JP5894457B2 - ペプチド含有抗菌性組成物 - Google Patents
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Description
なお、ここでのアルキルセルロース類及びヒドロキシアルキルセルロース類から選択されるセルロース誘導体とは、アルキル変性またはヒドロキシアルキル変性のみを行っているセルロース誘導体であり、セルロースの変性の際、異なる2種以上の基を組み合わせて変性を行っているセルロース誘導体、及びアルキル変性あるいはヒドロキシアルキル変性以外の変性を行っているセルロース誘導体は含まない。例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)のようにヒドロキシアルキル変性とアルキル変性とを組み合わせたセルロース誘導体や、カルボキシメチルセルロース(CMC)のようにカルボキシメチル変性を行ったセルロース誘導体は含まない。
また別の用途としては、例えば、家庭用・業務用の厨房、調理器具、食品加工工場、食品素材製造工場などにおいて、食品危害微生物の殺菌に使用できる。
<チオニンの精製>
大麦BL−100(株式会社ADEKA社製)40gを320mLのイオン交換水により攪拌後、遠心分離機により沈殿を洗浄・回収した。同様の操作をもう一度繰り返した大麦洗浄サンプルに160mLの0.2Mクエン酸水溶液を添加し、攪拌しながら30分間室温でチオニンを抽出した。抽出後、遠心分離機により上清を回収し、1N水酸化ナトリウム水溶液を滴下して中和した。この粗抽出液をイオン交換クロマトグラフィーカラム(HiTrap CM FF:GEヘルスケア社製)及びゲル濾過クロマトグラフィーカラム(HiPrep SEPHACRYL S-200 High Reaolution:GEヘルスケア社製)によるカラム精製によりチオニン精製品を得た。カラム操作は、低圧クロマトグラフィーシステム(BioLogic LP システム:バイオ・ラッドラボラトリーズ社製)により実施した。
各種化合物がチオニン活性(細胞膜損傷)に及ぼす効果を、標的微生物細胞(St. aureus NBRC12732)から溶出したATPの濃度を測定することで評価した。試験は、弱酸性水溶液(McIlvaine 緩衝液pH5.0)にチオニンを25μg/ml添加し、更に下記の各種試験化合物を0.1質量%になるように添加して均一になるまで攪拌した後、標的微生物細胞(St. aureus)と接触させATP濃度を測定した。ATP濃度が高いほど、チオニン活性が高いことになり、チオニン活性の相乗効果が認められることになる。なお比較のため、チオニンを添加せずに各種試験化合物のみ(0.1質量%)での試験も行った。結果を表1に示す。
HPC2 :ヒドロキシプロピルセルロース(2%,20℃)2.0〜2.9mPa・s(和光純薬社製)
HPC150:ヒドロキシプロピルセルロース(2%,20℃)150〜400mPa・s(和光純薬社製)
MC15 :メチルセルロース(2%,20℃)13〜18mPa・s(和光純薬社製)
MC100 :メチルセルロース(2%,20℃)80〜120mPa・s(和光純薬社製)
HPMC :ヒドロキシプロピルメチルセルロース(和光純薬社製)
CMC :カルボキシメチルセルロースナトリウム塩(和光純薬社製)
Triton X-100:ポリオキシエチレンオクチルフェノール(ナカライテスク社製)
Mydol 10 :アルキルグルコシド(花王株式会社製)
Tween 80 :ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(和光純薬社製)
Sorbitol :ソルビトール(和光純薬社製)
チオニンにセルロース誘導体及びキレート剤を添加したときのチオニンの抗菌活性(MIC)を測定した。GP培地(グルコース・ペプトン培地)に各種濃度のチオニン、セルロース誘導体としてヒドロキシプロピルセルロース(HPC)を0.1質量%及びキレート剤としてエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム(EDTA・2Na)を0.004質量%になるように添加し、クロカビ(Cladosporium cladosporioides IFO6348)胞子を供試菌として、最小発育阻止濃度(MIC)を25℃で5日間培養後の胞子の発芽抑制・菌糸伸張阻止効効果を判定した。チオニン以外の添加剤の濃度を固定し、チオニンの濃度を変化させたときの、クロカビ胞子の発芽抑制・菌糸伸張阻止効効果が確認できた最小濃度をMICとした。表2に結果を示す。
+:わずかだがクロカビの発芽あるいは菌糸伸張が確認される
−:クロカビの発芽あるいは菌糸伸張が確認できない
溶血性試験により、人体等に対する安全性を評価した。溶血性試験は、細胞毒性の指標とされる試験法である。溶血活性は、壊れた赤血球細胞から溶出したヘモグロビンを指標として評価した。赤血球細胞は、緬羊保存血液<SHEEP>(日本バイオテスト研究所社製)をリン酸緩衝生理食塩水(生理食塩水)で洗浄し調製した。各種試験化合物をリン酸緩衝生理食塩水に添加し、更にチオニンと赤血球細胞を混合し、37℃で35分間放置後に上清の吸光度(540nm)を測定した。具体的な配合は表3及び表4に示した。なお、測定結果の算出方法は、界面活性剤(Triton X-100)を0.2質量%で作用させ、赤血球細胞が完全に溶血した時の吸光度を基準(100%)とし、下記の式から溶血活性を算出した。溶血活性の値が低いほど細胞毒性が低いことになる。溶血性試験1〜18の結果を表3及び表4に示す。
(試験化合物)
ポリオキシエチレンオクチルフェノール(Triton X-100、ナカライテスク社製)
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(Tween80、和光純薬社製)
アルキルグルコシド(Mydol10、花王株式会社製)
ヒドロキシプロピルセルロース(HPC、和光純薬社製、20℃:2.0〜2.9mPa・S)
メチルセルロース(MC15、和光純薬社製、20℃:13〜18mPa・S)
エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム(EDTA、同仁化学研究所社製)
Claims (5)
- (A)成分としてチオニン、(B)成分としてアルキルセルロース類及びヒドロキシアルキルセルロース類から選択される1種又は2種以上のセルロース誘導体及び(C)成分としてキレート剤を含有することを特徴とするペプチド含有抗菌性組成物。
- (A)成分1質量部に対して(B)成分が0.1〜100000質量部であることを特徴とする請求項1に記載の抗菌性組成物。
- (C)成分がカルボン酸型キレート剤であることを特徴とする請求項1または2に記載の抗菌性組成物。
- (A)成分1質量部に対して(B)成分が0.1〜100000質量部、(C)成分が0.004〜4000質量部であることを特徴とする請求項1〜3のいずれかに記載の抗菌性組成物。
- チオニンの抗菌活性を、アルキルセルロース類及びヒドロキシアルキルセルロース類から選択される1種又は2種以上のセルロース誘導体及びキレート剤を共存させることで増強させる方法。
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