JPH089525B2 - 強化広域殺菌剤として使用されるナイシン組成物 - Google Patents
強化広域殺菌剤として使用されるナイシン組成物Info
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Description
継続出願である。ナイシンは、抗菌性を有するポリペプ
チドで、細菌ストレプトコッカス・ラクチス(Streptoc
occus lactis)の種々の株によって天然に産生される。
ナイシンは、ある種のグラム陽性桿菌の芽胞成長を阻害
する公知の食品保存料である。
こともあるが、ナイシンはより正確にはバクテリオシ
ン,すなわち,細菌によって産生されるタンパク質性物
質でその原種に近縁の種に対してのみ抗菌活性を有する
ものとして分類される。ナイシンは、牛乳及びチーズ中
に低濃度に見られる天然由来の保存料であり、ヒトに対
し全く毒性がなくしかもアレルゲン性が皆無であると信
じられている。
ド、殺菌プロセスチーズスプレッド及び果物、野菜又は
肉入殺菌チーズスプレッド又は同殺菌プロセスチーズス
プレッドの直接食品含有物として安全であると認められ
た。更に、ナイシンはポリペプチドであるので、食品中
に残留するナイシン残留物は全て迅速に消化される。
t)Aによるアドバンシス・イン・アプライド・マイク
ロバイオロジー(Advances in Applied Microbiology)
27:85−123(1981)に記載されている。この報文はナイ
シンについて一般に公知であることを記載している。ナ
イシンはストレプトコッカス・ラクチス(Streptococcu
s lactis)によって産生され、アプリン&バレット社
(Apline & Barret Ltd.),ドアセット(Dorset),
英国から純粋でない調製物ニサプリンTM(NisaplinTM)
として商業的に入手可能であり,また、ストレプトコッ
カス・ラクチス(Streptococcus lactis)の培養物から
天然のナイシンを単離しこのナイシンを公知の方法で濃
縮することによって得ることもできる。別の株のストレ
プトコッカスを用いてナイシンを製造する方法もまた報
告されている。1987年12月29日発行ゴンザレズ(Gonzal
ez)らによる米国特許第4,716,115号を参照。組換えDNA
技術によってナイシンを製造することもまた可能なはず
である。
うな乳製品中の保存料として効果的に用いられてきた。
プロセスチーズ中おけるナイシンの使用は最近の特許の
課題であった。米国特許4,584,199号及び第4,597,972号
を参照。あるグラム陽性バクテリアの増殖を阻害するた
めのナイシンの使用については充分に実証されている。
しかしながら、食品保存料としてナイシンが完全に成功
し受け入れられるためには、ナイシンがグラム陰性菌及
び多くのグラム陽性菌に対し無効であるという考えがこ
れまでその阻害となってきた。グラム陰性菌はほとんど
常にグラム陽性菌と共存しており、食品の腐敗及び汚染
の主要原因となっている。1986年4月22日発行テイラー
(Taylor)の米国特許第5584199号及び1986年7月1日
発行テイラー(Taylor)の米国特許第4,597,972号,ツ
ァイ(Tsai)及びサンディーン(Sandine)のコンジュ
ガル・トランスファー・オブ・ナイシン・プラスミド・
ジーンズ・フロム・ストレプトコッカス・ラクティス79
62・トウ・ロイコノストック・デキストラニカム181(C
onjugal Transfer of Nisin Plasmid Genes from Strep
tococcus Lactis 7962 to Leuconostoc Dextranicum 18
1),アプライド・エンド・エバイロメンタル・マイク
ロバイオロジー(Applied and Environmental Microbio
logy),1987年2月,352頁,“ア・ナチュラル・プリザ
ーバディンブ(A Natural Preservative)",フード・エ
ンジニアリング・インターナショナル(Food Engineeri
ng Int′l,1987年5月37−38頁,“フォーカス・オン・
ナイシン(Focus on Nisin)",フード・マニュファクチ
ャ(Food Manufacture),1987年3月,63頁を参照。
されると、ナイシン単独に比べてグラム陰性菌に対して
強化広域殺菌活性を有しまたより広域のグラム陽性菌に
対して強化活性を示すことが先の知見に反して今回見い
出された。グラム陽性菌に対する強化殺菌活性は、先の
知見よりも広いpH範囲で発現する。
な種々の非殺菌性薬剤と併用するナイシン又は他のラン
チオニン含有バクテリオシン類のバクテリオシン組成物
類を提供する。本発明は、更に、強化広域殺菌剤を得る
ために適切な担体に溶解又は懸濁した本組成物を提供す
る。
在下におけるナイシン約0.1μg/mlから300μg/mlの溶液
は、ニシン単独に比べてサルモネラ・チフイムリウム
(Salmonella typhimurium),エスシェリシア・コリ
(Escherichia coli),シュードモナス・エルギノサ
(Pseudomonas aeruginosa),バクテリオイデス・ギン
ギバリス(Bacterioides gingivalis),アクテノバチ
ラス・アクチノマイセステスコミタンス(Actinobacill
us actinomycetescomitans)及びクレブシエラ・ニュー
モニアエ(Klebsiella pneumoniae)のようなグラム陰
性菌の増殖を実質的に消失させ、また、スタフィロコッ
カス・オーレウス(Staphylococcus aureus),ストレ
プトコッカス・ミュータンス(Streptococcus mutan
s),リステリア・モノサイドゲネス(Listeria monocy
togenes),ストレプトコッカス・アガラクチアエ(Str
eptococcus agalactiae)及びコリネホルム(Corynefor
m)菌のようなグラム陽性菌に対しては更に活性である
ことが特に見い出された。キレート剤によるナイシン活
性の増強は濃度依存性であるが、20mMを越えるEDTA濃度
は予想に反しナイシンの殺菌活性阻害性であった。しか
しながら、タンパク質性担体及び血清アルブミン,コラ
ーゲン,ゼラチン,カゼイン及びケラチンのような多価
ポリマー類の存在下においては、20mM以上のEDTA濃度に
よるナイシンの阻害は有意に低下し、それによってEDTA
によるナイシンの強化の有用範囲が拡大された。
0mMのキレート剤の溶液が約0.01%から1.0%の界面活性
剤の存在下において、グラム陰性菌とグラム陽性菌に対
するナイシンの有効性を増強することも同様に見い出さ
れた。更に、界面活性剤の存在下においてナイシンはグ
ラム陽性菌に対する活性を増強することも見い出され
た。
DTA及び他のアルキルジアミン四酢酸類,EGTA及びクエン
酸塩が挙げられるが、これらに限定されるものではな
い。キレート剤として有用でEDTAの有無を問わずナイシ
ンと併用する上で適切な界面活性剤として、ツウィーン
類(Tweens),トリトン類(Tritons)及びグリセリド
の非イオン性界面活性剤,脂肪酸のようなイオン性界面
活性剤,四価の化合物,ドデシル硫酸ナトリウムのよう
な陰イオン性界面活性剤,及びコカミドプロピルベタイ
ン及び乳化剤のような両性界面活性剤が挙げられる。
て食品中に見られるので、サルモネラ・チフイムリウム
(Salmonella typhimurium),エスシェリシア・コリ
(Escherichia Coli),クレブシエラ・ニューモニアエ
(Klebsiella pneumoniae),シュードモナス・エルギ
ノサ(Pseudomonas aeruginosa),バクテリオイデス・
ギンギバリス(Bacterioides gingivalis),アクチノ
バシラス・アクチノマイセテスコミタンス(Actinobaci
llus actinomycetescomitans)のようなグラム陰性菌及
び他のグラム陰性病原菌、及びグラム陽性菌に対してナ
イシン組成物が有効であることは、極めて有用であろ
う。この殺菌剤は、生の原料、プロセス食品及び飲料の
細菌性病原体及び他の腐敗性微生物菌体による汚染の管
理及び防止に特に適している。食品関連用途として、特
に家きんの肉,卵,チーズ及び魚肉の処理及び食品包装
と処理機器の処理が挙げられる。更に、プロセスチー
ズ,クリーム,牛乳,乳製品などにおける食品保存料と
しての用途,及び家きん肉,魚肉,獣肉,野菜及び乳製
品及び食品のプロセス装置の清浄における用途が挙げら
れる。ナイシン組成物の用途を食品関連用途だけに限定
すべきではなく、このナイシン組成物はグラム陰性及び
グラム陽性菌を除去する必要性又は要望があるあらゆる
状況において有用であるはずである。
とができ、又はいずれの適当な液体、コロイド性又はポ
リマー性基質中にも懸濁することができ、殺菌剤を生成
する。本組成物すなわち殺菌剤は、感染治療,包帯又は
外科手術用インプラント(埋入物)などの医療用途中軟
膏又はコーティング剤に混合することができ、また、皮
膚又は口腔うがい用広域消毒剤・消毒用ブラシ,清拭剤
又はローション剤として取り入れることができる。本殺
菌剤は、医療器具の洗浄用、手術用術前ブラシその他に
おいて用いることができる。本殺菌剤は、周辺環境の消
毒を望んでいるが腐植性又は他の毒性残留物の危険があ
るために化学殺菌剤が除外されているような状況におい
て特に有用である。
んどの広域殺菌剤と異なり、本発明の組成物は牛乳又は
血清のような有機物の存在下においても殺菌剤として有
効である。
阻害し、特にpH5.0においてあるグラム陽性芽胞形成性
桿菌を阻害することが公知であった。キレート剤含有ナ
イシン溶液の殺菌活性は極めて迅速であり、pH5.0を超
えるpH値で広域グラム陽性菌に対して本活性は増強され
ていた。更に、酸性及び塩基性の両pHにおいて、好適に
はpH5.0から8.0の範囲において、グラム陰性菌に対して
活性化された。キレート剤により活性化されたナイシン
の殺菌活性がこのように予想外にも迅速でかつ広域であ
ることによって、特に消毒剤としての用途に本ナイシン
が適当とされている。
ンの綱に属する。この綱に属するものとしてまた、サブ
チリン,エピデルミン,シンナマイシン,ジェラマイシ
ン,アンコベニン及び(pep)ペプ5が挙げられる。こ
れらのバクテリオシンペプチドはそれぞれ異なる微生物
によって産生される。しかしながら、バシラス・サブチ
ラス(Bacillus subtilis)の培養物から得たサブチリ
ン及びスタフィロコッカス・エピデルミジス(Staphylo
coccus epidermidis)の培養物から得たエピデルミン
は、ナイシンの分子構造に極めて類似の分子構造を有し
ていることが見い出された[ハースト(Hurst),85−86
頁,及びシュネル(Schnell)ら,ネーチャ(Nature),
333:276−278を参照]。したがって、この分子類似性の
ために、他のランチオニン含有ペプチドバクテリオシン
類は、グラム陰性及びグラム陽性菌汚染の除去において
キレート剤及び非イオン性界面活性剤と併用しナイシン
と同等に有効である。
バクテリオシン組成物のグラム陰性菌に対する殺菌剤と
しての有効性は驚異的であり、その理由として、先行技
術が一般にこのナイシン活性について触れていないこと
が挙げられる。5.0を超えるpHにおいてEDTA存在下にお
けるグラム陽性菌に対するナイシンの増強活性は、これ
までナイシン活性はpH5.0で至適であると確信されてき
たので、予想外である。更に、ナイシン及びランチオニ
ン含有ペプチドバクテリオシン組成物の殺菌剤としての
有効性が発見されたことによって、広域細菌に対し有効
な許容可能でかつ天然由来の無毒の物質がないことに苦
慮していた食料保存科学における長期にわたる必要性が
満たされる。ナイシン,EDTA及び/又は種々の界面活性
剤含有組成物のグラム陰性及びグラム陽性の両菌に対す
る活性が優れておりしかも予測し得なかった程迅速であ
ることを示すために、本殺菌剤を用いていくつか試験を
行った。これらの試験は例示のためのみに記載されてい
るのであり、本発明を限定するものではない。他のラン
タニン含有ペプチドバクテリオシン類はナイシンの代替
物として有効であること、及びEDTA以外のキレート剤は
EDTAの有効代替物であることが予測できる。
率パーセントで殺菌剤活性を検定し求めた。一般に、標
的種の懸濁液1ml当たり107個の細胞をこの新規殺菌剤と
一定時間インキュベート後2分間遠心分離し、細菌を集
菌する。この細胞ペレットから本文でファージ(Phag
e)バッファと命名した救援(レスキュー)バッファ(5
0mM Tris−HClバッファpH7.8,1mMMgSO4,4mMCaCl2,0.1MN
aCl及び0.1%ゼラチン)で殺菌剤を洗い去り、再懸濁後
ファージバッファ中に倍数希釈し、この懸濁細菌100ml
を栄養寒天プレートに塗布した。37℃で24−48時間イン
キューベーション後、生存細菌をコロニー形成単位(CF
U)で求めた。本発明の有効殺菌剤は、初期生存細菌数
の0.1%未満しか生存させないようなものとする。
するナイシン及びキレート剤の活性 表1に示したように、20mMトリス(Tris),pH8.0中で
37℃で2試験を行いナイシンとキレート剤EDTAのみを含
有する殺菌剤の効果を明らかとした。試験#1は対照で
EDTAを含まない条件下で実施し、グラム陰性菌S.チフム
リウム(typhimurium)に対するナイシン単独の効果を
示したものである。ナイシンの濃度上昇に伴い活性が一
部発現するが、EDTAの非存在下における高濃度の活性は
100μg/mlナイシン当たり1.6%生存率であり、食品保存
料として全く不適当である。ナイシン及びEDTAから得た
細菌活性のレベルは有意である。
し、標的グラム陰性菌の除去においてこのナイシン組成
物の優れた活性を示している。
菌剤がS.チフイムリウム(typhimurium)に対して著し
い殺菌活性を示すこと、一方、100μg/ml以上のナイシ
ン濃度ではナイシン・EDTA殺菌剤が細菌を実質的に消失
させる(生存率パーセント10-4未満で、これはアッセイ
中に全く生存殺菌がないことを示唆する)。したがっ
て、EDTAとナイシンの併用がナイシン単独に比べて千倍
を超える相乗活性を示す。
対するナイシン,キレート剤及び界面活性剤の活性 4つの試験(表2)はナイシン及びEDTAと界面活性剤
トリトン(Triton)X−100の双方を含有する殺菌剤の3
7℃,20mMトリス(Tris),pH8.0中におけるS.チフイムリ
ウム(typhimurium)の効果を調べた。対照(試験#
1)は、実施例1の対照と同じである(表1)。
ton)X−100を用いて行ったが、EDTAを用いなかった。
この洗浄剤が存在しているだけでグラム陰性菌に対する
ナイシンの活性は阻害されナイシンは無効であった。し
かし、本発明を説明すると試験#3と#4ではトリトン
(Triton)X−100と併用して20mM EDTAが存在すること
が、S.チフイムリウム(typhimurium)に対するナイシ
ンの殺菌活性を著しく増強するひとつの殺菌剤となる。
実際、トリトン(Triton)X−100とEDTAの併用でナイ
シンを含有しない場合でも有効であった。但し、ナイシ
ンの存在下における場合よりもその度合は弱かった。#
3と#4の両試験で(表2)ナイシン併用剤は極めて有
効であったが、1.0%トリトン(Triton)X−100の濃度
(試験#4,表2)が最も有効であった。
on)X−100が存在することによって、ナイシンとEDTA
のみを含有する殺菌剤よりもはるかに強くグラム陰性菌
に対するナイシンの活性が増強される(実施例1)。
対するナイシン,キレート剤及び界面活性剤の活性 表3は、37℃の20mMトリス(Tris),pH8.0中における
ナイシン,キレート剤EDTA20mMおよび非イオン性界面活
性剤ツウィーン(Tween)20含有殺菌剤のS.チフイムリ
ウム(typhimurium)に対する活性の増強を示したもの
である。トリトン(Triton)X−100併用の場合と同じ
く(実施例2),ナイシントEDTAを(1%)ツウィーン
(Tween)20と併用することは最も有効である。
i)}に対するナイシン,キレート剤及び界面活性剤の
活性 ナイシン及びEDTA含有殺菌剤のグラム陰性菌E.コリ
(Coli)に対する殺菌剤の効果を明らかとし、表4に示
した。
初期生存数を1×107個E.コリ(Coli)細胞/mlとし試験
を行った。EDTAを含有した場合と含有しない場合があ
る。殺菌剤の効果は、2時間後の細菌生存率パーセント
の関数として求めた。
ンはE.コリ(Coli)の除去に対してほとんど有意味の活
性を示さなかった。しかし、20mMEDTAが存在する試験#
2(表4)では、殺菌組成物はE.コリ(Coli)菌に対し
て実質的な活性を示した。ナイシン濃度の上昇に伴い本
活性の有効性は増大した。殺菌剤としてのナイシンとED
TAの併用は、E.コリ(Coli)に対する有効性を千倍も相
乗的に高めることが明らかである。試験#3と#4(表
4)から、トリトン(Triton)X−100がE.コリ(Col
i)に対する有意な殺菌活性を全く有していないことが
わかる。実際、トリトン(Triton)X−100は、S.チフ
イムリウム(typhimurium)でみられたと同様に(表
2)グラム陰性菌に対するナイシン活性を阻害するよう
である。しかし、表2と4からわかるように、EDTAによ
るナイシンの全般的増強はトリトン(Triton X−100)
の阻害効果を実質的に打消す。
殺菌剤は、界面活性剤の存在下においてすらも種々のタ
イプのグラム陰性菌に対して有効な食品保存料であるこ
とが以上よりわかる。
ella pneumoniae)}に対するナイシン及びキレート剤
の活性 ナイシン及びEDTAのみを含有する殺菌剤のグラム陰性
菌K.ニューモニアエ(pneumoniae)に対する効果が、表
5に示したように明らかとなった。
を37℃の20mMトリス(Tris)バッファ,pH8.0中で初期生
存K.ニューモニアエ(pneumoniae)細胞数を107個/mlと
し行った。本効果を2時間後の細胞生存率%の関係とし
て測定した。
ニューモニアエ(pneumoniae)に対し意味のある殺菌活
性をほとんど示さなかった。しかし、試験#2(表5)
においては20mM EDTAが存在し、本殺菌剤はK.ニューモ
ニアエ(pneumoniae)に対し実質的活性を示した。ナイ
シン濃度が上昇するに伴い本活性の有効性が高まった。
ella typhimurium)}に対するナイシン活性はキレート
剤濃度に依存性である。
phimurium)}に対するナイシンの増強活性化は、50mM
酢酸ナトリウム,pH5.0又は20mMトリス(Tirs),pH8.0中
のいずれかにおいて37℃でEDTA濃度に存在性であること
を示している。
験#1と#3(対照,表6)では、pH5.0(#1)又はp
H8.0(#3)のいずれかにおいてS.チフイムリウム(ty
phimurium)に対し有意味の活性をほとんど示しさなか
った。しかし試験#2及び#4(表6)では、ナイシン
100μg/mlがEDTAと共存しており、本殺菌剤はS.チフイ
ムリウム(typhimurium)に対し実質的な活性を発現し
た。この殺菌剤の活性は酸性pH(5.0)でも塩基性pH
(8.0)でも双方において同様であったが、このこと
は、ナイシン単独のグラム陽性菌に対する活性がpH5.0
で至適であるという事実に反していた。
値5.0及び8.0において0.2mMから10mMの範囲で至適とな
る。10mM EDTAを超える濃度においてEDTAによるナイシ
ンの増強が低下するのは驚くべきことである。活性化の
低下は、pH5.0よりもpH8.0で有意に著明である。
するナイシン及びキレート剤 EDTAによる生体組織存在下グラム陰性菌に対するナイ
シン活性の増強が、ニワトリの筋肉上のS.チフイムリウ
ム(typhimurium)で明らかとなり、表7に示した。
又はpH8.0の20mMトリス(Tris)中のいずれか中で37℃
で行った。
酸ナトリウム及びポビドンヨウ素で洗浄した。本組織に
接種するために、さいの目にしたニワトリ筋肉をpH8.0
の20mMトリス塩酸中S.チフイムリウム(typhimurium)
懸濁液108個細胞/ml中に浸漬した。過剰の水分は、浸漬
立方体から振り落として除去した。ニワトリ試料は、本
組織を覆うために充分な量のナイシン組成物含有バッフ
ァ中に入れ37℃で2時間インキュベートした後、本組織
を覆うために充分な量のファージ(phage)バッファに
本組織を移した。試験溶液中に残留する細菌を遠心分離
によって集菌後ファージ(phage)バッファで洗浄し、
ファージバッファによって組織から洗い出された細菌と
合わせた。合わせた試料(“非固着”細胞と命名)を倍
数希釈し、アリコット100μを生存細菌の測定のため
に塗布した。
験#1及び試験#3(表7)において、EDTA単独ではS.
チフムリウム(typhimurium)の生存に有意の効果を全
く示さない。しかし、ナイシン300μg/mlが存在する試
験#2と#4(表7)では、ニワトリ筋肉上のS.チフイ
ムリウム(typhimurium)に対しpH5.0及びpH8.0の両pH
で本殺菌剤は実質的活性を示した。
5.0及び8.0の両値で0.3mMから10mM EDTAの範囲に至適濃
度があった。pH8.0において10mM EDTAを超える濃度で
は、EDTAによるナイシンの活性化が低下する。しかし、
試験#5に示したように(表7),pH8.0において1.0%
ウシ血清アルブミンの存在下では、ニワトリ筋肉上のS.
チフイムリウム(typhimurium)に対するナイシンの有
効性が100mMまでのEDTA濃度全範囲で示される。
Aのような低濃度のキレート剤含有殺菌剤は、グラム陰
性菌による食品汚染の除去又は防止に極めて有効であり
得る。
対するナイシン活性の滴定 キレート剤の至適濃度下におけるトリス(Tris)バッ
ファ中本殺菌剤のグラム陰性菌に対する有効性が実質的
であることを明らかとし、表8に示した。
下20mMトリス(Tris),pH8.0中1.0mM EDTAを含む0.3μg
/mlほどのわずかな量のナイシンが、S.チフイムリウム
(typhimurium)の存在を有意に低下することがわか
る。本殺菌剤は、ナシン単独がグラム陽性ストレプトコ
ッシ(Streptococci)に対し活性であるように、グラム
陰性菌に対し活性である。
対するナイシン活性の滴定 キレート剤の至適濃度下、生体組成存在下におけるグ
ラム陰性菌に対する殺菌剤の有効性を、ニワトリ筋肉上
S.チフイリウム(typhimurium)で明らかとし、表9に
示した。
及びポビドンヨウ素で使用に先立ち洗浄した。本組織に
接種するために、pH8.0の20mMトリス塩酸中108個細胞/m
lのS.チフイムリウム(typhimurium)懸濁液に浸漬し
た。過剰の水分を振り落として浸漬立方体から除去し
た。本組織を覆うのに充分な量のナイシン組成物含有バ
ッファ中に本組織を入れ、37℃で2時間インキュベート
後、本組織を覆うために充分な量のファージ(phage)
バッファに移した。試験溶液中に残留する細菌を遠心分
離によって集菌後ファージ(phage)バッファで洗浄
し、ファージバッファによって本組織から洗い出された
細菌と合わせた。合わせた試料(“非固着”細胞と命
名)を倍数希釈し、アリコット100μを生存細菌の測
定のために塗布した。
対するナイシンEDTA及びメチルパラベン活性 ナイシン及びEDTA含有殺菌剤を公知の食品保存料メチ
ルパラベンと併用すると、グラム陰性菌に対しずばぬけ
て有効であることが明らかとなり、表10に示した。
及びポビドンヨウ素で使用に先立ち洗浄した。本組織に
接種するために、さいの目にしたニワトリの筋肉をpH5.
0の50m酢酸ナトリウムバッファ中108個細胞/mlのS.チフ
イムリウム(typhimurium)懸濁液に浸漬した。過剰の
水分を振り落して浸漬立方体から除去した。本組織を覆
うために充分な量のナイシン組成物含有バッファ中に本
組織を入れ、37℃で2時間インキュベート後、本組織を
覆うために充分な量のファージ(phage)バッファに移
した。試験溶液中に残留する細菌を遠心分離によって集
菌後ファージ(Phage)バッファで洗浄し、ファージバ
ッファによって本組織から洗い出された細菌と合わせ
た。合わせた試料(“非固着”細胞と命名)を倍数希釈
し、アリコット100μを生存細胞の測定のために塗布
した。
ラベンは、1.0%の濃度においてのみS.チフイムリウム
(typhimurium)に対し効果的であることが示された。
しかし、試験#2(表10)では、300μg/mlナイシンの
存在下におけるメチルパラベンとナイシンのS.チフイム
リウム(typhimurium)に対する有効性は実質的に改良
された。
ラベンの有用性を有意に向上させた。更に、本殺菌剤
は、メチルパラベンのような一般に広く認められてはい
るが好適性に劣る食品保存料の(使用の)集中を実質的
に低下させることになるか、又はそれらに対する需要を
消失させることになる。
コッカス・オウレウス)}に対するナイシン及びキレー
ト剤の活性 キレート剤によるナイシンの活性化はpH依存性であ
る。表11のデータは、pH8.0においてよりもpH5.0におい
てナイシンがS.オウレウス(aureus)に対し幾分殺菌性
が強くなることを確認したものである。pH5.0においてE
DTAはS.オウレウス(aureus)に対しナイシン活性を増
強しないが、10mMを超えるEDTA濃度においてはナイシン
の殺菌活性に阻害性となる。しかし、pH8.0におけるEDT
A活性化ナイシンの殺菌活性はナイシン単独又はpH5.0の
EDTAと併用した時よりも有意に高い。
と報告されており{ハースト(Hurst)参照}、表11に
示すデータはこれを裏付けるものである。本知見に基づ
き、S.オウレウス(aureus)に対するEDTAのナイシン活
性化はより低いpHで同様に最大になると考えられてき
た。しかし、表11でわかるようにまた予測に反して(表
6参照)、EDTAがpH5.0においてグラム陽性菌に対する
ナイシン活性を増強することは観察されなかった。しか
し、EDTA高濃度にによるナイシン活性の阻害はpH5.0に
おいてもまだ認められた。従って、キレート剤によるナ
イシン活性化はある濃度範囲のキレート剤においてのみ
起こり、グラム陽性菌に関してはpH5.0を超える好適なp
H範囲のpHに依存性である。
は、重要ヒト病原体の1種であるS.オウレウス(aureu
s)に限定されておらず、歯垢の原因であるストレプト
コッカス・ミュータンス(Streptococcus mutans)(表
12A),食物運搬病原体の1種リステリア・モノサイト
ゲネス(Listeria monocytogenes)(表12B),及び体
臭の寄与因子であるコリネホルム(Coryneform)従属細
菌類の混合群(表12C)でも観察されている。
データによって例示されるように殺菌性が迅速である。
107個細胞/mlのグラム陽性菌S.ミュータンス(mutans)
懸濁液をpH7.3の20mMトリス(Tris)バッファ中である
範囲の濃度1mM EDTA活性化ナイシンと37℃でインキュベ
ートした。この懸濁液は0.5分から60分の範囲の種々の
時間にわたり前記殺菌剤とインキュベートした。本殺菌
剤の殺菌剤としての有効性を生存細菌のパーセントを求
めることによって推定した。EDTAによって増強されたナ
イシンはこの処方において10μg/mlの少量で、1分間以
内に6対数目盛だけ細菌数を減少させることができる。
る。従って、本組成物は特に本文で明らかとしたよう
に、口腔洗浄剤・うがい薬・歯みがき粉又は歯垢形成S.
ミュータンス(mutans)に有効な他類似歯科用品(dent
rifice)の成分として有効な殺菌剤であるこが予測され
る。
後の活性を実施例1−7に示した。EDTA増強ナイシンの
迅速殺菌活性は、同様にグラム陰性菌に対しても見ら
れ、このことは表13Bのデータによっても例示される。
EDTAによるナイシンの活性化を中和すると予測される。
しかし、表14のデータによってわかるように、S.ミュー
タンス(S.mutans)に対するナイシンの殺菌活性は、1m
MのCa2+イオンの存在下においてさえも1mM EDTAによっ
て増強される。3mMを超えた場合にのみ、Ca2+イオンをE
DTA活性化ナイシンに阻害性であった。これは特に、カ
ルシウムイオン濃度が関連する口腔洗浄外用剤において
重要である。
た時も同様に有意に増強される。このことは、表15Aに
示したようにある限られたナイシン濃度(0.2μg/ml)
で最も良く例示される。0.1%までの濃度において食品
等級の界面活性剤モノラウリンは、複合媒体牛乳中のス
トレプトコッカス・アガラクチアエ(Streptococcus ag
alactiae)に対し有意の殺菌活性をほとんど示さなかっ
た。ナイシンは0.2μg/mlまでの濃度において同様に牛
乳中において有意の殺菌活性を示さなかった。しかし、
0.1%モノラウリンと0.2g/mlのナイシンの2薬剤の併用
は、S.アガラクチアエ(agalactiae)に対し極めて強力
である。この殺菌剤は、相加効果で期待されるよりも百
倍以上強力であり、上記薬剤のいずれかを単独で用いる
時よりも1万倍強力である。従って、ナイシンの適用を
その使用可能な活性に限定する時、界面活性剤1種を含
有するナイシンから成る殺菌剤はさらに有用であると期
待できる。
のデータによって例示した。ナイシン及び特にナイシン
とEDTAから成る殺菌剤はL.モノサイトゲネス(monocyto
genes)に対して殺菌性であるが、表15Bのデータは、牛
乳のような複合媒体においてこの有機物に対する有効な
ナイシン活性が制約を受けることを示している。しか
し、グリセリドのモノオレアートとナイシンから成る殺
菌剤はこの食物運搬病原体に対して牛乳中においても有
効である。但し、モノオレアート自体はこの有機物に対
し全く殺菌性を有していない。
Claims (11)
- 【請求項1】ナイシン,サブチリン,エピデルミン,シ
ンナマイシン,ジュラマイシン,アンコベニン及びペプ
(Pep)5から成る群から選択されるランチオニン含有
バクテリオシンと、アルキルジアミン四酢酸,CaEDTA,Na
2CaEDTA,EGTA及びクエン酸塩から成る群から選択される
キレート剤とから成る強化広域殺菌剤として使用される
組成物。 - 【請求項2】ナイシン,サブチリン,エピデルミン,シ
ンナマイシン,ジュラマイシン,アンコベニン及びペプ
(Pep)5から成る群から選択されるランチオニン含有
バクテリオシンと、トリトン類(Tritons),ツウィー
ン類(Tweens)等の非イオン性界面活性剤,グリセリド
類,脂肪酸類,乳化剤,四価の化合物類,両性界面活性
剤から成る群から選択される界面活性剤とから成る強化
広域殺菌剤として使用される組成物。 - 【請求項3】ナイシン,サブチリン,エピデルミン,シ
ンナマイシン,ジュラマイシン,アンコベニン及びペプ
(Pep)5から成る群から選択されるランチオニン含有
バクテリオシンと、アルキルジアミン四酢酸,CaEDTA,Na
2CaEDTA,EGTA及びクエン酸塩から成る群から選択される
キレート剤と、トリトン類(Tritons),ツウィーン類
(Tweens)等の非イオン性界面活性剤,グリセリド類,
脂肪酸類,乳化剤,四価の化合物類,両性界面活性剤か
ら成る群から選択される界面活性剤とから成る強化広域
殺菌剤として使用される組成物。 - 【請求項4】担体と、ナイシン,サブチリン,エピデル
ミン,シンナマイシン,ジュラマイシン,アンコベニン
及びペプ(Pep)5から成る群から選択されるランチオ
ニン含有バクテリオシンと、アルキルジアミン四酢酸,C
aEDTA,Na2CaEDTA,EGTA及びクエン酸塩から成る群から選
択されるキレート剤とから成る強化広域殺菌剤。 - 【請求項5】担体と、ナイシン,サブチリン,エピデル
ミン,シンナマイシン,ジュラマイシン,アンコベニン
及びペプ(Pep)5から成る群から選択されるランチオ
ニン含有バクテリオシンと、トリトン類(Tritons),
ツウィーン類(Tweens)等の非イオン性界面活性剤,グ
リセリド類,脂肪酸類,乳化剤,四価の化合物類,両性
界面活性剤から成る群から選択される界面活性剤とから
成る強化広域殺菌剤。 - 【請求項6】担体と、ナイシン,サブチリン,エピデル
ミン,シンナマイシン,ジュラマイシン,アンコベニン
及びペプ(Pep)5から成る群から選択されるランチオ
ニン含有バクテリオシンと、アルキルジアミン四酢酸,C
aEDTA,Na2CaEDTA,EGTA及びクエン酸塩から成る群から選
択されるキレート剤と、トリトン類(Tritons),ツウ
ィーン類(Tweens)等の非イオン性界面活性剤,グリセ
リド類,脂肪酸類,乳化剤,四価の化合物類,両性界面
活性剤から成る群から選択される界面活性剤とから成る
強化広域殺菌剤。 - 【請求項7】ナイシン,サブチリン,エピデルミン,シ
ンナマイシン,ジュラマイシン,アンコベニン及びペプ
(Pep)5から成る群から選択されたランチオニン含有
バクテリオシン及びアルキルジアミン四酢酸,EGTA及び
クエン酸塩から成る群から選択されたキレート剤が、ス
タフィロコッカス・オーレウス(Staphylococcus aureu
s),ストレプトコッカス・ミュータンス(Streptococc
us mutans),リステリア・モノサイドゲネス(Listeri
amonocytogenes),ストレプトコッカス・アガラクチア
エ(Streptococcusagalactiae),コリネホルム(Coryn
eform)菌,サルモネラ・チフイムリウム(Salmonella
typhimurium),エスシェリシア・コリ(Escherichia C
oli),クレブシエラ・ニューモニア(Klebsiella Pneu
moniae)シュードモナス・オールギノサ(Pseudomonas
aeru−ginosa),バクテリオイデス・ジンギバリス(Ba
cterioides gingivalis)及びアクチノバシラス・アク
チノマイセテスコミタンス(Actinobacillus actinomyc
etescomitans)から成る群の細菌類の少なくともひとつ
に対して増強された有効性を保持する量存性する請求の
範囲4又は6に記載の強化広域殺菌剤。 - 【請求項8】前記アルキルジアミン四酢酸がEDTAである
請求の範囲7に記載の強化広域殺菌剤。 - 【請求項9】前記界面活性剤がトリトン類(Triton
s),ツウィーン類(Tweens)等の非イオン性界面活性
剤,グリセリド類,脂肪酸,乳化剤,四価の化合物類,
両性界面活性剤から成る群から選択されかつ前記殺菌剤
がグラム陰性菌及びグラム陽性菌から成る群の細菌類の
少なくともひとつに対し増強された有効性を保持するに
充分な量だけ前記界面活性剤が存在する請求の範囲5又
6に記載の強化広域殺菌剤。 - 【請求項10】ナイシンの濃度が約0.1μg/mlと300.0μ
g/mlの間にあり、キレート剤の濃度が0.1mMと20mMの間
にある請求の範囲7に記載の強化広域殺菌剤。 - 【請求項11】界面活性剤の濃度が約0.01%と1.0%の
間にある請求の範囲9に記載の強化広域殺菌剤。
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