JPH02503919A - 自己抗原の経口投与による自己免疫疾患の治療法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 自己抗原の経口投与による自己免疫疾患の治療法本出願は、１９８７年６月２４ 日に出願され、“自己抗原の経口投与による自己免疫疾患の治療”なる名称を有 する米国特許出願第０６５．７３４号の一部継続出願である。

発明の背景 発明の分野 本発明は、自己免疫疾患、とりわけＴ細胞媒介性またはＴ細胞依存性自己免疫疾 患の治療の分野に関するものである。本発明は、これらの自己免疫疾患を予防的 および治療的に処置するための、自己抗原、またはそのフラグメントまたは類似 体の経口または腸内投与を教示するものである。

背景となる技術の簡単な説明 自己免疫疾患は、正常な組織に対する細胞または抗体の関与する異常な免疫応答 によって生じる。自己免疫疾患を抑制するために、免疫応答を非特異的に抑制す る非常に顕著な薬物を含む、多数の方法が開発された。免疫応答を妨げるために 抗原の経口投与によって免疫充容を誘導する方法は、ウェルズ（Ｗｅｌｌｓ）に よって１９１１年に初めて示された。ウェルズ（Ｗｅｌｌｓ、Ｈ，、Ｊ、Ｉｎｆ ｅｃｔ、Ｄｉｓ、　９　：１４７（１９１１））。免疫不応答の経口的誘導も、 数種類のＴ細胞依存性抗原について示された。ヌガン等（Ｎｇａｎ、Ｊ、　ｅｔ 　ａｌ、、　Ｊ　、　Ｉ＋ｎｍｕｎｏ１．　１２０＝８６１（１９７８））、ボ ウタム等（Ｇａｕｔａｍ、　Ｓ　、　ｅｔ　ａｌ、、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３ ５：２９７５（１９８５））、タイタス等（Ｔ　１ｔｕｓ、Ｒ、ｅｔ　ａｌ、、 　　Ｉ　ｎｔ、Ａｒｃｈ、Ａｌｌｅｒｇｙ　Ａｐｐｌ、　Ｉ　ｍｍｕｎ、　６５ 　：３２３（１９８１））。また、最近の文献は、マウスモデルにおけるコラー ゲン誘発性関節炎を抑制するための、コラーゲンの経口投与を記載している。ナ グラーーアンダーノン等（Ｎａｇｌｅｒ−Ａｎｄｅｒｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、。

Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、（ＵＳＡ）　８３ニア　４４３−７４ ４６（１９８６）。

科学者らはまた、種々の動物モデルにおいて、自己免疫疾患を抑制するための方 法を研究した。実験的アレルギー性脳を８炎（ＥＡＥ）は、ミニリン塩基性タン パク（ＭＢＰ）に対して導かれるＴ細胞媒介自己免疫疾患であり、数種の哺乳動 物種において、多発性硬化症のためのモデルとして研究された。アルポード等（ Ａ　１ｖｏｒｄ、　Ｅ　、　ｅｔ　ａｌ、）の実験的アレルギー性脳を髄炎−多 発性硬化症のための有用なモデル（リス、ニューヨーク、１９８４　ＸＥｘｐｅ ｒｉｍｅｎｔａｌ　Ａ　］１ｅｒｇｉｃ　Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ −−Ａ　Ｕｓｅｆｕｌ　Ｍｏｄｅｌ　Ｆｏｒ　Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　５ｃｌｅｒｏ ｓｉｓ（Ａｌｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　ｌ　９　ｇ　４） ）参照。ＥＡＥの免疫調節は、少なくとも一部分、サプレッサーＴ細胞（Ｔｓ） に依存していることが知られている。Ｔｓは、ＥＡＥから回復したラットに存在 することが示された。スウィアコッツ等（Ｓｗｉｅｒｋｏｓｚ、　Ｊ　、　ｅｔ ａｌ、、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１１９：１５０１（１９７７）。また、サプレッ サーＴ細胞は、ある種のマウス系によって示される、ＥＡＥに対する不応答の原 因であることが示された。ランド等（Ｌａｎｄｏ、　Ｚ　、　ｅｔ　ａｌ、、Ｎ ａｔｕｒｅ　２８７：５５１（１９８０））。

ＥＡＥの抗原特異的抑制を誘導するために種々の方法が使用され、ランド等（Ｌ ａｎｄｏ、Ｚ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ　、Ｉｍｒｒｌｕｎｏ＋、　　Ｉ　２６： ｌ　５２６（１９８１））によって示されたフロイント不完全アジュバントに乳 化さコンジュゲートしＩ；リンパ球の静脈内注射を包含する。

よび４７４−４８２にそれぞれ報告されている。これらの論文の内の第１および 第２の論文は、非特異的補助因子、例えば抗生物質まｔ；はステロイドと一緒に 投与される時のみ、ＭＢＰの非経口投与によってサルのＥＡＥが抑制されること を開示している。第３の報告は、多発性硬化症に罹患している患者の脳を髄液中 に、ＭＢＰを抗原活性ペプチドフラグメントに分解する数種のグロテアーゼが存 在していることを開示している。

ｂ、Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　４８：２７５−８４（１９８３））は、ＭＢ Ｐを単独、または７０イント不完全アジユバント（ＩＦＡ）中、またはミニリン の脂質ハプテン、即ちガラクトセレブロシドと組み合わせて非経口投与すること によって、慢性百発性ＥＡＥに罹患しているモルモット系を処置すると、ＥＡＥ の臨床的症状が抑制されたことを開９ｌ−４０２（１９８３））は、７０インド 完全アジユバント中のモルモットＭＢＰを使用し、同系牌臓白血球または同系赤 血球にカップリングさせたモルモットＭＢＰをラットに予め注射しておくと、Ｅ ＡＥの次の誘導が抑制されたことを開示している。抑制の程度は、投与されたＭ Ｂ、Ｐの量に明らかに関係があった。

ムカブセルに封入されたモルモッ）ＭＢＰをラットに予め注射しておくと、７０ インド完全アジユバント中モルモットＭＢＰを注射したラットに現れるＥＡＥの 臨床的徴候および症状を抑制したことを開示している。

記載された、モルモットＭＢＰ白血球コンプレックスを注射することによる抑制 効果は、シクロホスファミド、即ちサプレッサー１９２３球の産生を阻害する薬 物で動物を予め処置しておいた時に消失したことを開示している。

クラスナー等による報告（Ｋｒａｓｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎｅｕｒｏｌｏｇ ｙ　３６　：　９２−９４（１９８６））は、合成ＣコポリマーＩがＭＢＰと免 疫学的交差反応を示さないことを記載している。この物質は動物をＥＡＥから保 護するので、多発性硬化症の治療法として試験されている。

また、ソビエトのベリク等からの報告（Ｂｅｌｉｋ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｖｏｐｒ 、Ｍｅｄ、Ｋｈｉｍ−２４：３７２−３７７（１９７８））は、ＥＡＥに罹患し ているモルモットへの“アルカリ性ミニリンタンパクフラグメント”および“合 成脳炎誘発性ペプチド”の非経口投与を開示している（英文要約による）。動物 は、ウシ゛アルカリ性ミニリンタンパク７ラグメント”または“合成脳炎誘発性 ペプチド″で感作した該動物に“アルカリ性ミニリンタンパクフラグメント”を 投与した後に回復しｔ；。

ンによる報告（Ｎａｇｌｅｒ　−Ａｎｄｅｒｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、上記）は共に 、自己抗原−りンバ球コンジュゲートを動物に注射することによって誘導された 、他の２種類の突験的自己免疫疾患の症状の抑制を開示している。

ブラレイーミュレン等の報告は、フロイント不完全アジュバシト中サイログロブ リン抗原をモルモットに注射することによって、これらの動物の実験的自己免疫 甲状腺炎が抑制されｔ；ことを開示している。ナグラーーアンダーノン等の報告 は、アジュバント中Ｔタイプ■コラーゲンで動物を免疫する前に、可溶性である が分解されないＴタイプ■コラーゲンを胃内投与することによって、マウスのＴ タイプｎコラーゲン誘発性関節炎が抑制されｔ；ことを記載している。

発明の要約 本発明は、動物におけるＴ細胞媒介またはＴ細胞依存性自己免疫疾患の治療法で あって、該動物に、該自己免疫疾患に特異的な自己抗原、自己抗原のフラグメン ト、または自己抗原に構造的に類似している類似体を、自己免疫疾患の治療に有 効な量で経口または腸内投与することからなる方法を教示するものである。その 様な疾患の臨床的または組織学的効果の両者は、投与量に依存して抑制される。

また、経口または腸内投与が自己免疫疾患の発症の前であっても後であっても抑 制が生じる。更に、疾患は、自己抗原の疾患非誘発性および疾患誘発性７ラグメ ントの経口または腸内投与によっても抑制される。従って、自己抗原の経口また は腸内投与は、自己免疫疾患を自然に免疫調節し得る有効かつ簡便な方法である 。

図面の簡単な説明 第１図は、ルイス系ラットにおける増殖性応答の、経口的に誘導される抑制の抗 原特異性を示すグラフである。−７、−５および一２日月に動物にＭＢＰまたは Ｂ　Ｓ　Ａ、　５００μ９を投与し、次いで０日月にＣＦＡ中ＭＢＰ１００μ９ で免疫した。免疫の９日後、リンパ節を摘出し、実施例３の記載の様にして、Ｍ ＢＰ％ＢＳＡおよびＰＰＤ（全て５０μｇ／ＴＦＩＱ）に対する増殖性応答を調 べた。刺激指数−実験値ｃｐｒｎ／対照値ｃｐｍ。

第２図は、関節の腫脹によって測定した、経口的に誘導されたアジュバント関節 炎抑制を示すグラフである。

第３図は、再発性ネズミＥＡＥを惹起するためのプロトコールの図式的説明であ る。

第４図は、ＳＪＬマウスにおいて、経口的に誘導されたリンパ球増殖抑制を示す 棒グラフである。動物にＭＢＰ４００μ９を２週間で７回投与し、ＣＦＡ（０， ６ｍ９／ｍ１２　　Ｍ、ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）中ＭＢＰ４００μ９で免疫 した。刺激指数は、ＭＢＰで誘発された増殖をバックグラウンドで除したもので ある。

第５図は、ミニリン塩基性タンパク（ＭＢＰ）投与ラットから得られｌ；牌臓お よび腸間膜リンパ節細胞（ＬＮＧ）による、原素浸出リンパ節細胞（Ｐ　Ｌ　Ｎ 　Ｃ）の応答の抗原特異的抑制を示すグラフである。

結果は、ＭＢＰ（丸）並びにＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏ ｓｉｓ（四角）に対するＰＬＮＧの抑制百分率として表わされている。黒丸また は黒四角は牌臓細胞の応答を示す。白丸または白四角は腸間膜リンパ節細胞の応 答を示す。

第６図は、ＭＢＰ経口投与後の、ＭＢＰに対するＩｇＧ応答の特異的抑制を示す グラフである。ラットから時々採血し、血清を抗０ＶＡ（第６Ａ図、白丸）また は抗ＭＢＰ（第６Ｂ図、白四角）抗体について試験した。これらの血清を、投与 しないでチャレンジした動物（黒記号）から得Ｉ；血清と比較した。結果は、Ｅ Ｌ　Ｉ　ＳＡ　Ｏ，Ｄ、　４９２レベル±Ｓ、Ｄ、とじて表わされている。

好ましい態様の説明 本発明は、Ｔ細胞媒介性またはＴ細胞依存性自己免疫疾患の治療法であって、こ の様な自己免疫疾患に特異的な自己抗原並びに自己抗原の生物学的に活性な７ラ グメントおよびその類似体の経口または腸内投与による治療法に関するものであ る。“治療“なる語句は、この様な自己免疫疾患を防ぐための予防的手段および この様な自己免疫疾患の発症後の症状の抑制または軽減の両者を包含して意味す る。

自己免疫疾患は、免疫系が動物体内の外来の物質と、動物自体を構成している種 々の物質を区別し得ないという、ヒトを含む動物の免疫系の機能不全である。“ 動物″′なる語句は、免疫調節系を有し、自己免疫疾患にかかり得る全ての生命 形態を包含する。

“自己抗原″は、正常でない状況において、その動物のリンパ球または抗体によ って動物自体の一部分であると認識されず、それが外来の物質であるかの様に免 疫調節系によって攻撃される、動物体内で通常見出だされる物質である。この様 な自己抗原の“生物学的に活性な７ラグメント”という用語は、同じ生物学的応 答、即ち経口または腸内投与するとＴ細胞媒介性またはＴ細胞依存性自己免疫応 答を抑制または排除する活性を誘導する、その部分的アミノ酸配列を包含する。

この様な自己抗原の“類似体”なる語句は、同じ生物学的活性、即ち経口または 腸内投与するとＴ細胞媒介性またはＴ細胞依存性自己免疫応答を排除または抑制 する活性を有する、これらの自己抗原に構造的に非常に類似している化合物を包 含する。従って、この語句は、自己抗原のアミノ酸配列と１またはそれ以上のア ミノ酸が異なる（実質土間等の生物学的活性を保持している）アミノ酸配列、お よび疾患の症状を抑制または軽減するその活性において自己抗原の生物学的活性 に類似している化合物を包含する。この様な化合物は、自己免疫疾患における攻 撃部位である標的器官からの組織からなっていることもある。

本発明の主要な用途は、集合的に自己免疫疾患と呼ばれる疾患であって、多発性 硬化症、重症筋無力症、慢性関節リウマチ、真性糖禾病、全身性紅斑性狼壜、自 己免疫性甲状腺炎、自己免疫性溶血性貧血、および例えば毒性アイビーの様な植 物要素によって生じることもある接触感受性疾患を包含するがこれに限定されな い、大きなカテゴリーの疾患の治療である。

実験的アレルギー性脳を８炎（ＥＡＥ）は、ミニリン塩基性タンパク（ＭＢＰ） に対するＴ細胞媒介性自己免疫疾患であり、数種の哺乳動物種において、多発性 硬化症のためのモデルとして研究されてきた。ＥＡＥの免疫調節は、少なくとも 一部分、サプレッサーＴ細胞（Ｔｓ）に依存していることが知られている。Ｔｓ はＥＡＥかも回復したラットに存在しており、Ｔｓはある種のマウス系において 、疾患に対する免疫不応答の原因であることが示された。

慢性関節リウマチの自己免疫の動物モデルである。注射後１０−１５日で、動物 は重篤な進行性関節炎を発症する。

本発明は、ＭＢＰの経口または腸内投与が急性−相性ＥＡＥの抑制に有効な手段 であり、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの経口または腸 内投与がアジュバント性関節炎の抑制に有効な方法であることの発見および確認 を基礎とする。経口的または経腸的に誘導される寛容（トレランス）はドーズ・ ディペンデントであり、疾患の臨床的および組織学重両症状の重篤度を軽減する 。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の様な非同類抗原は、経口的または経腸的には ＥＡＥへの罹患し易さに影響を有していないので、ＥＡＥに対して経口的または 経腸的に誘導される寛容は、ＭＢＰ、即ち疾患を媒介するＴ細胞が感作される抗 原に特異的であるということができる。

更に、ラットへのＭＢＰの経口または腸内投与は、ＭＢＰに対する免疫応答の抑 制を誘導する。例えば、リンパ球の増殖および抗ＭＢＰ抗体の産生は共に低下す る。イン・ビトロにおいて疾患の抑制および抗原特異的細胞応答の抑制の両者の 原因である細胞は、Ｔ細胞由来の、サプレッサー／細胞毒性ＣＤ８＋　Ｔリンパ 球である。

従って、多発性硬化症のためのＥＡＥ動物モデルおよびＡＡのだめの動物モデル を使用して以下に説明するように、本発明によって教示される、ＭＢＰの様な自 己抗原の経口または腸内投与からなる簡便な方法は、自己免疫疾患の発症および 自己抗原に対するある種の免疫応答の両者を抑制する有効な治療法である。

“導入”または“投与”なる語句は、自己抗原、その生物学的に活性なフラグメ ントまＩ；は生物学的に活性な類似体が、食事により口から胃へ、または胃管に よって胃内、即ち腸内に導入されることを意味する。

通常、自己抗原、７ラグメントまたは類似体は、経口的または腸内に、１日当た りｌから１ｏｏＯ＋Ｈの量で導入され、単一投与形態または複数回投与形態で投 与することができる。自己抗原、フラグメントまたは類似体を１日当たり２５か ら８５０＋ｎｇの量で投与するのが好ましい。当業者には理解される様に、実際 の投与量は、自己抗原、患者の年令、性別、身体的条件、および同時に行なわれ るその他の治療の関数である。

自己抗原、フラグメントまたは類似体を経口的に導入する場合、これをその他の 食物と混合し、固形、半固形、懸濁液、または乳濁液の形態で食するか、これを 薬学的に許容し得る担体、着香剤等と混合することができる。

自己抗原、７ラグメントまたは類似体を腸内投与する場合、これを固形、半固形 、懸濁液または乳濁液の形態で導入してもよいし、水、懸濁化剤、乳化剤を包含 する薬学的に許容し得る担体のいずれかと混合してもよい。

に晩 ラボラトリ−から、体重１５０〜２２０ｇの雌性ルイス系う・シトを入手し、全 ての試験で使用した。

動物の免疫二ラットの雨後足裏に、７０インド完全アジユバント（ＣＦＡ）に乳 化させたモルモットＭＢＰ５０μりを投与して免疫した。

幾つかの試験では、この乳化された抗原にオノ（ルブミン（ＯＶＡ）（シグマ社 ）５０μ９を加え、同様に注射した。ＥＡＥを四肢の麻痺によって特性化し、以 下の様にして評価した二〇）疾患なし；ｌ）低下された活性、四肢をひきする； ２）軽い麻痺、不安定な歩行；３）中程度の不全対麻痺；四肢が外側に広がる； ４）四肢の麻痺。

経口による寛容の誘導ニ プラスチックチューブで覆われた２３−ゲージ針を使用し、ラットに１Ｔｎ１２ ＰＢｓ中１−９のＭＢＰまたはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を３目間隔で５回 与えた。

摘出した。リンパ節をステンレス鋼網に押し付けることによって単一の細胞懸濁 液を調製した。総数１０ｓ個のリンパ節細胞（ＬＮＧ）を、指示された数の、投 与ラット由来の被照射（２０００ラド）またはそのままのＬＮＧ（４倍）と−緒 に丸底９６ウエルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）中で培養した。この培養物にＭＢＰ およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｍ　ｔ）、５ ０ｐ９／ｍＱを２０μＱ容量で加えた。培養物を８０時間インキュベートし、培 養の最後１６時間、１μＣ４［ＳＨ］ＴｄＲ／ウェルでパルスした。次いで、培 養物を自動細胞収穫機で集め、標準液体シンチレーションカウンターで読み取っ た。

プライムしたＬＮＧ（ＰＬＮＣ）の増殖の抑制百分率を、以下の式によって算出 した： ２ＸＩＯ−’Ｍ２−メルカプトエタノール、１％ピルビン酸ナトリウム、１％ペ ニシリンおよびストレプトマイシン、１％非必須アミノ酸、および１％自己血清 を加えた後、培地を滅菌濾過した。

種々の細胞サブセットの精製：牌臓細胞からＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８群を枯 渇させるために、ネガティブな選択を行った。ペトリ皿を、Ｐ　Ｂ　Ｓ／Ｂ　Ｓ 　Ａ中１／１０００ヤギ抗マウスＩｇＧ＋ＩｇＭ抗体（Ｔａｇｏ）ｌ　Ｏ２０で ４°Ｃにて一夜覆った。次いで、プレートを洗浄し、ＰＢＳ中３％ウシ胎児血清 で２０°Ｃにて３０分間覆い、再び洗浄し！；。ルイスのＬＮＧを、マウス抗ラ ットモノクローナル抗体（Ｓ　ｅｒｏｔｅｃ／　Ｂ　１ｏｐｒｏｄｕｃｔｓ）を 使用し、ＰＢＳ中１／１００に希釈したｃＤ３（ＭＲＣ，ＯＸ／３８）、ＣＤ４ （Ｗ　３／２５）、ｔ　ｆ：　＋ｉ　ＣＤ８（ＯＸ／８）について染色した。細 胞を氷上で３０分間染色し、洗浄し、予め覆っておいたペトリ皿に、１５Ｘ１０ ’細胞１５ｒＲＩ２ＰＢＳ／プレート、４℃で蒔いた。６０分後、非粘着性細胞 を含有している上溝を穏やかに吸引し、細胞の試験および計数前に２回遠心した 。このプロトコールにより、メンプラン免疫蛍光を調べることによって蛍光活性 化細胞ソーター中で調べると約８５−９５％純度の細胞群を得た。

養子免疫伝達の試験：供与体ラットに、ＭＢＰまｊ：はＢＳＡのいずれかを１ｍ ｇＸ５回、３−４目間隔で投与し、最終投与の４日後に殺した。腸間膜ＬＮＧお よび牌細胞を集め、直後に、または増殖培地中、コンカバリン−Ａ　（Ｃｏｎ− Ａ）　１．５　ｐ　ｇ／　ｍＱで４８時間活性化した後、腹腔内注射した。養子 免疫伝達の試験のために注射した細胞数は、以下の通りであった：活性化されて いるかいない総ＬＮＣ群、１２０Ｘ　１０’、ＣＤ３枯渇されたＬＮＧ、６０Ｘ １０’、ＣＤ４枯渇された群、８０Ｘ１’０’；ＣＤ８枯渇されたＬＮＧ、９５ Ｘ１０’。

４時間後、ＥＡＥを惹起するために、受容体ルイス系ラットをＢＰ／ＣＦＡで免 疫した。

抗体の血清中濃度：ＭＢＰおよびＯＶＡに対する抗体力価の測定のために、固相 酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）を使用した。

微量滴定プレートを、１ウエル当たり、ｌＯμｇ／ｒｔｒＱ再蒸留水の抗！０　 、１　ｒｎＱと一緒１こインキュベートしｌ二。プレートを２５°Ｃで１８時間 インキュベートした。ＰＢＳ／ツウイーン−２０（Ｂ　１ｏ−Ｒａｄ）、ｐＨ７ ，５で３回洗浄した後、プレートを３％Ｂ　Ｓ　Ａ／Ｐ　Ｂ　Ｓと−緒に３７℃ で２時間インキュベートし、２回洗浄し、希釈しこ血清１００μ０を４回加えた 。プレートを３７℃で２時間インキュベートした。ＰＢＳ／ツウィーンー２０で ３回洗浄した後、プレートを、１％Ｂ　Ｓ　ＡｌＰ　Ｂ　Ｓ中１：１０００に希 釈したペルオキシダーゼ−フンシュゲートヤギ抗ラット＋ｇＧ抗体（Ｔａｇｏ、 ＵＳＡ）ｌ　０ＯｐＱ／ウエルと一緒に２５°Ｃにて１時間インキュベートした 。３０％Ｈ３０，を含有しているＤ−７二二レンジアミン（０，４＋ｎｇ／＋Ｊ ！Ｊ７９）クエン酸バッファー、ｐＨ５，０）に接触させることによって、着色 反応を得た。０．４Ｎ　Ｈ，ＳＯ２を加えて反応を終止させ、ＥＬＩＳＡリーダ ーでＯＤ４．９２ｎｍを読み取った。

イン・ビトロにおける抗体産生の測定：投与された、投与されていない、チャレ ンジされたラットがら原素および肺臓ＬＮＣを得、単独、または指示された別の ＰＬＮＣを加えた照射体（２０００ラド）をベトリ皿１ｍＱ当たり１０’細胞の 濃度で蒔いた。培養物を、抗原（２０μｇ／蛯）を加えるか加えない増殖培地に てインキュベーター中、３日間維持し、次いで集めた。希釈した上溝を使用して イン・ビトロのＩｇＧ抗体の産生および分泌を試験し、前記ＥＬＩＳＡ試験を使 用して抗体の産生を測定した。

性タンパクの１−３７領域の重複７ラグメントを合成した。ホウテン（Ｈｏｕｇ ｈｔｅｎ、Ｒ，、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　　８２　： ５１３ｌ−５１３５（１９８５））。次いで、これらの７ラグメントを、全ミニ リン塩基性タンパク１．５１１１ｇまで、等モル濃度で経口投与した。

これらは、免疫前、−７、−５、および−２日目に投与した。次に、確立された 方法に従い、７０インドのアジュバントに入れた塩基性タンパクで動物をチャレ ンジし、評価した。

で足裏に免疫するかまたは経口投与し、動物に、全ミニリン塩基性タンパクを与 えた。７〜１０８後、肺臓およびリンパ節細胞を摘出し、イン・ビトロにてミニ リン塩基性タンパク分子の種々のフラグメントで再刺激した。

急性−相性ＥＡＥへの罹患し易さおよびその重篤度に対する、ＭＢＰおよびその 消化性７ラグメントの投与の効果を、ルイス系ラットで調べた。結果は、この天 然の経路の寛容誘導が、疾患の発症およびＭＢＰへの免疫応答の両者を抑制する ことを示している。

ＥＡＥの抑制を経口的に誘導するために、ルイス系ラットに、２０Ｇポール・ポ イント針を備えた注射器で、モルモットの脳から精製したＭＢＰを与えｔ；（デ ィーブラー等（Ｄｉｅｂｌｅｒ、Ｇ、、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｅｐ、Ｂｉｏｃ ｈｅｍ、　２　：　１３９（１９７２）））。対照群動物に、等量のウシ血清ア ルブミン（ＢＳＡ）または食塩水のみを与えた。Ｍ　ｙ　ｃｏｂａｃＬｅｒｉｕ ｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ２００　ｐｇ含有フロイント完全アジュバント（ ＣＦＡ）に乳化させたＭＢＰ５０μ９で後足裏注射により免疫することによって 、ＥＡＥを惹起した。疾患は通常、免疫後１２〜１５日目の後日月麻痺および失 調を特徴とし、全ての場合、ラットは１６６日目でに回復した。第１シリーズの 試験は、疾患の発症に対するＭＢＰの投与回数および投与量の効果を調べた。ラ ットに免疫日（０日目）の７日前（−７日目）に１回まｌこは−１４、−７およ び０日目に３回、種々の量のＭＢＰを投与した。結果（第１表）は、ラットにＭ ＢＰを投与するとＥＡＥが抑制され、経口的に誘導される抑制はドーズ・ディペ ンデントであることを示している。複数回、５００μりを投与すると、疾患を完 全に抑制し、この投与量での１回投与より効果的であった。ＥＡＥの臨床的症状 の発現以外に、ラットの疾患の組織学的徴候を調べた。免疫の１６日後、ラット を殺し、脳を摘出し、ホルマリン溶液中で固定させた。固定液は、７０％エタノ ール１０（ｈｕｆｆ、３７％ホルマリン１０ｍＱおよび氷酢酸５ｔａＱからなる 溶液であった。各ラットからパラフィンに包埋した組織のスライドを調製し、ヘ マトキシリンおよびエオシンで染色した。胸管周囲の炎症の病巣を、確立された 方法（ソーベル等（Ｓｏｂｅｌ、Ｒ，、ｅｔ　ａｌ、。

Ｊ　、　Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ　、上３２　：　２３９３（１９８４）））によって 、コードされたスライド上で定量化した。第１表に示される様に、ラットに−ｌ ４、−７８よび０８目に５００μ９のλ’ＩＢＰを投与すると、脳の炎症の損傷 数を著しく低下した。１００μ９を投与した動物では中程度の低下が見いだされ 、２５μ９ＭＢＰを投与したラットでは炎症の有意な低下が見いだされなかった 。

実施例２ 第２シリーズの試験は、経口的に誘導された抑制の効果が、抗原に予め接触させ ておくことによって影響されるか否かを調べるために、ＭＢＰによる免疫の前ま たは後にＭＢＰを投与することの効果を調べた。これらの試験のために、動物に 、疾患の能動的誘導の前または後に５００μ９のＭＢＰを３回投与した（ＭＢＰ による免疫）。

結果（８１表）は、感作の前または後のいずれであっても動物にＭＢＰを投与す ると疾患の臨床的発症が抑制され、免疫の前に抗原を投与すると効果がより完全 であることを示している。しかしながら、組織学的試験は、ＭＢＰへの感作の前 または後にＭＢＰを投与しＩ：ラットでは胸管周囲腫脹が著しく低下することを 示した。疾患の６０％より大きい抑制は、ラットに免疫後、＋５または＋７日日 月ら３回投与した場合にも起こった（データは示されていない）。

更に、ＭＢＰによる免疫の前または後の種々の時期にラットにＭＢＰ１００μ９ を投与する試験を行った。第■表に示される様に、疾患の抑制は免疫の前または 後に１回投与した場合に見られる。

実施例３ ＭＢＰへの細胞性または体液性免疫応答に対する、ＭＢＰの経口投与の効果をも 調べた。ラットに種々の投与量のＭＢＰを与え、投与後の種々の時期に免疫した 後に、ＭＢＰに対する増殖応答を調べた。免疫の１０日後、ラットを殺し、浸出 （原素）リンパ節の単一細胞懸濁液を調製した。細胞を微量用ウェルで４日間培 養し、最後の２４時間には３Ｈ−チミジンを加えた。２％グルタミン、１％ペニ シリン／ストレプトマイシン、５ＸＩＯ−ｓＭ２−メルカプトエタノールおよび ５％ウシ胎児血清含有ＲＰＭＩ　　１６４０中に４×１０５細胞を含んでいる０ 　、　２　ｍＱ容量を各微量用ウェルに加え、ＭＢＰを５０μｇ／ｒｒｒ（ｌで 加えた。ウェルを１μＣｉトリチウム含有チミジンでパルスし、多重収穫器によ ってガラス繊維フィルターに集め、標準液体シンチレーション法によって計測し た。

結果（第■および■表）は、ＭＢＰを投与すると、ＭＢＰに対する増殖応答が著 しく（７５−９２％）低下することを示している。増殖の抑制は、疾患の抑制と 異なり、免疫後の投与を含む、試験した全ての投与量および投与法において起こ った。ＭＢＰに対して経口的に誘導される増殖応答抑制は、第１図に示される様 に、抗原特異的である。具体的には、ＭＢＰの投与は、精製されたタンパク誘導 体（ＰＰＤ）、ＣＦＡによる免疫の結果、増殖応答を誘導するＭ、ｔｕｂｅｒｃ ｕｌｏｓｉｓ由来の抗原、に対する増殖応答を抑制しない。関連性のない抗［、 ＢＳＡの投与は、ＰＰＤに対する増殖応答に影響せず、ＭＢＰに対する増殖応答 をごくわずかに抑制する。

実施例４ 更に、抗ＭＢＰ抗体の産生に対するＭＢＰ投与の効果を試験した。

ＭＢＰを投与したラットを免疫し、免疫の１６日後、心臓せっ刺によって血液を 採取した。血清中の抗ＭＢＰ抗体の濃度を、ＥＬＩＳＡによって測定した。ＭＢ Ｐ溶液（ＰＢＳ中０−０５ｍ９７ｍＱ＞０　、１１Ｉｌ１２容量を各微量用クー ルに入れ、３７°Ｃで３時間インキュベートした。

０．０５％ツイーン含有ＰＢＳ（ＰＢＳＴ）でウェルを洗浄し、ＰＢＳ中５％Ｂ ＳＡ、ｐＨ９，０と一緒に４℃で一夜ブロックした。ＰＢＳＴでウェルを洗浄し た後、希釈したラット血清を加え、室温で３時間インキュベートし、ＰＢＳＴで 洗浄した後、第２の抗体（ペルオキシダーゼコンジュゲートしたヤギ抗ラット） を室温で１時間加えた。基質を加え、反応は指示順序であった；該コントロール および数プロセッサーは同時に非同期的に作動し得； 該コントロールプロセッサーの最大スピードより速く作動する内部数プロセッシ ング部品を含む該数プロセッサー：データ貯蔵メモリー： それを介して該数プロセッサーが該データ貯蔵メモリーに接触しているマルチボ ート登録ファイル： 該データ貯蔵メモリーにデータ仲介領域を提供する第１のボート、およびローカ ル結果バスに接続され、該内部数プロセッシング部品の出力を選択的に受信する 第２のボートを有する該登録ファイル；該結果バスから読み取り、書きとる様に 接続されているメモリーおよびアドレスコントラ−を含むローカルスタック。

６、以下からなるマルチプロセッサーシステムの数プロセッシングサブシステム コ コントロールプロセッサーおよび数プロセッサーであって、該コントロールプロ センサーが、該数プロセッサーに命令順序を実行するように命令するように接続 されているプロセッサー；該コントロールおよび数プロセッサーが同時に非同期 的に作動し得る。（Ａ７２．１．ｗｐ） 第１表 ＭＢＰに対する免疫応答 ＥＡＥの誘導　　　（阻害パーセント）”臨床的　ゝ組織学的 疾患　　　評価　　　′増殖　　１抗体免疫対照群　　　　　１９／２２　　９ ．２±５．８−−７日目に投与 ２５μｇ３１５　　　　ＮＤ　　　　　７５．６±２　　　ＮＤ１００μｇ２７ ５″＊　　　ＮＤ　　　　　８８．９　　　　ＮＤ５００μ９　　　　　　　　 　　　　　　３／ｌＯ＊本木　　　ＮＤ　　　　　　　　　　８８．９±２　　 　　　ＮＤ−１４、−７，０日目に投与 ２５μｇ３１５　　　７．２±５．２　　８２．１　　−４８±７２１００μｇ 　　　　　　　　　　　　　　２７５本　　　　　　３．２±１．９　　　　８ ０．８±５　　　　１４±４９５００μｇＯ／１０：Ｈ＊　　０．２±０．４　 　８７．２±１　　６６±３９（ａ）指示された日に種々の投与量のＭＢＰをラ ットに投与し、０日目にＣＦ　Ａ（Ｍ、ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ２００　ｐ９ ）中５０μ９ＭＢＦで免疫した。免疫したラット総数に対する罹患したラットの 数を示す。免疫した対照群には、ＢＳＡまたは食塩水を投与した。

（ｂ）免疫後１６６日目ラットを殺し、脳を摘出し、固定した。動物１匹当たり の胸管周囲炎症病巣の平均数＋／−ｓ、ｄ、を示す。ＮＤ−試験せず （ｃ）ラットを免疫した１０日後、浸出リンパ節細胞について、ＭＢＰに対する 増殖応答を測定した。２％グルタミン、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、 ５ＸＩＯ’−’Ｍ　　２−メルカプトエタノールおよび５％ウシ胎児血清含有Ｒ ＰＭＩ中４ＸＩＯ’細胞を含有している０、２ｒｎＱ容量を各微量用ウェルに加 え、ＭＢＰを５０μｇ／ｍＱで加えた。ウェルを１μＣｉ）リチウム含有チミジ ンでパルスし、多重収穫器を使用してガラス繊維フィルターＩコ収穫し、漂準液 体シンチレーション法を使用して計数しｔ；。免疫対照群について、ＭＢＰに対 する増殖応答の阻害百分率を示す。免疫対照群の平均刺激指数（ＭＢＰ刺激ＣＰ Ｍ／バックグラウンドＣＰＭ）は、６．０（２９，８８８ＣＰＭ／４９６０ＣＰ Ｍ）であった。

（ｄ）　１６日目にラットを殺し、心臓せっ刺によって血液を採取した。

血清をＰＢＳ中１／１５，６２５に希釈し、ＥＬ　Ｉ　ＳＡによって抗ＭＢＰ抗 体濃度を測定した。微量用ウェル当たり、ＭＢＰ溶液（ＰＢＳ中０．０５ｍ９／ ｍ１２）０　、１＋＋＋Ｑ容量を加え、３７°Ｃで３時間インキュベートした。

ウェルを０．０５％ツイーン含有ＰＢＳ（ＰＢＳＴ）で洗浄し、ＰＢＳ中５％Ｂ ＳＡ、ｐＨ９，０と一緒に４℃で一夜ブロックした。ＰＢＳＴでウェルを洗浄し ｌ；後、希釈したラット血清を加え、室温で３時間インキュベートし、ＰＢＳＴ で洗浄した後、第２の抗体（ペルオキシダーゼフンシュゲートしたヤギ抗ラット ）を室温で１時間加えた。基質を加え、０．１Ｍ　ＮａＦｌで反応を止めた。プ レートをタイターチック（Ｔ　ｉ　ｔｅｒ　ｔｅｋ）マルチスキャンにて４５０ ｎｍで読み取った。ＣＦＡのみで免疫したラット由来の血清についてもＡｂｓ、 ｓ。を測定し、バックグラウンドとして全ての値から減じた。

免疫対照群について、４５０ｎｍにおけるペルオキシダーゼ基質の吸収によって 測定された、抗体濃度の減少パーセントを示す（バックグラウンドを減じた免疫 対照群のＡ、、０における平均吸収は０．１４８であった）。

（ｅ）自由度１のチースクエア（ｃｈ　１−ｓｑｕａｒｅ）分析によって各群を 比較しプこ　：＊ｐ＜、０５、　＊＊ｐ＜０．１．＊＊本ｐ＜、０　０　１　　 。

第■表 ＭＢＰに対する免疫応答 ＥＡＥの誘導　　　　　（阻害パーセント）“臨床的　ゝ組織学的 疾患　　　評価　　　゛増殖　　６抗体免疫対照群　　　　　２３／２６　　２ １．６±５．１−５００μ９ＭＢＰの投与量 −７、−５、−２、＋２、＋５、＋７ヨ目　０１５“本本本　　　　０．２±Ｑ 、４　　　　ＮＤ　　　　　　　　３４−７、−５、−２日目　　　　　　　　 　　０／１７＊＊＊　　　　　０　　　　　　　　　９２．６　　　　　１．５ 十２、＋５、子７ＢＢ　　　　　　　　　　　４７１０＊ネ　　　　　１．４± ２．３　　　９１．５±３　　　１５（ａ）指示された日に５００μ９のＭＢＰ をラットに投与し、０日目にＣＦＡ中５０μｇＭＢＰで免疫した。

（ｂ）第１表参照。

（Ｃ）第１表参照。免疫対照群の平均刺激指数は９．４であった（８２゜２４７ ＣＰＭ／８．７１８ＣＰＭ）。

（ｄ）第１表参照。バックグラウンドを減じた免疫対照群のＡ　４６６における 平均吸収は０．４０３であった。

（ｅ）第１表参照。

第■表 ルイス系ラットにおいて経口的に誘導されたＥＡＥ抑制投与スケジュール　　罹 患したラット数／ラット総数投与せず　　　　　　　　　　　１１／１６＝１４ 、−７．０、＋７ε目　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０／１３指示さ れた日に１００μ９ＭＢＰをラットに投与しく免疫日−０）、ＣＦ　Ａ（、５ｒ ｎｅ／ｍＱ　Ｍ、ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）中５０μ９ＭＢＰで免疫した。

実施例５ ＥＡＥに対して経口的に誘導される保護の持続を調べるために、更に試験を行っ た。−７、−５および一２日月に５００μｇＭＢＦを投与した後、最終投与の後 の種々の時間的長さで、ラットを免疫した。ラットにおいて、ＥＡＥは投与後４ 週間まで完全に抑制され、ＭＢＰを投与したラットの５０％は８週間までに再び 疾患に罹患する様になった。結果を第■表に示す。この結果は、疾患に対する寛 容は最終投与後少なくとも４週間維持され、疾患の誘導に対する罹患し易さは投 与後８週間で現れることを示している。

第■表 罹患したラット数 対照群　　　　　　　　　　９／１４ 投与群 ０日月に免疫　　　　　　０／４ ＋７ε目に免疫　　　　　０／４ ＋１４日目８免疫　　　　０／４ ＋２８日目８免疫　　　　０／３ ＋５６日目８免疫　　　　４／８ −７、−５および一２日月１こラットに５００μｇＭＢＰを投与し、指示された 日にＣＦＡ中５０μ９ＭＢＦで免疫した。対照群ラット（ＢＳＡ投与）を同様に 免疫した。

実施例６ ラットにおけるモルモットＭＢＰの脳炎誘発領域は、単独でＥＡＥを誘導し得る 、７５−８４残基に位置する特異的デカペプチド配列であり、分子のその他の領 域は非脳炎誘発性であるということが知られている（ハシム（Ｈａｓｈｉｍ、Ｇ 　、、　Ｍｙｅｌｉｎ　：　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂ　ｉｏｌｏｇｙ、 　Ａｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｓ、　Ｎ、Ｙ、（１９８０）））。また、その他の抗原 については、免疫原決定基と異なる部位に別のサプレッサー決定基が存在するこ とが報告されている（ヨウエル等（Ｙｏｓ・ｅｌｌ、Ｒ，、ｅｔａｌ、、　Ｎａ ｔｕｒｅ　２７９＋７０（１９７９）））。そこで、ＭＢＰの脳炎誘発性および 脳炎非誘発性フラグメントの両者が経口投与によってＥＡＥを防ぎ得るか否かを 調べた。モルモットＭＢＰの７ラグメントを制限ペプシン消化によって作成し、 カラムクロマトグラフィーにトをラットに投与し、動物を全ＭＢＰで免疫した。

ラットに投与された時、疾患誘発性（フラグメン）４４−８９）および脳炎非誘 発性（フラグメント１−３７３よび９Ｏ−１７０）両ペプチドがＥＡＥを抑制し 、脳炎非誘発性７ラグメントの方が脳炎誘発性フラグメントより疾患の抑制に有 効であることがわかった（第７表）。１個のアミノ酸の置換によって脳炎誘発性 配列（７５−８４残基）と異なるデカペプチド（Ｓ　７９）が合成され、ＣＦ　 Ａと一緒にラントに注射された時、抑制を誘導することが報告されている（カー ディス等（Ｋａｒｄｙｓ。

Ｅ、、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、Ｉｒｎｍｕｎｏｌ、　　１２７：８６２（１９８ １）））。Ｓ７９（Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−ＡｒＳ７９（Ａｌａ−Ｇ ｉｎ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ａｒを動物に投与すると、これがＥＡＥを抑制すること もわかった（第７表）。脳炎誘発性配列を含む幾つかの部位がモルモッ）ＭＢＰ と異なり、モルモッｌ−ＭＢ　Ｐのための脳炎誘発性投与量ではラットにおいて 脳炎誘発性ではないウシＭＢＰ（ホロシラ等（Ｈｏｌｏｓｈｉｔｚ、　Ｊ　、、 　ａｔ　ａｌ、。

Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１３１：２８１０（１９８３）））も、免疫前に動物 に投与した時、疾患を抑制した。

策Ｖ表 ルイス系ラットにおける、ＥＡＥの発症に対する脳炎誘発性およびＥＡＥの臨床 上発生率 免疫対照群　　　　　　　　　　　　　　　１９／２５ＭＢＰフラグメント１− ３７（１０９μｇ）　　　０／９゛＊＊本ＭＢＰフラグメント４４−８９（１３ ５μｇ）　　３／１１＊本ＭＢＰフラグメント９０−１７０　（２３５μｇ）　 　Ｏ／４＊＊ペプチドＳ　７９　（３０μ９）　　　　　　　　　　　１／８＊ ＊＊ウシＭ　Ｂ　Ｐ　（５００μ！？）　　　　　　　　　　　　　Ｏ／ｌｏ＊ ＊＊−７，−５および一２日月に、ルイス系ラットに、表示された量のＭＢＰフ ラグメントまたはペプチド（全モルモットＭＢＰ５００μ９と等モル）を投与し 、ＯβＨにＣＦＡと一緒にモルモットＭＢＰ５０μりで免疫した。免疫したラッ ト総数に対する罹患したラット数を示す、（ａ）チースクエア（ｃｈ　１−ｓｑ ｕａｒｅ）分析によって、各群を免疫対照群と比較した二本＊ｐ（，０１、林＊ ｐ＜、００１゜実施例７ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａの投与による、アジュバント誘発性関節炎の抑制尾の 基部に１０ｍｇ／ｌｎＱのフロイント完全アジュバント０．１−で免疫すること によって、雌性ルイス系ラットにアジュバント性関節炎を惹起した。免疫前、− ７、−５および一２日月、０白目、および免疫後、＋７８よび＋１４日目Ｋ１動 物にリン酸緩衝化食塩水中Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉ ｓ　２　、０　ｌｌ１ｇを投与した。免疫後３週間、関節の腫脹を調べることに よって、関節炎を評価した（第■表および第２図）。

第■表 ２１日日目：８１する 関節の腫脹（ｍｍ） 対照群　　　　　　　　　　　　　　　　７．６１±１，４Ｍｙｃｏｂａｃｔｅ ｒｉａの投与口 −７、−５、−２日月　　　　　　　　　５．６１±１．１本−７、−５、−２ 、＋７、＋１４日目Ｋ１６．０７±０．９本関節の腫脹−測定したヨにおける関 節の厚さ＊ｐ＜０．０１　　対照群と比較（各試験は４匹の動物／群からなる） 実施例８ ＳＪＬマウスにおける、ＥＡＥの養子免疫伝達モデル養子免疫再発性ＥＡＥの実 施および再現可能なモデルを、ＳＪＬマウスで確立した。このモデルのためのプ ロトコールは、モクタリアン等（Ｍｏｋｈｔａｒｉａｎ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎ ａｔｕｒｅ、　３０９　：３５６（１９８４））から採用した。このプロトコー ルを、第３図に図式的に示す。簡単に言うと、供与体動物を、ＣＦＡＥＡＥＰ４ ００ｐｙおよびＭ、ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　３　Ｑμ９を含有している乳濁 液で免疫する。その１０日後、浸出リンパ節を摘出し、５０μｇ／ｍ（ＩＭＢＦ と一緒に４日間培養し、十分洗浄し、４−６Ｘ１０’生存細胞を雌性受容体動物 に静脈内注射した。標準的スケールを使用して動物の臨床的ＥＡＥを評価し、標 準Ｈ＆Ｅ組織学的検定によって病理学的に評価した（ブラウン等（Ｂｒａｉｎ、 Ａ、、　ｅｔａｌ、、　Ｌａｂ　Ｉｎｖｅｓｔ、　４５　：　２７８（１９８１ ））、ルプリン等（Ｌｕｂｌｉｎ、Ｆ、、　ｅｔ　ａｌ、、　　Ｊ、Ｉ＋ｎｍｕ ｎｏ１．　１２６　：　８１９（１９８１））およびパーナート等（Ｂｅｒｎａ ｒｄ、Ｃ、ｅｔ　ａｌ、、　Ｅｕｒ、　Ｊ　、　Ｉ　ｍｍ史巴し−１６：　６５ ５（１９７６）））。再発数を調べ得るように、伝達後少なくとも１００旦間、 動物をモニターした。

実施例９ ＳＬＪマウスにおける、経口的に誘導される増殖応答抑制ＣＦ　Ａ（０，６１！ ９／ｍ１２　Ｍ、ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）中ＭＢＰ４００μｓで免疫する前 に２週間毎日ＭＢＰ４ＱＱμ９を投与すると、ＭＢＰ免疫に対する応答において 、リンパ節細胞の増殖が抑制される。結果を第４図に示す。この図は、対照群の 結果対投与群の結果を、バックグラウンドで除したＭＢＰ誘発性増殖の関数（刺 激指数）として示す。

本発明は、本出願の様式および態様、および上記の態様に限定されない。本発明 は、本発明によって教示される自己免疫疾患の抑制を生じるあらゆる変更法をも 包含する。これらの等側法も、請求の範囲によって定義される保護の分野に包含 される。

実施例１０ ＭＢＰ投与した供与体ラットから非投与同系受容体ラットへの、ＥＡＥ発症に対 する保護的寛容の養子免疫伝達受容体ラットにＭＢＰまたはＢＳＡを、１ｔｒｇ Ｘ５回、３−４目間隔で投与し、最終投与の４日後に殺した。腸間膜リンパ節細 胞（ＬＮＣ）および肺臓細胞を集め、直後に、または増殖培地中、コンカナバリ アー、Ａ（Ｃａｎ−Ａ）１．５μｓ／ｍ１２で４８時間活性化した後に腹腔内注 射した。養子免疫伝達試験のために注射した細胞数は、以下の通りであった：活 性化されているかまたはされていない全ＬＮＣ群、１２０ｘｌＯ’；ｃＤ３枯渇 ＬＮＣ，６０Ｘ１０’；ＣＤ４枯渇群、８０Ｘ］Ｏ’；およびＣＤ８枯渇ＬＮＣ ，９５ｘｌＯ’。４時間後、ＥＡＥの誘導のために、受容体ルイス系ラットをＭ ＢＰ／ＣＦＡで免疫した。投与した供与体ラットから非投与同系受容体ラットへ 、ＥＡＥ発症に対する寛容を伝達する活性を第■表に示す。非投与ラットまたは ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）投与供与体ラットから得られたＬＮＧは、ＥＡＥ に対する保護を伝達しなかった。しかしながら、ＭＢＰ投与した供与体から得ら れた肺臓細胞または腸間膜（ＭＥＳ）リンパ節細胞は共に、受容体において誘導 されたＥＡＥに対して、それぞれ疾患の５０％および５７％抑制を示し、リラテ ィブ保護を伝達し得た。疾患の最大重回度平均値も、ＭＢＰ投与した供与体ラッ トから得られた肺臓細胞まｊ；は腸間膜リンパ節細胞の場合、受容体において著 しく低下された。これらの結果は、ＥＡＥ誘導に対する経口的寛容は細胞由来で あり、保護の原因である細胞は、腸間膜リンパ節および肺臓の両者において、濃 縮されて見出だされるということを示す。

蕗■表 投与または非装置供与体ラットから得たＬＮＧによる、ＥＡＥかもの保護の養子 免疫伝達 受容体におけるＥＡＥ 供与体　　　　　　　　　　最大重回度ラット投与物　ＬＮＣ源　　　　発生率 　　平均値なし　　　　　ｓｐｃ　　　　　　６／７　　２．５±０．３腸間膜 ＬＮＣ５１５２，６±０．４ ＢＳＡ　　　　　ＳＰＣ４／４　　２．４±０．２腸間膜ＬＮＣ５１５２，６± ０．３ ＭＢＰ　　　　　ＳＰＣ４／８＊　　１．６±０．２＊腸間膜ＬＮＣ４／７本　 １，７±０．２＊ルイス系ラツトに、ＭＢＰまたはＢＳＡを、■投写光たり１ｍ ｇ、３日間隔で５回投与するか、または処置せずにおいｔ；。次に、ラットを殺 し、その肺臓または腸間膜リンパ節を摘出した。ＬＮＧを集め、Ｃｏｎ−Ａの存 在下で４８時間活性化した。リンパ芽球を集め、３回洗浄し、非投与同系ラット にＭ腔内注射した。４時間後、ＥＡＥの誘導のために、受容体ラットをＭＢＰ／ ＣＦＡでチャレンジした。疾患を１０日日月ら毎日評価した（＊結果は統計的に 有意である、Ｔ細胞、ヘルパーエリ２３球（ＣＤ４）またはサプレッサー／細胞 毒性Ｔリンパ球（ＣＤ８）の枯渇の前または後に、ＭＢＰ投与した供与体ラット から得たＣｏｎ−Ａ活性化肺臓細胞（Ｓ　Ｐ　Ｃ）を非投与同系ラットに移した 。肺臓細胞からＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８群を枯渇させるために、負の選択を 使用した。ペトリ皿を、ＰＢＳ／ＢＳＡ中１／１０００ヤギ抗マウスＩｇＧ＋Ｉ ｇＭ抗体（Ｔａｇｏ）　１０　ｍＱで、４℃にて一夜覆った。次に、プレートを 洗浄し、ＰＢＳ中３％ウシ胎児血清で２０°Ｃにて３０分間覆い、再び洗浄した 。ルイス系ラットのＬＮＧを、ＰＢＳ中１／１００に希釈したＣＤ３（ＭＲＣ， ＯＸ／３８）、ＣＤ４（Ｗ３／２５）またはＣＤ８（ＯＸ／８）について、マウ ス抗ラットモノクローナル抗体（Ｓ　ｅｒｏｔｅｃ／　Ｂ　１ｏｐｒｏｄｕｃｔ ｓ）で染色した。細胞を氷上で３０分間染色し、洗浄し、予め覆ったベトリ皿に 、１５．ｏｏＯ，ｏ００細胞１５ｒＲＱＰＢＳ／プレートで、４℃で蒔いた。６ ０分後、非粘着細胞を含有している上溝を穏やかに吸引し、細胞試験および計数 前に２回遠心した。このプロトコールから、メンプラン免疫蛍光を調べることに よって蛍光活性化細胞選別機で調べた結果、約８５−９５％純度の細胞群を得た 。結果を第１１１表に示す。この結果は、ＳＰＣはＥＡＥかもの保護を伝達し得 る（５０％の発生率）が、Ｔ細胞枯渇ＳＰＣは受容体ラット（２群）を保護する その活性を失ったことを示す。即ち、保護を伝達し得る肺臓細胞はＴリンパ細胞 であるらしい。しかしながら、ＣＤ８細胞が枯渇すると（４群）、保護を伝達し 得す、一方、ＣＤ４＋枯渇ＳＰＣはＥＡＥからラットを保護する有意な活性を示 した。このことから、ＭＢＰの経口投与後に生成され、疾患の誘導に対する寛容 を媒介する抗原特異的１９２３球は、サプレッサー／細胞毒性サブセット由来で あることがわかる。

第４表 ＳＰＣの枯渇群による、ＥＡＥからの保護の養子免疫伝達受容体ラットにおける ＥＡＥ 群　ＭＢＰ投与した供与体　　　発生率　　最大重回度から除去されたＳＰＣ平 均値 １　　群全体　　　　　　　　　　２７４　　１．７±０．２本２　　　ＣＤ３ 枯渇　　　　　　　　６／６　　２．６±０．４＊３　　　ＣＤ４枯渇　　　　 　　　　２／６＊　　ｌ　、２±０．２本４　　　ＣＤ８枯渇　　　　　　　　 ６／７　　２．２±０．３供与体ラットにＭＢＰを投与し、第１表の解説欄の記 載と同様にして処置した。ある種のサブポピユレーションの枯渇前（１群）また は後（２−４群）に、非投与受容体ラットに、Ｃｏｎ−Ａ活性化ＳＰＣを注射し た。ＣＤ３、ＣＤ４またはＣＤ８リンパ球の枯渇は、ＳＰＣにモノクローナルＩ ｇＧ抗体をカップリングさせて選別することによって行った。受容体ラットをＭ Ｂ　Ｐ／ＣＦ　Ａで免疫し、１０日日月らＥＡＥを記録した（＊結果は統計的に 有意である、ｐ＜　０　、０５）。

実施例１２ Ｍ　Ｂ　Ｐ投与ラット由来のリンパ節細胞を加えることによる、イン・ビトロ抗 ＭＢＰＴ細胞応答の抑制 ラットをＭＢＰ／ＣＦＡで免疫し、９田後、そのプライムされた腸間膜浸出リン パ節（ＰＬＮＣ）を集めた。リンパ節をステンレス鋼網に押し付けることによっ て、単一の細胞懸濁液を調製した。合計１０５個のＬＮＣを、丸底９６ウエルプ レート（Ｃｏｓｔａｒ）中、表示した数の、被照射（２０００Ｒａｄ）またはそ のままの、投与ラット由来のＬＮＧと一緒に培養した（４回）。ＭＢＰおよびＭ ｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ５０　ｐｇ／ｒｎＱを、２ ０ｐＱ容量で培養物に加えた。培養物を８０時間インキュベートし、培養の最後 の１６時間、ｌ、ｕｃｉ［”Ｈ］ＴｄＲ／ウェルでパルスした。培養物を自動細 胞収穫器で集め、標準液体シンチレーションカウンターで読み取った。

プライムされ？：ＬＮＣ（ＰＬＮＣ）の増殖の抑制パーセントを、以下の式で算 出した： ＰＬＮＣを、ＭＢＰまたはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓ ｉｓの存在下、非投与またはＭＢＰ投与ラットから得た、照射したＳＰＣまたは 腸間膜ＬＮＣと一緒に培養した。ＭＢＰ投与した供与体ラットから得たＬＮＧを 、最終投与後の種々の日に試験した。結果を第５図に示す。試験の時間枠内では 、投与ラットから得たＬＮＧは、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕ ｌｏｓｉｓに対するＰＬＮＣの応答に影響しなかったことがわかる。しかしなが ら、投与ラットから得たＳＰＣおよび腸間膜ＬＮＣの両者は、ＭＢＰに対するＰ ＬＮＣの増殖を抑制することができた。ＰＬＮＧ応答の抗原特異的抑制は、腸間 膜ＬＮＣよりＳＰＣの使用において、より大きかった。抑制はＭＢＰの最終投与 後５〜３６日目に現れ、このことは、抑制の誘導が投与直後に達成され、比較的 長時間維持されることを示している。

従って、ＥＡＥ誘導に寛容となる様に与えられたラットから得たＬＮＧは、投与 に使用された抗原に対してのみの細胞免疫応答を抑制し得る抗原特異的リンパ球 であるらしい。

実施例１３ ＭＢＰ投与ラットから得られた被照射ＳＰＣおよびそのサブポピユレーションの 存在下の、ＰＬＮＧの抗ＭＢＰ応答の抑制抑制の原因であるＳＰＣのサブポピユ レーションを調べるために、最終投与の２０日後に、ＭＢＰ投与ラットからＳＰ Ｃを得、ある種のリンパ球群を枯渇させ、照射し、ＭＢＰと一緒にＭＢＰ／ＣＦ Ａで免疫したラットから得たＰＬＮＧと混合した。腋窩および肺臓ＬＮＣを、単 独で、または表示したその他のＰＬＮＧと一緒に照射（２０００Ｒａｄ）して、 １０７細胞／ｒｎＱペトリ皿の濃度で蒔いた。培養物を、抗！（２０μｙ／ｎＱ ）を加えるかまたは加えない増殖培地でインキュベーター中、３日間維持し、集 めた。希釈した上溝を使用してイン・ビトロの■ｇＧ抗体の産生および分泌を調 べ、ＥＬＩＳＡ試験を使用して抗体産生を測定しｌ；。微量滴定プレートを、再 蒸留水中、１０μｐ抗原／ｍＱ、１ウエル当たり０　、１　ｒｎＱと一緒に、イ ンキュベートした。プレートを２５℃で１８時間インキュベートした。ＰＢＳ／ ツウィーン−２０（Ｂ　ｉｏ　−Ｒａｄ）、ｐＨ７＋　５で３回洗浄した後、プ レートを３％Ｂ　Ｓ　Ａ／Ｐ　Ｂ　Ｓと一緒に３７℃で２時間インキュベートし 、２回洗浄し、希釈した血清１００μｇを４回加えた。プレートを３７℃で２時 間インキュベートした。ＰＢＳ／ツウィーン−２０で３回洗浄した後、プレート を、１％ＢＳＡ／ＰＢＳ中１：１Ｏ００希釈のペルオキシダーゼコンジュゲート したヤギ抗う・ントＩｇＧ抗体（Ｔａｇｏ、Ｕ　Ｓ　Ａ）　ｌ　ＯＯｐＱ／ウェ ルと一緒に２５°ｃ’ｔ’１時間インキュベートした。３０％Ｈ２０，含有Ｄ− フ二二レンジアミン（０、４ｍ９７ｍＱリン酸クエン酸バッファー、ｐＨ５，０ ）に接触させることによって、着色反応を得た。０．４ＮＨ，、Ｓ○、を加えて 反応を止め、ＥＬＩＳＡリーダーにて０Ｄ４９２ｒ＋ｍを読んだ。第１表に示さ れた結果は、非投与ラットから得たＳＰＣの存在下のＭＢＰに対するその応答に 比較した、ＭＢＰ投与ラットから得たＳＰＣの存在下のＰＬＮＧの抗原増殖の抑 制パーセントを示す。これは、ＭＢＰ投与ラット（１群）から得たＳＰＣはＭＢ Ｐに対するＰＬＮＣの応答を抑制する（７０％）ことを示した。Ｔ細胞（２群） またはサプレッサー／細胞毒性Ｔリンパ細胞（３群）の枯渇は、抑制を廃止する 。しかしながら、ヘルパー１９２３球（ＣＤ４．４群）の枯渇は、ＰＬＮＣの抗 ＭＢＰ増殖応答の阻害を高める。ＣＤ４枯渇ＳＰＣを希釈すると、９６％（ｌ： １比）から１８％（ＳＰＣ：ＰＬＮＣの１：ｌＯＯ比）、抑制が低下する。

これらの結果は、イン・ビトロにおける疾患阻害および抗原特異的細胞応答の両 者の原因である細胞はＴ細胞由来であり、これらはサプレッサー／細胞毒性１９ ２３球であることを示唆している。

第１表 ＭＢＰ投与ラットから得た被照射ＳＰＣおよびそのサブポピユレーションの存在 下のＰＬＮＧの抗ＭＢＰ応答の抑制群　ＭＢＰ投与ラットから　　　　ＳＰＣ： 　ＰＬＮＣ比　ＭＢＰに対するＰＬＮＣ採取されたＳＰＣの応答の抑制％ ｌ　　全群　　　　　　　　　　１：１７０２　　　ＣＤ３枯渇　　　　　　　 　　ｉ：ｌ　　　　−１３３ＣＤ８枯渇　　　　　　　　　１：ｌ　　　　−３ ０４ＣＤ４枯渇　　　　　　　　　］＋１　　　　　９６１：１００１０ ０ｌ８投与したルイス系ラットから肺臓を摘出し、次いで、細胞を集め、照射し 、ＭＢＰ／ＣＦＡ免疫した同系ラットから採取した厚内物質ＰＬＮＧと一緒に蒔 いた。ＳＰＣを非処置細胞として使用するか、またはカップリングおよび選別の ために適当なモノクローナル抗体を使用してＣＤ３、ＣＤ４またはＣＤ８Ｔリン パ球を枯渇させた。結果をＭＢＰに対するＰＬＮＧ応答の抑制パーセントとして 表すと、非投与ラットから採取した被照射ＳＰＣの存在下のＰＬＮＧの応答に類 似している。

実施例１４ ＭＢＰに対する経口的寛容によって誘導される、抗ＭＢＰＩｇＧ産生の体液性抑 制 ルイス系ラットを、ＭＢＰを投与するかまたは処置せずにおき、次いで、ＣＦＡ に乳濁させたオバルブミン（ＯＶＡ）と混合したＭＢＰでチャレンジした。次ぎ に、種々の時期にラットをしや血し、抗ＯＶＡまたは抗ＭＢＰ抗体について血清 を調べた。第６ａ図に示される様に、ＭＢＰ投与ラットにおける抗ＯＶＡ　　Ｉ ｇＧ血清濃度は影響されなかっｔ；が、ＭＢＰ投与ラットにおける抗ＭＢＰ　　 ｒｇｃ血清濃度は低下した（６ｂ）。

実施例１５ イン・ビトロにおけるＩｇＧ産生の抑制の原因である細胞タイプの醪 ルイス系ラットにＭＢＰを投与するか、または投与せずにおき、次いで、ＭＢＰ ＋ＯＶＡ／ＣＦＡで免疫した。１２日後、ＰＬＮを摘出し、ＭＢＰまたはＯＶＡ の存在下でＰＬＮＧを３日間培養し、上溝を集め、１：２０に希釈し、そのＩｇ Ｇ含有量を調べた。第Ｘ表に示される様に、投与ラット（２群）から得、ＭＢＰ と一緒にイン・ビトロで培養したＰＬＮＣは、非投与うッ）（１群、４５％抑制 ）から得たＰＬＮＧに比較して、抗ＭＢＰ　　ＩｇＧ産土産生で応答が少なかっ た。同一ラットからのＰＬＮＣにおける抗○ＶＡ　　ＩｇＧの産生け、影響され なかった（４群対５群）。また、ＭＢＰ投与し、免疫したラットから得Ｉ；照射 ＰＬＮＣと、ＭＢＰと一緒に培養した免疫ラットのＰＬＮＧを混合し！二ところ 、後者の抗体産生が低下しく３群、３５％抑制）、一方、ＯＶＡに対する抗体力 価は影響されなかった（６群）。さらに、ＣＤＳ＋細胞を除去すると、抗ＭＢＰ 抗体の抑制が中止され、養子免疫伝達および増殖応答と同様に、ＣＤａ＋細胞が 抑制の原因であることを示した。

第Ｘ表 上溝中１ｇＧ濃度 群　レスポン　モジュレーイン・ビト　Ｏ，０，４９２１ｇＧ産生ダー細胞　タ ー細胞　口での刺激　測定値±Ｓ、Ｄ、の抑制％１　免疫　　　　　　　　　Ｍ ＢＰ　　　　　０．５６±０．０６　−２　　ＭＢＰ投与　　−ＭＢＰ　　　　 　０．３１±０．０１　４５および免疫 ３　免疫　　　　ＭＢＰ投与　ＭＢＰ　　　　　０　、３６±０．０４　３５お よび免疫 ４　免疫　　　　ＭＢＰ投与　ＭＢＰ　　　　　０．５５±０．０４　　０およ び免疫 ＣＤｇ＋枯渇 ５　　免疫ＯＶＡ　　　　　Ｏ，１７ｆ０．０３　−５　　ＭＢＦ投与　　−Ｏ ＶＡ　　　　　Ｏ，１８±０．０２　　０および免疫 ７　　免疫　　　　ＭＢＰ投与　ＯＶＡ　　　　　Ｏ，２１±０．０４　　０お よび免疫 ラットをＭＢＰ＋ＯＶＡおよびＣＦＡで免疫した（５回目のＭＢＰ投与の約３日 後）。１２日後、そのＰＬＮＧを採取し、ＭＢＰと一緒に（１−４群）またはＯ ＶＡと一緒に（５−７群）、３日間培養した。幾つかの群では、ＭＢＰ投与し免 疫したラットから得た照射ＰＬＮＣを照射し、ＭＢＰの存在下（３群）またはＯ ＶＡの存在下（７群）、免疫ＰＬＮＧと一緒に培養した。これらの刺激体の上溝 を集め、希釈し、ＥＬＩＳＡによってＩｇＧ濃度を調べた。

実施例１５ ＭＢＰの重複合成ポリペプチドによる、ＥＡＥを能動的に抑制するＭ　Ｂ　Ｐ領 域の識別 モルモットのミニリン塩基性タンパクのアミノ酸１−３７７ラグメントの重複フ ラグメントを、同相ペプチド法を使用して合成した。

ホウテン（Ｈｏｕｇｈｒｅｎ、Ｒ，、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、 ｔｌＳＡ　　８２　：５１３１−５１３５（１９８５））。次いで、これらのフ ラグメントを、全ミニリン塩基性タンパク１５ｍｇに対する等モル濃度で経口投 与した。これらを免疫前、−７、−５および一２日月に投与した。

次ぎに、確立された方法に従って、７０インドのアジュバント中塩基性タンパク で動物をチャレンジし、評価した。

死亡率、疾患の存在および疾患の重篤度について、動物を評価した。第■表に示 される様に、６／６対照群動物が罹患し、３／６の死亡率であった。重複ペプチ ドフラグメントを投与した動物では、フラグメント１−１Ｏ以外、全ての７ラグ メントの使用によって、死亡率の低下があった。疾患の重篤度の観点では、アミ ノ酸５〜２０の分子領域が疾患のもつとも著しい低下を示す。これらの結果は、 それ自体が抑制原フラグメントであるアミノ酸領域１−３７では、この分子の特 定の領域は、経口投与した場合、多かれ少なかれ抑制的に働くことを示している 。

第■表 ＭＢＰ／ＣＦＡによって 媒介されるＥＡＥ フラグメント　　疾患の　　最大評価　　死亡率発生率　　の平均値 対照（ＰＢＳ）　　　６／６　　　３．８　　　３／６１−１０　　　　５１５ 　　　３．８　　　４１５５−１５　　　　４１５　　　２．１　　　１１５１ １−２０　　　４１５　　　２．０　　　０１５１６−２５　　　４１５　　　 ２．６　　　０１５２１−３０　　　５１５　　　３．０　　　１１５２６−３ ６　　　４／６　　　２．６　　　１／６３１、−３７　　　５／６　　　３． ３　　　０／６同相ペプチド法を使用し、モルモットのミニリン塩基性タンパク の１−３７領域の重複フラグメントを合成した。次いで、これらの７ラグメント を、全ミニリン塩基性タンパク１５１１１９まで、等モル濃ＦＩＦで謬口外旦１ デー　ψヒζか　Φ烙曲　−７−５Ｒ上び一２日月に投与した。次いで、確立さ れた方法に従い、７０インドのアジュバント中塩基性タンパクで動物をチャレン ジし、評価した。

実施例１６ 経口経路によるタンパク抗原の投与によってどの７ラグメントに対する免疫応答 があるかを決定することの説明足裏にフロイントのアジュバントと一緒に免疫す るか経口的に投与して、動物に全ミニリン塩基性タンパクを投与しｌ；。その７ 〜１０日後、肺臓およびリンパ節細胞を採取し、塩基性タンパク分子の種々の７ ラグメントによってイン・ビトロで再刺激した。

第■表に示される様に、ミニリン塩基性タンパクを７０インドのアジュバント中 、末梢より投与した場合、増殖によって測定される、主要な応答は４４−８９脳 炎誘発領域に対してである。しかしながら、第Ｘ■表に示されるように、経口投 与した場合、主要な応答はフラグメント１−３７、脳炎非誘発性サプレッサー決 定基に対してである。

第■表 全ＭＢＰで免疫したルイス系ラットにおけるＭＢＰフラグメントに対する増殖 総数７分　刺激指数 バックグラウンド　　　　　　　　３．２９２　　−一全ＭＢＰ　　　　　　　 　　　　　１０．１４２　３．１ＭＢＰフラグメント１−３７　　　　３．３６ ０　　１．０ＭＢＰフラグメント４４−８９　　１０．０５４　　３．０動物の 後足裏に、ＣＦＡ中５０μ９ＭＢＰで免疫した。１０日後、リンパ節を採取し、 イン・ビトロで１０μ９ＭＢＰまｔ；は等モル量のＭＢＰフラグメントで刺激し た。

Ｈｘｍ表 全ＭＢＰを経口投与したルイス系ラットにおけるＭＢＰフラグメントに対する増 殖 ＬＮＣの供給源　　全ＭＢＰ　　　１−３７　　　　４４−８９Ｓ　Ｐ　Ｃ５， １０±１．６　　　　５．０５±１．８　　　　２．４１±０．９腸間膜Ｌ　Ｎ 　Ｃ８，６１±１．９　　９．８計１．５　　３．５３±０．８工■部　　　　 　　　　　　　　　　　４．５８±１．３　　　　６．４２±０．９　　　　２ ．５１±０．６動物に全ＭＢＰ１ｍｆｌＸ３を投与し、投与の１５日後、種々の 器官から細胞を採取し、増殖を測定した。結果を、単独で培養された細胞と比較 し、ＣＰＭにおける変化ｘｌＯ−３で表す。

・　ダイ購 ＦＩＧ、　２ ＦＩＧ、　’１ 日数（最凄ト按斗イ友のＬｆＪＣｆ）指（蘭９ＦＩＧ、　５ ８収 ＦＩＧ、６ 国際調査報告

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. １．動物におけるＴ細胞媒介性またはＴ細胞依存性自己免疫疾患の治療法であっ て、該動物に、該自己免疫疾患に特異的な自己抗原、自己抗原の生物学的に活性 なフラグメントまたは自己抗原に構造的に類似している類似体を、該自己免疫疾 患の治療に有効な量で経口または腸内投与することからなる方法。
2. ２．該自己免疫疾患が、重症筋無力症、慢性関節リウマチ、真性糖尿病、全身性 紅斑性狼瘡、多発性硬化症、自己免疫性溶血性貧血および自己免疫性甲状腺炎か らなる群から選択される請求項１に記載の方法。
3. ３．該自己免疫疾患が接触感受性疾患である請求項１に記載の方法。
4. ４．該接触感受性疾患が植物要素によって誘発される請求項３に記載の方法。
5. ５．該植物要素が毒性アイビー由来である請求項４に記載の方法。
6. ６．該動物への該経口または腸内投与が該自己免疫疾患の発症前に行われる請求 項１に記載の方法。
7. ７．該動物への該経口または腸内投与が該自己免疫疾患の発症後に行われる請求 項１に記載の方法。
8. ８．該治療が該動物における該自己免疫疾患の発症を防ぐ請求項６に記載の方法 。
9. ９．該治療が該動物における該自己免疫疾患の症状を抑制する請求項７に記載の 方法。
10. １０．該動物がヒトである請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
11. １１．該自己抗原が経口投与される請求項１に記載の方法。
12. １２．該自己抗原が腸内投与される請求項１に記載の方法。
13. １３．該自己免疫疾患が多発性硬化症である請求項２に記載の方法。
14. １４．該自己免疫疾患が慢性関節リウマチである請求項２に記載の方法。
15. １５．該自己抗原がＭＢＰ、ＭＢＰの生物学的に活性なフラグメントまたはＭＢ Ｐの類似体である請求項１３に記載の方法。
16. １６．ＭＢＰの該生物学的に活性なフラグメントがＭＢＰの脳炎非誘発性フラグ メントである請求項１５に記載の方法。
17. １７．ＭＢＰの該脳炎非誘発性フラグメントがＭＢＰのアミノ酸１−３７または その生物学的に活性な部分を含む請求項１６に記載の方法。
18. １８．ＭＢＰの該生物学的に活性な部分がアミノ酸５〜２０の領域を含む請求項 １７に記載の方法。
19. １９．ＭＢＰのアミノ酸１−３７、その生物学的に活性なフラグメントまたはそ の類似体を含むポリペプチド。