JPH10146166A - 生理活性組成物 - Google Patents
生理活性組成物Info
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- JPH10146166A JPH10146166A JP32121196A JP32121196A JPH10146166A JP H10146166 A JPH10146166 A JP H10146166A JP 32121196 A JP32121196 A JP 32121196A JP 32121196 A JP32121196 A JP 32121196A JP H10146166 A JPH10146166 A JP H10146166A
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- sake
- lees
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 酒粕、酒粕水抽出液、及び／又は処理物
を有効成分として含有することを特徴とする生理活性組
成物。 【効果】 本有効成分は、ＮＫ細胞活性の促進、トキソ
ホルモン−Ｌの阻害、インスリン様作用、アミラーゼ阻
害等の生理活性を有するため、本組成物は、癌（それに
起因するやせ症状）、糖尿病、肥満等の予防、治療、あ
るいは保健に有用である。
を有効成分として含有することを特徴とする生理活性組
成物。 【効果】 本有効成分は、ＮＫ細胞活性の促進、トキソ
ホルモン−Ｌの阻害、インスリン様作用、アミラーゼ阻
害等の生理活性を有するため、本組成物は、癌（それに
起因するやせ症状）、糖尿病、肥満等の予防、治療、あ
るいは保健に有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、生理活性組成物に
関し、更に詳細には、ＮＫ細胞（ｎａｔｕｒａｌｋｉｌ
ｌｅｒ ｃｅｌｌｓ）活性化作用、アミラーゼ阻害作用
等すぐれた生理活性を有する酒粕由来の組成物に関する
ものである。
関し、更に詳細には、ＮＫ細胞（ｎａｔｕｒａｌｋｉｌ
ｌｅｒ ｃｅｌｌｓ）活性化作用、アミラーゼ阻害作用
等すぐれた生理活性を有する酒粕由来の組成物に関する
ものである。
【０００２】
【従来の技術】酒粕は、清酒もろみから清酒を分離した
後の残渣であって、従来、工業的に格別な用途はなく、
粕取焼酎、奈良漬、粕酢等の製造原料として、あるいは
粕汁等の素材として限定的に消費されているにすぎな
い。したがって、このような用途に利用されなかった酒
粕は廃棄物として処理しなければならないが、酒粕は栄
養物に富むために腐敗しやすく、放置しておくことがで
きないし、また、水分含量も高いために焼却処理するに
はコストがかかるという欠点は避けられない。
後の残渣であって、従来、工業的に格別な用途はなく、
粕取焼酎、奈良漬、粕酢等の製造原料として、あるいは
粕汁等の素材として限定的に消費されているにすぎな
い。したがって、このような用途に利用されなかった酒
粕は廃棄物として処理しなければならないが、酒粕は栄
養物に富むために腐敗しやすく、放置しておくことがで
きないし、また、水分含量も高いために焼却処理するに
はコストがかかるという欠点は避けられない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
技術背景に鑑み、酒粕を有効に処理する新しいシステム
を開発する目的でなされたものである。
技術背景に鑑み、酒粕を有効に処理する新しいシステム
を開発する目的でなされたものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するためになされたものであって、酒粕について、こ
れを廃棄物として取扱い、焼却したりするのではなく
て、これを更に積極的に有効利用することを目的として
なされたものである。
成するためになされたものであって、酒粕について、こ
れを廃棄物として取扱い、焼却したりするのではなく
て、これを更に積極的に有効利用することを目的として
なされたものである。
【０００５】そこで本発明者らは、各方面から酒粕に含
まれる機能性物質について検討した結果、酒粕にはＮＫ
細胞活性化作用があることをはじめて見出した。そして
この有用新知見にとどまらず、本発明者らは更に研究を
続けた結果、アミラーゼ阻害作用、トキソホルモン−Ｌ
阻害作用、インスリン様作用を酒粕が有することを新た
に見出し、酒粕を由来とする生理活性組成物に関する本
発明を完成するに至った。以下、本発明について詳述す
る。
まれる機能性物質について検討した結果、酒粕にはＮＫ
細胞活性化作用があることをはじめて見出した。そして
この有用新知見にとどまらず、本発明者らは更に研究を
続けた結果、アミラーゼ阻害作用、トキソホルモン−Ｌ
阻害作用、インスリン様作用を酒粕が有することを新た
に見出し、酒粕を由来とする生理活性組成物に関する本
発明を完成するに至った。以下、本発明について詳述す
る。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明は、酒粕を有効成分として
含有せしめてなる生理活性組成物を基本的技術思想とす
るものであって、本有効成分が、ＮＫ細胞活性の促進、
トキソホルモン−Ｌの阻害、インスリン様作用、アミラ
ーゼ阻害という有用な機能を有することから、本組成物
は、例えば、それぞれ、癌、癌に起因するやせ症状、糖
尿病、肥満の予防及び／又は治療に有用であり、特に飲
食品タイプの組成物として長期間摂取すれば特にすぐれ
た効果が期待される。
含有せしめてなる生理活性組成物を基本的技術思想とす
るものであって、本有効成分が、ＮＫ細胞活性の促進、
トキソホルモン−Ｌの阻害、インスリン様作用、アミラ
ーゼ阻害という有用な機能を有することから、本組成物
は、例えば、それぞれ、癌、癌に起因するやせ症状、糖
尿病、肥満の予防及び／又は治療に有用であり、特に飲
食品タイプの組成物として長期間摂取すれば特にすぐれ
た効果が期待される。
【０００７】本組成物の有効成分としては、酒粕が使用
されるが、これを濃縮したり水抽出すれば更に効果が高
まる。水抽出法としては、酒粕に蒸留水（脱イオン水）
を加えて攪拌し（必要あればホモゲナイズし）、遠心分
離（濾過）して、上清を得、これを酒粕抽出液とする。
そして、この酒粕抽出液を本組成物の有効成分として使
用するのである。
されるが、これを濃縮したり水抽出すれば更に効果が高
まる。水抽出法としては、酒粕に蒸留水（脱イオン水）
を加えて攪拌し（必要あればホモゲナイズし）、遠心分
離（濾過）して、上清を得、これを酒粕抽出液とする。
そして、この酒粕抽出液を本組成物の有効成分として使
用するのである。
【０００８】酒粕抽出液は、濃縮して有効成分濃度を更
に高めてもよく、例えば、濃縮物、ペースト化物、乾燥
物といった処理物とすることができ、これらの段階で有
効成分濃度を所望値にコントロールすることも可能であ
る。また、酒粕抽出液の各種処理物に水を添加して有効
成分濃度を所望値にコントロールすることも可能であ
り、更に、このようにして調製した加水物に上記処理物
を所望比率で添加混合して、有効成分濃度のコントロー
ルを行うことも可能である。
に高めてもよく、例えば、濃縮物、ペースト化物、乾燥
物といった処理物とすることができ、これらの段階で有
効成分濃度を所望値にコントロールすることも可能であ
る。また、酒粕抽出液の各種処理物に水を添加して有効
成分濃度を所望値にコントロールすることも可能であ
り、更に、このようにして調製した加水物に上記処理物
を所望比率で添加混合して、有効成分濃度のコントロー
ルを行うことも可能である。
【０００９】本発明は、酒粕、酒粕抽出液、及び／又は
処理物を有効成分とする生理活性組成物をその主題とす
るものであって、本組成物は、すぐれたＮＫ細胞活性の
促進、トキソホルモン−Ｌの阻害、インスリン様作用、
アミラーゼの阻害等の生理活性を有するものであり、し
かも本有効成分は酒粕由来である故、本来食品中に含ま
れるものであって、安全性についても問題はなく、各種
タイプの組成物として広範に使用できる。
処理物を有効成分とする生理活性組成物をその主題とす
るものであって、本組成物は、すぐれたＮＫ細胞活性の
促進、トキソホルモン−Ｌの阻害、インスリン様作用、
アミラーゼの阻害等の生理活性を有するものであり、し
かも本有効成分は酒粕由来である故、本来食品中に含ま
れるものであって、安全性についても問題はなく、各種
タイプの組成物として広範に使用できる。
【００１０】本組成物は、後記する実施例からも明らか
なように、各種のすぐれた生理活性作用を有するもので
あり、そのうちのひとつとして、酒粕によるアミラーゼ
の阻害作用が確認された（下記表１）。
なように、各種のすぐれた生理活性作用を有するもので
あり、そのうちのひとつとして、酒粕によるアミラーゼ
の阻害作用が確認された（下記表１）。
【００１１】
【表１】
【００１２】上記結果から明らかなように、酒粕５ｍｇ
／ｍｌでアミラーゼを５１．７％阻害している（１００
％−４８．３％）。このことは、酒粕を有効成分とする
本組成物を経口摂取することにより、アミラーゼ活性が
低下し、その結果、でんぷんの分解、腸からの吸収が遅
れ、そのため、血糖上昇の抑制、インスリンの急激な上
昇が阻止されることとなり、肥満の予防ないし防止が可
能であることを示すことにほかならない。
／ｍｌでアミラーゼを５１．７％阻害している（１００
％−４８．３％）。このことは、酒粕を有効成分とする
本組成物を経口摂取することにより、アミラーゼ活性が
低下し、その結果、でんぷんの分解、腸からの吸収が遅
れ、そのため、血糖上昇の抑制、インスリンの急激な上
昇が阻止されることとなり、肥満の予防ないし防止が可
能であることを示すことにほかならない。
【００１３】本組成物は、例えば、ヒト又は動物用の医
薬品、飲食品、調製粉乳、経腸栄養剤、健康飲食品、飼
餌料添加物等各種タイプの組成物として実用に供するこ
とができる。また、投与方法は、経口投与、静脈内投
与、患部への直接投与のどの方法を用いてもよい。
薬品、飲食品、調製粉乳、経腸栄養剤、健康飲食品、飼
餌料添加物等各種タイプの組成物として実用に供するこ
とができる。また、投与方法は、経口投与、静脈内投
与、患部への直接投与のどの方法を用いてもよい。
【００１４】有効成分の配合量は、任意でよいが、使用
目的（予防、保健、又は治療）、患者の年令、投与方
法、剤型等に応じて適宜定めればよく、通常、０．００
０１〜１０％の範囲が適当である。しかしながら、長期
間に亘って保健上ないし健康維持の目的で摂取する場合
には、上記範囲よりも少量であってもよいし、また本有
効成分は、安全性について問題がないので、上記範囲よ
りも多量に使用しても一向にさしつかえない。現にマウ
スを用いた１０日間の急性毒性試験の結果、１０００ｍ
ｇ／ｋｇの経口投与でも死亡例は認められなかった。
目的（予防、保健、又は治療）、患者の年令、投与方
法、剤型等に応じて適宜定めればよく、通常、０．００
０１〜１０％の範囲が適当である。しかしながら、長期
間に亘って保健上ないし健康維持の目的で摂取する場合
には、上記範囲よりも少量であってもよいし、また本有
効成分は、安全性について問題がないので、上記範囲よ
りも多量に使用しても一向にさしつかえない。現にマウ
スを用いた１０日間の急性毒性試験の結果、１０００ｍ
ｇ／ｋｇの経口投与でも死亡例は認められなかった。
【００１５】飲食品タイプの組成物として使用する場合
には、本有効成分（その処理物）をそのまま使用した
り、他の食品ないし食品成分と併用したりして適宜常法
にしたがって使用できる。本有効成分を用いる本発明に
係る組成物は、固体状（粉末、顆粒状その他）、ペース
ト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよいが、甘味料、
酸味料、ビタミン剤その他ドリンク剤製造に常用される
各種成分を用いて、健康ドリンクに製剤化すると好適で
ある。
には、本有効成分（その処理物）をそのまま使用した
り、他の食品ないし食品成分と併用したりして適宜常法
にしたがって使用できる。本有効成分を用いる本発明に
係る組成物は、固体状（粉末、顆粒状その他）、ペース
ト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよいが、甘味料、
酸味料、ビタミン剤その他ドリンク剤製造に常用される
各種成分を用いて、健康ドリンクに製剤化すると好適で
ある。
【００１６】医薬品タイプの組成物として使用する場
合、本有効成分は、種々の形態で投与される。その投与
形態としては例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、
シロップ剤等による経口投与をあげることができる。こ
れらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁
剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において
通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することが
できる。その使用量は症状、年令、体重、投与方法およ
び剤形等によって異なるが、通常は、成人に対して、１
日当り、静脈投与の場合は、体重１ｋｇ当り、０．０１
ｍｇ〜１０００ｍｇを投与することができ、筋肉投与の
場合は同じく０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇを投与するこ
とができる。また、経口投与の場合には同じく０．５〜
２０００ｍｇ、好ましくは１〜１０００ｍｇの範囲内で
投与するのがよい。
合、本有効成分は、種々の形態で投与される。その投与
形態としては例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、
シロップ剤等による経口投与をあげることができる。こ
れらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁
剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において
通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することが
できる。その使用量は症状、年令、体重、投与方法およ
び剤形等によって異なるが、通常は、成人に対して、１
日当り、静脈投与の場合は、体重１ｋｇ当り、０．０１
ｍｇ〜１０００ｍｇを投与することができ、筋肉投与の
場合は同じく０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇを投与するこ
とができる。また、経口投与の場合には同じく０．５〜
２０００ｍｇ、好ましくは１〜１０００ｍｇの範囲内で
投与するのがよい。
【００１７】以下に、本発明の実施例を示す。
【００１８】
【実施例１】酒粕によるＮＫ活性の促進作用を以下によ
り確認した。
り確認した。
【００１９】（１）赤血球融解用緩衝液−塩化アンモニ
ウム−トリス等張緩衝液の調製 ０．８３％ ＮＨ4Ｃｌとトリス（ヒドロキシメチル）
アミノメタン（２０．５９４ｇ／ｌ、ｐＨ７．６５）と
を９：１（ｖ／ｖ）の割合で混合して使用した。
ウム−トリス等張緩衝液の調製 ０．８３％ ＮＨ4Ｃｌとトリス（ヒドロキシメチル）
アミノメタン（２０．５９４ｇ／ｌ、ｐＨ７．６５）と
を９：１（ｖ／ｖ）の割合で混合して使用した。
【００２０】（２）酒粕抽出液の調製 酒粕を湿重量で２．５ｇ秤量し、これに蒸留水５ｍｌを
加え、ポリトロン（キネマティカ社製）を用いてホモジ
ナイズした後、２０００ｒｐｍで５分間、遠心分離し、
得られた上清を酒粕水抽出液５０ｍｇ／ｌ相当濃度（終
濃度１ｍｇ／ｍｌ）の溶液とした。この溶液の一部を凍
結乾燥し、凍結乾燥後の酒粕５ｍｇを蒸留水１ｍｌに溶
かし、この溶液を１００μｇ／ｍｌ相当濃度の溶液とし
た。
加え、ポリトロン（キネマティカ社製）を用いてホモジ
ナイズした後、２０００ｒｐｍで５分間、遠心分離し、
得られた上清を酒粕水抽出液５０ｍｇ／ｌ相当濃度（終
濃度１ｍｇ／ｍｌ）の溶液とした。この溶液の一部を凍
結乾燥し、凍結乾燥後の酒粕５ｍｇを蒸留水１ｍｌに溶
かし、この溶液を１００μｇ／ｍｌ相当濃度の溶液とし
た。
【００２１】（３）マウス脾細胞の調製 マウス（ＣＨ3／ＨｅＪ、５週齢、雄性：日本クレア
社）から脾臓を摘出した。摘出した脾臓を、１０％ Ｆ
ＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０培養液中（水浴中）で、鉗子
を用いて細かくつぶした。２００ｒｐｍで２分間遠心分
離した。上清をすてた後、１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ
１６４０培養液を加え、次いで２０００ｒｐｍで３分間
遠心分離して、細胞ペレットと上清に分離した。上清を
すてた後、細胞ペレット０．１ｍｌ／１ｍｌ塩化アンモ
ニウム−トリス等張緩衝液の割合で加え、１分間よく混
合した。
社）から脾臓を摘出した。摘出した脾臓を、１０％ Ｆ
ＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０培養液中（水浴中）で、鉗子
を用いて細かくつぶした。２００ｒｐｍで２分間遠心分
離した。上清をすてた後、１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ
１６４０培養液を加え、次いで２０００ｒｐｍで３分間
遠心分離して、細胞ペレットと上清に分離した。上清を
すてた後、細胞ペレット０．１ｍｌ／１ｍｌ塩化アンモ
ニウム−トリス等張緩衝液の割合で加え、１分間よく混
合した。
【００２２】１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０培養
液で（２０００ｒｐｍ、３分間の遠心分離）３回洗浄し
た。次いで細胞が４．０×１０7個／ｍｌになるよう
に、１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０培養液に浮遊
せしめて、細施浮遊液を調製した。６穴マイクロプレー
トに、１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０培養液３．
９ｍｌ、細胞浮遊液１ｍｌ、酒粕または１０％ ＦＣＳ
−ＲＰＭＩ １６４０培養液１００μｌを分注し、ＣＯ
2インキュベーターで２日間培養した。
液で（２０００ｒｐｍ、３分間の遠心分離）３回洗浄し
た。次いで細胞が４．０×１０7個／ｍｌになるよう
に、１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０培養液に浮遊
せしめて、細施浮遊液を調製した。６穴マイクロプレー
トに、１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０培養液３．
９ｍｌ、細胞浮遊液１ｍｌ、酒粕または１０％ ＦＣＳ
−ＲＰＭＩ １６４０培養液１００μｌを分注し、ＣＯ
2インキュベーターで２日間培養した。
【００２３】（４）ＹＡＣ−１細胞への51Ｃｒの標識化 ＹＡＣ−１細胞をＲＰＭＩ １６４０培養液で培養し、
対数増殖期にある生存率９０％以上の細胞１０×１０6
個を、スピッツ遠心管を用い、無血清ＲＰＭＩ１６４０
培養液で（２０００ｒｐｍ、３分間の遠心分離）３回洗
浄した。次いで、Ｎａ2 51ＣｒＯ4 ０．１ｍｌ（日本ア
イソトープ協会、０．５Ｃｉ／０．５ｍｌ）を添加した
後、１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０培養液で（２
０００ｒｐｍ、３分間の遠心分離）４回洗浄した。そし
て、３．０×１０5個／ｍｌになるように１０％ ＦＣ
Ｓ−ＲＰＭＩ １６４０培養液に浮遊した。
対数増殖期にある生存率９０％以上の細胞１０×１０6
個を、スピッツ遠心管を用い、無血清ＲＰＭＩ１６４０
培養液で（２０００ｒｐｍ、３分間の遠心分離）３回洗
浄した。次いで、Ｎａ2 51ＣｒＯ4 ０．１ｍｌ（日本ア
イソトープ協会、０．５Ｃｉ／０．５ｍｌ）を添加した
後、１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０培養液で（２
０００ｒｐｍ、３分間の遠心分離）４回洗浄した。そし
て、３．０×１０5個／ｍｌになるように１０％ ＦＣ
Ｓ−ＲＰＭＩ １６４０培養液に浮遊した。
【００２４】（５）ＮＫ活性の測定 マウス脾単核球を１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０
培養液で３回洗浄した後、１．０×１０7個／ｍｌにな
るように１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０培養液に
浮遊した。細胞浮遊液を、９６ウエルＵ底マイクロプレ
ートに１５０μｌずつ分注した。そして、51Ｃｒ標識Ｙ
ＡＣ−１細胞を５０μｌずつウエルに分注した。９６ウ
エルマイクロプレート遠心器にて、１０００ｒｐｍで５
分間遠心分離した。ＣＯ2インキュベーターで、４時
間、３７℃でインキュベートした。９６ウエルマイクロ
プレート遠心器にて、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離
した。小試験管に上清１００μｌをとり、γ−カウンタ
ーで測定し、測定結果から、次式により％ＮＫ活性を算
定した。
培養液で３回洗浄した後、１．０×１０7個／ｍｌにな
るように１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０培養液に
浮遊した。細胞浮遊液を、９６ウエルＵ底マイクロプレ
ートに１５０μｌずつ分注した。そして、51Ｃｒ標識Ｙ
ＡＣ−１細胞を５０μｌずつウエルに分注した。９６ウ
エルマイクロプレート遠心器にて、１０００ｒｐｍで５
分間遠心分離した。ＣＯ2インキュベーターで、４時
間、３７℃でインキュベートした。９６ウエルマイクロ
プレート遠心器にて、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離
した。小試験管に上清１００μｌをとり、γ−カウンタ
ーで測定し、測定結果から、次式により％ＮＫ活性を算
定した。
【００２５】 ％ＮＫ Ｌｙｓｉｓ＝（Ｅ−Ｓ）／（Ｍ−Ｓ）×１００ 但し式中、 Ｍ：ｍａｘｉｍｕｍ ｒｅｌｅａｓｅ ＹＡＣ−１細胞を１Ｎ ＮａＯＨで破壊したｃｐｍ Ｓ：ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ｒｅｌｅａｓｅ ＹＡＣ−１細胞を１０％ ＦＣＳ−ＲＰＭＩ １６４０
で培養液中に自然遊離したｃｐｍ Ｅ：ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒｅｌｅａｓｅ ＹＡＣ−１細胞とマウス脾単核球を反応させた後のｃｐ
ｍ
で培養液中に自然遊離したｃｐｍ Ｅ：ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒｅｌｅａｓｅ ＹＡＣ−１細胞とマウス脾単核球を反応させた後のｃｐ
ｍ
【００２６】得られた結果を図１に示す。この結果から
明らかなように、酒粕抽出液は１００μｇ／ｍｌでＮＫ
活性を増強することがわかる。
明らかなように、酒粕抽出液は１００μｇ／ｍｌでＮＫ
活性を増強することがわかる。
【００２７】
【実施例２】酒粕によるトキソホルモン−Ｌ（脂肪分解
物質）に対する阻害作用を以下により確認した。
物質）に対する阻害作用を以下により確認した。
【００２８】（１）酒粕抽出液の調製 酒粕を湿重量で１ｇ秤量し、これに蒸留水５ｍｌを加
え、ポリトロン（キネマティカ社製）を用いてホモジナ
イズした後、２０００ｒｐｍで５分間、遠心分離し、得
られた上清を酒粕水抽出液２０ｍｇ／ｍｌ相当濃度の溶
液とした。この溶液を希釈して、各濃度の測定を行っ
た。
え、ポリトロン（キネマティカ社製）を用いてホモジナ
イズした後、２０００ｒｐｍで５分間、遠心分離し、得
られた上清を酒粕水抽出液２０ｍｇ／ｍｌ相当濃度の溶
液とした。この溶液を希釈して、各濃度の測定を行っ
た。
【００２９】（２）試薬の調製 ａ）ＮＥＦＡ抽出液：クロロホルム９８０ｍｌ、ヘプタ
ン９８０ｍｌ、メタノール４０ｍｌを充分混合してＮＥ
ＦＡ抽出液を調製した。 ｂ）銅試薬：トリエタノールアミン２．９８ｇ、Ｃｕ
（ＮＯ3）2・３Ｈ2Ｏ ２．４２ｇ、ＮａＯＨ ０．４
８ｇを水に溶かし、２００ｍｌにメスアップし、ＮａＣ
ｌ ６６ｇを添加、溶解して銅試薬を調製した。 ｃ）発色試薬：バソクプロイン０．２ｇ、ブチルヒドロ
キシアニソール０．１ｇをクロロホルムに溶かし、２０
０ｍｌにメスアップして発色試薬を調製した。
ン９８０ｍｌ、メタノール４０ｍｌを充分混合してＮＥ
ＦＡ抽出液を調製した。 ｂ）銅試薬：トリエタノールアミン２．９８ｇ、Ｃｕ
（ＮＯ3）2・３Ｈ2Ｏ ２．４２ｇ、ＮａＯＨ ０．４
８ｇを水に溶かし、２００ｍｌにメスアップし、ＮａＣ
ｌ ６６ｇを添加、溶解して銅試薬を調製した。 ｃ）発色試薬：バソクプロイン０．２ｇ、ブチルヒドロ
キシアニソール０．１ｇをクロロホルムに溶かし、２０
０ｍｌにメスアップして発色試薬を調製した。
【００３０】（３）トキソホルモン−Ｌ阻害活性の測定 ２．５％ＢＳＡ溶液２００μｌ、酒粕水抽出液２５μ
ｌ、トキソホルモン−Ｌ２５μｌを混合した後、Ｐａｃ
ｋｅｄ ｆａｔ ｃｅｌｌｓ ５０μｌを添加し、３７℃
で１時間インキュベートした。次いで、酒粕水抽出液を
３ｍｌ加え、反応を停止した。１０分間振とうした後、
２５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。
ｌ、トキソホルモン−Ｌ２５μｌを混合した後、Ｐａｃ
ｋｅｄ ｆａｔ ｃｅｌｌｓ ５０μｌを添加し、３７℃
で１時間インキュベートした。次いで、酒粕水抽出液を
３ｍｌ加え、反応を停止した。１０分間振とうした後、
２５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。
【００３１】上層（水層）を吸引除去した。銅試薬１ｍ
ｌを加え、１０分間振とうした後、２５００ｒｐｍで１
０分間遠心分離した。上層０．５ｍｌを別の試験管に入
れ、発色試薬０．５ｍｌを加えてよく混合し、吸光度を
測定した（波長：４８０ｎｍ）。
ｌを加え、１０分間振とうした後、２５００ｒｐｍで１
０分間遠心分離した。上層０．５ｍｌを別の試験管に入
れ、発色試薬０．５ｍｌを加えてよく混合し、吸光度を
測定した（波長：４８０ｎｍ）。
【００３２】得られた結果を図２に示す。この結果から
明らかなように、酒粕抽出液は、脂肪細胞におけるトキ
ソホルモン−Ｌの脂肪分解を阻害することがわかる。
明らかなように、酒粕抽出液は、脂肪細胞におけるトキ
ソホルモン−Ｌの脂肪分解を阻害することがわかる。
【００３３】トキソホルモン−Ｌは、分子量約７万でＮ
末端にアスパラギン酸を有する糖蛋白質であって、脂肪
分解性のほかに食欲低下作用を有する物質であり、癌細
胞から分泌されている。したがって、癌患者の急激なや
せの原因のひとつは、癌細胞から分泌されたトキソホル
モン−Ｌによって、現在溜まっている脂肪が分解される
とともに、食欲が低下することによるものと考えられて
いるところから、トキソホルモン−Ｌを阻害することに
より、癌患者の急激なやせを止め、その結果、制癌剤や
放射線療法に耐える体力を維持することが可能となり、
酒粕は、癌の治療を側面から支援する生理活性組成物と
して非常に有用である。
末端にアスパラギン酸を有する糖蛋白質であって、脂肪
分解性のほかに食欲低下作用を有する物質であり、癌細
胞から分泌されている。したがって、癌患者の急激なや
せの原因のひとつは、癌細胞から分泌されたトキソホル
モン−Ｌによって、現在溜まっている脂肪が分解される
とともに、食欲が低下することによるものと考えられて
いるところから、トキソホルモン−Ｌを阻害することに
より、癌患者の急激なやせを止め、その結果、制癌剤や
放射線療法に耐える体力を維持することが可能となり、
酒粕は、癌の治療を側面から支援する生理活性組成物と
して非常に有用である。
【００３４】
【実施例３】酒粕によるインスリン様作用、つまり、脂
肪合成には影響を与えず、脂肪分解を阻害する作用を以
下により確認した。
肪合成には影響を与えず、脂肪分解を阻害する作用を以
下により確認した。
【００３５】Ａ：脂肪分解の測定： （１）酒粕抽出液の調製 酒粕を湿重量で１ｇ秤量し、これに蒸留水５ｍｌを加
え、ポリトロン（キネマティカ社製）を用いてホモジナ
イズした後、２０００ｒｐｍで５分間、遠心分離し、得
られた上清を酒粕水抽出液２０ｍｇ／ｍｌ相当濃度（終
濃度）の溶液とした。この溶液を希釈して、各濃度の測
定を行った。
え、ポリトロン（キネマティカ社製）を用いてホモジナ
イズした後、２０００ｒｐｍで５分間、遠心分離し、得
られた上清を酒粕水抽出液２０ｍｇ／ｍｌ相当濃度（終
濃度）の溶液とした。この溶液を希釈して、各濃度の測
定を行った。
【００３６】（２）試薬の調製 ａ）ＮＥＦＡ抽出液：クロロホルム９８０ｍｌ、ヘプタ
ン９８０ｍｌ、メタノール４０ｍｌを充分混合してＮＥ
ＦＡ抽出液を調製した。 ｂ）銅試薬：トリエタノールアミン２．９８ｇ、Ｃｕ
（ＮＯ3）2・３Ｈ2Ｏ ２．４２ｇ、ＮａＯＨ ０．４
８ｇを水に溶かし、２００ｍｌにメスアップし、ＮａＣ
ｌ ６６ｇを添加、溶解して銅試薬を調製した。 ｃ）発色試薬：バソクプロイン０．２ｇ、ブチルヒドロ
キシアニソール０．１ｇをクロロホルムに溶かし、２０
０ｍｌにメスアップして発色試薬を調製した。
ン９８０ｍｌ、メタノール４０ｍｌを充分混合してＮＥ
ＦＡ抽出液を調製した。 ｂ）銅試薬：トリエタノールアミン２．９８ｇ、Ｃｕ
（ＮＯ3）2・３Ｈ2Ｏ ２．４２ｇ、ＮａＯＨ ０．４
８ｇを水に溶かし、２００ｍｌにメスアップし、ＮａＣ
ｌ ６６ｇを添加、溶解して銅試薬を調製した。 ｃ）発色試薬：バソクプロイン０．２ｇ、ブチルヒドロ
キシアニソール０．１ｇをクロロホルムに溶かし、２０
０ｍｌにメスアップして発色試薬を調製した。
【００３７】（３）脂肪分解の測定 実施例２（３）において、トキソホルモン−Ｌにかえて
ノルエピネフリン（Ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）を
用いたほかは、同じ操作を行って測定を実施した。得ら
れた結果を図３に示した。
ノルエピネフリン（Ｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）を
用いたほかは、同じ操作を行って測定を実施した。得ら
れた結果を図３に示した。
【００３８】Ｂ：脂肪合成の測定： （１）酒粕抽出液の調製 酒粕を湿重量で２５０ｍｇ秤量し、これに蒸留水５ｍｌ
を加え、ポリトロン（キネマティカ社製）を用いてホモ
ジナイズした後、２０００ｒｐｍで５分間、遠心分離
し、得られた上清を酒粕水抽出液５ｍｇ／ｍｌ相当濃度
（終濃度）の溶液とした。この溶液を希釈して、各濃度
の測定を行った。
を加え、ポリトロン（キネマティカ社製）を用いてホモ
ジナイズした後、２０００ｒｐｍで５分間、遠心分離
し、得られた上清を酒粕水抽出液５ｍｇ／ｍｌ相当濃度
（終濃度）の溶液とした。この溶液を希釈して、各濃度
の測定を行った。
【００３９】（２）試薬の調製 ａ）６％ＢＳＡ、３ｍＭグルコース溶液：活性炭処理済
のＢＳＡ １．５ｇをハンクス緩衝液２５ｍｌに溶解
し、これにグルコース１５．５ｍｇを溶解し、ｐＨ７．
４に調整して、本溶液を調製した。 ｂ）ＥＭ液 イソプロピルアルコール２４００ｍｌ、ヘプタン６００
ｍｌ、１Ｎ Ｎ2ＳＯ4６０ｍｌを混合して、ＥＭ液を調
製した。
のＢＳＡ １．５ｇをハンクス緩衝液２５ｍｌに溶解
し、これにグルコース１５．５ｍｇを溶解し、ｐＨ７．
４に調整して、本溶液を調製した。 ｂ）ＥＭ液 イソプロピルアルコール２４００ｍｌ、ヘプタン６００
ｍｌ、１Ｎ Ｎ2ＳＯ4６０ｍｌを混合して、ＥＭ液を調
製した。
【００４０】（３）脂肪合成の測定 ６％ＢＳＡ、３ｍＭグルコース溶液１７５μｌにＰａｃ
ｋｅｄ ｆａｔ ｃｅｌｌｓ ４０μｌを加えた後、３７
℃で２０分間インキュベートした。これに酒粕水抽出液
２５μｌを加えた後、３７℃で５分間インキュベートし
た。次いで、１ｍＭインスリン２５μｌを加え、３７℃
で５分間インキュベートした。14Ｃ−グルコース２５μ
ｌを加え、３７℃で３０分間インキュベートした。次い
で、ＥＭ液０．８３ｍｌ、ヘプタン０．５ｍｌ、水０．
２５ｍｌを加え、ボルテックスで約１５秒間混合した
後、室温において３０００ｒｐｍで３分間遠心分離し
た。上清１３３．３μｌにトルエンシンチレーター７．
５ｍｌを加え、カウントした。得られた結果を図４に示
した。
ｋｅｄ ｆａｔ ｃｅｌｌｓ ４０μｌを加えた後、３７
℃で２０分間インキュベートした。これに酒粕水抽出液
２５μｌを加えた後、３７℃で５分間インキュベートし
た。次いで、１ｍＭインスリン２５μｌを加え、３７℃
で５分間インキュベートした。14Ｃ−グルコース２５μ
ｌを加え、３７℃で３０分間インキュベートした。次い
で、ＥＭ液０．８３ｍｌ、ヘプタン０．５ｍｌ、水０．
２５ｍｌを加え、ボルテックスで約１５秒間混合した
後、室温において３０００ｒｐｍで３分間遠心分離し
た。上清１３３．３μｌにトルエンシンチレーター７．
５ｍｌを加え、カウントした。得られた結果を図４に示
した。
【００４１】これらの結果から、酒粕抽出液には、脂肪
細胞におけるノルエピネフリンによる脂肪分解を抑制
し、グルコースからの脂肪合成には何ら影響しない成分
が含有されていることが確認された。
細胞におけるノルエピネフリンによる脂肪分解を抑制
し、グルコースからの脂肪合成には何ら影響しない成分
が含有されていることが確認された。
【００４２】
【実施例４】酒粕水抽出液分画成分のインスリン様作用
を以下により確認した。
を以下により確認した。
【００４３】（１）酒粕水抽出液の分画 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１０（商品名）を用いて酒粕水
抽出液を６区分に分画し、第３区分６２．５ｍｇをＩＲ
１２０Ｂ（商品名）により吸着区分と非吸着区分に分離
し、ＩＲ１２０Ｂ吸着区分１５．８ｍｇ（凍結乾燥重
量）及びＩＲ１２０Ｂ非吸着区分２５．７ｍｇ（凍結乾
燥重量）を得た。収率は、４１．５／６２．５×１００
＝６６．４％であった。
抽出液を６区分に分画し、第３区分６２．５ｍｇをＩＲ
１２０Ｂ（商品名）により吸着区分と非吸着区分に分離
し、ＩＲ１２０Ｂ吸着区分１５．８ｍｇ（凍結乾燥重
量）及びＩＲ１２０Ｂ非吸着区分２５．７ｍｇ（凍結乾
燥重量）を得た。収率は、４１．５／６２．５×１００
＝６６．４％であった。
【００４４】吸着区分についてＯＤＳ−８０Ｔ（商品
名）を用いる逆相クロマトグラフィーによる分画を行っ
た。逆相クロマトグラフィーの条件は次のとおりとし
た：ＨＰＬＣ 島津ＬＣ−９Ａ； Ｂｕｆｆｅｒ ２０
％アセトニトリル，流量３ｍＬ／ｍｉｎ； カラム Ｔ
ＯＳＯ−ＯＤＳ−８０Ｔｓ（２１．５×３００ｍｍ）分
取用； Ｄｅｔｅｃｔｏｒ Ｏ．Ｄ．220ｎｍ（ＲＡＮＧ
Ｅ１．２８）; 分画ＡＤＶＡＮＴＥＣ ＳＦ−２１２
０，３ｍＬ／ｔｕｂｅで分取した。
名）を用いる逆相クロマトグラフィーによる分画を行っ
た。逆相クロマトグラフィーの条件は次のとおりとし
た：ＨＰＬＣ 島津ＬＣ−９Ａ； Ｂｕｆｆｅｒ ２０
％アセトニトリル，流量３ｍＬ／ｍｉｎ； カラム Ｔ
ＯＳＯ−ＯＤＳ−８０Ｔｓ（２１．５×３００ｍｍ）分
取用； Ｄｅｔｅｃｔｏｒ Ｏ．Ｄ．220ｎｍ（ＲＡＮＧ
Ｅ１．２８）; 分画ＡＤＶＡＮＴＥＣ ＳＦ−２１２
０，３ｍＬ／ｔｕｂｅで分取した。
【００４５】試料として上記吸着区分を４ｍｇとり、２
０ｍｌの水に溶解分画した（５００μｌずつ４回に分け
てインジェクションした）。９区分に分画し、４回分を
合併した後凍結乾燥した。各区分の分画後の合併容量は
次のとおりであった： １区分：約１４４ｍＬ ２区分：約７２ｍＬ ３区分：約 ６０ｍＬ ４区分：約 ３６ｍＬ ５区分：約３６ｍＬ ６区分：約１３２ｍＬ ７区分：約１２０ｍＬ ８区分：約４８ｍＬ ９区分：約 ３６ｍＬ
０ｍｌの水に溶解分画した（５００μｌずつ４回に分け
てインジェクションした）。９区分に分画し、４回分を
合併した後凍結乾燥した。各区分の分画後の合併容量は
次のとおりであった： １区分：約１４４ｍＬ ２区分：約７２ｍＬ ３区分：約 ６０ｍＬ ４区分：約 ３６ｍＬ ５区分：約３６ｍＬ ６区分：約１３２ｍＬ ７区分：約１２０ｍＬ ８区分：約４８ｍＬ ９区分：約 ３６ｍＬ
【００４６】（２）脂肪分解の測定 実施例３（３）において、酒粕水抽出液にかえてサンプ
ル溶液（上記した１〜９区分溶液）を用いたほかは、同
じ操作を行って測定を行った。得られた結果を図５に示
した。上記結果から明らかなように、酒粕水抽出液画分
（特に１、７、９区分）についても、酒粕水抽出液と同
様の作用が確認された。
ル溶液（上記した１〜９区分溶液）を用いたほかは、同
じ操作を行って測定を行った。得られた結果を図５に示
した。上記結果から明らかなように、酒粕水抽出液画分
（特に１、７、９区分）についても、酒粕水抽出液と同
様の作用が確認された。
【００４７】
【実施例５】グラニュー糖５０ｇ、コーンスターチと乳
糖の等量混合物３０ｇ、ビタミンＣ２０ｇに、実施例１
にしたがって製造した酒粕抽出液の凍結乾燥品を２０ｇ
加えて混合した。得られた混合物を１００等分して袋に
詰め、スティック状の食品タイプの組成物を１００袋製
造した。
糖の等量混合物３０ｇ、ビタミンＣ２０ｇに、実施例１
にしたがって製造した酒粕抽出液の凍結乾燥品を２０ｇ
加えて混合した。得られた混合物を１００等分して袋に
詰め、スティック状の食品タイプの組成物を１００袋製
造した。
【００４８】
【実施例６】グラニュー糖１５０ｇ、蜂蜜１５ｇ、ビタ
ミンＣ １ｇ、クエン酸０．５ｇ、実施例１にしたがっ
て製造した酒粕抽出液の凍結乾燥品１００ｇ、香料適量
に水を加えて１ｋｇとし、これを９５℃で２０分間殺菌
し、１００ｍｌずつ無菌的にビンに充填して、ドリンク
タイプの組成物を製造した。
ミンＣ １ｇ、クエン酸０．５ｇ、実施例１にしたがっ
て製造した酒粕抽出液の凍結乾燥品１００ｇ、香料適量
に水を加えて１ｋｇとし、これを９５℃で２０分間殺菌
し、１００ｍｌずつ無菌的にビンに充填して、ドリンク
タイプの組成物を製造した。
【００４９】
【発明の効果】本発明に係る組成物は、ＮＫ細胞活性の
促進、トキソホルモン−Ｌの阻害、インスリン様作用、
アミラーゼ阻害といった生理活性を有するので、例えば
癌、癌に起因するやせの症状、糖尿病、肥満等の予防な
いし治療に有効である。
促進、トキソホルモン−Ｌの阻害、インスリン様作用、
アミラーゼ阻害といった生理活性を有するので、例えば
癌、癌に起因するやせの症状、糖尿病、肥満等の予防な
いし治療に有効である。
【００５０】特に本組成物は、安全性については全く問
題のない酒粕を使用するものであるので、飲食品タイプ
の組成物として長期間に亘って摂取することができ、上
記疾患や症状の予防、これらの患者の術後、あるいは保
健上の目的でも有利に使用することができる。
題のない酒粕を使用するものであるので、飲食品タイプ
の組成物として長期間に亘って摂取することができ、上
記疾患や症状の予防、これらの患者の術後、あるいは保
健上の目的でも有利に使用することができる。
【図１】酒粕のＮＫ活性に及ぼす作用を示す。ｐ＜０．
０５（対照比）
０５（対照比）
【図２】トキソホルモン−ＬによるＬｉｐｏｌｙｓｉｓ
（脂肪細胞の脂肪分解）に対する酒粕の作用を示す。
（脂肪細胞の脂肪分解）に対する酒粕の作用を示す。
【図３】ノルエピネフリンによるＬｉｐｏｌｙｓｉｓに
対する酒粕の作用を示す。
対する酒粕の作用を示す。
【図４】酒粕のＬｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ（脂肪合成）に
対する作用を示す。
対する作用を示す。
【図５】酒粕分画成分のノルエピネフリンによるＬｉｐ
ｏｌｙｓｉｓに対する作用を示す。
ｏｌｙｓｉｓに対する作用を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ // Ａ６１Ｋ 35/78 ＡＤＰ Ａ６１Ｋ 35/78 ＡＥＤ ＡＥＤ Ａ２３Ｌ 2/00 Ｆ
Claims (5)
- 【請求項１】 酒粕、酒粕の水抽出液、及び／又は、処
理物を有効成分として含有すること、を特徴とする生理
活性組成物。 - 【請求項２】 酒粕の水抽出液は、酒粕に水を加えた後
ホモジナイズし、次いで遠心分離して得た上清であるこ
と、を特徴とする請求項１に記載の組成物。 - 【請求項３】 該処理物が、濃縮物、ペースト化物、及
び／又は、乾燥物であること、を特徴とする請求項１又
は２に記載の組成物。 - 【請求項４】 生理活性が、ＮＫ細胞活性の促進、トキ
ソホルモン−Ｌの阻害、インスリン様作用、及び／又
は、アミラーゼの阻害であること、を特徴とする請求項
１〜３のいずれか１項に記載の組成物。 - 【請求項５】 該組成物が、医薬品タイプ及び／又は飲
食品タイプであること、を特徴とする請求項１〜４のい
ずれか１項に記載の組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32121196A JPH10146166A (ja) | 1996-11-18 | 1996-11-18 | 生理活性組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32121196A JPH10146166A (ja) | 1996-11-18 | 1996-11-18 | 生理活性組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10146166A true JPH10146166A (ja) | 1998-06-02 |
Family
ID=18130052
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32121196A Pending JPH10146166A (ja) | 1996-11-18 | 1996-11-18 | 生理活性組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10146166A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001299242A (ja) * | 2000-04-28 | 2001-10-30 | Kanebo Ltd | ゲル化剤含有食品及びその製法 |
| WO2004061090A1 (ja) * | 2002-12-27 | 2004-07-22 | Sanwa Shurui Co., Ltd. | ナチュラルキラー細胞を賦活化する作用を有する組成物及びその製造方法、及び前記組成物を使用して賦活化したナチュラルキラー細胞を含有する組成物及びその製造方法 |
| JP2007510694A (ja) * | 2003-11-12 | 2007-04-26 | ビオグルト ビオガルデ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディートゲゼルシャフト | 付加的に発酵させたジスチラーズ・グレインの、高血糖値の予防及び／又は治療のための使用 |
| JP2009235068A (ja) * | 2008-03-07 | 2009-10-15 | Kao Corp | Ｐｐａｒ活性化剤 |
| JP2012065675A (ja) * | 1998-06-05 | 2012-04-05 | Nutrinia Ltd | インスリンを補った乳児用調製乳 |
| CN107854512A (zh) * | 2017-12-12 | 2018-03-30 | 南宁学院 | 一种老鼠酒及其制备方法 |
-
1996
- 1996-11-18 JP JP32121196A patent/JPH10146166A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2012065675A (ja) * | 1998-06-05 | 2012-04-05 | Nutrinia Ltd | インスリンを補った乳児用調製乳 |
| JP2001299242A (ja) * | 2000-04-28 | 2001-10-30 | Kanebo Ltd | ゲル化剤含有食品及びその製法 |
| WO2004061090A1 (ja) * | 2002-12-27 | 2004-07-22 | Sanwa Shurui Co., Ltd. | ナチュラルキラー細胞を賦活化する作用を有する組成物及びその製造方法、及び前記組成物を使用して賦活化したナチュラルキラー細胞を含有する組成物及びその製造方法 |
| JP2007510694A (ja) * | 2003-11-12 | 2007-04-26 | ビオグルト ビオガルデ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディートゲゼルシャフト | 付加的に発酵させたジスチラーズ・グレインの、高血糖値の予防及び／又は治療のための使用 |
| JP4800961B2 (ja) * | 2003-11-12 | 2011-10-26 | ビオグルト ビオガルデ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディートゲゼルシャフト | 付加的に発酵させたジスチラーズ・グレインの、高血糖値の予防及び／又は治療のための使用 |
| JP2009235068A (ja) * | 2008-03-07 | 2009-10-15 | Kao Corp | Ｐｐａｒ活性化剤 |
| CN107854512A (zh) * | 2017-12-12 | 2018-03-30 | 南宁学院 | 一种老鼠酒及其制备方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20040122 |
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20040323 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20040803 |