JPH09133679A - ペプチド類 - Google Patents
ペプチド類Info
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- JPH09133679A JPH09133679A JP8247841A JP24784196A JPH09133679A JP H09133679 A JPH09133679 A JP H09133679A JP 8247841 A JP8247841 A JP 8247841A JP 24784196 A JP24784196 A JP 24784196A JP H09133679 A JPH09133679 A JP H09133679A
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- peptide
- amyloid
- pancreas
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ２型糖尿病に特有のペプチドの検定。
【解決手段】 糖尿病患者のすい臓で発現しているアミ
ロイドから製造するか、または対応する遺伝子配列を用
いたＤＮＡ組換え技術によってアミリン（Ａmylin）ペ
プチドを取得し、これによって誘導される抗体を用いて
イムノアッセイ系を確立した。
ロイドから製造するか、または対応する遺伝子配列を用
いたＤＮＡ組換え技術によってアミリン（Ａmylin）ペ
プチドを取得し、これによって誘導される抗体を用いて
イムノアッセイ系を確立した。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、ペプチド類に関
するものであり、好ましい態様としては、糖尿病患者の
すい臓（pancreas）から分離し得るペプチドに関するも
のである。
するものであり、好ましい態様としては、糖尿病患者の
すい臓（pancreas）から分離し得るペプチドに関するも
のである。
【０００２】
【従来の技術】糖尿病の最も一般的な形態は、真性糖尿
病（糖尿病２型または非インシュリン依存型と称され
る）であり、これは米国人口の１０％以上が６０才台後
半にかかり得る病気である[ヘルス・アンド・ニュート
リション・エクザミネーション・サーベイ(Ｈealth and
Ｎutrition Ｅxamination Ｓurvey)サイクルII、１９
７６−８０、ナショナル・センター・フォー・ヘルス・
スタティスティックス]このような糖尿患者のすい臓の
ランゲルハンス氏島中にしばしば異常な蛋白性沈積物が
沈澱しているのが見られる。この蛋白性沈積物はアミロ
イドと称されるもので、既に報告されている[オピー、
ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メデイシン
(Ｊ.Ｅxper.Ｍed.)５巻５２９−４０頁(１９６０年)お
よびベル、デイアベテス(Ｄiabetes)１巻３４１−３４
４頁(１９５２年)]。
病（糖尿病２型または非インシュリン依存型と称され
る）であり、これは米国人口の１０％以上が６０才台後
半にかかり得る病気である[ヘルス・アンド・ニュート
リション・エクザミネーション・サーベイ(Ｈealth and
Ｎutrition Ｅxamination Ｓurvey)サイクルII、１９
７６−８０、ナショナル・センター・フォー・ヘルス・
スタティスティックス]このような糖尿患者のすい臓の
ランゲルハンス氏島中にしばしば異常な蛋白性沈積物が
沈澱しているのが見られる。この蛋白性沈積物はアミロ
イドと称されるもので、既に報告されている[オピー、
ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メデイシン
(Ｊ.Ｅxper.Ｍed.)５巻５２９−４０頁(１９６０年)お
よびベル、デイアベテス(Ｄiabetes)１巻３４１−３４
４頁(１９５２年)]。
【０００３】ランゲルハンス氏島におけるアミロイド粒
子の集積は、糖尿病患者のすい臓に特異的なもののよう
である。粒子中の１成分はペプチド（以前、「糖尿病関
連ペプチド」または「ＤＡＰ」と仮称され、本明細書で
は「アミリン（Ａmylin）」の名で定義する)である。
子の集積は、糖尿病患者のすい臓に特異的なもののよう
である。粒子中の１成分はペプチド（以前、「糖尿病関
連ペプチド」または「ＤＡＰ」と仮称され、本明細書で
は「アミリン（Ａmylin）」の名で定義する)である。
【０００４】
【発明の記載】この発明の第１の態様によると、この発
明は下記アミノ酸配列
明は下記アミノ酸配列
【化１】 と同一または実質的に均質なペプチド、またはその活性
サブフラグメントを提供するものである。
サブフラグメントを提供するものである。
【０００５】アミノ酸残基は、通常の１文字命名法で示
される。最近の１文字命名法は、アミノ酸残基の古典的
３文字命名法に相関制があり、下記に示されるものであ
る。
される。最近の１文字命名法は、アミノ酸残基の古典的
３文字命名法に相関制があり、下記に示されるものであ
る。
【化２】
【０００６】上記配列を有する天然ペプチドは、この発
明の好ましい態様の１つを構成する。さらに、天然ペプ
チドでは２および７位のシステイン残基が共同してジス
ルフィド結合を作ると考えられる。しかし、２つのシス
テイン残基が共同して結合していないペプチドもこの発
明の範囲に含まれるものであり、これは例えば天然ＤＡ
Ｐ（アミリン）の好ましい中間体であるが、システイン
残基が結合しているペプチド類が好ましい。
明の好ましい態様の１つを構成する。さらに、天然ペプ
チドでは２および７位のシステイン残基が共同してジス
ルフィド結合を作ると考えられる。しかし、２つのシス
テイン残基が共同して結合していないペプチドもこの発
明の範囲に含まれるものであり、これは例えば天然ＤＡ
Ｐ（アミリン）の好ましい中間体であるが、システイン
残基が結合しているペプチド類が好ましい。
【０００７】この発明のペプチド類は、上記の配列のみ
からなるものであり得る。また、他のアミノ酸残基（例
えば１個、２個またはそれ以上の多数）も追加として存
在し得る。この発明の範囲内の他のペプチドとしては、
上述した全ペプチドに関する保存的変異体（conservati
ve mutants）(アミノ酸残基の１個またはそれ以上が欠
失、付加および／または置換された変異体であって生物
学的性質が実質的に保存されているもの）が含まれる。
翻訳後修飾（例えばグリコシル化）または他の手段によ
るその他の同様な修飾（特に２０位Ｓ残基上）を受けた
ペプチド類も、この発明の範囲に含まれる。
からなるものであり得る。また、他のアミノ酸残基（例
えば１個、２個またはそれ以上の多数）も追加として存
在し得る。この発明の範囲内の他のペプチドとしては、
上述した全ペプチドに関する保存的変異体（conservati
ve mutants）(アミノ酸残基の１個またはそれ以上が欠
失、付加および／または置換された変異体であって生物
学的性質が実質的に保存されているもの）が含まれる。
翻訳後修飾（例えばグリコシル化）または他の手段によ
るその他の同様な修飾（特に２０位Ｓ残基上）を受けた
ペプチド類も、この発明の範囲に含まれる。
【０００８】上記配列の活性サブフラグメント類もま
た、この発明の範囲に包含される。このようなサブフラ
グメント類はヘキサペプチド類であり得、および／また
は下記配列の１個またはそれ以上を含み得る。
た、この発明の範囲に包含される。このようなサブフラ
グメント類はヘキサペプチド類であり得、および／また
は下記配列の１個またはそれ以上を含み得る。
【化３】
【０００９】活性フラグメント類には、下記配列の１個
またはそれ以上のようなヘプタペプチド類も含まれる。
またはそれ以上のようなヘプタペプチド類も含まれる。
【化４】
【００１０】２および７位のシステイン残基は両方とも
存在するのが好ましい。ウェスターマーク等[バイオケ
ミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュ
ニケーションズ(Ｂiochemical and Ｂiophysical Ｒese
arch Ｃommunications)１４０ ９３、８２７−８３１
頁(１９８６年)]は、インシュリン発現性腫瘍中にアミ
ロイドフィブリルとして沈着した不純ペプチドについて
部分的な報告をしている。彼らは、さらに、２型糖尿病
のランゲルハンス氏島における沈着について理論的な証
拠をもつと述べている。ウェスターマーク等のペプチド
の最初の１９個のアミノ酸配列も示されているが、この
部分配列からみると、７位にセリン残基を有するので、
この発明のペプチド類と同一でないように思われる。さ
らに、２位の残基がシステインである点も全く明らかで
ない。
存在するのが好ましい。ウェスターマーク等[バイオケ
ミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュ
ニケーションズ(Ｂiochemical and Ｂiophysical Ｒese
arch Ｃommunications)１４０ ９３、８２７−８３１
頁(１９８６年)]は、インシュリン発現性腫瘍中にアミ
ロイドフィブリルとして沈着した不純ペプチドについて
部分的な報告をしている。彼らは、さらに、２型糖尿病
のランゲルハンス氏島における沈着について理論的な証
拠をもつと述べている。ウェスターマーク等のペプチド
の最初の１９個のアミノ酸配列も示されているが、この
部分配列からみると、７位にセリン残基を有するので、
この発明のペプチド類と同一でないように思われる。さ
らに、２位の残基がシステインである点も全く明らかで
ない。
【００１１】ウェスターマーク等が分析したペプチド
は、構造がどうであれ、極めて不純だと思われる。粗Ｈ
ＰＬＣ精製の実施後１.１マイクログラムの物質が得ら
れているが、アミノ酸分析シーケンス中におけるエドマ
ン分解の第１サイクル後に僅か１２.２ピコモルのリジ
ンしか得られていない。これは、おそらく２６８ピコモ
ル存在した粗抽出物中に僅か３０ピコモルのオーダーで
しかペプチドが存在しなかったことを意味する。
は、構造がどうであれ、極めて不純だと思われる。粗Ｈ
ＰＬＣ精製の実施後１.１マイクログラムの物質が得ら
れているが、アミノ酸分析シーケンス中におけるエドマ
ン分解の第１サイクル後に僅か１２.２ピコモルのリジ
ンしか得られていない。これは、おそらく２６８ピコモ
ル存在した粗抽出物中に僅か３０ピコモルのオーダーで
しかペプチドが存在しなかったことを意味する。
【００１２】この発明の第２の態様によると、実質的に
純粋な、アミリンまたはこの発明の第１の態様による他
のペプチドが提供される。「実質的に純粋」の語は、５
０％、特に８０％、例えば９０％、および特に９５また
は９９％（重量）より過剰の純度を包含する。
純粋な、アミリンまたはこの発明の第１の態様による他
のペプチドが提供される。「実質的に純粋」の語は、５
０％、特に８０％、例えば９０％、および特に９５また
は９９％（重量）より過剰の純度を包含する。
【００１３】この発明のペプチドの１つは、糖尿病患者
のすい臓から製造し得る。この発明の第３の態様による
と、この発明の第１の態様によるペプチドの製造法であ
って、可溶化アミロイドをまずＨＰＬＣゲル濾過、つい
で逆相ＨＰＬＣにかけることからなる方法が提供され
る。逆相ＨＰＬＣ（固定相が疎水性）を、順相ＨＰＬＣ
ゲル濾過の直後に行なうのが好ましく、これは貯蔵中の
ペプチド損失防止に役立つ。
のすい臓から製造し得る。この発明の第３の態様による
と、この発明の第１の態様によるペプチドの製造法であ
って、可溶化アミロイドをまずＨＰＬＣゲル濾過、つい
で逆相ＨＰＬＣにかけることからなる方法が提供され
る。逆相ＨＰＬＣ（固定相が疎水性）を、順相ＨＰＬＣ
ゲル濾過の直後に行なうのが好ましく、これは貯蔵中の
ペプチド損失防止に役立つ。
【００１４】直後に逆相ＨＰＬＣ精製を行なうことに
は、他にも数々の利点がある。まず、これにより実質的
に純粋なペプチドの分離が可能になる。つぎに、ゲル濾
過の流出液が好便に脱塩される。さらに、ペプチドが濃
縮されて少容量になる。
は、他にも数々の利点がある。まず、これにより実質的
に純粋なペプチドの分離が可能になる。つぎに、ゲル濾
過の流出液が好便に脱塩される。さらに、ペプチドが濃
縮されて少容量になる。
【００１５】アミロイドは、ぎ酸中で可溶化することが
できる。超音波を使用して可溶化を行なうか補助するの
が好ましい。アミロイドは、糖尿病患者のすい臓から得
るのが好ましい。すい臓は、コラゲナーゼのような蛋白
質溶解酵素で消化することができる。すい臓は、予備加
熱（例えば７０℃）してコラーゲンフィブリルを溶融す
ることにより消化を助けることができる。
できる。超音波を使用して可溶化を行なうか補助するの
が好ましい。アミロイドは、糖尿病患者のすい臓から得
るのが好ましい。すい臓は、コラゲナーゼのような蛋白
質溶解酵素で消化することができる。すい臓は、予備加
熱（例えば７０℃）してコラーゲンフィブリルを溶融す
ることにより消化を助けることができる。
【００１６】糖尿病患者のすい臓（少なくとも２型糖尿
病にかかっている患者）において、アミリンが産生され
アミロイドとして沈着するようである。産生レベルは、
正常（非糖尿病患者）のすい臓における産生レベルより
高いと思われる。正常のすい臓もまたアミリンとアミノ
酸が１個または２個異なるペプチドを作っている可能性
がある。それ故、アミリンおよびアミリン様ペプチド
は、標準として用いることができ、検出可能なラベルを
つけるとイムノアッセイのプローブとして用いることが
できる。それ故、この発明の第４の態様によると、上述
したペプチドからなる抗原が提供される。他の同様なペ
プチドと異なるアミノ酸配列を含むペプチドは、アミリ
ンの特異的イムノアッセイ用抗原として特に有用であ
る。例えば、２１−２９残基を含むペプチド類はカルシ
トニン遺伝子関連ペプチド類とは異なる。
病にかかっている患者）において、アミリンが産生され
アミロイドとして沈着するようである。産生レベルは、
正常（非糖尿病患者）のすい臓における産生レベルより
高いと思われる。正常のすい臓もまたアミリンとアミノ
酸が１個または２個異なるペプチドを作っている可能性
がある。それ故、アミリンおよびアミリン様ペプチド
は、標準として用いることができ、検出可能なラベルを
つけるとイムノアッセイのプローブとして用いることが
できる。それ故、この発明の第４の態様によると、上述
したペプチドからなる抗原が提供される。他の同様なペ
プチドと異なるアミノ酸配列を含むペプチドは、アミリ
ンの特異的イムノアッセイ用抗原として特に有用であ
る。例えば、２１−２９残基を含むペプチド類はカルシ
トニン遺伝子関連ペプチド類とは異なる。
【００１７】この発明の第５の態様によると、このよう
な抗原に対して誘発された抗体が提供される。この抗体
は、糖尿病関連ペプチド（アミリン）用特異的プローブ
として使用することができ、免疫組織化学およびイムノ
アッセイ上の用途をもつ。この抗体は、血漿中に異常な
量のアミリンを含む患者の診断テストに用いることがで
きる。さらに、抗体を標識すると、患者のすい臓におけ
るアミロイド中のアミリンの存在をインビボで検出する
のに用いることができる。また、ランゲルハンス氏島の
アミロイドを分散させ、またはアミロイドの成長を抑制
するために用いる医薬またはこれと結合する酵素を目的
として使用することができる。このような２つのタイプ
の抗体も、この発明に包含される。抗体は、ハイブリド
ーマが産生するモノクローナル抗体であり得る。このよ
うなハイブリドーマ細胞もまた、この発明の一部をな
す。
な抗原に対して誘発された抗体が提供される。この抗体
は、糖尿病関連ペプチド（アミリン）用特異的プローブ
として使用することができ、免疫組織化学およびイムノ
アッセイ上の用途をもつ。この抗体は、血漿中に異常な
量のアミリンを含む患者の診断テストに用いることがで
きる。さらに、抗体を標識すると、患者のすい臓におけ
るアミロイド中のアミリンの存在をインビボで検出する
のに用いることができる。また、ランゲルハンス氏島の
アミロイドを分散させ、またはアミロイドの成長を抑制
するために用いる医薬またはこれと結合する酵素を目的
として使用することができる。このような２つのタイプ
の抗体も、この発明に包含される。抗体は、ハイブリド
ーマが産生するモノクローナル抗体であり得る。このよ
うなハイブリドーマ細胞もまた、この発明の一部をな
す。
【００１８】アミリンの製造はすい臓組織の抽出による
ものとして示したが、アミリンおよびアミリン様ペプチ
ド類は合成することもできる。またこれらは、ＤＮＡ組
換え技術でも製造し得る。この技術の第１段は、アミリ
ンまたはアミリン様ペプチドをコードするある長さのＤ
ＮＡを得ることである。これを得る１つの方法は、アミ
リン産生細胞からmＲＮＡを分離し、インビトロでアミ
リンまたはアミリン様ペプチドをコードするcＤＮＡの
製造に逆転写酵素と共に用いることである。公知のアミ
ノ酸配列からオリゴヌクレオチドプローブを製造し、c
ＤＮＡまたはゲノムＤＮＡライブラリーのスクリーニン
グに用いることができる。別法として、ヌクレオチド配
列が一般に１００塩基長を丁度超える程度の場合、ＤＮ
Ａは化学合成できる。数々のオリゴヌクレオチドを製造
することができ、これから、ＤＮＡポリメラーゼおよび
ＤＮＡリガーゼを用いて目的とするcＤＮＡを製造する
ことができる。任意端（一方／両方）の制限エンドヌク
レアーゼ消化によりプラスミドに挿入するための適当な
粘着制限部位をもたらすことができる。
ものとして示したが、アミリンおよびアミリン様ペプチ
ド類は合成することもできる。またこれらは、ＤＮＡ組
換え技術でも製造し得る。この技術の第１段は、アミリ
ンまたはアミリン様ペプチドをコードするある長さのＤ
ＮＡを得ることである。これを得る１つの方法は、アミ
リン産生細胞からmＲＮＡを分離し、インビトロでアミ
リンまたはアミリン様ペプチドをコードするcＤＮＡの
製造に逆転写酵素と共に用いることである。公知のアミ
ノ酸配列からオリゴヌクレオチドプローブを製造し、c
ＤＮＡまたはゲノムＤＮＡライブラリーのスクリーニン
グに用いることができる。別法として、ヌクレオチド配
列が一般に１００塩基長を丁度超える程度の場合、ＤＮ
Ａは化学合成できる。数々のオリゴヌクレオチドを製造
することができ、これから、ＤＮＡポリメラーゼおよび
ＤＮＡリガーゼを用いて目的とするcＤＮＡを製造する
ことができる。任意端（一方／両方）の制限エンドヌク
レアーゼ消化によりプラスミドに挿入するための適当な
粘着制限部位をもたらすことができる。
【００１９】アミリンの遺伝子配列は下記の通りであ
る。これは好ましい態様であるが、この発明はまた、遺
伝子コードによる保存的変異体をも包含する。
る。これは好ましい態様であるが、この発明はまた、遺
伝子コードによる保存的変異体をも包含する。
【化５】
【００２０】合成ＤＮＡがcＤＮＡであるか化学合成品
であるかによらず、制限エンドヌクレアーゼによりもた
らされた粘着末端を有するか、または、例えば、適当な
ヌクレオチドと末端トランスフェラーゼの使用によりオ
リゴーdＣを末端尾部化される。
であるかによらず、制限エンドヌクレアーゼによりもた
らされた粘着末端を有するか、または、例えば、適当な
ヌクレオチドと末端トランスフェラーゼの使用によりオ
リゴーdＣを末端尾部化される。
【００２１】どのような尾部化法をとるにせよ、プラス
ミド（例えばpＢＲ ３２２）をとり、Ｐst Ｉのような
制限ヌクレアーゼにより１部位を開裂し得る。Ｐst Ｉ
はpＢＲ ３２２をアンピシリン抵抗の暗号化遺伝子のと
ころで開裂する。これにより、組換えプラスミドの選択
が容易となる。所望ならば、Ｐst Ｉ消化pＢＲ ３２２
をオリゴーdＧ尾部化してアミリンまたはアミリン様ペ
プチドコード化ＤＮＡのオリゴーdＣ尾部片と相補化す
ることができる。開裂したプラスミドとアミリンまたは
アミリン様ペプチドコード化ＤＮＡをアニールおよびラ
イゲートすることができ、ホスト細胞[例えば、エシエ
リヒア・コリ(Ｅ.Ｃoli)]をアミリン組換えプラスミド
で形質転換することができる。
ミド（例えばpＢＲ ３２２）をとり、Ｐst Ｉのような
制限ヌクレアーゼにより１部位を開裂し得る。Ｐst Ｉ
はpＢＲ ３２２をアンピシリン抵抗の暗号化遺伝子のと
ころで開裂する。これにより、組換えプラスミドの選択
が容易となる。所望ならば、Ｐst Ｉ消化pＢＲ ３２２
をオリゴーdＧ尾部化してアミリンまたはアミリン様ペ
プチドコード化ＤＮＡのオリゴーdＣ尾部片と相補化す
ることができる。開裂したプラスミドとアミリンまたは
アミリン様ペプチドコード化ＤＮＡをアニールおよびラ
イゲートすることができ、ホスト細胞[例えば、エシエ
リヒア・コリ(Ｅ.Ｃoli)]をアミリン組換えプラスミド
で形質転換することができる。
【００２２】形質転換したエシエリヒア・コリ（Ｅ.Ｃo
li）ホスト細胞は、適当な条件下に培養してアミリンま
たはアミリン様ペプチドを発現させることができる。し
たがって、この発明の別の態様として、上記ペプチドを
暗号化するＤＮＡまたはＲＮＡ、上記ＤＮＡ配列を含む
ベクター(例えばプラスミド)、および上記ベクターを含
み上記ＤＮＡ配列を発現し得るホスト細胞［例えば細菌
細胞または真核（例えば酵母）細胞］を提供する。
li）ホスト細胞は、適当な条件下に培養してアミリンま
たはアミリン様ペプチドを発現させることができる。し
たがって、この発明の別の態様として、上記ペプチドを
暗号化するＤＮＡまたはＲＮＡ、上記ＤＮＡ配列を含む
ベクター(例えばプラスミド)、および上記ベクターを含
み上記ＤＮＡ配列を発現し得るホスト細胞［例えば細菌
細胞または真核（例えば酵母）細胞］を提供する。
【００２３】この発明によるアミリンおよび他のペプチ
ド類並びにペプチド製品は、食欲低下剤のような臨床用
途を有し、また血管拡張作用を有するが、これは一般的
活性であり得、またはすい臓もしくはランゲルハンス氏
島の血流に特異的なものであり得る。この発明の別の態
様によると、ひとまたは動物薬用のアミリンまたはこの
発明の第１態様のペプチドが提供される。さらに、この
発明の他の態様によると、食欲低下剤または血管拡張剤
の製造におけるＤＡＰまたは他のペプチドまたはペプチ
ド製品の用途が提供される。
ド類並びにペプチド製品は、食欲低下剤のような臨床用
途を有し、また血管拡張作用を有するが、これは一般的
活性であり得、またはすい臓もしくはランゲルハンス氏
島の血流に特異的なものであり得る。この発明の別の態
様によると、ひとまたは動物薬用のアミリンまたはこの
発明の第１態様のペプチドが提供される。さらに、この
発明の他の態様によると、食欲低下剤または血管拡張剤
の製造におけるＤＡＰまたは他のペプチドまたはペプチ
ド製品の用途が提供される。
【００２４】この発明の理解をさらに容易にするため、
およびこの発明がどのように実施されるかを示すため、
以下に実験および図面に基づく実施例を示す。
およびこの発明がどのように実施されるかを示すため、
以下に実験および図面に基づく実施例を示す。
【００２５】
【図面の説明】図１〜図４は、アミロイドを含有する糖
尿病患者すい臓から由来した物質の６ＭグアニジンＨＣ
l／０.２Ｍりん酸ナトリウム緩衝液（pＨ７.５）中での
ＨＰＬＣゲル濾過流出液の吸収特性(図１)および逆相Ｈ
ＰＬＣゲル濾過流出液の吸収特性(図２、図３および図
４)を示す図である。図２、図３および図４は、何れも
逆相ＨＰＬＣ吸収特性を示す図である。図５、図６、お
よび図７は、ＤＡＰと種々のホモローグ分子の比較図で
ある。
尿病患者すい臓から由来した物質の６ＭグアニジンＨＣ
l／０.２Ｍりん酸ナトリウム緩衝液（pＨ７.５）中での
ＨＰＬＣゲル濾過流出液の吸収特性(図１)および逆相Ｈ
ＰＬＣゲル濾過流出液の吸収特性(図２、図３および図
４)を示す図である。図２、図３および図４は、何れも
逆相ＨＰＬＣ吸収特性を示す図である。図５、図６、お
よび図７は、ＤＡＰと種々のホモローグ分子の比較図で
ある。
【００２６】
実施例１ 糖尿病患者由来のすい臓を死後検死で得て、抽出するま
で−２０℃以下で冷凍した。ヘマトキシリンおよびエオ
シン染色後光学顕微鏡を用い、１５０mＭ ＮaＣl／１０
％ホルマリン中で固定した組織中でランゲルハンス島ア
ミロイドを検出し、アルカリ性コンゴ・レッドで染色し
た後偏光下で顕微鏡を用いて緑色複屈折の呈示によって
確認した。
で−２０℃以下で冷凍した。ヘマトキシリンおよびエオ
シン染色後光学顕微鏡を用い、１５０mＭ ＮaＣl／１０
％ホルマリン中で固定した組織中でランゲルハンス島ア
ミロイドを検出し、アルカリ性コンゴ・レッドで染色し
た後偏光下で顕微鏡を用いて緑色複屈折の呈示によって
確認した。
【００２７】全すい臓を氷冷１５０mＭ・ＮaＣl（１：
４、w／v）でホモジナイズし、ＧＳ−３ヘッドを用いる
ソルバルＲＣ−５Ｂ遠心機で、１００００g、３０分
間、４℃で沈降させた。その後脂肪および上清層を捨て
てこの工程を２度繰り返した。粗凍結乾燥コラーゲナー
ゼ（ＥＣ ３.４.２４.３、ボーリンゲルヘル−マンハ
イム・ユナイテッド・キングダム・リミテッド、製品１
０３５８６）を１：１００(w／v)で５０mＭトリス−Ｈ
Ｃl、１５０mＭ塩化ナトリウム、３mＭ ＣaＣl2、２％
(v／v)ノニデット（ＮＯＮＩＤＥＴ)−Ｐ４０を含む緩
衝液（pＨ７.４）に溶解させ、１８,０００gで２時間、
ＳＷ４０ＴiローターのベックマンＬＲ５Ｂ遠心機中で
精製した。粗すい臓ホモジネート部分を７０℃で１０分
間加熱し、コラーゲナーゼ上清（１：１０、w／v）を用
いて２０時間、３７℃ではげしく連続振とうしながらイ
ンキュベートした。シリコーン化微量遠心用試験管で１
０分間１１,２００gで一部を沈降させ、上清を除き、１
０倍量の１５０ミリモルＮaＣlを用いて２回および１０
倍量の滅菌水を用いて１回、その工程を繰り返した。ア
ルカリ性コンゴ・レッドを用いた染色は、残渣物質の２
０〜５０％が、全ての非糖尿病、アミロイド陰性対照す
い臓には見られないアミロイド（平均直径１０から３０
ミクロン）の粒子であることを示した（実施例２参
照)。種々の溶媒中で２日間連続振とうし、１１,２００
gで１０分間再沈降させてアミロイドの溶解性を評価
し、上清のアルカリ性コンゴ・レッド染色およびタンパ
ク分析後顕微鏡を用いて評価した。１／４(w／v)で７０
％(v／v)ギ酸中で超音波（ＭＳＥ音波破壊機、１５０w
型、波長８ミクロン、２０kＨz）によってアミロイドを
可溶化させた。３０秒バーストで４回超音波を加え、各
バースト後１５秒間ドライアイス／エタノール浴で冷却
した。直ぐにギ酸を回転濃縮機で除去してソルバル・ス
ピードＶＡＣ（ソルバル・ユナイテッド・キングダム・
リミテッド）でほとんど乾固させ、連続振とうしながら
１時間、６Ｍグアニジン／０.２Ｍりん酸ナトリウム（p
Ｈ７.５）中でアミロイドを再可溶化させた。
４、w／v）でホモジナイズし、ＧＳ−３ヘッドを用いる
ソルバルＲＣ−５Ｂ遠心機で、１００００g、３０分
間、４℃で沈降させた。その後脂肪および上清層を捨て
てこの工程を２度繰り返した。粗凍結乾燥コラーゲナー
ゼ（ＥＣ ３.４.２４.３、ボーリンゲルヘル−マンハ
イム・ユナイテッド・キングダム・リミテッド、製品１
０３５８６）を１：１００(w／v)で５０mＭトリス−Ｈ
Ｃl、１５０mＭ塩化ナトリウム、３mＭ ＣaＣl2、２％
(v／v)ノニデット（ＮＯＮＩＤＥＴ)−Ｐ４０を含む緩
衝液（pＨ７.４）に溶解させ、１８,０００gで２時間、
ＳＷ４０ＴiローターのベックマンＬＲ５Ｂ遠心機中で
精製した。粗すい臓ホモジネート部分を７０℃で１０分
間加熱し、コラーゲナーゼ上清（１：１０、w／v）を用
いて２０時間、３７℃ではげしく連続振とうしながらイ
ンキュベートした。シリコーン化微量遠心用試験管で１
０分間１１,２００gで一部を沈降させ、上清を除き、１
０倍量の１５０ミリモルＮaＣlを用いて２回および１０
倍量の滅菌水を用いて１回、その工程を繰り返した。ア
ルカリ性コンゴ・レッドを用いた染色は、残渣物質の２
０〜５０％が、全ての非糖尿病、アミロイド陰性対照す
い臓には見られないアミロイド（平均直径１０から３０
ミクロン）の粒子であることを示した（実施例２参
照)。種々の溶媒中で２日間連続振とうし、１１,２００
gで１０分間再沈降させてアミロイドの溶解性を評価
し、上清のアルカリ性コンゴ・レッド染色およびタンパ
ク分析後顕微鏡を用いて評価した。１／４(w／v)で７０
％(v／v)ギ酸中で超音波（ＭＳＥ音波破壊機、１５０w
型、波長８ミクロン、２０kＨz）によってアミロイドを
可溶化させた。３０秒バーストで４回超音波を加え、各
バースト後１５秒間ドライアイス／エタノール浴で冷却
した。直ぐにギ酸を回転濃縮機で除去してソルバル・ス
ピードＶＡＣ（ソルバル・ユナイテッド・キングダム・
リミテッド）でほとんど乾固させ、連続振とうしながら
１時間、６Ｍグアニジン／０.２Ｍりん酸ナトリウム（p
Ｈ７.５）中でアミロイドを再可溶化させた。
【００２８】初期分離は、移動相６Ｍグアニジン／０.
２Ｍりん酸ナトリウム（pＨ７.５）とウォーターズシス
テムを用いて、ゾルバックスＧＦ４５０およびＧＦ２５
０カラム[２５０×９.４nm、デュポント（ユナイテッド
・キングダム）リミテッド]で連続して、高速液体クロ
マトグラフィー（ＨＰＬＣ)、ゲルろ過クロマトグラフ
ィーに付すことによって達成され、実験は２８０nmで監
視した。図１に示した結果は、２８０nmでの吸収を示
す。
２Ｍりん酸ナトリウム（pＨ７.５）とウォーターズシス
テムを用いて、ゾルバックスＧＦ４５０およびＧＦ２５
０カラム[２５０×９.４nm、デュポント（ユナイテッド
・キングダム）リミテッド]で連続して、高速液体クロ
マトグラフィー（ＨＰＬＣ)、ゲルろ過クロマトグラフ
ィーに付すことによって達成され、実験は２８０nmで監
視した。図１に示した結果は、２８０nmでの吸収を示
す。
【００２９】パルチシル（ＰＡＲＴＩＳＩＬ)−１０
ＯＤＳ−３逆相ＨＰＬＣカラム（３００×４mm、ワット
マン・リミテッド）中にゲルろ過系由来の試料を直接注
入した。固定相は疎水性であった。移動相は、アセトニ
トリル（４５分間で５から８０％）を直線勾配溶出用に
含む１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）であった。実験は
再び２８０nmで監視した。
ＯＤＳ−３逆相ＨＰＬＣカラム（３００×４mm、ワット
マン・リミテッド）中にゲルろ過系由来の試料を直接注
入した。固定相は疎水性であった。移動相は、アセトニ
トリル（４５分間で５から８０％）を直線勾配溶出用に
含む１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）であった。実験は
再び２８０nmで監視した。
【００３０】図２は結果を示す。第３ピークは天然ＤＡ
Ｐを含む。第１および２ピークは初期ＨＰＬＣゲルろ過
精製を経て残った不純物のようである。この図で見られ
る基本線の吸収の高さは非蛋白質材料（脂質でありう
る）により生じたものである。
Ｐを含む。第１および２ピークは初期ＨＰＬＣゲルろ過
精製を経て残った不純物のようである。この図で見られ
る基本線の吸収の高さは非蛋白質材料（脂質でありう
る）により生じたものである。
【００３１】定量たんぱく測定およびアミノ酸組成は、
ウォーターズのＰＩＣＯ−ＴＡＧアミノ酸分析システム
（コ−エンら著、アメリカン・ラボラトリー(Ａmerican
Ｌaboratory)、１９８４年８月、４８頁）および第２
バージョンのソフトウエヤーでＯ２ＣＰＴＨサイクルを
使用するアップレイド・バイオシステムの４７０Ａプロ
テインシークエンサー（ヘリックら著、ジャーナル・オ
ブ・バイオロジガル・ケミストリー(Ｊ.Ｂ.Ｃhem.)、２
５６巻、(１９８１年)、７９９０頁）（アップレイド・
バイオシステム・リミテッド）を使用して行なわれた。
フェニルチオヒダントインアミノ酸誘導体はＨＰＬＣに
よって同定された。得られる配列は上記に記載した。
ウォーターズのＰＩＣＯ−ＴＡＧアミノ酸分析システム
（コ−エンら著、アメリカン・ラボラトリー(Ａmerican
Ｌaboratory)、１９８４年８月、４８頁）および第２
バージョンのソフトウエヤーでＯ２ＣＰＴＨサイクルを
使用するアップレイド・バイオシステムの４７０Ａプロ
テインシークエンサー（ヘリックら著、ジャーナル・オ
ブ・バイオロジガル・ケミストリー(Ｊ.Ｂ.Ｃhem.)、２
５６巻、(１９８１年)、７９９０頁）（アップレイド・
バイオシステム・リミテッド）を使用して行なわれた。
フェニルチオヒダントインアミノ酸誘導体はＨＰＬＣに
よって同定された。得られる配列は上記に記載した。
【００３２】実施例２（比較実験） 検死後非糖尿病由来のすい臓を得たこと以外は実施例１
の方法を繰り返した。コラーゲナーゼ消化および沈降
後、コンゴ・レッド染色はいかなる球形アミロイド粒子
をも現さない。しかしながら、それにもかかわらずこの
方法がゲルろ過ＨＰＬＣ段階に継続する場合、吸収プロ
フィールは糖尿病患者のアミロイド含有試料と同様であ
った。したがってこの吸収プロフィールは溶解したアミ
ロイドモノマーの存在または不存在に対する手引きとし
ては使用され得なかった。ゲルろ過ＨＰＬＣシステムか
ら逆相ＨＰＬＣカラムへ直接再注入した試料は図３に示
した様な逆層ＨＰＬＣ結果を生じた。図２の第１および
２ピークに対応するピークが存在することが分かるが、
図２の第３ピークに対応するピークはない。このピーク
は実際には３つの糖尿病患者抽出すい臓の各々に存在
し、６つのアミロイド陰性非糖尿病対照すい臓にはなか
ったことが分かった。これはアセトニトリル濃度６７.
５％で溶出した。
の方法を繰り返した。コラーゲナーゼ消化および沈降
後、コンゴ・レッド染色はいかなる球形アミロイド粒子
をも現さない。しかしながら、それにもかかわらずこの
方法がゲルろ過ＨＰＬＣ段階に継続する場合、吸収プロ
フィールは糖尿病患者のアミロイド含有試料と同様であ
った。したがってこの吸収プロフィールは溶解したアミ
ロイドモノマーの存在または不存在に対する手引きとし
ては使用され得なかった。ゲルろ過ＨＰＬＣシステムか
ら逆相ＨＰＬＣカラムへ直接再注入した試料は図３に示
した様な逆層ＨＰＬＣ結果を生じた。図２の第１および
２ピークに対応するピークが存在することが分かるが、
図２の第３ピークに対応するピークはない。このピーク
は実際には３つの糖尿病患者抽出すい臓の各々に存在
し、６つのアミロイド陰性非糖尿病対照すい臓にはなか
ったことが分かった。これはアセトニトリル濃度６７.
５％で溶出した。
【００３３】実施例３ さらに分析および精製のために、実施例１で得たアミリ
ンを以下の方法で還元およびアルキル化させた。ペプチ
ドの一部のトリプシン裂開（ＴＰＣＫ−トリプシン(ワ
ーシントン、イギリス)）は、１００mＭ重炭酸アンモニ
ウム緩衝液中、酵素：物質の比１：１００、３７℃で、
３時間行ない、ジイソプロピルフルオロホスフェートを
２５mＭまで添加して反応を終了させた。０.２Ｍピリジ
ン−酢酸緩衝液（pＨ５.５）中でカルボキシペプチダー
ゼＹを用いたＣ−末端のシークエンシングを行ない、１
００℃、２時間で反応を終了させた。６Ｍグアニジン／
０.２Ｍトリス（pＨ８.０)／３mＭエチレンジアミンテ
トラ酢酸ナトリウム（ＥＤＴＡ）中で、２０mＭジチオ
スレイトールに約１ナノモルの精製ペプチドを加え３時
間振とうさせ、次に14Ｃ標識インドール酢酸（ＩＡＡ）
を５分間、０℃、暗所で加え、新たに中和（４Ｍ−Ｎａ
ＯＨで）した非放射性標識ＩＡＡを４０mＭまで加えて
システイン残基の還元および放射性Ｓ−カルボキシメチ
ル化を行なった。さらに、同様の逆相ＨＰＬＣシステム
で得られたペプチドを再精製した。これを僅かに極性の
大きなカルボキシメチル基のペプチドへの導入に調和す
るアセトニトリル濃度６４％で僅かに早く溶出した。第
３ＲＡピークが誘導ペプチドを表す吸収プロフィールは
図１Ｄで見られる。
ンを以下の方法で還元およびアルキル化させた。ペプチ
ドの一部のトリプシン裂開（ＴＰＣＫ−トリプシン(ワ
ーシントン、イギリス)）は、１００mＭ重炭酸アンモニ
ウム緩衝液中、酵素：物質の比１：１００、３７℃で、
３時間行ない、ジイソプロピルフルオロホスフェートを
２５mＭまで添加して反応を終了させた。０.２Ｍピリジ
ン−酢酸緩衝液（pＨ５.５）中でカルボキシペプチダー
ゼＹを用いたＣ−末端のシークエンシングを行ない、１
００℃、２時間で反応を終了させた。６Ｍグアニジン／
０.２Ｍトリス（pＨ８.０)／３mＭエチレンジアミンテ
トラ酢酸ナトリウム（ＥＤＴＡ）中で、２０mＭジチオ
スレイトールに約１ナノモルの精製ペプチドを加え３時
間振とうさせ、次に14Ｃ標識インドール酢酸（ＩＡＡ）
を５分間、０℃、暗所で加え、新たに中和（４Ｍ−Ｎａ
ＯＨで）した非放射性標識ＩＡＡを４０mＭまで加えて
システイン残基の還元および放射性Ｓ−カルボキシメチ
ル化を行なった。さらに、同様の逆相ＨＰＬＣシステム
で得られたペプチドを再精製した。これを僅かに極性の
大きなカルボキシメチル基のペプチドへの導入に調和す
るアセトニトリル濃度６４％で僅かに早く溶出した。第
３ＲＡピークが誘導ペプチドを表す吸収プロフィールは
図１Ｄで見られる。
【００３４】この段階で分離した異なるアミノ酸分析値
を有し、配列分析でアミノ末端をプロックした２つの小
ペプチド類は、図１Ｄで第４および５ピークとして見ら
れる。対になっていないピークのアミノ酸分析は、ほぼ
３７の長さのアミノ酸残基をもつ純粋に近いペプチドの
存在を示した。１モルＧlu／Ｇlnに対して５モルＡspま
たはＡsnの比である点で、その組成は区別できる。この
パターンは、２つの糖尿病患者のすい臓の両方から精製
したペプチドで一致する。
を有し、配列分析でアミノ末端をプロックした２つの小
ペプチド類は、図１Ｄで第４および５ピークとして見ら
れる。対になっていないピークのアミノ酸分析は、ほぼ
３７の長さのアミノ酸残基をもつ純粋に近いペプチドの
存在を示した。１モルＧlu／Ｇlnに対して５モルＡspま
たはＡsnの比である点で、その組成は区別できる。この
パターンは、２つの糖尿病患者のすい臓の両方から精製
したペプチドで一致する。
【００３５】アミノ酸配列分析は、２つの糖尿病患者の
すい臓の両方から抽出したペプチドに対して同様の結果
を与えた。配列分析は２つの糖尿病患者のすい臓の両方
から行った。アミノ末端配列が知られている場合のトリ
プシン分解後の天然ペプチドおよび引き算でＡrgを測定
後の天然ペプチドでも配列分析を行った。初期Ｌys残基
は、約１０００ピコモルの純粋ペプチドから４００ピコ
モル水準で存在した。その後、分裂およびアルキル化し
た物質において、シークエンシング収量は少なくとも９
２％であった。しかしながら、天然材料が配列された場
合、第２の残基では収率の大きな低下があり、第７の残
基では２番目の減少があった。この事実と、還元／アル
キル化後にみられる正常の収率はＣys残基が２位および
７位でジスルフィド架橋を形成し得ることを示唆する。
ＣＰアーゼＹでのＣ末端配列は初期にはあい昧な結果を
与えたが、Ｃ末端残基がＴyrである証拠も与えた。
すい臓の両方から抽出したペプチドに対して同様の結果
を与えた。配列分析は２つの糖尿病患者のすい臓の両方
から行った。アミノ末端配列が知られている場合のトリ
プシン分解後の天然ペプチドおよび引き算でＡrgを測定
後の天然ペプチドでも配列分析を行った。初期Ｌys残基
は、約１０００ピコモルの純粋ペプチドから４００ピコ
モル水準で存在した。その後、分裂およびアルキル化し
た物質において、シークエンシング収量は少なくとも９
２％であった。しかしながら、天然材料が配列された場
合、第２の残基では収率の大きな低下があり、第７の残
基では２番目の減少があった。この事実と、還元／アル
キル化後にみられる正常の収率はＣys残基が２位および
７位でジスルフィド架橋を形成し得ることを示唆する。
ＣＰアーゼＹでのＣ末端配列は初期にはあい昧な結果を
与えたが、Ｃ末端残基がＴyrである証拠も与えた。
【００３６】図５は、糖尿病関連ペプチド（ＤＡＰ）ま
たはアミリンの構造を示す。図６は、天然ＤＡＰ（配列
１）とひとカルシトニン遺伝子関連ペプチド類ＣＧＲＰ
−１（配列３）およびＣＧＲＰ−２（配列２）およびラ
ットＣＧＲＰ−１（配列４）との１次構造配列の比較を
示す。ドットを打った枠は、置換相同域を示す。
たはアミリンの構造を示す。図６は、天然ＤＡＰ（配列
１）とひとカルシトニン遺伝子関連ペプチド類ＣＧＲＰ
−１（配列３）およびＣＧＲＰ−２（配列２）およびラ
ットＣＧＲＰ−１（配列４）との１次構造配列の比較を
示す。ドットを打った枠は、置換相同域を示す。
【００３７】図７は、アミリン（配列５）の１次構造を
モルモットインスリン（配列６）およびひとインスリン
（配列７）のアルファ鎖と比較を示す。残基の数は、イ
ンスリンの残基のものと同様である。比較配列でのコロ
ンは等しいことを示し、ピリオドは保存的な変化を示
す。ダッシュの枠は保存的なアミノ酸置換を表す。ペプ
チド間のアミノ酸同一性は枠によって示される。ダイホ
フら著、 「メソッズ・イン・エンツィモロジー(Ｍethod
s in Ｅnzymology)(１９８３年)、９１巻、５２４−５
４５頁」のアリジン（ＡＬＩＧＮ）プログラムおよび突
然変異データマトリックスによる相同の査定は、２つの
ペプチド間の近縁関係を確認する、ひとＣＧＲＰ−１に
対するアミリンの高度に有意なスコアー８.３１を与え
た（図６、配列１および配列３）。主に、インスリンア
ルファ鎖における７位および２０位でのＣys残基が不一
致であるためにインスリンのアルファ鎖に対するスコア
ーは有意ではなかった。しかしながら、インスリンのア
ルファ鎖（残渣６、１１および１６）における３つの高
度に保存的な３つの残基が一致し、また４番目の位置で
保存的な変化（残渣１９でのＰhe／Ｔyr）の同一性がみ
られた（図２Ｃ）。
モルモットインスリン（配列６）およびひとインスリン
（配列７）のアルファ鎖と比較を示す。残基の数は、イ
ンスリンの残基のものと同様である。比較配列でのコロ
ンは等しいことを示し、ピリオドは保存的な変化を示
す。ダッシュの枠は保存的なアミノ酸置換を表す。ペプ
チド間のアミノ酸同一性は枠によって示される。ダイホ
フら著、 「メソッズ・イン・エンツィモロジー(Ｍethod
s in Ｅnzymology)(１９８３年)、９１巻、５２４−５
４５頁」のアリジン（ＡＬＩＧＮ）プログラムおよび突
然変異データマトリックスによる相同の査定は、２つの
ペプチド間の近縁関係を確認する、ひとＣＧＲＰ−１に
対するアミリンの高度に有意なスコアー８.３１を与え
た（図６、配列１および配列３）。主に、インスリンア
ルファ鎖における７位および２０位でのＣys残基が不一
致であるためにインスリンのアルファ鎖に対するスコア
ーは有意ではなかった。しかしながら、インスリンのア
ルファ鎖（残渣６、１１および１６）における３つの高
度に保存的な３つの残基が一致し、また４番目の位置で
保存的な変化（残渣１９でのＰhe／Ｔyr）の同一性がみ
られた（図２Ｃ）。
【図１】 図１は、アミロイドを含有する糖尿病患者す
い臓から由来した物質の６ＭグアニジンＨＣl／０.２Ｍ
りん酸ナトリウム緩衝液（pＨ７.５）中でのＨＰＬＣゲ
ル濾過流出液の吸収特性を示す図である。
い臓から由来した物質の６ＭグアニジンＨＣl／０.２Ｍ
りん酸ナトリウム緩衝液（pＨ７.５）中でのＨＰＬＣゲ
ル濾過流出液の吸収特性を示す図である。
【図２】 逆相ＨＰＬＣ吸収特性を示す図である。
【図３】 逆相ＨＰＬＣ吸収特性を示す図である。
【図４】 逆相ＨＰＬＣ吸収特性を示す図である。
【図５】 ＤＡＰのアミノ酸配列である。
【図６】 ＤＡＰと種々のホモローグ分子の比較図であ
る。
る。
【図７】 ＤＡＰと種々のホモローグ分子の比較図であ
る。
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/577 9162−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ // Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＢＲ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＲ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 アンソニー・チャールズ・ウイリス イギリス国０エックス71エス・アール５ オクソン、ウイットニー、クランレイ・ロ ード24番、ザ・ドッグ・ハウス
Claims (4)
- 【請求項１】 アミリンに対する抗体を含む、アミリン
の定性用または定量用イムノアッセイ。 - 【請求項２】 抗体が検出可能なラベルをつけられてい
る、請求項１記載のイムノアッセイ。 - 【請求項３】 抗体がモノクロナルまたはポリクロナル
である、請求項１記載のイムノアッセイ。 - 【請求項４】 必要に応じてアミリンまたはアミリン抗
原を含む、請求項１記載のイムノアッセイ。
Applications Claiming Priority (2)
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|---|---|---|---|
| GB8709871 | 1987-04-27 | ||
| GB878709871A GB8709871D0 (en) | 1987-04-27 | 1987-04-27 | Peptides |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63107395A Division JP2766647B2 (ja) | 1987-04-27 | 1988-04-27 | ペプチド類 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09133679A true JPH09133679A (ja) | 1997-05-20 |
Family
ID=10616392
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63107395A Expired - Lifetime JP2766647B2 (ja) | 1987-04-27 | 1988-04-27 | ペプチド類 |
| JP8247841A Pending JPH09133679A (ja) | 1987-04-27 | 1996-09-19 | ペプチド類 |
| JP9297110A Pending JPH10168099A (ja) | 1987-04-27 | 1997-10-29 | ペプチド類 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63107395A Expired - Lifetime JP2766647B2 (ja) | 1987-04-27 | 1988-04-27 | ペプチド類 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9297110A Pending JPH10168099A (ja) | 1987-04-27 | 1997-10-29 | ペプチド類 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0289287B1 (ja) |
| JP (3) | JP2766647B2 (ja) |
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| CA (1) | CA1341333C (ja) |
| DE (1) | DE3856121T2 (ja) |
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| GB (1) | GB8709871D0 (ja) |
| GR (1) | GR3026640T3 (ja) |
| HK (1) | HK1003033A1 (ja) |
Families Citing this family (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| GB8720115D0 (en) * | 1987-08-26 | 1987-09-30 | Cooper G J S | Treatment of diabetes mellitus |
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