JPH09500285A - 乳頭腫ウイルス、その検出試薬、並びにそれにより引き起こされる疾病の治療薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は乳頭腫ウイルス主カプシドタンパク質のぺプチドをコード化するＤＮＡに関するものである。さらに、本発明は、このようなＤＮＡを含む乳頭腫ウイルスゲノムに関するものである。さらに、本発明は、この乳頭腫ウイルスゲノムによりコード化されるタンパク質と、ウイルス状粒子と、それらに向けられる抗体と、診断、治療およびワクチン接種におけるそれらの使用とに関するものである。

Description

【発明の詳細な説明】 乳頭腫ウイルス、その検出試薬、並びにそれにより引き起こされる疾病の治療薬 本発明は乳頭腫ウイルス主カプシドタンパク質のペプチドをコード化するＤＮ Ａに関するものである。さらに、本発明はこのようなＤＮＡを含有する乳頭腫ウ イルスゲノムに関するものである。さらに、本発明は、この乳頭腫ウイルスゲノ ムによりコード化されるタンパク質、ウイルス状粒子、およびそれらに対して向 けられる抗体、並びに診断、治療およびワクチン接種におけるそれらの使用に関 するものである。 ヒトおよび動物の上皮組織が乳頭腫ウイルスに感染することがよく知られてい る。ヒト乳頭腫ウイルス（以下、ＨＰウイルスと称する）が、生殖部位域におけ る良性のコンジローム（例えば、いぼ）、および悪性の上皮腫瘍（例えば、皮膚 癌および子宮癌）に発見されている（zur Hausen,H.、Cancer Research、49、19 89、4677−4681頁を参照）。ＨＰウイルスはまた、気道の悪性腫瘍の発生に関係 すると考えられている（zur Hausen,H.、Cancer Research、36、1976、530頁を 参照）。さらに、ＨＰウイルスは、肺の鱗屑上皮細胞癌の発生に関して少なくと も補助的な原因であると考えられている（Syrjeunen,K.J.、Lung、158、1980、1 31−142頁を参照）。 乳頭腫ウイルスは、コートのない二十面体カプシドを有し、このカプシドは約 7,900ｂｐの環状二重鎖ＤＮＡ分子を含んでいる。このカプシドは、主カプシド タンパク質（Ｌ１）および副カプシドタンパク質（Ｌ２）からなる。共に発現さ れた両方のタンパク質、または１つだけ発現されたＬ１により、生体外で、ウイ ルス状粒子が発生する（Kirnbauer,R.等、Journal of Virology、1993、6929−6 936頁を参照）。 乳頭腫ウイルスは単層細胞培養内では増殖させられない。したがって、これら のウイルスの特性付けは非常に困難であり、乳頭腫ウイルスの検出はすでに重要 な問題となっている。このことは特に皮膚癌内の乳頭腫ウイルスに当て嵌まる。 このウイルスの信頼できる検出、したがって、それらに対してよく計算された工 程は今でも可能にはなっていない。 したがって、特に皮膚癌において乳頭腫ウイルスを検出する役割を果たす試薬 を提供することが本発明の目的である。さらに、これらの乳頭腫ウイルスに対す る治療工程に役立つ薬品を提供する。 本発明によると、この目的は、請求の範囲の内容を実施することにより達成さ れる。 このように、本発明の内容は、乳頭腫ウイルス主カプシドタンパク質（Ｌ１） のペプチドをコード化するＤＮＡに関し、このペプチドは、第１図、第２図、第 ３図、第４図、第５図、第６図、第７図、第８図、または第９図のアミノ酸配列 またはアミノ酸配列の少なくとも一部からなる。 「アミノ酸配列の少なくとも一部」という表現は、個々の図面のアミノ酸配列 には、１種類以上のアミノ酸の変種を含んでいてもよいとう事実を意味するもの である。 本発明の別の内容は、乳頭腫ウイルス主カプシドタンパク質のペプチドをコー ド化するＤＮＡに関し、このＤＮＡは、第１図、第２図、第３図、第４図、第５ 図、第６図、第７図、第８図、または第９図の塩基配列または塩基配列の少なく とも一部からなる。 「塩基配列の少なくとも一部」という表現は、個々の図面の塩基配列には、１ 種類以上の塩基対の変種を含んでいてもよいとう事実を意味するものである。 第１図は、乳頭腫ウイルスのＬ１のペプチドをコード化するＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生したアミノ酸配列を示している。このＤＮＡは、1994年 4月 12日にＤＳＭ9133の元でＤＳＭ（German Collection of Microorganisms and Ce ll Cultures）にプラスミドＶＳ93-1として寄託された。 第２図は、乳頭腫ウイルスのＬ１のペプチドをコード化するＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生したアミノ酸配列を示している。このＤＮＡは、1994年 4月 12日にＤＳＭ9134の元でＤＳＭにプラスミドＣＲ148-59として寄託された。 第３図は、乳頭腫ウイルスのＬ１のペプチドをコード化するＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生したアミノ酸配列を示している。このＤＮＡは、1994年 4月 12日にＤＳＭ9135の元でＤＳＭにプラスミドＶＳ40-7として寄託された。 第４図は、乳頭腫ウイルスのＬ１のペプチドをコード化するＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生したアミノ酸配列を示している。このＤＮＡは、1994年 4月 12日にＤＳＭ9136の元でＤＳＭにプラスミドＶＳ20-4として寄託された。 第５図は、乳頭腫ウイルスのＬ１のペプチドをコード化するＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生したアミノ酸配列を示している。このＤＮＡは、1994年 4月 12日にＤＳＭ9137の元でＤＳＭにプラスミドＶＳ102-4として寄託された。 第６図は、乳頭腫ウイルスのＬ１のペプチドをコード化するＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生したアミノ酸配列を示している。このＤＮＡは、1994年 4月 12日にＤＳＭ9138の元でＤＳＭにプラスミドＶＳ73-1として寄託された。 第７図は、乳頭腫ウイルスのＬ１のペプチドをコード化するＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生したアミノ酸配列を示している。このＤＮＡは、1994年 4月 12日にＤＳＭ9139の元でＤＳＭにプラスミドＶＳ42-1として寄託された。 第８図は、乳頭腫ウイルスのＬ１のペプチドをコード化するＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生したアミノ酸配列を示している。このＤＮＡは、1994年 4月 12日にＤＳＭ9140の元でＤＳＭにプラスミドＶＳ92-1として寄託された。 第９図は、乳頭腫ウイルスのＬ１のペプチドをコード化するＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生したアミノ酸配列を示している。このＤＮＡは、1994年 4月 12日にＤＳＭ9141の元でＤＳＭにプラスミドＶＳ75-3として寄託された。 上述したＤＮＡは既知の乳頭腫ウイルスとの以下の配列相同性を有している： 第１図のＤＮＡ： ＨＰウイルス29と82.7％ 第２図のＤＮＡ： ＨＰウイルス49と75％ 第３図のＤＮＡ： ＨＰウイルス49と78.5％ 第４図のＤＮＡ： ＨＰウイルス25と75.6％ 第５図のＤＮＡ： ＨＰウイルス17と79％ 第６図のＤＮＡ： ＨＰウイルス17と73.6％ 第７図のＤＮＡ： ＨＰウイルス15と73.1％ 第８図のＤＮＡ： ＨＰウイルス15と82.8％ 第９図のＤＮＡ： ＨＰウイルス12と75.7％ 本発明によると、上述したＤＮＡは、ベクターおよび発現ベクター内にそれぞ れ存在していてもよい。当業者にはそれらの実例がよく知られている。Ｅ．ｃｏ ｌｉの発現ベクターの場合には、例えば、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＵＣ誘導体およびｐ ＧＥＸ−２Ｔがある。酵母内の発現に関しては、例えば、ｐＹ１００およびＹｃ ｐａｄ１について言及しなければならないが、動物細胞内の発現に関しては、例 えば、ｐＫＣＲ、ｐＥＦ−ＢＯＳ、ｃＤＭ８およびｐＣＥＶ４について示してい る。当業者には、発現ベクター内に存在する上記ＤＮＡを発現するための適切な 細胞が分かっている。そのような細胞の例としては、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＨＢ１０１ 、ＤＨ１、ｘ１７７６、ＪＭ１０１およびＪＭ１０９、酵母株サッカロミセス属 セレビシアエ（cerevisiae）並びに動物細胞Ｌ、３Ｔ３、ＦＭ３Ａ、ＣＨＯ、Ｃ Ｏｓ、ｖｅｒｏおよびＨｅｌａが挙げられる。当業者には、どのような方法で上 記ＤＮＡを発現ベクター内に挿入すべきであるかが分かっている。当業者には、 上述したＤＮＡを、それぞれ別のタンパク質およびペプチドをコード化するＤＮ Ａと組み合わせて挿入でき、そのために、上記ＤＮＡを融合タンパク質の形態で 発現できるという事実も知られている。 本発明の別の内容は、上記ＤＮＡを含む乳頭腫ウイルスゲノムに関するもので ある。「乳頭腫ウイルスゲノム」という表現はまた、上記ＤＮＡを含む不完全ゲ ノム、すなわち、乳頭腫ウイルスゲノムの断片も含んでいる。これは、例えば、 Ｌ１をコード化するＤＮＡまたはその一部であってもよい。 上述した乳頭腫ウイルスゲノムの調製に関して、以下の工程からなる方法を使 用することができる： (ａ) 上皮腫瘍の生検材料から全ＤＮＡを単離し、 (ｂ) (ａ)の全ＤＮＡを上記ＤＮＡによりハイブリッド形成し、それによって 、(ａ)の全ＤＮＡ内に含まれる乳頭腫ウイルスゲノムを検出し、 (ｃ) ベクター内で、乳頭腫ウイルスゲノムを含む(ａ)の全ＤＮＡをクローニ ングし、必要に応じて、得られたクローンをサブクローニングする。全ての工程 は、従来のＤＮＡ組換え技術から起因したものである。 細胞ＤＮＡの単離、ハイブリッド形成およびクローニングに関しては、補足と して、サムブルック等のMolecular Cloning、A Laboratory Manual、第２版、Co ld Spring Harbor Laboratory、1989を参照のこと。 「上皮腫瘍」という表現は、ヒトおよび動物内の上皮組織のいかなる腫瘍をも 含む。そのような腫瘍の例としては、いぼ、生殖部位のコンジローム、および皮 膚癌が挙げられる。ここで、好ましくは後者を用いて、上記乳頭腫ウイルスゲノ ムを単離する。 「ベクター」という表現は、それぞれ、染色体の並びに染色体外のＤＮＡをク ローニングするのに適したいかなるベクターをも含む。このようなベクターの例 としては、ｐＷＥ１５およびＳｕｐｅｒ Ｃｏｓ１のようなコスミド、並びに、 λファージ、例えば、λＺＡＰ発現ベクター、λＺＡＰＩＩベクターおよびλｇ ｔ１０ベクターのようなファージが挙げられる。ここでは、λファージが好まし い。上述したベクターは公知であり、ストラタジーン（Stratagene）社から得ら れる。 本発明による乳頭腫ウイルスゲノムは、染色体ＤＮＡ内に組み込まれている場 合もあるし、染色体外の形態で存在する場合もある。当業者はこれを明らかにす る方法を知っている。当業者はまた、乳頭腫ウイルスゲノムをクローニングする 最適な制限酵素を発見する方法も知っている。当業者は、既知の乳頭腫ウイルス のゲノムを使用してこれを行なう。具体的には、当業者は、上述したＨＰウイル スを観察することによってこれを行なう。 ＶＳ93-1- Ｇと称する乳頭腫ウイルスゲノムの調製を実施例として記載する。 この目的に関して、全ＤＮＡを鱗屑上皮細胞癌の生検材料から単離し、ＢａｍＨ Ｉにより開裂し、アガロースゲル内で電気泳動により分離した。次いで、アガロ ースゲルにブロッティング法を行ない、これにより、ＤＮＡをニトロセルロース 膜に移す。これは標識付けた試料としてＨＰウイルス29のＤＮＡと必要に応じて 組み合わせて、第１図のＤＮＡを用いるハイブリッド形成法に用いられる。全Ｄ ＮＡ内に存在する乳頭腫ウイルスＤＮＡによるハイブリッドが得られる。 さらに、ＢａｍＨＩにより開裂された上記全ＤＮＡをλファージ内にクローニ ングする。対応するクローン、すなわち、乳頭腫ウイルスＤＮＡを含むクローン は、ＨＰウイルス29のＤＮＡと必要に応じて組み合わせて、第１図のＤＮＡによ るハイブリッド形成により同定する。次いで、乳頭腫ウイルスゲノムＶＳ93-1- Ｇを含むクローンを得るために、これらのクローンの挿入物（insert）にプラス ミドベクター内で別のクローニングを行なう。このゲノムを塩基配列決定法によ り確認する。 さらに、乳頭腫ウイルスゲノムを同様な方法により調製する。ゲノムを調製す るために用いたＤＮＡに対応して、それらゲノムを、それぞれ、ＣＲ148-59- Ｇ 、ＶＳ40-7- Ｇ、ＶＳ20-4- Ｇ、ＶＳ102-4-Ｇ、ＶＳ73-1- Ｇ、ＶＳ42-1- Ｇ、 ＶＳ92-1- ＧおよびＶＳ75-3- Ｇと称する。 本発明の別の内容は、上記乳頭腫ウイルスゲノムによりコード化されるタンパ ク質に関するものである。このようなタンパク質は、例えば、主カプシドタンパ ク質（Ｌ１）または副カプシドタンパク質（Ｌ２）である。上述したタンパク質 をいつものとおりに生成する。乳頭腫ウイルスゲノムＶＳ93-1- ＧのＬ１および Ｌ２それぞれの生成について、実施例として記載する。この目的のために、第１ 図のＤＮＡに関連するＨＰウイルス29を使用する。このウイルスの完全な配列お よびタンパク質をコード化する個々のＤＮＡ領域の位置が知られている。両方の ゲノムの平行制限開裂、並びにＬ１およびＬ２それぞれをコード化するＤＮＡ各 々に関連する様々な断片による続いてのハイブリッド形成により乳頭腫ウイルス ゲノムＶＳ93-1- Ｇ上でこれらのＤＮＡを同定する。これらのＤＮＡを塩基配列 決定法により確認する。Ｌ１をコード化するＤＮＡをＶＳ93-1- Ｇ−Ｌ１−ＤＮ Ａと称し、Ｌ２をコード化するＤＮＡをＶＳ93-1- Ｇ−Ｌ２−ＤＮＡと称する。 さらに、Ｌ１およびＬ２それぞれをコード化するＤＮＡ各々を発現ベクター内 に挿入する。Ｅ．ｃｏｌｉ、酵母および動物細胞に関するそれらの例は上述して ある。この点について、補足として、Ｅ．ｃｏｌｉ内の発現に関して、ベクター ｐＧＥＸ−２Ｔについて言及する（Kirnbauer,R.等、前出を参照）。ＶＳ93-1- Ｇ−Ｌ１−ＤＮＡおよびＶＳ93-1- Ｇ−Ｌ２−ＤＮＡを挿入した後、それぞれ、 ｐＧＥＸ−２Ｔ−ＶＳ93-1- Ｇ−Ｌ１およびｐＧＥＸ−２Ｔ−ＶＳ93-1- Ｇ−Ｌ ２が得られる。Ｅ．ｃｏｌｉの形質転換後、これらの発現ベクターは、それぞれ 、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ−Ｌ１−融合タンパク質およびグルタチ オンＳ−トランスフェラーゼ−Ｌ２−融合タンパク質を発現する。これらのタン パク質をいつものように精製する。 Ｌ１およびＬ２それぞれをコード化する上記ＤＮＡ各々の別の発現に関して、 それぞれ、バキュロウイルス（bacculovirus）系およびワクシニアウイルス系に ついて言及する。バキュロウイルス系に関して、この目的に使用できる発現ベク ターは、例えば、ｐＥＶ ｍｏｄ．およびｐＳｙｎｗｔＶＩ^-である（Kirnbauer ,R.等、前出を参照）。ワクシニアウイルス系に関して、特に、ワクシニアウイ ルス「早期（early）」（ｐ７．５ｋ）および「後期（late）」（Ｐｓｙｎｔｈ 、ｐ１１ｋ）を含むベクターについて言及すべきである（Hagansee,M.E．等、Jo urnal of Virology、1993、315-322頁を参照）。ここではバキュロウイルス系が 好ましい。Ｌ１およびＬ２それぞれをコード化する上記ＤＮＡ各々をｐＥＶ ｍ ｏｄ．内に挿入することにより、それぞれ、ｐＥＶｍｏｄ．−ＶＳ93-1- Ｇ−Ｌ １およびｐＥＶｍｏｄ．−ＶＳ93-1- Ｇ−Ｌ２が得られる。 前者の発現ベクターのみかまたは両方の発現ベクターにより、ＳＦ−９昆虫細 胞の感染後にウイルス状粒子が形成される。前者の場合、このような粒子はＬ１ タンパク質を含むが、後者の場合には、Ｌ１タンパク質に加えて、Ｌ２タンパク 質も含む。 上記ＶＳ93-1- Ｇ−Ｌ１−ＤＮＡおよびＶＳ93-1- Ｇ−Ｌ２−ＤＮＡを互いに 発現ベクターｐＳｙｂｗｔＶＩ^-内に挿入し、得られるｐＳｙｎｗｔＶＩ^-ＶＳ93 -1- Ｇ−Ｌ１／Ｌ２をＳＦ−９昆虫細胞に使用するので、後者の場合のウイルス 状粒子も得られる。上記ウイルス状粒子をいつものように精製する。これらの粒 子も本発明の内容である。 本発明の別の内容は、上述したタンパク質およびウイルス状粒子それぞれに対 して向けられる抗体に関するものである。このような抗体は普通に産生される。 ＶＳ93-1- ＧのＬ１を含むウイルス状粒子に対して向けられる抗体の産生に関し て、実例として記載する。この目的のために、ＢＡＬＢ／ｃマウス中にウイルス 状粒子を皮下に注射する。この注射を各々３週間ごとに繰り返す。最後の注射か ら約２週間後、抗体を含有する血清を単離し、いつものように検査する。 好ましい実施の形態において、抗体はモノクローナル抗体である。その産生に 関して、上述した４回目の注射を行なった後にマウスからスプレノサイト（sple nocite）を採取し、これらをいつものように骨髄腫細胞と融合する。既知の方法 にしたがって、さらなるクローニングも行なう。 本発明により、特に皮膚癌における乳頭腫ウイルスを検出することが可能にな る。この目的のために、本発明によるＤＮＡをそのまま使用することも、別のＤ ＮＡ内に含めることもできる。後者は、乳頭腫ウイルスゲノムまたはその一部で あってもよい。 さらに、本発明により、以前には知られていない乳頭腫ウイルスを調製するこ とが可能になる。未知のウイルスは、特に皮膚癌内で発見される。さらに、本発 明は、これらの乳頭腫ウイルスから発生するウイルス状粒子およびタンパク質を 提供する。その上、これらのタンパク質および粒子それぞれに対して向けられる 抗体を提供する。 このように、本発明により、乳頭腫ウイルス病の場合の診断および治療工程を 行なうことが可能になる。さらに、本発明は、乳頭腫ウイルス感染に対するワク チンを調製することを可能にする。したがって、本発明は乳頭腫ウイルス研究の 分野における躍進に値する。 本発明を実施例により説明する。 実施例１： 乳頭腫ウイルスゲノムＶＳ93-1Ｇの同定 全ＤＮＡを免疫抑制されたヒトの鱗屑上皮細胞癌の生検材料ＷＶ −8495から単離する。このＤＮＡの10μｇを制限酵素ＢａｍＨＩにより開裂し、 0.5％のアガロースゲル内で電気泳動により分離する。これと同時に、開裂して いない上記ＤＮＡの10μｇも分離する。電気泳動の結果を第１０図に示す。この 結果から、ＤＮＡ分子が染色体外ＤＮＡに典型的な形態、すなわち、「スーパー コイル分子」および「開環状分子」それぞれの非開裂ＤＮＡ内に存在しているこ とが言える。このＤＮＡ分子はＢａｍＨＩにより２つの断片に開裂されている。 上述したアガロースゲルにブロッティング法を行ない、それによ にり、ＤＮＡをアガロースゲルからニトロセルロース膜に移す。これは第１図の 上記ＤＮＡがｐ³²標識付け試料としてのＨＰウイルス29ＤＮＡと組み合わせて用 いられるハイブリッド形成法に使用される。上記ＤＮＡ分子によるハイブリッド 形成を行なう。 ＤＮＡ組換え技術の分野における当業者には、上記方法が知られ ている。補足として、前出のサムブルック等の文献について言及する。 実施例２： 乳頭腫ウイルスゲノムＶＳ93-1-Ｇのクローニング 実施例１から得られた、ＷＶ−8495の生検材料のＤＮＡを制限酵 素ＢａｍＨＩにより開裂する。ＢａｍＨＩにより開裂し脱リンしたベクターλＺ ＡＰ発現が存在するリガーゼ反応内に、得られる断片を挿入する。 得られる組換えＤＮＡ分子を、バクテリアを感染させるために使 用するバクテリオファージ内に封じ込める。ストラタジーン社により得られるＺ ＡＰ発現ベクターキットをこれらの工程に用いる。次いで、得られるファージプ ラークにハイブリッド形成法を施す。このハイブリッド形成において、実施例１ で用いた第１図のｐ³²標識付けＤＮＡをｐ³²標識付けＨＰウイルス29ＤＮＡと組 み合わせて用いている。対応するファージプラークによるハイブリッドが得られ る。ＶＳ93-1- Ｇの２つのＢａｍＨＩ断片をそこから単離して、ＢａｍＨＩ開裂 し、脱リンしたプラスミドベクター、すなわち、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔととも に別のリガーゼ反応内に挿入する。得られる組換えＤＮＡ分子をバクテリア、す なわち、Ｅ．ｃｏｌｉ ＸＩ１−Ｂｌｕｅの形質転換に用いる。乳頭腫ウイルス ゲノムＶＳ93-1- Ｇを含む細菌性クローンをそれぞれ制限開裂および上記ＤＮＡ 試料によるハイブリッド形成により同定する。この細菌性クローンのプラスミド をｐＢｌｕｅ−ＶＳ93-1- Ｇと称する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ // Ｃ１２Ｑ 1/68 9453−4Ｂ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:92） (72)発明者 デ フィリエルスツール ハオゼン，エテ ルミケル ドイツ連邦共和国 ディー―69493 ヒル シュベルグ イム シャイブリング ６ (72)発明者 リー，アイリーン イギリス国 イー１ ２ビーエル アシュ フィールド ストリート 56 メディカル カレッジ ロンドン ホスピタル (72)発明者 ツール ハオゼン，ハラルド ドイツ連邦共和国 ディー―69493 ヒル シュベルク イム シャイブリング ６

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 乳頭腫ウイルス主カプシドタンパク質のペプチドをコード化するＤＮＡ であって、前記ペプチドが、第１図、第２図、第３図、第４図、第５図、第６図 、第７図、第８図、または第９図のアミノ酸配列の少なくとも一部を含むことを 特徴とするＤＮＡ。 ２． 前記ペプチドが、第１図、第２図、第３図、第４図、第５図、第６図、 第７図、第８図、または第９図のアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求の範 囲第１項記載のＤＮＡ。 ３． 前記乳頭腫ウイルス主カプシドタンパク質の前記ペプチドをコード化す る前記ＤＮＡが、第１図、第２図、第３図、第４図、第５図、第６図、第７図、 第８図、または第９図の塩基配列の少なくとも一部を含むことを特徴とする請求 の範囲第１項または第２項記載のＤＮＡ。 ４． 前記乳頭腫ウイルス主カプシドタンパク質の前記ペプチドをコード化す る前記ＤＮＡが、第１図、第２図、第３図、第４図、第５図、第６図、第７図、 第８図、または第９図の塩基配列を含むことを特徴とする請求の範囲第１項から 第３項いずれか１項記載のＤＮＡ。 ５． 請求の範囲第１項から第４項いずれか１項記載のＤＮＡを含むことを特 徴とする乳頭腫ウイルスゲノム。 ６． 請求の範囲第５項記載の乳頭腫ウイルスゲノムを産生する方法であって 、 (ａ) 上皮腫瘍の生検材料から全ＤＮＡを単離し、 (ｂ) 請求の範囲第１項から第４項いずれか１項記載のＤＮＡにより工程(ａ) の前記全ＤＮＡをハイブリッド形成し、それにより、(ａ)の前記全ＤＮＡ内に含 まれる乳頭腫ウイルスゲノムを検出し、 (ｃ) 前記乳頭腫ウイルスゲノムを含む(ａ)の前記全ＤＮＡをベクター内でク ローニングし、必要に応じて、得られるクローンをサブクローニングする 各工程からなり、前記各工程の全てが従来のＤＮＡ組換え技術から起因すること を特徴とする方法。 ７． 請求の範囲第５項記載の乳頭腫ウイルスゲノムによりコード化されるこ とを特徴とするタンパク質。 ８． 前記タンパク質が乳頭腫ウイルス主カプシドタンパク質であることを特 徴とする請求の範囲第７項記載のタンパク質。 ９． 前記タンパク質が乳頭腫ウイルス副カプシドタンパク質であることを特 徴とする請求の範囲第７項記載のタンパク質。 １０． 請求の範囲第７項から第９項いずれか１項記載のタンパク質をコード化 するＤＮＡを含むことを特徴とする発現ベクター。 １１． 請求の範囲第１０項記載の発現ベクターを含むことを特徴とする形質転 換体。 １２． 請求の範囲第７項から第９項いずれか１項記載のタンパク質を生成する 方法であって、適切な条件下で請求の範囲第１１項記載の形質転換体を培養する 工程を含むことを特徴とする方法。 １３． 請求の範囲第８項記載の乳頭腫ウイルス主カプシドタンパク質を含むこ とを特徴とするウイルス状粒子。 １４． 請求の範囲第９項記載の乳頭腫ウイルス副カプシドタンパク質をさらに 含むことを特徴とする請求の範囲第１３項記載のウイルス状粒子。 １５． 請求の範囲第７項から第９項いずれか１項記載のタンパク質に対して向 けられることを特徴とする抗体。 １６． 請求の範囲第１３項または第１４項記載のウイルス状粒子に対して向け られることを特徴とする抗体。 １７． 請求の範囲第１項から第５項いずれか１項記載のＤＮＡの、診断のため の試薬としての使用。 １８． 請求の範囲第７項から第９項いずれか１項記載のタンパク質の、診断、 治療および／またはワクチン接種のための試薬としての使用。 １９． 請求の範囲第１３項または第１４項記載のウイルス状粒子の、診断、治 療および／またはワクチン接種のための試薬としての使用。 ２０． 請求の範囲第１５項または第１６項記載の抗体の、診断および／または 治療のための試薬としての使用。