JPH09224689A - カテキンの生産方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 ヤナギタデ（Ｐolygonum hydropiper
Ｌ.）の子葉、胚軸、花芽のカルス由来の懸濁培養細胞
を確立し、該細胞からカテキンを生産する。 【効果】 薬理作用を有するカテキンを大量に工業生産
することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、カテキンの生産方
法に関し、更に詳細には、ヤナギタデのカルス由来の培
養細胞を用いてカテキンを生産する方法に関するもので
ある。

【０００２】

【従来の技術】ヤナギタデ（Polygonum hydropiper
L.）は、ホンタデ、マタデとも呼ばれるタデ科の植物で
あって、独特の辛味成分を含み、古くから食用に供され
ているだけでなく、神曲の材料になり、胃癌や消化剤な
ど薬用にも利用されている（「沖縄の薬草百科」昭和60
年11月20日、新星図書出版、第362〜363頁）。

【０００３】また、ヤナギタデの植物体には、セスキテ
ルペノイドのポリゴジアール（polygodial）が含まれて
いることは明らかにされているが（Fukuyama et al., P
hytochemistry, 21: 2895-2898 (1982)）、カテキン（c
atechin）については、従来より何も報告はなされてい
ない。ましてや、ヤナギタデのカルス由来の培養細胞か
らカテキンを生産することなど、従来技術は示唆すらす
るものではない。このような従来技術の現状にあって、
本発明は、ヤナギタデのカルス由来の培養細胞からカテ
キンを生産することにはじめて成功しただけでなく、カ
テキンの大量生産にはじめて成功したものであるが、こ
のような本発明は従来全く知られておらず新規なもので
ある。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】カテキン（Catechin）
は、抗癌作用や抗ウイルス作用など薬理効果の高い縮合
性タンニンの前駆物質として重要な物質であるばかりで
なく、カテキン自体も抗ウイルス作用などの薬理作用を
有しており（日本医事新報、Ｎo.3737、（平成７年１２
月９日）第１２６〜１２７頁）、大量生産法の確立が業
界において強く求められている。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ヤナギタ
デの植物成体から人工的に増殖性細胞塊（カルス）を誘
導し、これより安定に且つ迅速に増殖する懸濁培養細胞
系を樹立する研究、次いで、得られた懸濁培養細胞が生
産する二次代謝産物の研究を行った。これらの研究の過
程において、ヤナギタデのカルス由来の懸濁培養細胞系
の樹立に成功し、そして懸濁培養細胞から生産される二
次代謝産物としてカテキンが存在することをはじめてつ
きとめ、その抽出、精製にも成功し、カテキンの新規生
産方法を確立するのにはじめて成功し、本発明の完成に
至ったものである。

【０００６】更に詳細には、本発明は、下記する一連の
研究過程においてなされたものである。すなわち、ヤナ
ギタデの子葉、胚軸、花芽由来のカルスから懸濁培養細
胞系を確立し、この中の子葉、胚軸由来の懸濁培養細胞
を用いてポリゴジアールを生産させる培養条件について
検討するとともに、培養細胞が生産する二次代謝産物を
薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー
及びガスクロマトグラフィー／マススペクトロメトリー
を用いて分析した。さらに主要な二次代謝産物について
は、¹Ｈ-ＮＭＲ、¹³Ｃ-ＮＭＲ、ＤＥＰＴ、ＩＲ、Ｕ
Ｖ、ＭＳ及び融点、比旋光度等を測定して構造を決定し
た。その結果、主要産物としてカテキンが検出されたの
で、この物質の培養細胞及び培地中での生産の経時的変
化も検討し、一般には、脱分化した培養細胞では二次代
謝産物の生産が低下するかあるいは全く生産されないこ
とが多いにもかかわらず、本発明においてはカテキンが
生産されることを確認し、遂にカテキンの効率的生産方
法を確立するのに成功し、本発明を完成するに至った。

【０００７】すなわち本発明に係るカテキンの生産方法
は、ヤナギタデの各種カルス（例えば、子葉、胚軸、又
は花芽由来のカルス）由来の培養細胞の培養物（細胞及
び／又は培養液）からカテキンを抽出することを重要な
ポイントとするものである。以下、本発明について詳述
する。

【０００８】本発明を実施するにはヤナギタデのカルス
由来の培養細胞を利用することが必要である。培養細胞
としては、固体培地でカルスを培養して得た培養細胞、
液体培地を用いて得た懸濁培養細胞のいずれもが使用可
能であるが、懸濁培養細胞を例にとって、以下、本発明
を説明する。

【０００９】

【発明の実施の形態】懸濁培養細胞系は、ヤナギタデか
ら誘導し、継代、維持してきた子葉、胚軸、花芽のそれ
ぞれのカルスから確立した。それぞれのカルスの継代培
地としては、下記表１に示す固体培地を用い、カルスの
継代は１カ月毎に行った。

【００１０】

【表１】

【００１１】懸濁培養細胞系の培地は、Ｍurashige and
Skoog (Physiol. Plant., 15:473-497,1962) の培地
（以下、ＭＳと略す）を基本培地とし、これに成長調節
物質として２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−
Ｄ）とカイネチンを種々の濃度で添加したものを用い
た。各培地には炭素源として３％蔗糖を加え、培養細胞
の成長を促進するために０．１％カザミノ酸を加えた。
培地の組成については下記表２に示す。各培地は１Ｎ-
ＫＯＨ、１Ｎ-ＨＣｌを用いてｐＨ５.８に調整した後、
オートクレーブ滅菌（１２０℃、１.２kg／cm²、２０
分）を行った。

【００１２】

【表２】

【００１３】懸濁培養細胞系の確立は以下の方法で行っ
た。子葉、胚軸、花芽由来のカルス２ｇを上記の組成の
培地４０mlの入った１００ml三角フラスコに移して３週
間、連続光照射（約１０００ルックス）、２５℃の条件
下で振とう培養（１２０rpm）を行った。三角フラスコ
に浮遊細胞が多く見られるようになったところで、同様
の組成の培地１００mlの入った３００ml三角フラスコに
全て移し、３週間培養して浮遊細胞をさらに増殖させ
た。確立された細胞系は、２週間毎に吸引濾化して培地
を除き、細胞１ｇを新鮮な培地に移すことによって継代
し、成長の速い懸濁培養細胞を得た。

【００１４】このようにして得られた子葉、胚軸の懸濁
培養細胞系は、灰白色で、細胞塊は少なく、細かい細線
から構成されていた。花芽の懸濁培養細胞系は、わずか
に緑色がかかった灰色の細かい細胞から構成されてい
た。細胞の増殖が定常期に達したころにはフラスコの壁
面に赤い細胞が付着しているのがどの培養細胞において
も観察された。

【００１５】生長量は、子葉由来の懸濁培養細胞を用い
て測定した。継代６日後の懸濁培養細胞の生重量１.０
ｇを４０mlの液体培地が入った１００ml三角フラスコに
懸濁し、連続光照射（１０００ルックス）、２５℃の条
件下で振とう培養（１２０rpm）した。細胞は２分間吸
引濾化して培地を除き、生重量を測定した。１回の測定
には３本のフラスコを用い、その平均値を求め、測定は
２日毎に行った。

【００１６】子葉由来の懸濁培養細胞の成長量を図１に
示す。細胞は植え付け後から対数的に増加し、定常期に
至った。その詳細は１０日目まで急激に増加し、１０日
目から増殖は緩やかになり、１４日目に１０.７５g.f.
w.の最大量を示した後、２２日目までほとんど一定の値
を示した。

【００１７】継代６日後の子葉の懸濁培養細胞を、押し
つぶし法で作成したプレパラートを用い、光学顕微鏡で
観察したところ、分裂が盛んに行われると思われる小さ
な細胞が多く見られた。細胞は単細胞では存在せず、分
裂の結果絡み合って集塊となっているもの、分裂して細
長くのびているもの、らせん状のものなどが観察され
た。継代１５日後には細胞の伸長が進み、長い細胞が多
く観察された。

【００１８】植物体（実生）及び子葉由来の懸濁培養細
胞の染色体に関しては、植物体では観察した全ての個体
において、染色体数２ｎ＝２０が確認された。培養細胞
では倍数性の細胞が多く観察された。子葉由来の懸濁培
養細胞において観察された染色体数の倍数性の頻度を測
定した。培養細胞では、２０細胞について染色体数を測
定した結果、染色体数２ｎ＝約２０の二倍性の細胞が
３、染色体数４ｎ＝約４０の四倍性の細胞が１０、染色
体数６ｎ＝約６０の六倍性の細胞が４、染色体数８ｎ＝
約８０の八倍性の細胞が２、染色体数１６ｎ＝約１６０
の十六倍性の細胞が１、それぞれ観察された。最も多く
観察された細胞は四倍性の細胞で、その頻度は５０％で
あった。観察された細胞のうち、７５％の細胞で染色体
数に変異が生じていた。

【００１９】このようにして、子葉由来の懸濁培養細胞
系は、Ｍ−ＢＣ（ＭＳ＋３％ Ｓucrose＋０.１％ Ｃasa
mino asids＋１０-⁶Ｍ ２,４−Ｄ＋１０-⁶Ｍ Ｋineti
n）の培地で確立された。胚軸由来の懸濁培養細胞系
は、Ｍ−ＥＣ（ＭＳ＋３％ Ｓucrose＋０.１％ Ｃasami
no asids＋１０-⁵Ｍ ２,４−Ｄ）の培地で確立された。
花芽由来の懸濁培養細胞系は、Ｍ−ＦＣ（ＭＳ＋３％
Ｓucrose＋０.１％ Ｃasamino asids＋１０-⁶Ｍ ２,４
−Ｄ＋１０-⁶Ｍ Ｋinetin）の培地で確立された。

【００２０】このようにした得た懸濁培養細胞系は、静
置及び／又は攪拌培養することにより、大量培養する。
培地としては、各種培地を使用することができ、炭素源
としては、グルコース、フラクトース等の単糖類、マル
トース、シュークロース等の二糖類のほか、オリゴ糖や
澱粉等の多糖類も使用することができる。窒素源として
は、硝安、硝酸カリウムといった硝酸態窒素、硫安、酒
石酸アンモニウム等のアンモニア態窒素のほか、カザミ
ノ酸、アミノ酸、ペプトン、コーンスティープリカー、
酵母菌体、イーストエキストラクト、麦芽エキストラク
ト等が使用できる。そのほか、ニコチン酸、ニコチン酸
アミド、サイアミン、葉酸、ビオチン等のビタミン類；
イノシトール、アデニル酸、グアニル酸、シチジル酸、
チミジル酸、サイクリックＡＭＰ等の核酸関連物質；
鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、ヨウ素、カリウム、コバ
ルト、マグネシウム、モリブデン、リン、銅等のミネラ
ルも使用する。

【００２１】基本培地としては、例えば、ムラシゲ−ス
クーグ(Murashige-Skoog)培地（ＭＳ）、ホワイト（Ｗh
ite）培地等が使用可能である。

【００２２】基本培地にはオーキシン、サイトカイニン
を添加するのが好ましく、オーキシンとしては、インド
ール酢酸、インドール酪酸、ナフタレン酢酸、２，４−
ジクロロフェノキシ酢酸などが適宜利用される。また、
サイトカイニンとしては、ベンジルアデニン、カイネチ
ンなどが使用できる。これらの植物ホルモンやサイトカ
イニンは単独でも使用できるが、組合せて用いることが
効果的である。

【００２３】必要あれば、更に、ココナツミルク、カゼ
イン加水分解物、ジャガイモ抽出液、コーンスティープ
リカー、イーストエキストラクト、麦芽抽出液などの天
然有機栄養源を添加することが有効である。培養温度は
２０〜３０℃で培養操作できる。培養液のｐＨは弱酸性
（ｐＨ５.５〜６.０）が増殖に有利である。培養は、液
体培地を用いて振とう培養（８０〜２００rpm）するの
が好適である。

【００２４】このようにして得た懸濁培養細胞を用いて
カテキンを抽出、単離する。そのためには、セルラーゼ
やリゾチームを用いる生物学的処理、化学的処理、機械
的ないし超音波などの処理、又はこれらを組合わせたり
して細胞を破壊し、エーテル、メタノール、エタノー
ル、アセトン、クロロホルムその他の有機溶媒、水など
の単独ないしは、これらの有機溶媒と水との混合液で抽
出して回収できる。

【００２５】以下、本発明の実施例について述べる。

【００２６】

【実施例１】胚軸由来の懸濁培養細胞を用いて、カテキ
ンの単離及び構造決定を、次のようにして行った。

【００２７】（１）胚軸由来の懸濁培養細胞は、濾過吸
引して培地を除き、−２０℃で冷凍保存した。この細胞
約１８００ｇを乳鉢ですりつぶし、ジエチルエーテル
（Ｅt₂Ｏ）で２日間抽出した。なお、抽出効率をあげる
ために２０分間超音波にかけた。抽出液はブフナー漏斗
で吸引濾過した。得られた液にはＥt₂Ｏを加え、分液漏
斗でＥt₂Ｏ層とＨ₂Ｏ層に分離した。Ｈ₂Ｏ層には再びＥ
t₂Ｏを加え、Ｅt₂Ｏ層とＨ ₂Ｏ層の二層間に生じたエマ
ルジョン（emulsion）とに分離した。Ｅt₂Ｏ層は一つに
まとめ、水温３０℃の条件下で減圧濃縮し、ペレット
１（７０９mg）を得た。

【００２８】エマルジョンは、室温に放置して結晶化さ
せた。Ｈ₂Ｏ層には酢酸エチル（ＡｃＯＥt）を加え、分
液漏斗でＡｃＯＥt層とＨ₂Ｏ層に分離した。なお、分離
をよくするためにＮaＣlを加え塩析を行った。ＡcＯＥt
層は水温３５℃で減圧濃縮し、ペレット ２（３５３７m
g）を得た。Ｈ₂Ｏ層にはＡcＯＥt＋メタノール（ＭeＯ
Ｈ）の混液を加え、ＡcＯＥt＋ＭｅＯＨ層とＨ₂Ｏ層に
分液漏斗で分離した。ＡcＯＥt＋ＭｅＯＨ層は水温３０
℃で減圧濃縮し、ペレット ３（１３８５mg）を得た。
Ｈ₂Ｏ層にはブタノール（ＢｕＯＨ）を加え、ＢｕＯＨ
層とＨ₂Ｏ層に分液漏斗で分離した。ＢuＯＨ層は水温５
０℃で減圧濃縮し、ペレット ４（９.９７ｇ）を得た。
また上記で分離した細胞はＭeＯＨを加えて２日間抽出
し、水温３５℃で減圧濃縮後、ＡcＯＥtを加えて分液漏
斗でＡcＯＥt層とＨ₂Ｏ層に分離した。ＡcＯＥt層は水
温３５℃で減圧濃縮し、ペレット ５（１５ｇ）を得
た。以上の分画操作については図２に示す。

【００２９】成分の単離には、ペレット ２、３、５
（５についてはＭｅＯＨに溶解した１３ｇ）を用いた。
これらをＭｅＯＨに溶解して一つにまとめ、水温３５℃
で減圧濃縮した。それを３５ｇのセライトにまぶし、さ
らに乳鉢で細かくすりつぶして試料を作成した。試料
は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で分離するた
め、シリカゲルカラム（Ｓilica gel：Ｍerck 70-230 m
esh、３１５ｇ）上に平らになるようにしてのせた。展
開は、展開溶媒としてＣＨＣl₃：ＭeＯＨ：Ｈ₂Ｏ＝８
０：２０：１を５Ｌ、７：３：１を３Ｌ、６：４：１を
１Ｌ用いて行った。展開液は３０mlずつ分取し、ＴＬＣ
によってスポットを確認した。展開して得られた同一の
単一スポットを含むフラクションは一つにまとめ水温３
０℃で減圧濃縮した。

【００３０】（２）得られた単一の物質について、¹Ｈ-
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ or ｃｄ３ｏｄ、２００ＭＨｚ）、
¹³Ｃ-ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、５０.３１ＭＨｚ）、ＤＥＰ
Ｔ（ＣＤＣｌ、５０.３１ＭＨｚ）、ＵＶスペクトル
（Ｕltraviolet spectrum, ＵＶ）、赤外吸収スペクト
ル（Ｉnfraredspectrum, ＩＲ）、Ｍａｓｓスペクトル
（Ｍass spectrum, ＭＳ）を測定した。

【００３１】さらに、アセチル化して¹Ｈ-ＮＭＲ（ＣＤ
Ｃl₃、２００ＭＨｚ）、¹³Ｃ-ＮＭＲ（ＣＤＣl₃、５０.
３１ＭＨｚ）、ＤＥＰＴ（ＣＤＣl₃、５０.３１ＭＨ
ｚ）、ＵＶ、ＩＲ、ＭＳの各スペクトルを測定した。ア
セチル化は、塩基性下で２mlのピリジンと２mlの酢酸を
混ぜ合わせ、その中に単離した成分（４８.５mg）を入
れ、２０時間攪拌して行った。ＴＬＣによりアセチル化
されていることを確認した後、反応液に５０mlの氷水と
５０mlのＡcＯＥtを加え、Ｈ₂Ｏ層、ＡcＯＥt層に分液
する操作を４〜５回繰り返すことにより、Ｈ₂Ｏ層に溶
解するピリジン、酢酸を除いた。ＡcＯＥt層は濾過後、
水温３０℃で減圧濃縮し、得られた残渣５６.１mgをア
セチル化された成分として測定に用いた。

【００３２】（３）ペレット（ｐｅllｅt）４について
は、展開溶媒としてＣＨＣl₃：ＭｅＯＨ＝１：１を用い
てＳephadex ＬＨ-２０カラムにかけた。フラクション
は、ＴＬＣによってスポットを確認した。展開して得ら
れた同一の単一スポットを含むフラクションは一つにま
とめ、水温３０℃で減圧濃縮した。得られた単一の物質
（２３８５mg）は、上記と同様の分析を行い物質の構造
を決定した。さらに構造の決定された物質の融点、比旋
光度についても測定した。

【００３３】ペレット２、３、５より単離された単一の
物質の¹Ｈ-ＮＭＲ、¹³Ｃ-ＮＭＲのスペクトルを図３及
び図４に示す。単離された物質の¹Ｈ-ＮＭＲの測定結果
では、高磁場に１Ｈ分として観測されるシグナルが２つ
観測され、４.５ppm付近には酸素官能基が結合した炭素
上のシグナルが１Ｈ分観測された。低磁場には芳香族に
由来するシグナルが観測された（図３）。¹³Ｃ-ＮＭＲ
の測定結果では、シグナルが１５観測され、単離された
物質は炭素数が１５であることがわかった（図４）。Ｄ
ＥＰＴの測定結果から、２級炭素１、３級炭素７、４級
炭素７の存在が観測された。ＵＶの測定において極大吸
収波長が、２８０nmに観察された。ＩＲの測定において
３２９９cm-¹に水酸基の吸収が観測された。ＭＳの測定
の結果、物質の分子量は２９０であった。以上の結果か
ら単離された物質は芳香族化合物であることがわかっ
た。

【００３４】アセチル化した物質の¹Ｈ-ＮＭＲ、¹³Ｃ-
ＮＭＲ、ＤＥＰＴの測定結果では、アセチル基由来のメ
チル炭素のシグナルが５観測され、ＩＲの測定結果のア
セチル化していない物質では観測された水酸基の吸収が
消失し、１７６８cm-¹アセチル基に由来するカルボニル
の吸収が観測された。以上の結果から、単離された物質
には水酸基が５つ存在することがわかった。また、ＭＳ
の測定では分子量が５００であることがわかった。

【００３５】これらの結果から、単離された物質の分子
式はＣ₁₅Ｈ₁₄Ｏ₆の芳香族化合物であることが明らかと
なった。さらにカテキン標品の¹Ｈ-ＮＭＲと単離された
物質との¹Ｈ-ＮＭＲを比較したところ一致したことか
ら、単離された物質はカテキンであると同定された。

【００３６】用いた胚軸由来の懸濁培養細胞、生重量約
１８００ｇから約４５８５mgのカテキンの結晶が単離さ
れた（収率０．２６％）。この結晶の融点は、１５７−
１５９℃で、比旋光度は［α]D＝−３.８°であり、
（＋）−と（−）−のラセミ体であることが示唆され
た。

【００３７】

【実施例２】子葉由来の懸濁培養細胞を用いて、懸濁培
養細胞の成長に伴うカテキン生産量の測定を行った。

【００３８】継代６日後の懸濁培養細胞の生重量１.０
ｇを、４０mlの液体培地が入った１００ml三角フラスコ
に懸濁し、連続光照射（１０００ルックス）、２５℃の
条件下で振とう培養（１２０rpm）した。細胞は、ミラ
クロースをしいたブフナー漏斗で２分間吸引して細胞と
培地に分けた後、細胞の生重量を測定した。測定した細
胞は乳鉢に移して乳棒ですりつぶし、Ｅt₂Ｏで抽出し
た。

【００３９】抽出液はエバポレーターで減圧濃縮し、
１.５−２.０mlのエタノールに溶解して試料とした。さ
らにＡcＯＥtで抽出し、減圧濃縮後１.５−２.０mlのエ
タノールに溶解して試料とした。培地はＥt₂Ｏで抽出
し、水温３０℃で減圧濃縮後１.５mlのエタノールに溶
解して試料とした。さらにＡcＯＥtで１日間抽出後、減
圧濃縮して１.５mlのエタノールに溶解して試料とし
た。培地の抽出では、抽出効率をあげるため超音波で５
分間処理した。生重量、生産量は１回の測定につき３本
のフラスコを測定し、それらの平均値を求めた。

【００４０】得られた試料の定量分析はＨＰＬＣで行
い、試料は分析を行う直前に０.４５μｍのフィルター
で濾過した。なおＨＰＬＣでの分析は、移動相：アセト
ニトリル：酢酸：Ｈ₂Ｏ＝１０：５：８５、カラム温
度：４０℃、検出波長：２８０nm、流速：０.５ml／min
の条件で行った。

【００４１】カテキン標品（Ａ）及び子葉由来の懸濁培
養細胞の抽出物（Ｂ）のＨＰＬＣの結果を図５に示す。
カテキンは単一のピークとしてＲt.７.９付近に検出さ
れた。図中、矢印は、それぞれカテキンを示す。

【００４２】

【実施例３：懸濁培養細胞の成長に伴うカテキンの生産
量】子葉由来の懸濁培養細胞をＭ−ＢＣ培地で培養し、
その成長量と細胞のフラスコ当りのカテキン生産量を測
定した。得られた結果を図６に示す。図６の結果から明
らかなように、懸濁培養細胞は、培養開始直後から盛ん
に成長し、１５日目で１６.０７g.f.w./flaskに達し、
その後細胞が枯死し始め生重量が減少した。カテキンの
生産量は、１２日目まで細胞の増殖に伴って生産量も増
加したが、細胞の成長が定常期に達する前の１２日目に
最大量の６.２６mg／flaskの達し、その後急速に生産量
は減少した。

【００４３】子葉由来の懸濁培養細胞の生重量当たりの
カテキン生産量を図７に示す。カテキンの生産量は１日
目から５日目まで増加し、５日目に最大量の８１５.２
７μｇ／g.f.w.に達した。その後１６日目まで急激に減
少し、その後２５日目までは緩やかに減少した。

【００４４】培地中に存在するフラスコ当たりのカテキ
ン量を図８に示す。培地中のカテキン量は５日目までわ
ずかに増加し、５日目から８日目の間に急激に増加し
た。その後８日目から１２日目の間に急激に減少し、１
２日目には全く検出されなかった。１２日目から１５日
目に再びわずかに増加し、１５日目から２５日目まで急
激に増加した。２５日目には最大量の３２０.８５μｇ
／flaskとなった。

【００４５】

【発明の効果】ヤナギタデのカルス由来の培養細胞を確
立するのにはじめて成功しただけでなく、培養細胞から
カテキンを製造するのにもはじめて成功した。しかも、
培養細胞の生重量約１８００ｇから４５８５mgという大
量のカテキンが生産され（収率０.２６％）、そのう
え、ヤナギタデの植物体を直接使用するのとは異なり、
本発明によれば広い圃場、手間のかかる栽培が必要でな
く、天候にも左右されることなく、二次代謝産物である
カテキンの生産を人為的なコントロール下におくことが
でき、安定生産、生産収率の向上、生産に関する場所及
び時間の短縮を達成することが可能となった。

【図面の簡単な説明】

【図１】子葉由来の懸濁培養細胞の成長量を示す。

【図２】細胞生産物の分画操作を示す。

【図３】単離された物質の¹Ｈ-ＮＭＲスペクトル（２０
０ＭＨｚ、ＣＤＣl₃、ＴＭＳ int. standard）を示す。

【図４】単離された物質の¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（５
０ＭＨｚ、ＣＤＣl₃、ＴＭＳ int. standard）を示す。

【図５】カテキン標本及び子葉由来の懸濁培養細胞の抽
出物のＨＰＬＣパターンを示し、矢印はカテキンを示
す。

【図６】子葉由来の懸濁培養細胞の成長量と細胞のフラ
スコ当りのカテキン生産量を示す。

【図７】懸濁培養細胞の生重量当りのカテキン生産量を
示す。

【図８】培地中に存在するフラスコ当りのカテキン量を
示す。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ヤナギタデ（Polygonum hydropiper
   L.）のカルス由来の培養細胞を用いること、を特徴とす
   るカテキンの生産方法。
2. 【請求項２】 カルスがヤナギタデの子葉、胚軸、及び
   ／又は花芽由来のカルスであること、を特徴とする請求
   項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 カルス由来の培養細胞がカルス由来の懸
   濁培養細胞であること、を特徴とする請求項１又は請求
   項２に記載の方法。
4. 【請求項４】 ヤナギタデのカルス由来の培養細胞を破
   砕した後、有機溶媒抽出処理すること、を特徴とする請
   求項１〜請求項３のいずれか１項に記載のカテキンの生
   産方法。