JPH09165398A - タム−ホースフォール・グリコプロテインもしくはウロモジュリンの精製法、精製物および両者の識別法 - Google Patents
タム−ホースフォール・グリコプロテインもしくはウロモジュリンの精製法、精製物および両者の識別法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 タム−ホースフォール・グリコプロテイン
（ＴＨＧ）およびウロモジュリンの効率的な精製法およ
び両者の識別法を提供する。 【解決手段】 人尿を凍結したのち融解して生成する沈
澱分画を採取するか人尿に安息香酸ナトリウムもしくは
アンモニウムを溶解したのち溶液を安息香酸の析出する
酸性にして生成する沈澱分画を採取することを特徴とす
るＴＨＧもしくはウロモジュリンの精製法、ヒト免疫グ
ロブリンのクラスおよびサブクラスに対して互に異る結
合性を示す各精製物、およびその結合性を利用して両者
を識別する方法。 【効果】 本発明によれば、ＴＨＧおよびウロモジュリ
ンを簡易な操作で高効率で精製することができ、特有の
性質を示す精製物が得られ、またその性質を利用して両
者を識別することができる。
（ＴＨＧ）およびウロモジュリンの効率的な精製法およ
び両者の識別法を提供する。 【解決手段】 人尿を凍結したのち融解して生成する沈
澱分画を採取するか人尿に安息香酸ナトリウムもしくは
アンモニウムを溶解したのち溶液を安息香酸の析出する
酸性にして生成する沈澱分画を採取することを特徴とす
るＴＨＧもしくはウロモジュリンの精製法、ヒト免疫グ
ロブリンのクラスおよびサブクラスに対して互に異る結
合性を示す各精製物、およびその結合性を利用して両者
を識別する方法。 【効果】 本発明によれば、ＴＨＧおよびウロモジュリ
ンを簡易な操作で高効率で精製することができ、特有の
性質を示す精製物が得られ、またその性質を利用して両
者を識別することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はヒト尿由来のタム−ホー
スフォール・グリコプロテイン（Ｔａｍｍ−Ｈｏｒｓｆ
ａｌｌ Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）（以後ＴＨＧと略
称する）およびウロモジュリン（Ｕｒｏｍｏｄｕｌｉ
ｎ）の精製法と精製物および免疫グロブリンを使った両
蛋白の識別法に関するものである。
スフォール・グリコプロテイン（Ｔａｍｍ−Ｈｏｒｓｆ
ａｌｌ Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）（以後ＴＨＧと略
称する）およびウロモジュリン（Ｕｒｏｍｏｄｕｌｉ
ｎ）の精製法と精製物および免疫グロブリンを使った両
蛋白の識別法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ＴＨＧは当初、ウリナリ・ムコプロテイ
ン（ｕｒｉｎａｒｙ ｍｕｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）として
発見され（Ｍｏｒｎｅｒ ＫＡＨ，１８９５ Ｓｋａｎ
ｄ．Ａｒｃｈ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．６：３３２）、ウィル
スによる赤血球凝集反応を尿中で阻害する因子であると
報告された（Ｔａｍｍ Ｉ ａｎｄ Ｈｏｒｓｆａｌｌ
ＦＬ．１９５０ Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｍｅｄ．７４：１０８）。具体的な精製法として
は、尿を集め、４℃で一晩保存した後上清を一部廃棄
し、その残部に０．５８ＭになるようにＮａＣｌを加え
攪拌する。その後遠心分離し沈澱を集め、水で溶かし再
び遠心しその上清を集めて凍結乾燥したものがＴＨＧで
あるとされている。以後多くの研究者によってＴＨＧは
部分的改良を施された様々な方法で精製されているが、
基本的には上記の方法に沿って精製されている（Ｍｏｏ
ｎｅｎ Ｐ ｅｔ ａｌ，１９８８ ＦＥＢＳ Ｌｅｔ
ｔ．２２６：３１４、Ｔｏｍａ Ｇ ｅｔ ａｌ，１９
９４ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏ
ｍｍｕｎ．２００：２７５）。
ン（ｕｒｉｎａｒｙ ｍｕｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）として
発見され（Ｍｏｒｎｅｒ ＫＡＨ，１８９５ Ｓｋａｎ
ｄ．Ａｒｃｈ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．６：３３２）、ウィル
スによる赤血球凝集反応を尿中で阻害する因子であると
報告された（Ｔａｍｍ Ｉ ａｎｄ Ｈｏｒｓｆａｌｌ
ＦＬ．１９５０ Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｍｅｄ．７４：１０８）。具体的な精製法として
は、尿を集め、４℃で一晩保存した後上清を一部廃棄
し、その残部に０．５８ＭになるようにＮａＣｌを加え
攪拌する。その後遠心分離し沈澱を集め、水で溶かし再
び遠心しその上清を集めて凍結乾燥したものがＴＨＧで
あるとされている。以後多くの研究者によってＴＨＧは
部分的改良を施された様々な方法で精製されているが、
基本的には上記の方法に沿って精製されている（Ｍｏｏ
ｎｅｎ Ｐ ｅｔ ａｌ，１９８８ ＦＥＢＳ Ｌｅｔ
ｔ．２２６：３１４、Ｔｏｍａ Ｇ ｅｔ ａｌ，１９
９４ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏ
ｍｍｕｎ．２００：２７５）。
【０００３】一方、妊婦尿からＴＨＧと同じアミノ酸配
列を持つ糖タンパク質ウロモジュリン（Ｕｒｏｍｏｄｕ
ｌｉｎ）が精製された（Ｍｕｃｈｍｏｒｅ ＡＶ ａｎ
ｄＤｅｃｋｅｒ ＪＭ，１９８５ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
２９：４７９）。ウロモジュリンは妊婦尿をレクチンカ
ラム（Ｃｏｎ Ａ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ｃｏｌｏｍ
ｎ）にかけた後、α−メチルマンノースによって溶出し
た液を水に対し透析し凍結乾燥する。これをリン酸緩衝
食塩水に再溶解しゲル濾過、等電点電気泳動によって再
度分離し、限外濾過膜にて濃縮して精製される。当初、
ウロモジュリンの糖鎖部位には多くの機能がありＩＬ−
１，ＩＬ−２，腸瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカ
インの特異的なリガンドとされてきた（Ｈｅｓｓｉｏｎ
Ｃ ｅｔ ａｌ，１９８７ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３
７：１４９７、ＳｈｅｒｂｌｏｍＡＰ ｅｔ ａｌ，１
９８９ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３：９３９、Ｂｒｏ
ｗｎ ＫＭ ｅｔ ａｌ，１９８６ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：９１１９、
Ｗｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ Ａ ｅｔ ａｌ，１９９０
Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２０：２０
１）。しかし最近では単に尿から塩析法によって精製さ
れたものをＴＨＧ、妊婦尿を原料として塩析法によって
精製されたものをウロモジュリンと呼んでいる。
列を持つ糖タンパク質ウロモジュリン（Ｕｒｏｍｏｄｕ
ｌｉｎ）が精製された（Ｍｕｃｈｍｏｒｅ ＡＶ ａｎ
ｄＤｅｃｋｅｒ ＪＭ，１９８５ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２
２９：４７９）。ウロモジュリンは妊婦尿をレクチンカ
ラム（Ｃｏｎ Ａ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ｃｏｌｏｍ
ｎ）にかけた後、α−メチルマンノースによって溶出し
た液を水に対し透析し凍結乾燥する。これをリン酸緩衝
食塩水に再溶解しゲル濾過、等電点電気泳動によって再
度分離し、限外濾過膜にて濃縮して精製される。当初、
ウロモジュリンの糖鎖部位には多くの機能がありＩＬ−
１，ＩＬ−２，腸瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカ
インの特異的なリガンドとされてきた（Ｈｅｓｓｉｏｎ
Ｃ ｅｔ ａｌ，１９８７ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３
７：１４９７、ＳｈｅｒｂｌｏｍＡＰ ｅｔ ａｌ，１
９８９ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４３：９３９、Ｂｒｏ
ｗｎ ＫＭ ｅｔ ａｌ，１９８６ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：９１１９、
Ｗｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ Ａ ｅｔ ａｌ，１９９０
Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２０：２０
１）。しかし最近では単に尿から塩析法によって精製さ
れたものをＴＨＧ、妊婦尿を原料として塩析法によって
精製されたものをウロモジュリンと呼んでいる。
【０００４】ＴＨＧには分子量の約３０％の糖が含まれ
ており、ＧｌｕＮａ2 Ｍａｎ（５−７）（ＧｌｕＮ
ａ：Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｍａｎ：マンノース）
で示されるマンノースを豊富に含む糖鎖構造を有してい
る。そしてＭａｎ５，Ｍａｎ６の糖鎖残基がＩＬ−１や
ＩＬ−２、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を含むサイトカイン
と特異的に結合していることが判明している。これらの
ことはＴＨＧが免疫調節機構に関与している可能性を示
唆しているが、アミノ酸配列が同一であるウロモジュリ
ンのほうが免疫抑制作用が１０倍以上高いとされてい
る。また、最近羊由来のＴＨＧが羊ＩｇＧと結合し、ヒ
ト由来ＴＨＧも同様にヒトＩｇＧと結合することが報告
されている（Ｒｈｏｄｅｓ ＤＣＪ ｅｔ ａｌ，１９
９３ Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．４４：１０１４）。した
がって、ＴＨＧはサイトカインを介した免疫調節機構以
外にも、細尿管内での新しい免疫制御または免疫防衛に
重要な役割をしているものと考えられる。しかし、現在
ＴＨＧとウロモジュリンの識別を正確に把握し、定量す
る方法は確立されていない。
ており、ＧｌｕＮａ2 Ｍａｎ（５−７）（ＧｌｕＮ
ａ：Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｍａｎ：マンノース）
で示されるマンノースを豊富に含む糖鎖構造を有してい
る。そしてＭａｎ５，Ｍａｎ６の糖鎖残基がＩＬ−１や
ＩＬ−２、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を含むサイトカイン
と特異的に結合していることが判明している。これらの
ことはＴＨＧが免疫調節機構に関与している可能性を示
唆しているが、アミノ酸配列が同一であるウロモジュリ
ンのほうが免疫抑制作用が１０倍以上高いとされてい
る。また、最近羊由来のＴＨＧが羊ＩｇＧと結合し、ヒ
ト由来ＴＨＧも同様にヒトＩｇＧと結合することが報告
されている（Ｒｈｏｄｅｓ ＤＣＪ ｅｔ ａｌ，１９
９３ Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．４４：１０１４）。した
がって、ＴＨＧはサイトカインを介した免疫調節機構以
外にも、細尿管内での新しい免疫制御または免疫防衛に
重要な役割をしているものと考えられる。しかし、現在
ＴＨＧとウロモジュリンの識別を正確に把握し、定量す
る方法は確立されていない。
【０００５】
【発明の解決しようとする課題】ＴＨＧ及びウロモジュ
リンの精製を行うに当たり多くの研究者は上記の塩析法
を用いている。しかしこの方法では目的タンパク質は勿
論のこと、それ以外にも多くの不純物を巻き込んで沈澱
させる恐れがあり、後の精製過程において不純物を除く
過程を多く取り入れなければならない。この問題点を克
服するためにはもっと穏やかな方法でタンパク沈澱を得
る必要がある。また、ＴＨＧ及びウロモジュリンは金属
イオン（Ｎａ+ 、Ｃａ2+など）がその溶液中に存在する
と容易にゲル化するため、凍結乾燥したＴＨＧを生理的
食塩水で溶解するのは容易ではない。このため、ＴＨＧ
の精製過程において、凍結乾燥の過程を取り入れずに初
めから生理的条件下において精製することが望ましい。
更に、ＴＨＧとウロモジュリンが正確に測定でき、その
定量法が確立されれば、その生理的および臨床的意義が
より有効に解明されるものと考えられる。
リンの精製を行うに当たり多くの研究者は上記の塩析法
を用いている。しかしこの方法では目的タンパク質は勿
論のこと、それ以外にも多くの不純物を巻き込んで沈澱
させる恐れがあり、後の精製過程において不純物を除く
過程を多く取り入れなければならない。この問題点を克
服するためにはもっと穏やかな方法でタンパク沈澱を得
る必要がある。また、ＴＨＧ及びウロモジュリンは金属
イオン（Ｎａ+ 、Ｃａ2+など）がその溶液中に存在する
と容易にゲル化するため、凍結乾燥したＴＨＧを生理的
食塩水で溶解するのは容易ではない。このため、ＴＨＧ
の精製過程において、凍結乾燥の過程を取り入れずに初
めから生理的条件下において精製することが望ましい。
更に、ＴＨＧとウロモジュリンが正確に測定でき、その
定量法が確立されれば、その生理的および臨床的意義が
より有効に解明されるものと考えられる。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは一般尿、妊
婦尿に関わらず尿を一度凍結し解凍したときに多くの沈
澱物が生じており、その沈澱に多量のＴＨＧが含まれて
いることを見いだし、塩析法を用いずに凍結融解の１過
程において、多量のＴＨＧを沈澱させることに成功し
た。また、塩析法とは違って急激に沈澱を生じさせる方
法ではないため不純物を巻き込みにくいという利点も持
っていた。次に、多くの精製過程を簡素化した結果、高
速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣと略称す
る）を用いてゲル濾過を行えば、効率よく不純物（主に
色素）を取り除くことができ、また、集めたフラクショ
ンは凍結乾燥することなく、たとえば孔径約０．２μｍ
のフィルターを通すことにより、４℃で保存できること
を知った。ウロモジュリンは妊婦尿から上記の凍結融解
沈澱法以外にも安息香酸沈澱法で精製できる方法を確立
した。更に、精製ＴＨＧはヒト免疫グロブリンのクラス
（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ）とＩｇＧのサブクラスの全
て（ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４）、およ
びＩｇＧのＦ（ａｂ’）2 断片と結合する。しかしウロ
モジュリンはヒト免疫グロブリンのクラス（ＩｇＧ、Ｉ
ｇＡ）およびＩｇＧのサブクラス（ＩｇＧ１，ＩｇＧ
２，ＩｇＧ４）と結合するがＩｇＭ、ＩｇＧのサブクラ
スであるＩｇＧ３およびＩｇＧのＦ（ａｂ’）2 断片と
は結合しにくいことを見いだした。
婦尿に関わらず尿を一度凍結し解凍したときに多くの沈
澱物が生じており、その沈澱に多量のＴＨＧが含まれて
いることを見いだし、塩析法を用いずに凍結融解の１過
程において、多量のＴＨＧを沈澱させることに成功し
た。また、塩析法とは違って急激に沈澱を生じさせる方
法ではないため不純物を巻き込みにくいという利点も持
っていた。次に、多くの精製過程を簡素化した結果、高
速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣと略称す
る）を用いてゲル濾過を行えば、効率よく不純物（主に
色素）を取り除くことができ、また、集めたフラクショ
ンは凍結乾燥することなく、たとえば孔径約０．２μｍ
のフィルターを通すことにより、４℃で保存できること
を知った。ウロモジュリンは妊婦尿から上記の凍結融解
沈澱法以外にも安息香酸沈澱法で精製できる方法を確立
した。更に、精製ＴＨＧはヒト免疫グロブリンのクラス
（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ）とＩｇＧのサブクラスの全
て（ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４）、およ
びＩｇＧのＦ（ａｂ’）2 断片と結合する。しかしウロ
モジュリンはヒト免疫グロブリンのクラス（ＩｇＧ、Ｉ
ｇＡ）およびＩｇＧのサブクラス（ＩｇＧ１，ＩｇＧ
２，ＩｇＧ４）と結合するがＩｇＭ、ＩｇＧのサブクラ
スであるＩｇＧ３およびＩｇＧのＦ（ａｂ’）2 断片と
は結合しにくいことを見いだした。
【０００７】本発明はこれらの新知見を基礎としてさら
に発展させたもので、人尿を凍結したのち融解して生成
する沈澱分画を採取するか、人尿に安息香酸ナトリウム
もしくはアンモニウムを溶解したのち溶液を安息香酸の
析出する酸性にして生成する沈澱分画を採取することを
特徴とするＴＨＧもしくはウロモジュリンの精製法、特
定の性質を有するＴＨＧもしくはウロモジュリンの精製
物、および試料にヒトＩｇＧのＦ（ａｂ’）2 断片等の
ウロモジュリンが結合しにくい免疫グロブリンを作用さ
せ、その作用量を測定することを特徴とするＴＨＧとウ
ロモジュリンを識別する方法に関する。
に発展させたもので、人尿を凍結したのち融解して生成
する沈澱分画を採取するか、人尿に安息香酸ナトリウム
もしくはアンモニウムを溶解したのち溶液を安息香酸の
析出する酸性にして生成する沈澱分画を採取することを
特徴とするＴＨＧもしくはウロモジュリンの精製法、特
定の性質を有するＴＨＧもしくはウロモジュリンの精製
物、および試料にヒトＩｇＧのＦ（ａｂ’）2 断片等の
ウロモジュリンが結合しにくい免疫グロブリンを作用さ
せ、その作用量を測定することを特徴とするＴＨＧとウ
ロモジュリンを識別する方法に関する。
【０００８】人尿の凍結、融解は通常の方法で行うこと
ができ、融解液中に生成している沈澱分画を採取する。
安息香酸ナトリウムもしくはアンモニウムは尿に約２％
（Ｗ／Ｖ）加えれば充分である。その溶液に、たとえば
塩酸を加えてｐＨ３〜４の酸性にすれば安息香酸は析出
し、所望の糖タンパクを吸着して沈澱する。この沈澱分
画にエタノールを添加、攪拌することにより沈澱中の安
息香酸は溶解し除去した沈澱分画が得られる。
ができ、融解液中に生成している沈澱分画を採取する。
安息香酸ナトリウムもしくはアンモニウムは尿に約２％
（Ｗ／Ｖ）加えれば充分である。その溶液に、たとえば
塩酸を加えてｐＨ３〜４の酸性にすれば安息香酸は析出
し、所望の糖タンパクを吸着して沈澱する。この沈澱分
画にエタノールを添加、攪拌することにより沈澱中の安
息香酸は溶解し除去した沈澱分画が得られる。
【０００９】上記で得られる沈澱分画を、たとえばリン
酸緩衝食塩水に溶解してゲル濾過すれば色素などを含む
不純物を除去してさらに精製することができる。
酸緩衝食塩水に溶解してゲル濾過すれば色素などを含む
不純物を除去してさらに精製することができる。
【００１０】かくして得られる精製物が精製ＴＨＧの場
合にはヒトの免疫グロブリンのクラスであるＩｇＧのＦ
（ａｂ’）2 断片、ＩｇＡ（モノマー）とＩｇＭおよび
ＩｇＧのサブクラスであるＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ
３とＩｇＧ４のすべてと結合する特性を有し、精製ウロ
モジュリンの場合は、ヒトの免疫グロブリンのクラスで
あるＩｇＧとＩｇＡ（モノマー）およびＩｇＧのサブク
ラスであるＩｇＧ１、ＩｇＧ２とＩｇＧ４と結合する
が、ヒトの免疫グロブリンのクラスであるＩｇＧのＦ
（ａｂ’）2 断片、ＩｇＭ、およびＩｇＧのサブクラス
であるＩｇＧ３とは結合しにくい特性を有する。
合にはヒトの免疫グロブリンのクラスであるＩｇＧのＦ
（ａｂ’）2 断片、ＩｇＡ（モノマー）とＩｇＭおよび
ＩｇＧのサブクラスであるＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ
３とＩｇＧ４のすべてと結合する特性を有し、精製ウロ
モジュリンの場合は、ヒトの免疫グロブリンのクラスで
あるＩｇＧとＩｇＡ（モノマー）およびＩｇＧのサブク
ラスであるＩｇＧ１、ＩｇＧ２とＩｇＧ４と結合する
が、ヒトの免疫グロブリンのクラスであるＩｇＧのＦ
（ａｂ’）2 断片、ＩｇＭ、およびＩｇＧのサブクラス
であるＩｇＧ３とは結合しにくい特性を有する。
【００１１】それで精製物を公知の手段によってそれぞ
れ固定化しておき、これにヒト免疫グロブリンのクラス
ＩｇＭまたはＩｇＧのサブクラスＩｇＧ３を作用させ、
その作用量を酵素標識−プロテインＧで測定するか、ま
たは直接酵素標識したＩｇＧのＦ（ａｂ’）2 断片を作
用させ、その作用量を測定することによりＴＨＧとウロ
モジュリンを識別することができる。
れ固定化しておき、これにヒト免疫グロブリンのクラス
ＩｇＭまたはＩｇＧのサブクラスＩｇＧ３を作用させ、
その作用量を酵素標識−プロテインＧで測定するか、ま
たは直接酵素標識したＩｇＧのＦ（ａｂ’）2 断片を作
用させ、その作用量を測定することによりＴＨＧとウロ
モジュリンを識別することができる。
【００１２】エンドトキシンショックや敗血症等炎症に
関係するサイトカインＩＬ−１やＴＮＦによって引き起
こされていると考えられており、ヒト尿由来のＴＨＧま
たはウロモジュリンはサイトカインＩＬ−１に阻害作用
があるからこれらの病気にたいする治療薬として有効で
あり、また、ＴＨＧまたはウロモジュリンは免疫グロブ
リンと反応するから感染抵抗性増強作用も保持すると考
えられる。更に、免疫グロブリンを用いたＴＨＧとウロ
モジュリン識別法が確立されたので、これら蛋白の生理
的および臨床的意義を開明するために有用である。
関係するサイトカインＩＬ−１やＴＮＦによって引き起
こされていると考えられており、ヒト尿由来のＴＨＧま
たはウロモジュリンはサイトカインＩＬ−１に阻害作用
があるからこれらの病気にたいする治療薬として有効で
あり、また、ＴＨＧまたはウロモジュリンは免疫グロブ
リンと反応するから感染抵抗性増強作用も保持すると考
えられる。更に、免疫グロブリンを用いたＴＨＧとウロ
モジュリン識別法が確立されたので、これら蛋白の生理
的および臨床的意義を開明するために有用である。
【００１３】
【実施例】以下に、実施例を挙げて、本発明をさらに詳
細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるも
のではない。
細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるも
のではない。
【００１４】実施例１ 健常人尿を集め−２０℃にて凍結させた後４℃にて再解
凍させることにより沈澱を得た。これを３，０００×
ｇ、３０ｍｉｎ遠心分離し上清を捨て、沈澱をリン酸緩
衝食塩水（ＰＢＳ）に溶解させ同緩衝液で透析をした。
この後遠心分離を行いその上清をアミコンにて濃縮し、
ＨＰＬＣを用い、移動相をＰＢＳの条件でゲル濾過（Ｔ
ＳＫ−３０００ＳＷ：東ソー社）を行った（図１）。ボ
イド・ボリューム（ｖｏｉｄ ｖｏｌｕｍｅ）に溶出さ
れるフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけ分子量と純
度を確認した（図２）。妊婦尿（妊娠２ケ月半〜６ケ
月）を用いた場合でも上記の方法で精製出来た。
凍させることにより沈澱を得た。これを３，０００×
ｇ、３０ｍｉｎ遠心分離し上清を捨て、沈澱をリン酸緩
衝食塩水（ＰＢＳ）に溶解させ同緩衝液で透析をした。
この後遠心分離を行いその上清をアミコンにて濃縮し、
ＨＰＬＣを用い、移動相をＰＢＳの条件でゲル濾過（Ｔ
ＳＫ−３０００ＳＷ：東ソー社）を行った（図１）。ボ
イド・ボリューム（ｖｏｉｄ ｖｏｌｕｍｅ）に溶出さ
れるフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけ分子量と純
度を確認した（図２）。妊婦尿（妊娠２ケ月半〜６ケ
月）を用いた場合でも上記の方法で精製出来た。
【００１５】実施例２ 妊婦尿（妊娠２ケ月半〜６ケ月）に尿量の２％の安息香
酸ナトリウムを添加し３０分攪拌し溶解させた。その後
１６％塩酸にて溶液のｐＨを３．９に合わせ６０分攪拌
しタンパク質の沈澱を安息香酸の微粒子沈澱に効率よく
吸着させた。これを濾過し、沈澱を集め沈澱の２０倍量
の安息香酸飽和冷水（０．３％（ｗ／ｖ））で洗浄し
た。これを圧搾濾過し沈澱を得た。沈澱の３倍量の冷エ
タノールを添加し２２％アンモニア水でｐＨを５．５に
合わせた後３０分攪拌した。これを４℃で３時間放置し
上清の２／３を廃棄した。残りの沈澱液をセライトプレ
コート〔ＧＥＭＬＩＴＥ ＳｕｐｅｒＭ（商標）白山工
業（株）製〕中に添加し濾過した。沈澱物を回収し、−
３０℃にて保存した。このｗｅｔ ｃａｋｅを溶解し、
ＰＢＳに対し透析をし、１５，０００ｒｐｍ、１０分間
遠心分離した後、ＨＰＬＣを用いて移動相をＰＢＳの条
件でゲル濾過（ＴＳＫ３０００−ＳＷ：東ソー）を行っ
た（図３）。ボイド・ボリューム（ｖｏｉｄ ｖｏｌｕ
ｍｅ）に溶出されるフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥに
かけ分子量と純度を確認した（図４）。ウロモジュリン
が主に含まれるフラクションを集め、０．２２μｍのフ
ィルターに通して４℃で保存した。健常人尿を用いた場
合でも上記の方法で精製出来た。
酸ナトリウムを添加し３０分攪拌し溶解させた。その後
１６％塩酸にて溶液のｐＨを３．９に合わせ６０分攪拌
しタンパク質の沈澱を安息香酸の微粒子沈澱に効率よく
吸着させた。これを濾過し、沈澱を集め沈澱の２０倍量
の安息香酸飽和冷水（０．３％（ｗ／ｖ））で洗浄し
た。これを圧搾濾過し沈澱を得た。沈澱の３倍量の冷エ
タノールを添加し２２％アンモニア水でｐＨを５．５に
合わせた後３０分攪拌した。これを４℃で３時間放置し
上清の２／３を廃棄した。残りの沈澱液をセライトプレ
コート〔ＧＥＭＬＩＴＥ ＳｕｐｅｒＭ（商標）白山工
業（株）製〕中に添加し濾過した。沈澱物を回収し、−
３０℃にて保存した。このｗｅｔ ｃａｋｅを溶解し、
ＰＢＳに対し透析をし、１５，０００ｒｐｍ、１０分間
遠心分離した後、ＨＰＬＣを用いて移動相をＰＢＳの条
件でゲル濾過（ＴＳＫ３０００−ＳＷ：東ソー）を行っ
た（図３）。ボイド・ボリューム（ｖｏｉｄ ｖｏｌｕ
ｍｅ）に溶出されるフラクションをＳＤＳ−ＰＡＧＥに
かけ分子量と純度を確認した（図４）。ウロモジュリン
が主に含まれるフラクションを集め、０．２２μｍのフ
ィルターに通して４℃で保存した。健常人尿を用いた場
合でも上記の方法で精製出来た。
【００１６】実施例３ 実施例１および２で得られた精製ＴＨＧまたはＵｒｏｍ
ｏｄｕｌｉｎを５０ｍＭ炭酸ナトリウム緩衝液（以下、
ＳＣＢ：シグマ社）（ｐＨ９．６）で希釈し、９６穴プ
レート（ヌンク社）の各穴に５０μｌずつ分注して４℃
で一晩静置した。プレートをＳＣＢで洗った後、１％Ｂ
ＳＡ−ＳＣＢ溶液３００μｌを各穴に加え４℃で一晩静
置した。これを２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｂｕｆｆｅｒｅｄ
ｓａｌｉｎｅ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０（以下、
ＴＴＢＳ）（ｐＨ７．４）で洗い、１％ＢＳＡ−ＴＴＢ
Ｓで３ｍｇ／ｍｌから２倍の段階希釈をしたヒトＩｇＧ
（カッペル社）を５０μｌずつ加え４℃で一晩静置し反
応させた。これをＴＴＢＳで洗った後、ペルオキシダー
ゼ標識ＥＩＡ ｇｒａｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ（バイ
オラッド社）を１％ＢＳＡ−ＴＴＢＳで３０００倍に希
釈したものを各穴に５０μｌずつ加え３７℃で２時間反
応させた。これをＴＴＢＳで洗った後ＳＣＢですすぎ、
ＴＭＢパーオキシダーゼＥＩＡサブメトレート・キット
（ＴＭＢ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ＥＩＡ Ｓｕｂｓｔ
ｒａｔｅ Ｋｉｔ；バイオラッド社）にて発色させ、プ
レートリーダーによって４５０ｎｍの吸光度を計測し
た。図５ａに示したように、ＴＨＧとウロモジュリンは
ヒト免疫グロブリンＩｇＧに対して用量依存的に反応す
るという結果を得た。
ｏｄｕｌｉｎを５０ｍＭ炭酸ナトリウム緩衝液（以下、
ＳＣＢ：シグマ社）（ｐＨ９．６）で希釈し、９６穴プ
レート（ヌンク社）の各穴に５０μｌずつ分注して４℃
で一晩静置した。プレートをＳＣＢで洗った後、１％Ｂ
ＳＡ−ＳＣＢ溶液３００μｌを各穴に加え４℃で一晩静
置した。これを２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｂｕｆｆｅｒｅｄ
ｓａｌｉｎｅ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０（以下、
ＴＴＢＳ）（ｐＨ７．４）で洗い、１％ＢＳＡ−ＴＴＢ
Ｓで３ｍｇ／ｍｌから２倍の段階希釈をしたヒトＩｇＧ
（カッペル社）を５０μｌずつ加え４℃で一晩静置し反
応させた。これをＴＴＢＳで洗った後、ペルオキシダー
ゼ標識ＥＩＡ ｇｒａｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ（バイ
オラッド社）を１％ＢＳＡ−ＴＴＢＳで３０００倍に希
釈したものを各穴に５０μｌずつ加え３７℃で２時間反
応させた。これをＴＴＢＳで洗った後ＳＣＢですすぎ、
ＴＭＢパーオキシダーゼＥＩＡサブメトレート・キット
（ＴＭＢ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ＥＩＡ Ｓｕｂｓｔ
ｒａｔｅ Ｋｉｔ；バイオラッド社）にて発色させ、プ
レートリーダーによって４５０ｎｍの吸光度を計測し
た。図５ａに示したように、ＴＨＧとウロモジュリンは
ヒト免疫グロブリンＩｇＧに対して用量依存的に反応す
るという結果を得た。
【００１７】実施例４ 実施例１および２で得られた精製ＴＨＧまたはウロモジ
ュリンをＭＳＣＢで希釈し、９６穴プレートの各穴に５
０μｌずつ分注して４℃で一晩静置した。プレートをＳ
ＣＢで洗った後、１％ＢＳＡ−ＳＣＢ溶液３００μｌを
各穴に加え４℃で一晩静した。これをＴＴＢＳで洗い、
１％ＢＳＡ−ＴＴＢＳで３ｍｇ／ｍｌから２倍の段階希
釈をしたペルオキシダーゼ標識ヒトＩｇＧのＦ（ａ
ｂ’）2 断片（ロックランド社）を５０μｌずつ加え４
℃で一晩静置し反応させた。これをＴＴＢＳで洗った後
ＳＣＢですすぎ、ＴＭＢ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ＥＩ
Ａ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔにて反応させ、プレー
トリーダーによつて４５０ｎｍの吸光度を計測した。図
５ｂ）に示したように、ＴＨＧはヒト１ｇＧ Ｆ（ａ
ｂ’）2 断片に対して用量依存的に反応するがｕｒｏｍ
ｏｄｕｌｉｎは反応しにくいという結果を得た。
ュリンをＭＳＣＢで希釈し、９６穴プレートの各穴に５
０μｌずつ分注して４℃で一晩静置した。プレートをＳ
ＣＢで洗った後、１％ＢＳＡ−ＳＣＢ溶液３００μｌを
各穴に加え４℃で一晩静した。これをＴＴＢＳで洗い、
１％ＢＳＡ−ＴＴＢＳで３ｍｇ／ｍｌから２倍の段階希
釈をしたペルオキシダーゼ標識ヒトＩｇＧのＦ（ａ
ｂ’）2 断片（ロックランド社）を５０μｌずつ加え４
℃で一晩静置し反応させた。これをＴＴＢＳで洗った後
ＳＣＢですすぎ、ＴＭＢ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ＥＩ
Ａ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔにて反応させ、プレー
トリーダーによつて４５０ｎｍの吸光度を計測した。図
５ｂ）に示したように、ＴＨＧはヒト１ｇＧ Ｆ（ａ
ｂ’）2 断片に対して用量依存的に反応するがｕｒｏｍ
ｏｄｕｌｉｎは反応しにくいという結果を得た。
【００１８】実施例５ 人尿または妊婦尿を試料として５０ｍＭＳＣＢで希釈
し、９６穴プレートの各穴に５０μ１ずつ分注して４℃
で一晩静置した。プレートをＳＣＢで洗った後、１％Ｂ
ＳＡ−ＳＣＢ溶液３００μ１を各穴に加え４℃で一晩静
置した。これを２０ｍＭ ＴＴＢＳで洗い、１％ＢＳＡ
−ＴＴＢＳで３ｍｇ／ｍｌから２倍の段階希釈をしたヒ
トＩｇＧを５０μ１ずつ加え４℃で一晩静置し反応させ
た。これをＴＴＢＳで洗った後、ペルオキシダーゼ標識
ＥＩＡ ｇｒａｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇを１％ＢＳＡ
−ＴＴＢＳで３０００倍に希釈したものを各穴に５０μ
１ずつ加え３７℃で２時間反応させた。これをＴＴＢＳ
で洗った後ＳＣＢですすぎ、ＴＭＢ ｐｅｒｏｘｉｄａ
ｓｅ ＥＩＡ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔにて発色さ
せ、プレートリーダーによって４５０ｎｍの吸光度を測
定したところ実施例３と同様の結果を得た。
し、９６穴プレートの各穴に５０μ１ずつ分注して４℃
で一晩静置した。プレートをＳＣＢで洗った後、１％Ｂ
ＳＡ−ＳＣＢ溶液３００μ１を各穴に加え４℃で一晩静
置した。これを２０ｍＭ ＴＴＢＳで洗い、１％ＢＳＡ
−ＴＴＢＳで３ｍｇ／ｍｌから２倍の段階希釈をしたヒ
トＩｇＧを５０μ１ずつ加え４℃で一晩静置し反応させ
た。これをＴＴＢＳで洗った後、ペルオキシダーゼ標識
ＥＩＡ ｇｒａｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇを１％ＢＳＡ
−ＴＴＢＳで３０００倍に希釈したものを各穴に５０μ
１ずつ加え３７℃で２時間反応させた。これをＴＴＢＳ
で洗った後ＳＣＢですすぎ、ＴＭＢ ｐｅｒｏｘｉｄａ
ｓｅ ＥＩＡ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔにて発色さ
せ、プレートリーダーによって４５０ｎｍの吸光度を測
定したところ実施例３と同様の結果を得た。
【００１９】実施例６ 人尿または妊婦尿を試料として５０ｍＭＳＣＢで希釈
し、９６穴プレートの各穴にに５０μ１ずつ分注して４
℃で一晩静置した。プレートをＳＣＢで洗った後、１％
ＢＳＡ−ＳＣＢ溶液３００μ１を各穴に加え４℃で一晩
静置した。これを２０ｍＭ ＴＴＢＳで洗い、１％ＢＳ
Ａ−ＴＴＢＳで３ｍｇ／ｍｌから２倍の段階希釈をした
ペルオキシダーゼ標識ヒト１ｇＧ Ｆ（ａｂ’）2 断片
５０μ１ずつ加え４℃で一晩静置し反応させた。これを
ＴＴＢＳで洗った後ＳＣＢですすぎ、ＴＭＢ ｐｅｒｏ
ｘｉｄａｓｅ ＥＩＡ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔ
にて発色させ、プレートリーダーによって４５０ｎｍの
吸光度を計測してところ実施例４と同様の結果を得た。
し、９６穴プレートの各穴にに５０μ１ずつ分注して４
℃で一晩静置した。プレートをＳＣＢで洗った後、１％
ＢＳＡ−ＳＣＢ溶液３００μ１を各穴に加え４℃で一晩
静置した。これを２０ｍＭ ＴＴＢＳで洗い、１％ＢＳ
Ａ−ＴＴＢＳで３ｍｇ／ｍｌから２倍の段階希釈をした
ペルオキシダーゼ標識ヒト１ｇＧ Ｆ（ａｂ’）2 断片
５０μ１ずつ加え４℃で一晩静置し反応させた。これを
ＴＴＢＳで洗った後ＳＣＢですすぎ、ＴＭＢ ｐｅｒｏ
ｘｉｄａｓｅ ＥＩＡ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔ
にて発色させ、プレートリーダーによって４５０ｎｍの
吸光度を計測してところ実施例４と同様の結果を得た。
【００２０】
【発明の効果】本発明によれば、ＴＨＧおよびウロモジ
ュリンを簡易な操作で高効率で精製することができ、特
有の性質を示す精製物が得られ、またその性質を利用し
て両者を識別することができる。
ュリンを簡易な操作で高効率で精製することができ、特
有の性質を示す精製物が得られ、またその性質を利用し
て両者を識別することができる。
【図１】実施例１において、人尿を凍結、融解法により
精製した試料をゲル濾過したときの溶出パターンであ
る。
精製した試料をゲル濾過したときの溶出パターンであ
る。
【図２】実施例１で精製されたタムーホースフォール・
グリコプロテイン（ＴＨＧ）の還元および非還元条件下
におけるＳＤＳ−ＰＡＧＥの電気泳動写真である。
グリコプロテイン（ＴＨＧ）の還元および非還元条件下
におけるＳＤＳ−ＰＡＧＥの電気泳動写真である。
【図３】実施例２において、妊婦尿を安息香酸吸着沈殿
法で精製した試料をゲル濾過したときの溶出パターンで
ある。
法で精製した試料をゲル濾過したときの溶出パターンで
ある。
【図４】実施例２で精製されたウロモジュリンの還元お
よび非還元下におけるＳＤＳ−ＰＡＧＥの電気泳動写真
である。
よび非還元下におけるＳＤＳ−ＰＡＧＥの電気泳動写真
である。
【図５】実施例３および４において、マイクロプレート
上に固定化したＴＨＧおよびウロモジュリンにひと免疫
グロブリンまたはＩｇＧのＦ（ａｂ’）２断片との反応
を示すグラフである。ａ，ｂ共に○はＴＨＧを示し、●
はｕｒｏｍｏｄｕｌｉｎを示す。本図によりＴＨＧとｕ
ｒｏｍｏｄｕｌｉｎ はｈｕｍａｎ ＩｇＧ Ｆ（ａ
ｂ）′２断片との親和性により識別が可能であることが
示されている。
上に固定化したＴＨＧおよびウロモジュリンにひと免疫
グロブリンまたはＩｇＧのＦ（ａｂ’）２断片との反応
を示すグラフである。ａ，ｂ共に○はＴＨＧを示し、●
はｕｒｏｍｏｄｕｌｉｎを示す。本図によりＴＨＧとｕ
ｒｏｍｏｄｕｌｉｎ はｈｕｍａｎ ＩｇＧ Ｆ（ａ
ｂ）′２断片との親和性により識別が可能であることが
示されている。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成８年８月８日
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２
【補正方法】変更
【補正内容】
【図２】
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４
【補正方法】変更
【補正内容】
【図４】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/68 Ｇ０１Ｎ 33/68 // Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＢＮ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＮ
Claims (7)
- 【請求項１】 人尿を低温放置又は凍結したのち融解し
て生成する沈澱分画を採取するか人尿に安息香酸ナトリ
ウムもしくはアンモニウムを溶解したのち溶液を安息香
酸の析出する酸性にして生成する沈澱分画を採取するこ
とを特徴とするタム−ホースフォール・グリコプロテイ
ンもしくはウロモジュリンの精製法。 - 【請求項２】 沈澱分画をさらにゲル濾過により精製す
る請求項１記載の精製法。 - 【請求項３】 人尿が正常尿であり、タム−ホースフォ
ール・グリコプロテインが精製される請求項１または２
記載の精製法。 - 【請求項４】 人尿が妊婦尿であり、ウロモジュリンが
精製される請求項１または２記載の精製法。 - 【請求項５】 ヒトの免疫グロブリンのクラスであるＩ
ｇＧのＦ（ａｂ’）2 断片、ＩｇＡ（モノマー）とＩｇ
ＭおよびＩｇＧのサブクラスであるＩｇＧ１、ＩｇＧ
２、ＩｇＧ３とＩｇＧ４のすべてと結合する精製タム−
ホースフォール・グリコプロテイン。 - 【請求項６】 ヒトの免疫グロブリンのクラスであるＩ
ｇＧとＩｇＡ（モノマー）およびＩｇＧのサブクラスで
あるＩｇＧ１、ＩｇＧ２とＩｇＧ４と結合するが、ヒト
の免疫グロブリンのクラスであるＩｇＧのＦ（ａｂ’）
2 断片、ＩｇＭ、およびＩｇＧのサブクラスであるＩｇ
Ｇ３とは結合しにくい精製ウロモジュリン。 - 【請求項７】 タム−ホースフォール・グリコプロテイ
ンであるかウロモジュリンであるか識別されていない試
料にヒトの免疫グロブリンのクラスＩｇＭまたはＩｇＧ
のサブクラスＩｇＧ３を作用させ、その作用量を酵素標
識−プロテインＧで測定するか、または直接酵素標識し
たＩｇＧのＦ（ａｂ’）2 断片を作用させ、その作用量
を測定をすることを特徴とするタム−ホースフォール・
グリコプロテインとウロモジュリンを識別する方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34793995A JP3839509B2 (ja) | 1995-12-14 | 1995-12-14 | タム−ホースフォール・グリコプロテインもしくはウロモジュリンの精製法、精製物および両者の識別法 |
| DE69628397T DE69628397T2 (de) | 1995-12-14 | 1996-12-12 | Verfahren zur Reinigung von Tamm-Horsfall-Glykoprotein und Uromodulin |
| AT96119948T ATE241644T1 (de) | 1995-12-14 | 1996-12-12 | Verfahren zur reinigung von tamm-horsfall- glykoprotein und uromodulin |
| EP96119948A EP0780398B1 (en) | 1995-12-14 | 1996-12-12 | Process for purifying Tamm-Horsfall glycoprotein and uromodulin |
| CN96121360A CN1165146A (zh) | 1995-12-14 | 1996-12-13 | 绿化tamm-horsfall糖蛋白或尿调节素的方法，其纯化产物及区别二者的方法 |
| US08/766,742 US6110688A (en) | 1995-12-14 | 1996-12-13 | Process for purifying Tamm-Horsfall glycoprotein or uromodulin their purified products and method for making the discrimination between both of them |
| KR1019960065842A KR970042590A (ko) | 1995-12-14 | 1996-12-14 | 탐-홀스폴 글리코프로테인 또는 우로모둘린 정제방법 , 정제물 및 양자의 식별법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34793995A JP3839509B2 (ja) | 1995-12-14 | 1995-12-14 | タム−ホースフォール・グリコプロテインもしくはウロモジュリンの精製法、精製物および両者の識別法 |
Related Child Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2006034688A Division JP3947551B2 (ja) | 2006-02-13 | 2006-02-13 | タム−ホースフォール・グリコプロテインとウロモジュリンの識別法 |
| JP2006034687A Division JP3860601B2 (ja) | 2006-02-13 | 2006-02-13 | タム−ホースフォール・グリコプロテインもしくはウロモジュリンの精製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09165398A true JPH09165398A (ja) | 1997-06-24 |
| JP3839509B2 JP3839509B2 (ja) | 2006-11-01 |
Family
ID=18393634
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34793995A Expired - Fee Related JP3839509B2 (ja) | 1995-12-14 | 1995-12-14 | タム−ホースフォール・グリコプロテインもしくはウロモジュリンの精製法、精製物および両者の識別法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6110688A (ja) |
| EP (1) | EP0780398B1 (ja) |
| JP (1) | JP3839509B2 (ja) |
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| CN (1) | CN1165146A (ja) |
| AT (1) | ATE241644T1 (ja) |
| DE (1) | DE69628397T2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007027614A2 (en) * | 2005-08-30 | 2007-03-08 | The Regents Of The University Of California | Abnormal glycosylation in tamm-horsfall protein in interstitial cystitis patient |
| ES2700958T3 (es) | 2012-02-09 | 2019-02-20 | Inst Massone S A | Glucoproteína de Tamm-Horsfall (THP) como fármaco inmunoestimulante y composiciones para la utilización en un método de tratamiento para inhibir el desarrollo tumoral |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES8801383A1 (es) * | 1985-06-27 | 1988-01-01 | Biogen Nv | Un procedimiento para purificar uromodulina a partir de orina cruda |
| US4977244A (en) * | 1985-06-27 | 1990-12-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Uromodulin and a process of purifying it |
| ATE139802T1 (de) * | 1989-01-05 | 1996-07-15 | Leti Lab | Verwendung von spezifischen eigenschaften der tierallergene und verfahren zu ihrer herstellung |
-
1995
- 1995-12-14 JP JP34793995A patent/JP3839509B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-12-12 AT AT96119948T patent/ATE241644T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-12-12 EP EP96119948A patent/EP0780398B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-12 DE DE69628397T patent/DE69628397T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1996-12-13 CN CN96121360A patent/CN1165146A/zh active Pending
- 1996-12-13 US US08/766,742 patent/US6110688A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-12-14 KR KR1019960065842A patent/KR970042590A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3839509B2 (ja) | 2006-11-01 |
| CN1165146A (zh) | 1997-11-19 |
| US6110688A (en) | 2000-08-29 |
| DE69628397D1 (de) | 2003-07-03 |
| KR970042590A (ko) | 1997-07-24 |
| ATE241644T1 (de) | 2003-06-15 |
| EP0780398B1 (en) | 2003-05-28 |
| EP0780398A3 (en) | 1998-04-08 |
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