JPH0751052A - スポロルミエラ・インテルメディアとそれを利用するプロセス - Google Patents
スポロルミエラ・インテルメディアとそれを利用するプロセスInfo
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- JPH0751052A JPH0751052A JP4210630A JP21063092A JPH0751052A JP H0751052 A JPH0751052 A JP H0751052A JP 4210630 A JP4210630 A JP 4210630A JP 21063092 A JP21063092 A JP 21063092A JP H0751052 A JPH0751052 A JP H0751052A
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- compound
- intermedia
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 下記式
【化１】
の化合物を発酵生産できるスポロルミエラ・インテルメ
ディアを複数株、草食動物の糞から単離し、株として確
立した。 【効果】 上記微生物は、スクワレンシンセターゼ活性
を阻害する活性を有し、抗コレステロール血漿の治療に
有用な上記化合物の発酵生産を行なうことができる。
ディアを複数株、草食動物の糞から単離し、株として確
立した。 【効果】 上記微生物は、スクワレンシンセターゼ活性
を阻害する活性を有し、抗コレステロール血漿の治療に
有用な上記化合物の発酵生産を行なうことができる。
Description
【０００１】過コレステリン血症は、動脈硬化症等の虚
血性心臓血管疾患の主要な危険因子の１つとして知られ
る。胆汁酸金属イオン封鎖物がこの症状の治療に用いら
れてきたが、これらは中程度に効果的であると思われる
が、大量に、すなわち１回に数グラム用いる必要があ
り、あまり味がよくない。現在市販されているＭＥＶＡ
ＣＯＲ（商標）（ロバスタチン）は、酵素ＨＭＧ−Ｃｏ
Ａリダクターゼを阻害することでコレステロールの生体
内合成を抑制して作用する一群の非常に活性のある抗過
コレステリン血症剤の１つである。スクアレンシンセタ
ーゼは、デノボのコレステロール生体内合成経路の最初
の始動反応において酵素に関わる。この酵素は、２分子
のファルネシルピロリン酸を還元二量体化してスクアレ
ンを形成するのを触媒する。コレステロール合成におけ
るこの開始反応の阻害は、ユビキノン、ドリコール及び
イソペンテノイルｔ−ＲＮＡへの経路を妨げないことが
必要とされる。これまでのスクアレンシンセターゼを阻
害する努力は、Ｐ．Ｏrtiz de Ｍontellano ら、Ｊ．Ｍ
ed. Ｃhem. ，２０，２４３（１９７７）及び Ｅ．Ｊ．
ＣoreyとＲ．Ｖolante, Ｊ．Ａm．Ｃhem．Ｓoc．，９
８，１２９１（１９７６）に述べられているような化合
物を含んだピロリン酸又はピロリン酸類似体を用いてい
た。Ｓ．Ｂiller（米国特許第４，８７１，７２１号）
は、スクアレンシンセターゼの阻害剤としてイソプレノ
イド（ホスフィニルメチル）ホスホン酸塩について述べ
ている。
血性心臓血管疾患の主要な危険因子の１つとして知られ
る。胆汁酸金属イオン封鎖物がこの症状の治療に用いら
れてきたが、これらは中程度に効果的であると思われる
が、大量に、すなわち１回に数グラム用いる必要があ
り、あまり味がよくない。現在市販されているＭＥＶＡ
ＣＯＲ（商標）（ロバスタチン）は、酵素ＨＭＧ−Ｃｏ
Ａリダクターゼを阻害することでコレステロールの生体
内合成を抑制して作用する一群の非常に活性のある抗過
コレステリン血症剤の１つである。スクアレンシンセタ
ーゼは、デノボのコレステロール生体内合成経路の最初
の始動反応において酵素に関わる。この酵素は、２分子
のファルネシルピロリン酸を還元二量体化してスクアレ
ンを形成するのを触媒する。コレステロール合成におけ
るこの開始反応の阻害は、ユビキノン、ドリコール及び
イソペンテノイルｔ−ＲＮＡへの経路を妨げないことが
必要とされる。これまでのスクアレンシンセターゼを阻
害する努力は、Ｐ．Ｏrtiz de Ｍontellano ら、Ｊ．Ｍ
ed. Ｃhem. ，２０，２４３（１９７７）及び Ｅ．Ｊ．
ＣoreyとＲ．Ｖolante, Ｊ．Ａm．Ｃhem．Ｓoc．，９
８，１２９１（１９７６）に述べられているような化合
物を含んだピロリン酸又はピロリン酸類似体を用いてい
た。Ｓ．Ｂiller（米国特許第４，８７１，７２１号）
は、スクアレンシンセターゼの阻害剤としてイソプレノ
イド（ホスフィニルメチル）ホスホン酸塩について述べ
ている。
【０００２】要約するに本発明は、リンを全く含まない
スクアレンシンセターゼ阻害剤を生産するスポロルミエ
ラ・インテルメディア（Ｓporormiella intermedia）の
株を提供する。
スクアレンシンセターゼ阻害剤を生産するスポロルミエ
ラ・インテルメディア（Ｓporormiella intermedia）の
株を提供する。
【０００３】以下本発明を詳細に説明する。本発明は、
スクアレンシンセターゼ阻害剤である構造式（Ｉ）；
スクアレンシンセターゼ阻害剤である構造式（Ｉ）；
【化４】 を有する化合物を生産する新奇な微生物を目的とする。
構造式（Ｉ）の化合物は、コレステロール降下剤及び抗
真菌剤として有用である。構造式（Ｉ）の化合物はＳpo
rormiella intermediaの好気発酵によって調製する。さ
らに特定すると、用いる株は、ＭＦ５６５１、ＭＦ５６
５２、ＭＦ５６５５、ＭＦ５６５６、ＭＦ５６５７、Ｍ
Ｆ５６６３又はその変異体から選ばれる。
構造式（Ｉ）の化合物は、コレステロール降下剤及び抗
真菌剤として有用である。構造式（Ｉ）の化合物はＳpo
rormiella intermediaの好気発酵によって調製する。さ
らに特定すると、用いる株は、ＭＦ５６５１、ＭＦ５６
５２、ＭＦ５６５５、ＭＦ５６５６、ＭＦ５６５７、Ｍ
Ｆ５６６３又はその変異体から選ばれる。
【０００４】ＭＦ５６５１の培養物は、ヘラジカ（アリ
ゾナ）の糞から単離した糞生菌Ｓporormiella intermed
iaの培養株である。この培養は、ＭＤ ２０８５２、Ｒ
ockville、１２３０１ Ｐark-lawn Ｄrive にあるＡme
rican Ｔype Ｃulture Ｃollection（ＡＴＣＣ）に、Ａ
ＴＣＣ ７４０７２として寄託されている。ＭＦ５６５
２の培養物は、キリン（ケニア）の糞から単離した糞生
菌Ｓporormiella intermediaの培養株である。この培養
は、ＡＴＣＣ ７４０７３として寄託されている。ＭＦ
５６５５の培養物は、ヤギ（ギリシャ）の糞から単離し
た糞生菌スポロルミエラ・インテルメディアの培養株で
ある。この培養株は、ＡＴＣＣ ７４０７４として寄託
されている。ＭＦ５６５６の培養物は、ヤギ（ギリシ
ャ）の糞から単離した糞生菌スポロルミエラ・インテル
メディアの培養株である。この培養株は、ＡＴＣＣ ７
４０７５として預けられている。培養株ＭＦ５６５５
は、ヤギ（ギリシャ）の糞から単離した糞生菌スポロル
ミエラ・インテルメディアの培養株である。この培養株
は、ＡＴＣＣ ７４０７６として預けられている。ＭＦ
５６６３の培養物は、ヤギ（ギリシャ）の糞から単離し
た糞生菌スポロルミエラ・インテルメディアの培養株で
ある。この培養株は、ＡＴＣＣ ７４０８３として預け
られている。
ゾナ）の糞から単離した糞生菌Ｓporormiella intermed
iaの培養株である。この培養は、ＭＤ ２０８５２、Ｒ
ockville、１２３０１ Ｐark-lawn Ｄrive にあるＡme
rican Ｔype Ｃulture Ｃollection（ＡＴＣＣ）に、Ａ
ＴＣＣ ７４０７２として寄託されている。ＭＦ５６５
２の培養物は、キリン（ケニア）の糞から単離した糞生
菌Ｓporormiella intermediaの培養株である。この培養
は、ＡＴＣＣ ７４０７３として寄託されている。ＭＦ
５６５５の培養物は、ヤギ（ギリシャ）の糞から単離し
た糞生菌スポロルミエラ・インテルメディアの培養株で
ある。この培養株は、ＡＴＣＣ ７４０７４として寄託
されている。ＭＦ５６５６の培養物は、ヤギ（ギリシ
ャ）の糞から単離した糞生菌スポロルミエラ・インテル
メディアの培養株である。この培養株は、ＡＴＣＣ ７
４０７５として預けられている。培養株ＭＦ５６５５
は、ヤギ（ギリシャ）の糞から単離した糞生菌スポロル
ミエラ・インテルメディアの培養株である。この培養株
は、ＡＴＣＣ ７４０７６として預けられている。ＭＦ
５６６３の培養物は、ヤギ（ギリシャ）の糞から単離し
た糞生菌スポロルミエラ・インテルメディアの培養株で
ある。この培養株は、ＡＴＣＣ ７４０８３として預け
られている。
【０００５】一般に、本発明のスポロルミエラ・インテ
ルメディアの株は、糞生菌である。多くの糞生菌は糞の
中で特異的に生育し伝播していくのに適応しており、他
の基質中にはあまり生じない。糞生菌コミュニティーの
内部では、時間の経過につれてはっきりした種の交代が
生じるためいろいろな菌を収集することができる。糞生
菌は、進化系統的に多岐の種類にわたる。糞生菌のうち
で最も特徴的な群の１つは、スポロルミア（Ｓporormi
a）、スポロルミエラ（Ｓporormiella）及びプロイシア
（Ｐreussia）属中に様々に分類される子嚢菌類（Ａsco
mycetes）である。これらの腐生菌は、とくに草食性動
物の糞中に多くみられるが、必ずしもそこに限定されな
い。これら菌類は、乾燥地帯の糞中に高頻度に見出され
るが、この理由は、糞の分解速度が遅いためにこれら糞
生菌が糞中に蓄積できる時間が長いからである（Ｓ．
Ｉ．Ａhmed と Ｒ．Ｆ．Ｃain、１９７２、Ｒevision o
f the genera Ｓporormia and Ｓporormiella（スポロ
ルミア及びスポロルミエラ属の改訂）Ｃanadian Ｊourn
al of Ｂotany、５０：４１９〜４４７；Ｄ．Ｔ．Ｗick
low、１９８１、Ｔhe coprophilous community：a myco
logical community for examining ecological ideas
（糞生コミュニティー：エコロジーの概念を調べるため
の菌類学的コミュニティー）ｐｐ．４７〜７６．Ｔhe f
ungal community,its organization and role in the e
cosystem（菌類コミュニティー、そのエコシステムにお
ける構成と役割）に収録、Ｄ．Ｔ．Ｗicklow とＧ．
Ｃ．Ｃarroll 編、Ｍarcel Ｄekker, Ｉnc.）。これら
の菌類は、頻度はずっと低くなるが、土壌腐生菌及び木
本の宿主非特異的内生菌でもある。
ルメディアの株は、糞生菌である。多くの糞生菌は糞の
中で特異的に生育し伝播していくのに適応しており、他
の基質中にはあまり生じない。糞生菌コミュニティーの
内部では、時間の経過につれてはっきりした種の交代が
生じるためいろいろな菌を収集することができる。糞生
菌は、進化系統的に多岐の種類にわたる。糞生菌のうち
で最も特徴的な群の１つは、スポロルミア（Ｓporormi
a）、スポロルミエラ（Ｓporormiella）及びプロイシア
（Ｐreussia）属中に様々に分類される子嚢菌類（Ａsco
mycetes）である。これらの腐生菌は、とくに草食性動
物の糞中に多くみられるが、必ずしもそこに限定されな
い。これら菌類は、乾燥地帯の糞中に高頻度に見出され
るが、この理由は、糞の分解速度が遅いためにこれら糞
生菌が糞中に蓄積できる時間が長いからである（Ｓ．
Ｉ．Ａhmed と Ｒ．Ｆ．Ｃain、１９７２、Ｒevision o
f the genera Ｓporormia and Ｓporormiella（スポロ
ルミア及びスポロルミエラ属の改訂）Ｃanadian Ｊourn
al of Ｂotany、５０：４１９〜４４７；Ｄ．Ｔ．Ｗick
low、１９８１、Ｔhe coprophilous community：a myco
logical community for examining ecological ideas
（糞生コミュニティー：エコロジーの概念を調べるため
の菌類学的コミュニティー）ｐｐ．４７〜７６．Ｔhe f
ungal community,its organization and role in the e
cosystem（菌類コミュニティー、そのエコシステムにお
ける構成と役割）に収録、Ｄ．Ｔ．Ｗicklow とＧ．
Ｃ．Ｃarroll 編、Ｍarcel Ｄekker, Ｉnc.）。これら
の菌類は、頻度はずっと低くなるが、土壌腐生菌及び木
本の宿主非特異的内生菌でもある。
【０００６】これらの菌類がしばしば乾燥した環境での
草食動物の糞にコロニーを作ることを知っていれば、確
実にそれらを純粋な培養へと単離できる。これは、乾燥
地帯の糞を集めることにより行なうことができる。この
ような地帯は、もっぱら砂漠の植物、地中海性タイプの
植物で占められており、砂漠の低木地域、草原地域又は
サバンナである。糞はモイストチャンバーで、１００％
又はそれに近い相対湿度で、子嚢果が発達してくるまで
約１〜８週間インキュベートすることができる。その後
成熟した子嚢胞子を、細い針で実体顕微鏡下で子嚢内か
ら切り出して、各種の標準菌類培地に移して、培養を開
始する。別の方法としては、木本の生きた幹の細片をあ
つめ、この幹の表面を滅菌して、抗生物質を含んだ標準
イースト−麦芽エキス寒天培地にこの細片を置くことに
よりこれらの菌を得ることもできる。（Ｐetrini, Ｏ.
１９８６, Ｔaxonomy of endophytic fungi of aerial
plant tissue（気性植物の内生菌の分類学）、Ｍicrobi
ology of Ｐhyllosphere（葉圏の微生物学）収録、Ｎ．
Ｊ．Ｆokkema と Ｊ. van den Ｈeuval編、Ｃambridge
Ｕniv. Ｐress）。
草食動物の糞にコロニーを作ることを知っていれば、確
実にそれらを純粋な培養へと単離できる。これは、乾燥
地帯の糞を集めることにより行なうことができる。この
ような地帯は、もっぱら砂漠の植物、地中海性タイプの
植物で占められており、砂漠の低木地域、草原地域又は
サバンナである。糞はモイストチャンバーで、１００％
又はそれに近い相対湿度で、子嚢果が発達してくるまで
約１〜８週間インキュベートすることができる。その後
成熟した子嚢胞子を、細い針で実体顕微鏡下で子嚢内か
ら切り出して、各種の標準菌類培地に移して、培養を開
始する。別の方法としては、木本の生きた幹の細片をあ
つめ、この幹の表面を滅菌して、抗生物質を含んだ標準
イースト−麦芽エキス寒天培地にこの細片を置くことに
よりこれらの菌を得ることもできる。（Ｐetrini, Ｏ.
１９８６, Ｔaxonomy of endophytic fungi of aerial
plant tissue（気性植物の内生菌の分類学）、Ｍicrobi
ology of Ｐhyllosphere（葉圏の微生物学）収録、Ｎ．
Ｊ．Ｆokkema と Ｊ. van den Ｈeuval編、Ｃambridge
Ｕniv. Ｐress）。
【０００７】これら菌類のより直接的な単離方法は、少
量（０．５〜２ｇ）の乾燥した糞を粉状にして、滅菌水
で段階希釈してから、０．１〜１．０ｍｌの懸濁液を、
ＤＰＹ培地及びＣＭＣ培地等の選択的菌類培地に適用す
ることである。より選択的な方法は、流水下で糞の懸濁
液を２枚の金属メッシュを通して濾過することである。
粉状にした糞をまずポアサイズ１０５μｍの上段のメッ
シュを通して洗浄し、次に９０μｍの下段のメッシュを
通す。粒子は１５〜３０分間水で連続的に洗浄する。上
段のメッシュは通過するが下段のメッシュにより保持さ
れる粒子を、次に選択的菌類培地の表面にひろげて、こ
れを菌のコロニーが発達するまでインキュベートする。
スポロルミエラのコロニーは、一般に、その灰色ないし
黒い色、ビロード状の表面、及びゆっくりした生育速度
を特徴とする。次に、これらの最初のコロニーの菌糸断
片を新しい寒天培地に移して、純粋培養を得ることがで
きる。
量（０．５〜２ｇ）の乾燥した糞を粉状にして、滅菌水
で段階希釈してから、０．１〜１．０ｍｌの懸濁液を、
ＤＰＹ培地及びＣＭＣ培地等の選択的菌類培地に適用す
ることである。より選択的な方法は、流水下で糞の懸濁
液を２枚の金属メッシュを通して濾過することである。
粉状にした糞をまずポアサイズ１０５μｍの上段のメッ
シュを通して洗浄し、次に９０μｍの下段のメッシュを
通す。粒子は１５〜３０分間水で連続的に洗浄する。上
段のメッシュは通過するが下段のメッシュにより保持さ
れる粒子を、次に選択的菌類培地の表面にひろげて、こ
れを菌のコロニーが発達するまでインキュベートする。
スポロルミエラのコロニーは、一般に、その灰色ないし
黒い色、ビロード状の表面、及びゆっくりした生育速度
を特徴とする。次に、これらの最初のコロニーの菌糸断
片を新しい寒天培地に移して、純粋培養を得ることがで
きる。
【０００８】
【表１】選択的菌類培地の組成を以下に示す：ＤＰＹ培地 デキストロース ５.０ ｇ ペプトン １.０ ｇ イースト抽出物 ２.０ ｇ ＮＨ4ＯＨ １.０ ｇ Ｋ2Ｈ2ＰＯ4 １.０ ｇ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.５ ｇ ＦｅＣｌ3・６Ｈ2Ｏ ０.５mlの１％（w/v）溶液 Ｏxgall（乾燥したウシ胆汁） ５.０ ｇ プロピオン酸ナトリウム １.０ ｇ 寒 天 ２０.０ ｇ 水 １０００ ml オートクレーブ２０分（１２１℃、１５psi） オートクレーブ後に以下を加える： クロロテトラサイクリン ５０.０ mg 硫酸ストレプトマイシン ５０.０ mg （又は他のどのような適当な抗細菌抗生物質でもよい）
【表２】ＣＭＣ培地 ナトリウムカルボキシメチルセルロース １０.０ ｇ イースト抽出物 ０.５ ｇ （ＮＨ4）2ＳＯ4 １.０ ｇ ＮａＮＯ3 ２.０ ｇ ＫＨ2ＰＯ4 １.０ ｇ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.５ ｇ ＫＣｌ ０.５ ｇ ＣａＣｌ2 ０.０５ｇ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.０１ｇ ＣｕＳＯ4 ０.０１ｇ ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ ０.００５ｇ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.００１ｇ 寒 天 １５.０ ｇ 水 １０００ ml オートクレーブ２０分（１２１℃、１５psi） オートクレーブ後に以下を加える： クロロテトラサイクリン ５０.０ mg 硫酸ストレプトマイシン ５０.０ mg （又は他のどのような適当な抗細菌抗生物質でもよい）
【０００９】スポロルミエラ・インテルメディアの株
は、以下の形態学的特徴を示す。コロニーは比較的生育
が遅い：２週間で、コーンミール寒天（Ｄifco Ｌabora
tories）上では１０〜１５ｍｍ；オートミール寒天（Ｄ
ifco Ｌaboratories）上では１０〜１５ｍｍ；Ｖ８ジュ
ース寒天（２００ｍリットルのＶ８ジュース、Ｃampbel
l Ｓoup Ｃo. とＣａＣＯ3３ｇと寒天２０ｇを蒸留水で
１ｌにしたもの）上では１５〜２０ｍｍの直径に達す
る。オートミール寒天上では、わずかに盛り上がり、約
０．５〜１ｍｍの深さがあって、周辺部は培地中に入っ
ている。表面はフェルト状ないしビロード状、若いうち
はクリーム色で、やがて灰色から暗灰色、あるいは最終
的に暗いオリーブがかった灰色ないしほとんど黒色とな
る。ＣartridgeＢuff（大文字の色名はＲidgway. Ｒの
Ｃolor Ｓtandards and Ｎomenclature（色見本と命名
法）、Ｗashington, Ｄ．Ｃ．１９１２より）、Ｍargue
rite Ｙellow Ｏlive, Ｂuff, Ｌight Ｇrayish Ｏliv
e, Ｇrayish Ｏlive, ＤeepＧrayish Ｏlive, Ｉron Ｇ
ray, Ｏlivaceous Ｂlack となってゆく。裏面はにぶい
黄色がかったオリーブ色から、オリーブがかった灰色、
そして暗いオリーブがかった灰色である。臭気と分泌物
は見られない。２〜３週後にはしばしば広範囲にわたる
つやなしないし光沢がある、黒色子座（ストロマ）領域
がコロニーに発達する。子座領域には多くの密集〜簇生
する偽子のう殻原基が埋め込まれている。多くの株では
コロニーは、異常で生育の悪いセクターが生じる傾向が
強く、とくに継代をくりかえしたあとはそうである。こ
れらのセクターは、一般に、色がより淡く、ストロマ及
び／又は偽子嚢殻を分化する能力を失なうか低下してい
る。
は、以下の形態学的特徴を示す。コロニーは比較的生育
が遅い：２週間で、コーンミール寒天（Ｄifco Ｌabora
tories）上では１０〜１５ｍｍ；オートミール寒天（Ｄ
ifco Ｌaboratories）上では１０〜１５ｍｍ；Ｖ８ジュ
ース寒天（２００ｍリットルのＶ８ジュース、Ｃampbel
l Ｓoup Ｃo. とＣａＣＯ3３ｇと寒天２０ｇを蒸留水で
１ｌにしたもの）上では１５〜２０ｍｍの直径に達す
る。オートミール寒天上では、わずかに盛り上がり、約
０．５〜１ｍｍの深さがあって、周辺部は培地中に入っ
ている。表面はフェルト状ないしビロード状、若いうち
はクリーム色で、やがて灰色から暗灰色、あるいは最終
的に暗いオリーブがかった灰色ないしほとんど黒色とな
る。ＣartridgeＢuff（大文字の色名はＲidgway. Ｒの
Ｃolor Ｓtandards and Ｎomenclature（色見本と命名
法）、Ｗashington, Ｄ．Ｃ．１９１２より）、Ｍargue
rite Ｙellow Ｏlive, Ｂuff, Ｌight Ｇrayish Ｏliv
e, Ｇrayish Ｏlive, ＤeepＧrayish Ｏlive, Ｉron Ｇ
ray, Ｏlivaceous Ｂlack となってゆく。裏面はにぶい
黄色がかったオリーブ色から、オリーブがかった灰色、
そして暗いオリーブがかった灰色である。臭気と分泌物
は見られない。２〜３週後にはしばしば広範囲にわたる
つやなしないし光沢がある、黒色子座（ストロマ）領域
がコロニーに発達する。子座領域には多くの密集〜簇生
する偽子のう殻原基が埋め込まれている。多くの株では
コロニーは、異常で生育の悪いセクターが生じる傾向が
強く、とくに継代をくりかえしたあとはそうである。こ
れらのセクターは、一般に、色がより淡く、ストロマ及
び／又は偽子嚢殻を分化する能力を失なうか低下してい
る。
【００１０】子嚢果は偽子嚢殻である。偽子嚢殻は、蛍
光灯連続照射下２５℃のオートミール寒天培地上では２
〜３週間で目に見えるようになり、４〜５週間で成熟す
る。偽子嚢殻は単独ないしぎっしりと簇生しており、上
部の１０〜５０％が表面から出て埋め込まれている。直
径２００〜３００μｍで球状ないしほぼ球状で、先端パ
ピラ（乳頭）のあるものとないものがあり、孔口はな
く、無毛で、光沢がなく、一様に黒色である。人工培養
では偽子嚢殻は４〜８週間以内にしばしば消滅しかかっ
て、完全に成熟することがない。発達は、子嚢原基と側
糸の形成だけで止まる。子嚢殻は薄く、１〜２個の細胞
の厚さであり、多角形組織である。子嚢壁細胞は等直径
形で、直径４〜８μｍで、ＫＯＨ中で灰色ないし暗いオ
リーブがかった灰色である。子嚢は多く、共通基底部か
ら生じており、二重壁構造で、８つの胞子があり、円筒
状で直線又はわずかに湾曲している。頂端は広く丸く、
１２０〜１８０×２０〜３５μｍではっきりとした基部
ストークを持ち、基部ストークは７〜１１μｍの長さが
ある。側糸は多く、子嚢と相互にからみ合っていて、糸
状で幅１〜３μｍで隔壁の間隔は子嚢の長さとほぼ同じ
である。子嚢内の子嚢胞子は２段に生じ、４２〜５８×
１０〜１２μｍであり、４細胞から成り、隔壁は深くく
びれている。頂端細胞は先端が丸いか、細くなり、中央
の細胞は長円形ないし樽形であって、各細胞にはっきり
しない発芽スリットがあって、子嚢胞子全体が薄く、光
を屈折する透明な鞘につつまれており、細胞はしばしば
容易にバラバラになる。ＫＯＨ中では暗いオリーブがか
った灰色である。
光灯連続照射下２５℃のオートミール寒天培地上では２
〜３週間で目に見えるようになり、４〜５週間で成熟す
る。偽子嚢殻は単独ないしぎっしりと簇生しており、上
部の１０〜５０％が表面から出て埋め込まれている。直
径２００〜３００μｍで球状ないしほぼ球状で、先端パ
ピラ（乳頭）のあるものとないものがあり、孔口はな
く、無毛で、光沢がなく、一様に黒色である。人工培養
では偽子嚢殻は４〜８週間以内にしばしば消滅しかかっ
て、完全に成熟することがない。発達は、子嚢原基と側
糸の形成だけで止まる。子嚢殻は薄く、１〜２個の細胞
の厚さであり、多角形組織である。子嚢壁細胞は等直径
形で、直径４〜８μｍで、ＫＯＨ中で灰色ないし暗いオ
リーブがかった灰色である。子嚢は多く、共通基底部か
ら生じており、二重壁構造で、８つの胞子があり、円筒
状で直線又はわずかに湾曲している。頂端は広く丸く、
１２０〜１８０×２０〜３５μｍではっきりとした基部
ストークを持ち、基部ストークは７〜１１μｍの長さが
ある。側糸は多く、子嚢と相互にからみ合っていて、糸
状で幅１〜３μｍで隔壁の間隔は子嚢の長さとほぼ同じ
である。子嚢内の子嚢胞子は２段に生じ、４２〜５８×
１０〜１２μｍであり、４細胞から成り、隔壁は深くく
びれている。頂端細胞は先端が丸いか、細くなり、中央
の細胞は長円形ないし樽形であって、各細胞にはっきり
しない発芽スリットがあって、子嚢胞子全体が薄く、光
を屈折する透明な鞘につつまれており、細胞はしばしば
容易にバラバラになる。ＫＯＨ中では暗いオリーブがか
った灰色である。
【００１１】本出願書で請求するスポロルミエラ・イン
テルメディアの生物学的純粋培養とは、自然環境から単
離され、生存する混入微生物が存在しないものと定義す
る。本出願書で請求するスポロルミエラ・インテルメデ
ィアの培養とは、自然環境から単離され構造式（Ｉ）の
化合物の発酵に有害な生存混入微生物が存在しないもの
と定義する。本出願書で述べる微生物の活性突然変異体
は、１つ又はそれ以上の突然変異を持ち、構造式（Ｉ）
の化合物を生産し得る培養であると定義する。一般に、
特定の二次中間代謝物の形成は予測不可能であるのだ
が、出願者らは、スポロルミエラ・インテルメディアの
株がスクアレンシンセターゼの阻害物質で構造式（Ｉ）
の化合物を生産する能力に関して、化学的分類学上類似
していることを発見した。これらの株は、迅速な２工程
のスクリーニングによって容易に検出できる。株を単離
して液体栄養培地で培養する。少量のサンプルを経時的
にとり出し、最終発酵ブロスは凍結保存する。第１のス
クリーニング工程では、少量のサンプルを用いる。これ
らのサンプルは、有機溶媒で抽出する。有機相を濃縮し
て、後述のスクアレンシンセターゼアッセイでテストす
る。スクアレンシンセターゼの活性を阻害する化合物の
存在は、サンプルのスクアレンシンセターゼの活性を、
コントロールのスクアレンシンセターゼの活性と比較し
て決定する。スクアレンシンセターゼアッセイで陽性の
結果を示す発酵ブロスを、スクリーニングの第２の工程
でテストする。凍結した発酵ブロスを解凍して、有機溶
媒で抽出する。有機相を濃縮して高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）で分析する。構造式（Ｉ）の化合物
の存在を、純粋な（Ｉ）のクロマトグラムと抽出したサ
ンプルのクロマトグラムの比較により決定する。抽出物
中の（Ｉ）の存在の確認は、分離した成分のＵＶスペク
トル及び分離した成分とその誘導体のＭＳデータにより
行なう。
テルメディアの生物学的純粋培養とは、自然環境から単
離され、生存する混入微生物が存在しないものと定義す
る。本出願書で請求するスポロルミエラ・インテルメデ
ィアの培養とは、自然環境から単離され構造式（Ｉ）の
化合物の発酵に有害な生存混入微生物が存在しないもの
と定義する。本出願書で述べる微生物の活性突然変異体
は、１つ又はそれ以上の突然変異を持ち、構造式（Ｉ）
の化合物を生産し得る培養であると定義する。一般に、
特定の二次中間代謝物の形成は予測不可能であるのだ
が、出願者らは、スポロルミエラ・インテルメディアの
株がスクアレンシンセターゼの阻害物質で構造式（Ｉ）
の化合物を生産する能力に関して、化学的分類学上類似
していることを発見した。これらの株は、迅速な２工程
のスクリーニングによって容易に検出できる。株を単離
して液体栄養培地で培養する。少量のサンプルを経時的
にとり出し、最終発酵ブロスは凍結保存する。第１のス
クリーニング工程では、少量のサンプルを用いる。これ
らのサンプルは、有機溶媒で抽出する。有機相を濃縮し
て、後述のスクアレンシンセターゼアッセイでテストす
る。スクアレンシンセターゼの活性を阻害する化合物の
存在は、サンプルのスクアレンシンセターゼの活性を、
コントロールのスクアレンシンセターゼの活性と比較し
て決定する。スクアレンシンセターゼアッセイで陽性の
結果を示す発酵ブロスを、スクリーニングの第２の工程
でテストする。凍結した発酵ブロスを解凍して、有機溶
媒で抽出する。有機相を濃縮して高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）で分析する。構造式（Ｉ）の化合物
の存在を、純粋な（Ｉ）のクロマトグラムと抽出したサ
ンプルのクロマトグラムの比較により決定する。抽出物
中の（Ｉ）の存在の確認は、分離した成分のＵＶスペク
トル及び分離した成分とその誘導体のＭＳデータにより
行なう。
【００１２】ＭＦ５６５１の培養物は、スポロルミエラ
・インテルメディアと同定されて、前掲の一般的記述及
びＳ．Ｉ．Ａhmed とＲ．Ｆ．Ｃain のＲevision of th
e genera Ｓporormia and Ｓporormiella（スポロルミ
ア及びスポロルミエラ属に関する改訂）（Ｃanadian Ｊ
ournal of Ｂotany ５０：４１９〜４７７、（１９７
２））の記述において説明されているようなこの種に本
質的な形態学的特徴を示す。これらの標徴的形態学上の
特徴には以下が含まれる：比較的遅い生育、ポテトデキ
ストロース、オートミール、又は麦芽−イーストエキス
寒天等の標準的真菌類培地上で淡灰色、暗灰色ないし黒
色のコロニーを作る、培養物中に分生子状態が見られな
い；２〜５週間後にコロニー表面に黒色のストロマ状組
織及び／又は偽子嚢殻を形成する；球ないしほぼ球状の
偽子嚢殻を形成するが、無毛で孔口を持たない、あるい
はかすかな孔口を持つ；偽子嚢殻の、空間内に子嚢と一
緒に条状の側糸を形成する；二重壁構造の子嚢は円筒状
であり、短い柄状基部を持つ；子嚢胞子は子嚢内に２段
に配置されていて、長さ４５〜６０μｍで幅１０〜１２
μｍの大きさであり、４細胞で隔壁でくびれており、薄
くゼラチン状のオリーブグレイ色の鞘につつまれてお
り、各細胞は横長の湾曲した発芽スリットを持ってい
る。
・インテルメディアと同定されて、前掲の一般的記述及
びＳ．Ｉ．Ａhmed とＲ．Ｆ．Ｃain のＲevision of th
e genera Ｓporormia and Ｓporormiella（スポロルミ
ア及びスポロルミエラ属に関する改訂）（Ｃanadian Ｊ
ournal of Ｂotany ５０：４１９〜４７７、（１９７
２））の記述において説明されているようなこの種に本
質的な形態学的特徴を示す。これらの標徴的形態学上の
特徴には以下が含まれる：比較的遅い生育、ポテトデキ
ストロース、オートミール、又は麦芽−イーストエキス
寒天等の標準的真菌類培地上で淡灰色、暗灰色ないし黒
色のコロニーを作る、培養物中に分生子状態が見られな
い；２〜５週間後にコロニー表面に黒色のストロマ状組
織及び／又は偽子嚢殻を形成する；球ないしほぼ球状の
偽子嚢殻を形成するが、無毛で孔口を持たない、あるい
はかすかな孔口を持つ；偽子嚢殻の、空間内に子嚢と一
緒に条状の側糸を形成する；二重壁構造の子嚢は円筒状
であり、短い柄状基部を持つ；子嚢胞子は子嚢内に２段
に配置されていて、長さ４５〜６０μｍで幅１０〜１２
μｍの大きさであり、４細胞で隔壁でくびれており、薄
くゼラチン状のオリーブグレイ色の鞘につつまれてお
り、各細胞は横長の湾曲した発芽スリットを持ってい
る。
【００１３】ＭＦ５６５２の培養物は、スポロルミエラ
（Ｓporormiella intermedia）と同定されて、前掲の一
般的記述及びＳ．Ｉ．Ａhmed とＲ．Ｆ．Ｃain のＲevi
sionof the genera Ｓporormia and Ｓporormiella（ス
ポロルミア及びスポロルミエラ属に関する改訂）（Ｃan
adian Ｊournal of Ｂotany ５０：４１９〜４７７、
（１９７２））の記述において説明されているようなこ
の種に本質的な形態学的特徴を示す。これらの標徴的形
態学上の特徴には以下が含まれる：比較的おそい生育、
ポテトデキストロース、オートミール、又は麦芽−イー
ストエキス寒天等の標準的真菌類培地上で淡灰色、暗灰
色ないし黒色のコロニーを作る、培養物中に分生子状態
が見られない；２〜５週間後にコロニー表面に黒色のス
トロマ状組織及び／又は偽子嚢殻を形成する；球ないし
ほぼ球状の偽子嚢殻を形成するが、無毛で孔口を持たな
い、あるいはかすかな孔口を持つ；偽子嚢殻の、空間内
に子嚢と一緒に糸状の側糸を形成する；二重壁構造の子
嚢は円筒状であり、短い柄状基部を持つ；子嚢胞子は子
嚢内に２段に配置されており、長さ４５〜６０μｍで幅
１０〜１２μｍの大きさであり、４細胞で隔壁部でくび
れており、薄くゼラチン状のオリーブグレイ色の鞘につ
つまれており、各細胞は横長の湾曲した発芽スリットを
持っている。
（Ｓporormiella intermedia）と同定されて、前掲の一
般的記述及びＳ．Ｉ．Ａhmed とＲ．Ｆ．Ｃain のＲevi
sionof the genera Ｓporormia and Ｓporormiella（ス
ポロルミア及びスポロルミエラ属に関する改訂）（Ｃan
adian Ｊournal of Ｂotany ５０：４１９〜４７７、
（１９７２））の記述において説明されているようなこ
の種に本質的な形態学的特徴を示す。これらの標徴的形
態学上の特徴には以下が含まれる：比較的おそい生育、
ポテトデキストロース、オートミール、又は麦芽−イー
ストエキス寒天等の標準的真菌類培地上で淡灰色、暗灰
色ないし黒色のコロニーを作る、培養物中に分生子状態
が見られない；２〜５週間後にコロニー表面に黒色のス
トロマ状組織及び／又は偽子嚢殻を形成する；球ないし
ほぼ球状の偽子嚢殻を形成するが、無毛で孔口を持たな
い、あるいはかすかな孔口を持つ；偽子嚢殻の、空間内
に子嚢と一緒に糸状の側糸を形成する；二重壁構造の子
嚢は円筒状であり、短い柄状基部を持つ；子嚢胞子は子
嚢内に２段に配置されており、長さ４５〜６０μｍで幅
１０〜１２μｍの大きさであり、４細胞で隔壁部でくび
れており、薄くゼラチン状のオリーブグレイ色の鞘につ
つまれており、各細胞は横長の湾曲した発芽スリットを
持っている。
【００１４】ＭＦ５６５５、ＭＦ５６５６、ＭＦ５６５
７及びＭＦ５６６３の培養は、同じ環境から単離され
た。ＭＦ５６５５、ＭＦ５６５６及びＭＦ５６５７の培
養物はスポロルミエラ・インターメディアと同定され
て、前掲の一般的記述及びＳ．Ｉ．Ａhmed とＲ．Ｆ．
Ｃain のＲevisionof the genera Ｓporormia and Ｓpo
rormiella（スポロルミア及びスポロルミエラ属に関す
る改訂）（Ｃanadian Ｊournal of Ｂotany ５０：４１
９〜４７７、（１９７２））の記述において説明されて
いるようなこの種に本質的な形態学的特徴を示す。これ
らの標徴的形態学上の特徴には以下が含まれる：比較的
おそい生育、ポテトデキストロース、オートミール、又
は麦芽−イーストエキス寒天等の標準的真菌類培地上で
淡灰色、暗灰色ないし黒色のコロニーを作る、培養物中
に分生子状態が見られない；２〜５週間後にコロニー表
面に黒色のストロマ状組織及び／又は偽子嚢殻を形成す
る；球ないしほぼ球状の偽子嚢殻を形成するが、無毛で
孔口を持たない、あるいはかすかな孔口を持つ；偽子嚢
殻の内部に子嚢と一緒に糸状の側糸を形成する；二重壁
構造の子嚢は円筒状であり、短い柄状基部を持つ；子嚢
胞子は子嚢内に２段に配置されており、長さ４５〜６０
μｍで幅１０〜１２μｍの大きさであり、４細胞で隔壁
部でくびれており、薄くゼラチン状のオリーブグレイ色
の鞘につつまれており、各細胞は横長の湾曲した発芽ス
リットを持っている。
７及びＭＦ５６６３の培養は、同じ環境から単離され
た。ＭＦ５６５５、ＭＦ５６５６及びＭＦ５６５７の培
養物はスポロルミエラ・インターメディアと同定され
て、前掲の一般的記述及びＳ．Ｉ．Ａhmed とＲ．Ｆ．
Ｃain のＲevisionof the genera Ｓporormia and Ｓpo
rormiella（スポロルミア及びスポロルミエラ属に関す
る改訂）（Ｃanadian Ｊournal of Ｂotany ５０：４１
９〜４７７、（１９７２））の記述において説明されて
いるようなこの種に本質的な形態学的特徴を示す。これ
らの標徴的形態学上の特徴には以下が含まれる：比較的
おそい生育、ポテトデキストロース、オートミール、又
は麦芽−イーストエキス寒天等の標準的真菌類培地上で
淡灰色、暗灰色ないし黒色のコロニーを作る、培養物中
に分生子状態が見られない；２〜５週間後にコロニー表
面に黒色のストロマ状組織及び／又は偽子嚢殻を形成す
る；球ないしほぼ球状の偽子嚢殻を形成するが、無毛で
孔口を持たない、あるいはかすかな孔口を持つ；偽子嚢
殻の内部に子嚢と一緒に糸状の側糸を形成する；二重壁
構造の子嚢は円筒状であり、短い柄状基部を持つ；子嚢
胞子は子嚢内に２段に配置されており、長さ４５〜６０
μｍで幅１０〜１２μｍの大きさであり、４細胞で隔壁
部でくびれており、薄くゼラチン状のオリーブグレイ色
の鞘につつまれており、各細胞は横長の湾曲した発芽ス
リットを持っている。
【００１５】構造式（Ｉ）の化合物を、資化性炭素及び
窒素源を含んだ水性栄養培地中で、好ましくは好気条件
下に、前記微生物を培養することによって得ることがで
きる。また、栄養培地は、鉱物塩類と消泡剤を含んでも
よい。
窒素源を含んだ水性栄養培地中で、好ましくは好気条件
下に、前記微生物を培養することによって得ることがで
きる。また、栄養培地は、鉱物塩類と消泡剤を含んでも
よい。
【００１６】栄養培地中の好ましい炭素源は、グルコー
ス、グリセリン、デンプン、デキストリン、その他の炭
水化物である。含まれていてもよい他の炭素源は、マル
トース、マンノース、スクロース等である。さらに、オ
ート麦粉、コーンミール、キビ、トウモロコシ等の複合
栄養源でも利用できる炭素を供給できる。培地に用いる
炭素源の正確な量は、一部分は、培地中の他の成分にも
よるが、通常０．５ないし５重量パーセントの範囲にあ
る。これら炭素源を当該培地にそれぞれ用いてもよい
し、同培地にいくつかの炭素源を組み合わせて用いるこ
ともできる。
ス、グリセリン、デンプン、デキストリン、その他の炭
水化物である。含まれていてもよい他の炭素源は、マル
トース、マンノース、スクロース等である。さらに、オ
ート麦粉、コーンミール、キビ、トウモロコシ等の複合
栄養源でも利用できる炭素を供給できる。培地に用いる
炭素源の正確な量は、一部分は、培地中の他の成分にも
よるが、通常０．５ないし５重量パーセントの範囲にあ
る。これら炭素源を当該培地にそれぞれ用いてもよい
し、同培地にいくつかの炭素源を組み合わせて用いるこ
ともできる。
【００１７】好ましい窒素源は、グリシン、プロリン、
トレオニン、その他のアミノ酸、又同様に、イースト抽
出物（加水分解物、自己分解物）、乾燥イースト、トマ
トペースト、大豆ミール、ペプトン、コーンスティープ
リカー、ディスチラーズソルブルズ、麦芽抽出物、その
他のような複合源である。アンモニウム塩（たとえば、
硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニ
ウム等）の無機窒素源を用いることもできる。種々の窒
素源は、培地中の０．２ないし９重量パーセントの範囲
の量で、単独に、又は組み合わせて用いることができ
る。炭素及び窒素源は、一般に組み合わせて用いるが、
純粋な形態である必要はない。微量の生育因子、ビタミ
ン及び鉱物栄養を含むより純度の低いものを用いてもよ
い。また、（これらに限定はされないが）炭酸カルシウ
ム、リン酸ナトリウム又はカリウム、塩化ナトリウム又
はカリウム、マグネシウム塩、銅塩、コバルト塩、その
他のような鉱物塩類を培地に加えてもよい。又、マンガ
ン、鉄、モリブデン、亜鉛、その他の微量金属が含まれ
る。さらに、必要ならば、とくに培養培地がかなり泡立
つならば、ポリエチレングリコール又はシリコン等の消
泡剤を加えてもよい。この発明の化合物の好ましい生産
方法は、生産性微生物の胞子か菌糸体を適当な培地に接
種した後に好気条件下に培養することから成る。
トレオニン、その他のアミノ酸、又同様に、イースト抽
出物（加水分解物、自己分解物）、乾燥イースト、トマ
トペースト、大豆ミール、ペプトン、コーンスティープ
リカー、ディスチラーズソルブルズ、麦芽抽出物、その
他のような複合源である。アンモニウム塩（たとえば、
硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニ
ウム等）の無機窒素源を用いることもできる。種々の窒
素源は、培地中の０．２ないし９重量パーセントの範囲
の量で、単独に、又は組み合わせて用いることができ
る。炭素及び窒素源は、一般に組み合わせて用いるが、
純粋な形態である必要はない。微量の生育因子、ビタミ
ン及び鉱物栄養を含むより純度の低いものを用いてもよ
い。また、（これらに限定はされないが）炭酸カルシウ
ム、リン酸ナトリウム又はカリウム、塩化ナトリウム又
はカリウム、マグネシウム塩、銅塩、コバルト塩、その
他のような鉱物塩類を培地に加えてもよい。又、マンガ
ン、鉄、モリブデン、亜鉛、その他の微量金属が含まれ
る。さらに、必要ならば、とくに培養培地がかなり泡立
つならば、ポリエチレングリコール又はシリコン等の消
泡剤を加えてもよい。この発明の化合物の好ましい生産
方法は、生産性微生物の胞子か菌糸体を適当な培地に接
種した後に好気条件下に培養することから成る。
【００１８】一般に発酵工程は、まず保存しておいた培
養株を栄養種培地に接種して、時には２段階で活性化合
物の生産用の種菌となる微生物を増殖させる。接種後、
フラスコを振とうしながら２０ないし３０℃、好ましく
は２５ないし２８℃の範囲の温度でインキュベートす
る。振とう速度は、４００ｒｐｍまでの範囲、好ましく
は２００ないし２２０ｒｐｍでよい。種フラスコは、２
ないし１０日、好ましくは４日間インキュベートする。
通常は２ないし４日であるが、生育が十分になったら、
培養物を生産培地フラスコに接種するのに用いる。第２
段階の種培養は、とくにより大きな容器に移行させる場
合に行ってもよい。これを行なう場合、培養物の一部
を、第２の種フラスコに接種して同種の条件下であるが
より短時間インキュベートする。接種後、発酵生産培地
を５ないし２５日間、好ましくは７ないし２２日間、
（液体又は固体どちらの発酵培地を用いるかによって）
振とうするか、あるいは振とうせずにインキュベートす
る。発酵は２０ないし４０℃の温度範囲で好気的に行な
う。振とうする場合には、２００ないし４００ｒｐｍの
速度でよい。最適な結果を得るためには２２ないし２８
℃、もっとも好ましくは２４ないし２６℃の範囲であ
る。活性化合物を生成するのに適した栄養培地のｐＨ
は、３．５ないし８．５、もっとも好ましくは４．５な
いし７．０の範囲である。所望の化合物の生成を適当な
時間行なった後に、発酵フラスコを回収して活性化合物
を単離する。
養株を栄養種培地に接種して、時には２段階で活性化合
物の生産用の種菌となる微生物を増殖させる。接種後、
フラスコを振とうしながら２０ないし３０℃、好ましく
は２５ないし２８℃の範囲の温度でインキュベートす
る。振とう速度は、４００ｒｐｍまでの範囲、好ましく
は２００ないし２２０ｒｐｍでよい。種フラスコは、２
ないし１０日、好ましくは４日間インキュベートする。
通常は２ないし４日であるが、生育が十分になったら、
培養物を生産培地フラスコに接種するのに用いる。第２
段階の種培養は、とくにより大きな容器に移行させる場
合に行ってもよい。これを行なう場合、培養物の一部
を、第２の種フラスコに接種して同種の条件下であるが
より短時間インキュベートする。接種後、発酵生産培地
を５ないし２５日間、好ましくは７ないし２２日間、
（液体又は固体どちらの発酵培地を用いるかによって）
振とうするか、あるいは振とうせずにインキュベートす
る。発酵は２０ないし４０℃の温度範囲で好気的に行な
う。振とうする場合には、２００ないし４００ｒｐｍの
速度でよい。最適な結果を得るためには２２ないし２８
℃、もっとも好ましくは２４ないし２６℃の範囲であ
る。活性化合物を生成するのに適した栄養培地のｐＨ
は、３．５ないし８．５、もっとも好ましくは４．５な
いし７．０の範囲である。所望の化合物の生成を適当な
時間行なった後に、発酵フラスコを回収して活性化合物
を単離する。
【００１９】エステル又はケトン等の非アルコール性酸
素化溶媒と混合することもできるアルコール溶媒を用い
て、固体発酵培地から本発明の化合物を抽出する。この
混合物をはげしくかくはんして濾過し、濾液を減圧下に
濃縮する。濃縮物に水を加えて、鉱酸で１ないし４の範
囲、好ましくは１．５ないし２．５の範囲にｐＨを調整
する。次に水性濃縮物を水と混和しない酸素化溶媒でく
りかえし抽出する。この水と混和しない有機層をとり出
して、蒸発乾固させる。次に一般には、残渣を、吸着、
分配クロマトグラフィー、及び沈殿等のいくつかの分離
工程にかける。各分離工程において、生物学的アッセイ
及び／又はＨＰＬＣ／ＴＬＣ分析の結果にもとづいて、
フラクションを集めてひとまとめにする。
素化溶媒と混合することもできるアルコール溶媒を用い
て、固体発酵培地から本発明の化合物を抽出する。この
混合物をはげしくかくはんして濾過し、濾液を減圧下に
濃縮する。濃縮物に水を加えて、鉱酸で１ないし４の範
囲、好ましくは１．５ないし２．５の範囲にｐＨを調整
する。次に水性濃縮物を水と混和しない酸素化溶媒でく
りかえし抽出する。この水と混和しない有機層をとり出
して、蒸発乾固させる。次に一般には、残渣を、吸着、
分配クロマトグラフィー、及び沈殿等のいくつかの分離
工程にかける。各分離工程において、生物学的アッセイ
及び／又はＨＰＬＣ／ＴＬＣ分析の結果にもとづいて、
フラクションを集めてひとまとめにする。
【００２０】固体発酵の抽出に用いる好ましい溶媒は、
メタノールと２−ブタノンの１：１混合物である。最初
の抽出物を濃縮して水で希釈した後の、好ましい分配溶
媒はジクロロメタン又は酢酸エチルである。液体発酵か
ら化合物（Ｉ）を抽出するには、アルコール性溶媒又は
非アルコール性酸素化溶媒を用いることができる。好ま
しいアルコール性溶媒はメタノールであり、この場合
は、液体発酵物を２ないし４倍体積のメタノールで処理
した後、はげしくかくはんする。次に混合物を濾過して
濾液を減圧下に濃縮する。水を濃縮物に加えて、鉱酸で
ｐＨを１ないし４の範囲、もっとも好ましくは１．５な
いし２．５の範囲に調整する。次にこの水性濃縮物を水
と混和しない酸素化溶媒又は塩素化炭化水素溶媒でくり
かえし抽出する。水と混和しない有機層をデカントし
て、濃縮乾固する。次に、固体発酵からの有機抽出物の
蒸発に関して前に述べたように、残渣をさらに精製す
る。
メタノールと２−ブタノンの１：１混合物である。最初
の抽出物を濃縮して水で希釈した後の、好ましい分配溶
媒はジクロロメタン又は酢酸エチルである。液体発酵か
ら化合物（Ｉ）を抽出するには、アルコール性溶媒又は
非アルコール性酸素化溶媒を用いることができる。好ま
しいアルコール性溶媒はメタノールであり、この場合
は、液体発酵物を２ないし４倍体積のメタノールで処理
した後、はげしくかくはんする。次に混合物を濾過して
濾液を減圧下に濃縮する。水を濃縮物に加えて、鉱酸で
ｐＨを１ないし４の範囲、もっとも好ましくは１．５な
いし２．５の範囲に調整する。次にこの水性濃縮物を水
と混和しない酸素化溶媒又は塩素化炭化水素溶媒でくり
かえし抽出する。水と混和しない有機層をデカントし
て、濃縮乾固する。次に、固体発酵からの有機抽出物の
蒸発に関して前に述べたように、残渣をさらに精製す
る。
【００２１】液体発酵からの抽出に好ましい酸素化溶媒
は、酢酸エチルである。液体発酵物をまず鉱酸によっ
て、ｐＨ１ないし４、もっとも好ましくはｐＨ１．５な
いし２．５の範囲に調整する。次に混合物を酢酸エチル
又は２−ブタン等の酸素化溶媒でくりかえし抽出する。
水に混和しない有機層をデカントして、濃縮乾固する。
残渣は、固体発酵からの有機抽出物の蒸発乾固物に関し
て前に述べたようにさらに精製する。また、液体発酵物
を、ブロスを酸性にすることなく２−ブタノンで抽出で
きる。この場合、有機抽出物を水性層になるまで濃縮し
て、ｐＨ１．５〜２．５まで酸性にして、酢酸エチル等
の酸素化溶媒で抽出する。
は、酢酸エチルである。液体発酵物をまず鉱酸によっ
て、ｐＨ１ないし４、もっとも好ましくはｐＨ１．５な
いし２．５の範囲に調整する。次に混合物を酢酸エチル
又は２−ブタン等の酸素化溶媒でくりかえし抽出する。
水に混和しない有機層をデカントして、濃縮乾固する。
残渣は、固体発酵からの有機抽出物の蒸発乾固物に関し
て前に述べたようにさらに精製する。また、液体発酵物
を、ブロスを酸性にすることなく２−ブタノンで抽出で
きる。この場合、有機抽出物を水性層になるまで濃縮し
て、ｐＨ１．５〜２．５まで酸性にして、酢酸エチル等
の酸素化溶媒で抽出する。
【００２２】クロマトグラフィーによる分離は、イオン
性又は非イオン性樹脂を用いた従来のカラムクロマトグ
ラフィーを使って行なうことができる。Ｅ．Ｍerk から
市販されているようなシリカゲルは、有用な吸着剤であ
る。シリカゲルが吸着剤の場合、溶離液としてはメタノ
ール／クロロホルム／酢酸／水等のアルコール／塩素化
炭化水素／有機酸混合物が有用である。逆相クロマトグ
ラフィーには、より長い又はより短かいアルキル残基を
有する固着シリカゲルやＭitsubkshi ＤianionＨＰ−２
０、あるいはポリアクリル酸バックボーンを有するもの
を用いることもできるが、好ましい吸着剤はＣ8 固着シ
リカゲルである。逆相クロマトグラフィーに好ましい溶
離液は、アセトニトリルと０．１％リン酸又はトリフル
オロ酢酸等で低ｐＨに緩衝した水との混合物がある。Ｄ
owex−１（Ｃｌ-）またはＤowex−５０（Ｃａ++）等の
イオン性樹脂もまた、精製に有用である。とくに有用な
のは、ＢioＲＡＤＡＧ４×４（ギ酸塩）及びＡmberlyst
Ａ２１（酢酸塩）等のアニオン交換樹脂である。活性
化合物を、キニーネ塩として、非極性溶媒から沈殿させ
ることができる。沈殿のための好ましい溶媒は、ジエチ
ルエーテルである。また、活性化合物（Ｉ）を、メタノ
ール等の極性溶媒から、アンモニウム塩として沈殿させ
ることもできる。
性又は非イオン性樹脂を用いた従来のカラムクロマトグ
ラフィーを使って行なうことができる。Ｅ．Ｍerk から
市販されているようなシリカゲルは、有用な吸着剤であ
る。シリカゲルが吸着剤の場合、溶離液としてはメタノ
ール／クロロホルム／酢酸／水等のアルコール／塩素化
炭化水素／有機酸混合物が有用である。逆相クロマトグ
ラフィーには、より長い又はより短かいアルキル残基を
有する固着シリカゲルやＭitsubkshi ＤianionＨＰ−２
０、あるいはポリアクリル酸バックボーンを有するもの
を用いることもできるが、好ましい吸着剤はＣ8 固着シ
リカゲルである。逆相クロマトグラフィーに好ましい溶
離液は、アセトニトリルと０．１％リン酸又はトリフル
オロ酢酸等で低ｐＨに緩衝した水との混合物がある。Ｄ
owex−１（Ｃｌ-）またはＤowex−５０（Ｃａ++）等の
イオン性樹脂もまた、精製に有用である。とくに有用な
のは、ＢioＲＡＤＡＧ４×４（ギ酸塩）及びＡmberlyst
Ａ２１（酢酸塩）等のアニオン交換樹脂である。活性
化合物を、キニーネ塩として、非極性溶媒から沈殿させ
ることができる。沈殿のための好ましい溶媒は、ジエチ
ルエーテルである。また、活性化合物（Ｉ）を、メタノ
ール等の極性溶媒から、アンモニウム塩として沈殿させ
ることもできる。
【００２３】本発明の微生物の発酵で形成した化合物に
固有のスクアレンシンセターゼ阻害活性を、以下に述べ
る標準的なインビトロのプロトコールで測定した。
固有のスクアレンシンセターゼ阻害活性を、以下に述べ
る標準的なインビトロのプロトコールで測定した。
【００２４】ラット肝臓ミクロソームの調製 オスＣharles Ｒiver ＣＤラット（１２０ないし１５０
ｇ）を、０．１％ロバスタチンを含む規定食で４日間飼
育した。これらラットからの肝臓を５容（ｍｌ／ｇ）の
氷冷した５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシ
エチル）−１−ピペラジン−エタンスルホン酸）、５ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、ｐＨ７．５
に加えて、Ｐotter-Ｅlvehjer型 ライシューグラインダ
ーでホモジネートにした。このホモジネートを２回、２
０，０００×ｇで１５分間４℃で遠心分離して、そのた
びにペレットをとりのぞいた。次に上澄みを１００，０
００×ｇで１時間４℃で遠心分離した。得られたミクロ
ソームペレットを、はじめのホモジネートの１／５容の
前記ホモジネート用バッファーに再懸濁した。このミク
ロソーム調製物は約７ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有
している。ミクロソーム懸濁液は、分注して−７０℃で
保存した。これら分注物のスクアレンシンセターゼ活性
は、少なくとも数ケ月間安定である。
ｇ）を、０．１％ロバスタチンを含む規定食で４日間飼
育した。これらラットからの肝臓を５容（ｍｌ／ｇ）の
氷冷した５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシ
エチル）−１−ピペラジン−エタンスルホン酸）、５ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、ｐＨ７．５
に加えて、Ｐotter-Ｅlvehjer型 ライシューグラインダ
ーでホモジネートにした。このホモジネートを２回、２
０，０００×ｇで１５分間４℃で遠心分離して、そのた
びにペレットをとりのぞいた。次に上澄みを１００，０
００×ｇで１時間４℃で遠心分離した。得られたミクロ
ソームペレットを、はじめのホモジネートの１／５容の
前記ホモジネート用バッファーに再懸濁した。このミク
ロソーム調製物は約７ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を有
している。ミクロソーム懸濁液は、分注して−７０℃で
保存した。これら分注物のスクアレンシンセターゼ活性
は、少なくとも数ケ月間安定である。
【００２５】プレニルトランスフェラーゼの部分的精製 放射線でラベルしたピロリン酸ファルネシルの酵素的合
成に用いるためのプレニルトランスフェラーゼを精製し
た。プレニルトランスフェラーゼは、Ｒilling（Ｍetho
d in Ｅnzymology １１０、１２５〜１２９（１９８
５））の方法によりアッセイして、活性の単位は、標準
的アッセイにおいて３０℃１分間で１μｍｏｌのピロリ
ン酸ファルネシルを生成する酵素の量として定義した。
５％コレスチラミンに０．１％ロバスタチンを加えたも
ので飼育しておいた生後４０日のオスのラット２３匹の
肝臓を、１ｍｌあたりアプロチニンを０．１トリプシン
阻害剤単位含んだｐＨ７．０の１０ｍＭメルカプトエタ
ノール、２ｍＭＥＤＴＡ、２５μＭロイペプチン、０．
００５％フッ化フェニルメチルスルホニル溶液１リット
ルに入れてＷaringブレンダーでホモジネートした。ホ
モジネートは２０，０００ｘｇで２０分間遠心分離し
た。上澄みを６Ｎ ＨＯＡｃでｐＨ５．５に調整して、
１００，０００ｘｇで１時間遠心分離した。この上澄み
を３Ｎ ＫＯＨでｐＨ７．０に調整して、３５〜６０％
硫酸アンモニウムフラクションをとった。６０％ペレッ
トを、１０ｍＭリン酸カリウム、１０ｍＭメルカプトエ
タノール、１ｍＭ ＥＤＴＡのｐＨ７．０の溶液（バッ
ファーＡ）６０ｍｌに再溶解して、バッファーＡ１リッ
トルを２回とりかえて透析した。この透析したフラクシ
ョンを、バッファーＡで平衡化したＤＥＡＥ−Ｓepharo
se ４Ｂの１２．５×５ｃｍのカラムにかけた。このカ
ラムを７００ｍｌのバッファーＡ、及びバッファーＡか
ら１００ｍＭリン酸カリウム、１０ｍＭメルカプトエタ
ノール、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．０への勾配１リッ
トルで洗浄した。０．２単位／ｍｇより大きな比活性を
持つフラクションを合して、固体硫酸アンモニウムを加
えて６０％で飽和させてペレットにした。ペレットを１
０ｍＭトリス、１０ｍＭβ−メルカプトエタノールのｐ
Ｈ７．０の溶液（バッファーＢ）８ｍｌに溶解した。ペ
レットの再溶解物に、バッファーＢ中飽和硫酸アンモニ
ウム１．５容を加えて、硫酸アンモニウム６０％飽和と
した。この硫酸アンモニウム懸濁液は０．２３単位／ｍ
ｇの比活性のある３．５単位／ｍｌを含み、ピロリン酸
イソペンテニルイソメラーゼ活性はなかった。この硫酸
アンモニウム懸濁液を〔４−14Ｃ〕ピロリン酸ファルネ
シルの合成に用いたが、活性は少なくとも６ケ月間４℃
で保存していて安定であった。
成に用いるためのプレニルトランスフェラーゼを精製し
た。プレニルトランスフェラーゼは、Ｒilling（Ｍetho
d in Ｅnzymology １１０、１２５〜１２９（１９８
５））の方法によりアッセイして、活性の単位は、標準
的アッセイにおいて３０℃１分間で１μｍｏｌのピロリ
ン酸ファルネシルを生成する酵素の量として定義した。
５％コレスチラミンに０．１％ロバスタチンを加えたも
ので飼育しておいた生後４０日のオスのラット２３匹の
肝臓を、１ｍｌあたりアプロチニンを０．１トリプシン
阻害剤単位含んだｐＨ７．０の１０ｍＭメルカプトエタ
ノール、２ｍＭＥＤＴＡ、２５μＭロイペプチン、０．
００５％フッ化フェニルメチルスルホニル溶液１リット
ルに入れてＷaringブレンダーでホモジネートした。ホ
モジネートは２０，０００ｘｇで２０分間遠心分離し
た。上澄みを６Ｎ ＨＯＡｃでｐＨ５．５に調整して、
１００，０００ｘｇで１時間遠心分離した。この上澄み
を３Ｎ ＫＯＨでｐＨ７．０に調整して、３５〜６０％
硫酸アンモニウムフラクションをとった。６０％ペレッ
トを、１０ｍＭリン酸カリウム、１０ｍＭメルカプトエ
タノール、１ｍＭ ＥＤＴＡのｐＨ７．０の溶液（バッ
ファーＡ）６０ｍｌに再溶解して、バッファーＡ１リッ
トルを２回とりかえて透析した。この透析したフラクシ
ョンを、バッファーＡで平衡化したＤＥＡＥ−Ｓepharo
se ４Ｂの１２．５×５ｃｍのカラムにかけた。このカ
ラムを７００ｍｌのバッファーＡ、及びバッファーＡか
ら１００ｍＭリン酸カリウム、１０ｍＭメルカプトエタ
ノール、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．０への勾配１リッ
トルで洗浄した。０．２単位／ｍｇより大きな比活性を
持つフラクションを合して、固体硫酸アンモニウムを加
えて６０％で飽和させてペレットにした。ペレットを１
０ｍＭトリス、１０ｍＭβ−メルカプトエタノールのｐ
Ｈ７．０の溶液（バッファーＢ）８ｍｌに溶解した。ペ
レットの再溶解物に、バッファーＢ中飽和硫酸アンモニ
ウム１．５容を加えて、硫酸アンモニウム６０％飽和と
した。この硫酸アンモニウム懸濁液は０．２３単位／ｍ
ｇの比活性のある３．５単位／ｍｌを含み、ピロリン酸
イソペンテニルイソメラーゼ活性はなかった。この硫酸
アンモニウム懸濁液を〔４−14Ｃ〕ピロリン酸ファルネ
シルの合成に用いたが、活性は少なくとも６ケ月間４℃
で保存していて安定であった。
【００２６】〔４−14Ｃ〕ピロリン酸ファルネシルの酵
素的合成 ロータリーエバポレーターで５５μＣｉの〔４−14Ｃ〕
ピロリン酸イソペンテニル（４７．９μＣｉ／μｍｏ
ｌ）から溶媒（エタノール・０．１５Ｎ ＮＨ4ＯＨ１：
１）を除去した。６００マイクロリットルの１００ｍＭ
トリス１０ｍＭＭｇＣｌ2、４ｍＭジチオスレイトール
ｐＨ７．５を加えて、溶液を１．５ｍｌEppendorf遠心
用試験管にうつした。ピロリン酸ゲラニル、２０ｍＭ溶
液２５０μｌと、プレニルトランスフェラーゼの硫酸ア
ンモニウム懸濁液５０μｌを加えて、反応を開始させ
た。このインキュベーションは、体積９００μｌ中にピ
ロリン酸ゲラニル５μｍｏｌピロリン酸イソペンテニル
１．１５μｍｏｌ、ＭｇＣｌ2６μｍｏｌ、０．１８単
位のプレニルトランスフェラーゼを含んでいた。インキ
ュベーション中、混合物は、新たに形成されたピロリン
酸ファルネシルのマグネシウム錯体が溶液から沈殿する
につれて白濁した。〔４−14Ｃ〕ピロリン酸ファルネシ
ルをＥppendorf遠心分離試験管中で３分間１４，０００
ｒｐｍで遠心分離して回収し、上澄をとりのぞいて、ペ
レットを、ｐＨ７．５で１．０ｍｌの５０ｍＭ ＨＥＰ
ＥＳ、５ｍＭ ＥＤＴＡに溶解した。収量は〔４−
14Ｃ〕ピロリン酸ファルネシル５０．７μＣｉ（９２
％）であつた。この〔４−14Ｃ〕ピロリン酸ファルネシ
ルを分注して−７０℃で保存した。
素的合成 ロータリーエバポレーターで５５μＣｉの〔４−14Ｃ〕
ピロリン酸イソペンテニル（４７．９μＣｉ／μｍｏ
ｌ）から溶媒（エタノール・０．１５Ｎ ＮＨ4ＯＨ１：
１）を除去した。６００マイクロリットルの１００ｍＭ
トリス１０ｍＭＭｇＣｌ2、４ｍＭジチオスレイトール
ｐＨ７．５を加えて、溶液を１．５ｍｌEppendorf遠心
用試験管にうつした。ピロリン酸ゲラニル、２０ｍＭ溶
液２５０μｌと、プレニルトランスフェラーゼの硫酸ア
ンモニウム懸濁液５０μｌを加えて、反応を開始させ
た。このインキュベーションは、体積９００μｌ中にピ
ロリン酸ゲラニル５μｍｏｌピロリン酸イソペンテニル
１．１５μｍｏｌ、ＭｇＣｌ2６μｍｏｌ、０．１８単
位のプレニルトランスフェラーゼを含んでいた。インキ
ュベーション中、混合物は、新たに形成されたピロリン
酸ファルネシルのマグネシウム錯体が溶液から沈殿する
につれて白濁した。〔４−14Ｃ〕ピロリン酸ファルネシ
ルをＥppendorf遠心分離試験管中で３分間１４，０００
ｒｐｍで遠心分離して回収し、上澄をとりのぞいて、ペ
レットを、ｐＨ７．５で１．０ｍｌの５０ｍＭ ＨＥＰ
ＥＳ、５ｍＭ ＥＤＴＡに溶解した。収量は〔４−
14Ｃ〕ピロリン酸ファルネシル５０．７μＣｉ（９２
％）であつた。この〔４−14Ｃ〕ピロリン酸ファルネシ
ルを分注して−７０℃で保存した。
【００２７】スクアレンシンセターゼアッセイ 反応は１６×１２５ｍｍねじぶた付試験管で行なった。
バッチアッセイ用混合物を以下の溶液から調製した：
バッチアッセイ用混合物を以下の溶液から調製した：
【表３】 各アッセイ分μｌ 50アッセイ用の容量 1. 250mM HEPES pH7.5 20 1000 2. ＮａＦ １１０ｍＭ 10 500 3. ＭｇＣｌ2 ５５ｍＭ 10 500 4. ジチオスレトール30mM 10 500 5. NADPH 10mM (用時調製) 10 500 6.〔４-14Ｃ〕ピロリン酸ファルネシル 47.9μCi/μmole、及び 0.025μCi/3.0μl 3.0 150 7. Ｈ2Ｏ 24 1200
【００２８】このアッセイ用混合物を減圧下に脱気して
Ｎ2を充填した。スクアレンシンセターゼ阻害剤の溶液
をＤＭＳＯがＭｅＯＨのいずれかで調製して、最初のホ
モジネート用バッファーでミクロソームタンパク質を
１：１２０に希釈した。各反応に対して、３μｌの阻害
剤溶液（コントロール中にはＤＭＳＯ又はＭｅＯＨ）と
８７μｌのアッセイ混合物を用いて、温浴中で３０℃に
あたためた後、ミクロソームタンパク質の１：１２０希
釈液（このアッセイで全量０．６μｇのンパク質）１０
μｌを加えることによって反応を開始させた。反応は、
２０分後に４０％ＫＯＨと９５％ＥｔＯＨの１：１混合
物を１００μｌ加えて停止させた。反応を停止させた混
合物を、３０分間６５℃に加熱して、冷却し、１０ｍｌ
のヘプタンを加えて、この混合物を攪拌した。その後２
ｇの活性アルミナを加えて、再び混合物を攪拌して、ア
ルミナを沈降させた後５ｍｌのヘプタン層をとり出し、
１０ｍｌのシンチレーション用液をヘプタン溶液に加え
て、放射能を液体シンチレーションカウンターで決定し
た。阻害の百分率は式： （１−（サンプル−ブランク）／（対照−ブランク）×
１００
Ｎ2を充填した。スクアレンシンセターゼ阻害剤の溶液
をＤＭＳＯがＭｅＯＨのいずれかで調製して、最初のホ
モジネート用バッファーでミクロソームタンパク質を
１：１２０に希釈した。各反応に対して、３μｌの阻害
剤溶液（コントロール中にはＤＭＳＯ又はＭｅＯＨ）と
８７μｌのアッセイ混合物を用いて、温浴中で３０℃に
あたためた後、ミクロソームタンパク質の１：１２０希
釈液（このアッセイで全量０．６μｇのンパク質）１０
μｌを加えることによって反応を開始させた。反応は、
２０分後に４０％ＫＯＨと９５％ＥｔＯＨの１：１混合
物を１００μｌ加えて停止させた。反応を停止させた混
合物を、３０分間６５℃に加熱して、冷却し、１０ｍｌ
のヘプタンを加えて、この混合物を攪拌した。その後２
ｇの活性アルミナを加えて、再び混合物を攪拌して、ア
ルミナを沈降させた後５ｍｌのヘプタン層をとり出し、
１０ｍｌのシンチレーション用液をヘプタン溶液に加え
て、放射能を液体シンチレーションカウンターで決定し
た。阻害の百分率は式： （１−（サンプル−ブランク）／（対照−ブランク）×
１００
【００２９】以下の実施例は、構造式（Ｉ）の化合物調
製のための本出願書の微生物の使用法を説明するもので
あるから、本出願書中の請求項に示すこの発明を制限す
るものと考えてはならない。
製のための本出願書の微生物の使用法を説明するもので
あるから、本出願書中の請求項に示すこの発明を制限す
るものと考えてはならない。
【００３０】以下の実施例において使用される培地組成
を以下に列記する：
を以下に列記する：
【表４】ＹＭＥ平板用培地 構成物質 量 酵母エキス ４．０ｇ 麦芽エキス １０．０ｇ グルコース ４．０ｇ 蒸留水 １０００ｍＬ 寒天 ２５．０ｇ ＫＦ種培地 リットル当たり 微量元素混合物 ｇ／Ｌ コーンスティープリカー ５ｇ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １.０ トマトペースト ４０ｇ ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ １.０ オート麦粉 １０ｇ ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ０.０２５ グルコース １０ｇ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ０.１ 微量元素混合物 １０ｍＬ Ｈ3ＢＯ3 ０.０５６ (ＮＨ4)6ＭＯ7Ｏ24・４Ｈ2Ｏ ０.０１９ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.２ １Ｌの０．６Ｎ ＨＣｌに溶解 ｐＨは６．８に調整（殺菌前） ２５０ｍＫ容イボなし三角フラスコに５０ｍＬの培地 ２０分間オートクレーブ（１２１℃、１５ｐｓｉ）
【００３１】生産培地 固体基質生産培地（２５０ｍＬ容イボなし三角フラスコ
中に調製）
中に調製）
【表５】 Ｆ１ Ｆ２０２ 粉砕コーーン １０.０ｇ／フラスコ キビ １５.０ｇ／フラスコ 基本液＃１ １０.０ｍＬ／フラスコ 基本液＃４ １５.０ｍＬ／フラスコ 基本液＃１ 基本液＃４ ｇ/Ｌ ｇ/Ｌ アルダミンｐＨ ０.２ 酵母エキス ３３.３ ＫＨ2ＰＯ4 ０.１ 酒石酸ナトリウム ６.６７ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.１ シュークロース ３３.３ 酒石酸ナトリウム ０.１ アルファルファ ３３.３ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.０１ コーン油 ６.６７ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.０１ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.６７ 蒸留水 １０００ｍＬ 蒸留水 １０００ｍＬ ｐＨは無調製 ｐＨは無調製 オートクレーブ１５分間 オートクレーブ１５分間 （１２１℃、１５ｐｓｉ） （１２１℃、１５ｐｓｉ） フラスコ当たり１５．０ｍＬの フラスコ当たり１５．０ｍｌの 蒸留水を添加 蒸留水を添加 オートクレーブ２０分間 オートクレーブ２０分間 （１２１℃、１５ｐｓｉ） （１２１℃、１５ｐｓｉ）
【００３２】液体生産培地〔全ての液体培地はイボなし
２５０ｍＬ容三角フラスコ当たり４５ｍＬ入れ、２０分
間オートクレーブする（１２１℃、１５ｐｓｉ）〕
２５０ｍＬ容三角フラスコ当たり４５ｍＬ入れ、２０分
間オートクレーブする（１２１℃、１５ｐｓｉ）〕
【表６】 ＬＳＦ１ ＣＴＳ８０ ｇ/Ｌ ｇ/Ｌ グリセロール ７５.０ コーンミール（黄色） ５０.０ グルコース １０.０ 酵母エキス １.０ アルダミンＰＨ ５.０ シュークロース ８０.０ 大豆粉 ５.０ 蒸留水 １０００ｍＬ トマトペースト ５.０ クエン酸ナトイウム ２.０ （ＮＨ4）2ＳＯ4 ２.０ 蒸留水 １０００ｍＬ 殺菌前にｐＨを７．０に調整 ｐＨは無調整
【００３３】実施例１ 化合物Ｉの調製 Ａ．糸状菌ＭＦ５６５１の培養 殺菌した土に保存しておいた菌糸をガラス性スプーン１
かき用いて、ＭＦ５６５１株をＫＦ種培地に植菌した。
ＫＦ種培地の入ったフラスコを７１時間２５℃、２２０
ｒｐｍ、湿度８５％で振盪培養した。培養終了後２．０
ｍＬずつを無菌的に１２個のＬＳＦ１生産培地に移植し
た。この生産培地の入ったフラスコを２５℃、２２０ｒ
ｐｍ、湿度８５％で７日間振盪培養する。フラスコを集
め、菌体をＢiohomogenizer／mixer（Ｂiospec Ｐroduc
ts Ｉnc.，Ｂartlesville，ＯＫ）を用いて高速で２０
秒間ホモジナイズする。このようにして全ての培養物を
１Ｌの三角フラスコに貯蔵する。 Ｂ．化合物Ｉの単離 実施例１パートＡの培養液５０ｍＬ、２．５Ｎ ＨＣｌ
でｐＨを２．５に調整し、５０ｍＬの酢酸エチルを添加
した。混合液を室温で１時間攪拌し、各々の層をＩＦＣ
臨床遠心機中で遠心により分離した。酢酸エチル層を取
り、減圧濃縮した。残渣をメタノール／水（６／４）に
溶解した４０ｍＭギ酸ナトリウム溶液（ｐＨ４．３）２
０ｍｌに溶解した。この溶液を当量のヘキサンで手短か
に抽出操作を行い、ヘキサン層を除去することにより、
脱脂した。この脱脂したメタノール水溶液を、ＢioＲad
ＡＧ４×４（ギ酸塩サイクル、１００−２００メッシ
ュ）の ３ｍＬカラムにおよそ毎時１０倍カラム量の流
速で供した。カラムをメタノール／水６／４に溶解した
４０ｍＭギ酸ナトリウム溶液（ｐＨ４．３）２５ｍｌで
洗浄し、更にＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ（６／４）、２０ｍＬで
洗浄した。カラムをＣＨ3 ＣＮ／Ｈ2Ｏ（６／４）に溶
解した０．２Ｎ Ｈ2ＳＯ4溶液で溶出し、１０ｍＬづつ
分画した。画分３と４に化合物Ｉが存在していた。化合
物Ｉの存在するＡＧ４×４の溶出画分を集め、１０％
（ｗ／ｖ）ＮａＣｌを含有する０．１Ｎ ＨＣｌ、２０
ｍＬを添加した。この溶液を１５ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2で１
回抽出し、ＣＨ2Ｃｌ2層を取り、Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、
減圧濃縮した。残渣を２ｍＬのメタノールに溶解しＨＰ
ＬＣ（Ｐhenomenex Ｕltracarb ５ ＯＤＳ３０、１５ｃ
ｍ×４．６ｍｍ、６５％ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ＋０．１％Ｈ
3ＰＯ4、１．０ｍＬ／分、室温、Ｗaters ９９０＋ダイ
オードアレイ検出装置）に分析したところ２７μｇ／ｍ
ｌの化合物Ｉが存在していることを確認した。ｔr＝１
５．８分。
かき用いて、ＭＦ５６５１株をＫＦ種培地に植菌した。
ＫＦ種培地の入ったフラスコを７１時間２５℃、２２０
ｒｐｍ、湿度８５％で振盪培養した。培養終了後２．０
ｍＬずつを無菌的に１２個のＬＳＦ１生産培地に移植し
た。この生産培地の入ったフラスコを２５℃、２２０ｒ
ｐｍ、湿度８５％で７日間振盪培養する。フラスコを集
め、菌体をＢiohomogenizer／mixer（Ｂiospec Ｐroduc
ts Ｉnc.，Ｂartlesville，ＯＫ）を用いて高速で２０
秒間ホモジナイズする。このようにして全ての培養物を
１Ｌの三角フラスコに貯蔵する。 Ｂ．化合物Ｉの単離 実施例１パートＡの培養液５０ｍＬ、２．５Ｎ ＨＣｌ
でｐＨを２．５に調整し、５０ｍＬの酢酸エチルを添加
した。混合液を室温で１時間攪拌し、各々の層をＩＦＣ
臨床遠心機中で遠心により分離した。酢酸エチル層を取
り、減圧濃縮した。残渣をメタノール／水（６／４）に
溶解した４０ｍＭギ酸ナトリウム溶液（ｐＨ４．３）２
０ｍｌに溶解した。この溶液を当量のヘキサンで手短か
に抽出操作を行い、ヘキサン層を除去することにより、
脱脂した。この脱脂したメタノール水溶液を、ＢioＲad
ＡＧ４×４（ギ酸塩サイクル、１００−２００メッシ
ュ）の ３ｍＬカラムにおよそ毎時１０倍カラム量の流
速で供した。カラムをメタノール／水６／４に溶解した
４０ｍＭギ酸ナトリウム溶液（ｐＨ４．３）２５ｍｌで
洗浄し、更にＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ（６／４）、２０ｍＬで
洗浄した。カラムをＣＨ3 ＣＮ／Ｈ2Ｏ（６／４）に溶
解した０．２Ｎ Ｈ2ＳＯ4溶液で溶出し、１０ｍＬづつ
分画した。画分３と４に化合物Ｉが存在していた。化合
物Ｉの存在するＡＧ４×４の溶出画分を集め、１０％
（ｗ／ｖ）ＮａＣｌを含有する０．１Ｎ ＨＣｌ、２０
ｍＬを添加した。この溶液を１５ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2で１
回抽出し、ＣＨ2Ｃｌ2層を取り、Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、
減圧濃縮した。残渣を２ｍＬのメタノールに溶解しＨＰ
ＬＣ（Ｐhenomenex Ｕltracarb ５ ＯＤＳ３０、１５ｃ
ｍ×４．６ｍｍ、６５％ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ＋０．１％Ｈ
3ＰＯ4、１．０ｍＬ／分、室温、Ｗaters ９９０＋ダイ
オードアレイ検出装置）に分析したところ２７μｇ／ｍ
ｌの化合物Ｉが存在していることを確認した。ｔr＝１
５．８分。
【００３４】実施例２ 化合物Ｉの調製 Ａ．糸状菌ＭＦ５６５２の培養 殺菌した土に保存しておいた菌糸をガラス性スプーン１
かき用いて、ＭＦ５６５２株をＫＦ種培地に植菌した。
ＫＦ種培地の入ったフラスコを７２（時間）、２５℃、
２２０ｒｐｍ、湿度８５％で振盪培養した。培養終了後
２．０ｍＬずつを無菌的に１２個のＦ１固形生産培地お
よび１２個のＬＳＦ１液体生産培地に移植した。この生
産培地の入ったフラスコを２５℃、湿度８５％で、静置
（Ｆ１フラスコ）または２２０ｒｐｍの回転式シェーカ
ー上（ＬＳＦ１フラスコ）で２１日間培養した。終了後
５０ｍＬのメチルエチルケトンを各々のＦ１フラスコに
添加し固体菌体成分を手で小片にした。溶媒で処理した
フラスコを回転式シェーカーに移し、更に菌塊を細かく
して菌体が溶媒と接触しやすくするために２２０ｒｐｍ
にて３０分間攪拌した。攪拌後、フラスコの中身を集
め、全てのフラスコ成分（固形および全て）を１Ｌのフ
ラスコに移した。ＬＳＦ１フラスコは、菌体をＢiohomo
genizer／mixer（Ｂiospec Ｐroducts Ｉnc.，Ｂartles
ville，ＯＫ）を用いて高速で２０秒間ホモージナイズ
して回収した。ＬＳＦ１フラスコの全ての培養物を１Ｌ
の三角フラスコに貯蔵した。 Ｂ．化合物Ｉの単離 実施例２パートＡのＬＳＦ１液体培養液５０ｍＬを２.
５Ｎ ＨＣｌでｐＨを２．５に調整し、５０ｍＬの酢酸
エチルを添加した。混合液を室温で１時間攪拌し、層を
ＩＥＣ臨床遠心機中で遠心により分離した。酢酸エチル
層を取り、減圧濃縮した。残渣をメタノール／水（６／
４）に溶解した４０ｍＭギ酸ナトリウム溶液（ｐＨ４．
３）２０ｍｌに溶解した。この溶液を当量のヘキサンで
抽出操作を行い、ヘキサン層を除去することにより、脱
脂した。この脱脂したメタノール水溶液をＢioＲad Ａ
Ｇ４×４（ギ酸塩サイクル、１００−２００メッシュ）
の３ｍ Ｌカラムにおよそ毎時１０倍カラム量の流速で
供した。カラムをメタノール／水（６／４）に溶解した
４０ｍＭギ酸ナトリウム溶液（ｐＨ４．３）２５ｍｌで
洗浄し、更にＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ（６／４）２０ｍＬで洗
浄した。カラムをＣＨ3Ｃ Ｎ／Ｈ2Ｏ（６／４）中の
０．２Ｎ Ｈ2ＳＯ4溶液で溶出し、１０ｍＬづつ分画し
た。画分３と４に化合物Ｉが存在していた。化合物Ｉの
存在するＡＧ４×４の溶出画分を集め、１０％（ｗ／
ｖ）ＮａＣｌを含有する０．１Ｎ ＨＣｌ、２０ｍＬを
添加した。この溶液を１５ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2で１回抽出
し、ＣＨ2Ｃｌ2層を取り、Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、減圧濃
縮した。残渣を２ｍＬのメタノールに溶解し分析用ＨＰ
ＬＣ（Ｐhenomenx Ｕltracarb５ ＯＤＳ３０、１５ｃｍ
×４．６ｍｍ、６５％ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ＋０．１％Ｈ3
ＰＯ4、１．０ｍＬ／分、室温、Ｗaters ９９０＋ダイ
オードアレイ検出装置）で 分析したところ６μｇ／ｍ
ｌの化合物Ｉが存在していることを確認した。ｔr＝ １
５．８分。
かき用いて、ＭＦ５６５２株をＫＦ種培地に植菌した。
ＫＦ種培地の入ったフラスコを７２（時間）、２５℃、
２２０ｒｐｍ、湿度８５％で振盪培養した。培養終了後
２．０ｍＬずつを無菌的に１２個のＦ１固形生産培地お
よび１２個のＬＳＦ１液体生産培地に移植した。この生
産培地の入ったフラスコを２５℃、湿度８５％で、静置
（Ｆ１フラスコ）または２２０ｒｐｍの回転式シェーカ
ー上（ＬＳＦ１フラスコ）で２１日間培養した。終了後
５０ｍＬのメチルエチルケトンを各々のＦ１フラスコに
添加し固体菌体成分を手で小片にした。溶媒で処理した
フラスコを回転式シェーカーに移し、更に菌塊を細かく
して菌体が溶媒と接触しやすくするために２２０ｒｐｍ
にて３０分間攪拌した。攪拌後、フラスコの中身を集
め、全てのフラスコ成分（固形および全て）を１Ｌのフ
ラスコに移した。ＬＳＦ１フラスコは、菌体をＢiohomo
genizer／mixer（Ｂiospec Ｐroducts Ｉnc.，Ｂartles
ville，ＯＫ）を用いて高速で２０秒間ホモージナイズ
して回収した。ＬＳＦ１フラスコの全ての培養物を１Ｌ
の三角フラスコに貯蔵した。 Ｂ．化合物Ｉの単離 実施例２パートＡのＬＳＦ１液体培養液５０ｍＬを２.
５Ｎ ＨＣｌでｐＨを２．５に調整し、５０ｍＬの酢酸
エチルを添加した。混合液を室温で１時間攪拌し、層を
ＩＥＣ臨床遠心機中で遠心により分離した。酢酸エチル
層を取り、減圧濃縮した。残渣をメタノール／水（６／
４）に溶解した４０ｍＭギ酸ナトリウム溶液（ｐＨ４．
３）２０ｍｌに溶解した。この溶液を当量のヘキサンで
抽出操作を行い、ヘキサン層を除去することにより、脱
脂した。この脱脂したメタノール水溶液をＢioＲad Ａ
Ｇ４×４（ギ酸塩サイクル、１００−２００メッシュ）
の３ｍ Ｌカラムにおよそ毎時１０倍カラム量の流速で
供した。カラムをメタノール／水（６／４）に溶解した
４０ｍＭギ酸ナトリウム溶液（ｐＨ４．３）２５ｍｌで
洗浄し、更にＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ（６／４）２０ｍＬで洗
浄した。カラムをＣＨ3Ｃ Ｎ／Ｈ2Ｏ（６／４）中の
０．２Ｎ Ｈ2ＳＯ4溶液で溶出し、１０ｍＬづつ分画し
た。画分３と４に化合物Ｉが存在していた。化合物Ｉの
存在するＡＧ４×４の溶出画分を集め、１０％（ｗ／
ｖ）ＮａＣｌを含有する０．１Ｎ ＨＣｌ、２０ｍＬを
添加した。この溶液を１５ｍＬのＣＨ2Ｃｌ2で１回抽出
し、ＣＨ2Ｃｌ2層を取り、Ｎａ2ＳＯ4で脱水し、減圧濃
縮した。残渣を２ｍＬのメタノールに溶解し分析用ＨＰ
ＬＣ（Ｐhenomenx Ｕltracarb５ ＯＤＳ３０、１５ｃｍ
×４．６ｍｍ、６５％ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ＋０．１％Ｈ3
ＰＯ4、１．０ｍＬ／分、室温、Ｗaters ９９０＋ダイ
オードアレイ検出装置）で 分析したところ６μｇ／ｍ
ｌの化合物Ｉが存在していることを確認した。ｔr＝ １
５．８分。
【００３５】実施例３ 化合物Ｉの調製 Ａ．糸状菌ＭＦ５６５５の培養 殺菌した土に保存しておいた菌糸をガラス性スプーン１
かき用いて、ＭＦ５６５５株をＫＦ種培地に植菌した。
ＫＦ種培地の入ったフラスコを７０時間、２５℃、２２
０ｒｐｍ、湿度８５％で振盪培養した。培養終了後２．
０ｍＬずつを無菌的に９個のＦ２０２固形生産培地およ
び９個のＣＹＳ８０液体生産培地に移植した。この生産
培地の入ったフラスコを２５℃、湿度８５％で、静置
（Ｆ２０２フラスコ）、２２０ｒｐｍの回転式シェーカ
ー上（ＣＹＳ８０フラスコ）で７日間培養した。集菌
時、メタノール４５ｍｌづつを各々のＦ２０２フラスコ
に添加し、固体菌体成分を手で小片にした。溶媒で処理
したフラスコを回転式シェーカーに移し、更に菌塊を細
かくして菌体が溶媒と接触しやすくするために２２０ｒ
ｐｍで３０分間攪拌した。攪拌後、フラスコの中身を集
め、全てのフラスコ成分（固形および全て）を１Ｌのフ
ラスコに移した。ＣＹＳ８０フラスコは、菌体をＢioho
mogenizer／mixer（Ｂiospec Ｐroducts Ｉnc.，Ｂartl
esville，ＯＫ）を用いて高速で２０秒間ホモージナイ
ズして回収した。このようにして全てのＣＹＳ８０フラ
スコの培養物を１Ｌの三角フラスコに貯蔵した。 Ｂ．化合物Ｉの単離 実施例３パートＡの液体培養液４００ｍＬを５００ｍＬ
の２−ブタノンで処理し、混合液を激しく２時間攪拌し
た。上層を遠心により分離し、下層の水層を再度４００
ｍＬの２−ブタノンで抽出した。最初と２度目の２−ブ
タノン抽出物を併せ、減圧濃縮し、水溶液とした。この
濃縮物を水で１００ｍＬにし、混合液のｐＨを希塩酸を
用いて２．０に調整した。この水溶液を１００ｍＬの酢
酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を併せ、濃縮乾
固した。残渣をアセトニトリル／水（６／４）に溶解し
た２０ｍＭギ酸ナトリウム溶液１００ｍｌに溶解した。
溶液のｐＨは４．５に調整した。この水性アセトニトリ
ル溶液をｐＨ４．５でＢioＲad ＡＧ４×４（ギ酸塩サ
イクル、２００−４００メッシュ）の１０ｍＬカラムに
およそ４ｍＬ／分で吸着させた。カラムをアセトニトリ
ル／水（６／４）に溶解した６０ｍＭギ酸ナトリウム溶
液（ｐＨ４．５）１５０ｍｌで洗浄した。化合物Ｉはカ
ラムをアセトニトリル／水（６／４）中の０.２Ｎ Ｈ2
ＳＯ4溶液（ｐＨ１．３）で溶出した。溶出液は１０ｍ
Ｌづつ分画し、化合物ＩをＨＰＬＣで分析した。化合物
Ｉが存在する画分を集め、半量の、０.１Ｎ ＨＣｌを含
む１０％塩化ナトリウム水溶液で希釈し、当量のメチレ
ンクロライドで抽出した。メチレンクロライド抽出層を
無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮し、化合物Ｉを
得た。抽出物を逆相ＨＰＬＣにて精製すると本質的に純
粋な化合物Ｉの試料を得る。
かき用いて、ＭＦ５６５５株をＫＦ種培地に植菌した。
ＫＦ種培地の入ったフラスコを７０時間、２５℃、２２
０ｒｐｍ、湿度８５％で振盪培養した。培養終了後２．
０ｍＬずつを無菌的に９個のＦ２０２固形生産培地およ
び９個のＣＹＳ８０液体生産培地に移植した。この生産
培地の入ったフラスコを２５℃、湿度８５％で、静置
（Ｆ２０２フラスコ）、２２０ｒｐｍの回転式シェーカ
ー上（ＣＹＳ８０フラスコ）で７日間培養した。集菌
時、メタノール４５ｍｌづつを各々のＦ２０２フラスコ
に添加し、固体菌体成分を手で小片にした。溶媒で処理
したフラスコを回転式シェーカーに移し、更に菌塊を細
かくして菌体が溶媒と接触しやすくするために２２０ｒ
ｐｍで３０分間攪拌した。攪拌後、フラスコの中身を集
め、全てのフラスコ成分（固形および全て）を１Ｌのフ
ラスコに移した。ＣＹＳ８０フラスコは、菌体をＢioho
mogenizer／mixer（Ｂiospec Ｐroducts Ｉnc.，Ｂartl
esville，ＯＫ）を用いて高速で２０秒間ホモージナイ
ズして回収した。このようにして全てのＣＹＳ８０フラ
スコの培養物を１Ｌの三角フラスコに貯蔵した。 Ｂ．化合物Ｉの単離 実施例３パートＡの液体培養液４００ｍＬを５００ｍＬ
の２−ブタノンで処理し、混合液を激しく２時間攪拌し
た。上層を遠心により分離し、下層の水層を再度４００
ｍＬの２−ブタノンで抽出した。最初と２度目の２−ブ
タノン抽出物を併せ、減圧濃縮し、水溶液とした。この
濃縮物を水で１００ｍＬにし、混合液のｐＨを希塩酸を
用いて２．０に調整した。この水溶液を１００ｍＬの酢
酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を併せ、濃縮乾
固した。残渣をアセトニトリル／水（６／４）に溶解し
た２０ｍＭギ酸ナトリウム溶液１００ｍｌに溶解した。
溶液のｐＨは４．５に調整した。この水性アセトニトリ
ル溶液をｐＨ４．５でＢioＲad ＡＧ４×４（ギ酸塩サ
イクル、２００−４００メッシュ）の１０ｍＬカラムに
およそ４ｍＬ／分で吸着させた。カラムをアセトニトリ
ル／水（６／４）に溶解した６０ｍＭギ酸ナトリウム溶
液（ｐＨ４．５）１５０ｍｌで洗浄した。化合物Ｉはカ
ラムをアセトニトリル／水（６／４）中の０.２Ｎ Ｈ2
ＳＯ4溶液（ｐＨ１．３）で溶出した。溶出液は１０ｍ
Ｌづつ分画し、化合物ＩをＨＰＬＣで分析した。化合物
Ｉが存在する画分を集め、半量の、０.１Ｎ ＨＣｌを含
む１０％塩化ナトリウム水溶液で希釈し、当量のメチレ
ンクロライドで抽出した。メチレンクロライド抽出層を
無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮し、化合物Ｉを
得た。抽出物を逆相ＨＰＬＣにて精製すると本質的に純
粋な化合物Ｉの試料を得る。
【００３６】実施例４ 化合物Ｉの調製 Ａ．糸状菌ＭＦ５６５６の培養 殺菌した土に保存しておいた菌糸をガラス性スプーン１
かき用いて、ＭＦ５６５６株をＫＦ種培地に植菌した。
ＫＦ種培地の入ったフラスコを７０時間、２５℃、２２
０ｒｐｍ、湿度８５％で振盪培養した。培養終了後２．
０ｍＬずつを無菌的に１５個のＣＹＳ８０液体生産培地
に移植した。この生産培地の入ったフラスコを２５℃、
湿度８５％、２２０ｒｐｍで７日間培養した。フラスコ
を集め、菌体をＢiohomogenizer／mixer（Ｂiospec Ｐr
oducts Ｉnc.，Ｂartlesville，ＯＫ）を用いて高速で
２０秒間ホモジナイズする。このようにして全ての培養
物を１Ｌの三角フラスコに貯蔵した。 Ｂ．化合物Ｉの単離 実施例４パートＡの液体培養液４００ｍＬを５００ｍＬ
の２−ブタノンで処理し、混合液を激しく２時間攪拌し
た。上層を遠心により分離し、下層の水層を再度４００
ｍＬの２−ブタノンで抽出した。最初と２度目の２−ブ
タノン抽出物を併せ、減圧濃縮し、水溶液とした。この
濃縮物を水で１００ｍＬにし、混合液のｐＨを希塩酸を
用いて２．０に調整した。この水溶液を２度１００ｍＬ
の酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を併せ、濃縮乾
固した。残渣をアセトニトリル／水（６／４）に溶解し
た２０ｍＭギ酸ナトリウム、１００ｍＬ溶液に溶解し
た。溶液のｐＨは４．５に調整した。この水性アセトニ
トリル溶液をｐＨ４.５でＢioＲad ＡＧ４×４（ギ酸塩
サイクル、２００−４００メッシュ）の１０ｍＬカラム
におよそ４ｍＬ／分で吸着させた。カラムをアセトニト
リル／水（６／４）に溶解した６０ｍＭギ酸ナトリウム
溶液（ｐＨ４．５）１５０ｍｌで洗浄した。化合物Ｉは
カラムをアセトニトリル／水（６／４）中の０．２Ｎ
Ｈ2ＳＯ4溶液（ｐＨ１.３）で溶出することにより得ら
れた。溶出液は１０ｍＬづつ分画し、化合物ＩをＨＰＬ
Ｃで分析した。化合物Ｉが存在する画分を集め、半量の
０.１Ｎ Ｈ2ＳＯ4を含む１０％塩化ナトリウム水溶液で
希釈し、当量のメチレンクロライドで抽出した。メチレ
ンクロライド抽出層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減
圧濃縮し、化合物Ｉを得た。抽出物を逆相ＨＰＬＣにて
精製すると本質的に純粋な化合物Ｉの試料が得られた。
かき用いて、ＭＦ５６５６株をＫＦ種培地に植菌した。
ＫＦ種培地の入ったフラスコを７０時間、２５℃、２２
０ｒｐｍ、湿度８５％で振盪培養した。培養終了後２．
０ｍＬずつを無菌的に１５個のＣＹＳ８０液体生産培地
に移植した。この生産培地の入ったフラスコを２５℃、
湿度８５％、２２０ｒｐｍで７日間培養した。フラスコ
を集め、菌体をＢiohomogenizer／mixer（Ｂiospec Ｐr
oducts Ｉnc.，Ｂartlesville，ＯＫ）を用いて高速で
２０秒間ホモジナイズする。このようにして全ての培養
物を１Ｌの三角フラスコに貯蔵した。 Ｂ．化合物Ｉの単離 実施例４パートＡの液体培養液４００ｍＬを５００ｍＬ
の２−ブタノンで処理し、混合液を激しく２時間攪拌し
た。上層を遠心により分離し、下層の水層を再度４００
ｍＬの２−ブタノンで抽出した。最初と２度目の２−ブ
タノン抽出物を併せ、減圧濃縮し、水溶液とした。この
濃縮物を水で１００ｍＬにし、混合液のｐＨを希塩酸を
用いて２．０に調整した。この水溶液を２度１００ｍＬ
の酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を併せ、濃縮乾
固した。残渣をアセトニトリル／水（６／４）に溶解し
た２０ｍＭギ酸ナトリウム、１００ｍＬ溶液に溶解し
た。溶液のｐＨは４．５に調整した。この水性アセトニ
トリル溶液をｐＨ４.５でＢioＲad ＡＧ４×４（ギ酸塩
サイクル、２００−４００メッシュ）の１０ｍＬカラム
におよそ４ｍＬ／分で吸着させた。カラムをアセトニト
リル／水（６／４）に溶解した６０ｍＭギ酸ナトリウム
溶液（ｐＨ４．５）１５０ｍｌで洗浄した。化合物Ｉは
カラムをアセトニトリル／水（６／４）中の０．２Ｎ
Ｈ2ＳＯ4溶液（ｐＨ１.３）で溶出することにより得ら
れた。溶出液は１０ｍＬづつ分画し、化合物ＩをＨＰＬ
Ｃで分析した。化合物Ｉが存在する画分を集め、半量の
０.１Ｎ Ｈ2ＳＯ4を含む１０％塩化ナトリウム水溶液で
希釈し、当量のメチレンクロライドで抽出した。メチレ
ンクロライド抽出層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減
圧濃縮し、化合物Ｉを得た。抽出物を逆相ＨＰＬＣにて
精製すると本質的に純粋な化合物Ｉの試料が得られた。
【００３７】実施例５ 化合物Ｉの調製 Ａ．糸状菌ＭＦ５６５７の培養 殺菌した土に保存しておいた菌糸をガラス性スプーン１
かき用いて、ＭＦ５６５７株をＫＦ種培地に植菌した。
ＫＦ種培地の入ったフラスコを７０時間、２５℃、２２
０ｒｐｍ、湿度８５％で振盪培養した。培養終了後２．
０ｍＬずつを無菌的に９個のＦ２０２固形生産培地およ
び１０個のＣＹＳ８０液体生産培地に移植した。この生
産培地の入ったフラスコを２５℃、湿度８５％で、静置
（Ｆ２０２フラスコ）、あるいは２２０ｒｐｍの回転式
シェーカー上（ＣＹＳ８０フラスコ）で１４日間培養す
る。集菌時、メチルエチルケトンを５０ｍｌづつ各々の
Ｆ２０２フラスコに添加し、固体菌体成分を手で小片に
した。溶媒で処理したフラスコを回転式シェーカーに移
し、更に菌塊を細かくして菌体が溶媒と接触しやすくす
るために２２０ｒｐｍにて３０分間攪拌した。攪拌後、
フラスコの中身を集め、全てのフラスコ成分（固形およ
び全て）を１Ｌのフラスコに移した。ＣＹＳ８０フラス
コは、菌体をＢiohomogenizer／mixer（Ｂiospec Ｐrod
ucts Ｉnc.，Ｂartlesville，ＯＫ）を用いて高速で２
０秒間ホモージナイズして回収した。このようにして全
てのＣＹＳ８０フラスコの培養物を１Ｌの三角フラスコ
に貯蔵した。 Ｂ．化合物Ｉの単離 実施例５パートＡの液体培養液４００ｍＬを５００ｍＬ
の２−ブタノンで処理し、混合液を激しく２時間攪拌し
た。上層を遠心により分離し、下層の水層を再度４００
ｍＬの２−ブタノンで抽出した。最初と２度目の２−ブ
タノン抽出物を併せ、減圧濃縮し、水溶液とした。この
濃縮物を水で１００ｍＬにし、混合液のｐＨを希塩酸を
用いて２．０に調整した。この水溶液を１００ｍＬの酢
酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を併せ、濃縮乾
固した。残渣を、アセトニトリル／水（６／４）に溶解
した２０ｍＭギ酸ナトリウム溶液１００ｍｌに溶解し
た。溶液のｐＨは４．５に調整した。この水性アセトニ
トリル溶液をｐＨ４.５でＢioＲad ＡＧ４×４（ギ酸塩
サイクル、２００−４００メッシュ）の１０ｍＬカラム
におよそ４ｍＬ／分で吸着させた。カラムをアセトニト
リル／水（６／４）に溶解した６０ｍＭギ酸ナトリウム
溶液（ｐＨ４．５）１５０ｍｌで洗浄した。化合物Ｉは
カラムをアセトニトリル／水（６／４）中の０．２Ｎ
Ｈ2ＳＯ4溶液（ｐＨ１.３）で溶出した。溶出液は１０
ｍＬづつ分画し、化合物ＩをＨＰＬＣで分析した。化合
物Ｉが存在する画分を集め、２分の１量の、０.１Ｎ Ｈ
Ｃｌを含む１０％塩化ナトリウム水溶液で希釈し、当量
のメチレンクロライドで抽出した。メチレンクロライド
抽出層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮し、化
合物Ｉを得た。抽出物を逆相ＨＰＬＣにて精製すると本
質的に純粋な化合物Ｉの試料を得た。
かき用いて、ＭＦ５６５７株をＫＦ種培地に植菌した。
ＫＦ種培地の入ったフラスコを７０時間、２５℃、２２
０ｒｐｍ、湿度８５％で振盪培養した。培養終了後２．
０ｍＬずつを無菌的に９個のＦ２０２固形生産培地およ
び１０個のＣＹＳ８０液体生産培地に移植した。この生
産培地の入ったフラスコを２５℃、湿度８５％で、静置
（Ｆ２０２フラスコ）、あるいは２２０ｒｐｍの回転式
シェーカー上（ＣＹＳ８０フラスコ）で１４日間培養す
る。集菌時、メチルエチルケトンを５０ｍｌづつ各々の
Ｆ２０２フラスコに添加し、固体菌体成分を手で小片に
した。溶媒で処理したフラスコを回転式シェーカーに移
し、更に菌塊を細かくして菌体が溶媒と接触しやすくす
るために２２０ｒｐｍにて３０分間攪拌した。攪拌後、
フラスコの中身を集め、全てのフラスコ成分（固形およ
び全て）を１Ｌのフラスコに移した。ＣＹＳ８０フラス
コは、菌体をＢiohomogenizer／mixer（Ｂiospec Ｐrod
ucts Ｉnc.，Ｂartlesville，ＯＫ）を用いて高速で２
０秒間ホモージナイズして回収した。このようにして全
てのＣＹＳ８０フラスコの培養物を１Ｌの三角フラスコ
に貯蔵した。 Ｂ．化合物Ｉの単離 実施例５パートＡの液体培養液４００ｍＬを５００ｍＬ
の２−ブタノンで処理し、混合液を激しく２時間攪拌し
た。上層を遠心により分離し、下層の水層を再度４００
ｍＬの２−ブタノンで抽出した。最初と２度目の２−ブ
タノン抽出物を併せ、減圧濃縮し、水溶液とした。この
濃縮物を水で１００ｍＬにし、混合液のｐＨを希塩酸を
用いて２．０に調整した。この水溶液を１００ｍＬの酢
酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を併せ、濃縮乾
固した。残渣を、アセトニトリル／水（６／４）に溶解
した２０ｍＭギ酸ナトリウム溶液１００ｍｌに溶解し
た。溶液のｐＨは４．５に調整した。この水性アセトニ
トリル溶液をｐＨ４.５でＢioＲad ＡＧ４×４（ギ酸塩
サイクル、２００−４００メッシュ）の１０ｍＬカラム
におよそ４ｍＬ／分で吸着させた。カラムをアセトニト
リル／水（６／４）に溶解した６０ｍＭギ酸ナトリウム
溶液（ｐＨ４．５）１５０ｍｌで洗浄した。化合物Ｉは
カラムをアセトニトリル／水（６／４）中の０．２Ｎ
Ｈ2ＳＯ4溶液（ｐＨ１.３）で溶出した。溶出液は１０
ｍＬづつ分画し、化合物ＩをＨＰＬＣで分析した。化合
物Ｉが存在する画分を集め、２分の１量の、０.１Ｎ Ｈ
Ｃｌを含む１０％塩化ナトリウム水溶液で希釈し、当量
のメチレンクロライドで抽出した。メチレンクロライド
抽出層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃縮し、化
合物Ｉを得た。抽出物を逆相ＨＰＬＣにて精製すると本
質的に純粋な化合物Ｉの試料を得た。
【００３８】実施例６ 化合物Ｉの調製 Ａ．糸状菌ＭＦ５６６３の培養 殺菌した土に保存しておいた菌糸をガラス性スプーン１
かき用いて、ＭＦ５６６３株をＫＦ種培地に植菌した。
ＫＦ種培地の入ったフラスコを７２時間、２５℃、２２
０ｒｐｍ、湿度８５％で振盪培養した。培養終了後２．
０ｍＬずつを無菌的に１５個のＣＹＳ８０液体生産培地
に移植した。この生産培地の入ったフラスコを２５℃、
湿度８５％、２２０ｒｐｍで２２日間培養した。フラス
コを集め、菌体をＢiohomogenizer／mixer（Ｂiospec
Ｐroducts Ｉnc.，Ｂartlesville， ＯＫ）を用いて高
速で２０秒間ホモジナイズした。このようにして全ての
培養物を１Ｌの三角フラスコに貯蔵した。 Ｂ．化合物Ｉの単離 実施例６パートＡの液体培養液４００ｍＬを５００ｍＬ
の２−ブタノンで処理し、混合液を激しく２時間攪拌し
た。上層を遠心により分離し、下層の水層を再度４００
ｍＬの２−ブタノンで抽出した。最初と２度目の２−ブ
タノン抽出物を併せ、減圧濃縮し、水溶液とした。この
濃縮物を水で１００ｍＬにし、混合液のｐＨを希塩酸を
用いて２．０に調整した。この水溶液を１００ｍＬの酢
酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を併せ、濃縮乾
固した。残渣をアセトニトリル／水（６／４）に溶解し
た２０ｍＭギ酸ナトリウム溶液１００ｍｌに溶解した。
溶液のｐＨは４．５に調整した。この水性アセトニトリ
ル溶液をｐＨ４.５でＢioＲad ＡＧ４×４（ギ酸塩サイ
クル、２００−４００メッシュ）の１０ｍＬカラムにお
よそ４ｍＬ／分で吸着させた。カラムをアセトニトリル
／水（６／４）に溶解した６０ｍＭギ酸ナトリウム溶液
（ｐＨ４．５）１５０ｍｌで洗浄した。化合物Ｉはカラ
ムをアセトニトリル／水（６／４）中の０．２Ｎ Ｈ2Ｓ
Ｏ4溶液（ｐＨ１.３）で溶出することにより得られた。
溶出液は１０ｍＬづつ分画し、化合物ＩをＨＰＬＣで分
析した。化合物Ｉが存在する画分を集め、半量の、０.
１Ｎ ＨＣｌを含む１０％塩化ナトリウム水溶液で希釈
し、当量のメチレンクロライドで抽出した。メチレンク
ロライド抽出層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃
縮し、化合物Ｉを得た。抽出物を逆相ＨＰＬＣにて精製
すると本質的に純粋な化合物Ｉの試料が得られた。 Ｃ．化合物Ｉの物理化学的性状 本化合物はＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ７３１に〔Ｍ＋
Ｈ〕+、酢酸リチウムの付加による〔Ｍ・Ｌｉ3＋Ｌｉ〕
+（即ちｍ／ｚ７５５にトリリチウム塩であるリチウム
付加物のピーク）が観測された）により分子量は７３０
と決定された。化合物のヘキサ−トリメチルシラン誘導
体のＨＲ−ＥＩ測定によって、本化合物の分子式はＣ39
Ｈ54Ｏ13と決定した（Ｃ39Ｈ54Ｏ13＋（ＳｉＣ3Ｈ8）6
−ＣＨ3に対する計算値は１１４７．５７０１、実測値
は１１４７．５７５１）。 1Ｈ ＮＭＲスペクトル （４００ＭＨｚ）（ＣＤ3ＯＤ、
２２℃）：図１参照。 13Ｃ ＮＭＲ化学シフト値 （ＣＤ3ＯＤ、２２℃）：１
４．８、１５．２、１８．１、２５．３、２７．５、３
０．１、３０．３（２ｘ）、３３．２、３３．５（２
ｘ）、３３．９、３４．８、３６．７、３６．９、３
８．６、７５．７、７６．７、７８．４、８１．０、８
２．０、９１．１、１０７．５、１２５．７、１２７．
０（２ｘ）、１２７．９、１２９．５（２ｘ）、１３
０．２、１３１．０、１３１．９、１３２．５７、１３
２．６３、１３９．３、１６８．６、１７０．３、１７
２．６、１７３．６ｐｐｍ。ＵＶ（ＭｅＯＨ） ：λｍａｘは２５０ｎｍ（ε２３．０
００）ＩＲ（遊離酸として；ＺｎＳｅフィルム法） ：３２２０
ｂｒ、２９２４、２８５５、２４８９ｂｒ、１７４１、
１４３６、１４１７、１２６６、１１５２、１１２２、
１００４、９６７、９５０、８０４、７４４、６９５ｃ
ｍ-1。
かき用いて、ＭＦ５６６３株をＫＦ種培地に植菌した。
ＫＦ種培地の入ったフラスコを７２時間、２５℃、２２
０ｒｐｍ、湿度８５％で振盪培養した。培養終了後２．
０ｍＬずつを無菌的に１５個のＣＹＳ８０液体生産培地
に移植した。この生産培地の入ったフラスコを２５℃、
湿度８５％、２２０ｒｐｍで２２日間培養した。フラス
コを集め、菌体をＢiohomogenizer／mixer（Ｂiospec
Ｐroducts Ｉnc.，Ｂartlesville， ＯＫ）を用いて高
速で２０秒間ホモジナイズした。このようにして全ての
培養物を１Ｌの三角フラスコに貯蔵した。 Ｂ．化合物Ｉの単離 実施例６パートＡの液体培養液４００ｍＬを５００ｍＬ
の２−ブタノンで処理し、混合液を激しく２時間攪拌し
た。上層を遠心により分離し、下層の水層を再度４００
ｍＬの２−ブタノンで抽出した。最初と２度目の２−ブ
タノン抽出物を併せ、減圧濃縮し、水溶液とした。この
濃縮物を水で１００ｍＬにし、混合液のｐＨを希塩酸を
用いて２．０に調整した。この水溶液を１００ｍＬの酢
酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を併せ、濃縮乾
固した。残渣をアセトニトリル／水（６／４）に溶解し
た２０ｍＭギ酸ナトリウム溶液１００ｍｌに溶解した。
溶液のｐＨは４．５に調整した。この水性アセトニトリ
ル溶液をｐＨ４.５でＢioＲad ＡＧ４×４（ギ酸塩サイ
クル、２００−４００メッシュ）の１０ｍＬカラムにお
よそ４ｍＬ／分で吸着させた。カラムをアセトニトリル
／水（６／４）に溶解した６０ｍＭギ酸ナトリウム溶液
（ｐＨ４．５）１５０ｍｌで洗浄した。化合物Ｉはカラ
ムをアセトニトリル／水（６／４）中の０．２Ｎ Ｈ2Ｓ
Ｏ4溶液（ｐＨ１.３）で溶出することにより得られた。
溶出液は１０ｍＬづつ分画し、化合物ＩをＨＰＬＣで分
析した。化合物Ｉが存在する画分を集め、半量の、０.
１Ｎ ＨＣｌを含む１０％塩化ナトリウム水溶液で希釈
し、当量のメチレンクロライドで抽出した。メチレンク
ロライド抽出層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、減圧濃
縮し、化合物Ｉを得た。抽出物を逆相ＨＰＬＣにて精製
すると本質的に純粋な化合物Ｉの試料が得られた。 Ｃ．化合物Ｉの物理化学的性状 本化合物はＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ７３１に〔Ｍ＋
Ｈ〕+、酢酸リチウムの付加による〔Ｍ・Ｌｉ3＋Ｌｉ〕
+（即ちｍ／ｚ７５５にトリリチウム塩であるリチウム
付加物のピーク）が観測された）により分子量は７３０
と決定された。化合物のヘキサ−トリメチルシラン誘導
体のＨＲ−ＥＩ測定によって、本化合物の分子式はＣ39
Ｈ54Ｏ13と決定した（Ｃ39Ｈ54Ｏ13＋（ＳｉＣ3Ｈ8）6
−ＣＨ3に対する計算値は１１４７．５７０１、実測値
は１１４７．５７５１）。 1Ｈ ＮＭＲスペクトル （４００ＭＨｚ）（ＣＤ3ＯＤ、
２２℃）：図１参照。 13Ｃ ＮＭＲ化学シフト値 （ＣＤ3ＯＤ、２２℃）：１
４．８、１５．２、１８．１、２５．３、２７．５、３
０．１、３０．３（２ｘ）、３３．２、３３．５（２
ｘ）、３３．９、３４．８、３６．７、３６．９、３
８．６、７５．７、７６．７、７８．４、８１．０、８
２．０、９１．１、１０７．５、１２５．７、１２７．
０（２ｘ）、１２７．９、１２９．５（２ｘ）、１３
０．２、１３１．０、１３１．９、１３２．５７、１３
２．６３、１３９．３、１６８．６、１７０．３、１７
２．６、１７３．６ｐｐｍ。ＵＶ（ＭｅＯＨ） ：λｍａｘは２５０ｎｍ（ε２３．０
００）ＩＲ（遊離酸として；ＺｎＳｅフィルム法） ：３２２０
ｂｒ、２９２４、２８５５、２４８９ｂｒ、１７４１、
１４３６、１４１７、１２６６、１１５２、１１２２、
１００４、９６７、９５０、８０４、７４４、６９５ｃ
ｍ-1。
【図１】本化合物のＮＭＲスペクトルを示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｄ Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 マリア ティー．ディエス−マタス スペイン国，28010 マドリッド，シー ／オリド，４ (72)発明者 メアリ ナリン オムステッド アメリカ合衆国，07090 ニュージャーシ ィ，ウエストフィールド，ウエストフィー ルド アヴェニュー 634 (72)発明者 フェルナンド ペラエス スペイン国，28038 マドリッド，シー ／カミロデ ヴァルデリバス，110 (72)発明者 ユ リン コング アメリカ合衆国，08820 ニュージャーシ ィ，エジソン，ブライアント アヴェニュ ー 57
Claims (8)
- 【請求項１】 スクアレンシンセターゼ活性を阻害す
る、以下の構造を有する物質を発酵ブロス中に回収可能
な量生産できるスポロルミエラ・インテルメディア（Ｓ
porormiella intermedia）（ＡＴＣＣ２０９８５とＡＴ
ＣＣ２０９８９を除く）の生物学的純粋培養。 【化１】 - 【請求項２】 スクアレンシンセターゼ活性を阻害す
る、以下の構造を有する物質を発酵ブロス中に回収可能
な量生産できるスポロルミエラ・インテルメディア（Ｓ
porormiella intermedia）（ＡＴＣＣ２０９８５とＡＴ
ＣＣ２０９８９を除く）の培養。 【化２】 - 【請求項３】 以下の株またはこれらの活性変異株から
選択された、請求項１記載の生物学的純粋培養。 （ａ）ＭＦ５６５１（ＡＴＣＣ７４０７２） （ｂ）ＭＦ５６５２（ＡＴＣＣ７４０７３） （ｃ）ＭＦ５６５５（ＡＴＣＣ７４０７４） （ｄ）ＭＦ５６５６（ＡＴＣＣ７４０７５） （ｅ）ＭＦ５６５７（ＡＴＣＣ７４０７６） （ｆ）ＭＦ５６６３（ＡＴＣＣ７４０８３） - 【請求項４】 以下の株またはこれらの活性変異株から
選択された、請求項２記載の培養。 （ａ）ＭＦ５６５１（ＡＴＣＣ７４０７２） （ｂ）ＭＦ５６５２（ＡＴＣＣ７４０７３） （ｃ）ＭＦ５６５５（ＡＴＣＣ７４０７４） （ｄ）ＭＦ５６５６（ＡＴＣＣ７４０７５） （ｅ）ＭＦ５６５７（ＡＴＣＣ７４０７６） （ｆ）ＭＦ５６６３（ＡＴＣＣ７４０８３） - 【請求項５】 下記構造式（Ｉ）の化合物の製造方法で
あって、スポロルミエラ・インテルメディア（ＡＴＣＣ
２０９８５とＡＴＣＣ２０９８９を除く）をその化合物
の発酵生産およびその回収に適切な条件下で培養するこ
とから成る製造方法。 【化３】 - 【請求項６】 スポロルミエラ・インテルメディアが以
下の株またはこれらの活性変異株から選択されたもので
ある、請求項５記載の製造方法。 （ａ）ＭＦ５６５１（ＡＴＣＣ７４０７２） （ｂ）ＭＦ５６５２（ＡＴＣＣ７４０７３） （ｃ）ＭＦ５６５５（ＡＴＣＣ７４０７４） （ｄ）ＭＦ５６５６（ＡＴＣＣ７４０７５） （ｅ）ＭＦ５６５７（ＡＴＣＣ７４０７６） （ｆ）ＭＦ５６６３（ＡＴＣＣ７４０８３） - 【請求項７】 発酵培養を７から２１日間行なう、請求
項５記載の製造方法。 - 【請求項８】 発酵培養を７から２１日間行なう、請求
項６記載の製造方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US72335791A | 1991-06-28 | 1991-06-28 | |
| US723357 | 1991-06-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0751052A true JPH0751052A (ja) | 1995-02-28 |
Family
ID=24905881
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4210630A Pending JPH0751052A (ja) | 1991-06-28 | 1992-06-29 | スポロルミエラ・インテルメディアとそれを利用するプロセス |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0525846A1 (ja) |
| JP (1) | JPH0751052A (ja) |
| CA (1) | CA2071655A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5430055A (en) * | 1994-04-08 | 1995-07-04 | Pfizer Inc. | Inhibitor of squalene synthase |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL97251A0 (en) * | 1990-03-21 | 1992-05-25 | Merck & Co Inc | Antihypercholesterolemic 2,8-dioxabicyclo(3,2,1)octane derivatives,their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| US5026554A (en) * | 1990-09-13 | 1991-06-25 | Merck & Co., Inc. | Method of inhibiting fungal growth using squalene synthetase inhibitors |
-
1992
- 1992-06-19 CA CA002071655A patent/CA2071655A1/en not_active Abandoned
- 1992-06-20 EP EP92201829A patent/EP0525846A1/en not_active Withdrawn
- 1992-06-29 JP JP4210630A patent/JPH0751052A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0525846A1 (en) | 1993-02-03 |
| CA2071655A1 (en) | 1992-12-29 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 19960313 |