FI91166C - Ternimaitofraktio, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö kasvualustojen täydennysaineena - Google Patents
Ternimaitofraktio, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö kasvualustojen täydennysaineena Download PDFInfo
- Publication number
- FI91166C FI91166C FI914911A FI914911A FI91166C FI 91166 C FI91166 C FI 91166C FI 914911 A FI914911 A FI 914911A FI 914911 A FI914911 A FI 914911A FI 91166 C FI91166 C FI 91166C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- colostrum
- fraction
- cell culture
- ultrafiltrate
- cell
- Prior art date
Links
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 239000013589 supplement Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 28
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 8
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 title description 10
- 239000008267 milk Substances 0.000 title description 10
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 title description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 7
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 claims abstract description 64
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 claims abstract description 64
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims abstract description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 13
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 claims description 10
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 claims description 10
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 9
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 8
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 7
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 claims 2
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 claims 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 abstract description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 43
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 19
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 17
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 15
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 15
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 15
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 15
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 14
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 13
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 9
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 6
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 6
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 6
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 5
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 4
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100040006 Annexin A1 Human genes 0.000 description 3
- 101000959738 Homo sapiens Annexin A1 Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 3
- 239000012480 LAL reagent Substances 0.000 description 3
- 101000929342 Lytechinus pictus Actin, cytoskeletal 1 Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 2
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 description 2
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 description 2
- BFVQTKQTUCQRPI-YYEZTRBPSA-N LPS with O-antigen Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O5)O)O4)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)NC(C)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)NC(C)=O)O2)NC(C)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)OC1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)OC([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H]([C@@H](O)COC2[C@H]([C@@H](O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]([C@@H](O)CO)O2)O)OC([C@H]1O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCCN)[C@@H]([C@@H](O)CO)OC([C@H]1O)O[C@H]1[C@H](O[C@]2(O[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@]3(O[C@@H]([C@@H](O)[C@H](OP(O)(=O)OCCN)C3)[C@@H](O)CO)C(O)=O)C2)[C@@H](O)CO)C(O)=O)C[C@](O[C@@H]1[C@@H](O)CO)(OC[C@H]1O[C@@H](OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O2)O)[C@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@H]([C@@H]1OP(O)(O)=O)OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1NC(C)=O BFVQTKQTUCQRPI-YYEZTRBPSA-N 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000000356 anti-lactoferrin effect Effects 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 2
- 229940057428 lactoperoxidase Drugs 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 101000766306 Homo sapiens Serotransferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 1
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 1
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000207836 Olea <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 240000007313 Tilia cordata Species 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 102000002070 Transferrins Human genes 0.000 description 1
- 108010015865 Transferrins Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000004640 cellular pathway Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 108010031561 colostrum growth factor Proteins 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229940031098 ethanolamine Drugs 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- -1 for example Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 description 1
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012913 medium supplement Substances 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Substances OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 238000011169 microbiological contamination Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 229940082569 selenite Drugs 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021241 α-lactalbumin Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
- C12N5/0037—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/70—Undefined extracts
- C12N2500/80—Undefined extracts from animals
- C12N2500/84—Undefined extracts from animals from mammals
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
i 91166
Ternimaitofraktio, menetelmS sen valmistamiseksi ja sen kSyttd kasvualustojen t&ydennysaineena
KeksintO koskee ternimai tof rakt iota, menetelmaa sen 5 valmistamiseksi sek& sen kfcyttdS kasvualustojen taydennys-aineena. Keksinndn mukaisella ternimaitofraktiolla on al-hainen endotoksiini-, proteiini- ja immunoglobuliinipitoi-suus ja se valmistetaan ultrasuodattamalla esik&siteltyå ternimaitoa.
10 Nisdkassolujen viljelyssé in vitro kSytetaan perin- teisesti perusalustan lisSna nisakkaiden veren seerumia, joka sisaltaa useita osin tuntemattomia solujen kasvua stimuloivia aineita, mm. kasvutekijbita, vitamiineja, hi-venaineita, hormoneja ja tarttumistekijdita. Useimpiin 15 kayttOtarkoituksiin sopivin on naudan sikiOseerumi, jonka hinta on viime vuosina noussut voimakkaasti kysynnan laa-jetessa. Toisena syyna hinnan nousuun on ollut kyllin puh-taan seerumin saannin vaikeus. Korkean hinnan lisaksi on-gelmana on seerumin kompleksinen koostumus ja erityisesti 20 korkea proteiinipitoisuus, mika haittaa soluviljelylia tuotettujen aineiden eristamista soluviljelyalustasta. Kontaminaatiovaara on lisaksi suuri kSytettaesså seerumia kasvualustojen taydennysaineena.
Monoklonaalisten vasta-aineiden tuottaminen muodos-25 taa seka teknisesti etta taloudellisesti merkittavån osan eiainsoluviljelyteknologiasta. Monoklonaalisia vasta-ai-neita tuotetaan suuria maariå erilaisiin kliinisiin ja tieteellisiin tarkoituksiin. Monoklonaalisten vasta-aineiden suuren mittakaavan tuotannossa on tarkeaa kayttaa so-30 pivaa viljelyalustaa. Vasta-aineiden tuoton tulisi olla jatkuvaa ja toisinnettavissa, prosessikustannusten tulisi olla mahdollisimman alhaiset, vasta-aineiden puhdistuksen tulisi olla helppoa ja mikrobien ja endotoksiinien aiheut-tamia kontaminaatio-ongelmia tulisi vaitt&å. T3ma koskee 35 mybs muiden kliinisesti k&ytettdvien biologisten aineiden, 2 kuten kasvutekijOiden, hormonien ja rokotteiden, valmis-tusta geenitekniikan keinoin. Naita vaatimuksia on kuiten-kin hyvin vaikea tayttaa, kun naudan sikiOseerumia kSyte-tåån viljelyalustan tSydennysaineena.
5 Nain olien on pyritty lOytamaan vaihtoehtoja seeru- mille kehittamaiia erilaisia perusalustoja ja seerumin korvikkeita. Nama sisaitavat kokonaan tai osittain puhdis-tettuja kasvua stimuloivia aineita, jotka on joko tuotettu biosynteettisesti tai eristetty suoraan biologisesta mate-10 riaalista. Tailaisia kasvua stimuloivia aineita, joita esiintyy paitsi seerumissa myOs naudan ternimaidossa, ovat esimerkiksi eri peptidikasvutekijat kuten insuliini ja in-suliinin kaltaiset kasvutekijat (IGF-1 ja IGF-2). Kasvute-kijOiden synteesi, eristaminen ja puhdistaminen on yleenså 15 vaikeaa, eikå suuren mittakaavan tuotantoon soveltuvia me-netelmia ole kuvattu alan kirjallisuudessa. Puhdistettujen kasvutekijOiden kéyttoa rajoittaa myOs niiden sikiOseeru-miakin korkeampi hinta.
Maidon ja juuston valmistuksen sivutuotteena syn-20 tyvan heran fraktioiden kayttoa soluviljelyalustojen tay-dennysaineena on kuvattu alan kirjallisuudessa. Maidon kasvutekijaaktiivisuus laskee kuitenkin jyrkasti poikimi-sen jaikeen ja on jo kolmen vuorokauden kuluttua ja my6-henunissa laktaation vaiheissa hyvin alhainen, lahes olema-25 ton. Maito sisaltaa tosin mahdollisesti muita solujen kasvua edistavia aineita, ravinteita ym, jotka voivat edes-auttaa solujen viljelya.
On myOs tunnettua, etta naudan ternimaito ja sen fraktiot stimuloivat nisakassolujen kasvua in vitro. Nau-30 dan ternimaito sisaitaa kuitenkin muiden solulle vaitta-mattOmien aineiden lisaksi suuria maaria immunoglobuliine-ja, paaosin IgG:ta, ja muita proteiineja, kuten kaseiini-miselleja, α-laktalbumiinia, β-laktoglobuliinia ja albu-miinia. Heti laktaation jaikeen IgG-pitoisuus voi olla 35 jopa 40 - 60 g/1. Kun ternimaitoa kdytetaan sellaisenaan li 91166 3 hybridomien viljelyyn, tåmå on selvå haitta, koska hybri-domatuotteiden eriståminen ja puhdistaminen vaikeutuvat.
Toinen vakava ongelma liittyy psykrotrooppisiin mikro-organismeihin, låhinnå gram-negatiivisiin bakteerei-5 hin, jotka ovat tavallisimmat xnaidon pilaajat såilytyksen aikana. Mikro-organismien tuottamat lipopolysakkaridit (endotoksiinit) ovat vastuussa monista gram-negatiivisten bakteerien aiheuttamiin infektioihin liittyvistå patofy-siologista vaikutuksista. Endotoksiinit ovat siten erit-10 tain haitallisia kontaminantteja ja niiden poistaminen on vålttåmåtontå etenkin silloin, kun soluviljelyssa tuotet-tuja aineita annetaan ihmisille.
EP-hakemusjulkaisussa 219 372, Linden et al., kuva-taan tavallisen maidon tietyn molekyylipainoisia frak-15 tioita, niiden valmistusta ja kåyttbå soluviljelysså. Jul-kaisun mukaan maito ensin ultrasentrifugoidaan, mikå on teknisesti vaikeaa suuren mittakaavan puhdistuksessa. Var-sinainen fraktiointi suoritetaan sitten aineiden erilai-seen molekyylikokoon perustuvalla ultrasuodatuksella, jon-20 ka erottelukyky on karkea. Nåin olien proteiinipitoisuus lopputuotteessa on hyvin korkea kasvutekijåaktiivisuuteen nahden. Keksijat ovat kuvanneet myos juuston valmistuksen sivutuotteena syntyvan heran tai sen fraktioiden kayttbå nisakåssolujen viljelysså (Biotechnology Techniques 2 25 (1988) s. 253 - 258, Damerdhjii et al. ja Lait 70 (1990) s. 313 - 324, Oerouiche et al.). Ongelmana nåissåkin on hyvin korkea proteiinipitoisuus ja kemiallisen sekå mikrobiologisen kontaminaation mahdollisuus.
EP-hakemusjulkaisussa 313 515, Biirk, R. R. & Cox, 30 D., kuvataan maidon polypeptidikasvutekijåå, menetelmiå sen eriståmiseksi ja puhdistamiseksi maidosta ja maito-tuotteista, sekå sen kåyttoå farmaseuttisena aineena, ra-vintokoostumusten lisåaineena ja soluviljelyalustojen tåy-dennysaineena. Julkaisussa kuvattu menetelmå kåsittåå ka-35 tioninvaihtokromatografiaa, hydrofobista interaktiokroma- 4 tografiaa, kokoon perustuvaa ekskluusiokromatografiaa ja polyakryyliamidigeelielektroforeesia. Kuten jo aikaisemmin todettiin laskee maidon kasvutekijaaktiivisuus jyrkåsti poikimisen jalkeen. Ternimaitoa ja sen kasittelya el kui-5 tenkaan julkaisussa mainita.
US-patenttijulkaisussa 4 440 860, Klagsbrun, kuva-taan maitoa tal ternimaitoa ja fibronektiinia sisaitavia soluviljelyalustoja ja niiden valmistusta. Julkaisun mu-kaan fraktiot valmistetaan geelisuodatuksella ja isoelekt-10 risella fokusoinnilla, joka ei sovellu suuren mittakaavan tuotantoon. Julkaisussa ei ole esitetty, miten taataan lopputuotteen mikrobiologinen puhtaus. Julkaisussa kuvat-tujen fraktioiden kasvutekijaaktiivisuutta ei ole verrattu naudan sikittseerumiin, joka on yleisin soluviljelyalus-15 toissa kaytOssa oleva seerumityyppi, vaan oleellisesti vahemmån aktiivisuutta sisaitavaan vasikan seerumiin. Fraktioiden endotoksiinipitoisuutta ei mainita lainkaan. Lisaksi on todettava, etta julkaisussa kasiteliaan saman-laisina eri nisSkSslajien ternimaidon kasvutekijSfraktioi-20 ta. MyOhemmin on kuitenkin todettu, etta esimerkiksi naudan ja ihmisen ternimaidon paaasialliset kasvutekijat poikkeavat niin paljon toisistaan, ettei niiden eristami-seksi voida kåyttaa samaa menetelmaa (Endocrinology 115 (1984) s. 273 - 282, Shing, Y. W. & Klagsbrun, M.).
25 Shing et al. ovat teoksessa Methods in Enzymology, vol. 146, toimittajat Barnes D. ja Sirbasku, D. A., kuvan-neet naudan ternimaidon kasvutekijan (BCGF:n) puhdistusme-netelman, joka perustuu kationinvaihtoon, isoelektriseen fokusointiin ja suuren erotuskyvyn ekskluusiokromatogra-30 fiaan. Menetelma ei sovellu kasvutekijan eristamiseen tuo-tannollisessa mittakaavassa.
Francis et al. ovat julkaisussa Biochem. J. 251 (1988) s. 95 - 103 kuvatun menetelman mukaisesti erista-neet ja karakterisoineet naudan ternimaidosta insuliinin-35 kaltaiset kasvutekijat IGF-1 ja IGF-2. Nama ovat molekyy- 91166 5 lipainoltaan 8000 ja 7000 D ja rakenteeltaan lahes ident-tiset ihmisen vastaavien tekijOlden kanssa. Monlvalhelnen ja hankala menetelma kasittaa nun. uselta kationinvaihto-kromatografia- ja kaanteisfaasi-HPLC-vaiheita, eika siten 5 sovellu suuren mlttakaavan tuotantoon.
Tunnetut menetelmat ovat slls kalkkl monlvaihelsla ja hankalia suorlttaa eivatka sovellu suuren mlttakaavan tuotantoon. Monimutkaiset ja aikaavievét puhdistusoperaa-tlot lisaavat myiis tuottelden hlntaa. Lisaksi on huomat-10 tava, etta julkaisuissa el ole esitetty, miten taataan lopputuotteen mikrobiologinen puhtaus. Lopputuotteen endo-toksiinipitoisuutta el myOskaan julkaisuissa mainita. En-dotoksiineja ja niiden aiheuttamia ongelmia ei julkaisuissa kuvata, eika niissa siten myOskaan ole esitetty rat-15 kaisua naihin ongelmiin.
Ternimaidon suurimmat haittapuolet viljelyalustojen taydennysaineena ovat sen korkea proteiini- ja IgG-pitoi-suus seka yleensa korkea endotoksiinipitoisuus. Ternimai-dossa olevat virukset saattavat myiis estaa solujen kasvua 20 ja jopa tappaa soluja. Ternimaidon korkea proteiinipitoi- suus ja sen sisaltamat liukenemattomat sedimentit vaikeut-tavat my6s ternimaidon kasittelya ja tekevat esimerkiksi rasvattoman ternimaidon steriloinnin mikrosuodattimien avulla lahes mahdottomaksi. Mikali suuria maaria rasvaton-25 ta ternimaitoa lisataan viljelyalustaan, perusalustaan muodostuu lisaksi saostumia.
Nyt on yliattaen havaittu, etta naudan ternimaidos-ta voidaan tassa hakemuksessa kuvatulla menetelmaiia muo-dostaa fraktio, jolla on hyvin alhainen proteiini- ja im-30 munoglobuliinipitoisuus ja jonka endotoksiinipitoisuus on kaytannOllisesti katsoen nolla. Lopputuote sisaitaa kaikki ternimaidossa olevat kasvutekljat, hivenaineet, vitamiinit ja muut soluviljelyn kannalta vaittamattOmat pienimoleku-laariset yhdisteet. Maidossa olevat haltalliset endotok-35 siinit sen sijaan poistetaan prosessin aikana. MyOs mah- 6 dolliset viruspartikkelit todennåkoisesti poistuvat, mika tietysti våhentaå soluviljelyn lopputuotteiden kontaminaa-tiovaaraa.
Keksinto koskee siten ternimaitofraktiota, jolla on 5 alhainen endotoksiini-, proteiini- ja immunoglobuliinipi-toisuus.
Keksinnon mukainen ternimaitofraktio voidaan val-mistaa keksinnon mukaisella menetelmållå, jolle on tunnus-omaista, ettå esikåsitellylle ternimaidolle suoritetaan 10 ultrasuodatuskåsittely kåyttåen membraania, jonka cut off on 100 000, ja suodos otetaan talteen.
Keksinnon mukainen menetelma perustuu siis ultra-suodatukseen. Ternimaito esikåsitellåan ensin rasvan ja mahdollisten solujåanteiden poistamiseksi. Haluttaessa 15 rasvattomasta ternimaidosta voidaan muodostaa heraliuos poistamalla kaseiini esimerkiksi happo- tai entsyymisaos-tuksella. Muodostunut rasvaton ternimaito tai hera ultra-suodatetaan sitten kayttåen membraania, jonka cut off on 100 000 ja suodos otetaan talteen. MenetelmS soveltuu ai-20 kaisemmin esitettyihin menetelmiin verrattuna erittåin hyvin suuren mittakaavan tuotantoon ja lopputuotteen puh-taus voidaan varmistaa esimerkiksi steriilisuodatuksella.
Menetelmåvaihtoehto, jossa kaseiinisaostusta ei suoriteta, on edullisempi, koska se on yksinkertaisempi ja 25 halvempi suorittaaa. Toisaalta, jos kaseiinisaostus suoritetaan, saadaan jonkin verran parempi tuote, eli saadulla ultrasuodoksella on alempi proteiini- ja immunoglobuliini-pitoisuus.
Keksinnon mukainen ternimaitofraktio on erittåin 30 kåyttokelpoinen joko sellaisenaan tai tehostettuna muilla tåydennysaineilla yleisesti kåytetyisså soluviljelyyn tar-koitetuissa alustoissa korvaamaan osittain tai kokonaan naudan sikioseerumin. Fraktion vaikutusta voidaan tehostaa lisååmållå yhtå tai useampaa tåydennysainetta, kuten esi-35 merkiksi natriumseleniittiå, insuliinia, etanoliamiinia,
II
91166 7 β-merkaptoetanolia, naudan seerumialbumiinia tms.
Keksinndn mukainen ternimaitofraktio valmistetaan siis naudan ternimaidosta. Edullisesti raaka-aineena kay-tetéén parin vuorokauden sisaiia poikimisen jalkeen lyp-5 settyå ternimaitoa. Ternimaito voidaan pakastaa tilalla ennen kasittelyjen aloittamista.
Ternimaidosta poistetaan aluksi rasva ja mahdol-liset solujaanteet esimerkiksi sentrifugoimalla, kayttåen tavanomaista meijeriseparaattoria tai suodattamalla.
10 Haluttaessa rasvattomalle ternimaidolle suoritetaan steriilisuodatuskasittely, joka kasittaa ternimaidon suo-dattamisen joko yhden tai useamman erikokoisen mikrosuo-dattimen lapi. Steriilisuodatus ei ole vaittamatiinta, mut-ta se nopeuttaa ultrasuodatusta ja vahentaa fraktion bak-15 teeripitoisuutta.
Haluttaessa voidaan rasvaton ternimaito mytts kasi-telia edelleen, esimerkiksi kaseiini voidaan poistaa hap-posaostuksella laskemalla seoksen pH:ta. Saostukseen kay-tetaan esimerkiksi suolahappoa tai etikkahappoa, ja pH 20 lasketaan noin arvoon 4,5. Saostus voidaan suorittaa koro-tetussa lampdtilassa mikrobiologisten kontaminanttien va-hentamiseksi. Saostus voidaan myds suorittaa entsyymien avulla. Sakka voidaan erottaa seoksesta eri menetelmilia, esimerkiksi sentrifugoimalla tai tangentiaalisella kalvo-25 suodatuksella. Kun sakka on erotettu, neutraloidaan seos ja syntynyt sakka poistetaan. Nain saadaan ternimaidon heraa.
Muodostetulle vaaleankeltaiseile ternimaidon heralle suoritetaan haluttaessa steriilisuodatuskasittely edel-30 la kuvatulla tavalla.
Saatu tuote ultrasuodatetaan sitten kayttaen memb-raania, jonka nimellinen molekyylipainoraja on 100 000, ja membraanin lapi meneva suodos otetaan talteen.
Ultrasuodosfraktiota voidaan haluttaessa konsen-35 troida, steriilisuodattaa ja/tai lyofilisoida. Fraktiota δ voidaan haluttaessa myos puhdistaa edelleen.
KMyttoå vårten keksinnon mukainen ternimaitofraktio lisStSån kasvualustaan. Fraktion optimikonsentraatio on noin 5 - 15 %, vaikka myos pienempia maåria voi kåyttåa.
5 Hyvin suurina pitoisuuksina fraktiolla on solukasvua inhi-boiva vaikutus. Haluttaessa fraktiota tMydennetaan apuai-neilla tai kasvua ediståvillS aineilla. Kaytetyt aineet ja niiden pitoisuus vaihtelevat solutyypeittain. Esimerkkinå voidaan mainita, ettå viljeltåesså LPCl-hybridomasoluja 10 10 prosenttisessa ternimaitofraktiossa tåydennettynå natrium- seleniitillå, natriumseleniitin optimikonsentraatio on noin 0,4 -2 μΜ, kun taas 3T3-solujen osalta optimikonsentraatio on noin 0,4 -100 nM. Vaikka solujatkot tehdåån pienilla solutiheyksilla (esim. 15 000 solua/ml) hybrido-15 mat voidaan lisata soluviljelyalustaan ilman adaptiovai-hetta.
Keksinnon mukaisella ternimaitofraktiolla taydenne-tysså kasvualustassa saavutettu maksimi solutiheys on pie-nempi kuin kaytettåesså naudan sikioseerumia. Fraktio on 20 kuitenkin taloudellisesti hyvinkin kilpailukykyinen sikio- seerumin kanssa. Tuloksia voidaan myos parantaa optimoi-malla viljelyolosuhteita. Fraktion alhaisen proteiinipi-toisuuden ansiosta viljeltyjen solujen tuottamia proteii-neja kuten monoklonaalisia vasta-aineita on helpompi puh-25 distaa kuin sellaisesta soluviljelyalustasta, johon on lisatty seerumia. Terapeutt isten proteiinien puhdistamista helpottaa myos ultrasuodoksen alhainen endotoksiinipitoi-suus. Alhaiset proteiini- ja endotoksiinipitoisuudet ta-kaavat osaltaan sen, etta tuotettuja proteiineja, voi an-30 taa myos ihmiselle ilman terveyshaittoja.
Keksintoa valaistaan seuraavien esimerkkien avulla, joiden tarkoituksena ei ole rajoittaa keksintoa. Kaikissa kuvatuissa solukasvatuksissa, joissa kåytettiin ultrasuo-dosta, oli transferriinia mukana (5 mg/ml).
Il 91166 9
Esimerkki 1
Fraktion valmistaminen naudan ternimaidosta
Naudan ternimaitoa kerattiin 16 lehmaita viidelta eri maatilalta. Jokaiselta lehmaita kerattiin viidesta 5 ensimmaisesta lypsykerrasta laktaation alkamisesta yksi litra ternimaitoa, joka jaahdytettiin vaiittdmasti. 80 litran era valmistettiin sekoittamalla sama maara ternimaitoa jokaisesta lypsykerrasta. Ternimaitopooli jaettiin yhden litran eriin ja sailytettiin -20 °C:ssa jatkokasit-10 telya vårten.
Ternimaito sulatettiin ja sentrifugoitiin 10 000 g 60 min. Rasvaa sisaltava paailimmainen kerros ja solujaan-teita ja muuta liukenematonta materiaalia sisaitava poh-jakerros heitettiin pois. Kaseiini saostettiin 56 eC:ssa 15 saatamana pH arvoon 4,6 2 M HClilia. Seosta sekoitettiin tunnin ajan, jonka jaikeen sakka poistettiin sentrifugoi-malla 4 °C:ssa 10 000 g 60 min. Heraa inkuboitiin 4 °C:ssa y5n yli, minka jaikeen pH saadettiin arvoon 7,0 4 M NaOHrlla. Sakka poistettiin sentrifugoimalla huoneen lam-20 pdtilassa edelia kuvatulla tavalla. Kirkastettu hera suo- datettiin peråkkain 0,8 ym:n ja 0,22 μπι:η suodattimien lapi (Millipore Corporation, Bedford, MA, USA) ja suodos ultrasuodatettiin Minitan-laitteessa (Millipore) kayttaen polysulfoniultrasuodatuskalvoja, joiden nimellinen mole-25 kyylipainoraja oli 100 000. Ultrasuodos suodatettiin 0,22 pm:n suodattimen lapi ja sailytettiin -20 °C:ssa.
Esimerkki 2
Fraktion valmistaminen naudan ternimaidosta, vaih- toehtoinen tapa 30 Esimerkin 1 mukaisesti valmistettu ternimaitoera sulatettiin ja rasva, solujaanteet ja muu liukenematon materiaali erotettiin separaattorilla. Saatu rasvaton ter-nimaitofraktio suodatettiin perakkain 0,8 pm:n ja 0,22 ym:n suodattimien lapi (Millipore Corporation, Bedford, 35 MA, U.S.A.) ja suodos ultrasuodatettiin Minitan-laitteessa 10 (Millipore) k&yttSen polysulfoniultrasuodatuskalvoja, joi-den nimellinen molekyylipainoraja oli 100 000. Ultrasuodos suodatettiin 0,22 pm:n suodattimen l&pi ja sSilytettiin -20 °C:ssa.
5 Esimerkki 3
Fraktion ja vAlituottelden karakterisointi
Esimerkkien 1 ja 2 mukaisesti saatujen lopputuot-teiden ja vSlituotteiden proteiinipitoisuus måSritettiin kolorimetrisesti julkaisussa Anal. Biochem. 72 (1976) s. 10 248 - 254 kuvatulla tavalla kSyttSen vakiona naudan immu- noglobuliinia. Monoklonaalisten vasta-aineiden pitoisuus maaritettiin FPLC:11S (Pharmacia, Uppsala, Ruotsi) kfiytta-en ProAna™Mabs -proteiini G-kolonnia (Perstorp Biolytica, Lund, Ruotsi) ja vakiona puhdistettua hiiren IgG-1 julkai-15 sussa J. Immunol. Meth. 114 (1988) s. 175 - 180 kuvatulla tavalla. Saatujen tuotteiden kokonaisproteiinipitoisuus ja IgG-pitoisuus on esitetty taulukossa 1.
Taulukko 1
Naudan ternimaidon, heran ja ultrasuodoksen pro-20 teiini- ja IgG-pitoisuus NSyte IgG Kokonaisproteiinipitoisuus [g/i] [g/i] 25
Rasvaton 22,5 ± 1,0 67,1 ± 7,5 ternimaito
Hera 12,8 ± 1,1 19,6 ± 0,35 30
Ultrasuodos 0,24 ± 0,01 1,15 ± 0,027 (esim. 1)
Ultrasuodos 0,830 ± 0,341 3,48 ± 0,88 35 (esim. 2) 91166 11
Endotoksiinit maaritettiin julkaisussa Bull. John Hopkins Hospital 115 (1964) s. 265 - 274 kuvatulla Limulus Amebocyte Lysate (LAL) gel-clot-menetelmaiia ja testipak-kaus oli Whittaker Bioproducts Inc.:n (Walkersville, MD, 5 USA) tuote. Endotoksiinivakio on valmistettu E. coli-kan-nasta 055:B5. Kontrollivakioendotoksiinin (CSE, Control Standard Endotoxin) pitoisuus oli 10 EU/ng ja lysaatin herkkyys oli 0,06 EU/ml. Analyysit suoritettiin valmis-tajan ohjeiden mukaisesti. Laimennoksiin kSytettiin pyro-10 geenivapaata vetta (Leiras Oy, Turku, Suomi) ja laimen-nokset tehtiin aseptisesti. Endotoksiinipitoisuus lasket-tiin kertomalla testiliuoksen suuremman laimennoksen, joka antoi positiivisen loppupistearvon, kaanteisarvo lysaatin herkkyydelia. Tunnetun endotoksiinipitoisuuden omaavaa 15 positiivista kontrollia ja pyrogeenivapaasta vedesta rauo-dostuvaa negatiivista kontrollia kaytettiin jokaisessa analyysissa. Tuotteiden endotoksiinipitoisuus on esitetty taulukossa 2.
Taulukko 2 20 Naudan ternimaidon, heran la ultrasuodoksen endo toksiinipitoisuus
Nayte Endotoksiinipitoisuus [EU/ml] 25 _
Rasvaton ternimaito 7,7 ± 5,5 30 Hera 0,66 ± 0,36
Ultrasuodos <0,24 (esim. 1) 35 Ultrasuodos <4,6 (esim. 2) 12
Esimerkln 1 mukaisesti valmistettu ultrasuodos sisalsi siis endotoksiineja vdhemmån kuin 0,24 EU/ml. Esimerkin 2 mukaisessa tuotteessa on enemmån endotoksiineja, mutta ei kuitenkaan enemmån kun seerumista valmiste-5 tuissa tuotteissa. Seka ultrasuodos etta ternimaito sisal-sivat LAL-analyysin inhibiittoreita, mutta naiden vaikutus vaitettiin laimentamalla naytteet (1:2) ja kuumentamalla ne 100 °C:ssa noin 2 min.
Esimerkki 4 10 Fraktion kåyttd hybridomasolujen viljelyssa
Hybridomien valmistus
Balb/c-hiiria immunisoitiin intraperitoneaalisesti joka kolmas viikko joko 200 pg:lla laktoferriinia (Sigma Chemical Co., St.-Louis, MO, USA) tai 200 pg:lla laktope-15 roksidaasia (Sigma). Ensimmainen ja kaksi seuraavaa annos-ta annettiin Freunds'in taydellisessa ja vastaavasti epå-taydellisessa adjuvantissa. Viimeinen annos annettiin fos-faatilla puskuroidussa suolaliuoksessa (PBS). Eiainten perna kerattiin fuusiota vårten kolme paivaa viimeisen an-20 noksen jalkeen. Pernan lymfosyytit fuusioitiin X63.Ag8.653 hiiren myeloomasoluilla julkaisussa Methods Enzymol 73 (1975) s. 3-46 kuvatulla tavalla ja anti-laktoferriini-ja anti-laktoperoksidaasi-vasta-aineita tuottavat hybridit seulottiin ELISA-maaritykselia (enzyme linked immunosor-25 bent assay) teoksessa Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology, toimittajat Burdon R. H. ja Knippenberg P. H., Elsevier Science Publishers, Amsterdam, Hollanti, kuvatulla tavalla. Vasta-aineiden alaluokat maa-ritettiin kaupallisia kitteja kayttaen valmistajan ohjei-30 den mukaisesti (Mouse-Typer Sub-Isotyping Kit, Bio-Rad, Richmond, CA, USA ja Serotec Ltd., Oxford, UK). Kloonit LFC6 ja LFC1 tuottivat IgG-1 alaluokkaa olevia anti-lakto-ferriini-vasta-aineita ja LPC1 samaa alaluokkaa olevia anti-laktoperoksidaasi-vasta-aineita.
91166 13
Hybridomien viljely
Soluja kasvatettiin DMEM-alustassa (Dulbeccos's Modified Eagles Essential Medium, Flow Laboratories Ltd., Scotland, UK), johon oli lisétty 4 mM glutamiinia, 100 5 U/ml penisilliinia ja 100 pg/ml streptomysiinia (perus-alusta). Kantaviljelmia pidettiin 75 cm2 muovipulloissa (Costar, Cambridge, MA, USA), joihin oli lisatty 7 % nau-dan sikibseerumia (Flow). Alaviljelmien muodostamiseksi eksponentiaalisessa kasvuvaiheessa olevia soluja sentrifu-10 goitiin 400 g 5 min. Supernatantti heitettiin pois ja soluja pestiin kerran PBS:lia. Sitten solut suspendoitiin kasvualustaan, jossa oli tunnetut maarat (0 - 20 %) naudan sikibseerumia, rasvatonta naudan ternimaitoa, heraa tai ultrasuodosta taydennettyna ihmisen transferriinilia, 5 15 mg/ml (Sigma). Solut maljattiin tassa koeviljelyalustassa 6 kuopan mikrotiitterilevyihin (Costar) 15 000 solua/ml ja inkuboitiin 0-12 vrk vaihtamatta viljelyalustaa. Solu-laskennat suoritettiin rinnakkaismaarityksina hemasytomet-rilia kayttaen trypaanisiniekskluusiota solujen elinkel-20 poisuuden maarittamiseksi.
Tulokset on esitetty graafisesti kuviossa 1, joka kuvaa eiavien LPC1-solujen lukumaaråa ajan funktiona jat-kuvan kasvatuksen aikana ultrasuodoksella (A), heralla (B) ja rasvattomalla ternimaidolla (C) taydennetyssa kasvu-25 alustassa. Kasvualustaan oli lisatty seuraavat maardt esi-merkin 1 mukaisesti valmistettua taydennysainetta: 1 % (·), 5 % (f), 10 % (), 15 % (A) ja 20 % (X). Suurin solu-tiheys 5,31 x 105/ml saatiin kayttamaiia 10 % ultrasuodosta (kuvio 1A), rasvattomassa ternimaidossa suurin solutiheys 30 4,61 x 105/ml saatiin kayttamaiia 1 % ternimaitoa (kuvio 1C). Solutiheys jai alhaiseksi kaikilla herakonsentraa-tioilla (kuvio IB).
Kuviossa 2 verrataan LPCl-solujen kasvua 10-pro-senttisessa naudan sikibseerumissa (·), 10-prosenttisessa 35 esimerkin 1 mukaisesti valmistetussa ultrasuodoksessa () 14 ja 10-prosenttisessa esimerkin 2 mukaisesti valmistetussa ultrasuodoksessa (▼).
Eri tavalla taydennetyssa perusalustassa kasvatet-tujen LFCl-, LFC6- ja LPCl-hybridomien kasvukåyråt on esi-5 tetty kuviossa 3. Hybridoma LPCl kasvatettiin 10-prosent-tisessa naudan sikioseerumissa (·), 10-prosenttisessa ul-trasuodoksessa (o) ja perusalustassa, johon oli lisåtty ainoastaan transferriinia 5 mg/ml (▲), hybridoma LFC1 kasvatettiin 10-prosenttisessa naudan sikidseerumissa (ψ) ja 10 10-prosenttisessa ultrasuodoksessa (V) ja hybridoma LFC6 kasvatettiin 10-prosenttisessa naudan sikioseerumissa () ja 10-prosenttisessa ultrasuodoksessa (e).
Solulinjojen kasvuominaisuuksissa ei havaittu muu-toksia. Suurimmat hybridomasolutiheydet olivat 13,6 - 15,8 15 x 105/ml 10-prosenttisessa naudan sikioseerumissa ja 5,12 -5,64 x 105/ml 10-prosenttisessa ultrasuodoksessa. Ultrasuo-doksen aikaansaama suurin solutiheys oli siis noin 35-40 % sikioseerumiin verrattuna. Hybridomien jakautumisaika 011 noin 17 tuntia ja vastaavasti noin 35 tuntia sikiosee-20 rumissa ja ultrasuodoksessa. Kun perusalustaan 1isattiin vain transferriinia, hybridomat eivåt kaytMnnollisesti katsoen kasvaneet lainkaan. Toisaalta, ultrasuodos ei pys-tynyt edistamaan hybridomien kasvua ilman transferriiniå. Monoklonaalisten vasta-aineiden tuotto 25 LFCl- ja LFC6-hybridomasolujen vasta-aine-tuotto kasvualustassa, joka sisMlsi 10 % naudan sikioseerumia (FBS) ja vastaavasti 10 % ultrasuodosta (UF), on esitetty kuviossa 4 [LFCl: FBS (·), UF (o); LFC6: FBS (), UF (o)].
12 vuorokauden jatkuvan kasvatuksen jalkeen vasta-ainepi- 30 toisuudet kåytettaesså 10 % ultrasuodosta olivat 40 % (LFCl) ja 42 % (LFC6) siitå, mita saatiin kaytettaessa 10 % sikioseerumia (83,5 mg/1 LPCl ja 72,0 mg/1 LPC6).
91166 15
Esimerkki 5
Fraktion kSyttd mulden solujen viljelyyn
Esimerkin 1 mukaisesti valmistetun fraktion vaiku-tusta muiden solujen kasvuun tutkittiin kayttamaiia kolmea 5 eri solutyyppia. Vero-(Afrikkalaisen vihrean apinan munu-aissolulinja, ATCC CCL 81), CHO-Ki- (Kiinalaisen hamsterin munasolulinja, ATCC CCL 61) ja 3T3- (Hiiren sikidn fibro-blastisolulinja, ATCC CCL 92) soluja kasvatettiin perus-alustassa, joka sisaisi vaihtelevia maaria ultrasuodosta.
10 Kantaviljelraat sailytettiin 10-prosenttisessa naudan si-kiOseerumissa. Alaviljelmien muodostamiseksi soluja pes-tiin kerran PBSrlia ja suspendoitiin perusalustaan, joka oli taydennetty vaihtelevilla maarilia (0 - 20 %) ultrasuodosta ja transferriinilia, 5 mg/ml. Solut maljattiin 15 koealustaan 24-kuopan mikrotiitterilevyilia (Costar) kåyt-taen pitoisuutta 20 000 eiavaa solua/ml ja inkuboitiin vaihtamatta kasvualustaa 7 vrk. Solulaskennat suoritettiin rinnakkaismaarityksina hemasytometrilia kayttaen trypaani-siniekskluusiota. Tulokset on esitetty taulukossa 3.
20 Taulukko 3
Ultrasuodoksen vaikutus eri solutyyppien kasvuun
Ultrasuodos- Soluja/ml pitoisuus Vero CHO-Ki 3T3 25 _ 20 % 26000 13000 46000 15 % 116000 17000 108000 10 % 133000 16000 81000 5 % 51000 7800 47000 7: 30 1 % 11000 0 7800 0 % 19000 5600 2200 16
Tuloksista ilmenee, etta ultrasuodos stimuloi kaik-kien solulinjojen kasvua, joskin eri solutyypit reagoivat eri tavalla. Ultrasuodoksella on vaikutusta jo niinkin pienena pitoisuutena kuin 1 %, ja pitoisuudet 5 - 15 % 5 pidetaan edullisina. Erityisen edullisia ovat 10 - 15 % pitoisuudet.
Esimerkki 6
Fraktion supplementointi
Keksinndn mukainen ultrasuodostuote sisaitaa aina 10 transferriinia. Lisaksi sen vaikutusta solukasvua stimu- loivana aineena voidaan tehostaa erilaisilla supplemen- teilla. Natriumseleniitti- ja B-merkaptoetanolilisdyksen vaikutus 3T3-solujen kasvuun maaritettiin seuraavalla tavalla. Solut pestiin kerran PBS:1la ja suspendoitiin pe-15 rusalustaan, johon oli lisatty 15 % ultrasuodosta, 5 mg/ml transferriinia ja vaihtelevia maaria natriumseleniittia tai B-merkaptoetanolia. Solujen kasvatus ja laskeminen suoritettiin esimerkeissa 4 ja 5 kuvatulla tavalla. Tulok-set on esitetty taulukossa 4.
20 Taulukko 4
Natriumseleniitilia ja B-merkaptoetanolilla supplemento idun ultrasuodoksen vaikutus solukasvuun B-MeOH Soluja/ml Na-seleniitti Soluja/ml 25 [μΜ] [nM] 0 69000 0 69000 0,5 61000 0,4 111000 1,0 159000 4,0 128000 30 5,0 147000 40 109000 10 130000 100 136000 20 90000 300 74000
II
91166 17
Kuvioissa 5 ja 6 esitetaan natriumseleniitin ja vastaavastl β-merkaptoetanolin tehostava vaikutus LPC1-hybridomasolujen kasvuun. Soluja kasvatettiin 10-prosent-tlsessa ultrasuodoksessa, johon oli lisatty 0,4 μΜ (o), 2 5 μΜ (Δ), 6 μΜ (α) ja 20 μΜ (^7) natriumseleniittia (kuvio 5) ja vastaavastl 5 μΜ (o), 15 μΜ (Δ), 50 μΜ (o) ja 100 μΜ (^) β-merkaptoetanolia (kuvio 6). (·) ja (ψ) edustavat LPCl-soluja, joita oli kasvatettu 10-prosenttisessa naudan sikiOseerumissa ja vastaavastl 10-prosenttisessa ultrasuo-10 doksessa lisaamatta em. aineita.
Tuloksista ilmenee, etta supplementtien teho ja kayttiJkonsentraatio-alueet vaihtelevat solutyypeittain. Esimerkiksi natriumseleniitilia on tehostava vaikutus jopa hyvin pienina pitoisuuksina (nanomoolitasolla), kun taas 15 β-merkaptoetanolilla vaikutusta saadaan vasta mikromooli-tasolla.
Claims (7)
1. Naudan ternimaitofraktio, joka soveltuu kaytet-tMvaksi soluviljelyalustojen taydennysaineena, t u n - 5. e t t u siita, etta sillå on alhainen kokonaisproteii-ni-, endotoksiini- ja immunoglobuliinipitoisuus ja se val-mistetaan ultrasuodattamalla rasvatontå ternimaitoa, josta kaseiini mahdollisesti on poistettu tavanomaisiin menetel-min, kayttaen membraania, jonka cut off on 100 000, ja 10 ottamalla suodos talteen.
2. Menetelma naudan ternimaitofraktion valmistami-seksi, jolla fraktiolla on alhainen kokonaisproteiini-, endotoksiini- ja ixnmunoglobuliinipitoisuus, t u η n e t -t u siita, ettS rasvatonta ternimaitoa, josta kaseiini 15 mahdollisesti on poistettu tavanomaisin menetelmin, ultra- suodatetaan kayttSen membraania, jonka cut off on 100 000, ja suodos otetaan talteen.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelma, tunnettu siitS, etta kaseiini on poistettu saos- 20 tamalla.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen naudan ternimaitofraktion kaytto soluviljelyalustojen taydennysaineena.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen naudan ternimaitofraktion kaytto, tunnettu siita, etta sen vai- 25 kutusta tehostetaan lisaåmallå muita tåydennysaineita.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen naudan ternimaitofraktion kaytto, tunnettu siita, etta ternimai-tofraktioon lisåtaan natriumseleniittia tai β-merkaptoeta-nolia.
7. Soluviljelyalusta, tunnettu siita, etta se sisaltaa patenttivaatimuksen 1 mukaista naudan terni-maitofraktiota. 91166
Priority Applications (14)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI914911A FI91166C (fi) | 1991-10-17 | 1991-10-17 | Ternimaitofraktio, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö kasvualustojen täydennysaineena |
| DK92920502T DK0610245T3 (da) | 1991-10-17 | 1992-10-02 | Fraktion af råmælk og dens anvendelse som tilsætningsstof i et cellekulturmedium |
| PCT/FI1992/000268 WO1993008264A1 (en) | 1991-10-17 | 1992-10-02 | Colostrum fraction, preparation and use thereof as cell culture media supplement |
| CA 2121472 CA2121472C (en) | 1991-10-17 | 1992-10-02 | Colostrum fraction, preparation and use thereof as cell culture media supplement |
| ES92920502T ES2119821T3 (es) | 1991-10-17 | 1992-10-02 | Fraccion de calostro y su utilizacion como suplemento en los medios de cultivo celular. |
| EP19920920502 EP0610245B1 (en) | 1991-10-17 | 1992-10-02 | Colostrum fraction and its use thereof as cell culture media supplement |
| DE69225976T DE69225976T2 (de) | 1991-10-17 | 1992-10-02 | Colostrum fraktion und ihre verwendung als additiv beim zellkulturmedium |
| AU26667/92A AU665581B2 (en) | 1991-10-17 | 1992-10-02 | Colostrum fraction, preparation and use thereof as cell culture media supplement |
| JP50746793A JP2629074B2 (ja) | 1991-10-17 | 1992-10-02 | 初乳フラクション、その製造方法および細胞培養培地補充物質としてのその使用方法 |
| AT92920502T ATE167516T1 (de) | 1991-10-17 | 1992-10-02 | Colostrum fraktion und ihre verwendung als additiv beim zellkulturmedium |
| NZ24473192A NZ244731A (en) | 1991-10-17 | 1992-10-14 | Colostrum fraction, its preparation and its use as a cell culture media |
| ZA927993A ZA927993B (en) | 1991-10-17 | 1992-10-16 | A colostrum fraction, a process of preparing it and its use. |
| US08/166,911 US5500229A (en) | 1991-10-17 | 1993-12-15 | Colostrum fraction, a process of preparing it and its use as a supplement in cell culture media |
| NO941381A NO941381L (no) | 1991-10-17 | 1994-04-15 | Colostrumfraksjon, fremgangsmåte for fremstilling og anvendelse av denne som et cellekulturmediumsupplement |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI914911 | 1991-10-17 | ||
| FI914911A FI91166C (fi) | 1991-10-17 | 1991-10-17 | Ternimaitofraktio, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö kasvualustojen täydennysaineena |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI914911A0 FI914911A0 (fi) | 1991-10-17 |
| FI914911L FI914911L (fi) | 1993-04-18 |
| FI91166B FI91166B (fi) | 1994-02-15 |
| FI91166C true FI91166C (fi) | 1994-05-25 |
Family
ID=8533317
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI914911A FI91166C (fi) | 1991-10-17 | 1991-10-17 | Ternimaitofraktio, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö kasvualustojen täydennysaineena |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5500229A (fi) |
| EP (1) | EP0610245B1 (fi) |
| JP (1) | JP2629074B2 (fi) |
| AT (1) | ATE167516T1 (fi) |
| AU (1) | AU665581B2 (fi) |
| CA (1) | CA2121472C (fi) |
| DE (1) | DE69225976T2 (fi) |
| DK (1) | DK0610245T3 (fi) |
| ES (1) | ES2119821T3 (fi) |
| FI (1) | FI91166C (fi) |
| NO (1) | NO941381L (fi) |
| NZ (1) | NZ244731A (fi) |
| WO (1) | WO1993008264A1 (fi) |
| ZA (1) | ZA927993B (fi) |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE287415T1 (de) * | 1990-07-13 | 2005-02-15 | Gropep Ltd | Wachstumsfördernder wirkstoff |
| US7033610B2 (en) * | 1990-07-13 | 2006-04-25 | Gropep Pty, Ltd. | Growth-promoting agent |
| US6319522B1 (en) | 1990-07-13 | 2001-11-20 | Gropep Limited | Growth-promoting agent |
| US6610493B1 (en) | 1993-06-17 | 2003-08-26 | Brigham And Women's Hospital | Screening compounds for the ability to alter the production of amyloid-β peptide |
| US5837672A (en) | 1992-07-10 | 1998-11-17 | Athena Neurosciences, Inc. | Methods and compositions for the detection of soluble β-amyloid peptide |
| WO1994023017A1 (en) * | 1993-04-01 | 1994-10-13 | Viable Bioproducts Ltd. | A composition useful as additive to a cell culture medium, comprising colostrum and serum |
| US5780028A (en) * | 1993-09-20 | 1998-07-14 | Anadis Ltd. | Method of obtaining immunoglobulins from colostrum and their use in pharmaceutical composition |
| FI97269B (fi) * | 1993-10-12 | 1996-08-15 | Viable Bioproducts Ltd | Menetelmä ravintojuoman valmistamiseksi |
| AUPM534794A0 (en) * | 1994-04-28 | 1994-05-19 | Gropep Pty Ltd | Modified milk growth factor |
| AU702002B2 (en) * | 1994-04-28 | 1999-02-11 | Novozymes Biopharma Dk A/S | Modified milk growth factor |
| AUPN642795A0 (en) | 1995-11-08 | 1995-11-30 | Northfield Laboratories Pty Ltd | Dairy compositions and methods of preparing same |
| DE19619990A1 (de) * | 1996-05-17 | 1997-11-20 | Charlotte Adler | Verfahren zur Herstellung von Kolostralmilchprodukten sowie deren Verwendung |
| US5846569A (en) * | 1997-06-20 | 1998-12-08 | Creative Labs, Inc. | Colostrum supplement |
| US20070128253A1 (en) * | 2005-04-13 | 2007-06-07 | Ramaekers Joseph C | Encapsulated transfer factor compositions and methods of use |
| US6506413B1 (en) * | 2001-04-30 | 2003-01-14 | Joseph C. Ramaekers | Compositions for treating animal diseases and syndromes |
| US20060073197A1 (en) * | 2004-05-20 | 2006-04-06 | Ramaekers Joseph C | Encapsulated transfer factor compositions and methods of use |
| US20060013889A1 (en) * | 2004-07-16 | 2006-01-19 | Playford Raymond J | Colostrum-based treatment for irritable bowel syndrome |
| EP1789073A4 (en) * | 2004-09-14 | 2011-06-08 | Nexcell Biosciences Inc | ISOLATION OF GROWTH AND DIFFERENTIATION FACTORS FROM COLOSTRUM |
| WO2006029494A1 (en) * | 2004-09-14 | 2006-03-23 | Nexcell Biosciences Inc. | Extraction of growth and differentiating factors from colostrum |
| US7426440B2 (en) * | 2004-09-24 | 2008-09-16 | Nutritional Bioscience Ltd. | Repair and protection factor scoring method for bioactive agents |
| US20060068022A1 (en) * | 2004-09-29 | 2006-03-30 | Playford Raymond J | Bioactive agent compositions for repair of cell injuries |
| US20090053197A1 (en) * | 2006-06-14 | 2009-02-26 | Ramaekers Joseph C | Transfer Factor Compositions and Methods |
| US9125874B2 (en) | 2007-11-30 | 2015-09-08 | The Ramaekers Family Trust | Administration of transfer factor for improving reproductive health |
| US20090074751A1 (en) * | 2007-09-18 | 2009-03-19 | Ramaekers Nutrition, Inc. | Growth factor fraction compositions and methods |
| WO2009070788A1 (en) * | 2007-11-30 | 2009-06-04 | The Ramaekers Family Trust | Compositions and methods for enhancing fertility |
| EP3479699A1 (en) * | 2017-11-03 | 2019-05-08 | Agriculture and Food Development Authority (TEAGASC) | A composition and uses thereof |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3122476A (en) * | 1960-06-21 | 1964-02-25 | Hyland Lab | Tissue culture medium |
| US4051235A (en) * | 1976-04-22 | 1977-09-27 | Plymate Robert R | Method of preparing bovine colostrum for use in treating livestock |
| US4440860A (en) | 1980-01-18 | 1984-04-03 | The Children's Medical Center Corporation | Stimulating cell growth |
| US4402938A (en) * | 1980-05-29 | 1983-09-06 | Impro Products, Inc. | Food and the method of extracting the same from colostrum and milk |
| US4473647A (en) * | 1981-02-27 | 1984-09-25 | Amf Inc. | Tissue culture medium |
| DE3432718C1 (de) * | 1984-09-06 | 1986-05-22 | Biotest Pharma GmbH, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung einer Loesung von Milch- und/oder Kolostralimmunglobulinen |
| GB8502006D0 (en) * | 1985-01-26 | 1985-02-27 | Ciba Geigy Ag | Polypeptide factors from colostrum |
| US4834974A (en) * | 1986-01-13 | 1989-05-30 | Protein Technologies, Inc. | Immunologically active whey fraction and recovery process |
| FR2586699B1 (fr) * | 1985-08-29 | 1987-11-20 | Univ Nancy | Fractions de lait, procede d'obtention de ces fractions et milieux de cultures cellulaires renfermant ces fractions |
| JPS62298536A (ja) * | 1986-06-17 | 1987-12-25 | Green Cross Corp:The | 生理活性物質の自動精製方法および自動精製装置 |
| AU605901B2 (en) * | 1987-09-11 | 1991-01-24 | Ares Trading S.A. | Purification process |
| GB8723094D0 (en) * | 1987-10-01 | 1987-11-04 | Ciba Geigy Ag | Polypeptide growth factor from milk |
| DE3876098D1 (de) * | 1988-04-20 | 1992-12-24 | Applic Tech Nouvelles | Verfahren zur abtrennung bestimmter proteine aus molke. |
| FR2639650B1 (fr) * | 1988-11-30 | 1991-07-05 | Univ Nancy | Complements de milieux de culture de cellules eucaryotes a base de produits derives de l'industrie laitiere |
| AU5254790A (en) * | 1989-04-06 | 1990-10-11 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process for preparing a therapeutic agent for rotavirus infection |
-
1991
- 1991-10-17 FI FI914911A patent/FI91166C/fi not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-10-02 ES ES92920502T patent/ES2119821T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-02 EP EP19920920502 patent/EP0610245B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-02 WO PCT/FI1992/000268 patent/WO1993008264A1/en not_active Ceased
- 1992-10-02 AT AT92920502T patent/ATE167516T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-10-02 DK DK92920502T patent/DK0610245T3/da active
- 1992-10-02 DE DE69225976T patent/DE69225976T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-02 JP JP50746793A patent/JP2629074B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-02 CA CA 2121472 patent/CA2121472C/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-02 AU AU26667/92A patent/AU665581B2/en not_active Ceased
- 1992-10-14 NZ NZ24473192A patent/NZ244731A/xx unknown
- 1992-10-16 ZA ZA927993A patent/ZA927993B/xx unknown
-
1993
- 1993-12-15 US US08/166,911 patent/US5500229A/en not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-04-15 NO NO941381A patent/NO941381L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5500229A (en) | 1996-03-19 |
| CA2121472C (en) | 1998-02-17 |
| WO1993008264A1 (en) | 1993-04-29 |
| ATE167516T1 (de) | 1998-07-15 |
| DE69225976D1 (de) | 1998-07-23 |
| JP2629074B2 (ja) | 1997-07-09 |
| ES2119821T3 (es) | 1998-10-16 |
| NZ244731A (en) | 1994-07-26 |
| EP0610245B1 (en) | 1998-06-17 |
| AU2666792A (en) | 1993-05-21 |
| AU665581B2 (en) | 1996-01-11 |
| FI914911L (fi) | 1993-04-18 |
| NO941381D0 (no) | 1994-04-15 |
| FI91166B (fi) | 1994-02-15 |
| JPH07502889A (ja) | 1995-03-30 |
| DK0610245T3 (da) | 1998-10-19 |
| NO941381L (no) | 1994-06-16 |
| DE69225976T2 (de) | 1998-10-15 |
| ZA927993B (en) | 1993-04-26 |
| CA2121472A1 (en) | 1993-04-29 |
| FI914911A0 (fi) | 1991-10-17 |
| EP0610245A1 (en) | 1994-08-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI91166C (fi) | Ternimaitofraktio, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö kasvualustojen täydennysaineena | |
| EP0413727B1 (en) | Blood platelet lysate, method of its preparation and a cell culture medium containing said blood platelet lysate | |
| JP4476362B2 (ja) | 生物学的に活性なペプチドのミルクからの精製 | |
| US4473647A (en) | Tissue culture medium | |
| JPH05304979A (ja) | モノクローナル抗体 | |
| JP2003510070A (ja) | 細胞の無タンパク質かつ無血清の培養のための培地 | |
| US4757018A (en) | Myeloma cell lines and uses thereof | |
| Pakkanen et al. | Bovine colostrum fraction as a serum substitute for the cultivation of mouse hybridomas | |
| US4452893A (en) | Cell growth medium supplement | |
| WO1991018925A1 (en) | Novel megakaryocyte colony stimulating factor and production thereof | |
| US4654304A (en) | Composition for cell cultivation, production and use thereof | |
| EP0115284A2 (en) | Tissue culture medium | |
| JP2004008130A (ja) | 細胞培養用無血清培地 | |
| KR880002318B1 (ko) | 무혈청 배지 | |
| Capiaumont et al. | Whey and β-lactoglobulin: 2 milk by-products which can replace fetal calf serum in mouse hybridoma cell culture | |
| CN1557939A (zh) | 含生长因子的细胞培养液添加剂 | |
| WO1990006357A1 (fr) | Complements de milieux de culture de cellules animales a base de produits derives de l'industrie laitiere | |
| WO1994018310A1 (en) | Growth enhancing media supplement for the culture of mammalian cells | |
| JPH06113828A (ja) | 無血清培地用添加組成物 | |
| JP2947481B2 (ja) | 抗体産生促進物質及び抗体産生方法 | |
| AU8338082A (en) | Tissue culture medium | |
| RU2342428C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных - продуцент моноклональных антител крысы к гипогликозилированным и дегликозилированным изоформам опухоль-ассоциированного антигена человека muci | |
| Zakaria-Runkat et al. | Production of fish serum products as substitute for fetal bovine serum in hybridoma cell cultures from surimi industrial waste | |
| JPH0698763A (ja) | ヒト型ハイブリドーマ細胞の抗体産生増殖促進物質 | |
| WO1994023017A1 (en) | A composition useful as additive to a cell culture medium, comprising colostrum and serum |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GB | Transfer or assigment of application |
Owner name: N.V. NUTRICIA |
|
| BB | Publication of examined application | ||
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: N.V. NUTRICIA |
|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: N.V. NUTRICIA |
|
| MA | Patent expired |