JP2001523249A

JP2001523249A - 特異的免疫寛容を誘導するための抗原と粘膜結合成分の組合せ

Info

Publication number: JP2001523249A
Application number: JP54637498A
Authority: JP
Inventors: ステンピーターセン，ジェイコブ
Original assignee: ザイモジェネティクス，インコーポレイティド
Priority date: 1997-04-23
Filing date: 1998-04-23
Publication date: 2001-11-20
Also published as: AU7161098A; ATE299711T1; WO1998047529A1; EP0977586B1; DK0977586T3; DE69830900D1; US20020119159A1; DE69830900T2; EP0977586A1; US7097845B2

Abstract

(57)【要約】本発明は、インスリンのような免疫寛容誘導抗原とガングリオシドＧＭ１を優先的に結合する粘膜結合成分との組合せを提供する。それらの成分は非共有結合配置で存在する。粘膜表面に投与すると、該組合せは抗原だけの場合の10分の１の用量で特異的免疫寛容を誘導するのに有効である。免疫寛容はブースター投与の必要なく多週間に渡り持続される。本発明の組成物および方法は、望ましくない免疫応答に帰することができる症状の予防または緩和に有益である。

Description

【発明の詳細な説明】特異的免疫寛容を誘導するための抗原と粘膜結合成分の組合せ関連出願この出願は、1997年４月23日出願の係属中の米国仮出願第60／044,184号および1997年４月23日出願の係属中の米国仮出願第60／044,182号の優先権を主張する。技術分野本発明は、一般的には経口免疫寛容の分野に関する。より具体的には、本発明は、状態の病的作用の原因となる免疫反応を特異的に阻害することによる、望ましくない免疫応答に関連した糖尿病および他の状態を処置するための製剤および処置方法に関する。背景人の病気の多くが宿主に必要な免疫系の適応障害に関連するということがますます認識されてきている。病原微生物を排除できないのは、しばしば免疫応答性低下または不適切なエフェクター作用に起因する。他方で、侵襲生物の不在下での組織破壊は、自己抗原に対する免疫反応性過剰から起こる。有力な非特異的免疫増強剤または抑制剤である小さな分子薬剤が開発されている。しかしながら、それらは本当に必要とされるもの、すなわち少数の特定の標的分子に対する免疫反応性の集中調節のための用具としては緩慢である。この問題を扱う上での１つの試みは、基礎となっている免疫原性と免疫寛容のメカニズムの相違、すなわちそれぞれ免疫反応性の上方または下方調節を解明することである。ある状況では、両調節ともに、抗原提示細胞とＴ細胞との複雑な相互作用に誘発抗原が関与する。粘膜免疫系は、全身免疫系よりも外来抗原に対して無反応で寛容する傾向がある。明らかに、食事に含まれるあらゆる外来物質に対する反応がこの系の勢力を使い尽くすだろう。反応性を弱めるメカニズムは、クップファー細胞による門戸循環からの食物抗原のクリアランス、および免疫寛容原性環境での免疫系への提示のための成熟赤血球およびパイアー斑のＭ細胞からの抗原のサンプリングを含む。粘膜免疫系に関与するリンパ球や他の細胞は、全身免疫系の相当物とは異なるスペクトルのサイトカインを分泌しそして異なるスペクトルの表面マーカーを担持している。粘膜免疫系は、気管支、胸部および腸といった異なる粘膜部位に共通している（Bienenstock他，Adv．Exp．Med．Biol．107:53，1978）。対照的に、粘膜免疫系と全身免疫系は互いから分割されている。腸における寛容応答には、TGF-β， IL-4およびIFN-γを分泌する調節Ｔ細胞が関係している（Leonilda他，Cell．Im munol．157:439，1994;Zeng-Yu他，Cellular Immunol．157:353，1994）。腸間膜リンパ節の輸出管の細胞は優先的に粘膜へと戻り、一方で末梢リンパ節の輸出管の細胞は優先的に末梢へと戻る。それにもかかわらず、それらの免疫系間には、腸で引き起こされた反応が全身区分に共有されるのに十分なくらいの交差がある。よって、セービンポリオワクチン（経口ポリオ生ワクチン）は、粘膜表面と循環系の両方でポリオに対する防御を誘導する。腸内に提供された或る抗原に対して誘導された免疫寛容は、それらの抗原に対して全身性の免疫無反応性をもたらす。特異的免疫ダウンレギュレーションの治療モデルとして、寛容の方への粘膜傾向を利用する努力がなされている。この分野の概説については、Thompson他(Imm unol．Today 11:197，1990)；Weiner(Proc．Natl．Acad．Sci．USA 91:10762，1 994)；MacDonald(Curr． Biol．4:178，1994）およびWeiner他（Annu．Rev．Immunol．12:809，1994）を参照のこと。一般に、反応性を低下させそれにより状態を改善しようとする努力において、異常な免疫応答を有する動物の小腸中に抗原を挿管するアプローチがとられている。国際特許公開第WO 91/12816号および欧州特許出願第EP 666 080 A1号公報は、自己抗原の経口投与による自己免疫疾患の治療を提唱している。この自己抗原は自己免疫疾患に特異的であり、且つその自己抗原を認識するサプレッサーＴ細胞を惹起させるために経口または腸内投与される。国際特許公開第WO 91/08760号公報は、自己抗原のエーロゾル投与による自己免疫疾患の治療を開示している。国際特許公開第WO 96/39176号公報は、Ｔ_H1免疫応答とＴ_H2免疫応答の両方を抑制し且つ抗体産生を抑制するための抗原の経口投与の使用を記載している。実施例では抗原が飲料水中で適宜供給されており、そして従属請求項は一日少なくとも６回のまたは徐放投与を記載している。国際特許公開第WO 93/16724号公報は、自己免疫疾患に直接関連している自己抗原よりもむしろ局外者（bystander）抗原を投与することによる自己免疫疾患の治療を提唱している。局外者抗原は哺乳類の体内の一部位でTGF-βの放出を惹起し、自己免疫応答に寄与するＴ細胞がその病気の一因であるＴ細胞を抑制することがわかった。国際特許公開第WO 94/27634号公報は、免疫寛容を誘導するのに使われる陰性ペプチドを開示している。陰性ペプチドは、生来のタンパク質抗原のプロセシングおよび提示のために、通常は免疫系に暴露されないタンパク質抗原中の抗原決定基である。多数の特許公報および学術文献が、粘膜経路を通して免疫寛容させることによる特定の状態の治療を開示している。米国特許第5,399,347号明細書およびThomp son他（Autoimmunity 16:189， 1993）は、経口的に投与される完全なII型コラーゲンによる慢性関節リウマチの治療方法を記載している。国際公開第WO 94/27634号公報およびVrabec他（Autoi mmunity 12:175，1992）は、Ｓ抗原を経口投与することにより自己免疫性ブドウ膜網膜炎を治療することを開示している。Chen他（Science 265:1237，1994）およびWhitachre他（J．Immunol．147:2155，1991）は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の経口投与による自己免疫性脳髄膜炎の抑制を開示している。Wang 他（Cell．Immunol．152:394，1993）は、実験的自己免疫性重症筋無力症に対して経口的に免疫寛容させるためのアセチルコリン受容体の経口投与を開示している。国際特許公開第WO 94/27634号公報は、インスリンの経口投与によるＩ型糖尿病の治療を開示している。非肥満性糖尿病（ＮＯＤ）マウスでの別の実験については、Ramiya他（Diabetes 44:164A，1995）とZhang他（Proc．Natl．Acad．Sci ．USA 88:10252，1991）を参照のこと。ウイルス誘発型抗原特異的糖尿病モデルにおいて、出発のウイルスチャレンジの１週間前または10日後に開始したインスリンの経口処置は、マウスの＞50％において高血糖の出現を予防した。経口投与は抗β細胞細胞傷害性Ｔリンパ球の生産にも膵臓中への浸潤にも影響を与えないと考えられたが、ほとんどのβ細胞が破壊されなかった。好結果にインスリンで処置したマウスの島の大部分のリンパ球はIL-4，IL-10およびTGF-βを生産したが、一方で症候性マウスからのリンパ球は主にγ-IFNを生産した。国際特許公開第WO 92/07581号公報は、哺乳類における同種移植片拒絶を抑制するための方法および組成物を開示している。移植片受容個体には、脾細胞、培養細胞または提供個体からの抽出物もしくはＭＨＣ抗原からなる群より選ばれた剤が経口またはエーロゾル投与により投与される。上述した開示は、典型的には、免疫寛容を誘導する抗原を１日数回まで頻繁に、または1mg／マウス以上の用量で投与しなければならないことを示している。免疫寛容を維持するために、通常は進行中の基準に基づいて抗原を投与することが必要である。コレラ毒素はビブリオ・コレレ（Vibrio cholerae）により放出される原型細菌エンテロトキシンであり、それは腸上皮からの活発な電解質と水の分泌を誘発する。それは分子量28,000のＡサブユニット１個と分子量11,600のＢサブユニット５個から構成されるタンパク質である。Ｂサブユニットは強固な非共有結合により環状に凝集され、Ａサブユニットは弱い非共有結合相互作用によってＢサブユニット５量体環に結合しそして多分一部が環の中に埋め込まれる。Ｂサブユニットは細胞結合を担い、そしてＡサブユニットはサイクリックＡＭＰ経路のＧタンパク質を改変することにより毒性活性を有する。Ｂサブユニットの結合活性は、粘膜表面上に存在するガングリオシドＧＭ１に対してである。コレラ毒素が粘膜ワクチンにおけるアジュバントとして機能する能力に関する文献は多数存在し、それを混在させると抗原に対する免疫応答のレベルを増加させる。例えば、Elson，Curr．Top．Microbiol．Immunol．146，1989;Nedrud他， J．Immunol．139:3484-3492，1987;McKenzie他，J．Immunol．133:1818，1984を参照のこと。より最近になって、ある種の抗原に連結させたＣＴＢサブユニットが、粘膜表面に投与すると免疫寛容誘導効果を有することが指摘された。国際特許公開第WO 95/10301号公報は、特定の寛容原に結合せしめた粘膜結合分子を含んで成る免疫寛容誘導剤を開示している。典型的な粘膜結合構造は、ＣＴＢおよびＥ．コリの熱不安定性エンテロトキシンのサブユニットであった。 Sun他（Proc．Natl．Acad．Sci．USA 93:7196，1996）は、経粘膜キャリヤー輸送系としてのＣＴＢを開示している。ＧＭ１と共有結合させることにより赤血球を改変し、次いでそれにＣＴＢを結合させた。ＣＴＢへの直接共有結合によりＨＧＧを改変した。ＣＴＢに結合せしめた可溶性または粒状抗原の１回の経口投与が免疫寛容を増強した。Sun他（Proc．Natl．Acad．Sci．USA 93，7196，1996 ）は、ＣＴＢに共有結合させたミエリン塩基性タンパク質を供給することによる、実験的自己免疫性脳髄炎の治療を記載している。国際特許公開第WO 96/21458号公報は、自己免疫性肝臓病、クローン病、グッドパスチャー症候群、乾癬、限局性硬化症、関節炎の様々な症状発現、および様々な限局性退行性炎症状態または繊維症状態のような、免疫系により媒介される病気の治療のためのコラーゲン法およびコラーゲン製剤を開示している。コラーゲン化合物はＣＴＢのような粘膜結合分子に結合した状態で投与される。それらの刊行物の実験では、抗原をＣＴＢと直接的にまたは連結基を介して結合させることにより有効成分が構成される。発明の要約本発明の組合せ組成物は、互いに共有結合で結合されていないが、粘膜表面に投与すると特異的な免疫寛容を誘発するのに効果的である、誘導抗原と粘膜結合成分とを含有する。それらの組成物は、10分の１の用量で免疫寛容を誘導することができ且つより持続した応答をもたらすので、抗原だけの従来技術組成物を上回る改善を有する。それらは、共有結合した複合体と比較して調製が容易で且つ経済的であるという点で、より好都合である。本発明の一態様は、個体において標的抗原に対する持続性免疫寛容を誘導する方法であって、未結合の形の誘導抗原と粘膜結合成分の有効組合せを含んで成る組成物を前記個体の粘膜表面に投与することを含んで成る方法である。誘導抗原は、標的抗原に対する免疫寛容を所望する標的抗原であるか、または標的抗原の局外者であることができる。誘導抗原は自己抗原（非限定的にインスリンペプチド、コラーゲンペプチドおよびＭＢＰペプチドが挙げられる）、同種抗原（非限定的に、ＨＬＡクラスＩおよびIIが挙げられる）、異種抗原またはアレルゲンであることができる。粘膜結合成分は典型的にはＧＭ１結合活性を有し、そしてコレラ毒素ＢおよびＬＴＢがその代表例である。本発明の別の態様は、個体における自己免疫疾患またはアレルギー状態の治療方法であって、上述した通りに持続性免疫寛容を誘導することを含んで成る方法である。本発明の別の態様は、未結合の形の粘膜結合成分と誘導剤の有効組合せを含んで成る医薬組成物である。糖尿病を治療するのに好ましい組成物は、誘導抗原としてのインスリン、および亜鉛のような金属カチオンを含有する。更なる態様は、有効な組合せ重量比において両成分を含んで成る、そのような医薬組成物を調製する方法である。更に別の態様は、組織移植の状況において免疫寛容を誘導することに関する。１つのそのような態様は、提供個体（ドナー）から移植される組織移植片の受容個体（宿主）の危険性を減らす方法であって、未結合の形の誘導抗原と粘膜結合成分の有効組合せを含んで成る組成物を受容個体の粘膜表面に投与することにより、提供個体の細胞に対する受容個体の免疫寛容を誘導することを含んで成る方法である。異種移植片と同種移植片の両方が含まれる。別のそのような態様は、提供個体から移植される組織移植片の受容個体における対宿主性移植片病の危険性を減らす方法であって、未結合の形の誘導抗原と粘膜結合成分の有効組合せを含んで成る組成物を受容個体の粘膜表面に投与することにより、提供個体の細胞に対する受容個体の免疫寛容を誘導することを含んで成る方法である。誘導抗原は、例えば、単独のＨＬＡ抗原もしくはＨＬＡ抗原混合物、または１もしくは複数の個体からの細胞もしくは細胞誘導体であることができる。提供個体からの組織移植片を受容個体に移植する改良方法であって、本発明に従って組織移植片の拒絶の危険性または対宿主性移植片病の危険性を減少させることを含んで成る方法も包含される。更に別の態様は、提供個体から移植された組織移植片の受容個体における拒絶の危険性、または対宿主性移植片病の危険性を減少させるための医薬組成物であって、精製された分子または細胞誘導体の形の１または複数の誘導抗原と、未結合の形で１または複数の誘導抗原との有効組合せを含んで成る医薬組成物である。そのような組成物の調製方法であって、有効な組合せ重量比において両成分を混合することを含んで成る方法も含まれる。更なる態様は、提供個体から移植される組織移植片の受容個体における拒絶の危険性、または対宿主性移植片病の危険性を減らすのに使われるキットであって、細胞または細胞抽出物と混合すると有効組合せ組成物を提供する粘膜結合性成分を含んで成るキットに関する。該キットは所望により誘導抗原またはそのような抗原のパネルを含んでもよい。また、そのようなキットの製造方法であって、キットの使用者が有効組合せ組成物を調製できるように十分な量の粘膜結合成分をキット形において包装することを含んで成る方法も提供される。発明の詳細な説明本発明の目的は、容易に調合されそして投与される組成物を使って、特異的免疫寛容を誘導するための系を提供することである。そのような組成物は、有効組合せとして次の２成分を最小限含んで成る：・粘膜結合成分、例えばコレラ毒素Ｂサブユニット（ＣＴＢ）・免疫寛容が望ましい標的かまたは標的の局外者のいずれか誘導抗原は、投与前に粘膜結合成分と混合してもよく、それらを別々に投与してもよく、あるいは誘導抗原がすでに粘膜表面上に存在していてもよい。一緒に投与する場合、粘膜結合成分と誘導抗原は未結合の形であり、未結合とはそれらが直接にまたは中間リンカーを介して互いに共有結合していないことを意味する。粘膜表面への該組成物の適用は、標的抗原に対する特異的免疫寛容を引き起こす。典型的には、免疫寛容は、ほぼ２週間ごとに与えることができる複数回の投与での処置により誘導される。もたらされる免疫寛容は典型的には持続性である。持続性とは、最初の投与の終了後多数週間、少なくとも３週間、典型的には少なくとも約５週間、好ましくは少なくとも約10週間または15週間の持続期間に渡って、免疫寛容の免疫学的または臨床学的指標が観察され得ることを意味する。免疫寛容レベルを高めるためにこの期間の最中にまたは後に追加のブースター注射を与えることができる。理論に縛られることなく、持続性免疫寛容は少なくとも部分的には標的抗原に特異的な免疫ＢまたはＴ細胞の能動的免疫抑制を伴うことは明らかである。本発明の基礎となる結果は、インスリンとＣＴＢとの共有結合体の開発、およびその後の糖尿病ＮＯＤマウスモデルにおける経口免疫寛容原としてのそれらの試験を行っている最中に発見された。マウスの対照グループは、インスリンだけもしくはＣＴＢだけ、またはその両者の非共有結合混合物で処置したものを含んだ。インスリンの粘膜投与の効果についての事前説明を鑑みれば、高レベルの単独のインスリンで小さな免疫寛容が誘導されることは予想された。インスリン−ＣＴＢ共有結合体のいくつかは免疫寛容を誘導するのが非常に有力であった。インスリンとＣＴＢの非共有結合混合物は誘導寛容の時点で、単独のインスリンよりもずっと非常に有力であることがわかった。実施例１は、非共有結合組合せに対する応答の性質を更に特徴づける追跡実験を記載する。それらの実験の結果は、非共有結合組合せが次のような予想外の特性を有することを証明する。・この組合せは、経口投与すると、インスリンを単独で使って免疫寛容を誘導するのに必要な量よりも約10倍少ない（約10分の１である）濃度で免疫寛容を誘導した。・単独のインスリンの作用とは異なり、非共有結合組合せにより誘導される免疫寛容は長期に渡って持続した。処置開始後少なくとも17週間に渡りＮＯＤマウスのかなりの比率において糖尿病症状の開始遅らせることができた。粘膜結合成分が抗原の免疫寛容原性を増強するというメカニズムは完全には解明されていない。このメカニズムの解明は、本発明を実施することを必要とせず且つ次の説明により限定するつもりはない。一つの可能性あるメカニズムでは、粘膜結合成分は、抗原が粘膜表面を貫通しそして特異的免疫寛容に関与する抗原提示細胞または調節細胞の近くに蓄積する能力を促進する。代わりにまたは追加として、この組合せが反復量で多数回投与される場合、粘膜結合成分は粘膜免疫を開始することができ、その粘膜免疫がその後の用量の混合物に対する迅速なエフェクター応答をもたらす。これが引いては、混合物中低用量の抗原に対する調節Ｔ細胞の受容性を高めるサイトカインまたは他の可溶性因子を提供することができる。第三の説明では、ＣＴＢの増強効果がリンパ球上または抗原提示細胞上のＧＭ１を架橋することにより媒介され得る。実施例２は、抗原より前に細胞培養物に提供されたＣＴＢが、明らかに抗原提示を増強しそしてＴ_H1細胞（IL-2とIFN-γを分泌する）とＴ_H2細胞（IL-4を分泌する）を増加させることを示す。粘膜免疫系細胞上のＧＭ１のＣＴＢ架橋は、サプレッサー細胞の特異的活性化を高めることができる。抗原と粘膜結合成分は場合により非共有結合形で会合させることができるけれども、これは所望の効果を得るのに必要ではない。本発明は、それらの成分のうちの一部または全部が水溶液とした時に互いに非共有結合で会合されている組成物、およびそれらの成分が会合されていない組成物を包含する。本発明は、望ましくない免疫応答を処置するために重要である免疫寛容を誘導するという点で幾つかの利点を提供する。粘膜結合成分は免疫寛容を誘導する誘導抗原の能力を増強させるために、かなり低用量の抗原を投与することができる。この応答が持続性であるということは、ブースター投与をあまり頻繁に与えなくてもよいことを意味する。該組成物は単に各成分を混合することにより作られるので、調製が迅速である。組成物の調製が容易であるということは、新たな成分、組合せおよび比率を試験するのが容易であり、そして決められた組成物の商業生産を低費用で実施できることを意味する。抗原混合物、細胞抽出物または細胞溶解物中に存在し得る抗原に対して粘膜結合成分が免疫寛容を増強する、非常に複雑な混合物も得ることができる。その上、本発明は新規治療法を考案するために免疫系を操作するという利点を提供する。外来抗原に対する望ましくない過敏性反応の標的抗原に対して免疫寛容を刺激することができる。標的抗原としては、食品、食品添加物、花粉、真菌胞子、粉塵または動物鱗屑が挙げられる。暴露は、胃腸管経由で、吸入により、または皮膚接触を通して起こり得る。ＣＴＢのような粘膜結合成分は、侵襲抗原源の前に、同時にまたは直後に投与され、あるいは投与前に抗原の試料と直接混合される。別々に投与する時、粘膜結合成分が誘導抗原に対する免疫寛容を促進できるような期間の中で、そして好ましくはできるだけ接近して、両成分が投与される。本発明は更に、粘膜表面上に存在する標的抗原に対して免疫寛容を誘導する方法を提供する。特に着目されるのは炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、セリアック病およびクローン病により代表される粘膜障害に優先的に関連する標的抗原である。ＣＴＢのような粘膜結合成分は、粘膜障害に関連する内因性標的抗原の存在下での免疫寛容の誘導を助ける環境をつくるために粘膜障害を有する患者に投与される。ある標的抗原は既に粘膜表面上に存在しており、病気状態によって発現のレベルまたは性質が変えられ得る。投与されたＣＴＢは、その場で有効組合せを作り、特異的免疫寛容を引き起こす。患者における望ましくない免疫応答の開始を改善するか、抑制するか、または延期するためには特異的免疫寛容が望ましい。従って、本発明の方法および組成物は、望ましくない免疫応答に関連した病因を有する多数のヒトの病気の治療において非常に重要である。定義および一般技術処置した被検体の一部分において、未処置の被検体に比較して、ａ）特異的免疫応答レベルの減少（抗原特異的エフェクターＴリンパ球、Ｂリンパ球、抗体またはそれらの等価物により少なくとも一部は媒介されると考えられる）；ｂ）特異的免疫応答の開始または進行の遅延；またはｃ）特異的免疫応答の開始または進行の危険性の減少、という効果のうちの少なくとも１つを有するならば、そのような方法および組成物は、本明細書中では「免疫寛容」を引き起こすものと呼称される。「特異的」免疫寛容は、免疫応答が他のものに比較して一定の抗原に対して選択的に引き起こされる時に生じる。「能動」免疫寛容とは、寛容作用が進行中の生物学的過程、例えばサブレッサー細胞による特異的エフェクター細胞のダウンレギュレーション、の結果である状態を言う。能動免疫寛容は、細胞混合実験または細胞移行実験により証明することができる。次の実験結果（適当な対照と共に実施）の２つの例は能動免疫寛容の証拠である：ａ）ある免疫寛容動物からの白血球を第二の動物からの特異的エフェクター細胞と混合した時、エフェクター細胞の活性が減少する；ｂ）ある免疫寛容動物からの白血球を自己免疫疾患を有する第二の動物に移した時に、その疾患の特徴が減少する。「持続性寛容」は、少なくとも２週間に渡り測定可能に持続する免疫寛容である。「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という語は、本明細書中では任意の長さのアミノ酸のポリマーに対して言及するのに互いに交換可能に用いられる。「ポリヌクレオチド」という語は、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドのいずれかの任意の長さのヌクレオチドの重合形、またはその類似体を言い、プラスミドとベクターを包含する。配列をタンパク質間でまたはポリヌクレオチド間で比較する時、直鎖状配列中の残基が「保存性」であると限定される場合を除いて、明らかに実質的な相同性領域を整列するのに必要である時折のギャップは許容される。本明細書中で用いる時、「標的抗原」は、それに対する免疫寛容を所望する抗原である。典型的には、標的抗原は、望ましくない免疫応答（既に潜在するかまたは被検者が危険な状態である）の標的でもあり、そして目的は該応答の危険性を低下、遅延または削減することであろう。「誘導抗原」は、免疫寛容を引き起こすために本発明の組合せに含まれる抗原である。それは標的抗原であってもよく、またはそれの断片もしくは誘導体であってもよい。あるいは、それは付随抗原であることができる。「局外者（bystander）抗原」は、標的抗原とは抗原上全く別のものであるが、特異的免疫寛容を生じさせる上で標的抗原にとって代わることができる抗原である。通常、付随抗原は、標的抗原の近隣で同じ組織において発現される。局外者抗原が役割を果たす可能なメカニズムは、本明細書中のどこかで説明する。「食物抗原」は、飲食により遭遇し得る任意の抗原であり、食品成分や食品添加物中に存在する抗原を包含する。「粘膜抗原」は、構成的にまたは誘導により、例えば炎症または病気の過程で、粘膜表面上に発現される抗原である。「アレルゲン」は、予備感作された個体においてＩ型過敏症反応を発生させることができる抗原である。分子は、それらが直接にまたは１もしくは複数のリンカー分子を経て互いに共有結合しているならば、「結合」または「連結」していると言われる。これらの用語は、結合の性質または形成される生成物に関しては他の限定を何も付与しない。例えば、ジスルフィド結合しているアミノ酸鎖は「結合」しており；ポリペプチド鎖の最初の半分は次の半分に「連結」している。「未結合」分子は、互いに結合または連結していない。製剤中の２つの分子は、その製剤がpH〜7の等張緩衝液100ml中に溶解または希釈されると、過剰でない一方の分子の少なくとも50 ％が、両分子の非共有結合ヘテロ二量体またはヘテロ多量体（ポリマー）へと会合するならば、「会合」していると呼ばれる。ある態様では、分子間の会合が、会合定数＜10¹⁰Ｍ^-1、好ましくは＜10⁸Ｍ^-1を有する。２つの「未会合」分子は結合もしていないし且つ会合もしていない。「処置」とは、処置すべき個体の自然過程を変えようとする試みにおける臨床的介入であり、予防のためにまたは臨床病理学の過程の間のいずれかで実施することができる。望ましい効果としては、病気の発生もしくは再発の予防、症状の緩和、病気の任意の直接的もしくは間接的な病理結果の減少、病気の進行速度の低下などが挙げられ、それらは臨床的特徴および一般に許容される生化学的、免疫学的または組織病理学的特徴により評価することができる。病気状態に関連する病理学は、正常な健康生理状態、または罹患個体の生活の質を悪化させるすべてのものである。本発明の組成物または方法を使って処置される個体または被検者は、脊椎動物、特に哺乳類（酪農動物、競技動物およびペットを含む）、しばしばヒトであろう。処置用製剤中の成分の「有効組合せ」は、組み合わせると望ましい効果を達成する各成分の量を含んで成る。その効果は１回のまたは一連の投与により達成され得る。成分混合物中の成分の「有効比率」は、有効組合せと同じ成分の比率（重量／重量に基づく）を有する。従って、その混合物は分割し、溶解し、または希釈して有効な投与用組成物にすることができる。本発明の実施は、特に断らない限り、当業者の技術の範囲内である分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技術、および免疫学の常用技術を使用するだろう。例えば“Molecular Cloning:A Laboratory Manual”,第２版（Sambrook，Fritsch & Maniatis，1989）；”Handbook of Experimental I mmunology”(D.M．Weir & C.C．Blackwell編);“Gene Transfer Vectors for Ma mmalian Cells”(J.M．Miller & M.P．Calos編，1987);”Current Protocols in Molecular Biology”(F.M．Ausubel他編，1987)；および“Current Protocols in Immunology”(J.E．Coligan他編，1991)を参照のこと。粘膜結合成分の選択および調製多数の粘膜結合成分が本発明での使用に適している。粘膜結合成分は、処置すべき被検体の粘膜細胞に特異的に結合することができる１または複数の分子を含んで成る。ある場合には、粘膜結合成分が粘膜表面の向こう側に貫通またはトランスロケーション（輸送）する追加の特徴を有する。粘膜結合成分の非限定例としては次のものが挙げられる：１．細菌毒素およびそれらの結合性サブユニットまたは断片、例えばコレラ毒素およびコレラ毒素Ｂサブユニット、Ｅ．コリ熱不安定性エンテロトキシンおよびそのＢサブユニット、百日咳菌〔ボルデテラ・パーツッシス（Bordetella pertussis）〕毒素並びにサブユニットＳ２，Ｓ３，Ｓ４およびＳ５（任意組合せで）、ジフテリア毒素およびβ毒素断片、志賀および志賀様毒素並びにそれらのＢサブユニット、連鎖球菌α−溶血毒、ビブリオ耐熱性直接溶血毒。２．細菌線毛、例えばＥ．コリ K88 ，K99，987P，F41，CFA/I，CFA/II（CS4，CS5およびCS6）、Ｐ線毛、Ｖ．コレレ毒素接合線毛（TCP）、マンノース感受性血球凝集素（MSHA）、フコース感受性血球凝集素（FSITH）、百日咳菌繊維状血球凝集素。３．ウイルス結合タンパク質、例えばインフルエンサ血球凝集素、センダイウイルス血球凝集素、HIV gp12 0。４．植物および動物レクチン、例えばCon A、小麦胚芽凝集素、フィトヘマグルチニン（植物凝集素）、アブリン、リシン、Ｃ型レクチン、ラクトース結合（Ｓ型）タンパク質、セレクチン、コレクチン、ヘミックスポタチア血球凝集素。５．粘膜成分（非限定的に、特に粘膜で発現される糖類）に対するモノクローナルおよびポリクローナル抗体、並びに所望の粘膜成分結合活性を有する抗体断片および誘導体、例えばダイアボディおよび一本鎖可変領域。本発明は、適当な特異性を有するが断片化、残基置換、標識、接合、および／または別の性質を有するペプチドとの融合により改変されている分子に基づいた粘膜結合成分も包含する。改変は、任意の所望の目的、例えば非限定的に、毒性や免疫原性といった任意の望ましくない性質の除去のために、または粘膜結合、粘膜貫通もしくは免疫応答の寛容原性アーム(arm)の刺激といった任意の望ましい性質の増強のために行うことができる。粘膜結合活性は、標準的結合アッセイについて意図する投与部位の単離された細胞または組織を使って同定することができる。本発明の好ましい粘膜結合成分は、粘膜で発現されるガングリオシド、好ましくはガングリオシドＧＭ１を結合することができる。本発明での使用の候補となる粘膜結合成分は、分子または細胞結合アッセイを使ったガングリオシドへの結合能力により活性試験することができる。ガングリオシドまたはＧＭ１結合活性を有するものとして分子に明言する本発明の態様は、粘膜結合成分の定義を満たすのにその他の性質を何も必要としない。当該技術分野で既知である多数のアッセイを、ＧＭ１結合活性の測定に合わせて容易に改変することができる。１つの非限定例は、次のフォーマットを有するＧＭ１結合活性についてのプレート結合ELISAである。まず、マイクロタイタープレートを、50mM炭酸ナトリウムpH9.6中の５μgの精製ＧＭ１（Sigma Chemical Co.，St．Louisから入手可能）により一晩コティングし、次いでアッセイ緩衝液（PBS，0.1％ Tween^TM 20）中で４回洗浄し、アッセイ緩衝液中の１％ウシアルブミンでブロックし、そして再洗浄する。アッセイ緩衝液中の粘膜結合タンパク質候補の系列希釈液をウエル中で約1.5時間インキュベートした後、洗浄する。ＧＭ１に結合する成分に対する第一抗体（例えばヤギ抗ＣＴＢ）、該一次抗体に特異的な第二の酵素標識抗体（例えばペルオキシダーゼ接合ロバ抗ヤギ免疫グロブリン）、および酵素基質（例えばＯ−フェニレンジアミン）を使ってウエルを発色させる。粘膜結合成分は、その分子の性質に依存して、当該技術分野で既知の多数の技術によって調製することができる。最初に細菌、ウイルス、植物または動物源より同定されたそれらの分子は、その最初の記載に従ってそれらの源より単離することができる。短鎖ペプチドは便利にはアミノ酸合成により調製される。レクチンおよび他の粘膜結合タンパク質は、生化学販売会社から入手可能である。抗体は、単離された粘膜結合性標的で動物を免疫処置し、次いで血清から抗体を精製するかまたは該動物からのリンパ球を使ってハイブリドーマ抗体を惹起させることにより生産される。既知配列を有する長鎖タンパク質は、コード配列を合成するかまたは天然源もしくはベクターからコード配列をＰＣＲ増幅せしめ、次いで適当な細菌または真核宿主中でコード配列を発現させることにより調製することができる。典型的な粘膜結合成分はコレラ毒素Ｂサブユニット（ＣＴＢ）およびＥ．コリ熱不安定性エンテロトキシンＢサブユニット（ＬＴＢ）である。本明細書中で用いるＣＴＢペプチドやＬＴＢペプチドといった用語は、完全なサブユニットだけでなく、類似体が誘導される各々の親分子の少なくとも10個、好ましくは30個の保存性アミノ酸に相同である（好ましくは、アミノ酸レベルで70％同一、より好ましくは80％同一、更に好ましくは90％同一である）領域を含む、対立遺伝子変異体および合成変異体、断片、融合ペプチド、結合体および他の誘導体についても使用する。ここで、上述したような結合アッセイにおいて測定すると、該誘導体の相同性領域は粘膜結合活性を有する。免疫寛容を誘導するよりもむしろ粘液応答を増強してしまう危険性を最少にするために、粘膜結合成分として使用するＣＴＢは、ほとんどの態様において、完全なコレラ毒素または機能的コレラ毒素Ａサブユニットを本質的に含まない。これは、ＣＴＢ製剤の＜0.1重量％、好ましくは＜0.01重量％が活性なＡサブユニットであることを意味する。組換え生産により得られたＣＴＢは汚染物質としてＡサブユニットをまずもたないので、それらが好ましい源である。コレラ毒素とＣＴＢはSigma Chemical Co.，St．Louis MOから入手可能である。コレラ毒素ＡおよびＢ鎖のＤＮＡコード配列は、米国特許第4,666,837号明細書に開示されている。組換えＣＴＢの調製に便利である材料および技術については、欧州特許第0095426号明細書、米国特許第5,268,276号明細書、およびSanche z他，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86:481，1989を参照のこと。組換えＬＴＢの調製に便利である材料および技術については、国際特許公開第WO 95/10301号公報、およびHirst他，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 81:7752，1984を参照のこと。細菌発現系から分泌されるタンパク質は、pHを4.5に調整し、ヘキサメタリン酸（最終濃度2.5g／ｌ）で沈澱させ、8000RPMで遠心し、リン酸塩緩衝食塩水中に溶解しそして透析し、次いで遠心および限外濾過により清澄化することにより、増殖培地から回収することができる。調製物は、例えばゲル濾過クロマトグラフィーにより更に精製することができる。抗原の選択および調製実施者は、本発明の組合せに使用される抗原について多数の選択肢を有する。本発明の組合せ中に存在する誘導抗原は、誘導される免疫寛容応答の特異性に寄与する。それは標的抗原と同じであっても異なっていてもよく、望ましくない免疫応答の標的でありそしてそれに対する免疫寛容か望ましい、処置すべき被検体中に存在するかまたは提供する予定である抗原である。本発明の誘導抗原は、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、糖質、糖脂質、または生物源から単離された他の分子であることができ、あるいは、それが粘膜結合成分と組み合わされると本発明に係る免疫寛容を誘導する能力を有するという前提で、化学的に合成された小分子、ポリマー、または生物学的物質の誘導体であることができる。本発明の或る態様では、誘導抗原が単離または組換え生産された単一分子である。宿主の様々な位置に標的抗原を分散させる処置条件には、一般に誘導抗原が標的抗原と同一であるかまたは免疫学的に関連していることが必要である。そのような抗原の例は、大部分のポリヌクレオチド抗原、および幾つかの糖質抗原（例えば血液型抗原）である。標的抗原が特定の器官、細胞または組織型上で優先的に発現される場合も、実施者は、標的抗原と同一であるかまたは免疫学的に関連する誘導抗原を使うという選択肢を有する。しかしながら、局外者である抗原を使うという別の選択肢も有する。この局外者抗原は、標的抗原に免疫学的に関連していなくてもよいが、標的抗原が発現される組織で優先的に発現される抗原である。局外者抑制の有効性に関する作用理論は、抑制が標的細胞における免疫応答のエフェクターアームをダウンレギュレーションする能動的細胞媒介工程であることである。粘膜表面において誘導抗原によりサプレッサー細胞が特異的に刺激され、そしてそれが組織部位に戻り、そこで局外者抗原が優先的に発現される。相互作用またはサイトカイン媒介メカニズムを通して、限局化したサプレッサー細胞は、それらが何に対して反応性なのかにかかわらず、近隣のエフェクター細胞（またはエフェクター細胞の誘導物質）をダウンレギュレーションする。エフェクター細胞が、誘導抗原とは異なる標的に対して特異的であるならば、その結果は局外者作用である。局外者反応の更に詳しい説明およびこの作用を有する寛容原性ペプチドの一覧については、国際特許公開第WO 93/16724号公報を参照されたい。局外者理論は、本発明を実施するために免疫寛容を所望するものに対する特定の標的抗原を同定または単離する必要がないという含みがある。実施者は、標的部位において優先的に発現される、誘導抗原として使われる少なくとも１つの分子を得ることができることだけを必要とする。インスリン依存性糖尿病は、インスリン生産部位である膵臓のβ細胞に対する自己免疫攻撃を伴う。この攻撃の中心は、一般にインスリンではなくてβ細胞により発現される別の抗原であると考えられる。しかしながら、インスリン、グルカゴンおよびアミリンはβ細胞により優先的に発現されるので、それらのいずれも本発明の誘導抗原として適当である。精製されたブタおよびウシインスリン並びに組換えヒトインスリンは、グルコース代謝の臨床および獣医学経営者の多数の入手源、例えばNovo Nordisk、Connaught LaboratoriesおよびEli Lilly & Co ．から入手できる。それらの製剤は、本発明の実施に直接含めることができ、または組換え発現によりインスリンを生産することができる。ある態様では、インスリンは免疫寛容しようとする被検者とは異なる種に由来する。インスリンの前駆体形（Ｂ鎖をＡ鎖に連結するＡＡＫ配列を含んで成る）、他の一本鎖形および分泌のためのシグナルペプチドを含む形も使用できる。本発明の一態様では、誘導抗原が、処置する個体中で発現されるものと同じ形態ではなく、それの断片または誘導体である。本発明の誘導抗原は、適当な特異性を有する分子に基づいているが断片化、残基置換、標識、接合、および／または別の機能的特性を有するペプチドとの融合により改変されているペプチドを包含する。改変は、任意の望ましい目的、例えば非限定的に、毒性や免疫原性といった任意の望ましくない性質の除去のために、または粘膜結合、粘膜貫通もしくは免疫応答の寛容原性アームの刺激といった任意の望ましい性質の増強のために行うことができる。本明細書中で用いる、インスリンペプチド、コラーゲンペプチドおよびミエリン塩基性タンパク質ペプチドといった用語は、完全なサブユニットだけでなく、類似体が誘導される各々の親分子の少なくとも10個、好ましくは20個の保存性アミノ酸に相同である（好ましくは、アミノ酸レベルで70％同一、より好ましくは80％同一、更に好ましくは90％同一である）領域を含む、アロタイプ変異体または合成変異体、断片、融合ペプチド、接合体および他の誘導体についても使用する。ここで、それらの誘導体の相同性領域は、標的抗原に対する免疫寛容を誘導する能力を各々の親分子と共有する。誘導抗原の免疫寛容原性領域が抗体応答の刺激のための免疫優性エピトープとしばしば異なることは理解される。免疫寛容原性領域は、一般にＴ細胞が関与する特定の細胞相互作用に提供することができる領域である。免疫寛容原性領域が既に存在して完全な抗原の提示と同時に免疫寛容を誘導することができる。生来の抗原のプロセシングと提示は通常は免疫寛容を触発しないということから、抗原によっては陰性免疫寛容原性領域を含むことがある。陰性抗原の説明およびそれらの同定は国際特許公開第WO 94/27634号公報に見つかる。生来の分子から免疫刺激性領域と免疫寛容原性領域への切断は、免疫優性領域が免疫寛容原性効果を劣化させるか、または免疫寛容原性領域だけが陰性のものである時（多くのアレルゲンの場合そうである）に、是認される。適当な寛容原性断片のマッピングおよび選択は、次の項目に記載する機能アッセイの１つを使って行うことができる。インスリンのＡ鎖とＢ鎖はともに、単独で使用しても免疫寛容を誘導するが、Ｂ鎖のほうが幾分良好に誘導する。成熟Ｂ鎖の重要な断片は残基１〜12、10〜22または11〜30を含むが、残基23〜30はそれだけではあまり有効でない。インスリン類似体は、当該技術分野で既知の方法により調製することができる。例えば、Marki他，Hoppe-Seyler's Z．Physiol．Chem．360:1619-1632，1979; Kitagawa他，Biochem．23:4444-4448，1984;Schwartz他，Biochem．17:4550-455 6，1978;Nakagawa他，J．Biol．Chem．266:11502-11509，1991;Schwartz他，Int ．J．Pept．Prot．Res．17:243-255，1981;Hu他，Biochem．32:2631-2635，1993 ;Nakagawa他，J．Biol．Chem．261:7332-7410，1986;およびRiemen他，Biochem ．22:1507-1515，1983を参照のこと。誘導抗原が免疫寛容誘導物質として作用する能力の他に機能的活性を有することは、しばしば不要であり且つ時々望ましくないことがある。例えば、インスリンまたはインスリン局外者に対する免疫寛容が所望される場合、本発明は、インスリンの代謝不活性形態、代謝不活性インスリン断片、および代謝不活性インスリン類似体を使用することを含む。好ましい不活性形態は、同等の用量で投与した時に、投与後約４時間以内に血糖レベルを有意に低下させる能力をもたないか、またはＩ型糖尿病を治療するのに十分な程には活性でない。代謝不活性類似体および断片としては、正常ヒトインスリンにより示される活性の７％未満、好ましくは３％未満、更に好ましくは１％未満、更により好ましくは0. 1％未満の活性を有するものが挙げられる。インスリン活性の測定方法としてはオイグリセミック（euglycemic）ブタクランプアッセイ、静脈内ウサギ血中グルコースアッセイ、マウス無脂肪細胞アッセイ、皮下マウス血中グルコースアッセイ、および全細胞または可溶性レセプターを使ったレセプター結合アッセイが挙げられる（Anderson他，J．Biol．Chem．267:133681-133686，1992;Volund他，D iabetic Med．8:839-847，1991;Moody他，Horm．Metab．Res．6:12-16，1974;Vo lund，Biometrics 34:357-365，1978;Brang他，Diabet．Care 13:923-954，1990 ;Drejer，Diabet．Met．Rev．8:259-286，1992）。典型的な代謝不活性インスリン類似体としては、Ｘ28；Ｘ38（Asp⁸²⁵ヒトインスリン）；Ｍ13；インスリンＡ鎖；インスリンＢ鎖；des(A1-A2)ヒトインスリン；des(A1-A3)ヒトインスリン；desA21ヒトインスリン；des(B1-B5)ヒトインスリン；des(B1-B6)ヒトインスリン；des(B23-B30)ヒトインスリン；des(B24-B30)ヒトインスリン；des(B25-B30)ヒトインスリン；Gly^A2ヒトインスリン；Ala^A2ヒトインスリン；Nle^A2ヒトインスリン；Thr^A2ヒトインスリン；Pro^A2ヒトインスリン；Ｄ−アロIle^A2ヒトインスリン；Nva^A3ヒトインスリン；Leu^A3ヒトインスリン；Val^A2，Ile^A3ヒトインスリン；Abu^A2，Abu^A3ヒトインスリン；Ｄ−Cys^A6ヒトインスリン；Ｄ−Cys^A6，Cys^A11ヒトインスリン；Ser^A6，Ser^A11ヒトインスリン；des(A8-A10)ヒトインスリン；Ｄ−Cys^A7ヒトインスリン；Ｄ−Cys^A11ヒトインスリン；Leu^A19ヒトインスリン；Gly^B6ヒトインスリン；Glu^B12ヒトインスリン；Asn^B12ヒトインスリン；Phe^B12 ヒトインスリン；およびＤ−Ala^B12ヒトインスリンが挙げられる。本発明の或る態様では、２つ、３つまたはより多数の誘導抗原が使われる。複数の標的抗原が存在する場合、または複数の標的の局外者を提供するために、それらの態様を実行することが望ましいかもしれない。例えば、糖尿病の治療の際にインスリンとグルカゴンを粘膜結合成分と混合することができる。複数の可能な別の標的をカバーするために抗原の混合物（カクテル）を提供することも望ましいかもしれない。例えば、組織適合性抗原断片の混合物を使用して、未知の表現型の同種移植片による将来の移植を見越して被検者を免疫寛容することができる。ヒト白血球抗原のアロ変異体領域が当該技術分野で知られている。例えば、 Immunogenetics 29:231，1989参照。別の例では、アレルゲンの混合物がアトピーの治療のための誘導抗原として働き得る。誘導抗原は、分子の性質に依存して、当該技術分野で既知の多数の技術により調製することができる。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および糖質（炭水化物）抗原は、それらが豊富に存在する処置しようとする患者の細胞から単離することができる。短鎖ペプチドは便利にはアミノ酸合成により調製される。既知配列を有する長鎖タンパク質は、コード配列を合成するかまたは天然源もしくはベクターからコード配列をＰＣＲ増幅せしめ、次いで適当な細菌または真菌宿主細胞中でコード配列を発現させることにより調製することができる。本発明の或る態様では、本発明の組合せが細胞または組織より得られた複雑な抗原混合物を含んで成り、その混合物のうちの１つまたは複数が誘導抗原の役割を果たす。抗原は、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドまたはアルコールのような固定剤で処理したものかまたはそのままのもののいずれかの、完全な細胞の形であってもよい。抗原は、細胞または組織の界面活性剤可溶化または機械的破壊に続いて清澄化により得られた、細胞溶解物の形であってもよい。抗原は更に、分画遠心、並びに所望によりその後の界面活性剤可溶化および透析といった技術による細胞下分画、特に原形質膜の富化により得ることもできる。可溶化した膜タンパク質のアフィニティークロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーのような他の分離技術も適当である。抗原は、接種しそして消化中に粘膜に抗原が放出される食品の形であってもよい。そのような食品としては、穀物、堅果または関連品、例えば油；乳または固形乳；チーズ；果実；野菜；海産物；薬味；および卵または卵関連品、例えば卵白およびアルブミンが挙げられる。過敏症の標的である小さい分子化合物─例えば色素、例えばＦＤ＆Ｃ黄色第５号および６号、保存剤、副産物並びに矯味矯臭剤、例えばスルフェートおよびグルタミン酸一ナトリウムを含有する食品も含まれる。抗原は病的状態に応答したまたは関連した個体、例えば粘膜障害に関連した個体中で発現されてもよくまたはその個体に存在してもよい。典型的な粘膜障害としては、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、潰瘍性腸炎、セリアック病およびクローン病が挙げられる。細胞または組織からの抗原の混合物は、本発明の様々な用途において特に重要である。例えば、（1）標的抗原もしくは適当な局外者抗原の正体が未知である器官特異的自己免疫疾患の治療のために、または複数の抗原を提供して免疫寛容応答を増強するため。この目的での適当な細胞源は、治療しようとする被検者からの同一組織の生検試料、または同一組織型の培養細胞系である。（2）計画した組織移植に対して受容個体を免疫寛容するため。免疫寛容の時点で提供個体の表現型が未知である場合、細胞源は、好ましくは提供個体からまたは少なくとも１つの主要組織適合性複合体アロタイプを提供個体と共有する個体から得られる。ヒトの場合、好ましくはHLA-A/BとHLA-DR座で２つ以上のアロタイプが共有されるのが好ましい（移植片拒絶の治療において優先性を高めるため；対宿主性移植片病の治療において優先性を減らすため）。組織適合性クラスII抗原（急性同種移植片拒絶の通常の標的）に対する免疫寛容化には、末梢血単核細胞、脾細胞またはリンパ節細胞が特に適当である。糖質抗原（極急性異種移植片拒絶の通常の標的）に対する免疫寛容化には、標的が富化されている任意の細胞タイプ、例えば内皮細胞または白血球を使用するのが適当である。提供個体の表現型が，免疫寛容誘導の時点で未知の場合、同一種の非近交系集団の複数メンバーから採取した細胞（例えば単核白血球）の混合物を使用することが適当である。組合せの構築および試験本発明の組合せは、１または複数の誘導抗原を１または複数の粘膜結合成分と組み合わせることにより調製される。これは、比較的中性の水性溶剤または緩衝液、例えば水、等張食塩水、リン酸塩緩衝液、または炭酸水素塩緩衝液、あるいは薬理学的におよび生理学的に適合する賦形剤中で最も便利に実施される。この組合せを固体形で貯蔵または投与するつもりの場合、それらの成分を固体として混合することができ、再懸濁または溶解して混合物を作製することができる。１または複数の誘導抗原および１または複数の粘膜結合成分は有効組合せ比で組み合わされる。一般に、有効組合せは、重量で約100:1〜約1:100であり、通常は重量で約20:1〜約1:20、典型的には重量で約5:1〜約1:5であろう。新規組合せの試験のための良好な開始点は約1:1の重量比である。混合した後、必要ならば、各分割量が１回の投与に望ましい抗原の量を含むように混合物が分割される。単離した細胞を使ってまたは動物モデルにおいて実験を行うことにより、免疫寛容を促進する能力についてそれらの組合せを試験することができる。免疫寛容原性活性の代用となるのは、標的部位において適当なサイトカインの生産を刺激することができる完全抗原または断片の能力である。標的部位でＴサプレッサー細胞により放出される免疫調節性サイトカインはTGF-βであると考えられる（Miller他，Proc．Natl．Acad．Sci．USA89:421，1992）。免疫寛容の最中に生産され得る他の因子は、サイトカインIL-4とIL-10、およびメディエーターPGEである。対照的に、活発な免疫破壊を受けている組織中のリンパ球は、IL- 1，IL-2，IL-6およびγ-IFNのようなサイトカインを分泌する。よって、候補となる誘導抗原は、適当な型のサイトカインを刺激するそれの能力を測定することにより評価することができる。これを念頭に置くと、誘導抗原の免疫寛容原性エピトープ、有効な粘膜結合成分、有効な組合せ、または有効な粘膜投与方法およびスケジュールについての迅速なスクリーニング試験は、試験管内細胞アッセイにおいて提供個体として同系動物を使って実施することができる。動物の粘膜表面を試験組成物で処置し、そしてある時点で完全フロイントアジュバント中の標的抗原の非経口投与によりチャレンジする。脾細胞を単離し、次いで約50μg/mlの濃度の標的抗原の存在下で試験管内培養する。標的抗原を候補のタンパク質または部分断片により置き換えて、免疫寛容原性エピトープの位置をマッピングすることができる。培地中へのサイトカイン分泌は標準的イムノアッセイにより定量することができる。他の細胞の活性を抑制する細胞の能力は、標的抗原で免疫処置した動物から単離した細胞を使って、または標的抗原に応答する細胞系を作製することにより、決定することができる（Ben-Nun他，Eur．J．Immunol．11:195，1981）。この実験の１つの変形では、サプレッサー細胞集団を軽く照射して（約1000〜1250ラド）増殖を抑制し、そのサプレッサーをレスポンダー細胞と共に共存培養し、次いでトリチル化チミジン取込み（またはＭＴＴ）を用いてレスポンダー細胞の増殖活性を提供する。別の変形では、サプレッサー細胞集団とレスポンダー細胞集団を２チャンバートランスウエル培養系（Coster，Cambridge MA）の上方高さと下方高さで培養し、その系は、それらの集団をポリカーボネート膜により互いに1m m以内隔てられた状態で同時インキュベートできるようにする。このアプローチでは、レスポンダー細胞の増殖活性を別個に測定できるので、サプレッサー細胞の照射が不要である。標的抗原が既に個体に存在するような本発明の態様では、抗原を単離する必要も粘膜結合成分と予め組み合わせておく必要もない。例えば、病的状態（例えば炎症性腸疾患またはセリアック病）の結果としてまたは食物アレルゲンの摂取を通して、ある方式で個体内で発現させることができる。１回もしくは複数回量でまたは製剤において粘膜結合成分を与え、そして抗原に対する免疫寛容化をその場で促進する能力を調べることにより試験が行われる。特定の病気の治療のための組成物および投与形態の有効性も、対応する動物病気モデルにおいて細かく練ることができる。病気の総体的症候を減少させるかまたは遅らせる能力は、使用するモデルに合わせて適宜、循環している生化学的および免疫学的性質の証拠、患部組織の免疫組織学、並びに臨床的特徴のレベルでモニタリングされる。試験に用いることができる動物モデルの非限定例が下記の項目に含まれる。治療目的の特異的免疫寛容化本発明の組成物および方法は、望ましくない免疫応答を予見または抑制することが望ましいかどうかに向けることができる。これは、様々なヒトおよび脊椎動物状態の治療に適当である。治療は、有効量での粘膜結合成分と抗原の有効組合せを投与することにより行われる。医薬組成物または治療プロトコールは、１回または複数回投与の後、それが有益なまたは望ましい臨床結果をもたらすならば効果的である。本発明の或る態様は、治療介入により事前に免疫寛容されてない個体における免疫寛容の誘導に関する。それらの態様は一般に、抗原と粘膜結合成分の組合せの複数回投与を含む。典型的には、少なくとも３回の投与、しばしば少なくとも４回の投与、時には少なくとも６回の投与が長期持続する結果を与えるが、被検体は治療過程においてより早期に免疫寛容の兆候を示すことがある。もっとも頻繁には、各用量はボーラス投与として与えられるが、粘膜放出可能な持続性製剤も適当である。多数回投与を行う場合、投与間の間隔は一般に１日〜３週間であり、典型的には約３日〜約２週間である。一般に、同一抗原と粘膜結合成分が同一濃度で存在し、そして同一粘膜表面に投与されるが、治療の過程でそれら変数の幾つかの変更を行うこともできる。本発明の別の態様は、事前に確立された免疫寛容の持続性を増強（boosting）することまたは延長することに関する。それらの態様は一般に、確立された免疫寛容が減衰しているかまたは減衰する危険がある時点での、１回の投与または短期治療過程を含む。増強は、開始ブーストまたは予備ブーストの後、通常は１か月〜１年、典型的には２〜６か月行われる。本発明は、２週間に１回、毎週、１週間に２回、または他の規則的スケジュールで行われる投与スケジュールに基づいた免疫寛容の規則的維持を伴う態様も包含する。本発明は、本明細書中に記載の態様が他の免疫寛容の誘導方法または臨床状態の処置方法と同時にもしくは逐次的に用いられる組合せ処置を包含する。これには非限定的に抗原のみ、粘膜結合成分のみもしくは抗原と粘膜結合成分の共有結合体の粘膜投与、またはいずれかの種類の免疫寛容原性物質の静脈内投与が挙げられる。処置は、一般に予防に基づいて行われる時、免疫性疾患の最も深刻な結果を予防するのに効果的である。これには幾つかの理由がある。第一に、望ましくない免疫反応を逆転させるよりもその開始を制限する上で免疫寛容誘導は効果的であるだろう。第二に、望ましくない免疫反応は不可逆的に標的器官または組織に損傷を与えることがある。例えば、Ｉ型糖尿病では膵臓のインスリン分泌β細胞が破壊される。従って、家族病歴、生化学、免疫学もしくは遺伝学的マーカーまたは初期の臨床的特徴があるために、病気の危険性が十分にあると同定された被検者に予防的投与を行うことがしばしば適切である。それにもかかわらず、開業医は、活発型の病気の治療の際に本発明を使用する機会も認識するだろう。状態の一時緩和は、完全な後退が可能でなくても確かに値打ちのあることである。免疫反応に起因する進行中の病理学、例えば全身性狼癒、慢性関節リウマチ、または粘膜疾患、例えば炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、セリアック病もしくはクローン病においては、免疫寛容誘導から恩恵を得るかもしれない。糖尿病は、β細胞破壊が不完全である場合、グルコース代謝を調節するために投与されるインスリンの有効性を低下させてしまう抗体が存在する場合、またはβ細胞移植を計画している場合、免疫寛容を誘導することにより活性状態を治療する価値がある。他の過敏性反応、例えば食物アレルギーは、標的抗原源により引き起こされ、例えば個体においてそのような反応を刺激することが知られている食物を接種することによって引き起こされる。本発明の処置は、暴露が起こりそうな時のあたりで刺激された粘膜表面に粘膜結合成分を投与することを含むだろう。特異的免疫寛容誘導により治療可能な病気の例本明細書中に開示される特異的免疫寛容を誘導するための組成物および方法は、多種多様な状態の治療に向けることができる。後述するものは幾つかの着目の状態の非限定的説明である。本発明の或る態様は、自己免疫が役割を果たしている病的状態の治療に関する。自己免疫疾患は、器官特異的および全身的なものとして特徴づけることができる。病理学としては、患部組織の抗体媒介細胞溶解もしくは細胞媒介細胞溶解、Ｔヘルパー／インデューサー細胞により媒介される炎症性破壊、免疫複合体の沈着、および抗体媒介レセプタートリガ（trigger）またはブロックを挙げることができる。本発明に従って治療することができる状態の非限定例としては次のものが挙げられる。 ^*他の臨床状態の誘導抗原として適当なコラーゲン型については、国際特許公開第WO96/21458号公報を参照のこと。自己免疫状態のための多数の動物モデルが技術の現状において確立されている。例えば、インスリン依存性糖尿病（Martin他，J．Autoimmunity 9:637，1996; Yang他，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90:10494，1993;von Herrath他，J．Clin ．Invest．98:1324，1996;並びに実施例１および３）、関節炎（Zeidler他，Aut oimmunity 21:245，1995;WO 96/21458;Pearson他，J．Chrionic Dis．16:863，1 963;および実施例４）、多発性硬化症（Alvord他，“Experimentai Allergic En cephalomyelitis...”，Allan R．Liss NY，1984;および実施例４）、および自己免疫性ブドウ膜網膜炎（WO 91/01333）。本発明の他の態様は、望ましくない過敏症に関連する病的状態の処置に関する。過敏症は、Ｉ型、II型、III型およびIV型のいずれか１つであることができる。即時型（Ｉ型）過敏症は、典型的には誘導抗原として１もしくは複数の侵襲（ offending）アレルゲンまたはそれの免疫寛容原性断片を使って処置される。投与の頻度は、典型的にはアレルゲンの暴露時間に対応するだろう。適当な動物モデルが技術の現状において既知である（例えば、Gundel他，Am．Rev．Respir．D is．146:369，1992;Wada他，J．Med．Chem．39，2055，1996;およびWO 96/35418 ）。本発明の別の態様は移植に関する。これは、提供個体から受容個体への組織試料または移植片の移植を言い、そしてしばしば組織により提供される生理学的機能を回復するために組織を必要とするヒト受容個体に対して行われる。移植される組織としては、非限定的に、腎臓、肝臓、心臓、肺のような器官全体；皮膚移植片や目の角膜のような器官成分；並びに骨髄または循環血液から選択されそして増殖された細胞の培養物、骨髄細胞および全血輸液といった細胞懸濁液が挙げられる。移植から起こり得る深刻な合併症は、宿主受容個体と移植される組織との間の抗原の相違の結果より生じる。その相違の性質および程度に依存して、宿主による移植片の免疫学的侵襲または移植片による宿主の免疫学的侵襲の危険性があり、あるいはその両方が起こり得る。この危険性の程度は、同様な表現型を有し同様に処置された被検者の集団における反応パターンを追跡し、そして十分に受け入れられた臨床手順に従って可能性のある様々な寄与因子を相関させることにより求められる。免疫学的侵襲は、先在する免疫応答（例えば予め形成された抗体）の結果であってもよく、または移植の時期近くに開始されるものの結果であってもよい。互いとまたは様々なエフェクター分子や細胞との任意の組合せで抗体、Ｔ_H細胞またはＴ_C細胞が関与し得る。本発明の一目的は、標準的外科手順に従うが、移植片の受容個体にとって不利な免疫反応の危険性が減少された、移植を実施できるようにする材料および方法を提供することである。この方法は、提供個体の組織に対して受容個体を免疫寛容するか、もしくはその逆、またはその両方を含む。免疫寛容誘導は、移植された組織中で発現される標的抗原または局外者抗原を、粘膜結合タンパク質と未接合の組合せで投与することにより行われる。有効組合せの調製の容易さとは、ほとんど注意を払わずに、提供個体と受容個体の表現型に合わせてそれらを調製できることを意味する。移植片は多数の異なる細胞型から成る複雑構造であることがあり、そして個体に移植される細胞型のいずれか１つまたは複数が危険性を有することがあり、そのため本発明の方法が適当である。例えば、内皮細胞抗原は腎臓移植を複雑にし、そしてパッセンジャーリンパ球は肝臓移植を複雑にする。本発明の或る態様は、受容個体による組織移植片拒絶に至る、対宿主性移植片病の危険性を減少させることに関する。超急性、急性または慢性拒絶反応の作用を予防または減少させるために処置を行うことができる。処置は、移植片を設置する時に免疫寛容が正しい場所に起こるように、移植に先立って優先的に開始される。しかし、これが可能でない場合には、処置を移植と同時にまたは移植の後に開始することができる。開始の時期にかかわらず、処置は一般に移植後少なくとも１か月間に渡り規則的な間隔で続けられるだろう。移植片の十分な適応が起これば、追跡量は必要でないかもしれないが、移植片の拒絶または炎症の何らかの証拠があれば、続行すべきである。もちろん、本発明の免疫寛容誘導方法は、更に低レベルの危険性を得るために他の形態の免疫抑制と組み合わせることができる。一例として、別の種へのブタ腎臓の異種移植は、排他的でなく主として、腎内皮細胞上に発現された三糖Galα1-3Galβ1-4GlcNAcβ1-に対して予め形成された抗体に対する超急性拒絶の危険性がある。従って、ブタ同種移植片を予想して、前記三糖が誘導抗原であるような組成物を使って受容個体を予め免疫寛容することができる。あるいは、ブタ内皮細胞抽出物を使って、支配的な前記三糖に対してだけでなく、他の三糖類、組織適合性抗原上の異種決定基および予想されない抗原不適合に対しても免疫寛容を促進することができる。第二の例として、ヒト間での腎臓同種移植は、組織適合性クラスII抗原の不一致のために急性（主にＴ_H 媒介）拒絶反応の危険性がある。従って、受容個体の免疫寛容誘導は移植前、最中または後に提供個体の表現型の単離または組換えヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスIIを使って実施することができる。あるいは、提供個体からの細胞または細胞抽出物を誘導抗原として使って、クラスII不一致と他の不適合に対して免疫寛容することができる。この用途での好ましい細胞型は、好ましくは実質的レベルでクラスII抗原を発現するもの、特にＢ細胞、単核細胞およびマクロファージであろう。それらの細胞は、末梢血（入手可能なら）、リンパ節または脾臓から得ることができる。単核白血球集団（Histopaque Ficoll^TMのような培地上での遠心分離により得られる）は、一般にクラスII抗原に非常に富むだろう。移植待ちリストに載った被検者に組換えＨＬＡ抗原の混合物または多数の異なる提供個体からの混合白血球集団の抽出物を投与することにより、該被検者を多数の潜在的提供個体に対して事前免疫寛容することも可能である。本発明の或る態様は、対宿主性移植片病の危険性を減らすことに関する。この一連の態様では、生存している提供個体を、移植を行う前に将来の移植片受容個体の標的抗原に対して免疫寛容することが必要である。一端免疫寛容が得られたら、提供個体の細胞または組織が収得されそして移植が行われる。一例では、受容個体の組織に対して非自系骨髄提供個体を事前免疫寛容することにより、受容個体が免疫無防備状態である場合に免疫移植片中のリンパ球が全身性対宿主移植片病を発生しないようにする。対宿主性移植片病は典型的にはヒト白血球抗原に向けられるので、提供個体に投与される組成物に適当な誘導抗原は、受容個体の表現型の単離もしくは組換えＨＬＡ、または受容個体からの白血球抽出物である。最も伝統的な非特異的免疫抑制方法を提供個体源に適用することは、移植の目標に不適合であろう。本発明の方法は、誘導される免疫寛容が特異的であり、且つ移植片の機能を妨害しないだろうという点で有利である。別の例では、受容個体の型の抗原または赤血球を使って提供対象を免疫寛容することにより、肝移植片中の血液型抗原に特異的なパッセンジャーリンパ球による溶血活性が最少化される。医薬組成物およびそれらの投与本発明の組成物は、投与が必要な個体、特に望ましくない免疫応答を有するヒト被検体への投与のために調製することができる。組成物の調製およびそれらの使用は、一般に受け入れられた医薬組成物の調製手順に従って行われる。本発明の或る態様では、粘膜結合成分と抗原または抗原混合物とが一緒に投与される。両成分は典型的には単一の医薬組成物中に有効比率で組み合わされるか、または投与の直前に混合される。他の態様では、粘膜結合成分が抗原とは別個の製剤として投与される。例えば、抗原が食品成分である時、粘膜結合成分が前記食品成分に対する免疫寛容を促進する粘膜結合成分を食品と一緒に、またはその前の期間に、または食品の摂取後に与えることができる。粘膜結合成分と誘導抗原は、できるだけ近接した時間内に与えられ、好ましくは約６時間以内に、より好ましくは30分以内に与えられる。別の例では、粘膜結合成分を含有する製剤に、粘膜表面上に既に存在する自己抗原が補足される。医薬組成物の調製方法は、Remington's Pharmaceutical Sciences．E.W．Mart in編，Mack Publishing Co.，PAに記載されている。粘膜結合成分と抗原（別々にまたは一緒に投与される）は、場合により他の活性成分、担体および賦形剤、並びに安定剤と組み合わされる。着目される追加の活性成分は、粘膜表面における該組合せの免疫寛容原性作用を増強する剤である。追加の活性成分の例はサイトカイン、例えばIL-4である。必ずしも必要でないが、医薬組成物は正確な量の投与に適した単位投与形態において提供することができる。本発明の或る態様は、所望により、患者によるまたは健康管理専門家による医薬組成物の調合についての使用説明書と共に、１または複数の成分が別々の容器中に提供されているキットおよび試薬に関する。一例では、投与直前に混合するためのキットの別個の容器中に誘導抗原と粘膜結合成分が提供される。移植について着目される第二の例では、専門家が組成物での使用に適した誘導抗原を選択できるように、可能な誘導抗原のパネル（即ち、異なる提供個体の白血球抽出物または組換えＨＬＡ抗原のパネル）が粘膜結合成分と一緒に提供される。第三の例では、誘導抗原と組み合わせる目的で、場合により他の成分、例えば緩衝剤およびIL-4のような補因子と共に、粘膜結合タンパク質が単独で提供され、特に専門家により投与時期の近くに調製された細胞または細胞抽出物が提供される。該組成物は粘膜投与用であるので、予想される保存寿命の間安定なだけでなく、極端なpH、酵素、および粘膜環境での他の侵襲に対して耐性である組成物を調製することが有用である。例えば、粘膜表面に結合するかまたは貫通するペプチドの能力を害することがないように該ペプチドを維持する結合剤が有力な補助剤であるだろう。インスリンは金属カチオン、特に亜鉛カチオンの存在によって安定化される。中性または弱アルカリ性の溶液（典型的には腸液）中では、インスリンの優先形態は、六量体（ヘキサマー）複合体あたり約２個の亜鉛イオンを有する六量体である。ポリマー会合に関与しているのは、主にインスリン単量体の無極性残基であり、表面はほとんど完全に極性になっている。従って、インスリンを含む組成物には、十分な金属カチオンの使用、特に亜鉛の使用が推奨される。多くの市販のインスリン製剤は少量の亜鉛が存在するものもあるが、そうでないものもあり、亜鉛の存在が望ましいならばそれを補足する必要があるだろう。必要な量は、インスリン六量体あたり亜鉛イオン２個の場合には0.38重量％、または六量体あたり亜鉛イオン４個の場合には 0.78重量％である。理論により限定するつもりはなく、亜鉛を含まない態様よりも亜鉛を含むインスリンが良好に機能する１つの考えられる理由は、遊離のインスリンに比較して亜鉛含有インスリン複合体のサイズが大きいことである。小さい分子は主に腸上皮細胞に差し向けられ、そして大きい分子はＭ細胞に差し向けられるということが証明されている（Frey他，J．Exp．Med．184:1045-1059，1996）。Ｍ細胞はＴ細胞との相互作用のためにパイアー斑にタンパク質を輸送する働きをし、次いでそれは全身循環に入る（Weiner他，Immunology Today 18:335-343，1997）。パイアー斑からの調節Ｔ細胞は、本発明により誘導された免疫寛容を標的部位へと戻す働きをするのかもしれない。亜鉛含有複合体は、大きなサイズであるためにＭ細胞に一層直接的に差し向けられ、それが免疫寛容を誘導する有効性の原因となると理論化することができる。本発明の医薬組成物の厳密な性質はしばしは、意図する投与経路に一部は依存するだろう。粘膜表面への医薬組成物の投与経路の選択は、引いては、処置すべき臨床状態と特定表面への投与の容易さに特に依存するだろう。最も典型的に使用される粘膜表面は、胃腸管、鼻粘膜、および気道粘膜の表面である。胃腸管への投与は、経口投与、座薬、挿管、内視鏡検査、または他の適当な技術によって行うことができる。経口投与用組成物は、典型的には液体、ピルまたはカプセルである。液体組成物は、溶液または懸濁液として、あるいは使用前に液体中に溶解または懸濁するのに適した固体形態として提供することができる。インスリンを含む経口組成物は、六量体形成に十分な亜鉛量の存在から特に恩恵を被る。液体または易溶性組成物もインスリンが胃の低ｐＨで分解する危険性を有するので、インスリンの前にまたは同時に、炭酸水素塩または別の許容される制酸薬を使って胃のｐＨを約４より上に高めることにより、この危険性を減少させるのが有利であろう。経口投与に特に適した他のインスリン組成物は、ゼラチンカプセル中に封入されているか、または胃を通過した後で内容物を放出するように他の形で製剤化されている腸溶性コーティングピル剤である。誘導抗原と粘膜結合タンパク質を封入しているリポソームおよびゲル化性親水コロイドのような微粒子製剤も有効である（例えば、欧州特許出願 0635261 Al）。該組成物の抗原がインスリン以外の何かである場合、それらの方策の１つまたは複数によって該抗原を保護することの重要性は、胃腸環境に対するその抗原の感受性に依存するだろう。薬物を腸にターゲッティングするための一般的概説については、Wilding他（Pharmac．Ther．62:97，1994）を参照のこと。経鼻投与は、典型的には、快適な用量で有効濃度を含有する易流動性の液体、クリームまたはゲルの使用を伴う。鼻粘膜は比較的静止性であり、そして比較的少量のタンパク質分解酵素が存在するので、場合によってはより低用量の抗原を使って効果が得られるかもしれない。気道の粘膜への投与は、典型的にはエーロゾルの調製と吸入を必要とする。エーロゾルは、微細に分散された液体または粉末のいずれかであることができる。エーロゾルを作製する装置および方法は、Kurk-Othmer，“Encyclopedia of Che mical Technology”，第４版第１号，Wiley NY，670-685頁，1991;Newman，“Ae rosols and the Lung”，Clarke & Davia編，Buttersworths，London Engl.，19 7-224頁，1984に記載されている。米国特許第4,624,251号、同第3,703,173号、同第3,561,444号および同第4,635,627号明細書を調べることもできる。ポータブル吸入器は、必要ならば一日何度も便利に投与できるようにする。用量の大きさは、意図する作用部位に達する前の予想される該組成物の分布量、投与経路に対して予想される分解および浸透の程度、投与頻度、並びに処置する被検者の年齢および臨床状態といった他の関連する特徴を考慮に入れて選択される。一般に、ヒト被検者への経口投与の１回投与量は、10μg〜50mgの抗原または抗原混合物であり、典型的な範囲は約100μg〜2mgであろう。個々の患者についての臨床的特徴の評価および適当な治療スケジュールの考案は、結局は処方する医師の責任である。下記の記載は、特に、各成分の有効組合せを使った、被検者において免疫寛容をいかに誘導できるかについての詳細な説明である。本発明の精神を逸脱することなく、組成物の性質とそれらの使用の両方に関して変更をなし得ることは理解されよう。上記と下記の両方で本明細書中に言及される全ての特許、特許出願、文献および刊行物は全体が参考として本明細書中に組み込まれる。下記に与える例は、当業者に対する更なる指針として提供され、決して限定を意味するものではない。実施例実施例１：インスリンとコレラ毒素Ｂの非共有結合混合物を使ったＮＯＤマウスの糖尿病の症状の処置この実施例は、インスリンと混合したＣＴＢがＮＯＤマウスモデルにおいて免疫寛容を誘導しそして糖尿病の症状を防止できることを特徴づけるために行った。インスリン依存性糖尿病は、ＮＯＤマウスにおいて生後約20週の中央期間で自発的に発病した。組換えヒトインスリンおよび精製ブタインスリンはNovo Nordisk，Bagsvaerd ，Denmarkから入手した。それらの製剤は共に結晶性でありそして亜鉛を含む。Ｂ鎖とＡ鎖の間にアミノ酸配列ＡＡＫを含むインスリン前駆体“Ｍ13”（リーダー配列は含まない）は、前駆体コード領域の組換え発現により得た。Ｍ13製剤は亜鉛を含まなかった。コレラ毒素Ｂサブユニット（ＣＴＢ）は、コレラ毒素遺伝子を欠いておりそしてＣＴＢをコードする組換え過剰発現プラスミドが補足されているビブリオ・コレレ（Vibrio cholerae）変異株の培養物濾液からのヘキサメタリン酸沈澱とSephadex^TMG-75ゲル濾過クロマトグラフィーの組合せにより精製した（Lebens他，Bio/Tech．11:1574，1993）。インスリンは20mg／mlになるように0.35Ｍ炭酸水素ナトリウム中に溶かした。ＣＴＢは５mg／mlになるようにリン酸塩緩衝食塩水，pH7.4（ＰＢＳ）中に溶かした。それらの溶液を等重量比で混合し、次いでＰＢＳで希釈して250μｌ容量中に所望の量を与えた。別の250μｌの炭酸水素ナトリウムを加えて胃酸を緩衝化した。18ゲージのステンレス綱栄養供給針からの経口栄養により組成物を雌ＮＯＤマウスに投与した。マウスを表２に示すようなグループに分けた。生後10週、12週、14週、16週、 18週および20週目に隔週スケジュールにおいて投与した。処置期間中および確認週間において毎週動物を糖尿病の徴候についてモニタリングした。動物が陽性尿グルコース試験を有し、そして15mM以上の持続するランダムな血中グルコース濃度を有した場合、その動物を糖尿病と見なした（Bayer ，Germanyからの尿化学試験片を使って測定した時）。結果を表３に示す。第27週の時点まで全ての動物が生存しており、データをカウントした。フィッシャーのExact Testを使って、偽薬で処置したグループからの有意差の確率を計算した。偽薬処置グループからの結果は、この株における自発性糖尿病症状の進行速度を追跡する。処置グループにおける有意に低い症状頻度は、この処置が該グループ中のある比率の動物において発病を遅らせることを示す。最終投与後３週目に、100μgのインスリンを100μgのＣＴＢと組み合わせて投与したグループ２とグループ５で症状の頻度が低かった。組換えヒトインスリンと精製ブタインスリンも同等に効果的であったが、インスリン製剤が亜鉛を含むという前提を有した。グループ８もインスリンのみでの処置後に低頻度の症状を示したが、1000μｇというずっと高いレベルにおいてであった。グループ６における100μgの亜鉛不含有インスリンと100μgのＣＴＢの組合せは、この組合せの効力を維持する亜鉛の役割と一致して、効果的でなかった。亜鉛は、インスリンを六量体として集成した状態に維持し、胃腸系への通過中にそれを保護しそして／または粘膜表面の良好な浸透もしくは抗原提示細胞による良好な取込みを促進すると思われる。 100μgのＭ13インスリン前駆体と100μgのＣＴＢとの組合せも効果的なく、これも亜鉛の欠失に起因した（グループ４）。この前駆体はそうでなければ効果的であると推測される。インスリンとＣＴＢとの混合物はインスリンを1000μgという高用量で与えると効果的でない（グループ３）。最終投与後７週目、グループ２と５では糖尿病症状の進行がまだ有意に遅延され、対照の77％に比較して44％に減少した症状の頻度を有した。グループ８はもはや対照から有意に相違しなかった。これは、単独の1000μgのインスリンでは一時的にのみ症状を遅らせることを示す。しかしながら、100μgのＣＴＢと組み合わせた100μgのインスリンは、処置終了後少なくとも７週間に渡ってかなりの比率の動物において症状の発現を遅らせる持続性免疫寛容をもたらす。処置グループ対対照グループの罹病動物の比率（44％／77％）は、処置しなければ27週目までに症状を発生したであろう動物の約43％において処置が有効であったことを示す。実施例２：試験管内でのコレラ毒素Ｂの免疫刺激効果この実施例は、ＣＴＢが抗原特異的リンパ球によるサイトカイン分泌を誘導しそして培養物において抗原提示を促進することを証明する。 10週のBALB/cマウスを、完全フロイントアジュバント中の200μgのＫＬＨ（ＰＢＳ中２mg／ml）（最終容量0.4ml）で皮下免疫処置した。２週間後、脾細胞を調製しそして５×10⁵細胞／ウエルの密度でプレートに接種した。細胞を刺激剤と共にインキュベートし、そして次のアッセイに従ってプレートを発色させた。 MultiScreen^TMプレート（Millipore Cat．MAIPS4510）の各ウエルを100μｌの５μg/mlサイトカイン抗体（抗IL-2，抗IL-4または抗IFN-γ）により４℃で一晩コーティングする。該プレートを１％ウシアルブミンと0.1％ Tw een^TM20を含むＰＢＳで37℃にて１時間ブロックする。該プレートを10％ウシ胎児血清を含むRPMI 1640中で洗浄し、そして脾細胞を37℃および５％CO₂で16〜24 時間インキュベートする。10回洗浄後、100μｌ／ウエルのビオチン化抗サイトカイン抗体（Pharmingen）を２μg/mlで添加し、そして37℃で２時間インキュベートした。プレートを再び洗浄し、そして２μg/mlの西洋ワサビペルオキシダーゼ接合抗免疫グロブリンを該ウエル中に添加して室温で２時間インキュベートした。洗浄後、製造業者の指示（HRP用のVector AEC基質キット，Cat．SK-4200）に従って色原体基質を添加して反応液を発色させた。洗浄および乾燥後、顕微鏡下でスポットをカウントした。結果を下記の表に示す。この結果は、ＣＴＢの添加が、読み取りに用いるサイトカインに依存して抗原特異的Ｔ細胞試験管内応答を５倍増強することを示す。ＣＴＢはＫＬＨの不在下では脾細胞を刺激しなかったので、刺激効果が抗原特異的であると結論づけることができる。別の実験において、抗原提示細胞に対するＣＴＢの効果を特徴づけた。10週齢のBALB/cマウスからの脾細胞をＣＴＢ（５μg/ml）と共に37℃で20 分間インキュベートした。結合しなかったＣＴＢを洗い流し、処置した細胞を１：１の比でＫＬＨ免疫動物からの2.5×10⁵個の脾細胞と混合し、次いで上述した通りにＫＬＨの存在下でまたは不在下で刺激した。結果を下表に示す。 IL-4生産の増加により測定した時に、ＫＬＨに対する抗原特異的応答が約５倍増強された。マイトジェン（分裂促進因子）誘導応答(Con A)に対しても非応答細胞（培地対照）に対しても全く効果が見られなかった。これは、抗原提示の増強を介したＣＴＢの免疫刺激効果を裏付ける。ＣＴＢとマウス抗原提示細胞系RA W 264との１〜２日間のインキュベーションは、次の同時刺激分子のアップレギュレーションをもたらした：B7-1，B7-2，VCAM，クラスII MHC抗原およびMAC-1 。実施例３：Ｉ型糖尿病のウイルス誘導モデルにおける処置ヒトのインスリン依存性（Ｉ型）糖尿病の病因は、典型的には組織特異的自己免疫疾患に対する遺伝的素因、およびβ細胞破壊を開始させるトリガ（触発）現象に関係すると考えられる。トリガ現象は、外来の病因物質、例えばβ細胞により発現される宿主の一成分を模倣するウイルス、による感染である場合がある。着目の別の動物モデルはvon Herrath他（J．Clin．Invest．98:1324，1996）のトランスジェニックマウスモデルである。これらのマウスは、β細胞中でラットインスリンプロモーターの調節下にリンパ球脈絡髄膜炎ウイルス（LCMV）のウイルス核タンパク質を発現する。トランスジェニックマウスの２％未満が糖尿病症状を自発的に発生するが、LCMVでのチャレンジ後２カ月目には、応答頻度が＞ 95％になる。１mgのインスリンでの２か月間に渡る週２回の経口処置は、該療法の中間期にLCMVでチャレンジした時、マウスの＞50％で糖尿病を予防する。この実施例の実験では、トランスジェニックマウスを本発明の組合せで処置し、LCMVでチャレンジして糖尿病の発病を触発し、次いで２か月間まで症状についてモニタリングする。混合物と投与は、投与１回あたり100μgのＣＴＢと混合した100μgの亜鉛含有ヒトインスリンを含んで成る組成物を使って、実施例１に記載の通りに行う。LCMVチャレンジの前か後のいずれかで２週間に渡り週２回栄養を行う。マウスは、２回の連続した測定において＞350mg／mlのランダムグルコース測定値により糖尿病であると定義される。混合物で処置したグループと、インスリンのみまたは緩衝液対照で処置したグループとで効果を比較した。実施例４：別の免疫媒介状態の処置のための抗原−ＣＴＢ混合物本発明の組成物を、望ましくない免疫応答を伴う他の病気について動物モデルを使って試験した。多発性硬化症は、７〜８週齢の雌Lewisラットにおいて実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を誘導することによりモデル化する。動物の後足に完全フロイントアジュバント中の50μgのモルモットミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）を注射する。100μgのＭＢＰと100μgのＣＴＢの混合物の胃内挿管により免疫寛容を誘導する。ＥＡＥの誘導前または後のいずれかで、投与と投与の間に２日または５日間間隔をあけて動物に１，３または６回免疫寛容原を供給する。動物を次のスケールに従ってＥＡＥの臨床的徴候について毎日調べる：０−全く検出可能な病気なし；１−尾彼行；２−尾麻痺および四肢虚弱；３−後足麻痺；４−四肢麻痺；５−致死。ＭＢＰ−ＣＴＢ混合物の効果をＭＢＰのみの効果と比較し、そして異なる処置スケジュール間で比較する。関節炎は、完全フロイントアジュバント中の300μgのII型コラーゲン(Sigma) の皮内注射に続き、21日後に100μgのII型コラーゲンの追加注射により８〜14週齢のDBA/1 Lac Jマウスを感作することによりモデル化する。10μgまたは100μg のII型コラーゲンと同重量のＣＴＢとの混合物の胃内挿管により免疫寛容を誘導する。関節炎の誘導前または後のいずれかで、投与と投与の間に２日または５日間間隔をあけて動物に１，３または６回免疫寛容原を供給する。マウスを関節腫大と紅斑について１週間に２〜３回調べる（足の太さと足根関節幅；定張力カリパスを使って測定する）。少なくとも１本の足における連続した測定値の実質的変化により腫大と紅斑が観察される時、マウスを関節炎であると見なす。次の採点スケールを用いる：０−全く関節炎が検出可能でない；１− 穏和な腫大と紅斑；２−両足根と足根関節の腫大と紅斑；３−硬直と骨変形。ＭＢＰ−ＣＴＢ混合物の効果を、ＭＢＰのみの効果と比較し、そして異なる処置スケジュール間で比較した。実施例５：経鼻または経口投与による破傷風毒素に対する免疫寛容誘導この実験では、別の標的抗原として破傷風毒素を試験し、胃腸内投与と経鼻投与とで比較を行った。この実験プロトコールは次のようであった。完全な破傷風毒素（ＴＴ）はConn aught Laboratories，Toronto Canadaから入手した。Balb/cマウス（雌，７〜８週齢）を下記に指摘のように、ＰＢＳ中の50μg破傷風毒素（ＴＴ）と１：１混合した足パッド中の完全フロイントアジュバント（最終容量10μｌ）を使って免疫処置した。10日後、排液したリンパ節を取り出し、単細胞懸濁液に調製した。それらを96ウエルプレート中で100μg/mlの破傷風毒素で50時間刺激し（５％ウシ胎児血清、100U/mlペニシリン、100g/mlストレプトマイシンおよび２mMグルタミンを含有するRPMI 1640中200,000細胞／μｌ）、次いで１μCiのメチル³Ｈ− チミジンを使って24時間追跡した。細胞を収得し、そしてシンチレーションカウンティングによりチミジン取込みを測定した。抗原で刺激したＴ細胞の値で割った抗原不含有の培地中のＴ細胞の値として、刺激指数（ＳＩ）を計算した。経口投与には、抗原を0.35M NaHCO₃中に希釈しそして0.57mlの最終容量を投与した。経鼻投与には、抗原をＰＢＳ中に希釈し、そして0.01mlの最終容量を投与した。処置グループを下表に示す。結果を下表に示す。ＴＴの経口投与と経鼻投与の両方が応答を阻害した（グループ３と７）。しかしながら、ＴＴとＣＴＢを混合することにより、経口デリバリーによる効果が約10倍増強された。というのは、10μg ＴＴ＋10μg ＣＴＢの経口投与は、単独の破傷風毒素100μgと同じくらいＴ細胞増殖を阻害した（それぞれ、6.0 ＳＩと6.1 ＳＩ）からである。100μg ＴＴ＋100μg ＣＴＢ経口投与は、その阻害を更に増強した（即ち、4.5 ＳＩ）。Ｔ細胞増殖の阻害には経鼻投与も有効であった。10μg ＴＴ単独を10μgＴＴ＋10μg ＣＴＢと比較すると、混合製剤を使った時にＴ細胞増殖阻害に対する最高の効果が得られた（それぞれ 4.9 ＳＩと4.4 ＳＩ）。全体的に、Ｔ細胞増殖阻害に対して最高の効果は、10μ gＴＴ経鼻投与、10μg ＴＴ＋10μg ＣＴＢ経口投与、100μg ＴＴ経口投与または5000μg ＴＴ経口投与に比べて、10μg ＴＴ＋１０μg ＣＴＢ経鼻投与を用いた時に得られた。ＴＴ混合物が単独でＴＴを使った場合と比較して、経口免疫寛容を約10倍増強すると結論づけられた。更に、経鼻投与は経口投与と比較して、Ｔ細胞増殖に対する阻害効果を約10倍増強する。即ち、10μg ＴＴ＋10μg ＣＴＢ経鼻投与は、 100μg ＴＴ＋100μg ＣＴＢ経口投与と同じくらいに作用する（それぞれ、4.4 ＳＩと4.5 ＳＩ）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 29/00 １０１Ａ６１Ｐ 37/02 37/02 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】 1. 個体において標的抗原に対する持続性免疫寛容を誘導する方法であって、前記個体の粘膜表面に、未接合の形で誘導抗原と粘膜結合成分の有効組合せを含んで成る組成物を投与することを含んで成る方法。 2. 個体においてアレルゲンまたは粘膜抗原に対する持続性免疫応答を誘導する方法であって、前記個体の粘膜表面に、粘膜結合成分の有効量を含んで成る組成物を投与することを含んで成る方法。 3. 前記粘膜結合成分がＧＭ１結合活性を有する、上記請求項のいずれか一項に記載の方法。 4. 前記粘膜結合成分がコレラ毒素Ｂペプチドである、上記請求項のいずれか一項に記載の方法。 5. 前記誘導抗原と前記粘膜結合成分が組成物中で未会合の形である、請求項１に記載の方法。 6. 下記の条件：ａ）前記誘導抗原が標的抗原を含んで成る；ｂ）前記誘導抗原が標的抗原の局外者を含んで成る；ｃ）前記標的抗原が自己抗原である；ｄ）前記標的抗原がアレルゲンである；ｅ）前記標的抗原が同種抗原または異種抗原であるのうちの１つまたは複数が存在する、上記請求項のいずれか一項に記載の方法。 7. ａ）前記粘膜表面が胃腸粘膜でありそして前記組成物が経口投与される；ｂ）前記粘膜表面が鼻粘膜であり、そして前記組成物が鼻内投与される；またはｃ）前記粘膜表面が気道粘膜であり、そして前記組成物がエーロゾルにより投与される、上記請求項のいずれか一項に記載の方法。 8. 前記組成物が少なくとも３回連続して粘膜表面に投与される、上記請求項のいずれか一項に記載の方法。 9. 前記持続性免疫応答が少なくとも５週間に渡り持続する、上記請求項のいずれか一項に記載の方法。 10．上記請求項のいずれか一項の方法に従って持続性免疫応答を誘導することを含んで成る、個体の自己免疫状態の処置方法。 11．ａ）前記自己免疫状態が慢性関節リウマチであり、そして前記誘導抗原が II型コラーゲンペプチドである；ｂ）前記自己免疫状態が多発性硬化症であり、そして前記誘導抗原がミエリン塩基性タンパク質ペプチドである；またはｃ）前記自己免疫状態がＩ型糖尿病であり、そして前記誘導抗原がインスリンペプチドである、請求項10に記載の方法。 12．ａ）前記免疫寛容がアレルゲンに対して誘導され、そして粘膜表面への前記粘膜結合成分の投与がアレルゲンへのその粘膜表面の暴露の前、最中または後に行われる；またはｂ）前記免疫寛容が胃腸管の自己免疫疾患に関連する粘膜抗原に対して誘導され、そして前記粘膜結合成分が胃腸管に投与される、請求項２に記載の方法。 13．提供個体から移植される組織移植片の受容個体における拒絶の危険性を減らす方法であって、請求項１の方法に従って、前記受容個体の粘膜表面に、未結合の形の誘導抗原と粘膜結合成分の有効組合せを含んで成る組成物を投与することにより、前記受容個体において前記提供個体の細胞に対する免疫寛容を誘導することを含んで成る方法。 14．提供個体から移植される組織移植片からの受容個体における対宿主性移植片病の危険性を減らす方法であって、請求項１の方法に従って、前記受容個体の粘膜表面に、未結合の形の誘導抗原と粘膜結合成分の有効組合せを含んで成る組成物を投与することにより、前記提供個体において前記受容個体の細胞に対する免疫寛容を誘導することを含んで成る方法。 15．前記誘導抗原がａ）処置する受容個体または提供個体を免疫寛容しようとするアロタイプ決定基を有する、単離もしくは合成ヒト白血球抗原またはそれの混合物；またはｂ）受容個体または提供個体それぞれからの、あるいは受容個体または提供個体それぞれと主要組織適合性複合体アロタイプを共有する個体からの、細胞、細胞膜または細胞抽出物の形の誘導抗原の混合物；のいずれかである、請求項13または14に記載の方法。 16．請求項１，３〜11および13〜14のいずれか一項に記載の方法に従って持続性免疫寛容を誘導するための医薬組成物であって、未結合の形で誘導抗原と粘膜結合成分の有効組合せを含んで成る医薬組成物。 17．未結合の形でインスリンペプチドと粘膜結合成分の有効組合せを含んで成る、Ｉ型糖尿病またはインスリン炎の処置における粘膜投与のための請求項16に記載の医薬組成物。 18．金属イオンを更に含んで成る、請求項22に記載の医薬組成物。 19．前記金属イオンがZn⁺⁺である、請求項22に記載の医薬組成物。 20．請求項15〜18のいずれか一項に記載の医薬組成物の調製方法であって、インスリンペプチドを有効な組合せ重量比で粘膜結合成分と組み合わせることを含んで成る方法。 21．手術または療法においてヒトまたは動物の体を処置するための医薬の調製における誘導抗原と粘膜結合成分の使用であって、前記誘導抗原と前記粘膜結合成分が医薬中で未結合の形であることを特徴とする使用。 22．個体において標的抗原に対する持続性免疫誘導を誘導するための医薬の調製における粘膜結合成分の使用であって、ａ）前記医薬が前記標的抗原に対する免疫寛容を誘導するための誘導抗原を更に含んで成り、そして前記誘導抗原と前記粘膜結合成分が医薬中で未結合の形である；またはｂ）前記医薬がそのような誘導抗原を実質的に含まないことを特徴とする使用。 23．標的抗原に対する免疫反応性に関連した個体の自己免疫状態を処置するための医薬の調製における粘膜結合成分の使用であって、ａ）前記医薬が前記標的抗原に対する免疫寛容を誘導するための誘導抗原を更に含んで成り、そして前記誘導抗原と前記粘膜結合成分が医薬中で未結合の形である；またはｂ）前記医薬がそのような誘導抗原を実質的に含まないことを特徴とする使用。 24．個体において標的抗原に対する望ましくない過敏症を処置するための医薬における粘膜結合成分の使用であって、ａ）前記医薬が前記標的抗原に対する免疫寛容を誘導するための誘導抗原を更に含んで成り、そして前記誘導抗原と前記粘膜結合成分が医薬中で未結合の形である；またはｂ）前記医薬がそのような誘導抗原を実質的に含まないことを特徴とする使用。 25．提供個体から移植された組織移植片に対する受容個体における拒絶の危険性を減らすための医薬の調製における粘膜結合成分と誘導抗原の使用であって、前記誘導抗原が前記提供個体のアロタイプ決定基を含んで成ることを特徴とする使用。 26．提供個体から移植された組織移植片からの受容個体における対宿主性移植片病の危険性を減らすための医薬の調製における粘膜結合成分と誘導抗原の使用であって、前記誘導抗原が前記受容個体のアロタイプ決定基を含んで成ることを特徴とする使用。 27．前記医薬が粘膜表面への投与用に製剤される、請求項21〜26のいずれか一項に記載の使用。 28．前記医薬が経口投与、経鼻投与または気道投与用に製剤される、請求項21 〜27のいずれか一項に記載の使用。 29．前記粘膜結合成分がＧＭ１結合活性を有する、請求項21〜28のいずれか一項に記載の使用。 30．前記粘膜結合成分がコレラ毒素Ｂペプチドである、請求項21〜29のいずれか一項に記載の使用。 31．前記医薬が標的抗原に対する免疫寛容を誘導するための誘導抗原を含んで成る、請求項21〜30のいずれか一項に記載の使用。 32．前記誘導抗原と前記粘膜結合成分が医薬中で未会合である、請求項31に記載の使用。 33．下記の条件：ａ）前記誘導抗原が標的抗原を含んで成る；ｂ）前記誘導抗原が標的抗原の局外者を含んで成る；ｃ）前記標的抗原が自己抗原である；ｄ）前記標的抗原がアレルゲンである；ｅ）前記標的抗原が同種抗原または異種抗原であるのうちの１つまたは複数が存在する、請求項31または請求項32に記載の使用。 34．前記医薬が少なくとも５週間持続する持続性免疫寛容を誘導するのに有効である、請求項21〜34のいずれか一項に記載の使用。 35．ａ）前記自己免疫状態が慢性関節リウマチであり、そして前記誘導抗原が II型コラーゲンペプチドである；ｂ）前記自己免疫状態が多発性硬化症であり、そして前記誘導抗原がミエリン塩基性タンパク質ペプチドである；ｃ）前記自己免疫状態がＩ型糖尿病であり、そして前記誘導抗原がインスリンペプチドである；またはｄ）前記自己免疫状態が胃腸管の自己免疫疾患であり、そして前記医薬が誘導抗原を実質的に含まないことを特徴とする、請求項23に記載の使用。 36．前記誘導抗原がａ）処置する受容個体または提供個体を免疫寛容しようとするアロタイプ決定基を有する、単離もしくは合成ヒト白血球抗原またはそれらの混合物；またはｂ）受容個体または提供個体それぞれからの、あるいは受容個体または提供個体それぞれと主要組織適合性複合体アロタイプを共有する個体からの、細胞、細胞膜または細胞抽出物の形の誘導抗原の混合物のいずれかである、請求項25または26の使用。 37．Ｉ型糖尿病またはインスリン炎の処置のための医薬の調製におけるインスリンペプチドと粘膜結合成分の使用。 38．前記医薬が金属カチオンを更に含んで成る、請求項37に記載の使用。 39．前記金属カチオンがZn⁺⁺である、請求項38に記載の使用。 40．組合せ製剤であって、個体において持続性免疫寛容を誘導するため、個体において自己免疫疾患を治療するため、個体において望ましくない過敏症を治療するため、提供個体から移植された組織移植片の受容個体中での拒絶の危険性を減らすため、または提供個体から移植された組織移植片からの受容個体中での対宿主性移植片病の危険性を減らすため、同時に、別々にまたは連続して使用される、ａ）粘膜結合成分；およびｂ）望ましくない免疫応答に対する誘導抗原を含有する組合せ製剤。