JPH09503754A

JPH09503754A - 初乳から免疫グロブリンを得る方法および医薬組成物におけるそれらの使用

Info

Publication number: JPH09503754A
Application number: JP7509434A
Authority: JP
Inventors: コナー・ジヨングラハム，
Original assignee: アナデイス・リミテツド
Priority date: 1993-09-20
Filing date: 1994-09-20
Publication date: 1997-04-15
Also published as: CA2171607A1; EP0725789A1; EP0725789A4; US5780028A; WO1995008562A1; ATE234855T1; DE69432309D1; NZ273865A; EP0725789B1

Abstract

(57)【要約】（ｉ）初乳から乳脂肪を除去して低脂肪初乳を得ること；（ｉｉ）低脂肪初乳を低温殺菌すること；（ｉｉｉ）低温殺菌された低脂肪初乳を凝固させ、そしてカゼインを含有する乳カードを除去すること；（ｉｖ）残液を遠心して、沈殿物を除去すること；（ｖ）乳糖、無機質および水を除去して、抗体含有画分を得ること；（ｖｉ）抗体含有画分をＴＲＩＳ−ＨＣｌバッファーに溶解し、そして同一バッファーに対して透析すること；および（ｖｉｉ）抗体含有溶液を濃縮して、１０重量％の抗体溶液を得ること：を含む抗体に富む初乳から高純度の免疫グロブリン調製物を得る方法。コア要素が錠剤形状で存在し、そして錠剤を調製するために使用される圧縮力が、それが、活性抗体を損傷しないか変性しないようなものである、上記方法によって得られた活性抗体成分を含むコア要素を含んでなる医薬組成物。

Description

【発明の詳細な説明】初乳から免疫グロブリンを得る方法および医薬組成物におけるそれらの使用本発明は、医薬組成物、特に抗体を含む医薬組成物、および同組成物を調製する方法に関する。抗体は、ヒト血液から分離され、種々の伝染病を治療するために使用できることが知られている。特に、血清から分画されたγ−グロブリンは、病気の治療および予防に有効であることが知られており、そして麻疹や他の伝染病の治療のために注射によって投与されてきた。後になって、実際に、γ−グロブリン、およびβ−グロブリン画分の一部は、５種の主構成成分：ＩｇＧ，ＩｇＡ，ＩｇＭ，ＩｇＤおよびＩｇＥからなり、その各々が、独自の生理学的特性をもつことが分かった。しかしながら、そのような血清抗体は、収集することが困難であり、その結果、医療用の大量の抗体の商業生産は、非経済的である。ＩｇＡは、血清中のみならず乳腺のような分泌器官においても産生されることが分かった。分泌器官において見いだされたＩｇＡは、ＩｇＡの２分子からなる二量体の形で存在し、それは、分泌成分の１分子と架橋されている。ＩｇＡのこの形態は、プロテアーゼや酸性条件に対して非常に安定であり、そして血清ＩｇＡとは異なる分泌ＩｇＡとして知られている。他の免疫グロブリンとは違って、粘膜の上皮細胞に分泌ＩｇＡの形で存在するＩｇＡは、そこで細菌やウイルスを攻撃し、かくして、局所免疫において重要な役割を演じている。このために、分泌ＩｇＡの経口投与は、患者に免疫防御を与えるために用いられ、そして、このことが、母乳保育児とは反対に人工乳保育児に見られる感染に対する弱い抵抗力を、自然に生じさせていると思われる。分泌ＩｇＡは、初乳において特に高濃度に見いだされる。初乳は、誕生前後の短い期間にわたって、哺乳動物によって産生される乳である。初乳は、成熟乳での分泌ＩｇＡ５０ｍｇ／ｄｌに比較して平均３００ｍｇ／ｄｌを含む。特異抗原を用いて雌牛のような哺乳動物を免疫化することによって、特異抗体を含む初乳が収穫され、伝染病、特に腸の疾病を治療するために使用される。多くの応用について、血清からγ−グロブリンを単離するのに好適な商業的諸法が立証されてきた。初乳は、分泌ＩｇＡの有用な給源であることが立証されたが、初乳抗体の精製と保存には、困難が経験された。特に、これまでに知られている方法によって単離された初乳抗体は、医薬組成物の調製および保存の間に見られる条件、あるいは、活性化の意図される部位に到達する前に、医薬組成物の遭遇するであろう生理的状態のいくつかに耐えるには、十分安定ではないかも知れないことが分かってきた。さらなる問題は、初乳抗体の投与において見いだされる。以前には、初乳抗体は、薬学的に許容されうる添加物を大きいパーセンテージで含む組成物で投与されてきた。これは、次第に、抗体投与が望まれるレベルに達するために多量の医薬組成物を必要とするので、結果的に非実用的な投与ということになった。先行技術の方法は、経口投与のために液体に溶解されるかまたは懸濁される散剤、あるいは経口投与のための初乳抗体の造粒およびカプセル化を必要としていた。これらの両方法は、有効な抗体レベルに確実に達するために、高い投与レベルの療法を必要とする。また、投薬は、抗体の起源によって複雑になる。それは、乳製品から得られるので、多量の乳糖は、しばしば分離された抗体と会合される。このことは、抗体を含む医薬組成物の全体容量の増加という結果になり、その組成物を、乳糖に寛容性のない個体への投与には不適切なものとする。したがって、本発明の目的は、先行技術において起きる１つ以上の難題を克服するか、または少なくとも軽減することである。驚くべきことに、本発明の方法により収集され、精製された初乳抗体を、活性の実質的損失なしに錠剤形態に圧縮することが可能であることを発見した。これは、圧縮錠剤を作製するのに必要な力は、その錠剤に存在するいかなる抗体をも変性し、破壊するであろうと考えるこれまで受け入れられてきた見解と反するものである。したがって、本発明の第一の態様においては、（ｉ）初乳から乳脂肪を除去して低脂肪初乳を得ること；（ｉｉ）低脂肪初乳を低温殺菌すること；（ｉｉｉ）低温殺菌された低脂肪初乳を凝固させ、そしてカゼインを含有する乳カードを除去すること；（ｉｖ）残液を遠心して、沈殿物を除去すること；（ｖ）乳糖、無機質および水を除去して、抗体含有画分を得ること；（ｖｉ）抗体含有画分をＴＲＩＳ−ＨＣｌバッファーに溶解し、そして同一バッファーに対して透析すること；および（ｖｉｉ）抗体含有溶液を濃縮して、１０重量％の抗体溶液を得ること：を含む、抗体に富む初乳から高純度の免疫グロブリン調製物を得る方法が提供される。次いで、免疫グロブリン調製物は、抗体溶液を急速（ｓｎａｐ）凍結および凍結乾燥することによって保存されてもよい。段階（ｖ）における乳糖、無機質および水の除去は、逆浸透または限外濾過のような技術上既知のいかなる方法によって実施されてもよい。好ましくは、飽和硫酸アンモニウム溶液が、段階（ｉｖ）で得られた上澄液に添加されて、抗体含有画分を沈殿させ、そして得られる混合液が遠心される。次いで、乳糖、無機質および水を含んでいる上澄液は捨てられる。段階（ｖｉ）のバッファーは、好ましくは、０．０１ＭＴＲＩＳ−ＨＣｌバッファーｐＨ８であり、そして０．３２ＭＮａＣｌを含有する。免疫グロブリン・バッファー溶液は、好ましくは、同じバッファーの約５倍量に対して透析され、そしていかなる既知の装置を用いて透析されてもよい。好ましくは、Ａｍｉｃｏｎスパイラルメンブレンシステムまたは中空繊維法が使用される。特異初乳抗体は、初乳が収集される哺乳動物を免疫化することによって得られる。好ましくは、免疫化される動物は雌牛である。例えば、本発明の免疫グロブリン調製物は、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、ビブリオ・コレラ（Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａ）のような腸内毒性細菌、原生動物クリプトスポリジウム（ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、腸内毒性ウイルス、および特定の毒素に対する特異抗体を含んでもよい。上記方法により得られる免疫グロブリン調製物は、高純度と同様に改善された安定性を有するであろう。本発明の第二の態様では、好ましくは初乳から得られる活性抗体成分を含むコア要素（ｃｏｒｅｅｌｅｍｅｎｔ）（この場合、コア要素は、錠剤の形状で、好ましくは圧縮錠剤の形状で存在する）を含む医薬組成物が提供される。その錠剤を調製するために使用される圧縮力は、それが、活性抗体を損傷しないか変性しないようなものである。好ましくは、その圧縮力は、約０．１トン／ｃｍ²〜４２．１トン／ｃｍ²；より好ましくは、約１．３トン／ｃｍ²〜１０．５トン／ｃｍ²；より好ましくは、約８トン／ｃｍ²である。本発明のコア要素は、同時投与のための抗体の混合物を含んでもよい。また、コア要素は、他の有効成分、例えば抗ヒスタミン薬、抗生物質、抗結核薬、コリン性薬、抗ムスカリン様薬、交感神経興奮薬、交感神経遮断薬、自律神経作用薬、鉄製剤、止血剤、強心薬、抗高血圧症薬、血管拡張薬、非ステロイド性抗炎症薬、アヘン作動薬、鎮痛剤、トランキライザー、覚醒薬、催眠薬、鎮静剤、去痰薬、鎮吐薬、胃腸薬、重金属拮抗剤、抗甲状腺薬、性尿器平滑筋弛緩剤およびビタミン類を含んでもよい。本発明のコア要素は、初乳から得られた活性抗体を約２０〜９０重量％、好ましくは４０〜８０重量％含有するのが好適である。コア要素のほかには、上記の他の有効成分を含んでもよく、さらに、薬学的に受容できる担体もしくは添加物、賦形剤、安定剤、可塑剤、界面活性剤、滑沢剤、発泡剤、結合剤および着色剤を含んでもよい。適切な賦形剤は、不溶性物質、例えば、二酸化ケイ素、タルク、二酸化チタン、アルミナ、澱粉、カオリン、ポラクリリン（ｐｏｌａｃｒｉｌｉｎ）カリウム、粉末セルロース、微結晶セルロース、アミロペクチンＮ、Ａｅｒｏｓｉｌ（商標）、Ｓｉｐｅｒｎａｔ２２（商標）、Ｓｉｐｅｒｎａｔ２２Ｓ（商標）およびそれらの混合物のような合成シリカ、そしてマニトール、蔗糖、乳糖、デキストロース、塩化ナトリウム、ソルビトールおよびそれらの混合物から選ばれる可溶性賦形剤から選ばれてもよい。結合剤は、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、糖類およびそれらの混合物から選ばれてもよい。発泡剤は、好ましくは、クエン酸と重炭酸ナトリウムの混合物である。ステアリン酸マグネシウムは、である。本発明の好適な形態においては、コア要素は、腸溶コーティングを施される。腸溶コーティングは、酸性媒体中では不溶性であるが、中性もしくはアルカリ性媒体中では可溶性であって、そのために腸溶コーティングは、錠剤を保護し、錠剤が腸内でその薬理活性を発揮できるようにする。腸溶コーティングは、技術上既知のいかなる腸溶コーティングであってもよい。そのようなコーティング剤は、酢酸フタル酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸クエン酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタアクリル酸コポリマー、セラック酢酸トリメリット酸セルロースおよびそれらの混合物を包含する。特に好適な腸溶性ポリマーは、商品名ＥｕｄｒａｇｉｔＬ１００−５５の固体であり、そしてメタアクリル酸：アクリル酸エチルエステル１：１コポリマーである。本発明のさらなる実施態様においては、腸溶コーティングは、コア要素に含まれる有効成分の徐放性を提供するために適応されてもよい。そのような実施態様においては、また腸溶コーティングは、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコールのようなポリマー、および糖類、塩類もしくは有機酸およびそれらの混合物のようなそれらのモノマーから選ばれる少なくとも１種の部分的酸可溶成分を含んでもよい。また、腸溶コーティングは、エチルセルロース、アクリル酸および／またはメタアクリル酸エステルポリマー、またはそれらの混合物から選ばれる少なくとも１種の不溶性骨格ポリマーを含んでもよい。部分的酸可溶成分は、いずれか賦形剤もしくは可塑剤の重量を除く腸溶コーティングの全重量に基づき、腸溶コーティング中に約１〜６０重量％、好ましくは１５〜４０重量％、より好ましくは２０〜３５重量％存在してもよい。不溶性骨格ポリマーは、いずれか賦形剤および可塑剤の重量を除く腸溶コーティングの全重量に基づき、腸溶コーティング中に約１〜８５重量％、好ましくは３５〜７５重量％、より好ましくは４５〜６５重量％存在してもよい。可塑剤は、腸溶コーティングの全重量に基づき、腸溶コーティング中に好ましくは０〜５０重量％存在してもよい。可塑剤は、セチルアルコール、フタル酸ジエチル、クエン酸トリエチル、クエン酸トリエチルアセチル、トリアセチン、クエン酸トリブチル、ポリエチレングリコールおよびグリセロール、等から選ばれてもよい。可塑剤の選択は、大きくは、腸溶コーティングに使用されるポリマー、およびコーティング溶液または分散液と、可塑剤との適合性によって決定されるであろう。賦形剤は、腸溶コーティングの全重量に基づき、約０〜７５重量％存在してもよい。賦形剤は、二酸化ケイ素、二酸化チタン、タルク、アルミナ、澱粉、カオリン、粉末セルロースおよび微結晶セルロース、およびそれらの混合物のような不溶性物質から選ばれてもよい。本発明のさらなる態様においては、初乳から得られる免疫グロブリン調製物を含むコア要素を含む医薬調製物を調製する方法が提供されるが、その方法は、（ａ）抗体に富んだ初乳を提供すること、（ｂ）初乳から免疫グロブリン調製物を単離すること、そして（ｃ）該免疫グロブリン調製物からコア要素を形成すること：を含む。本方法によって製造されるコア要素は、好ましくは錠剤、より好ましくは圧縮錠剤である。圧縮錠剤は、それらが、活性抗体を損傷または変性しないような圧縮力を用いて形成される。特に好適な実施態様では、本コア要素は、腸溶コーティングを施される。これは、パンコーター中のコア要素上に、コーティング剤を噴霧するような慣用的方法によって行われてもよい。好ましくは、コーティング剤は、医薬調製物の２〜５重量％を含む。適切な腸溶コーティング組成物は、それに関して前述したいかなる化合物をも含んでもよい。ここに、本発明は、実施例に関して、より完全に説明されるであろう。しかしながら、次の記述は、単に具体的な説明であると理解すべきであり、そしていかなる場合にも、前記本発明の普遍性を制限するものとして取らえるべきではない。実施例１抗体の生産酪農乳牛２頭が、旅行者の下痢に関与する体細胞の血清グループＯ８およびＯ１５を表す腸内毒素生成菌Ｅ．コリの混合株を用いて免疫された。細菌は、加熱して不活性化され、そして生理食塩水２ｍｌ中菌数２ｘ１０⁹の懸濁液を、同容量のＭｏｎｔａｎｉｄｅＩＳＡ７０アジュバントを用いて乳化した。得られるワクチンを、妊娠期間の最後の８週間に週１度投与した。抗体の単離および精製初乳を、授乳の最初の２日間収集した。乳脂肪を除去し、そして脱脂乳を、５６℃で３０分間低温殺菌し、次いでHilpert，Human Milk Banking 1984におけるようにレンネットにより凝固させた。カゼインを含有する乳カードを除去した後、ホエーを遠心し、その微細沈殿物を捨てた。 Brandon et al，Aust．J．Exp．Biol．Med．Sci.，1971，v 40，p613記載のように、等容量の飽和硫酸アンモニウム溶液を連続的に混合しながら、その上澄液に徐々に添加した。遠心後、得られる沈殿物を保存し、乳糖と塩類を含む上澄液を捨てた。その沈殿物を、０．３２ＭＮａＣｌを含む０．０１ＭＴＲＩＳ−ＨＣｌバッファーｐＨ８（始発容量の３０％）中に溶解した。この溶液を、ＡｍｉｃｏｎスパイラルメンブレンＳＩＹ３０カートリッジを用いて５倍量の同一バッファーに対して十分に透析した。次に、抗体溶液を１０％まで濃縮し、急速凍結し、そして凍結乾燥した。抗体錠剤の調製凍結乾燥した抗体粉末を、各重量５００ｍｇの高い溶解性の錠剤に成形した。各錠剤は、次のように含む：初乳抗体８０％微結晶セルロース６％カルボキシメチルセルロース３．２％クエン酸６％重炭酸ナトリウム６％ステアリン酸マグネシウム０．８％全成分を、圧縮前に、コニカルミキサー中で乾式混合物として混合した。得られる粉末混合物を、ローラーコンパクターを用いて引き締めた。造粒は、単発式Ｍａｎｅｓｔｙ錠剤機で圧縮された。腸溶コーティング可塑剤として３％セチルアルコール（ｗ／ｗ）を含むＥｕｄｒａｇｉｔＬ１００−５５ポリマーの水性分散液を含む腸溶コーティング剤を、慣用のパンコーター中で、錠剤上に噴霧した。十分な皮膜強度は、コーティング混合物２〜５％（ｗ／ｗ）を用いて達成された。試験コーティングされた錠剤は、崩壊試験にかけられ、そしてｐＨ６．５では９〜１２分内、ｐＨ８では５〜９分内に溶解された。錠剤に圧縮される前の抗体顆粒中の抗体活性が、未コーティングおよびコーティングされた抗体錠剤と比較された。顆粒、未コーティング錠およびコーティング錠が、リン酸−生理食塩水バッファーｐＨ８１００ｍｌに別々に溶解された。３種の溶液の抗体価は、ＥＬＩＺＡアッセイを用いて比較された。ＥＬＩＺＡプレートは、ワクチン接種に使用された細菌の懸濁液で一夜塗膜された。次いで、そのプレートを、抗体溶液の血清希釈液を試験するために、標準法で処理した。抗体価は、すべて３種の溶液について同じであって、圧縮され腸溶コーティングされた錠剤中の抗体活性の完全な維持を示した。実施例２初乳抗体の圧縮抗体Ｅ．コリＫ８８に対する初乳抗体が、実施例１の方法に従って単離され精製された。圧縮試験のための抗体の製剤化抗体を、ピンローラーによって粉砕し、３０メッシュの篩にかけた。得られる抗体粉末を、０．５％ｗ／ｗＳｉｐｅｒｎａｔ２２Ｓを含む混合容器に添加した。十分な混合（５分間）の後、１３．５％ｗ／ｗＳｉｐｅｒｎａｔ２２および８．５％ｗ／ｗＡｍｙｌｏｐｅｃｔｉｎＮを添加し、さらに５分間抗体粉末と混合した。最後に、０．５％ｗ／ｗステアリン酸マグネシウムを添加し、２分間混合した。得られる錠剤用混合物は、圧縮試験に使用される次の剤形を有した：抗体粉末７７重量％Ｓｉｐｅｒｎａｔ２２１３．５重量％ＡｍｙｌｏｐｅｃｔｉｎＮ８．５重量％Ｓｉｐｅｒｎａｔ２２Ｓ０．５重量％ステアリン酸Ｍｇ０．５重量％圧縮試験圧縮試験は、注文製作の臼と杵のセットを用いる注文製作の圧縮装置を使用した。５種の錠剤を、指定された圧力レベルで製造した。錠剤用粉末を含む臼と杵のアッセンブリー全体を、圧縮装置の支持枠の中に設置した。５〜１６０キロニュートン（ｋＮ）の力を、水圧ピストンによって上杵に適用した。ピストンの作動表面は、７３．１ｃｍ²であり、杵チップの表面は、０．３８ｃｍ²であった。錠剤に伝達される杵チップ圧の範囲は、それぞれ、１ｃｍ²当たり１．３００〜４２，１００ｋｇにわたった。免疫活性の評価のための圧縮錠剤の調製表１に示した各圧力点からの３種の錠剤を、乳鉢と乳棒で細粉に粉砕した。その粉末１００ｍｇを試験管に移し、リン酸−生理食塩水バッファーｐＨ７．２１０ｍｌを添加した。圧縮されなかった粉末状の錠剤用混合物１００ｍｇを、対照として用いた。試験管をＣｏｕｌｔｅｒミキサー上に設置し、抗体を一夜室温で抽出した。抽出後、その試験管を、３０００ｒｐｍで１時間遠心し、上澄液の一部を、ＥＬＩＺＡ試験を用いて抗体活性をアッセイした。Ｅ．コリに対する抗体活性測定のためのＥＬＩＺＡアッセイＥＬＩＺＡアッセイは、本質的に、Voller A．et al．（1980）Enzyme linked immunosorbent assay記載のように実施された。Manual of Clinical immunolog y，pp．359-371，Eds N.R．Rose & H．Friedman．American Society for Microb iology，Washington，D.C．に掲載。そのアッセイの変法が、Ｅ．コリＫ８８抗原に対する抗体活性を測定するために導入された。簡単言えば、炭酸バッファー（０.１Ｍ，ｐＨ９.６）中、菌数１０⁹個のＥ．コリＫ８８懸濁液１００μｌを、平底Ｎｕｎｃｐｏｌｙｓｏｒｂプレートの各ウェルに入れ、４℃で一夜インキュベートした。プレートを、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎバッファー（０．１ＭＰＢＳおよびＴｗｅｅｎ２０，０．０５％ｖ／ｖ）により３回洗浄した。洗浄後、作業バッファー（０．２５％ｗ／ｗＢＳＡが添加されたＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎバッファー）中に希釈された試薬を１００μｌ／ウェル添加後に続く１時間のインキュベートからなるプレートの処理は、その間に、各々３回の洗浄を行って、次の規定で行われた：（１）作業バッファー中１：１００に希釈された被検抗体は、プレートを横行して連続的に希釈され、（２）作業バッファー中、パーオキシダーゼ共役ウサギ抗ウシ免疫グロブリンは、１：１０００に希釈された。最後に、クエン酸バッファー（９６ｍｌ）、過酸化水素（蒸留水１０ｍｌ中３０％過酸化水素１２６μｌ，２ｍｌ）、ＡＢＴＳ＠（２ｍｌ）を含有する基質溶液を、各ウェルに添加した。２．５時間後、プレートを、４．４ｎｍにおける吸光度について精査した。結果研究は、初乳抗体の免疫活性に及ぼす圧縮圧の影響を評価した。７７％の抗体粉末および２３％の崩壊剤および他の添加物を含む錠剤用混合物を、１．３〜４２．１トン／ｃｍ²の圧力範囲で圧縮した。対照を含む全ての抗体サンプルを、同じＥＬＩＺＡアッセイで試験した。研究の結果を、図１と表２に示した。図１は、圧縮にかけなかった対照抗体粉末と、圧縮された抗体との免疫活性を比較する棒グラフである。表２は、ＥＬＩＺＡ吸収の読みの生データを含む。対照サンプル（圧縮にかけられなかった抗体粉末）の平均Ｌｏｇ変換値は、３．６２±０．４であり、全部を含むサンプルの平均は、３．３７±０．６であった。結論最終圧４２．１トン／ｃｍ²は、市販装置の最高承認圧を５倍超上回った。驚くべきことに、初乳抗体の免疫活性は、試験された圧力の全範囲にわたって保たれた。これらの結果は、本明細書記載のように製剤化された初乳抗体は、免疫活性の有意な損失なしに錠剤化できることを示している。種々の他の修飾および／または変更が、本明細書に概説された本発明の精神を逸脱することなしに行われることを、理解すべきである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年８月９日【補正内容】５．ＴＲＩＳ−ＨＣｌバッファーが、０．３２ＭＮａＣｌを含有するｐＨ８の０．０１Ｍ溶液である、請求の範囲１〜４のいずれか１つに記載の方法。６．ＴＲＩＳ−ＨＣｌバッファー溶液中の抗体が、Ａｍｉｃｏｎスパイラルメンブレンシステムまたは中空繊維システムを用いて、同じバッファーの５倍量に対して透析される、請求の範囲１〜５のいずれか１つに記載の方法。７．コア要素が、圧縮錠剤形状で存在する、活性抗体成分を含むコア要素を含んでなる医薬組成物。８．活性抗体成分が、初乳から得られる、請求の範囲７記載の医薬組成物。９．活性抗体成分が、請求の範囲１〜６のいずれか１つの方法に従って調製される、請求の範囲７または８のいずれかに記載の医薬組成物。１０．錠剤を調製するために使用される圧縮力が、それが、活性抗体を損傷しないか変性しないようなものである、請求の範囲７〜９のいずれか１つに記載の医薬組成物。１１．錠剤を調製するために使用される圧縮力が、約０．１トン／ｃｍ²〜約４２．１トン／ｃｍ²の範囲である、請求の範囲７〜１０のいずれか１つに記載の医薬組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｋ 1/30 8517−4ＨＣ０７Ｋ 1/30 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．抗体に富む初乳から高純度の免疫グロブリン調製物を得る方法であって、（ｉ）初乳から乳脂肪を除去して低脂肪初乳を得ること；（ｉｉ）低脂肪初乳を低温殺菌すること；（ｉｉｉ）低温殺菌された低脂肪初乳を凝固させ、そしてカゼインを含有する乳カードを除去すること；（ｉｖ）残液を遠心して、沈殿物を除去すること；（ｖ）乳糖、無機質および水を除去して、抗体含有画分を得ること；（ｖｉ）抗体含有画分をＴＲＩＳ−ＨＣｌバッファーに溶解し、そして同一バッファーに対して透析すること；および（ｖｉｉ）抗体含有溶液を濃縮して、１０重量％の抗体溶液を得ること：を含む方法。２．段階（ｖｉｉ）で得られた抗体溶液が、抗体粉末を得るために、急速（ｓｎａｐ）凍結および凍結乾燥される、請求の範囲１記載の方法。３．段階（ｖ）における乳糖、無機質および水の除去が、飽和硫酸アンモニウム溶液を、段階（ｉｖ）で得られた上澄液に添加して、抗体含有画分を沈殿させ；その沈殿物を分離するために遠心し；そして、乳糖、無機質および水を含んでいる上澄液を捨てることによって達成される、請求の範囲１または２のいずれかに記載の方法。４．飽和硫酸アンモニウム溶液が、段階（ｉｖ）からの上澄液に等容量で添加される、請求の範囲３記載の方法。５．ＴＲＩＳ−ＨＣｌバッファーが、０．３２ＭＮａＣｌを含有するｐＨ８の０．０１Ｍ溶液である、請求の範囲１〜４のいずれか１つに記載の方法。６．ＴＲＩＳ−ＨＣｌバッファー溶液中の抗体が、Ａｍｉｃｏｎスパイラルメンブレンシステムまたは中空繊維システムを用いて、同じバッファーの５倍量に対して透析される、請求の範囲１〜５のいずれか１つに記載の方法。７．コア要素が、錠剤形状で存在する、活性抗体成分を含むコア要素を含んでなる医薬組成物。８．活性抗体成分が、初乳から得られる、請求の範囲７記載の医薬組成物。９．活性抗体成分が、請求の範囲１〜６のいずれか１つの方法に従って調製される、請求の範囲７または８のいずれかに記載の医薬組成物。１０．錠剤を調製するために使用される圧縮力が、それが、活性抗体を損傷しないか変性しないようなものである、請求の範囲７〜９のいずれか１つに記載の医薬組成物。１１．錠剤を調製するために使用される圧縮力が、約０．１トン／ｃｍ²〜約４２．１トン／ｃｍ²の範囲である、請求の範囲７〜１０のいずれか１つに記載の医薬組成物。１２．錠剤を調製するために使用される圧縮力が、約１．３トン／ｃｍ²〜約１０．５トン／ｃｍ²の範囲である、請求の範囲７〜１１のいずれか１つに記載の医薬組成物。１３．錠剤を調製するために使用される圧縮力が、約８トン／ｃｍ²である、請求の範囲７〜１２のいずれか１つに記載の医薬組成物。１４．活性抗体成分が、腸内毒性細菌、原生動物、クリプトスポリジウム（ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、腸内毒性ウイルス、および特定の毒素に対する特異抗体から選ばれる１種以上の抗体を含む、請求の範囲７〜１３のいずれか１つに記載の医薬組成物。１５．腸内毒性細菌に対する抗体が、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）およびビブリオ・コレラ（Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａ）に対する抗体である、請求の範囲１４記載の医薬組成物。１６．コア要素が、抗ヒスタミン薬、抗生物質、抗結核薬、コリン性薬、抗ムスカリン様薬、交感神経興奮薬、交感神経遮断薬、自律神経作用薬、鉄製剤、止血剤、強心薬、抗高血圧症薬、血管拡張薬、非ステロイド性抗炎症薬、アヘン作動薬、鎮痛剤、トランキライザー、覚醒薬、催眠薬、鎮静剤、去痰薬、鎮吐薬、胃腸薬、重金属拮抗剤、抗甲状腺薬、性尿器平滑筋弛緩剤およびビタミン類から選ばれるさらなる有効成分を含む、請求の範囲７〜１５のいずれか１つに記載の医薬組成物。１７．コア要素が、さらに、二酸化ケイ素、タルク、二酸化チタン、アルミナ、澱粉、カオリン、ポラクリリン（ｐｏｌａｃｒｉｌｉｎ）カリウム、粉末セルロース、微結晶セルロース、アミロペクチンＮ、Ａｅｒｏｓｉｌ（商標）、Ｓｉｐｅｒｎａｔ２２（商標）、Ｓｉｐｅｒｎａｔ２２Ｓ（商標）またはそれらの混合物から選ばれる合成シリカ、そしてマニトール、蔗糖、乳糖、デキストロース、塩化ナトリウム、ソルビトールおよびそれらの混合物、から選ばれる賦形剤を含む、請求の範囲７〜１６のいずれか１つに記載の医薬組成物。１８．コア要素が、さらに、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、糖類およびそれらの混合物から選ばれる結合剤を含む、請求の範囲７〜１７のいずれか１つに記載の医薬組成物。１９．コア要素が、さらに、発泡剤としてクエン酸および重炭酸ナトリウムの混合物を含む、請求の範囲７〜１８のいずれか１つに記載の医薬組成物。２０．コア要素が、活性抗体約２０〜９０重量％を含む、請求の範囲７〜１９のいずれか１つに記載の医薬組成物。２１．コア要素が、活性抗体約４０〜８０重量％を含む、請求の範囲７〜２０のいずれか１つに記載の医薬組成物。２２．活性コア成分が、次のように構成される、請求の範囲７〜２１のいずれか１つに記載の医薬組成物。初乳抗体８０％微結晶セルロース６％カルボキシメチルセルロース３．２％クエン酸６％重炭酸ナトリウム６％ステアリン酸マグネシウム０．８％２３．コア要素が、次のように構成される、請求の範囲７〜２２のいずれか１つに記載の医薬組成物。活性抗体７７重量％Ｓｉｐｅｒｎａｔ２２１３．５重量％ＡｍｙｌｏｐｅｃｔｉｎＮ８．５重量％Ｓｉｐｅｒｎａｔ２２Ｓ０．５重量％ステアリン酸マグネシウム０．５重量％２４．コア要素が、腸溶コーティングを施される、請求の範囲７〜２３のいずれか１つに記載の医薬組成物。２５．腸溶コーティングが、酢酸フタル酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸クエン酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタアクリル酸コポリマー、セラック酢酸トリメリット酸セルロースおよびそれらの混合物から選ばれるコーティング材料を含む、請求の範囲２４記載の医薬組成物。２６．腸溶コーティングが、メタアクリル酸：アクリル酸エチルエステル１：１コポリマーである腸溶性ポリマーを含む、請求の範囲２４記載の医薬組成物。２７．また、腸溶コーティングが、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコールおよび糖類のようなポリマー、それらの塩類もしくは有機酸、およびそれらの混合物から選ばれる少なくとも１種の部分的酸可溶成分を約１〜６０重量％含む、請求の範囲２４〜２６のいずれか１つに記載の医薬組成物。２８．また、腸溶コーティングが、エチルセルロース、アクリル酸および／またはメタアクリル酸エステルポリマー、およびそれらの混合物から選ばれる少なくとも１種の不溶性骨格ポリマーを約１〜８５重量％含む、請求の範囲２４〜２７のいずれか１つに記載の医薬組成物。２９．また、腸溶コーティングが、セチルアルコール、フタル酸ジエチル、クエン酸トリエチル、クエン酸トリエチルアセチル、トリアセチン、クエン酸トリブチル、ポリエチレングリコールおよびグリセロールから選ばれる可塑剤を、腸溶コーティングの全重量に基づき、約０〜５０重量％含む、請求の範囲２４〜２８のいずれか１つに記載の医薬組成物。３０．また、腸溶コーティングが、二酸化ケイ素、二酸化チタン、タルク、アルミナ、澱粉、カオリン、粉末セルロース、微結晶セルロースおよびそれらの混合物から選ばれる賦形剤を、腸溶コーティングの全重量に基づき、約０．７５重量％含む、請求の範囲２４〜２９のいずれか１つに記載の医薬組成物。３１．方法が、活性抗体を含む錠剤用粉末を提供し、そして錠剤用粉末を圧縮して錠剤を形成することを含む、活性抗体を含むコア要素を含んでなる医薬調製物を調製する方法。３２．活性抗体が、抗体に富む初乳から単離される、請求の範囲３１記載の方法。３３．錠剤が、約０．１〜約４２．１トン／ｃｍ²の力を用いて圧縮される、請求の範囲３１または３２のいずれかに記載の方法。３４．錠剤が、約１．３〜約１０．５トン／ｃｍ²の圧縮力を用いて形成される、請求の範囲３１〜３３のいずれか１つに記載の方法。３５．コア要素が、医薬調製物の２〜５重量％を含む腸溶コーティングを施される、請求の範囲３１〜３４のいずれか１つに記載の方法。３６．実質的に、実施例１または２のいずれかに関して前述された医薬調製物を調製する方法。３７．実質的に、実施例１または２のいずれかに関して前述された医薬組成物。