JPH10174596A - ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法 - Google Patents
ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法Info
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- JPH10174596A JPH10174596A JP35401596A JP35401596A JPH10174596A JP H10174596 A JPH10174596 A JP H10174596A JP 35401596 A JP35401596 A JP 35401596A JP 35401596 A JP35401596 A JP 35401596A JP H10174596 A JPH10174596 A JP H10174596A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ε−ポリ−Ｌ−リジンの生産性を向上させる
製造法。 【解決手段】 ε−ポリ−Ｌ−リジンを発酵生産するス
トレプトマイセス属微生物を用いて、ε−ポリ−Ｌ−リ
ジンを発酵生産する際に、ε−ポリ−Ｌ−リジン生産期
における培養液中の残存炭素源濃度を５０ｇ／ｌ以下の
低濃度に制限して培養するε−ポリ−Ｌ−リジンの製造
法。 【効果】 公知方法と比較して対炭素源収率が１．７〜
１．９倍に向上した。
製造法。 【解決手段】 ε−ポリ−Ｌ−リジンを発酵生産するス
トレプトマイセス属微生物を用いて、ε−ポリ−Ｌ−リ
ジンを発酵生産する際に、ε−ポリ−Ｌ−リジン生産期
における培養液中の残存炭素源濃度を５０ｇ／ｌ以下の
低濃度に制限して培養するε−ポリ−Ｌ−リジンの製造
法。 【効果】 公知方法と比較して対炭素源収率が１．７〜
１．９倍に向上した。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ε−ポリ−Ｌ−リ
ジン（以下εＰＬという）の製造法に関する。当該物質
は、必須アミノ酸であるＬ−リジンのポリマーであるた
め安全性が高くかつカチオン含量が高いので、特異な物
性を有する。したがってトイレタリー用品、化粧品、飼
料添加物、医薬、農薬、食品添加物、電子材料等の用途
が期待できる。特に食品添加物の分野では、天然系の添
加物として大きく注目されている。
ジン（以下εＰＬという）の製造法に関する。当該物質
は、必須アミノ酸であるＬ−リジンのポリマーであるた
め安全性が高くかつカチオン含量が高いので、特異な物
性を有する。したがってトイレタリー用品、化粧品、飼
料添加物、医薬、農薬、食品添加物、電子材料等の用途
が期待できる。特に食品添加物の分野では、天然系の添
加物として大きく注目されている。
【０００２】
【従来の技術とその問題点】ストレプトマイセス・アル
ブラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ）
種微生物を用いたεＰＬの製造法が特公昭５９−２０３
５９号公報に、ストレプトマイセス・アルブラス・サブ
スピーシズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐｕｔｏｍｙ
ｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ｓｕｂｓｐ．ｌｙｓｉｎｏｐ
ｏｌｙｍｅｒｕｓ）菌株をＬ−リジンのアナログ物質に
耐性を有する変異株に変異処理して得られた該変異株を
培地に培養し、培養液中にεＰＬを生成蓄積せしめ、こ
れを採取することを特徴とするεＰＬの製造法が特公平
３−７８９９８号公報に、またストレプトマイセス・ア
ルブラス・サブスピーシズ・リジノポリメラス菌株のε
ＰＬの生産に関与する遺伝子を含むプラスミドをクロラ
ムフェニコールを用いて増幅させ、得られた菌株をＬ−
リジンを添加した培地にて培養し、培養液中に生成蓄積
したεＰＬを採取することを特徴とするεＰＬの製造法
が特公平３−４２０７５号公報にそれぞれ記載されてい
る。しかし、これらのεＰＬ製造法は、菌株を特徴とし
たものである。ただしεＰＬ製造の際の培地中の炭素源
（グルコース）濃度は５０ｇ／ｌと記載されており、ま
た培養中に添加する炭素源（グルコース）濃度も５０ｇ
／ｌと記載されている。したがって、従来の培養法は、
炭素源（グルコース）の残存濃度が低下したら、５０ｇ
／ｌの炭素源（グルコース）を添加する方法で行ってお
り、特に炭素源を低濃度にした検討は行われていない。
これらの方法ではεＰＬ製造の際の対炭素源収率（対炭
素源収率＝εＰＬ生産量／炭素源使用量×１００で表さ
れる）が低いため原料使用量が多くなり、工業的に安価
なεＰＬの製造が困難であるという問題点があった。ま
た、培地中のリン酸濃度を制限し、かつ培地中にＬ−リ
ジン及び硫酸アンモニウムを含有させることを特徴とす
るεＰＬの製造法が特開平８−１６３９９２号公報に記
載されている。ただし、ここで記載の方法はεＰＬのモ
ノマーであるＬ−リジンを主原料としてεＰＬを生産す
る方法であり（Ｌ−リジンは炭素源としてεＰＬ生産菌
には資化されない）、グルコース等の炭素源及び硫酸ア
ンモニウム等の窒素源のみを原料としてεＰＬを発酵生
産する方法とは根本的に異なるものである。また、ここ
に記載の方法では、Ｌ−リジンを原料として収率を向上
させているが、εＰＬの生産量が少ないため、未だ安価
なεＰＬの製造が困難であるという問題点があった。
ブラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ）
種微生物を用いたεＰＬの製造法が特公昭５９−２０３
５９号公報に、ストレプトマイセス・アルブラス・サブ
スピーシズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐｕｔｏｍｙ
ｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ｓｕｂｓｐ．ｌｙｓｉｎｏｐ
ｏｌｙｍｅｒｕｓ）菌株をＬ−リジンのアナログ物質に
耐性を有する変異株に変異処理して得られた該変異株を
培地に培養し、培養液中にεＰＬを生成蓄積せしめ、こ
れを採取することを特徴とするεＰＬの製造法が特公平
３−７８９９８号公報に、またストレプトマイセス・ア
ルブラス・サブスピーシズ・リジノポリメラス菌株のε
ＰＬの生産に関与する遺伝子を含むプラスミドをクロラ
ムフェニコールを用いて増幅させ、得られた菌株をＬ−
リジンを添加した培地にて培養し、培養液中に生成蓄積
したεＰＬを採取することを特徴とするεＰＬの製造法
が特公平３−４２０７５号公報にそれぞれ記載されてい
る。しかし、これらのεＰＬ製造法は、菌株を特徴とし
たものである。ただしεＰＬ製造の際の培地中の炭素源
（グルコース）濃度は５０ｇ／ｌと記載されており、ま
た培養中に添加する炭素源（グルコース）濃度も５０ｇ
／ｌと記載されている。したがって、従来の培養法は、
炭素源（グルコース）の残存濃度が低下したら、５０ｇ
／ｌの炭素源（グルコース）を添加する方法で行ってお
り、特に炭素源を低濃度にした検討は行われていない。
これらの方法ではεＰＬ製造の際の対炭素源収率（対炭
素源収率＝εＰＬ生産量／炭素源使用量×１００で表さ
れる）が低いため原料使用量が多くなり、工業的に安価
なεＰＬの製造が困難であるという問題点があった。ま
た、培地中のリン酸濃度を制限し、かつ培地中にＬ−リ
ジン及び硫酸アンモニウムを含有させることを特徴とす
るεＰＬの製造法が特開平８−１６３９９２号公報に記
載されている。ただし、ここで記載の方法はεＰＬのモ
ノマーであるＬ−リジンを主原料としてεＰＬを生産す
る方法であり（Ｌ−リジンは炭素源としてεＰＬ生産菌
には資化されない）、グルコース等の炭素源及び硫酸ア
ンモニウム等の窒素源のみを原料としてεＰＬを発酵生
産する方法とは根本的に異なるものである。また、ここ
に記載の方法では、Ｌ−リジンを原料として収率を向上
させているが、εＰＬの生産量が少ないため、未だ安価
なεＰＬの製造が困難であるという問題点があった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、εＰＬ
の製造法について鋭意検討を重ねた結果、εＰＬ生産能
を有するストレプトマイセス属微生物を培養する際に、
培養液中の残存炭素源濃度をεＰＬ生産期には５０ｇ／
ｌ未満、特に２０ｇ／ｌ未満に維持することにより、ε
ＰＬ生産の際の対炭素源収率が増大することを見いだ
し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。以
上の記述から明らかなように、本発明の目的は、εＰＬ
の生産における対炭素源収率を増大させ、安価で有利な
εＰＬ製造法を提供することである。
の製造法について鋭意検討を重ねた結果、εＰＬ生産能
を有するストレプトマイセス属微生物を培養する際に、
培養液中の残存炭素源濃度をεＰＬ生産期には５０ｇ／
ｌ未満、特に２０ｇ／ｌ未満に維持することにより、ε
ＰＬ生産の際の対炭素源収率が増大することを見いだ
し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。以
上の記述から明らかなように、本発明の目的は、εＰＬ
の生産における対炭素源収率を増大させ、安価で有利な
εＰＬ製造法を提供することである。
【０００４】本発明は下記の構成を有する。 （１）ε−ポリ−Ｌ−リジンを発酵生産するストレプト
マイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属微生物を好気
的に培地で培養し、得られた培養液からε−ポリ−Ｌ−
リジンを採取する方法において、ε−ポリ−Ｌ−リジン
生産期における培養液中の残存炭素源濃度５０ｇ／ｌ未
満１ｇ／ｌ以上で培養することを特徴とするε−ポリ−
Ｌ−リジンの製造法。
マイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属微生物を好気
的に培地で培養し、得られた培養液からε−ポリ−Ｌ−
リジンを採取する方法において、ε−ポリ−Ｌ−リジン
生産期における培養液中の残存炭素源濃度５０ｇ／ｌ未
満１ｇ／ｌ以上で培養することを特徴とするε−ポリ−
Ｌ−リジンの製造法。
【０００５】（２）残存炭素源濃度２０〜１ｇ／ｌで培
養することを特徴とする前記（１）に記載の製造法。
養することを特徴とする前記（１）に記載の製造法。
【０００６】（３）残存炭素源濃度１０〜１ｇ／ｌで培
養することを特徴とする前記（１）に記載の製造法。
養することを特徴とする前記（１）に記載の製造法。
【０００７】本発明の構成と効果につき以下に詳述す
る。本発明に使用できる微生物は、εＰＬを生産する能
力のあるストレプトマイセス属微生物であればいずれで
も使用可能であるが、特にストレプトマイセス・アルブ
ラス種微生物が望ましい。かかるストレプトマイセス・
アルブラス種微生物の具体的な例としては、ストレプト
マイセス・アルブラス・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ｓｕｂｓｐ．ｌｙｓ
ｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）Ｂ２１０２１株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１５１９３）があげられる。
る。本発明に使用できる微生物は、εＰＬを生産する能
力のあるストレプトマイセス属微生物であればいずれで
も使用可能であるが、特にストレプトマイセス・アルブ
ラス種微生物が望ましい。かかるストレプトマイセス・
アルブラス種微生物の具体的な例としては、ストレプト
マイセス・アルブラス・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ｓｕｂｓｐ．ｌｙｓ
ｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）Ｂ２１０２１株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１５１９３）があげられる。
【０００８】本発明において、εＰＬ生産期に維持する
培養液中の残存炭素源濃度は５０ｇ／ｌ未満であるが、
好ましくは２０ｇ／ｌ〜１ｇ／ｌであり、さらに好まし
くは１０ｇ／ｌ〜１ｇ／ｌである。培養開始時の培地中
の炭素源濃度は通常５０ｇ／ｌであるが、培養開始後菌
体の増殖と共に残存炭素源濃度は比較的急速に低下す
る。残存炭素源濃度が低下しεＰＬ生産期に入った後
に、残存炭素源濃度濃度が５０ｇ／ｌを超えないように
炭素源を連続にあるいは逐次添加する。ただし、炭素源
が完全に消費つくされてしまうとεＰＬの生産も停止し
てしまうため、常に炭素源が培養液中に残存するように
維持する。炭素源としては、グルコース、フラクトー
ス、グリセリン、スターチ、ガラクトース、マンニトー
ル、イノシトール、サリシン等のεＰＬ生産菌が資化可
能なものならいずれも使用できる。
培養液中の残存炭素源濃度は５０ｇ／ｌ未満であるが、
好ましくは２０ｇ／ｌ〜１ｇ／ｌであり、さらに好まし
くは１０ｇ／ｌ〜１ｇ／ｌである。培養開始時の培地中
の炭素源濃度は通常５０ｇ／ｌであるが、培養開始後菌
体の増殖と共に残存炭素源濃度は比較的急速に低下す
る。残存炭素源濃度が低下しεＰＬ生産期に入った後
に、残存炭素源濃度濃度が５０ｇ／ｌを超えないように
炭素源を連続にあるいは逐次添加する。ただし、炭素源
が完全に消費つくされてしまうとεＰＬの生産も停止し
てしまうため、常に炭素源が培養液中に残存するように
維持する。炭素源としては、グルコース、フラクトー
ス、グリセリン、スターチ、ガラクトース、マンニトー
ル、イノシトール、サリシン等のεＰＬ生産菌が資化可
能なものならいずれも使用できる。
【０００９】本発明に使用する培地としては、炭素源の
他に窒素源、無機物及びその他栄養物を所要量含有する
培地ならばいずれも使用できる。窒素源としては、ペプ
トン、カゼイン加水分解物、無機アンモニウム塩等いず
れでもかまわないが、好ましくは硫酸アンモニウムであ
る。窒素源の含有量は、２〜２０ｇ／ｌが好ましい。窒
素源濃度もεＰＬの生産とともに低下するため、窒素源
物質を連続添加あるいは逐次添加する。無機物としては
リン酸イオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、
亜鉛イオン、鉄イオン、マンガンイオン、ナトリウムイ
オン等が挙げられる。これらの各イオンの濃度は限定さ
れないが、通常０．０１〜１ｇ／１である。また酵母エ
キスを１〜５ｇ／ｌ含有させることは、菌の生育を良く
し、εＰＬの生産においても好ましい結果を与える。
他に窒素源、無機物及びその他栄養物を所要量含有する
培地ならばいずれも使用できる。窒素源としては、ペプ
トン、カゼイン加水分解物、無機アンモニウム塩等いず
れでもかまわないが、好ましくは硫酸アンモニウムであ
る。窒素源の含有量は、２〜２０ｇ／ｌが好ましい。窒
素源濃度もεＰＬの生産とともに低下するため、窒素源
物質を連続添加あるいは逐次添加する。無機物としては
リン酸イオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、
亜鉛イオン、鉄イオン、マンガンイオン、ナトリウムイ
オン等が挙げられる。これらの各イオンの濃度は限定さ
れないが、通常０．０１〜１ｇ／１である。また酵母エ
キスを１〜５ｇ／ｌ含有させることは、菌の生育を良く
し、εＰＬの生産においても好ましい結果を与える。
【００１０】本発明の培養は、好気的条件下で振とう培
養、撹拌培養等で行う。培養温度は２５〜３０℃が好ま
しい。培地のｐＨは中性付近（ｐＨ６〜８）が好ましい
が、培養開始後菌の生育とともにｐＨは低下する。ｐＨ
が４まで低下した時点で、アルカリを添加してｐＨを４
に維持させる。添加するアルカリはアンモニア水が好ま
しいが、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等でも差し
支えない。通常１〜７日間でεＰＬは培養液中に蓄積さ
れる。
養、撹拌培養等で行う。培養温度は２５〜３０℃が好ま
しい。培地のｐＨは中性付近（ｐＨ６〜８）が好ましい
が、培養開始後菌の生育とともにｐＨは低下する。ｐＨ
が４まで低下した時点で、アルカリを添加してｐＨを４
に維持させる。添加するアルカリはアンモニア水が好ま
しいが、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等でも差し
支えない。通常１〜７日間でεＰＬは培養液中に蓄積さ
れる。
【００１１】本発明に係る目的物の収得は、上記培養液
から遠心分離あるいはフィルターで菌体を除いた後、菌
体除去液を精製、脱色し、これを濃縮する。濃縮液から
アセトン、エタノール等の有機溶媒で晶析することによ
り、目的のεＰＬが得られる。
から遠心分離あるいはフィルターで菌体を除いた後、菌
体除去液を精製、脱色し、これを濃縮する。濃縮液から
アセトン、エタノール等の有機溶媒で晶析することによ
り、目的のεＰＬが得られる。
【００１２】
【実施例】本発明を実施例により更に詳細に説明する。
なお、培養液中のεＰＬ濃度は、イツアキ（Ｉｔｚｈａ
ｋｉ）：アナリティカルバイオケミストリー（Ａｎａｌ
ｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），５０，５
６９，１９７２の方法により測定した。すなわち、培養
液を遠心分離して菌体を除いた後、上澄液（εＰＬ: ０
〜２００μｇ）２ｍｌと１ｍＭメチルオレンジ水溶液２
ｍｌとを混合し、室温で３０分放置後、生じたεＰＬ−
メチルオレンジコンプレックスを遠心分離で除き、その
上澄水の４６５ｎｍにおける吸光度を測定し、εＰＬ量
を求めた。また、実施例中の％は特に断らない限り、重
量（ｇ）／容量（ｄｌ）％である。
なお、培養液中のεＰＬ濃度は、イツアキ（Ｉｔｚｈａ
ｋｉ）：アナリティカルバイオケミストリー（Ａｎａｌ
ｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），５０，５
６９，１９７２の方法により測定した。すなわち、培養
液を遠心分離して菌体を除いた後、上澄液（εＰＬ: ０
〜２００μｇ）２ｍｌと１ｍＭメチルオレンジ水溶液２
ｍｌとを混合し、室温で３０分放置後、生じたεＰＬ−
メチルオレンジコンプレックスを遠心分離で除き、その
上澄水の４６５ｎｍにおける吸光度を測定し、εＰＬ量
を求めた。また、実施例中の％は特に断らない限り、重
量（ｇ）／容量（ｄｌ）％である。
【００１３】実施例１ グルコ−ス５％（５０ｇ／ｌ）、酵母エキス０．５％、
硫酸アンモニウム１％、Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．０８％、ＫＨ
2 ＰＯ4 ０．１３６％、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．０５
％、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．００４％、ＦｅＳＯ4 ・
７Ｈ2 Ｏ０．００３％、ｐＨ６．８に調製した２ｌの培
地を３ｌ容ジャーに入れ、ストレプトマイセス・アルブ
ラス・サブスピーシズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ｓｕｂｓｐ．ｌｙｓ
ｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）Ｂ２１０２１株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１５１９３号）の前培養液１００ｍｌを接種し、
３０℃、７００ｒｐｍ、通気量３ｌ／min.で１６８時間
好気培養を行った。ただし、グルコース濃度については
５０ｇ／ｌで培養を開始し、培養開始後残存グルコース
濃度が１０ｇ／ｌ以下に低下しεＰＬ生産期に入ったと
解された時点から、残存グルコース濃度が常に１０ｇ／
ｌを超えないようにグルコースを逐次添加した。また、
硫酸アンモニウムについても、残存濃度が低下後逐次添
加を行った。ｐＨの調整については、１０％アンモニア
水を用いてｐＨ４に維持した。１６８時間培養後のεＰ
Ｌ生産量及び対炭素源収率を表１に示した。
硫酸アンモニウム１％、Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．０８％、ＫＨ
2 ＰＯ4 ０．１３６％、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．０５
％、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．００４％、ＦｅＳＯ4 ・
７Ｈ2 Ｏ０．００３％、ｐＨ６．８に調製した２ｌの培
地を３ｌ容ジャーに入れ、ストレプトマイセス・アルブ
ラス・サブスピーシズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ｓｕｂｓｐ．ｌｙｓ
ｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）Ｂ２１０２１株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１５１９３号）の前培養液１００ｍｌを接種し、
３０℃、７００ｒｐｍ、通気量３ｌ／min.で１６８時間
好気培養を行った。ただし、グルコース濃度については
５０ｇ／ｌで培養を開始し、培養開始後残存グルコース
濃度が１０ｇ／ｌ以下に低下しεＰＬ生産期に入ったと
解された時点から、残存グルコース濃度が常に１０ｇ／
ｌを超えないようにグルコースを逐次添加した。また、
硫酸アンモニウムについても、残存濃度が低下後逐次添
加を行った。ｐＨの調整については、１０％アンモニア
水を用いてｐＨ４に維持した。１６８時間培養後のεＰ
Ｌ生産量及び対炭素源収率を表１に示した。
【００１４】実施例２ グルコ−ス５％（５０ｇ／ｌ）、酵母エキス０．５％、
硫酸アンモニウム１％、Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．０８％、ＫＨ
2 ＰＯ4 ０．１３６％、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．０５
％、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．００４％、ＦｅＳＯ4 ・
７Ｈ2 Ｏ０．００３％、ｐＨ６．８に調製した２ｌの培
地を３ｌ容ジャーに入れ、ストレプトマイセス・アルブ
ラス・サブスピーシズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ｓｕｂｓｐ．ｌｙｓ
ｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）Ｂ２１０２１株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１５１９３号）の前培養液１００ｍｌを接種し、
３０℃、７００ｒｐｍ、通気量３ｌ／min.で１６８時間
好気培養を行った。ただし、グルコース濃度については
５０ｇ／ｌで培養を開始し、培養開始後残存グルコース
濃度が２０ｇ／ｌ以下に低下しεＰＬ生産期に入ったと
解された時点から、残存グルコース濃度が常に２０ｇ／
ｌを超えないようにグルコースを逐次添加した。また、
硫酸アンモニウムについても、残存濃度が低下後逐次添
加を行った。ｐＨの調整については、１０％アンモニア
水を用いてｐＨ４に維持した。１６８時間培養後のεＰ
Ｌ生産量及び対炭素源収率を表１に示した。
硫酸アンモニウム１％、Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．０８％、ＫＨ
2 ＰＯ4 ０．１３６％、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．０５
％、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．００４％、ＦｅＳＯ4 ・
７Ｈ2 Ｏ０．００３％、ｐＨ６．８に調製した２ｌの培
地を３ｌ容ジャーに入れ、ストレプトマイセス・アルブ
ラス・サブスピーシズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ｓｕｂｓｐ．ｌｙｓ
ｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）Ｂ２１０２１株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１５１９３号）の前培養液１００ｍｌを接種し、
３０℃、７００ｒｐｍ、通気量３ｌ／min.で１６８時間
好気培養を行った。ただし、グルコース濃度については
５０ｇ／ｌで培養を開始し、培養開始後残存グルコース
濃度が２０ｇ／ｌ以下に低下しεＰＬ生産期に入ったと
解された時点から、残存グルコース濃度が常に２０ｇ／
ｌを超えないようにグルコースを逐次添加した。また、
硫酸アンモニウムについても、残存濃度が低下後逐次添
加を行った。ｐＨの調整については、１０％アンモニア
水を用いてｐＨ４に維持した。１６８時間培養後のεＰ
Ｌ生産量及び対炭素源収率を表１に示した。
【００１５】比較例１ グルコ−ス５％（５０ｇ／ｌ）、酵母エキス０．５％、
硫酸アンモニウム１％、Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．０８％、ＫＨ
2 ＰＯ4 ０．１３６％、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．０５
％、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．００４％、ＦｅＳＯ4 ・
７Ｈ2 Ｏ０．００３％、ｐＨ６．８に調製した２ｌの培
地を３ｌ容ジャーに入れ、ストレプトマイセス・アルブ
ラス・サブスピーシズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ｓｕｂｓｐ．ｌｙｓ
ｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）Ｂ２１０２１株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１５１９３号）の前培養液１００ｍｌを接種し、
３０℃、７００ｒｐｍ、通気量３ｌ／min.で１６８時間
好気培養を行った。ただし、グルコース濃度について
は、５０ｇ／ｌで培養を開始し、残存グルコース濃度が
低下した後に、残存グルコース濃度が常時ほぼ５０ｇ／
ｌになるようにグルコースを逐次添加した。また、硫酸
アンモニウムについても、残存濃度が低下後逐次添加を
行った。ｐＨの調整については、１０％アンモニア水を
用いてｐＨ４に維持した。１６８時間培養後のεＰＬ生
産量及び対炭素源収率を表１に示した。
硫酸アンモニウム１％、Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．０８％、ＫＨ
2 ＰＯ4 ０．１３６％、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．０５
％、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．００４％、ＦｅＳＯ4 ・
７Ｈ2 Ｏ０．００３％、ｐＨ６．８に調製した２ｌの培
地を３ｌ容ジャーに入れ、ストレプトマイセス・アルブ
ラス・サブスピーシズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ｓｕｂｓｐ．ｌｙｓ
ｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）Ｂ２１０２１株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１５１９３号）の前培養液１００ｍｌを接種し、
３０℃、７００ｒｐｍ、通気量３ｌ／min.で１６８時間
好気培養を行った。ただし、グルコース濃度について
は、５０ｇ／ｌで培養を開始し、残存グルコース濃度が
低下した後に、残存グルコース濃度が常時ほぼ５０ｇ／
ｌになるようにグルコースを逐次添加した。また、硫酸
アンモニウムについても、残存濃度が低下後逐次添加を
行った。ｐＨの調整については、１０％アンモニア水を
用いてｐＨ４に維持した。１６８時間培養後のεＰＬ生
産量及び対炭素源収率を表１に示した。
【００１６】
【表１】
【００１７】表１の結果から明らかなように、培養液中
の残存炭素源（グルコース）濃度をより低濃度に制限す
るほどその効果は顕著に現れ、εＰＬ生産量及び対炭素
源収率が増大することがわかる。
の残存炭素源（グルコース）濃度をより低濃度に制限す
るほどその効果は顕著に現れ、εＰＬ生産量及び対炭素
源収率が増大することがわかる。
【００１８】
【発明の効果】本発明の製造法により、εＰＬを高収率
で製造することが可能となるため、安価なεＰＬを提供
することができる。
で製造することが可能となるため、安価なεＰＬを提供
することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:465）
Claims (3)
- 【請求項１】 ε−ポリ−Ｌ−リジンを発酵生産するス
トレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属微生
物を好気的に培地で培養し、得られた培養液からε−ポ
リ−Ｌ−リジンを採取する方法において、ε−ポリ−Ｌ
−リジン生産期における培養液中の残存炭素源濃度５０
ｇ／ｌ未満１ｇ／ｌ以上で培養することを特徴とするε
−ポリ−Ｌ−リジンの製造法。 - 【請求項２】 残存炭素源濃度２０〜１ｇ／ｌで培養す
ることを特徴とする請求項１に記載の製造法。 - 【請求項３】 残存炭素源濃度１０〜１ｇ／ｌで培養す
ることを特徴とする請求項１に記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP35401596A JPH10174596A (ja) | 1996-12-18 | 1996-12-18 | ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP35401596A JPH10174596A (ja) | 1996-12-18 | 1996-12-18 | ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10174596A true JPH10174596A (ja) | 1998-06-30 |
Family
ID=18434745
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP35401596A Pending JPH10174596A (ja) | 1996-12-18 | 1996-12-18 | ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10174596A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112322567A (zh) * | 2020-11-27 | 2021-02-05 | 江南大学 | 一株耐酸高产ε-聚赖氨酸的突变菌株及其应用 |
-
1996
- 1996-12-18 JP JP35401596A patent/JPH10174596A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112322567A (zh) * | 2020-11-27 | 2021-02-05 | 江南大学 | 一株耐酸高产ε-聚赖氨酸的突变菌株及其应用 |
| CN112322567B (zh) * | 2020-11-27 | 2022-08-09 | 江南大学 | 一株耐酸高产ε-聚赖氨酸的突变菌株及其应用 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20051116 |
|
| A521 | Written amendment |
Effective date: 20051128 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060124 |
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| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20060912 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |