JPH09221448A

JPH09221448A - 新規化合物ｋ４６１０４２２

Info

Publication number: JPH09221448A
Application number: JP2573296A
Authority: JP
Inventors: Michihiro Sugano; 道裕菅野; Emiko Hatano; 恵美子波田野; Takakazu Hamada; 孝和浜田; Hisao Okazaki; 尚夫岡崎; Yasuyuki Takamatsu; 安行高松
Original assignee: Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Co Ltd
Priority date: 1996-02-14
Filing date: 1996-02-14
Publication date: 1997-08-26

Abstract

(57)【要約】【課題】５α−還元酵素阻害作用を有する新規化合物を
含有する医薬、５α−還元酵素阻害剤、前立腺肥大症の
予防薬および／または治療薬を提供する。【解決手段】下記式（Ｉ）【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は優れたテストステロ
ン−５α−還元酵素（以下「５α−還元酵素」とい
う。）阻害作用を有する新規化合物ｋ４６１０４２２、
新規化合物ｋ４６１０４２２を有効成分として含有する
医薬、５α−還元酵素阻害剤、および前立腺肥大症の予
防剤および／または治療剤、ならびにそれらの製造方法
に関する。

【０００２】

【従来の技術】前立腺肥大症は、男性の加齢に伴う疾患
であり、近年の平均寿命の延長によりその疾患者数は著
しく増加している。本疾患の基本的病態は肥大血節の増
大による尿道抵抗の増加で、症状は排尿障害、残尿感で
ある。ところで、前立腺肥大症組織では正常前立腺組織
と比較して、５α−ジヒドロテストステロン（５α−Ｄ
ＨＴ）含量が有意に高いことが知られている。この５α
−ＤＨＴはおもに男性の生殖器である前立腺で、テスト
ステロンから５α−還元酵素によって合成される。そこ
で５α−還元酵素を阻害し、５α−ＤＨＴを低下させる
ことで前立腺肥大症を治療しようとする薬剤の開発が行
われている。現在までに開発されている薬剤としては、
４−アザステロイド骨格を有するフィナステロイド(G.
H. Rasmusson, J. R. Berman et al., J. Med. Chem.,
29巻, 2298-2315 頁 (1986年))がある。またステロイド
骨格をもたない合成化合物としてはベンズアニリド骨格
を有するＯＮＯ−３８０５(EP 0 291 245 A2)が知られ
ている。また天然物由来の物としては、フェナジン骨格
を有するＷＳ−９６５９ＡおよびＢ (O. Nakayama, M.
Kohsaka et al., J. Antibiot., 42巻, 1221−1240頁
(1989年))、リボフラビン(O. Nakayama, M. Kohsaka et
al., J. Antibiot., 43 巻, 1615-1616 頁 (1990年))
が知られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明者等は微生物二
次代謝産物中より５α−還元酵素阻害作用を有する物質
を検索した結果、ストレプトスポランジウム属（Strept
osporangium ）属に属するストレプトスポランジウム
エスピー（Streptosporangium sp. ）ＳＡＮＫ６２１９
５株の培養液中に、５α−還元酵素阻害作用を有する新
規化合物ｋ４６１０４２２が生産されることを見出して
本発明を完成した。

【０００４】更に、本発明の他の目的は、ｋ４６１０４
２２を有効成分として含有する医薬、５α−還元酵素阻
害剤、前立腺肥大症の予防薬および／または治療薬を提
供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、（１）下記
式（Ｉ）

【０００６】

【化２】

【０００７】を有するｋ４６１０４２２、（２）スト
レプトスポランジウム属に属するｋ４６１０４２２生産
菌を培養し、その培養物からｋ４６１０４２２を採取す
ることを特徴とするｋ４６１０４２２の製法、（３）
ストレプトスポランジウム属に属するｋ４６１０４２２
生産菌がストレプトスポランジウムエスピーＳＡＮＫ
６２１９５株である（２）に記載の製法、および（４）
ｋ４６１０４２２を有効成分として含有する「医
薬」、「５α−還元酵素阻害剤」および「前立腺肥大症
の予防薬および／または治療薬」に関する。

【０００８】本発明のｋ４６１０４２２は下記の性状を
有する。

【０００９】１）物質の性状：淡黄色粉末２）分子式：Ｃ₁₉Ｈ₂₆Ｏ₂ （高分解能マススペクトル
法により測定）３）分子量：２８６（質量分析法により測定）４）赤外線吸収スペクトル：ν_max ｃｍ^-1 クロロホルム中で測定した赤外線吸収スペクトルは、次
に示す通りである。3611, 2952, 2930, 1663, 1451, 13
82, 1282 ５） ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ｐｐｍ）重メタノール中、内部基準にテトラメチルシランを使用
して測定した ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（３６０ＭＨ
ｚ）は、以下の通りである：6.17(1H, brs), 5.77(1H,
dd, J=17.5Hz), 5.35(1H, brs),4.93(1H, dd, J=10.6,
1.4Hz), 4.90(1H, dd,J=17.5, 1.4Hz),4.25(1H, d, J=1
7.4Hz), 4.19(1H, d, J=17.7Hz), 2.70(1H, brd, J=12.
8Hz),2.51(1H, d, J=16.1Hz), 2.35(2H, m), 2.33(1H,
d, J=16.1Hz), 2.15(1H, m),1.89(1H, m), 1.69(1H,
m), 1.59(1H, m), 1.42-1.46(2H, m), 1.48(1H, m),1.0
6(3H, s), 0.82(3H,s) 。６）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ppm ）重メタノール中、内部基準にテトラメチルシランを使用
して測定した¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（３６０ＭＨ
ｚ）は、以下の通りである：202.1(s), 168.5(s), 149.
6(d), 136.2(s), 131.5(d), 123.0(d), 111.1(t),63.3
(t), 51.9(t), 49.3(d), 48.3(d), 43.1(s), 38.6(s),
36.0(t), 35.5(t),26.5(q), 24.0(t), 20.1(t), 14.5
(q)。

【００１０】７）紫外線吸収スペクトル：λmax ｎｍ
（ε）２４５（８０００）８）溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、ジメ
チルスルホキシド、ベンゼン、クロロホルム、ジエチル
エーテル、酢酸エチルに可溶。水に不溶。

【００１１】９）呈色反応：硫酸、ヨードに陽性。

【００１２】１０）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値；０．５吸着剤；シリカゲルプレート(Kieselgel 60 F254, メ
ルク社製）展開溶媒；メチレンクロライド：メタノール＝９：１。

【００１３】本発明のｋ４６１０４２２はその分子中に
不斉炭素原子を含有しているので、種々の光学異性体が
存在する。前記式（Ｉ）は、これらの光学異性体および
これらの光学異性体の混合物がすべて単一の式、すなわ
ち式（Ｉ）で示されている。したがって、本発明はこれ
らの光学異性体およびこれらの光学異性体の混合物をも
すべて含むものである。更に、本発明のｋ４６１０４２
２はその分子内に３つの不飽和６員環を有しているの
で、種々の幾何異性体が存在する。前記式（Ｉ）は、こ
れらの幾何異性体およびこれらの幾何異性体の混合物が
すべて単一の式、すなわち式（Ｉ）で示されている。し
たがって、本発明はこれらの幾何異性体およびこれらの
幾何異性体の混合物をもすべて含むものである。

【００１４】本発明のｋ４６１０４２２が、大気中に放
置されたり、または再結晶をすることにより、水分を吸
収し、吸着水が付着したり、水和物を形成する場合があ
る。本発明はこのような水和物をも含むものである。

【００１５】更に本発明において、生体内において代謝
されてｋ４６１０４２２に変換される化合物、いわゆる
プロドラッグもすべて含むものである。

【００１６】本発明のｋ４６１０４２２の製造において
用いられるストレプトスポランジウム属に属するｋ４６
１０４２２生産菌としては、例えばストレプトスポラン
ジウムエスピーＳＡＮＫ６２１９５株をあげることが
できる。ＳＡＮＫ６２１９５株は土壌から分離された菌
株である。

【００１７】ＳＡＮＫ６２１９５株の形態学的特徴、生
理学的性質および化学分類学的性質は以下に示すとおり
である。

【００１８】１．形態学的特徴ＳＡＮＫ６２１９５株はＩＳＰ「インターナショナル・
ストレプトマイセス・プロジェクト（International St
reptomyces Project）」規定の培地上で２８℃、１４日
間の培養により次のような形態学的特徴を示した。光学
顕微鏡による観察ではＳＡＮＫ６２１９５の基生菌糸は
良好に伸長、分岐し茶味白、黄味茶ないし鈍黄味橙色を
示すがノカルディア（ Nocardia ）属菌株様の断裂やジ
グザグ伸長は観察されない。菌叢は白色ないし薄いピン
ク色を示す。気菌糸の形成は比較的貧弱で単純分岐す
る。気菌糸上に短い胞子柄を形成しその先端に球ないし
亜球状の胞子のうを豊富に形成する。走査型電子顕微鏡
による観察では胞子のうの表面は平滑である。胞子のう
の大きさは８〜１０μｍである。胞子のう胞子は球ない
し亜球状である。胞子のう胞子の遊走性は観察されな
い。また、気菌糸の車軸分岐、菌糸の断裂、菌核などの
特殊器官は認められない。

【００１９】各種寒天培地上で２８℃、１４日間培養し
たときの性状を表１に示す。色調の表示はマンセル方式
による日本色彩研究所版「標準色票」のカラーチップ・
ナンバーを表す。

【００２０】

【表１】表１ ──────────────────────────────────── イースト・麦芽寒天ＳＭ^*1：非常に良好、平坦、黄味茶（10YR 6/10)^*2 （ＩＳＰ２）ＡＭ：あまり良くない、茶味白(5YR 9/1) Ｒ：黄味茶(10YR 7/6) ＳＰ：産生せずＳＧ：僅かに形成 ──────────────────────────────────── オートミール寒天ＳＭ：非常に良好、平坦、薄黄味茶（2.5Y 7/3）（ＩＳＰ３）ＡＭ：あまり良くない、茶味白(7.5Y 9/1) Ｒ：黄味灰(5Y 9/4) ＳＰ：産生せずＳＧ：僅かに形成 ──────────────────────────────────── 澱粉・無機塩寒天ＳＭ：良好、平坦、鈍黄味橙（10YR 8/8）（ＩＳＰ４）ＡＭ：着生せずＲ：薄黄味茶(10YR 8/6) ＳＰ：産生せずＳＧ：形成せず ──────────────────────────────────── グリセリン・ＳＭ：良好、平坦、薄黄味橙（2.5Y 9/2）アスパラギン寒天ＡＭ：僅かに形成、薄茶(5YR 8/3) （ＩＳＰ５）Ｒ：黄味灰(5Y 9/2) ＳＰ：産生せずＳＧ：良好に形成 ──────────────────────────────────── ペプトン・ＳＭ：良好、平坦、黄味茶（10YR 6/8）イーストエキス・ＡＭ：着生せず鉄寒天Ｒ：薄黄味茶(10YR 8/6) （ＩＳＰ６）ＳＰ：産生せずＳＧ：形成せず ──────────────────────────────────── チロシン寒天ＳＭ：良好、平坦、薄黄味茶（2.5Y 8/4）（ＩＳＰ７）ＡＭ：僅かに着生、茶味白(7.5YR 9/1) Ｒ：薄黄味橙(10YR 8/3) ＳＰ：薄黄味茶（2.5YR 8/4 ）ＳＧ：形成せず ──────────────────────────────────── シュクロース・ＳＭ：良好、平坦、黄味茶（2.5Y 7/4）硝酸塩寒天ＡＭ：着生せずＲ：明るいオリーブ灰(5Y 8/4) ＳＰ：産生せずＳＧ：形成せず ──────────────────────────────────── グルコース・ＳＭ：あまり良くない、平坦、茶味白（2.5Y 9/1）アスパラギン寒天ＡＭ：着生せずＲ：茶味白(2.5Y 9/1) ＳＰ：産生せずＳＧ：形成せず ──────────────────────────────────── 栄養寒天ＳＭ：非常に良好、平坦、黄味茶（10YR 7/6）（ＤＩＦＣＯ）ＡＭ：着生せずＲ：薄黄味茶(10YR 8/6) ＳＰ：産生せずＳＧ：形成せず ──────────────────────────────────── ポテトエキス・ＳＭ：良好、平坦、黄味灰（5Y 9/1）人参エキス寒天ＡＭ：僅かに着生、白Ｒ：黄味灰（5Y 9/1）ＳＰ：産生せずＳＧ：形成せず ──────────────────────────────────── 水寒天ＳＭ：僅かに形成、平坦、黄味灰（5Y 9/1）ＡＭ：僅かに着生Ｒ：黄味灰（5Y 9/1）ＳＰ：産生せずＳＧ：僅かに形成 ──────────────────────────────────── ＊１ＳＭ：基生菌糸、ＡＭ：気菌糸、Ｒ：裏面、ＳＰ：可溶性色素、ＳＧ：胞子のう＊２マンセル方式に準拠した標準色票表示。

【００２１】２．生理学的性質２８℃で２ないし２１日間培養したときのＳＡＮＫ６２
１９５株の生理学的性質を表２に示す。

【００２２】

【表２】表２ ───────────────────────── 澱粉の加水分解陽性ゼラチンの液化陽性硝酸塩の還元疑陽性ミルクの凝固陽性ミルクのペプトン化陰性メラニン様色素の産生（培地１、２、３）陰性基質分解性カゼイン陽性チロシン陽性キサンチン陰性生育温度範囲（培地４）１３〜３７℃ 生育至適温度（培地４）２０〜３０℃ 食塩存在下での生育（培地４）３％まで生育 ───────────────────────── 培地１：トリプトン・イーストエキス・ブロス（ＩＳＰ１）培地２：ペプトン・イーストエキス・鉄寒天（ＩＳＰ６）培地３：チロシン寒天（ＩＳＰ７）培地４：イーストエキス・麦芽エキス寒天（ＩＳＰ２）。

【００２３】基礎培地としてプリドハム・ゴトリーブ寒
天培地（ＩＳＰ９）、Ｃ−１およびＣ−２(Bergey's
manual of systematic bacteriology, 4巻，2548頁 (19
89年))を用いて２８℃で培養し、１４日目に観察したＳ
ＡＮＫ６２１９５株の炭素源資化性は表３に示したとお
りである。

【００２４】

【表３】表３ ──────────────────────────── ＩＳＰ９Ｃ−１Ｃ−２ ────────────────────────── Ｄ−グルコース＋＋＋Ｌ−アラビノース＋＋＋Ｄ−キシロース＋＋＋イノシトール ± − − Ｄ−マンニトール ± ＋＋Ｄ−フルクトース＋＋＋Ｌ−ラムノース ± − − シュクロース＋＋＋ラフィノース ± − − 対照 ± − − ──────────────────────────── ＋：資化する、 ±：弱く資化する、 −：資化しない。３．化学分類学的性質ＳＡＮＫ６２１９５株の細胞壁は長谷川らの方法 (長谷
川ら、ザ・ジャーナル・オブ・ゼネラル・アンド・アプ
ライド・マイクロバイオロジー (The Journalof Genera
l and Applied Microbiology), 29巻, 319-322 頁 (198
3年))に従い検討した結果、meso−ジアミノピメリン酸
が検出された。また、ＳＡＮＫ６２１９５株の全細胞中
の主要糖成分をエム・ピー・レシェバリエの方法 (M.
P. Lechevalier, ジャーナル・オブ・ラボラトリー・
アンド・クリニカル・メディシン（Journal of Laborat
ory and Clinical Medicine), 71巻, 934-944 頁 (1968
年))に従い検討した結果少量のマジュロースが検出され
た。細胞壁ペプチドグリカンのアシル基について内田ら
の方法 (K. Uchida ら、ザ・ジャーナル・オブ・ゼネラ
ル・アンド・アプライド・マイクロバイオロジー（The
Journal of General and Applied Microbiology), 25
巻, 169-183 頁 (1979年))に従い検討した結果アセチル
型であった。ヘフトらの方法 (S. T. Hecht ら、ジャー
ナル・オブ・クリニカル・マイクロバイオロジー（Jour
nal of Clinical Microbiology）, 4 巻,284-287 頁 (1
976年))に従いミコール酸について検討した結果、検出
されなかった。放線菌の同定実験法（日本放線菌学会
編、中越印刷、東京、131-139 頁(1988 年))に従ってイ
ソプレノイド・キノンを検討した結果、主成分としてＭ
Ｋ−９（Ｈ２）を検出した。放線菌の同定実験法（日本
放線菌学会編、中越印刷、東京、88-103頁 (1988年))に
従ってリン脂質を検討したところ、主要成分としてフォ
スファチジルイノシトール（ＰＩ）および未知のグルコ
サミン含有リン脂質（ＧｌｕＮＵ）を検出したがフォス
ファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、フォスファチジ
ルコリン（ＰＣ）およびフォスファチジルグリセロール
（ＰＧ）は確認されなかった。

【００２５】以上の菌学的性質からＳＡＮＫ６２１９５
株は放線菌の中でもストレプトスポランジウム（Strept
osporangium ）属に属することが明らかにされた。従っ
て、ＳＡＮＫ６２１９５株をストレプトスポランジウム
エスピーと同定した。なお、本菌株は、Streptospora
ngium sp. ＳＡＮＫ６２１９５として、１９９５年８月
１１日に通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所
に寄託され、寄託番号ＦＥＲＭＢＰ−５２００を付さ
れた。

【００２６】周知の通り、放線菌は自然界において、ま
たは人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照射、
化学薬品処理等）により変異を起こし易い。本発明のＳ
ＡＮＫ６２１９５株もこの点は同じである。本発明にい
うＳＡＮＫ６２１９５株はそれらのすべての変異株を含
有する。

【００２７】また、これらの変異株の中には、遺伝学的
方法、例えば組み替え、形質導入、形質転換等により得
られたものも包含される。すなわち、ｋ４６１０４２２
を生産する、ＳＡＮＫ６２１９５株およびその変異株お
よびそれらと明確に区別されない菌株は、すべてＳＡＮ
Ｋ６２１９５株に包含されるものである。

【００２８】

【発明の実施の形態】

１．培養本発明の菌株を分離するに際して、使用される分離培地
としては炭素源、窒素源、無機イオンおよび有機栄養源
等より選択されたものを適宜含有する培地であれば合成
または天然培地のいずれでも使用可能である。分離操作
は常法に従って行われる。

【００２９】本発明の新規化合物ｋ４６１０４２２を得
るため、これらの微生物の培養は他の発酵生産物を生産
するために用いられるような培地中で行なわれる。この
ような培地は、微生物が資化できる炭素源、窒素源およ
び無機塩を含有する。

【００３０】一般に、炭素源としてグルコース、フラク
トース、マルトース、シュークロース、マンニトール、
グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウ
モロコシデンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆
粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸などを単一に、あ
るいは併用して用いる事が出来る。一般には、培地量の
１−１０重量％の範囲で用いられる。好適には７−９重
量％であり、最適には８重量％である。

【００３１】窒素源としては、一般に蛋白質およびその
加水分解物を含有する物質または無機塩を発酵工程に用
いる。適当な窒素源としては、例えば大豆粉、フスマ、
落花生粉、綿実粉、カゼイン加水分解物、ファーマミ
ン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキ
ス、イースト、イーストエキス、マルトエキス、硝酸ナ
トリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等をあ
げることができる。これらの窒素源は、一般に、単一ま
たは併用して培地量の０．１−６重量％の範囲で用いら
れる。好適には２−４重量％であり、最適には３重量％
である。

【００３２】培地中に取り入れる栄養無機塩は、ナトリ
ウム、アンモニウム、カルシウム、カリウム、マグネシ
ウム、鉄、フォスフェート、サルフェート、クロライ
ド、カーボネート等のイオンを得ることの出来る通常の
塩類である。また、コバルト、マンガン、ストロンチウ
ム等の微量の金属、その他ブロマイド、フルオライド、
ボレ−ト、シリケ−ト等の微量イオンを得る塩も含む。

【００３３】液体培養に際しては、消泡剤としてシリコ
ン油、植物油、界面活性剤等を使用することができる。

【００３４】ＳＡＮＫ６０６９５株を培養しｋ４６１０
４２２を生産する培地のｐＨは、５．０−８．０の範囲
で変化させることが出来る。好ましくはｐＨは、７前後
である。

【００３５】菌の生育温度は４℃乃至３２℃であり、２
０℃乃至３０℃での生育が良好である。ｋ４６１０４２
２の生産には、２３℃付近が好適である。

【００３６】ｋ４６１０４２２はｋ４６１０４２２生産
菌を好気的に培養して得られ、通常用いられる好気的培
養法、例えば固体培養法、振とう培養法、通気撹拌培養
法等によって培養することができる。それらのうち特
に、振とう培養法が好ましい。

【００３７】小規模な培養においては、２０℃乃至２６
℃で数日間振とう培養を行うのが良好である。培養は三
角フラスコ中で、１または数段階の種培養の発育工程に
より開始する。種培養発育段階の培地は、上記炭素源お
よび窒素源を併用することが出来る。種培養フラスコは
定温インキュベーター中で１乃至３日間振とうするか、
または充分に成長するまで振とうする。成長した種培養
液は次段階の種培地、または生産培地に接種するのに用
いられる。本培養は、例えば種培養液を接種した生産培
地を含むフラスコを一定温度で１乃至３日間、または生
産量が最大に達するまで振とう培養することによりおこ
なうことができる。

【００３８】大量培養の場合には、撹拌機、通気装置を
付けた適当なタンクで培養するのが好ましい。この方法
によれば、栄養培地をタンクの中で作成出来る。栄養培
地を滅菌し、冷却後、滅菌培地にあらかじめ成長させて
おいた種培養液を接種する。培養は２０℃乃至２６℃で
通気撹拌して行う。この方法は、多量の化合物を得るの
に適している。

【００３９】培養の経過に伴って生産されるｋ４６１０
４２２の量の経時的変化は、高速液体クロマトグラフィ
ーを用いて測定することができる。通常は、５日間乃至
８日間の振とう培養でｋ４６１０４２２の生産量は最高
値に達する。

【００４０】２．抽出精製培養液中の液体部分もしくは菌体内に存在するｋ４６１
０４２２を得るには、培養終了後、培養液に同容量程度
のアセトンなどのケトン類、アセトニトリルなどのニト
リル類のような有機溶媒を加えて、混合し、抽出する。
必要ならば抽出液中に存在する菌体およびその他の固形
部分を珪藻土をろ過助剤とするろ過操作または遠心分離
によって分別し、そのろ液もしくは上清中または菌体中
に存在するｋ４６１０４２２を、５α−還元酵素阻害活
性を指標にしてその物理化学的性状を利用し抽出精製す
ることにより得られる。

【００４１】例えば、ろ液もしくは上清中に存在するｋ
４６１０４２２は、最初に濃縮操作で混在する有機溶媒
を除去した後、中性または酸性ｐＨ条件下で水と混和し
ない有機溶剤、例えばブタノールなどのアルコール類；
メチルエチルケトンなどのケトン類；酢酸エチルなどの
エステル類；クロロホルム、塩化エチレン、塩化メチレ
ンなどのハロゲン化炭化水素類を単独にもしくは組み合
わせて用いて抽出精製することができる。

【００４２】あるいは、ｋ４６１０４２２を含む液を吸
着剤の層を通過させて不純物を吸着させて取り除くか、
またはｋ４６１０４２２を吸着させた後、アセトン水な
どの含水ケトン類、メタノール水、ブタノール水などの
含水アルコール類を用いて溶出させることにより得られ
る。吸着剤としては、例えば活性炭または吸着用樹脂で
あるアンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４ (ローム
・アンド・ハース社製) 等や、ダイアイオンＨＰ−１
０、ＨＰ−２０、ＣＨＰ−２０Ｐ、ＨＰ−５０（三菱化
成（株) 社製) 等が使用される。

【００４３】菌体内に存在するｋ４６１０４２２は、例
えば５０乃至９０％の含水アセトンなどの含水ケトン類
または含水メタノール類などの含水アルコール類により
抽出し、次いで有機溶剤を除去した後、上記の「ろ液も
しくは上清中に存在するｋ４６１０４２２」の抽出精製
操作と同様の抽出精製操作を行なうことにより得られ
る。

【００４４】このようにして得られたｋ４６１０４２２
は、更にシリカゲル、マグネシウム−シリカゲル系のフ
ロリジルのような担体を用いた吸着カラムクロマトグラ
フィー；セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社
製) などを用いた分配カラムクロマトグラフィー；セフ
ァデックスＧ−２５（ファルマシア社製) などを用い
たゲルろ過クロマトグラフィー；および順相、逆相カラ
ムを用いた高速液体クロマトグラフィー；等によって精
製することが出来る。以上の分離、精製の手段を単独ま
たは適宜組み合わせて反復して用いることによりｋ４６
１０４２２を分離精製することができる。

【００４５】３．５α−還元酵素阻害試験５α−還元酵素阻害試験は、ｋ４６１０４２２存在下も
しくは非存在下における５α−還元酵素活性、即ちテス
トステロンを還元して５α−ジヒドロテストステロンと
する５α−還元酵素の活性を測定することにより行うこ
とができる。５α−還元酵素活性は(Endocrinology, 11
7 巻，571-579 頁 (1985年))に記載された方法により測
定することができる。以下に、より詳しく述べる。

【００４６】５α−還元酵素としては、例えばラット前
立腺腹葉からを調製したラット５α−還元酵素を用いる
ことができる。

【００４７】５α−還元酵素阻害試験は５α−還元酵
素、放射性同位元素で標識されたテストステロン、ニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチド−フォスフェート還
元体（ＮＡＤＰＨ）を含む緩衝液にｋ４６１０４２２を
含む検体を加え、一定時間、一定温度でインキュベート
し、その後、エタノールを加えて反応を停止する。反応
液を薄層クロマトプレート上で展開し、薄層クロマトプ
レート上の放射活性を測定する。ラット５α−還元酵素
活性は、加えられた［¹⁴Ｃ］テストステロンに対する、
［¹⁴Ｃ］５α−ジヒドロテストステロンの割合（変換率
（％）) で表し、５α−還元酵素阻害活性は次式を用い
て求められる。

【００４８】５α−還元酵素阻害活性＝｛１−（検体添
加群の変換率／（対照群の変換率）｝x １００（％）更に、検体の濃度を変えて上式を用いて阻害活性（％）
を求め、その値から５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀）を求める
ことができる。

【００４９】本発明のｋ４６１０４２２または薬理的に
許容されるエステルは、文献未載の新規化合物であり、
５α−還元酵素阻害作用を示すことから、医薬、５α−
還元酵素阻害剤、特に、前立腺肥大症の予防薬および／
または治療薬として有用である。

【００５０】本発明のｋ４６１０４２２を医薬として用
いる場合、常法に従って種々の形態で投与される。その
投与形態としては例えば散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル
剤、シロップ剤などの形態で経口的または注射剤（静脈
内、筋肉内、皮下）、点滴剤、座剤、塗布剤、軟膏剤な
どの形態で非経口的に安全に投与することが出来る。こ
れらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、溶解補助
剤、懸濁剤、コ−ティング剤、希釈剤などの医薬の製剤
技術分野において通常使用しうる既知の添加物を用いて
製剤化することができる。

【００５１】ここに、賦形剤としては、例えば乳糖、白
糖、ぶどう糖、マンニット、ソルビットのような糖誘導
体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、α−
デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプンの
ような澱粉誘導体；結晶セルロース、低置換度ヒドロキ
シプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセル
ロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチ
ルセルロースカルシウム、内部架橋カルボキシメチルセ
ルロースナトリウムのようなセルロース誘導体；アラビ
アゴム；デキストラン；プルラン；などの有機系賦形
剤；および軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ
珪酸アルミン酸マグネシウムのような珪酸塩誘導体；燐
酸カルシウムのような燐酸塩；炭酸カルシウムのような
炭酸塩；硫酸カルシウムのような硫酸塩；などの無機系
賦形剤をあげることができる。

【００５２】滑沢剤としては、例えばステアリン酸、ス
テアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムのよ
うなステアリン酸金属塩；タルク；コロイドシリカ；ビ
ーガム、ゲイ蝋のようなワックス類；硼酸：アジピン
酸；硫酸ナトリウムのような硫酸塩；グリコール；フマ
ル酸；安息香酸ナトリウム；ＤＬ−ロイシン；脂肪酸ナ
トリウム塩；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マ
グネシウムのようなラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水
和物のような珪酸類；および、上記澱粉誘導体などをあ
げることができる。結合剤としては、例えばポリビニル
ピロリドン、マクロゴールおよび前記賦形剤と同様の化
合物をあげることができる。崩壊剤としては、例えば前
記賦形剤と同様の化合物およびクロスカルメロースナト
リウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポ
リビニルピロリドンのような化学修飾されたデンプン・
セルロース類をあげることができる。安定剤としては、
例えばメチルパラベン、プロピルパラベンのようなパラ
オキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジ
ルアルコール、フェニルエチルアルコールのようなアル
コール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール、クレゾ
ールのようなフェエノール類；チメロサール；デヒドロ
酢酸；およびソルビン酸をあげることができる。矯味矯
臭剤としては、例えば通常使用される、甘味料、酸味
料、香料等をあげることができる。

【００５３】投与量は対象疾患、投与経路および投与回
数などにより異なるが、例えば成人に経口投与する場
合、１日当たりの投与量の上限は２０００ｍｇ（好適に
は５００ｍｇ）であり、下限は１ｍｇ（好適には１０ｍ
ｇ）であり、症状に応じて１回または数回に分けて投与
するのが好ましい。成人に静脈内投与する場合、１日当
たりの投与量の上限は４００ｍｇ（好適には１００ｍ
ｇ）であり、下限は０．１ｍｇ（好適には１ｍｇ）であ
り、症状に応じて１回または数回に分けて投与するのが
好ましい。

【００５４】本発明の新規化合物ｋ４６１０４２２を含
有するカプセル剤を製造する場合は、例えば以下のよう
に製造することができる。製剤例１．カプセル剤ｋ４６１０４２２１０ｇ、乳糖１０ｇ、トウモロコ
シ澱粉１５．８ｇおよびステアリン酸マグネシウム
０．２ｇをＶ型混合機を用いて混合した後、ゼラチンカ
プセルに１８０ｍｇずつ充填すると、カプセル剤が得ら
れる。該カプセル剤は１カプセル当たりｋ４６１０４２
２５０ｍｇを含有する。

【００５５】

【実施例】次に実施例をあげて本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【００５６】実施例１．（１）培養一白金耳のＳＡＮＫ６０６９５株を、下記の組成の前培
養培地１００ｍｌを含む５００ｍｌの三角フラスコ
（種培養フラスコ）に接種した。次いでこれを２８℃で
５日間、２１０ｒｐｍのロータリー振蘯機で前培養を行
った。

【００５７】前培養培地組成グルコース１０ｇグリセロール１０ｇシュクロース１０ｇ生イースト１０ｇオートミール５ｇ大豆粉２０ｇカザミノ酸５ｇＣＢ−４２２（消泡剤）０．５ｍｌ炭酸カルシウム１ｇ ───────────────────────── 水道水１０００ｍｌ（ｐＨ７．０）。

【００５８】本培養は次のように行った。３０リットル
のジャーファーメンター２機に下記の本培養培地１５
リットルを入れ、１２１℃で４０分間加熱滅菌した。こ
れに種培養液７５ｍｌずつを接種し、回転数１００
ｒｐｍ、通気量１５リットル／分で、２８℃で７日
間、攪拌培養を行った。

【００５９】本培養培地組成グルコース２０ｇ可溶化デンプン２０ｇイースト５ｇ大豆粉２０ｇ炭酸カルシウム３．２ｇ食塩２．５ｇ ─────────────────── 水道水１０００ｍｌ（ｐＨ７．２）。

【００６０】（２）単離精製培養終了後、培養液２８リットルにセライト１．５
ｇを加えて吸引ろ過し、菌体部分とろ液に分別した。菌
体部分を８０％アセトン７０リットルを加えて混合
し、これを吸引ろ過した。得られたろ液を減圧下で濃縮
してアセトンを除去し、残留物のｐＨを３に調整し２倍
量の酢酸エチルを使用して３回抽出した。酢酸エチル層
を飽和食塩水１５リットル、次いで水１５リットルで
洗浄後、無水硫酸ナトリウムで脱水した後、減圧下で溶
媒を留去すると１０．２ｇの濃褐色の油状物が得られ
た。

【００６１】この油状物質を、１０００ｍｌのＨＰ−２
０を充填したカラム（φ７０ｍｍ×２５０ｍｍ）に付し
た。このカラムを各１リットルの水、２０％、４０％、
６０％、８０％の含水アセトン、１００％アセトンで溶
出した。５α−還元酵素阻害活性の認められた８０％含
水アセトン画分を濃縮すると、３．７ｇの濃褐色物質が
得られた。

【００６２】このエキス３．７ｇを、コスモシル１
００ｍｌを充填したカラム（φ３０ｍｍ×１５ｍｍ）に
付して８０％アセトンで溶出した後、１００％アセトン
で溶出した。１００％アセトンで溶出された画分の溶媒
を減圧下で留去すると１．８７ｇの油状物が得られた。

【００６３】これをローバーカラム（ＲＰー１８、メル
ク社製）を用いたカラムクロマトグラフィー（８０％メ
タノール）によって精製し、次いで、高速液体カラムク
ロマトグラフィー（センシュウパックＯＤＳ−Ｈ−４
２５２、センシュウ科学（株）社製、移動相；アセトニ
トリル：水＝１：１）によって精製すると、ｋ４６１０
４２２０．７ｍｇが得られた。

【００６４】

【発明の効果】

試験例１．５α−還元酵素阻害活性試験（１）５α−還元酵素の調製成熟雄ラット（３５０−４００ｇ：Ｓｐａｇｕｅ−Ｄａ
ｗｌｅｙ) の前立腺腹葉をはさみで小片に細切後、組織
の約３倍量の緩衝液［０．３３Ｍシュクロース、１ｍＭ
ジチオスレイトール、５０ｍＭニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチドホスフェートー還元体（ＮＡＤＰ
Ｈ）、０．００１％フェニルメチルスルホニルフルオラ
イド（ＰＭＳＦ）を含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝
液 (ｐＨ７．４) ］を加え、まずポリトロン（ＫＩＮＥ
ＭＡＴＩＣＡＧｍｂ）でホモジナイズし、ついでテフ
ロンーガラスホモジナイザーでホモジナイズした。得ら
れたホモジネートを遠心分離 (１００，０００×ｇ、６
０分) に供し、沈殿物を上記緩衝液に懸濁し、再び同条
件で遠心分離することによって洗浄した。この沈殿物を
ラット５α−還元酵素とし、上記緩衝液を加えて、蛋白
量を約２０ｍｇ／ｍｌに調製後、−８０℃で凍結保存
した。

【００６５】（２）５α−還元酵素阻害試験５０ｍｌ中に、（１）で得た５α−還元酵素（蛋白量
２００μｇ) を含有する４０ｍＭリン酸カリウム緩衝液
（ｐＨ７．０）を調製して、これを酵素液とした。２
μＭ［¹⁴Ｃ］テストステロン、１ｍＭジチオスレイトー
ルおよび１．５ｍＭＮＡＤＰＨを含む４０ｍＭリン酸
カリウム緩衝液 (ｐＨ７．０) に、ジメチルスルホキ
シドもしくはエタノールで希釈した検体２μｌを加
え、総液量が５０μｌになるように基質液を調製し
た。

【００６６】基質液５０μｌに酵素液５０μｌを加える
ことにより、酵素反応を開始し、これを３７℃で２５分
間乃至４０分間インキュベートして酵素反応を進行させ
た。これに、１００ｍｌのエタノールを加えて反応を停
止し、この反応液のうちの２５μｌを薄層クロマトグラ
フィー用のプレート（ＬＫ６ＤＦｓｉｌｉｃａｐｌａ
ｔｅ、Ｗｈａｔｍａｎ社製）にスポットし、酢酸エチル
−シクロヘキサン（１：１）混合液を展開溶媒として用
いて、室温で２回展開した。薄層クロマトプレート上の
放射活性をバイオイメージアナライザー（富士写真フィ
ルム（株）社製）を用いて測定した。ラットの５α−還
元酵素活性は、加えた［¹⁴Ｃ］テストステロンのうち、
［¹⁴Ｃ］５α−ジヒドロテストステロンとなった割合
（変換率（％）) で表し、５α−還元酵素阻害活性は次
式を用いて求めた。

【００６７】５α−還元酵素阻害活性＝｛１−（検体添
加群の変換率／（対照群の変換率）｝x １００（％）更に、検体の濃度を変えて上式を用いて阻害活性（％）
を求め、その値から５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀）を求め
た。

【００６８】ｋ４６１０４２２の５α−還元酵素阻害活
性（ＩＣ₅₀）は７．８μｇ／ｍｌであった。

【００６９】以上から、本発明のｋ４６１０４２２は５
α−還元酵素阻害作用を有し、前立腺肥大症の予防薬お
よび／または治療薬などの５α−還元酵素阻害剤、医薬
として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者岡崎尚夫茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社内 (72)発明者高松安行福島県いわき市泉町下川字大剱389−４三共株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記式（Ｉ）【化１】を有するｋ４６１０４２２。
【請求項２】下記の性状を有するｋ４６１０４２２；１）物質の性状：白色粉末２）分子式：Ｃ₁₉Ｈ₂₆Ｏ₂ （高分解能マススペクトル
法により測定）３）分子量：２８６（質量分析法により測定）４）赤外線吸収スペクトル：ν_max ｃｍ^-1 クロロホルム中で測定した赤外線吸収スペクトルは、次
に示す通りである。3611, 2952, 2930, 1663, 1451, 13
82, 1282 ５） ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ｐｐｍ）重メタノール中、内部基準にテトラメチルシランを使用
して測定した ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（３６０ＭＨ
ｚ）は、以下の通りである：6.17(1H, brs), 5.77(1H,
dd, J=17.5Hz), 5.35(1H, brs),4.93(1H, dd, J=10.6,
1.4Hz), 4.90(1H, dd,J=17.5, 1.4Hz),4.25(1H, d, J=1
7.4Hz), 4.19(1H, d, J=17.7Hz), 2.70(1H, brd, J=12.
8Hz),2.51(1H, d, J=16.1Hz), 2.35(2H, m), 2.33(1H,
d, J=16.1Hz), 2.15(1H, m),1.89(1H, m), 1.69(1H,
m), 1.59(1H, m), 1.42-1.46(2H, m), 1.48(1H, m),1.0
6(3H, s), 0.82(3H,s) 。６）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ppm ）重メタノール中、内部基準にテトラメチルシランを使用
して測定した¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（３６０ＭＨ
ｚ）は、以下の通りである：202.1(s), 168.5(s), 149.
6(d), 136.2(s), 131.5(d), 123.0(d), 111.1(t),63.3
(t), 51.9(t), 49.3(d), 48.3(d), 43.1(s), 38.6(s),
36.0(t), 35.5(t),26.5(q), 24.0(t), 20.1(t), 14.5
(q)。７）紫外線吸収スペクトル：λmax ｎｍ（ε）２４５（８０００）８）溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、ジメ
チルスルホキシド、ベンゼン、クロロホルム、ジエチル
エーテル、酢酸エチルに可溶。水に不溶。９）呈色反応：硫酸、ヨードに陽性。１０）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値；０．５吸着剤；シリカゲルプレート(Kieselgel 60 F254, メ
ルク社製）展開溶媒；メチレンクロライド：メタノール＝９：１。
【請求項３】ストレプトスポランジウム属に属するｋ
４６１０４２２生産菌を培養し、その培養物からｋ４６
１０４２２を採取することを特徴とするｋ４６１０４２
２の製法。
【請求項４】ストレプトスポランジウム属に属するｋ
４６１０４２２生産菌がストレプトスポランジウムエ
スピーＳＡＮＫ６２１９５株である請求項３記載の製
法。
【請求項５】ｋ４６１０４２２を有効成分として含有
する医薬。
【請求項６】ｋ４６１０４２２を有効成分として含有
する５α−還元酵素阻害剤。
【請求項７】ｋ４６１０４２２を有効成分として含有
する前立腺肥大症の予防薬および／または治療薬。