JP5256758B2 - 新規fki−1746−1物質およびその製造方法 - Google Patents
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Description
また本発明は、アスペルギルス属に属し、上記FKI-1746-1物質および/またはFKI-1746-2物質を生産する能力を有する微生物、特に、アスペルギルス・クラバトナニクスFKI-1746 (Aspergillus clavatonanicus FKI-1746) (FERM P-21482) に関する。
1.形態的特徴
本菌株は、ツァペック・イーストエキス寒天培地、20% サッカロース・ツァペック・イーストエキス寒天培地、麦芽汁寒天培地、ツァペック・ドックス寒天培地などで良好に生育し、各種寒天培地で分生子の着生は良好であった。
2 .培養性状
各種寒天培地上で、25℃、7 日間培養した場合の肉眼的観察結果を表1に示す。
1)最適生育条件
本菌株の最適生育条件は、pH 5〜6 、温度14.0〜32.0℃である。
本菌株の生育範囲は、pH 3〜10、温度6.0 〜34.0℃である。
3)好気性、嫌気性の区別
好気性
(1)性状:白色粉末
(2)分子式:C25H21N5O3
HRFAB-MS (m/z) [M+H]+ 計算値440.1723, 実測値440.1771
(3)分子量:439
FAB-MS(m/z) で[M+H]+ 440, [M+Na]+ 462 を観測
(4)紫外部吸収スペクトル:エタノール溶液中で測定した紫外部吸収スペクトルは図1に示すとおりであり、λmax (EtOH,ε): 206 (38820), 226 (30187), 267 (9916), 278 (9408), 303 (3726), 315 (2977) nmの吸収を示す。
(5)赤外部吸収スペクトル:臭化カリウム錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは図2に示すとおりであり、νmax 3448, 1716, 1623cm-1等に特徴的な吸収極大を示す。
(6)比旋光度: [α] D 22 - 44.68 °(c=0.01、エタノール)
(7)溶剤に対する溶解性:クロロホルムや酢酸エチルに易溶。メタノール、エタノールやアセトニトリルに可溶。水に不溶。
(8)プロトン及びカーボン核磁気共鳴スペクトル:重クロロホルム中で、バリアン社製300MHz核磁気共鳴スペクトロメータで測定した水素の化学シフト(ppm )及び炭素の化学シフト(ppm )は下記に示すとおりである。
δC : 25.0, 29.7, 33.9, 53.0, 53.5, 56.5, 60.6, 69.4, 91.8, 116.8, 120.95, 123.9, 126.7, 127.1, 127.3, 127.8, 129.6, 135.0, 136.8, 137.7, 146.6, 151.1, 158.7, 170.7, 174.1 ppm
以上のように、FKI-1746-1物質の各種理化学性状やスペクトルデータを詳細に検討した結果 FKI-1746-1 物質は下記の式[I]で表される化学構造であることが決定された。
(1)性状:黄色粉末
(2)分子式:C27H27N5O4
HRFAB-MS (m/z) [M+H]+ 計算値486.2141, 実測値486.2126
(3)分子量:485
FAB-MS(m/z) で[M+H]+ 486, [M+Na]+ 508 を観測
(4)紫外部吸収スペクトル:エタノール溶液中で測定した紫外部吸収スペクトルは図1に示すとおりであり、λmax (EtOH,ε): 209 (42756), 300 (10180) nmの吸収を示す。
(5)赤外部吸収スペクトル:臭化カリウム錠剤法で測定した赤外吸収スペクトルは図2に示すとおりであり、νmax 3432, 1685, 1596cm-1 等に特徴的な吸収極大を示す。
(6)比旋光度: [α] D 22 - 19.56 °(c=0.01、エタノール)
(7)溶剤に対する溶解性:メタノール、クロロホルムや酢酸エチルに可溶。水に不溶。
(8)プロトン及びカーボン核磁気共鳴スペクトル:重クロロホルム中で、バリアン社製300MHz核磁気共鳴スペクトロメータで測定した水素の化学シフト(ppm )及び炭素の化学シフト(ppm )は下記に示すとおりである。
δC : 21.2, 21.9, 24.8, 25.6, 40.2, 51.3, 65.7, 74.4, 77.9, 115.9, 119.8, 120.5, 124.2, 125.5, 127.0, 127.6 (x2), 130.4, 132.7, 134.9, 136.7, 137.8, 145.2, 146.9, 160.4, 168.0, 173.9 ppm
以上のように、FKI-1746-2物質の各種理化学性状やスペクトルデータを詳細に検討した結果、FKI-1746-2物質は下記の式[II]で表される化学構造であることが決定された。
寒天斜面培地 (グリセロール 0.1 % (関東化学) 、KH2PO4 0.08 % (関東化学) 、K2HPO4 0.02 % (関東化学) 、MgSO4 ・7H2O 0.02 % (和光純薬) 、KCl 0.02 % (関東化学) 、NaNO3 0.2 % (和光純薬) 、酵母エキス 0.02%(オリエンタル酵母)、寒天 1.5 %(清水食品)、pH 6.0に調製) で培養したFKI-1746株を、種培地 (グルコース 2 % (和光純薬) 、ポリペプトン 0.5 % (和光純薬) 、MgSO4 ・7H2O 0.05 % (和光純薬) 、酵母エキス 0.2 % (オリエンタル酵母) 、KH2PO4 0.1 % (関東化学) 、寒天 0.1% (清水食品)pH 6.0に調製) 10 mL を分注した大試験管に一白金耳ずつ接種し、27°C で 3日間ロータリーシェイカー (210 rpm)で培養した後、生産培地 (グリセロール 3.0 % (関東化学) 、オートミール 2.0 % (日本食品製造合資) 、ダイゴ人工海水1.8%(日本製薬)、乾燥酵母 1.0 % (旭化成) 、KH2PO4 1.0 % (関東化学) 、Na2HPO4 1.0 % (関東化学) 、MgCl2 ・6H2O 0.5 % (関東化学) 、 pH 未調整) 3 L を分注した 500 mL 容三角フラスコに 1% 植菌し、27°C で 3日間振とう培養後、さらに 10 日間静置培養を行った。
寒天斜面培地 (グリセロール 0.1 % (関東化学) 、KH2PO4 0.08 % (関東化学) 、K2HPO4 0.02 % (関東化学) 、MgSO4 ・7H2O 0.02 % (和光純薬) 、KCl 0.02 % (関東化学) 、NaNO3 0.2 % (和光純薬) 、酵母エキス 0.02%(オリエンタル酵母)、寒天 1.5 %(清水食品)、pH 6.0に調整) で培養したFKI-1746株を、種培地 (グルコース 2 % (和光純薬) 、ポリペプトン 0.5 % (和光純薬) 、MgSO4 ・7H2O 0.05 % (和光純薬) 、酵母エキス 0.2 % (オリエンタル酵母) 、KH2PO4 0.1 % (関東化学) 、寒天 0.1% (清水食品)pH 6.0に調製) 100 mLを分注した500 mL容三角フラスコに一白金耳ずつ接種し、27°C で 3日間ロータリーシェイカー (210 rpm)で培養した後、生産培地 (グリセロール 3.0 % (関東化学) 、オートミール 2.0 % (日本食品製造合資) 、乾燥酵母 1.0 % (旭化成) 、KH2 PO4 1.0 % (関東化学) 、Na2HPO4 1.0 % (関東化学) 、MgCl2 ・6H2O 0.5 % (関東化学) 、 pH 未調製) 20 Lを分注した 30 L 容ジャーファーメンターに 1% 植菌し、27°C で 7日間培養した。
本発明のFKI-1746-1物質およびFKI-1746-2物質のマウス腹腔マクロファージ内でのコレステリルエステル及びトリアシルグリセロールの形成に対する阻害作用を以下の方法により試験した。
マウス腹腔より単離したマクロファージを6.8%リポ蛋白質欠乏血清含有のダルベッコ改変イーグル培地(6.8%LPDS-DMEM 培地)に2.0 ×105 cells/mlで懸濁して、48穴マイクロプレート(Corning 社製)に0.25 ml ずつまく。
Claims (4)
- アスペルギルス属に属し、FKI-1746-1物質を生産する能力を有する微生物アスペルギルス・クラバトナニクスFKI-1746 (Aspergillus clavatonanicus FKI-1746) (FERM P-21482) を培地に培養し、培養物中にFKI-1746-1物質を蓄積せしめ、該培養物からFKI-1746-1物質を採取することを特徴とする、請求項1記載のFKI-1746-1物質の製造法。
- アスペルギルス属に属し、請求項1記載のFKI-1746-1物質を生産する能力を有する微生物であるアスペルギルス・クラバトナニクスFKI-1746 (Aspergillus clavatonanicus FKI-1746) (FERM P-21482) 。
- 請求項1記載のFKI-1746-1物質を有効成分とする、マクロファージの脂肪滴蓄積阻害剤。
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