
ついて、各希釈倍率の供試薬物を用いて、上記（３）に
従い測定された吸光度値をグラフにプロットし、該グラ
フから培養内皮細胞（ＦＢＨＥ）の増殖を５０％抑制す
る供試薬物濃度を求め、これをＩＣ５０値とした。

【００７３】上記で求められたＩＣ５０値（μｇ／ｍｌ
）が０．３以下を＋＋＋＋、０．３〜１を＋＋＋、１〜
１０を＋＋、１０〜１００を＋及び１００以上を−とし
て効力評価し、得られた結果を下記第１表に示す。

【００７４】

【表１】

【００７５】第１表より、本発明のリジン及びアルギニ
ン誘導体は、いずれも高活性且つ高選択性を示すことが
判る。

【００７６】以上のことから、本発明化合物は血管新生
を伴う癌や腫瘍、リウマチ性関節炎、糖尿病性網膜症、
未熟児網膜症、老人性黄斑部変性、創傷時の過剰瘢痕形
成等に対しても血管新生の抑制による治癒と副作用の少
ないことが判る。

【００７７】

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１で得られた本発明誘導体のＩＲスペク
トル図である。

【図２】実施例１で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトル図である。

【図３】実施例１で得られた本発明誘導体のＩＲスペク
トル図である。

【図４】実施例１で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトル図である。

【図５】実施例１で得られた本発明誘導体の１３Ｃ−Ｎ
ＭＲスペクトル図である。

【図６】実施例１で得られた本発明誘導体のＵＶスペク
トル図である。

【図７】実施例２で得られた本発明誘導体のＩＲスペク
トル図である。

【図８】実施例２で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトル図である。

【図９】実施例２で得られた本発明誘導体のＩＲスペク
トル図である。

【図１０】実施例２で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図１１】実施例２で得られた本発明誘導体のＵＶスペ
クトル図である。

【図１２】実施例３で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図１３】実施例３で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図１４】実施例３で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図１５】実施例３で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図１６】実施例３で得られた本発明誘導体の１３Ｃ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図１７】実施例３で得られた本発明誘導体のＵＶスペ
クトル図である。

【図１８】実施例３に従うゲル濾過溶出パターンを示す
図である。

【図１９】実施例４で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図２０】実施例４で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図２１】実施例４で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図２２】実施例４で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図２３】実施例４で得られた本発明誘導体の１３Ｃ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図２４】実施例５で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図２５】実施例５で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図２６】実施例５で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図２７】実施例５で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図２８】実施例５で得られた本発明誘導体の１３Ｃ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図２９】実施例６で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図３０】実施例６で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図３１】実施例６で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図３２】実施例６で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図３３】実施例７で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図３４】実施例７で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図３５】実施例７で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図３６】実施例７で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図３７】実施例８で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図３８】実施例８で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図３９】実施例８で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図４０】実施例８で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図４１】実施例９に従う本発明誘導体分取のためのゲ
ル濾過溶出パターンと分取範囲を示す図である。

【図４２】実施例９で得られた本発明誘導体のＩＲスペ
クトル図である。

【図４３】実施例９で得られた本発明誘導体の　１Ｈ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図４４】実施例９で得られた本発明誘導体の１３Ｃ−
ＮＭＲスペクトル図である。

【図４５】実施例９で得られた本発明誘導体のＵＶスペ
クトル図である。

【図４６】実施例９に従う本発明誘導体分取のためのゲ
ル濾過溶出パターンを示す図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】　　一般式【化１】で表わされる構造単位と一般式【化２】〔各式中、ｌ及びｍはそれぞれ１〜５の整数を示し、ｐ
は３又は４を示し、Ｒ１　はアミノ基、基【化３】又は基【化４】を示す。〕で表わされる構造単位とを含有し、分子量が２０００〜
２００００の範囲にある共重合体であることを特徴とす
るリジン又はアルギニン誘導体。
【請求項２】　　一般式【化５】で表わされる構造単位、一般式【化６】で表わされる構造単位及び一般式【化７】〔各式中、ｌ及びｍはそれぞれ１〜５の整数を示す。〕
で表わされる構造単位を有し、分子量が２０００〜２０
０００の範囲にある共重合体であることを特徴とするリ
ジン又はアルギニン誘導体。