JPH09221493A

JPH09221493A - 新規化合物ｋ４６１０１７８

Info

Publication number: JPH09221493A
Application number: JP8025731A
Authority: JP
Inventors: Michihiro Sugano; 道裕菅野; Emiko Hatano; 恵美子波田野; Takakazu Hamada; 孝和浜田; Takeshi Hosoya; 剛細矢
Original assignee: Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Co Ltd
Priority date: 1996-02-14
Filing date: 1996-02-14
Publication date: 1997-08-26

Abstract

(57)【要約】【課題】５α−還元酵素阻害作用を有する化合物を含有
する医薬、５α−還元酵素阻害剤、前立腺肥大症の予防
および／または治療薬を提供する。【解決手段】下記の性状を有するｋ４６１０１７８また
はその塩；１）物質の性状：白色粉末２）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₃₀Ｏ₁₀（高分解能マススペクトル
法により測定）３）分子量：５３８（質量分析法により測定）。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は優れたテストステロ
ン５α−還元酵素（以下「５α−還元酵素」という。）
阻害作用を有する新規化合物ｋ４６１０１７８およびそ
の塩、新規化合物ｋ４６１０１７８および／またはその
塩を有効成分として含有する医薬、５α−還元酵素阻害
剤、および前立腺肥大症の予防剤および／または治療
剤、ならびにそれらの製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】前立腺肥大症は、男性の加齢に伴う疾患
であり、近年の平均寿命の延長によりその疾患者数は著
しく増加している。本疾患の基本的病態は肥大血節の増
大による尿道抵抗の増加で、症状は排尿障害、残尿感で
ある。ところで、前立腺肥大症組織では正常前立腺組織
と比較して、５α−ジヒドロテストステロン（５α−Ｄ
ＨＴ）含量が有意に高いことが知られている。この５α
−ＤＨＴはおもに男性の生殖器である前立腺で、テスト
ステロンから５α−還元酵素によって合成される。そこ
で５α−還元酵素を阻害し、５α−ＤＨＴを低下させる
ことで前立腺肥大症を治療しようとする薬剤の開発が行
われている。現在までに開発されている薬剤としては、
４−アザステロイド骨格を有するフィナステロイド(G.
H. Rasmusson, J. R. Berman et al., J. Med. Chem.,
29巻、 2298-2315頁 (1986年))がある。またステロイド
骨格をもたない合成化合物としてはベンズアニリド骨格
を有するＯＮＯ−３８０５(EP 0 291245 A2) が知られ
ている。また天然物由来の物としては、フェナジン骨格
を有するＷＳ−９６５９ＡおよびＢ (O. Nakayama, M.
Kohsaka et al., J. Antibiot., 42巻、1221−1240頁
(1989年))、リボフラビン(O. Nakayama, M. Kohsaka et
al., J.Antibiot., 43 巻、 1615-1616頁 (1990年))が
知られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明者等はチエラビ
ア（Thielavia ）属に属するチエラビアサブテモフィ
ラモウチャッカ（Thielavia subthemophila Mouchacc
a ）ＳＡＮＫ３１２８１株の培養液中に、５α−還元
酵素阻害作用を有する新規化合物ｋ４６１０１７８が生
産されることを見出して本発明を完成した。更に、本発
明の他の目的は、ｋ４６１０１７８を有効成分として含
有する医薬、５α−還元酵素阻害剤、前立腺肥大症の予
防および／または治療薬を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は、（１）下記の性状；１）物質の性状：白色粉末２）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₃₀Ｏ₁₀（高分解能マススペクトル
法により測定）３）分子量：５３８（質量分析法により測定）４）赤外線吸収スペクトル：ν_max ｃｍ^-1 液膜法で測定した赤外線吸収スペクトルは、次に示す通
りである；3424, 2930, 1660, 1605, 1440, 1309, 126
3, 1166, 1147, 1070。

【０００５】５） ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：
ｐｐｍ）重クロロホルム中、内部基準にテトラメチルシランを使
用して測定した¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（３６０Ｍ
Ｈｚ）は、以下の通りである；6.51(1H, s), 2.81(3H,
s), 2.79(3H, s), 2.68(3H, s), 2.31(3H, s),2.28(3H,
s), 2.24(3H, s), 2.24(3H, s), 2.22(3H, s)。

【０００６】６）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：
ｐｐｍ）重クロロホルム：重メタノール（＝１：１）混液中、内
部基準にテトラメチルシランを使用して測定した核磁気
共鳴スペクトル（９０ＭＨｚ）は、以下の通りである；
175.5(s), 172.0(s), 171.6(s), 166.0(s), 163.2(s),
161.0(s),160.9(s), 154.4(s), 153.4(s), 142.3(s), 1
40.0(d), 139.6(s),123.5(s), 122.2(s), 118.7(d), 11
8.0(s), 114.0(s), 113.3(s),112.0(s), 111.3(s), 10
4.8(s), 26.3(q), 20.7(q), 14.8(q), 14.7(q),11.2
(q), 11.2(q), 9.2(q)。

【０００７】７）紫外線吸収スペクトル：λmax ｎｍ
（ε）２３９（１５７００）８）溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、ジメ
チルスルホキシド、ベンゼンに可溶。水、クロロホル
ム、ジエチルエーテル、酢酸エチルに不溶。

【０００８】９）呈色反応：硫酸、ヨードに陽性。

【０００９】１０）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値；０．３吸着剤；逆相プレート(RP-18 F254, メルク社製）展開溶媒；メタノール：水：酢酸＝９０：５：５を有するｋ４６１０１７８またはその塩、（２）チエラビア属に属するｋ４６１０１７８生産菌
を培養し、その培養物からｋ４６１０１７８を採取する
ことを特徴とするｋ４６１０１７８の製法、（３）チエラビア属に属するｋ４６１０１７８生産菌
がチエラビアサブテモフィラモウチャッカＳＡＮ
Ｋ３１２８１株である請求項２記載の製法、ならびに（４）ｋ４６１０１７８またはその塩を有効成分とし
て含有する医薬、５α−還元酵素阻害剤、前立腺肥大症
の予防薬および／または治療薬に関する。

【００１０】本発明のｋ４６１０１７８は、常法に従っ
て、塩にすることができる。そのような塩としては例え
ばリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩のようなアル
カリ金属塩；カルシウム塩、バリウム塩のようなアルカ
リ土類金属塩；マグネシウム塩；アルミニウム塩；など
の金属塩；メチルアミン塩、ジメチルアミン塩、トリエ
チルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールア
ミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルア
ミン塩、アンモニウム塩のようなアミン塩；グリシン
塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミ
ン塩、アスパラギン塩のようなアミノ酸塩；などの塩基
性物質との塩を挙げることができる。

【００１１】本発明のｋ４６１０１７８またはその塩
が、大気中に放置されたり、または再結晶をすることに
より、水分を吸収し、吸着水が付着したり、水和物を形
成する場合がある。本発明はこのような水和物をもすべ
て含むものである。

【００１２】更に本発明において、生体内において代謝
されてｋ４６１０１７８に変換される化合物、いわゆる
プロドラッグもすべて含むものである。

【００１３】本発明のｋ４６１０１７８の製造において
用いられるチエラビア属に属するｋ４６１０１７８生産
菌としては、例えばチエラビアサブテモフィラモウ
チャッカＳＡＮＫ３１２８１株をあげることができ
る。ＳＡＮＫ３１２８１株は土壌から分離された菌株で
ある。ＳＡＮＫ３１２８１の菌学的性状は次の通りであ
る。

【００１４】馬鈴薯ニンジン培地上、３７℃での生育は
早く、二週間でシャーレ全面を覆う。２３℃での成長
は、その約半分である。コロニーは暗黄褐色から暗褐灰
色を呈する。裏面は紫灰色である。閉子嚢殻は培地表面
に旺盛に形成される。亜球形〜卵形を呈し、直径１００
−２００μｍである。殻壁は薄く、オリーブ味を帯びた
暗褐色、膜状で、多角菌組織様を呈す。子嚢は８胞子性
で、球形から亜球形または卵形であり、その大きさは２
８−３２ｘ２２−３０μｍ、膜は成熟に伴ない消失す
る。子嚢胞子は最初無色だが、成熟にともないしばしば
暗褐色となる。大きさは１３−１８ｘ７−１０μｍ、両
端においてやや尖り、表面は平滑、頂端付近に発芽孔を
有する。馬鈴薯ニンジン培地の組成は以下の通りであ
る。

【００１５】

【表１】培地組成ジャガイモ２０ｇニンジン２０ｇ寒天２０ｇ ──────────── 水１リットル。

【００１６】以上の菌学的性状により本菌株に該当する
ものを検索したところ、日本菌学会報２０：13-22 (197
9) (Udagawa, S., Muroi, T. Some interesing species
ofAscomycetes from imported spices.)に記載されて
いるThielavia subthemophila Mouchacca と一致した。
よって、本菌株をThielavia subthemophila Mouchacca
と同定した。なお、本菌株は、Thielavia subthemophil
a Mouchacca ＳＡＮＫ３１２８１として、１９９５年８
月３０日に通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究
所に寄託され、寄託番号ＦＥＲＭＢＰ−５２１３を
付された。

【００１７】周知の通り、子のう菌は自然界において、
または人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照
射、化学薬品処理等）により変異を起こし易い。本発明
のチエラビアサブテモフィラモウチャッカＳＡＮ
Ｋ３１２８１株もこの点は同じである。本発明にいうチ
エラビアサブテモフィラモウチャッカＳＡＮＫ３
１２８１株はそのすべての変異株を含有する。

【００１８】また、これらの変異株の中には、遺伝学的
方法、例えば組み替え、形質導入、形質転換等により得
られたものも包含される。すなわち、ｋ４６１０１７８
を生産する、チエラビアサブテモフィラモウチャッ
カＳＡＮＫ３１２８１株およびその変異株およびそれ
らと明確に区別されない菌株は、すべてチエラビアサブ
テモフィラモウチャッカＳＡＮＫ３１２８１株に包
含されるものである。

【００１９】

【発明の実施の形態】

１．培養本発明のチエラビア属に属するｋ４６１０１７８生産菌
を分離するに際して、使用される分離培地としては炭素
源、窒素源、無機イオンおよび有機栄養源等より選択さ
れたものを適宜含有する培地であれば合成または天然培
地のいずれでも使用可能である。分離操作は常法に従っ
て行われる。

【００２０】本発明の新規化合物ｋ４６１０１７８を得
るため、これらの微生物の培養は他の発酵生成物を生産
するために用いられるような培地中で行なわれる。この
ような培地中には、微生物が資化出来る炭素源、窒素源
および無機塩を含有する。

【００２１】一般に、炭素源としてグルコース、フラク
トース、マルトース、シュークロース、マンニトール、
グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウ
モロコシデンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆
粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸などを単一に、あ
るいは併用して用いる事が出来る。一般には、培地量の
１−１０重量％の範囲で用いられる。好適には７−９重
量％であり、最適には８重量％である。

【００２２】窒素源としては、一般に蛋白質を含有する
物質を発酵工程に用いる。適当な窒素源としては、大豆
粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、カゼイン加水分解物、
ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプト
ン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マルトエキ
ス等の動物系、植物系またはエキス類の窒素源、硝酸ナ
トリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の無
機窒素源である。窒素源は、単一または併用して培地量
の０．１−６重量％の範囲で用いられる。好適には２−
４重量％であり、最適には３重量％である。

【００２３】培地中に取り入れる栄養無機塩は、ナトリ
ウム、アンモニウム、カルシウム、カリウム、マグネシ
ウム、鉄、フォスフェート、サルフェート、クロライ
ド、カーボネート等のイオンを得ることの出来る通常の
塩類である。また、コバルト、マンガン、ストロンチウ
ム等の微量の金属、その他ブロマイド、フルオライド、
ボレ−ト、シリケ−ト等の微量イオンを得る塩も含む。

【００２４】液体培養に際しては、消泡剤としてシリコ
ン油、植物油、界面活性剤等が使用される。

【００２５】ＳＡＮＫ３１２８１株を培養し、ｋ４６１
０１７８を生産する培地のｐＨは、５．０−８．０の範
囲で変化させることが出来る。好ましくはｐＨ７前後
である。

【００２６】菌の生育温度は４℃乃至３２℃であり、２
０℃乃至３０℃の範囲で生育が良好であり、更にｋ４６
１０１７８の生産には、２３℃付近が好適である。

【００２７】ｋ４６１０１７８は、好気的に培養して得
られるが、通常用いられる好気的培養法、例えば固体培
養法、振とう培養法、通気撹拌培養法等を用いることが
できる。その中でも、特に振とう培養法が好ましい。

【００２８】小規模な培養においては、２０℃乃至２６
℃で数日間振とう培養を行うのが良好である。培養は三
角フラスコ中で、１乃至２段階の種培養の発育工程によ
り開始する。種培養発育段階の培地は、炭素源および窒
素源を併用出来る。種フラスコは定温インキュベーター
中で２３℃、１乃至３日間振とうするか、または充分に
成長するまで振とうする。成長した種培養液は第二の種
培地、または生産培地に接種するのに用いられる。中間
の発育工程を用いる場合には、本質的に同様の方法で成
長させ、生産培地に接種するためにそれを部分的に用い
る。本培養は、例えば種培養液を接種した生産培地を含
むフラスコを一定温度で１乃至３日間、またはｋ４６１
０１７８の生産量が最大に達するまで振とう培養するこ
とによりおこなうことができる。

【００２９】大量培養の場合には、撹拌機、通気装置を
付けた適当なタンクで培養するのが好ましい。この方法
によれば、栄養培地をタンクの中で作成出来る。栄養培
地を１２５℃まで加熱して滅菌し、冷却後、滅菌培地に
あらかじめ成長させてあった種培養液を接種する。培養
は２０℃乃至２６℃で通気撹拌して行う。この方法は、
多量の化合物を得るのに適している。

【００３０】培養の経過に伴って生産されるｋ４６１０
１７８の量の経時変化は、高速液体クロマトグラフィー
を用いて測定することが出来る。通常は、５日間乃至８
日間の振とう培養でｋ４６１０１７８の生産量は最高値
に達する。

【００３１】２．抽出精製培養終了後、培養液中の液体部分及び菌体内に存在する
ｋ４６１０１７８を得るには、培養液に同容量程度のア
セトンなどのケトン類、アセトニトリルなどのニトリル
類のような有機溶媒を添加し、混合して抽出する。次い
で、抽出液中に存在する菌体、その他の固形部分を珪藻
土をろ過助剤とするろ過操作または遠心分離によって分
別し、そのろ液もしくは上清中または菌体中に存在する
ｋ４６１０１７８を、５α−還元酵素阻害活性を指標に
してその物理化学的性状を利用し抽出精製することによ
り得られる。例えば、ろ液または上清中に存在するｋ４
６１０１７８は、最初に濃縮操作で混在する有機溶媒を
除去した後、中性または酸性条件下で水と混和しない有
機溶剤（例えばブタノールなどのアルコール類；メチル
エチルケトンなどのケトン類；酢酸エチルなどのエステ
ル類；クロロホルム、塩化エチレン、塩化メチレンなど
のハロゲン化炭化水素類；など）を用いて単独または、
それらの組み合わせにより抽出精製することができる。

【００３２】あるいは、ｋ４６１０１７８を含む液を吸
着剤の層を通過させて不純物を吸着させて取り除くか、
またはｋ４６１０１７８を吸着させた後、アセトン水な
どの含水ケトン類；メタノール水、ブタノール水などの
含水アルコール類；などを用いて溶出させることにより
得られる。吸着剤としては、例えば活性炭または吸着用
樹脂であるアンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４
(ローム・アンド・ハース社製) 等や、ダイアイオン
ＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＣＨＰ−２０Ｐ、ＨＰ−５０
（三菱化成（株) 社製) 等が使用される。

【００３３】菌体内に存在するｋ４６１０１７８は、例
えば５０−９０％含水アセトンなどの含水ケトン類また
は含水メタノール類などの含水アルコール類により抽出
し、次いで有機溶剤を除去した後、上記の「ろ液または
上清中に存在するｋ４６１０１７８」の抽出精製操作と
同様の抽出精製操作を行なうことにより得られる。

【００３４】このようにして得られたｋ４６１０１７８
は、更にシリカゲル、マグネシウムーシリカゲル系のフ
ロリジルのような担体を用いた吸着カラムクロマトグラ
フィー；セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社
製) などを用いた分配カラムクロマトグラフィー；セフ
ァデックスＧ−２５（ファルマシア社製) などを用い
たゲルろ過クロマトグラフィー；および順相、逆相カラ
ムを用いた高速液体クロマトグラフィー；等で精製する
ことが出来る。以上の分離、精製の手段を単独または適
宜組み合わせて、必要ならば反復して０用いることによ
りｋ４６１０１７８を分離精製することができる。

【００３５】３．５α−還元酵素阻害試験５α−還元酵素阻害試験は、ｋ４６１０１７８存在下も
しくは非存在下における５α−還元酵素活性、即ちテス
トステロンを還元して５α−ジヒドロテストステロンと
する５α−還元酵素の活性を測定することにより行うこ
とができる。５α−還元酵素活性は(Endocrinology, 11
7 巻，571-579 頁 (1985年))に記載された方法により測
定することができる。以下に、より詳しく述べる。

【００３６】５α−還元酵素としては、例えばラット前
立腺腹葉からを調製したラット５α−還元酵素を用いる
ことができる。

【００３７】５α−還元酵素阻害試験は５α−還元酵
素、放射性同位元素で標識されたテストステロン、ニコ
チンアミドアデニンジヌクレオチド−フォスフェート還
元体（ＮＡＤＰＨ）を含む緩衝液にｋ４６１０１７８を
含む検体を加え、一定時間、一定温度でインキュベート
し、その後、エタノールを加えて反応を停止する。反応
液を薄層クロマトプレート上で展開し、薄層クロマトプ
レート上の放射活性を測定する。ラット５α−還元酵素
活性は、加えられた［¹⁴Ｃ］テストステロンに対する、
［¹⁴Ｃ］５α−ジヒドロテストステロンの割合（変換率
（％）) で表し、５α−還元酵素阻害活性は次式を用い
て求められる。

【００３８】５α−還元酵素阻害活性＝｛１−（検体添
加群の変換率／（対照群の変換率）｝×１００（％）更に、検体の濃度を変えて上式を用いて阻害活性（％）
を求め、その値から５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀）を求める
ことができる。

【００３９】本発明のｋ４６１０１７８または薬理的に
許容されるエステルは、文献未載の新規化合物であり、
５α−還元酵素阻害作用を示すことから、医薬、５α−
還元酵素阻害剤、特に、前立腺肥大症の予防薬および／
または治療薬として有用である。

【００４０】本発明のｋ４６１０１７８またはその塩を
医薬として用いる場合、常法に従って種々の形態で投与
される。その投与形態としては例えば散剤、顆粒剤、錠
剤、カプセル剤、シロップ剤などの形態で経口的または
注射剤（静脈内、筋肉内、皮下）、点滴剤、座剤、塗布
剤、軟膏剤などの形態で非経口的に安全に投与すること
が出来る。これらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦
形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、
溶解補助剤、懸濁剤、コ−ティング剤、希釈剤などの医
薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の添加物
を用いて製剤化することができる。

【００４１】ここに、賦形剤としては、例えば乳糖、白
糖、ぶどう糖、マンニット、ソルビットのような糖誘導
体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、α−
デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプンの
ような澱粉誘導体；結晶セルロース、低置換度ヒドロキ
シプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセル
ロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチ
ルセルロースカルシウム、内部架橋カルボキシメチルセ
ルロースナトリウムのようなセルロース誘導体；アラビ
アゴム；デキストラン；プルラン；などの有機系賦形
剤；および軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ
珪酸アルミン酸マグネシウムのような珪酸塩誘導体；燐
酸カルシウムのような燐酸塩；炭酸カルシウムのような
炭酸塩；硫酸カルシウムのような硫酸塩；などの無機系
賦形剤をあげることができる。

【００４２】滑沢剤としては、例えばステアリン酸、ス
テアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムのよ
うなステアリン酸金属塩；タルク；コロイドシリカ；ビ
ーガム、ゲイ蝋のようなワックス類；硼酸：アジピン
酸；硫酸ナトリウムのような硫酸塩；グリコール；フマ
ル酸；安息香酸ナトリウム；ＤＬ−ロイシン；脂肪酸ナ
トリウム塩；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マ
グネシウムのようなラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水
和物のような珪酸類；および、上記澱粉誘導体などをあ
げることができる。結合剤としては、例えばポリビニル
ピロリドン、マクロゴールおよび前記賦形剤と同様の化
合物をあげることができる。崩壊剤としては、例えば前
記賦形剤と同様の化合物およびクロスカルメロースナト
リウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポ
リビニルピロリドンのような化学修飾されたデンプン・
セルロース類をあげることができる。安定剤としては、
例えばメチルパラベン、プロピルパラベンのようなパラ
オキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジ
ルアルコール、フェニルエチルアルコールのようなアル
コール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール、クレゾ
ールのようなフェエノール類；チメロサール；デヒドロ
酢酸；およびソルビン酸をあげることができる。矯味矯
臭剤としては、例えば通常使用される、甘味料、酸味
料、香料等をあげることができる。

【００４３】投与量は対象疾患、投与経路および投与回
数などにより異なるが、例えば成人に経口投与する場
合、１日当たりの投与量の上限は２０００ｍｇ（好適に
は５００ｍｇ）であり、下限は１ｍｇ（好適には１０ｍ
ｇ）であり、症状に応じて１回または数回に分けて投与
するのが好ましい。成人に静脈内投与する場合、１日当
たりの投与量の上限は４００ｍｇ（好適には１００ｍ
ｇ）であり、下限は０．１ｍｇ（好適には１ｍｇ）であ
り、症状に応じて１回または数回に分けて投与するのが
好ましい。

【００４４】本発明の新規化合物ｋ４６１０１７８また
はその塩を含有するカプセル剤を製造する場合は、例え
ば以下のように製造することができる。製剤例１．カプセル剤ｋ４６１０１７８１０ｇ、乳糖１０ｇ、トウモロコ
シ澱粉１５．８ｇおよびステアリン酸マグネシウム
０．２ｇをＶ型混合機を用いて混合した後、ゼラチンカ
プセルに１８０ｍｇずつ充填すると、カプセル剤が得ら
れる。該カプセル剤は１カプセル当たりｋ４６１０１７
８５０ｍｇを含有する。

【００４５】

【実施例】次に実施例をあげて本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【００４６】実施例１．（１）培養一白金耳のチエラビアサブテモフィラモウチャッカ
ＳＡＮＫ３１２８１株（ＦＥＲＭＢＰ−５２１３）
を、下記の組成の前培養培地１００ｍｌを含む５００
ｍｌの三角フラスコ（種培養フラスコ）に接種した。次
いでこれを２６℃で５日間、２１０ｒｐｍのロータリー
振蘯機で前培養を行った。

【００４７】前培養培地組成グリセロール５０ｇポテト５０ｇ麦芽エキス５ｇ酵母エキス５ｇＣＢ−４２２（消泡剤）０．５ｍｌ ───────────────────────── 水道水１０００ｍｌ（ｐＨ無調整）。

【００４８】５００ｍｌの三角フラスコ４２本、上記組
成の培地１００ｍｌずつ入れ、更に前培養液を５ｍ
ｌずつ接種した。これを２６℃で７日間、２１０ｒｐｍ
のロータリー振蘯機で本培養を行った。

【００４９】（２）単離精製培養終了後、培養液４．２リットルをろ過し、ろ液と
菌体部分とに分別した。

【００５０】ろ液のｐＨを３．０に調整した後、酢酸エ
チル３リットルで抽出し、抽出液の溶媒を留去し、残
留物を得た。一方、菌体部分にはアセトン１リットル
を加えて一晩放置した後、溶媒を留去し、酢酸エチル
５００ｍｌで抽出した。この抽出液の溶媒を留去し、残
留物を得た。こうして得られた両残留物とも５α−還元
酵素阻害活性を示したので、両者をを合わせ、計１．４
３ｇの残留物を得た。

【００５１】これをシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー（メチレンクロライド：メタノール＝９：１）に付し
た。５α−還元酵素阻害活性を示した画分を集めて、溶
媒を留去した後、ローバーカラムクロマトグラフィー
（カラム：RP-18 A size、メルク社製；移動層：８０％
メタノール）、（カラム：RP-18 A size、メルク社製；
移動層：８０％メタノール）および（カラム：RP-18 A
size、メルク社製；移動層：７０％メタノール）に付し
て精製すると、９．３ｍｇのｋ４６１０１７８が得られ
た。

【００５２】

【発明の効果】

試験例１．５α−還元酵素阻害活性試験（１）５α−還元酵素の調製成熟雄ラット（３５０−４００ｇ：Ｓｐａｇｕｅ−Ｄａ
ｗｌｅｙ) の前立腺腹葉をはさみで小片に細切後、組織
の約３倍量の緩衝液［０．３３Ｍシュクロース、１ｍＭ
ジチオスレイトール、５０ｍＭニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチドホスフェート−還元体（ＮＡＤＰ
Ｈ）、０．００１％フェニルメチルスルホニルフルオラ
イド（ＰＭＳＦ）を含む２０ｍＭリン酸カリウム緩衝
液 (ｐＨ７．４) ］を加え、まずポリトロン（ＫＩＮＥ
ＭＡＴＩＣＡＧｍｂ）でホモジナイズし、ついでテフ
ロン−ガラスホモジナイザーでホモジナイズした。得ら
れたホモジネートを遠心分離 (１００，０００×ｇ、６
０分) に供し、沈殿物を上記緩衝液に懸濁し、再び同条
件で遠心分離することによって洗浄した。この沈殿物を
ラット５α−還元酵素とし、上記緩衝液を加えて、蛋白
量を約２０ｍｇ／ｍｌに調製後、−８０℃で凍結保存
した。

【００５３】（２）５α−還元酵素阻害試験５０ｍｌ中に、（１）で得た５α−還元酵素（蛋白量
２００μｇ) を含有する４０ｍＭリン酸カリウム緩衝液
（ｐＨ７．０）を調製して、これを酵素液とした。２
μＭ［¹⁴Ｃ］テストステロン、１ｍＭジチオスレイトー
ルおよび１．５ｍＭＮＡＤＰＨを含む４０ｍＭリン酸
カリウム緩衝液 (ｐＨ７．０) に、ジメチルスルホキ
シドもしくはエタノールで希釈した検体２μｌを加
え、総液量が５０μｌになるように基質液を調製し
た。

【００５４】基質液５０μｌに酵素液５０μｌを加える
ことにより、酵素反応を開始し、これを３７℃で２５分
間乃至４０分間インキュベートして酵素反応を進行させ
た。これに、１００ｍｌのエタノールを加えて反応を停
止し、この反応液のうちの２５μｌを薄層クロマトグラ
フィー用のプレート（ＬＫ６ＤＦｓｉｌｉｃａｐｌａ
ｔｅ、Ｗｈａｔｍａｎ社製）にスポットし、酢酸エチル
−シクロヘキサン（１：１）混合液を展開溶媒として用
いて、室温で２回展開した。薄層クロマトプレート上の
放射活性をバイオイメージアナライザー（富士写真フィ
ルム（株）社製）を用いて測定した。ラットの５α−還
元酵素活性は、加えた［¹⁴Ｃ］テストステロンのうち、
［¹⁴Ｃ］５α−ジヒドロテストステロンとなった割合
（変換率（％）) で表し、５α−還元酵素阻害活性は次
式を用いて求めた。

【００５５】５α−還元酵素阻害活性＝｛１−（検体添
加群の変換率／（対照群の変換率）｝×１００（％）更に、検体の濃度を変えて上式を用いて阻害活性（％）
を求め、その値から５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀）を求め
た。

【００５６】ｋ４６１０１７８の５α−還元酵素阻害活
性（ＩＣ₅₀）は６．４μＭであった。

【００５７】以上から、本発明のｋ４６１０１７８は５
α−還元酵素阻害作用を有し、前立腺肥大症の予防薬お
よび／または治療薬などの５α−還元酵素阻害剤、医薬
として有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者細矢剛茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の性状；１）物質の性状：白色粉末２）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₃₀Ｏ₁₀（高分解能マススペクトル
法により測定）３）分子量：５３８（質量分析法により測定）４）赤外線吸収スペクトル：ν_max ｃｍ^-1 液膜法で測定した赤外線吸収スペクトルは、次に示す通
りである；3424, 2930, 1660, 1605, 1440, 1309, 126
3, 1166, 1147, 1070。５） ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ｐｐｍ）重クロロホルム中、内部基準にテトラメチルシランを使
用して測定した¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（３６０Ｍ
Ｈｚ）は、以下の通りである；6.51(1H, s), 2.81(3H,
s), 2.79(3H, s), 2.68(3H, s), 2.31(3H, s),2.28(3H,
s), 2.24(3H, s), 2.24(3H, s), 2.22(3H, s)。６）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ｐｐｍ）重クロロホルム：重メタノール（＝１：１）混液中、内
部基準にテトラメチルシランを使用して測定した核磁気
共鳴スペクトル（９０ＭＨｚ）は、以下の通りである；
175.5(s), 172.0(s), 171.6(s), 166.0(s), 163.2(s),
161.0(s),160.9(s), 154.4(s), 153.4(s), 142.3(s), 1
40.0(d), 139.6(s),123.5(s), 122.2(s), 118.7(d), 11
8.0(s), 114.0(s), 113.3(s),112.0(s), 111.3(s), 10
4.8(s), 26.3(q), 20.7(q), 14.8(q), 14.7(q),11.2
(q), 11.2(q), 9.2(q)。７）紫外線吸収スペクトル：λ_max ｎｍ（ε）２３９（１５７００）８）溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、ジメ
チルスルホキシド、ベンゼンに可溶。水、クロロホル
ム、ジエチルエーテル、酢酸エチルに不溶。９）呈色反応：硫酸、ヨードに陽性。１０）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値；０．３吸着剤；逆相プレート(RP-18 F254, メルク社製）展開溶媒；メタノール：水：酢酸＝９０：５：５を有するｋ４６１０１７８またはその塩。
【請求項２】チエラビア属に属するｋ４６１０１７８
生産菌を培養し、その培養物からｋ４６１０１７８を採
取することを特徴とするｋ４６１０１７８の製法。
【請求項３】チエラビア属に属するｋ４６１０１７８
生産菌がチエラビアサブテモフィラモウチャッカ
ＳＡＮＫ３１２８１株である請求項２記載の製法。
【請求項４】ｋ４６１０１７８またはその塩を有効成
分として含有する医薬。
【請求項５】ｋ４６１０１７８またはその塩を有効成
分として含有する５α−還元酵素阻害剤。
【請求項６】ｋ４６１０１７８またはその塩を有効成
分として含有する前立腺肥大症の予防薬および／または
治療薬。