JPH09268153A - トリフルオロメチルケトン誘導体及びホスホリパーゼａ２阻害剤 - Google Patents
トリフルオロメチルケトン誘導体及びホスホリパーゼａ２阻害剤Info
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- JPH09268153A JPH09268153A JP7997096A JP7997096A JPH09268153A JP H09268153 A JPH09268153 A JP H09268153A JP 7997096 A JP7997096 A JP 7997096A JP 7997096 A JP7997096 A JP 7997096A JP H09268153 A JPH09268153 A JP H09268153A
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- JP
- Japan
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- phospholipase
- acid
- fatty acid
- trifluoromethyl ketone
- ketone derivative
- Prior art date
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- Pending
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
- C07C45/45—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds by condensation
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- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明は炎症の初期に関与しているとされる
細胞質ホスホリパーゼＡ 2に対して優れた阻害活性を示
し、かつ副作用のない薬剤を提供することを目的とす
る。 【構成】 一般式 ＲＣＯＣＦ3 （式中、ＲＣＯはｎ−３系高度不飽和脂肪酸のアシル残
基を表す。）で表されるトリフルオロメチルケトン誘導
体を有効成分として含有する細胞質ホスホリパーゼＡ2
阻害剤。 【発明の効果】 上記化合物は、細胞質ホスホリパーゼ
Ａ2に対して優れた阻害活性を示し、従って炎症性疾患
の治療薬、例えば抗炎症薬あるいは抗アレルギー薬とし
ての用途を有する。
細胞質ホスホリパーゼＡ 2に対して優れた阻害活性を示
し、かつ副作用のない薬剤を提供することを目的とす
る。 【構成】 一般式 ＲＣＯＣＦ3 （式中、ＲＣＯはｎ−３系高度不飽和脂肪酸のアシル残
基を表す。）で表されるトリフルオロメチルケトン誘導
体を有効成分として含有する細胞質ホスホリパーゼＡ2
阻害剤。 【発明の効果】 上記化合物は、細胞質ホスホリパーゼ
Ａ2に対して優れた阻害活性を示し、従って炎症性疾患
の治療薬、例えば抗炎症薬あるいは抗アレルギー薬とし
ての用途を有する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ｎ−３系高度不飽
和脂肪酸残基を有するトリフルオロメチルケトン誘導体
を有効成分とする細胞質ホスホリパーゼＡ2阻害剤に関
するものである。
和脂肪酸残基を有するトリフルオロメチルケトン誘導体
を有効成分とする細胞質ホスホリパーゼＡ2阻害剤に関
するものである。
【０００２】
【従来の技術】ホスホリパーゼＡ2阻害剤はホスホリパ
ーゼＡ2（ＰＬＡ2）の加水分解作用を阻害することによ
ってグリセロリン脂質より遊離するリゾグリセロリン脂
質とアラキドン酸の生成を抑え、その結果として血小板
活性化因子やエイコサノイドとして知られる炎症メディ
エイタ−の産生を調節せんとするもので、炎症性障害を
治療する薬剤として期待されている。
ーゼＡ2（ＰＬＡ2）の加水分解作用を阻害することによ
ってグリセロリン脂質より遊離するリゾグリセロリン脂
質とアラキドン酸の生成を抑え、その結果として血小板
活性化因子やエイコサノイドとして知られる炎症メディ
エイタ−の産生を調節せんとするもので、炎症性障害を
治療する薬剤として期待されている。
【０００３】この炎症に関わっていると考えられている
ホスホリパーゼＡ2としては、炎症部位由来のII型ホス
ホリパーゼＡ2及び、マクロファージ細胞株や血小板可
溶性画 分から精製された高分子量の細胞質ホスホリパ
ーゼＡ2等が知られている〔蛋白質・核酸・酵素, Vol.3
6, No.3, p325-332(1991)〕。最近、特に細胞質ホスホ
リパーゼＡ2の慢性化炎症への関与が報告され、細胞質
ホスホリパーゼＡ2の阻害剤は慢性炎症治療薬として期
待される。
ホスホリパーゼＡ2としては、炎症部位由来のII型ホス
ホリパーゼＡ2及び、マクロファージ細胞株や血小板可
溶性画 分から精製された高分子量の細胞質ホスホリパ
ーゼＡ2等が知られている〔蛋白質・核酸・酵素, Vol.3
6, No.3, p325-332(1991)〕。最近、特に細胞質ホスホ
リパーゼＡ2の慢性化炎症への関与が報告され、細胞質
ホスホリパーゼＡ2の阻害剤は慢性炎症治療薬として期
待される。
【０００４】細胞質ホスホリパーゼＡ2に対して阻害作
用を有する化合物としては例えば、ｎ−６系の高度不飽
和脂肪酸のトリフルオロメチルケトン誘導体であるアラ
キドン酸トリフルオロメチルケトンおよびγ-リノレン
酸トリフルオロメチルケトンの報告〔Biochemistry, 3
2, 5935-5940(1993)、J. Biol. Chem., 269, 15625-156
30 (1994)〕があるが、アラキドン酸やその生合成前駆
体のγ-リノレン酸自体はエイコサノイドとして知られ
ている炎症性前駆代謝産物に変換されうる化合物である
という問題がある。なお、マウスまたはヒトの表面細胞
から得られた６８ｋＤａの表面ホスホリパーゼＡ2に対
して炭素数１８〜２０の不飽和脂肪酸が阻害作用を示す
こと〔特開平４−３４２５２５号〕が報告されている
が、その活性は弱い。
用を有する化合物としては例えば、ｎ−６系の高度不飽
和脂肪酸のトリフルオロメチルケトン誘導体であるアラ
キドン酸トリフルオロメチルケトンおよびγ-リノレン
酸トリフルオロメチルケトンの報告〔Biochemistry, 3
2, 5935-5940(1993)、J. Biol. Chem., 269, 15625-156
30 (1994)〕があるが、アラキドン酸やその生合成前駆
体のγ-リノレン酸自体はエイコサノイドとして知られ
ている炎症性前駆代謝産物に変換されうる化合物である
という問題がある。なお、マウスまたはヒトの表面細胞
から得られた６８ｋＤａの表面ホスホリパーゼＡ2に対
して炭素数１８〜２０の不飽和脂肪酸が阻害作用を示す
こと〔特開平４−３４２５２５号〕が報告されている
が、その活性は弱い。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は炎症の初期に
関与しているとされる細胞質ホスホリパーゼＡ2に対し
て優れた阻害活性を示し、かつ副作用のない薬剤を提供
することを目的とする。
関与しているとされる細胞質ホスホリパーゼＡ2に対し
て優れた阻害活性を示し、かつ副作用のない薬剤を提供
することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、下記一般
式（Ｉ）で表されるトリフルオロメチルケトン誘導体
が、細胞質ホスホリパーゼＡ2（ｃＰＬＡ2）例えば、ウ
サギ血小板より部分精製した８５ｋＤａのｃＰＬＡ2に
対して優れた阻害活性を有しているという新し い知見
に基づき本発明を完成した。
式（Ｉ）で表されるトリフルオロメチルケトン誘導体
が、細胞質ホスホリパーゼＡ2（ｃＰＬＡ2）例えば、ウ
サギ血小板より部分精製した８５ｋＤａのｃＰＬＡ2に
対して優れた阻害活性を有しているという新し い知見
に基づき本発明を完成した。
【０００７】すなわち、本発明は一般式（Ｉ） ＲＣＯＣＦ3 （Ｉ） （式中、ＲＣＯはｎ−３系高度不飽和脂肪酸のアシル残
基を表す。）で表されるトリフルオロメチルケトン誘導
体並びに、それを有効成分として含有する医薬、とくに
細胞質ホスホリパーゼＡ2阻害剤を提供する。
基を表す。）で表されるトリフルオロメチルケトン誘導
体並びに、それを有効成分として含有する医薬、とくに
細胞質ホスホリパーゼＡ2阻害剤を提供する。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明において、ＲＣＯで表され
るｎ−３系高度不飽和脂肪酸のアシル残基としては、イ
コサペンタエノイル基、ドコサヘキサエノイル基、ドコ
サペンタエノイル基、α−リノレノイル基等を挙げるこ
とができるが、活性の点で特にイコサペンタエノイル基
が好ましい。
るｎ−３系高度不飽和脂肪酸のアシル残基としては、イ
コサペンタエノイル基、ドコサヘキサエノイル基、ドコ
サペンタエノイル基、α−リノレノイル基等を挙げるこ
とができるが、活性の点で特にイコサペンタエノイル基
が好ましい。
【０００９】本発明の上記一般式（Ｉ）で表されるトリ
フルオロメチルケトン誘導体は、例えばｎ−３系高度不
飽和脂肪酸をオキサリルクロリド等のハロゲン化剤で処
理して、対応する酸ハロゲン化物としたのち、ピリジン
等の塩基存在下、トリフルオロ酢酸無水物と反応させる
ことにより製造することができる。（Tetrahedron Lett
ers, 33, 1285-1288, 1992 ）
フルオロメチルケトン誘導体は、例えばｎ−３系高度不
飽和脂肪酸をオキサリルクロリド等のハロゲン化剤で処
理して、対応する酸ハロゲン化物としたのち、ピリジン
等の塩基存在下、トリフルオロ酢酸無水物と反応させる
ことにより製造することができる。（Tetrahedron Lett
ers, 33, 1285-1288, 1992 ）
【００１０】本発明のトリフルオロメチルケトン誘導体
の投与量は、年齢、性別、体重、症状、あるいは投与形
態により異なるが、一般には、１日あたり約０．１〜５
００ｍｇであり、１回あるいは数回に分けて服用されう
る。
の投与量は、年齢、性別、体重、症状、あるいは投与形
態により異なるが、一般には、１日あたり約０．１〜５
００ｍｇであり、１回あるいは数回に分けて服用されう
る。
【００１１】本発明の阻害剤は経口的あるいは非経口的
に投与することができる。経口投与剤としては散剤、顆
粒剤、カプセル剤、錠剤などの固形製剤あるいはシロッ
プ剤、エリキシル剤などの液状製剤とすることができ
る。また、非経口投与剤として注射剤とすることができ
る。これらの製剤は有効成分に薬学的に認容である製造
助剤を加えることにより常法に従って製造される。更に
公知の技術により持続性製剤とすることも可能である。
に投与することができる。経口投与剤としては散剤、顆
粒剤、カプセル剤、錠剤などの固形製剤あるいはシロッ
プ剤、エリキシル剤などの液状製剤とすることができ
る。また、非経口投与剤として注射剤とすることができ
る。これらの製剤は有効成分に薬学的に認容である製造
助剤を加えることにより常法に従って製造される。更に
公知の技術により持続性製剤とすることも可能である。
【００１２】経口投与用の固形製剤を製造するには、有
効成分と賦形剤例えば乳糖、デンプン、結晶セルロー
ス、乳糖カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウ
ム、無水ケイ酸などとを混合して散剤とするか、さらに
必要に応じて白糖、ヒドロキシプロピルセルロース、ポ
リビニルピロリドンなどの結合剤、カルボキシメチルセ
ルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウムなど
の崩壊剤などを加えて湿式又は乾式造粒して顆粒剤とす
る。錠剤を製造するにはこれらの散剤及び顆粒剤をその
ままあるいはステアリン酸マグネシウム、タルクなどの
滑沢剤を加えて打錠すればよい。これらの顆粒又は錠剤
はヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メ
タアクリル酸、メタアクリル酸メチルコポリマーなどの
腸溶性基剤で被覆して腸溶性製剤、あるいはエチルセル
ロース、カルナウバロウ、硬化油などで被覆して持続性
製剤とすることもできる。また、カプセル剤を製造する
には散剤又は顆粒剤を硬カプセルに充填するか、有効成
分をグリセリン、ポリエチレングリコール、ゴマ油、オ
リーブ油などに溶解したのちゼラチン膜で被覆し軟カプ
セル剤とすることができる。
効成分と賦形剤例えば乳糖、デンプン、結晶セルロー
ス、乳糖カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウ
ム、無水ケイ酸などとを混合して散剤とするか、さらに
必要に応じて白糖、ヒドロキシプロピルセルロース、ポ
リビニルピロリドンなどの結合剤、カルボキシメチルセ
ルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウムなど
の崩壊剤などを加えて湿式又は乾式造粒して顆粒剤とす
る。錠剤を製造するにはこれらの散剤及び顆粒剤をその
ままあるいはステアリン酸マグネシウム、タルクなどの
滑沢剤を加えて打錠すればよい。これらの顆粒又は錠剤
はヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メ
タアクリル酸、メタアクリル酸メチルコポリマーなどの
腸溶性基剤で被覆して腸溶性製剤、あるいはエチルセル
ロース、カルナウバロウ、硬化油などで被覆して持続性
製剤とすることもできる。また、カプセル剤を製造する
には散剤又は顆粒剤を硬カプセルに充填するか、有効成
分をグリセリン、ポリエチレングリコール、ゴマ油、オ
リーブ油などに溶解したのちゼラチン膜で被覆し軟カプ
セル剤とすることができる。
【００１３】経口投与用の液状製剤を製造するには、有
効成分と白糖、ソルビトール、グリセリンなどの甘味剤
とを水に溶解して透明なシロップ剤、更に精油、エタノ
ールなどを加えてエリキシル剤とするか、アラビアゴ
ム、トラガント、ポリソルベート８０、カルボキシメチ
ルセルロースナトリウムなどを加えて乳剤又は懸濁剤と
してもよい。これらの液状製剤には所望により矯味剤、
着色剤、保存剤などを加えてもよい。
効成分と白糖、ソルビトール、グリセリンなどの甘味剤
とを水に溶解して透明なシロップ剤、更に精油、エタノ
ールなどを加えてエリキシル剤とするか、アラビアゴ
ム、トラガント、ポリソルベート８０、カルボキシメチ
ルセルロースナトリウムなどを加えて乳剤又は懸濁剤と
してもよい。これらの液状製剤には所望により矯味剤、
着色剤、保存剤などを加えてもよい。
【００１４】注射剤を製造するには、有効成分を必要に
応じ塩酸、水酸化ナトリウム、乳糖、乳酸ナトリウム、
リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなど
のｐＨ調整剤、塩化ナトリウム、ブドウ糖などの等張化
剤とともに注射用蒸留水に溶解し、無菌濾過してアンプ
ルに充填するか、更にマンニトール、デキストリン、シ
クロデキストリン、ゼラチンなどを加えて真空下凍結乾
燥し、用時溶解型の注射剤としてもよい。また、有効成
分にレシチン、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレ
ン硬化ヒマシ油などを加えて水中で乳化せしめ注射用乳
剤とすることもできる。
応じ塩酸、水酸化ナトリウム、乳糖、乳酸ナトリウム、
リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなど
のｐＨ調整剤、塩化ナトリウム、ブドウ糖などの等張化
剤とともに注射用蒸留水に溶解し、無菌濾過してアンプ
ルに充填するか、更にマンニトール、デキストリン、シ
クロデキストリン、ゼラチンなどを加えて真空下凍結乾
燥し、用時溶解型の注射剤としてもよい。また、有効成
分にレシチン、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレ
ン硬化ヒマシ油などを加えて水中で乳化せしめ注射用乳
剤とすることもできる。
【００１５】これらの製剤は公知の製造法、例えば日本
薬局方第１０版製剤総則記載の方法ないし適当な改良を
加えた方法によって製造することができる。
薬局方第１０版製剤総則記載の方法ないし適当な改良を
加えた方法によって製造することができる。
【００１６】
【実施例】以下、本発明を合成例、試験例によりさらに
詳細に説明する。
詳細に説明する。
【００１７】合成例１ ドコサヘキサエノイルトリフル
オロメタン誘導体の合成 ドコサヘキサエン酸 (164 mg, 0.5 mmol) のテトラヒド
ロフラン（THF） (2 mL) 溶液にジメチルホルムアミド
（DMF）を半滴加え、さらにオキサリルクロリド(0.44 m
L, 5.0 mmol) を加え、室温で２時間撹拌した後、溶媒
を減圧留去し酸塩化物を得た。酸塩化物をジクロロメタ
ン (5 mL) に溶かし、トリフルオロ酢酸無水物 (0.42 m
L, 3.0 mmol) を加え、0℃ にてピリジン (0.32 mL, 4.
0 mmol)を加え、さらにその温度で１時間撹拌した。0
℃ で水 (0.5 mL) をゆっくり加え、クロロホルムにて
抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留
去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー (5% Et3
N／ヘキサンで処理) に付し（ヘキサン/酢酸エチル = 2
0/1, v/v）、目的とするトリフルオロメチルケトン体
(56 mg, 0.16 mmol, 32%) を得た。
オロメタン誘導体の合成 ドコサヘキサエン酸 (164 mg, 0.5 mmol) のテトラヒド
ロフラン（THF） (2 mL) 溶液にジメチルホルムアミド
（DMF）を半滴加え、さらにオキサリルクロリド(0.44 m
L, 5.0 mmol) を加え、室温で２時間撹拌した後、溶媒
を減圧留去し酸塩化物を得た。酸塩化物をジクロロメタ
ン (5 mL) に溶かし、トリフルオロ酢酸無水物 (0.42 m
L, 3.0 mmol) を加え、0℃ にてピリジン (0.32 mL, 4.
0 mmol)を加え、さらにその温度で１時間撹拌した。0
℃ で水 (0.5 mL) をゆっくり加え、クロロホルムにて
抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留
去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー (5% Et3
N／ヘキサンで処理) に付し（ヘキサン/酢酸エチル = 2
0/1, v/v）、目的とするトリフルオロメチルケトン体
(56 mg, 0.16 mmol, 32%) を得た。
【００１８】無色油状体1 H NMR (CDCl3) 400 MHz δ 0.97 (3H, t, J = 7.5 Hz,
CH3), 2.07 (2H, m, H-22), 2.44, (2H, dt, J = 7.1
Hz, H-4), 2.79 (2H, t, J = 7.1 Hz, H-3), 2.85 (10
H, m, CH2), 5.39 (12H, m, CH=CH)13 C NMR (CDCl3) d 14.27, 20.32, 20.57, 25.56, 25.6
0, 25.65, 25.66, 36.36, 115.55 (q, J = 292 Hz), 12
6.54, 127.04, 127.73, 127.89, 128.02, 128.07, 128.
34, 128.36, 128.55, 128.62, 130.36, 132.08, 190.90
(q, J = 35 Hz) IR (neat) 3015, 2966, 1765, 1396, 1205, 1143, 105
7, 997, 707 cm-1 Mass 381 (M++1), 311 (M-CF3) Anal. Calcd for C23H31F3O: C 72.60 %, H 8.21%; fou
nd C 72.74 %, H 8.24 %
CH3), 2.07 (2H, m, H-22), 2.44, (2H, dt, J = 7.1
Hz, H-4), 2.79 (2H, t, J = 7.1 Hz, H-3), 2.85 (10
H, m, CH2), 5.39 (12H, m, CH=CH)13 C NMR (CDCl3) d 14.27, 20.32, 20.57, 25.56, 25.6
0, 25.65, 25.66, 36.36, 115.55 (q, J = 292 Hz), 12
6.54, 127.04, 127.73, 127.89, 128.02, 128.07, 128.
34, 128.36, 128.55, 128.62, 130.36, 132.08, 190.90
(q, J = 35 Hz) IR (neat) 3015, 2966, 1765, 1396, 1205, 1143, 105
7, 997, 707 cm-1 Mass 381 (M++1), 311 (M-CF3) Anal. Calcd for C23H31F3O: C 72.60 %, H 8.21%; fou
nd C 72.74 %, H 8.24 %
【００１９】参考例２ イコサペンタエノイルトリフル
オロメタン誘導体の合成 イコサペンタエン酸 (70 mg, 0.23 mmol) のTHF (2 mL)
溶液に DMF を半滴加え、さらにオキサリルクロリド
(0.20 mL, 2.3 mmol) を加え、室温で２時間撹拌した
後、溶媒を減圧留去し酸塩化物を得た。酸塩化物をジク
ロロメタン (2 mL) に溶かし、トリフルオロ酢酸無水物
(0.19 mL, 1.38 mmol) を加え、0℃ にてピリジン (0.
15 mL, 1.84 mmol) を加え、さらにその温度で２時間撹
拌した。0℃ で水 (2 mL) をゆっくり加え、クロロホル
ムにて抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を
減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー
(5%Et3N／ヘキサンで処理) に付し（ヘキサン/酢酸エチ
ル = 7/1, v/v）、目的とするトリフルオロメチルケト
ン体 (50 mg, 0.14 mmol, 60%) を得た。
オロメタン誘導体の合成 イコサペンタエン酸 (70 mg, 0.23 mmol) のTHF (2 mL)
溶液に DMF を半滴加え、さらにオキサリルクロリド
(0.20 mL, 2.3 mmol) を加え、室温で２時間撹拌した
後、溶媒を減圧留去し酸塩化物を得た。酸塩化物をジク
ロロメタン (2 mL) に溶かし、トリフルオロ酢酸無水物
(0.19 mL, 1.38 mmol) を加え、0℃ にてピリジン (0.
15 mL, 1.84 mmol) を加え、さらにその温度で２時間撹
拌した。0℃ で水 (2 mL) をゆっくり加え、クロロホル
ムにて抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を
減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー
(5%Et3N／ヘキサンで処理) に付し（ヘキサン/酢酸エチ
ル = 7/1, v/v）、目的とするトリフルオロメチルケト
ン体 (50 mg, 0.14 mmol, 60%) を得た。
【００２０】1H NMR (CDCl3) 400 MHz δ0.97 (3H, t,
J = 7.5 Hz, CH3), 1.76 (2H, m, CH2), 2.08 (2H, m,
CH2), 2.14 (2H, m, CH2), 2.72 (2H, t, J = 7.0 Hz,
CH2-CO), 2.82 (8H, m, CH2), 5.39 (10H, m, CH=CH)13 C NMR (CDCl3) d 14.27, 20.57, 22.17, 25.26, 25.6
2, 25.64, 25.66, 26.03, 35.63, 115.549 (J = 292 H
z), 127.03, 127.87, 127.94, 128.02, 128.22, 128.3
6, 128.63, 129.65, 132.09, 191.48 (J = 35 Hz) IR (neat) 3015, 2964, 1765, 1442, 1400, 1273, 120
7, 1143, 706 cm-1 Anal. Calcd for C21H29F3O: C 71.16 %, H 8.25%; fou
nd C 70.54 %, H 8.36 %
J = 7.5 Hz, CH3), 1.76 (2H, m, CH2), 2.08 (2H, m,
CH2), 2.14 (2H, m, CH2), 2.72 (2H, t, J = 7.0 Hz,
CH2-CO), 2.82 (8H, m, CH2), 5.39 (10H, m, CH=CH)13 C NMR (CDCl3) d 14.27, 20.57, 22.17, 25.26, 25.6
2, 25.64, 25.66, 26.03, 35.63, 115.549 (J = 292 H
z), 127.03, 127.87, 127.94, 128.02, 128.22, 128.3
6, 128.63, 129.65, 132.09, 191.48 (J = 35 Hz) IR (neat) 3015, 2964, 1765, 1442, 1400, 1273, 120
7, 1143, 706 cm-1 Anal. Calcd for C21H29F3O: C 71.16 %, H 8.25%; fou
nd C 70.54 %, H 8.36 %
【００２１】細胞質ホスホリパーゼＡ2阻害活性の試験
方法（無細胞系） 細胞質ホスホリパーゼＡ2（ｃＰＬＡ2）は、ウサギ洗浄
血小板より以下の方法により部分精製し、用いた。ウサ
ギ１０羽の全血液より常法にて単離した血小板を、10mM
トリス塩酸緩衝液〔(pH 7.5)/1mM EDTA/0.14M NaCl〕で
洗浄し、50mlの50mMトリス塩酸緩衝液〔(pH 7.5)/1mM E
DTA/0.1M NaCl〕（以下緩衝液Ａ）に懸濁して超音波 破
砕した。この溶液を、４℃で3000xg、５分間遠心分離し
た。上清をさらに100,000xgで１時間遠心分離し、その
上清をヘパリン−セファロースCL6Bカラムに添加した。
緩衝液Ａで展開し、夾雑物はカラムに吸着させることで
除去し、流出液を回収した。これをさらにDEAE−セファ
セルカラムに添加し、50mMトリス塩酸緩衝液〔(pH 7.5)
/1mM EDTA/0.15M NaCl〕でカラムをよく洗浄した後、50
mMトリス塩酸緩衝液〔(pH 7.5)/1mM EDTA/0.6M NaCl〕
で目的画分を溶出した。この画分 はさらにブチル−ト
ヨパール 650Mに添加し、50mMトリス塩酸緩衝液〔(pH
7.5)/1mM EDTA/0.6M NaCl〕でよく洗浄した後、10mMグ
リシン-NaOH緩衝液（pH 11.5）で溶出させた。この画分
をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動した後、ニトロ
セルロースフィルターにブロットし、ｃＰＬＡ2に特異
的なモノクローナル抗体、およびｃＰＬＡ2とII型ＰＬ
Ａ2に反応するモノクローナル抗体を用いてバンドの検
出を行った。その結果、本画分には８５ｋＤａのｃＰＬ
Ａ 2のみが検出され、他のホスホリパーゼＡ2の混入がな
いことを確認した。検体はジメチルスルホキシドに溶解
し試験液として使用した。反応は、1Mトリス−塩酸(pH
9.0)25μl:2%牛血清アルブミン（脂肪酸不含）12.5μl:
50mM塩化カルシウム溶液20μlの混合緩衝溶液に試験液
とｃＰＬＡ2溶液を加え全量200μlとし、37℃で20分間
反応させた。その後、基質の１−パルミトイル−２−[
14C]アラキドノイル−グリ セロホスホエタノ−ルアミ
ン(0.5nmol/50,000dpm/50μl)を加え更に37℃で10分 間
反応させた。ド−ル試薬(イソプロパノール:ヘプタン:1
NH2SO4=10:40:1, 1.25ml)を加えて反応を停止し、ドー
ルの方法により遊離脂肪酸画分を回収してその放射活性
を液体シンチレーションカウンターで計測することによ
りアラキドン酸の遊離量、すなわち酵素活性を測定し
た。
方法（無細胞系） 細胞質ホスホリパーゼＡ2（ｃＰＬＡ2）は、ウサギ洗浄
血小板より以下の方法により部分精製し、用いた。ウサ
ギ１０羽の全血液より常法にて単離した血小板を、10mM
トリス塩酸緩衝液〔(pH 7.5)/1mM EDTA/0.14M NaCl〕で
洗浄し、50mlの50mMトリス塩酸緩衝液〔(pH 7.5)/1mM E
DTA/0.1M NaCl〕（以下緩衝液Ａ）に懸濁して超音波 破
砕した。この溶液を、４℃で3000xg、５分間遠心分離し
た。上清をさらに100,000xgで１時間遠心分離し、その
上清をヘパリン−セファロースCL6Bカラムに添加した。
緩衝液Ａで展開し、夾雑物はカラムに吸着させることで
除去し、流出液を回収した。これをさらにDEAE−セファ
セルカラムに添加し、50mMトリス塩酸緩衝液〔(pH 7.5)
/1mM EDTA/0.15M NaCl〕でカラムをよく洗浄した後、50
mMトリス塩酸緩衝液〔(pH 7.5)/1mM EDTA/0.6M NaCl〕
で目的画分を溶出した。この画分 はさらにブチル−ト
ヨパール 650Mに添加し、50mMトリス塩酸緩衝液〔(pH
7.5)/1mM EDTA/0.6M NaCl〕でよく洗浄した後、10mMグ
リシン-NaOH緩衝液（pH 11.5）で溶出させた。この画分
をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動した後、ニトロ
セルロースフィルターにブロットし、ｃＰＬＡ2に特異
的なモノクローナル抗体、およびｃＰＬＡ2とII型ＰＬ
Ａ2に反応するモノクローナル抗体を用いてバンドの検
出を行った。その結果、本画分には８５ｋＤａのｃＰＬ
Ａ 2のみが検出され、他のホスホリパーゼＡ2の混入がな
いことを確認した。検体はジメチルスルホキシドに溶解
し試験液として使用した。反応は、1Mトリス−塩酸(pH
9.0)25μl:2%牛血清アルブミン（脂肪酸不含）12.5μl:
50mM塩化カルシウム溶液20μlの混合緩衝溶液に試験液
とｃＰＬＡ2溶液を加え全量200μlとし、37℃で20分間
反応させた。その後、基質の１−パルミトイル−２−[
14C]アラキドノイル−グリ セロホスホエタノ−ルアミ
ン(0.5nmol/50,000dpm/50μl)を加え更に37℃で10分 間
反応させた。ド−ル試薬(イソプロパノール:ヘプタン:1
NH2SO4=10:40:1, 1.25ml)を加えて反応を停止し、ドー
ルの方法により遊離脂肪酸画分を回収してその放射活性
を液体シンチレーションカウンターで計測することによ
りアラキドン酸の遊離量、すなわち酵素活性を測定し
た。
【００２２】細胞質ホスホリパーゼＡ2活性阻害の試験
方法（細胞系） ヒト骨髄性白血病細胞株HL60を用いて、細胞質ホスホリ
パーゼＡ2によるアラキドン酸の遊離を細胞レベルで検
討した。HL60細胞は、1.4％ジメチルスルホキシド（DMS
O）及び10％ウシ胎児血清を含むRPMI-1640培地中で4日
間培養することで好中球様に分化させた。培地に1-
[14C]-アラキドン酸0.1μCi／mlを添加して1時間培養し
た後、0.25％ウシ血清アルブミン（脂肪酸不含）／リン
酸緩衝液（pH7.2）で細胞を３回洗浄し、0.25％ウシ血
清アルブミン（脂肪酸不含）／イーグル基礎培地 に2×
106個／mlとなるよう懸濁した。ガラス試験官に細胞懸
濁液250オlを添加して37℃で加温し、さらに検体のジメ
チルスルホキシド溶液1.25μlを添加してさらに37℃で5
分間前処理した。これにカルシウムイオノフォアA23187
の2mM DMSO溶液を1.25μl加えて反応を開始した。37
℃、5分間の反応後、ド−ル試薬(イソプロパノール:ヘ
プタン:1N H2SO4=10 : 40 : 1, 1.25ml)を加えて反応を
停止し、ドールの方法により遊離脂肪酸画分を回収して
その放射活性を液体シンチレーションカウンターで計測
することにより酵素活性を測定した。
方法（細胞系） ヒト骨髄性白血病細胞株HL60を用いて、細胞質ホスホリ
パーゼＡ2によるアラキドン酸の遊離を細胞レベルで検
討した。HL60細胞は、1.4％ジメチルスルホキシド（DMS
O）及び10％ウシ胎児血清を含むRPMI-1640培地中で4日
間培養することで好中球様に分化させた。培地に1-
[14C]-アラキドン酸0.1μCi／mlを添加して1時間培養し
た後、0.25％ウシ血清アルブミン（脂肪酸不含）／リン
酸緩衝液（pH7.2）で細胞を３回洗浄し、0.25％ウシ血
清アルブミン（脂肪酸不含）／イーグル基礎培地 に2×
106個／mlとなるよう懸濁した。ガラス試験官に細胞懸
濁液250オlを添加して37℃で加温し、さらに検体のジメ
チルスルホキシド溶液1.25μlを添加してさらに37℃で5
分間前処理した。これにカルシウムイオノフォアA23187
の2mM DMSO溶液を1.25μl加えて反応を開始した。37
℃、5分間の反応後、ド−ル試薬(イソプロパノール:ヘ
プタン:1N H2SO4=10 : 40 : 1, 1.25ml)を加えて反応を
停止し、ドールの方法により遊離脂肪酸画分を回収して
その放射活性を液体シンチレーションカウンターで計測
することにより酵素活性を測定した。
【００２３】試験例１ 検体として、ドコサヘキサエノイルトリフルオロメタン
（DHA-CF3）を用い、前記試験方法に従いｃＰＬＡ2によ
る[14C]アラキドン酸量を測定した。結果を表１に示
す。
（DHA-CF3）を用い、前記試験方法に従いｃＰＬＡ2によ
る[14C]アラキドン酸量を測定した。結果を表１に示
す。
【００２４】試験例２ 検体として、イコサペンタエノイルトリフルオロメタン
（EPA-CF3）を用い、前記試験方法に従いｃＰＬＡ2によ
る[14C]アラキドン酸量を測定した。結果を表１に示
す。
（EPA-CF3）を用い、前記試験方法に従いｃＰＬＡ2によ
る[14C]アラキドン酸量を測定した。結果を表１に示
す。
【００２５】比較試験例１ 比較対象として、アラキドノイルトリフルオロメタン
（AA-CF3）を用い、前記試験方法に従いｃＰＬＡ2によ
る[14C]アラキドン酸量を測定した。結果を表１に示
す。
（AA-CF3）を用い、前記試験方法に従いｃＰＬＡ2によ
る[14C]アラキドン酸量を測定した。結果を表１に示
す。
【００２６】比較試験例２ 比較対象として、パルミトイルトリフルオロメタン（PA
-CF3）を用い、前記試験方法に従いｃＰＬＡ2による[14
C]アラキドン酸量を測定した。結果を表１に示す。
-CF3）を用い、前記試験方法に従いｃＰＬＡ2による[14
C]アラキドン酸量を測定した。結果を表１に示す。
【００２７】
【表１】
【００２８】表１より明らかなように、ドコサヘキサエ
ン酸残基を有するトリフルオロメチルケトン誘導体、イ
コサペンタエン酸残基を有するトリフルオロメチルケト
ン誘導体はアラキドン酸残基を有するトリフルオロメチ
ルケトン誘導体と同等あるいはより優れたｃＰＬＡ2阻
害活性を示したが、比較対照としたパルミチン酸残基を
有するトリフルオロメチルケトン誘導体は全くｃＰＬＡ
2を阻害しなかった。特に、より実際的な細胞系におけ
る試験において、イコサペンタエン酸残基を有するもの
が高い活性を示した。
ン酸残基を有するトリフルオロメチルケトン誘導体、イ
コサペンタエン酸残基を有するトリフルオロメチルケト
ン誘導体はアラキドン酸残基を有するトリフルオロメチ
ルケトン誘導体と同等あるいはより優れたｃＰＬＡ2阻
害活性を示したが、比較対照としたパルミチン酸残基を
有するトリフルオロメチルケトン誘導体は全くｃＰＬＡ
2を阻害しなかった。特に、より実際的な細胞系におけ
る試験において、イコサペンタエン酸残基を有するもの
が高い活性を示した。
【００２９】
【発明の効果】本発明の化合物は、細胞質ホスホリパー
ゼＡ2に対して優れた阻害活性を示し、従って本発明の
阻害剤は炎症性疾患の治療薬、例えば抗炎症薬あるいは
抗アレルギー薬としての用途を有する。
ゼＡ2に対して優れた阻害活性を示し、従って本発明の
阻害剤は炎症性疾患の治療薬、例えば抗炎症薬あるいは
抗アレルギー薬としての用途を有する。
Claims (3)
- 【請求項１】 一般式 ＲＣＯＣＦ3 （式中、ＲＣＯはｎ−３系高度不飽和脂肪酸のアシル残
基を表す。）で表されるトリフルオロメチルケトン誘導
体。 - 【請求項２】 一般式 ＲＣＯＣＦ3 （式中、ＲＣＯはｎ−３系高度不飽和脂肪酸のアシル残
基を表す。）で表されるトリフルオロメチルケトン誘導
体を有効成分として含有する医薬。 - 【請求項３】 一般式 ＲＣＯＣＦ3 （式中、ＲＣＯはｎ−３系高度不飽和脂肪酸のアシル残
基を表す。）で表されるトリフルオロメチルケトン誘導
体を有効成分として含有する細胞質ホスホリパーゼＡ2
阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7997096A JPH09268153A (ja) | 1996-04-02 | 1996-04-02 | トリフルオロメチルケトン誘導体及びホスホリパーゼａ２阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7997096A JPH09268153A (ja) | 1996-04-02 | 1996-04-02 | トリフルオロメチルケトン誘導体及びホスホリパーゼａ２阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09268153A true JPH09268153A (ja) | 1997-10-14 |
Family
ID=13705187
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7997096A Pending JPH09268153A (ja) | 1996-04-02 | 1996-04-02 | トリフルオロメチルケトン誘導体及びホスホリパーゼａ２阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09268153A (ja) |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6255496B1 (en) | 1997-09-23 | 2001-07-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Trifluoromethyl ketone analogs as selective cPLA2 inhibitors |
| US6350892B1 (en) * | 1997-09-23 | 2002-02-26 | Bristol-Myers Squibb Company | Trifluoromethyl ketone analogs as selective cPLA2 inhibitors |
| WO2002060535A1 (en) * | 2001-01-31 | 2002-08-08 | Leff Alan R | Method of treating inflammatory conditions by inhibiting cytosolic phospholipase a¿2? |
| US6492550B2 (en) | 2000-02-18 | 2002-12-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Alpha-substituted thio, -oxo trifluoromethylketones as phospholipase inhibitors |
| WO2003063878A1 (en) * | 2002-01-29 | 2003-08-07 | Leiv Eiriksson Nyskaping As | Use of polyunsaturated ketones for the treatment of psoriasis |
| US6924301B1 (en) | 1999-10-22 | 2005-08-02 | Shionogi & Co., Ltd. | Composition for treating or preventing arrhythmia |
| US6924391B2 (en) | 2000-05-11 | 2005-08-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Alpha-amino,-thio,-oxo substituted ketones as phospholipase inhibitors |
| AU2008200812B2 (en) * | 2002-01-29 | 2010-01-21 | Avexxin As | Nasal and oral compositions of polyunsaturated ketones for the treatment of psoriasis |
| US8796251B2 (en) | 2009-06-04 | 2014-08-05 | Avexxin As | Compositions and methods for the treatment of glomerulonephritis |
| US9682930B2 (en) | 2010-09-02 | 2017-06-20 | Avexxin As | Rheumatoid arthritis treatment |
| US10085953B2 (en) | 2014-05-27 | 2018-10-02 | Avexxin As | Skin cancer treatment |
| US10953004B2 (en) | 2016-03-14 | 2021-03-23 | Avexxin As | Combination therapy for proliferative diseases |
| US11351127B2 (en) | 2016-09-21 | 2022-06-07 | Avexxin As | Pharmaceutical composition |
-
1996
- 1996-04-02 JP JP7997096A patent/JPH09268153A/ja active Pending
Cited By (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JP2005518419A (ja) * | 2002-01-29 | 2005-06-23 | レイーブ エリクソン ニスカピング エーエス | ポリ不飽和ケトンを乾癬の治療に使用する方法 |
| WO2003063878A1 (en) * | 2002-01-29 | 2003-08-07 | Leiv Eiriksson Nyskaping As | Use of polyunsaturated ketones for the treatment of psoriasis |
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| US8524776B2 (en) | 2002-01-29 | 2013-09-03 | Avexxin As | Use of polyunsaturated ketones for the treatment of psoriasis |
| US8865768B2 (en) | 2002-01-29 | 2014-10-21 | Avexxin As | Use of polyunsaturated ketones for the treatment of psoriasis |
| US9375409B2 (en) | 2002-01-29 | 2016-06-28 | Avexxin As | Use of polyunsaturated ketones for the treatment of psoriasis |
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| US9187396B2 (en) | 2009-06-04 | 2015-11-17 | Avexxin As | Compositions and methods for the treatment of glomerulonephritis |
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| US11351127B2 (en) | 2016-09-21 | 2022-06-07 | Avexxin As | Pharmaceutical composition |
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