JPH0873504A - 非還元性糖質とその製造方法並びに用途 - Google Patents

非還元性糖質とその製造方法並びに用途

Info

Publication number
JPH0873504A
JPH0873504A JP7116583A JP11658395A JPH0873504A JP H0873504 A JPH0873504 A JP H0873504A JP 7116583 A JP7116583 A JP 7116583A JP 11658395 A JP11658395 A JP 11658395A JP H0873504 A JPH0873504 A JP H0873504A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
enzyme
reducing
trehalose
starch
reducing sugar
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP7116583A
Other languages
English (en)
Other versions
JP3793590B2 (ja
Inventor
Takahiko Bandai
隆彦 万代
Takashi Shibuya
孝 渋谷
Toshiyuki Sugimoto
利行 杉本
Toshio Miyake
俊雄 三宅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK
Original Assignee
Hayashibara Biochemical Laboratories Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hayashibara Biochemical Laboratories Co Ltd filed Critical Hayashibara Biochemical Laboratories Co Ltd
Priority to JP11658395A priority Critical patent/JP3793590B2/ja
Priority to TW084105765A priority patent/TW426736B/zh
Priority to IL11403195A priority patent/IL114031A0/xx
Priority to DE69528019T priority patent/DE69528019T9/de
Priority to EP95304439A priority patent/EP0691407B1/en
Priority to CA002152563A priority patent/CA2152563C/en
Priority to ES95304439T priority patent/ES2182869T3/es
Priority to KR1019950017442A priority patent/KR100362688B1/ko
Priority to US08/495,030 priority patent/US5919668A/en
Publication of JPH0873504A publication Critical patent/JPH0873504A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP3793590B2 publication Critical patent/JP3793590B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D2/00—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking
    • A21D2/08—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking by adding organic substances
    • A21D2/14—Organic oxygen compounds
    • A21D2/18—Carbohydrates
    • A21D2/181—Sugars or sugar alcohols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D2/00—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking
    • A21D2/08—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking by adding organic substances
    • A21D2/14—Organic oxygen compounds
    • A21D2/18—Carbohydrates
    • A21D2/186—Starches; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/005—Condensed milk; Sugared condensed milk
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/13—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using additives
    • A23C9/1307—Milk products or derivatives; Fruit or vegetable juices; Sugars, sugar alcohols, sweeteners; Oligosaccharides; Organic acids or salts thereof or acidifying agents; Flavours, dyes or pigments; Inert or aerosol gases; Carbonation methods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/152—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations containing additives
    • A23C9/156—Flavoured milk preparations ; Addition of fruits, vegetables, sugars, sugar alcohols or sweeteners
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G3/00—Sweetmeats; Confectionery; Marzipan; Coated or filled products
    • A23G3/34—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof
    • A23G3/346—Finished or semi-finished products in the form of powders, paste or liquids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/163—Sugars; Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L11/00—Pulses, i.e. fruits of leguminous plants, for production of food; Products from legumes; Preparation or treatment thereof
    • A23L11/05—Mashed or comminuted pulses or legumes; Products made therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L13/00—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof
    • A23L13/40—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof containing additives
    • A23L13/42—Additives other than enzymes or microorganisms in meat products or meat meals
    • A23L13/428—Addition of flavours, spices, colours, amino acids or their salts, peptides, vitamins, yeast extract or autolysate, nucleic acid or derivatives, organic acidifying agents or their salts or acidogens, sweeteners, e.g. sugars or sugar alcohols; Addition of alcohol-containing products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/30—Artificial sweetening agents
    • A23L27/33—Artificial sweetening agents containing sugars or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/30—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols, e.g. xylitol; containing starch hydrolysates, e.g. dextrin
    • A23L29/35—Degradation products of starch, e.g. hydrolysates, dextrins; Enzymatically modified starches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L9/00—Puddings; Cream substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L9/10—Puddings; Dry powder puddings
    • A23L9/12—Ready-to-eat liquid or semi-liquid desserts, e.g. puddings, not to be mixed with liquids, e.g. water, milk
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/28—Dragees; Coated pills or tablets, e.g. with film or compression coating
    • A61K9/2806—Coating materials
    • A61K9/282—Organic compounds, e.g. fats
    • A61K9/2826—Sugars or sugar alcohols, e.g. sucrose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/18—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a glycosyl transferase, e.g. alpha-, beta- or gamma-cyclodextrins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/24—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an isomerase, e.g. fructose
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/01019—Cyclomaltodextrin glucanotransferase (2.4.1.19)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C13—SUGAR INDUSTRY
    • C13K—SACCHARIDES OBTAINED FROM NATURAL SOURCES OR BY HYDROLYSIS OF NATURALLY OCCURRING DISACCHARIDES, OLIGOSACCHARIDES OR POLYSACCHARIDES
    • C13K13/00—Sugars not otherwise provided for in this class
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G2200/00—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF containing organic compounds, e.g. synthetic flavouring agents
    • A23G2200/02—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF containing organic compounds, e.g. synthetic flavouring agents containing microorganisms, enzymes, probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G2200/00—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF containing organic compounds, e.g. synthetic flavouring agents
    • A23G2200/06—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF containing organic compounds, e.g. synthetic flavouring agents containing beet sugar or cane sugar if specifically mentioned or containing other carbohydrates, e.g. starches, gums, alcohol sugar, polysaccharides, dextrin or containing high or low amount of carbohydrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Seasonings (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【目的】 末端にトレハロース構造を有する非還元性糖
質、トレハロースの両グルコースに重合度１若しくは２
以上のグルコースを有している非還元性糖質及びトレハ
ロースなどの非還元性糖質、又は、これを含む低還元性
糖質とその製造方法並びに用途を提供する。 【構成】 澱粉を液化した溶液に、非還元性糖質生成酵
素を澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキストリン
・グルカノトランスフェラーゼとともに作用させるか、
又は非還元性糖質生成酵素及びトレハロース遊離酵素を
澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキストリン・グ
ルカノトランスフェラーゼとともに作用させ、得られる
非還元性糖質、又は、これを含む低還元性糖質、該糖質
の製造方法並びに該糖質を含有せしめた組成物を主な構
成とする。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、非還元性糖質とその製
造方法並びに用途に関し、更に詳細には、分子の末端に
トレハロース構造を有する非還元性糖質、分子の内部に
トレハロース構造を有する非還元性糖質及びトレハロー
スなどの非還元性糖質と該非還元性糖質の澱粉からの製
造方法、並びに該非還元性糖質、又は、これを含む低還
元性糖質を含有せしめた組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】グルコースを構成糖とする非還元性糖質
として、古くからトレハロース（α，α−トレハロー
ス）が知られており、その存在は、『アドバンシズ・イ
ン・カーボハイドレイト・ケミストリー（Ａｄｖａｎｃ
ｅｓ ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ）』、第１８巻、第２０１乃至２２５頁（１９６
３年）アカデミック・プレス社（米国）及び『アプライ
ド・アンド・エンビロメンタル・マイクロバイオロジー
（Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａ
ｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）』、第５６巻、第３２
１３乃至３２１５頁（１９９０年）などにも記載されて
いるように、少量ながら、微生物、きのこ、昆虫など広
範囲に及んでいる。トレハロースのような非還元性糖質
は、アミノ酸や蛋白質等のアミノ基を有する物質とアミ
ノカルボニル反応を起こさず、含アミノ酸物質を損なわ
ないことから、褐変、劣化を懸念することなく利用、加
工できることが期待され、その工業的製造方法の確立が
望まれている。
【０００３】トレハロースの製造方法としては、例え
ば、特開昭５０−１５４４８５公報で報告されている微
生物菌体を用いる方法や、特開昭５８−２１６６９５公
報で提案されているマルトース・ホスホリラーゼとトレ
ハロース・ホスホリラーゼとの組合せでマルトースを変
換する方法などが知られている。しかしながら、微生物
菌体を用いる方法は、該菌体を出発原料とし、これに含
まれるトレハロースの含量が、通常、固形物当り１５ｗ
／ｗ％（以下、本明細書では、特にことわらない限り、
ｗ／ｗ％を単に％と略称する）未満と低く、その上、こ
れを抽出、精製する工程が煩雑で、工業的製造方法とし
ては不適である。また、マルトース・ホスホリラーゼ及
びトレハロース・ホスホリラーゼを用いる方法は、いず
れもグルコース−１リン酸を経由しており、その基質濃
度を高めることが困難であり、また、両酵素の反応系が
可逆反応で目的物の生成率が低く、更には、両酵素の反
応系を安定に維持して反応をスムーズに進行させること
が困難であって、未だ、工業的製造方法として実現する
に至っていない。
【０００４】これに関係して、『月刊フードケミカ
ル』、８月号、第６７乃至７２頁（１９９２年）、「澱
粉利用開発の現状と課題」の「オリゴ糖」の項におい
て、「トレハロースについては著しく広い応用範囲が考
えられるが、本糖の澱粉糖質からの直接糖転移、加水分
解反応を用いた酵素的生産は、現在のところ学術的には
不可能であるといわれている。」と記載されているよう
に、澱粉を原料とし、酵素反応によってトレハロースを
製造することは、従来、学術的にも不可能であると考え
られてきた。
【０００５】一方、澱粉を原料として製造される澱粉部
分分解物、例えば、澱粉液化物、各種デキストリン、各
種マルトオリゴ糖などは、通常、その分子の末端に還元
基を有し還元性を示すことが知られている。このような
澱粉部分分解物を、本明細書では、還元性澱粉部分分解
物と称する。一般に、還元性澱粉部分分解物は、固形物
当りの還元力の大きさをデキストロース・エクイバレン
ト（ＤｅｘｔｒｏｓｅＥｑｕｉｖａｌｅｎｔ，ＤＥ）と
して表している。この値の大きいものは、通常、分子が
小さく低粘度で、甘味が強いものの、反応性が強く、ア
ミノ酸や蛋白質などのアミノ基を持つ物質とアミノカル
ボニル反応を起こし易く、褐変し、悪臭を発生して、品
質を劣化し易い性質のあることが知られている。
【０００６】このような還元性澱粉部分分解物の種々の
特性は、ＤＥの大小に依存しており、還元性澱粉部分分
解物とＤＥとの関係は極めて重要である。従来、当業界
では、この関係を断ち切ることは不可能とさえ信じられ
てきた。
【０００７】還元性澱粉部分分解物とＤＥとの関係を断
ち切る唯一の方法は、還元性澱粉部分分解物を高圧水素
添加法などによって、その還元基を糖アルコールに変換
して非還元性糖質にする方法である。しかし、この方法
は、高圧オートクレーブを必要とし、多量の水素やエネ
ルギーを消費するのみならず、防災上からも高度な安全
施設や管理を必要としている。その上、得られる還元性
澱粉部分分解物の糖アルコールは、原料の還元性澱粉部
分分解物がグルコースのみからなるのに対し、グルコー
スとソルビトールとから構成される点で異なり、それを
摂取することによって、一過性ではあるが、難消化、緩
下の症状を起こす懸念もある。従って、還元性澱粉部分
分解物の構成糖であるグルコースを変えることなく、そ
の還元力を低減若しくは消滅させる方法の確立が望まれ
る。
【０００８】これを解決するために、本発明者等は、先
に、特願平５−３４９２１６号明細書で、グルコース重
合度３以上から選ばれる１種又は２種以上の還元性澱粉
部分分解物から分子の末端にトレハロース構造を有する
非還元性糖質を生成する新規非還元性糖質生成酵素（本
酵素を、本明細書を通じて、非還元性糖質生成酵素と称
する。）を開示し、本非還元性糖質生成酵素を利用し
て、還元性澱粉部分分解物から分子末端にトレハロース
構造を有する非還元性糖質とこれを含む低還元性糖質並
びにこれら糖質からのトレハロースの製造方法を確立し
た。
【０００９】しかしながら、この方法で得られる低還元
性糖質は、原料の還元性澱粉部分分解物が比較的高分子
の場合には、その還元力をよく低減しているものの粘度
が高すぎるきらいがあり、また、原料の還元性澱粉部分
分解物が比較的低分子の場合には、還元力の低減が不充
分であることが判明した。また、このようにして得られ
た低還元性糖質にグルコアミラーゼを作用させて生成さ
れるトレハロースは、原料の還元性澱粉部分分解物から
の収量が、工業的に生産するにはあまりに低すぎること
も判明した。これらを改善するためには、還元性澱粉部
分分解物から更に低分子の非還元性糖質をより高収量で
製造する方法の確立が望まれる。
【００１０】また、本発明者等は、特願平６−７９２９
１号明細書で、分子の末端にトレハロース構造を有する
グルコース重合度３以上の非還元性糖質のトレハロース
部分とそれ以外の部分との間の結合を特異的に加水分解
する新規トレハロース遊離酵素（本酵素を、本明細書を
通じて、トレハロース遊離酵素と称する。）を開示し、
前述の非還元性糖質生成酵素と本トレハロース遊離酵素
とを併用して還元性澱粉部分分解物から比較的高収量の
トレハロースの製造方法を確立した。しかしながら、ト
レハロースを工業的に大量生産するには、その収量を更
に向上させる製造方法の確立が望まれる。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、安価で安定
供給の容易な澱粉を原料として、比較的低分子の分子末
端にトレハロース構造を有する非還元性糖質（以下、本
物質を、本明細書では、α−グリコシルトレハロースと
称する。）、トレハロースの両グルコースに重合度１若
しくは２以上のグルコースを有している非還元性糖質、
換言すれば、分子の内部にトレハロース構造を有する非
還元性糖質（以下、本物質を、本明細書では、α−グリ
コシル α−グリコシドと称する。）及びトレハロース
などの非還元性糖質、又は、これを含む低還元性糖質を
高収量で製造する方法を確立し、併せて、これら糖質の
用途を提供するものである。
【００１２】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、前記課題
を解決するために、澱粉を原料に非還元性糖質の製造方
法について鋭意研究を続けてきた。その結果、澱粉を液
化した溶液に、非還元性糖質生成酵素、又は、非還元性
糖質生成酵素及びトレハロース遊離酵素を作用させるに
際し、澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキストリ
ン・グルカノトトランスフェラーゼを併用することによ
り目的を達成し得ることを見いだし、本発明を完成し
た。
【００１３】すなわち、澱粉を比較的低ＤＥに液化した
溶液、望ましくは、ＤＥ１５未満の溶液に非還元性糖質
生成酵素を作用させてα−グリコシルトレハロース、又
は、これを含む低還元性糖質を製造するに際し、澱粉枝
切酵素及び／又はシクロマルトデキストリン・グルカノ
トランスフェラーゼをともに作用させて得られる非還元
性糖質を含む低還元性糖質は、非還元性糖質生成酵素だ
けを作用させた場合と比較して、その還元性をほとんど
増加させることなく、その分子量を著しく低減し、粘度
を低下し、その取扱いを容易にすることが判明した。更
に、このようにして得られた低還元性糖質にグルコアミ
ラーゼを作用させたところ、その構造中に含まれるトレ
ハロース含量が大幅に増加していることも判明した。ま
た、澱粉を比較的低ＤＥに液化した溶液、望ましくはＤ
Ｅ１５未満の溶液に非還元性糖質生成酵素及びトレハロ
ース遊離酵素を作用させてトレハロースを製造するに際
し、澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキストリン
・グルカノトランスフェラーゼをともに作用させて得ら
れるトレハロースは、非還元性糖質生成酵素及びトレハ
ロース遊離酵素だけを作用させた場合と比較して、その
収量が大幅に増加することが判明した。このようにして
得られる非還元性糖質やこれを含む低還元性糖質は、安
定性が高く、取扱い容易で、広範な用途に利用でき、例
えば、飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に
利用できる。
【００１４】まず、本発明で用いる非還元性糖質生成酵
素としては、澱粉を比較的低ＤＥに液化した溶液に含ま
れるグルコース重合度３以上から選ばれる１種又は２種
以上の還元性澱粉部分分解物からα−グリコシルトレハ
ロースを生成する酵素であればよく、例えば、特願平５
−３４９２１６号明細書に開示されるリゾビウム属、ア
ルスロバクター属、ブレビバクテリウム属、フラボバク
テリウム属、ミクロコッカス属、クルトバクテリウム
属、マイコバクテリウム属及びテラバクター属などに属
する微生物由来の酵素が有利に利用できる。また、必要
ならば、耐熱性の非還元性糖質生成酵素を用いることも
随意であり、例えば、本出願人が特願平６−１６６０１
１号明細書で開示したスルフォロブス属由来の耐熱性非
還元性糖質生成酵素を用いることも有利に実施できる。
また、トレハロース遊離酵素としては、澱粉を液化した
溶液に非還元性糖質生成酵素を作用させて生成されるα
−グリコシルトレハロースを、そのトレハロース部分と
それ以外の部分との間の結合を特異的に加水分解する酵
素であればよく、例えば、特願平６−７９２９１号明細
書に開示されているリゾビウム属、アルスロバクター
属、ブレビバクテリウム属、及びミクロコッカス属など
に属する微生物由来の酵素が有利に利用できる。また、
必要ならば、耐熱性のトレハロース遊離酵素を用いるこ
とも随意であり、例えば、本出願人が特願平６−１６６
１２６号明細書で開示したスルフォロブス属に属するト
レハロース遊離酵素を用いることも有利に実施できる。
微生物から非還元性糖質生成酵素及び／又はトレハロー
ス遊離酵素を調製する方法は、これら酵素の産生能を有
する微生物を培養して調製すればよい。
【００１５】微生物の培養に用いる培地は、微生物が生
育でき、非還元性糖質生成酵素及び／又はトレハロース
遊離酵素を産生し得る栄養培地であればよく、合成培地
及び天然培地のいずれでもよい。炭素源としては、微生
物が資化し得る物であればよく、例えば、グルコース、
フラクトース、ラクトース、スクロース、マンニトー
ル、ソルビトール、糖蜜、還元性澱粉部分分解物などの
糖質、また、クエン酸、コハク酸などの有機酸、又はそ
の塩も使用することができる。培地におけるこれらの炭
素源の濃度は炭素源の種類により適宜選択される。例え
ば、還元性澱粉部分分解物の場合には、通常、２０％以
下が望ましく、菌の生育及び増殖からは５％以下が好ま
しい。窒素源としては、例えば、アンモニウム塩、硝酸
塩などの無機窒素化合物及び、例えば、尿素、コーン・
スティープ・リカー、カゼイン、ペプトン、酵母エキ
ス、肉エキスなどの有機窒素含有物が用いられる。ま
た、無機成分としては、例えば、カルシウム塩、マグネ
シウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、リン酸塩、マン
ガン塩、亜鉛塩、鉄塩、銅塩、モリブデン塩、コバルト
塩などが適宜用いられる。更に、必要に応じて、アミノ
酸、ビタミンなども適宜用いられる。
【００１６】培養は、通常、温度４乃至４０℃、好まし
くは２０乃至３７℃、ｐＨ４乃至１０、好ましくは５乃
至９から選ばれる条件で好気的に行われる。また、耐熱
性酵素を産生する微生物の場合には、通常、温度４０乃
至９０℃、好ましくは５０乃至８０℃、ｐＨ２乃至１
０、好ましくはｐＨ３乃至９から選ばれる条件で行われ
る。培養時間は微生物が増殖し得る時間以上の時間であ
ればよく、好ましくは１０時間乃至１００時間である。
また、培養液の溶存酸素濃度には特に制限はないが、通
常は、０．５乃至２０ｐｐｍが好ましい。そのために、
通気量を調節したり、撹拌したり、通気に酸素を追加し
たり、また、ファーメンター内の圧力を高めるなどの手
段が採用される。また、培養方式は、回分培養又は連続
培養のいずれでもよい。
【００１７】このようにして、微生物を培養した後、酵
素を回収する。酵素活性は、培養物の菌体及び除菌液い
ずれにも認められ、菌体及び除菌液を粗酵素液として採
取することも、また、培養物全体を粗酵素液として用い
ることもできる。培養物から菌体を除去するには公知の
固液分離法が採用される。例えば、培養物そのものをそ
のまま遠心分離する方法、あるいは、プレコートフィル
ターなどを用いて濾過分離する方法、平膜、中空糸膜な
どの膜濾過により分離する方法などが適宜採用される。
除菌液をそのまま酵素液として用いることができるが、
一般的には、濃縮して用いられる。濃縮方法としては、
例えば、硫安塩析法、アセトン及びアルコール沈殿法、
平膜、中空糸膜など膜濃縮法などが採用される。
【００１８】更に、除菌液及びその濃縮物を公知の方法
により固定化することもできる。例えば、イオン交換体
への結合法、樹脂及び膜などとの共有結合・吸着法、高
分子物質を用いた包括法などが採用される。また、培養
物から分離した菌体もそのまま粗酵素として用いること
ができるが、これを固定化して用いてもよい。一例とし
て、これをアルギン酸ナトリウムと混合して、塩化カル
シウム溶液中に滴下して粒状にゲル化させて固定化す
る。この粒状化物をさらにポリエチレンイミン、グルタ
ールアルデヒドで処理して固定化してもよい。菌体から
酵素を抽出して、その抽出液を粗酵素液として用いるこ
ともできる。例えば、超音波による破砕法、ガラスビー
ズ及びアルミナによる機械的破砕法、フレンチプレスに
よる破砕法などで菌体から酵素を抽出し、遠心分離又は
膜濾過などで清澄な粗酵素液を得ることができる。
【００１９】本酵素液はそのまま用いることができる
が、公知の方法によって更に精製して利用することもで
きる。一例として、培養液の処理物を硫安塩析して濃縮
した粗酵素標品を透析後、東ソー株式会社製『ＤＥＡＥ
−トヨパール』などを用いた陰イオン交換カラムクロマ
トグラフィー、続いて、同社製『ブチルトヨパール』な
どを用いた疎水カラムクロマトグラフィー、同社製『ト
ヨパール ＨＷ−５５』などを用いたゲル濾過クロマト
グラフィーを用いて精製することにより、電気泳動的に
単一な酵素を得ることができる。
【００２０】このようにして得られる非還元性糖質生成
酵素は、一般的には、例えば、下記の理化学的性質を有
する。 （１） 作用 グルコース重合度３以上から選ばれる１種又は２種以上
の還元性澱粉部分分解物からα−グリコシルトレハロー
スを生成する。 （２） 分子量 ＳＤＳ−ゲル電気泳動法により、約７６，０００乃至８
７，０００ダルトン。 （３） 等電点 アンフォライン含有電気泳動法により、ｐＩ約３．６乃
至４．６。 （４） 至適温度 ｐＨ７．０、６０分間反応で、３５乃至４０℃付近。 （５） 至適ｐＨ ４０℃、６０分間反応で、ｐＨ約６．４乃至７．２。 （６） 温度安定性 ｐＨ７．０、６０分間保持で、３５乃至４０℃付近まで
安定。 （７） ｐＨ安定性 ２５℃、１６時間保持で、ｐＨ約５．５乃至１１．０。
【００２１】非還元性糖質生成酵素の活性測定方法は、
基質としてマルトペンタオース１．２５ｗ／ｖ％（５０
ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．０）４ｍｌに酵素液を１ｍ
ｌ加え４０℃で６０分間反応させた後、１００℃で１０
分間加熱して反応を停止させ、その反応液を正確に脱イ
オン水で１０倍に希釈し、その希釈液の還元力をソモギ
ー・ネルソン法にて測定する。対照として、あらかじめ
１００℃で１０分間加熱することにより失活させた酵素
液を用いて同様に測定する。上記の測定方法を用いて、
１分間に１μｍｏｌｅのマルトペンタオースに相当する
還元力を減少させる酵素量を１単位と定義した。
【００２２】また、前述のようにして得られるトレハロ
ース遊離酵素は、一般的には、例えば、下記の理化学的
性質を有する。 （１） 作用 α−グリコシルトレハロースのトレハロース部分とそれ
以外のグリコシル部分との間の結合を特異的に加水分解
する。 （２） 分子量 ＳＤＳ−ゲル電気泳動法により、約５７，０００乃至６
８，０００ダルトン。 （３） 等電点 アンフォライン含有電気泳動法により、ｐＩ約３．３乃
至４．６。 （４） 至適温度 ｐＨ７．０、３０分間反応で、３５乃至４５℃付近。 （５） 至適ｐＨ ４０℃、３０分間反応で、ｐＨ約６．０乃至７．５。 （６） 温度安定性 ｐＨ７．０、６０分間保持で、３０乃至４５℃付近まで
安定。 （７） ｐＨ安定性 ２５℃、１６時間保持で、ｐＨ約５．０乃至１０．０。
【００２３】トレハロース遊離酵素の活性は次のように
して測定する。基質としてマルトトリオシルトレハロー
ス（別名、α−マルトテトラオシル α−Ｄ−グルコシ
ド）１．２５ｗ／ｖ％（５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ
７．０）４ｍｌに酵素液を１ｍｌ加え４０℃で３０分間
反応させた後、ソモギー銅液を加え反応を停止させ、還
元力をソモギー・ネルソン法にて測定する。対照とし
て、あらかじめ１００℃で１０分間加熱することにより
失活させた酵素液を用いて同様に測定する。上記の測定
方法を用いて、１分間に１μｍｏｌｅのグルコースに相
当する還元力を増加させる酵素量を１単位と定義する。
【００２４】次に、本発明で用いる澱粉枝切酵素は、澱
粉を比較的低ＤＥに液化した溶液、望ましくは、ＤＥ１
５未満の液化溶液に作用し、澱粉の枝分かれ結合を加水
分解する酵素であって、公知のプルラナーゼ、イソアミ
ラーゼなどが有利に利用でき、また、市販の酵素剤を利
用することも有利に実施できる。また、シクロマルトデ
キストリン・グルカノトランスフェラーゼは、澱粉を比
較的低ＤＥに液化した溶液、望ましくは、ＤＥ１５未満
の液化溶液に作用し、澱粉糖を糖転移し、不均化（ｄｉ
ｓｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｔｉｏｎ）反応する酵素であ
って、公知のバチルス属、クレブシーラ属などに属する
微生物由来の酵素が有利に利用でき、また、市販の酵素
剤を利用することも有利に実施できる。
【００２５】また、前述の澱粉枝切酵素及び／又はシク
ロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼに
加えて、必要に応じて、他のアミラーゼ、望ましくは、
澱粉を比較的低ＤＥに液化した溶液に作用して、主とし
てグルコース重合度３以上のオリゴ糖を生成するアミラ
ーゼ、例えば、α−アミラーゼ、マルトトリオース生成
アミラーゼ、マルトテトラオース生成アミラーゼ、マル
トペンタオース生成アミラーゼ、マルトヘキサオース生
成アミラーゼ、マルトヘプタオース生成アミラーゼなど
を用いることも有利に実施できる。
【００２６】本発明で使用される澱粉は、とうもろこし
澱粉、米澱粉、小麦澱粉などの地上澱粉であっても、馬
鈴薯澱粉、甘藷澱粉、タピオカ澱粉などの地下澱粉であ
ってもよい。澱粉を液化するには、通常、澱粉を水に懸
濁した澱粉乳、望ましくは濃度１０％以上、更に望まし
くは約２０乃至５０％とし、これを加熱して機械的に液
化しても、酸又は酵素で液化してもよい。液化の程度
は、比較的低いものが適しており、望ましくはＤＥ１５
未満、更に望ましくはＤＥ１０未満のものが好適であ
る。酸で液化する場合には、例えば、塩酸、燐酸、蓚酸
などで液化し、その後、炭酸カルシウム、酸化カルシウ
ム、炭酸ナトリウムなどで必要ｐＨに中和して利用すれ
ばよい。酵素で液化する場合には、α−アミラーゼ、と
りわけ、耐熱性の液化型α−アミラーゼの使用が適して
いる。
【００２７】このようにして得られる澱粉を液化した溶
液に、非還元性糖質生成酵素を澱粉枝切酵素及び／又は
シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラー
ゼとともに作用させるか、又は、非還元性糖質生成酵素
及びトレハロース遊離酵素を澱粉枝切酵素及び／又はシ
クロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ
とともに作用させるには、これら酵素が作用し得るｐ
Ｈ、温度で行えばよく、通常、ｐＨ４乃至１０、好まし
くは、ｐＨ５乃至８、温度約１０乃至８０℃、好ましく
は、約３０乃至７０℃で行われる。また、澱粉を液化し
た溶液にこれら酵素を加える順序は問わず、いずれかの
酵素を先に加え、他の酵素をその後に加えて作用させる
ことも、また、これら酵素を同時に加えて作用させるこ
とも随意である。
【００２８】酵素の使用量は、作用条件、反応時間によ
って適宜選べばよいが、通常、基質である澱粉を液化し
た溶液に対して、固形物グラム当たり、非還元性糖質生
成酵素及びトレハロース遊離酵素の場合、それぞれ約
０．０１乃至１００単位から選ばれ、また、澱粉枝切酵
素の場合、約１乃至１０，０００単位から選ばれ、シク
ロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼの
場合、約０．０５乃至５００単位から選ばれる。このよ
うにして得られる非還元性糖質を含む低還元性糖質は、
澱粉を液化した溶液に、澱粉枝切酵素及び／又はシクロ
マルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼが非
還元性糖質生成酵素又は非還元性糖質生成酵素及びトレ
ハロース遊離酵素とともに作用するため、比較的低分子
のα−グリコシルトレハロース及び／又はα−グリコシ
ル α−グリコシドを多量に含有するか、又はトレハロ
ースを多量に含有する特長を有している。なお、α−グ
リコシル α−グリコシドは、本出願人が、特願平６−
５４３７７号明細書で開示したα−Ｄ−オリゴグルコシ
ル α−Ｄ−オリゴグルコシドを含む呼称である。
【００２９】反応液は、常法により、濾過、遠心分離な
どして不溶物を除去した後、活性炭で脱色、Ｈ型、ＯＨ
型イオン交換樹脂で脱塩して精製し、濃縮し、シラップ
状製品とする。更に、乾燥して粉末状製品にすることも
随意である。必要ならば、更に、精製、例えば、イオン
交換カラムクロマトグラフィー、活性炭カラムクロマト
グラフィー、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなど
のカラムクロマトグラフィーによる分画、アルコール及
びアセトンなど有機溶媒による分別、適度な分離性能を
有する膜による分離、更には、酵母での発酵処理、アル
カリ処理などによる残存している還元性糖質の分解除去
などの方法を１種又は２種以上組み合わせて精製するこ
とにより、最高純度の非還元性糖質製品を得ることも容
易である。
【００３０】とりわけ、工業的大量生産方法としては、
イオン交換カラムクロマトグラフィーの採用が好適であ
り、例えば、特開昭５８−２３７９９号公報、特開昭５
８−７２５９８号公報などに開示されている強酸性カチ
オン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより
夾雑糖類を除去し、目的物の含量を向上させた非還元性
糖質を有利に製造することができる。この際、固定床方
式、移動床方式、擬似移動床方式のいずれの方式を採用
することも随意である。
【００３１】このようにして得られた本発明の分子中に
トレハロース構造を有する非還元性糖質、又はこれを含
む低還元性糖質を、必要により、アミラーゼ、例えば、
α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼな
どや、又はα−グルコシダーゼで分解し、甘味性、還元
力などを調整したり、粘性を低下させたりすることも、
また、水素添加して残存する還元性糖質を糖アルコール
にして還元力を消滅せしめることなどの更なる加工処理
を施すことも随意である。
【００３２】とりわけ、本発明の分子中にトレハロース
構造を有する非還元性糖質、又はこれを含む低還元性糖
質に対して、グルコアミラーゼ又はα−グルコシダーゼ
を作用させることにより容易にトレハロースを製造する
ことができる。即ち、これらの非還元性又は低還元性糖
質にグルコアミラーゼ又はα−グルコシダーゼを作用さ
せてトレハロースとグルコースとの混合溶液とし、これ
を、前述の精製方法、例えば、イオン交換カラムクロマ
トグラフィーなどにより、グルコースを除去し、トレハ
ロース高含有画分を採取する。これを精製、濃縮して、
シラップ状製品を得ることも、更に濃縮して過飽和に
し、晶出させてトレハロース含水結晶又は無水結晶トレ
ハロースを得ることも有利に実施できる。
【００３３】トレハロース含水結晶を製造するには、例
えば、純度約６０％以上、濃度約６５乃至９０％のトレ
ハロース高含有液を助晶缶にとり、必要に応じて、０．
１乃至２０％の種晶共存下で、温度９５℃以下、望まし
くは１０乃至９０℃の範囲で、撹拌しつつ徐冷し、トレ
ハロース含水結晶を含有するマスキットを製造する。ま
た、減圧濃縮しながら晶析させる連続晶析法を採用する
ことも有利に実施できる。マスキットからトレハロース
含水結晶又はこれを含有する含蜜結晶を製造する方法
は、例えば、分蜜方法、ブロック粉砕方法、流動造粒方
法、噴霧乾燥方法など公知の方法を採用すればよい。
【００３４】分蜜方法の場合には、通常、マスキットを
バスケット型遠心分離機にかけ、トレハロース含水結晶
と蜜（母液）とを分離し、必要により、該結晶に少量の
冷水をスプレーして洗浄することも容易な方法であり、
より高純度のトレハロース含水結晶を製造するのに好適
である。噴霧乾燥方法の場合には、通常、濃度７０乃至
８５％、晶出率２０乃至６０％程度のマスキットを高圧
ポンプでノズルから噴霧し、結晶粉末が溶解しない温
度、例えば、６０乃至１００℃の熱風で乾燥し、次いで
３０乃至６０℃の温風で約１乃至２０時間熟成すれば非
吸湿性又は難吸湿性の含蜜結晶が容易に製造できる。ま
た、ブロック粉砕方法の場合には、通常、水分１０乃至
２０％、晶出率１０乃至６０％程度のマスキットを約
０．１乃至３日間静置して全体をブロック状に晶出固化
させ、これを粉砕又は切削などの方法によって粉末化し
乾燥すれば、非吸湿性又は難吸湿性の含蜜結晶が容易に
製造できる。
【００３５】また、無水結晶トレハロースを製造するに
は、トレハロース含水結晶を乾燥して変換させることも
できるが、一般的には、水分１０％未満の高濃度トレハ
ロース高含有溶液を助晶缶にとり、種晶共存下で５０乃
至１６０℃、望ましくは８０乃至１４０℃の範囲で撹拌
しつつ無水結晶トレハロースを含有するマスキットを製
造し、これを比較的高温乾燥条件下で、例えば、ブロッ
ク粉砕、流動造粒、噴霧乾燥などの方法で晶出、粉末化
して製造される。
【００３６】このようにして製造される本発明の非還元
性糖質、又はこれを含む低還元性糖質は、還元性が低く
安定であり、他の素材、特にアミノ酸、オリゴペプチ
ド、蛋白質などのアミノ酸を有する物質と混合、加工し
ても、褐変することも、異臭を発生することもなく、混
合した他の素材を損なうことも少ない。また、還元力が
低いにもかかわらず低粘度であり、平均グルコース重合
度が低いものの場合には、良質で上品な甘味を有してい
る。
【００３７】更に、アミラーゼ、例えば、すい臓由来α
−アミラーゼにより分解し、低分子非還元性オリゴ糖や
低分子マルトオリゴ糖を生成し、また、これらオリゴ糖
も、α−グルコシダーゼや小腸酵素でも容易に分解し、
グルコース及びトレハロースを生成し、更に、生成した
トレハロースはトレハラーゼにより容易にグルコースに
まで分解することから、経口摂取により、消化吸収さ
れ、カロリー源として利用される。虫歯誘発菌などによ
って、醗酵されにくく、虫歯を起こしにくい甘味料とし
ても利用できる。また、浸透圧調節性、賦形性、照り付
与性、保湿性、粘性、他の糖の晶出防止性、難醗酵性、
糊化澱粉の老化防止性などの性質を具備している。
【００３８】また、本発明のトレハロースは、経管栄養
剤、輸液剤などとして非経口的に使用され、毒性、副作
用の懸念もなく、よく代謝利用され、生体へのエネルギ
ー補給に有利に利用することができる。また、安定な甘
味料であることにより、結晶高含有製品の場合には、プ
ルラン、ヒドロキシエチルスターチ、ポリビニルピロリ
ドンなどの結合剤と併用して錠剤の糖衣剤として利用す
ることも有利に実施できる。
【００３９】さらに、本発明のトレハロースは、保湿
剤、増量剤、増粘剤などとして化粧用クリーム、ヘアリ
ンス、乳液、化粧水などに使用され、その際、トレハロ
ースとともに、例えば、プロピレングリコール、１，３
−ブチレングリコール、グリセリン、ソルビトール、ポ
リオキシエチレンオレイルアルコールなどの保湿剤と併
用することも、更には、α−グルコシル−Ｌ−アスコル
ビン酸、酵素処理ルチンなどのビタミン類を配合して、
水分保持効果に優れ、紫外線によるシミやソバカスを防
止する効果、美白効果も期待される化粧品としても有利
に実施できる。
【００４０】また、無水結晶トレハロースの場合には、
食品、医薬品、化粧品、その原材料、又は加工中間物な
どの含水物の脱水剤としても有利に利用でき、安定で高
品質の粉末、顆粒、錠剤など固状物を容易に製造するこ
とができる。
【００４１】従って、本発明の非還元性糖質、又はこれ
を含む低還元性糖質は、甘味料、呈味改良剤、品質改良
剤、安定剤、賦形剤、脱水剤などとして、飲食物、嗜好
物、飼料、餌料、化粧品、医薬品などの各種組成物に有
利に利用できる。
【００４２】本発明の非還元性糖質、又はこれを含む低
還元性糖質は、そのまま甘味付けのための調味料として
使用することができる。必要ならば、例えば、粉飴、ブ
ドウ糖、マルトース、蔗糖、異性化糖、蜂蜜、メープル
シュガー、イソマルトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、フ
ラクトオリゴ糖、ラクトスクロース、ソルビトール、マ
ルチトール、ラクチトール、ジヒドロカルコン、ステビ
オシド、α−グリコシルステビオシド、レバウディオシ
ド、グリチルリチン、Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニル
アラニンメチルエステル、サッカリン、グリシン、アラ
ニンなどのような他の甘味料の１種又は２種以上の適量
と混合して使用してもよく、また必要ならば、デキスト
リン、澱粉、乳糖などのような増量剤と混合して使用す
ることもできる。
【００４３】また、本発明の非還元性糖質、又はこれを
含む低還元性糖質は、そのままで、又は必要に応じて、
増量剤、賦形剤、結合剤などと混合して、顆粒、球状、
短棒状、板状、立方体、錠剤など各種形状に成型して使
用することも随意である。
【００４４】また、本発明の非還元性糖質、又はこれを
含む低還元性糖質は、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦
味などの他の呈味を有する各種物質とよく調和し、耐酸
性、耐熱性も大きいので、一般の飲食物の甘味付け、呈
味改良に、また品質改良などに有利に利用できる。
【００４５】例えば、アミノ酸、ペプチド類、醤油、粉
末醤油、味噌、粉末味噌、もろみ、ひしお、ふりかけ、
マヨネーズ、ドレッシング、食酢、三杯酢、粉末すし
酢、中華の素、天つゆ、麺つゆ、ソース、ケチャップ、
焼肉のタレ、カレールウ、シチューの素、スープの素、
ダシの素、核酸系調味料、複合調味料、みりん、新みり
ん、テーブルシュガー、コーヒーシュガーなど各種調味
料として有利に使用できる。
【００４６】また、例えば、せんべい、あられ、おこ
し、餅類、まんじゅう、ういろう、あん類、羊羮、水羊
羮、錦玉、ゼリー、カステラ、飴玉などの各種和菓子、
パン、ビスケット、クラッカー、クッキー、パイ、プリ
ン、バタークリーム、カスタードクリーム、シュークリ
ーム、ワッフル、スポンジケーキ、ドーナツ、チョコレ
ート、チューインガム、キャラメル、キャンディーなど
の洋菓子、アイスクリーム、シャーベットなどの氷菓、
果実のシロップ漬、氷蜜などのシロップ類、フラワーペ
ースト、ピーナッツペースト、フルーツペースト、スプ
レッドなどのペースト類、ジャム、マーマレード、シロ
ップ漬、糖果などの果実、野菜の加工食品類、福神漬、
べったら漬、千枚漬、らっきょう漬などの漬物類、たく
あん漬の素、白菜漬の素などの漬物の素類、ハム、ソー
セージなどの畜肉製品類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、
かまぼこ、ちくわ、天ぷらなどの魚肉製品、ウニ、イカ
の塩辛、酢こんぶ、さきするめ、ふぐみりん干しなどの
各種珍味類、のり、山菜、するめ、小魚、貝などで製造
されるつくだ煮類、煮豆、ポテトサラダ、こんぶ巻など
の惣菜食品、ヨーグルト、チーズなどの乳製品、魚肉、
畜肉、果実、野菜のビン詰、缶詰類、清酒、合成酒、リ
キュール、洋酒などの酒類、コーヒー、紅茶、ココア、
ジュース、炭酸飲料、乳酸飲料、乳酸菌飲料などの清涼
飲料水、プリンミックス、ホットケーキミックス、即席
しるこ、即席スープなどの即席食品、更には、離乳食、
治療食、ドリンク剤、ペプチド食品、冷凍食品、乾燥食
品などの各種飲食物への甘味付けに、呈味改良に、ま
た、品質改良などに有利に利用できる。
【００４７】また、家畜、家禽、その他蜜蜂、蚕、魚な
どの飼育動物のために飼料、餌料などの嗜好性を向上さ
せる目的で使用することもできる。その他、タバコ、練
歯磨、口紅、リップクリーム、内服液、錠剤、トロー
チ、肝油ドロップ、口中清涼剤、口中香剤、うがい剤な
ど各種固形物、ペースト状、液状などで嗜好物、化粧
品、医薬品などの各種組成物への甘味剤として、又は呈
味改良剤、矯味剤として、さらには品質改良剤、安定剤
などとして有利に利用できる。
【００４８】品質改良剤、安定剤としては、有効成分、
活性などを失い易い各種生理活性物質又はこれを含む健
康食品、医薬品などに有利に適用できる。例えば、イン
ターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフ
ェロン−γ、ツモア・ネクロシス・ファクター−α、ツ
モア・ネクロシス・ファクター−β、マクロファージ遊
走阻止因子、コロニー刺激因子、トランスファーファク
ター、インターロイキンＩＩなどのリンホカイン、イン
シュリン、成長ホルモン、プロラクチン、エリトロポエ
チン、卵細胞刺激ホルモンなどのホルモン、ＢＣＧワク
チン、日本脳炎ワクチン、はしかワクチン、ポリオ生ワ
クチン、痘苗、破傷風トキソイド、ハブ抗毒素、ヒト免
疫グロブリンなどの生物製剤、ペニシリン、エリスロマ
イシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、ス
プレプトマイシン、硫酸カナマイシンなどの抗生物質、
チアミン、リボフラビン、Ｌ−アスコルビン酸、肝油、
カロチノイド、エルゴステロール、トコフェロールなど
のビタミン、リパーゼ、エラスターゼ、ウロキナーゼ、
プロテアーゼ、β−アミラーゼ、イソアミラーゼ、グル
カナーゼ、ラクターゼなどの酵素、薬用人参エキス、ス
ッポンエキス、クロレラエキス、アロエエキス、プロポ
リスエキスなどのエキス類、ウイルス、乳酸菌、酵母な
どの生菌、ローヤルゼリーなどの各種生理活性物質も、
その有効成分、活性を失うことなく、安定で高品質の液
状、ペースト状又は固状の健康食品や医薬品などに容易
に製造できることとなる。
【００４９】以上述べたような各種組成物に非還元性糖
質、又は、これを含む低還元性糖質を含有せしめる方法
は、その製品が完成するまでの工程に含有せしめればよ
く、例えば、混和、溶解、融解、浸漬、浸透、散布、塗
布、被覆、噴霧、注入、晶出、固化など公知の方法が適
宜選ばれる。その量は、通常０．１％以上、望ましくは
１％以上含有せしめるのが好適である。
【００５０】次に実験により本発明をさらに具体的に説
明する。
【００５１】まず、新規微生物リゾビウム・スピーシー
ズ Ｍ−１１及びアルスロバクター・スピーシーズ Ｑ
３６からの非還元性糖質生成酵素について説明し、次い
で、公知微生物からの非還元性糖質生成酵素について説
明する。
【００５２】
【実験１ リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１からの
非還元性糖質生成酵素の生産】マルトース２．０ｗ／ｖ
％、ペプトン０．５ｗ／ｖ％、酵母エキス０．１ｗ／ｖ
％、リン酸二ナトリウム０．１ｗ／ｖ％、リン酸一カリ
ウム０．１ｗ／ｖ％及び水からなる液体培地をｐＨ７．
０に調整した。５００ｍｌ容三角フラスコにこの培地を
約１００ｍｌずつ入れ、オートクレーブで１２０℃で２
０分間滅菌し、冷却して、リゾビウム・スピーシーズ
Ｍ−１１（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１３０）を接種し、２７
℃、１３０ｒｐｍで２４時間培養したものを種培養液と
した。
【００５３】容量３０ｌのファーメンターに種培養の場
合と同組成の培地約２０ｌを入れて滅菌、冷却して温度
３０℃とした後、種培養液１ｗ／ｖ％を接種し、温度３
０℃、ｐＨ６．０乃至８．０に保ちつつ、約２４時間通
気撹拌培養した。培養液の本酵素活性は約１．５単位／
ｍｌであった。培養液の一部を採り遠心分離して菌体と
培養液上清とに分離し、更に菌体を５０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）で元の培養液と同じ液量の懸濁液とし
た後、菌体懸濁液と培養液上清の酵素活性を測定したと
ころ、菌体懸濁液には約０．６単位／ｍｌの酵素活性
が、また、培養液上清には約０．９単位／ｍｌの酵素活
性が認められた。
【００５４】
【実験２ 酵素の精製】実験１で得られた培養液約１８
ｌを超高圧菌体破砕装置、大日本製薬株式会社製『ミニ
ラボ』で処理し、含まれる菌体を破砕した。処理液を遠
心分離（１０，０００ｒｐｍ、３０分間）することによ
り、約１６ｌの上清を得た。その液に飽和度０．２にな
るように硫安を溶解させ、４℃、１時間放置した後、遠
心分離して上清を回収した。
【００５５】更に、その液に飽和度０．６になるように
硫安を溶解させ、４℃、２４時間放置した後、遠心分離
して硫安塩析物を回収した。得られた硫安塩析物を１０
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解させた後、同じ
緩衝液に対して２４時間透析し、遠心分離して不溶物を
除いた。その透析液（３６０ｍｌ）を２回に分けて、
『ＤＥＡＥ−トヨパール』を用いたイオン交換カラムク
ロマトグラフィー（ゲル量３００ｍｌ）を行った。
【００５６】本酵素は『ＤＥＡＥ−トヨパール』に吸着
し、食塩を含む同緩衝液でカラムから溶出した。得られ
る酵素活性画分を、２Ｍ硫安を含む同緩衝液に対して透
析し、その透析液を遠心分離して不溶物を除き、得られ
る上清を東ソー株式会社製『ブチルトヨパール ６５
０』を用いた疎水カラムクロマトグラフィー（ゲル量３
００ｍｌ）を行った。吸着した本酵素を硫安２Ｍから０
Ｍのリニアグラジエントによりカラムから溶出させ、酵
素活性画分を回収した。続いて、『トヨパールＨＷ−５
５』を用いたゲル濾過クロマトグラフィー（ゲル量３０
０ｍｌ）を行い、酵素活性画分を回収した。精製の各工
程における酵素活性量、比活性、収率を表１に示す。
【００５７】
【表１】
【００５８】表１の工程でゲル濾過溶出液として得られ
た精製酵素標品をポリアクリルアミドゲル（ゲル濃度
７．５％）を用いる電気泳動法で純度を検定したとこ
ろ、蛋白バンドは単一であることが示され、得られた酵
素標品は電気泳動的に単一な純度の高い標品であった。
【００５９】
【実験３ 酵素の性質】実験２で得られた精製酵素標品
をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（ゲル濃度１０％）
を用いる電気泳動法に供し、同時に泳動した分子量マー
カー（日本バイオ・ラッド・ラボラトリーズ株式会社
製）と比較して本酵素の分子量を測定したところ、分子
量約７７，０００乃至８７，０００ダルトンであった。
【００６０】精製酵素標品を２％アンフォライン含有ポ
リアクリルアミドゲルを用いる等電点電気泳動法に供
し、泳動後、ゲルのｐＨを測定して本酵素の等電点を求
めたところ、等電点は約３．６乃至４．６であった。
【００６１】本酵素活性に対する温度の影響、ｐＨの影
響は活性測定方法に準じて調べた。結果を図１（温度の
影響）、図２（ｐＨの影響）に示した。酵素の至適温度
は、ｐＨ７．０、６０分間反応で、４０℃付近、至適ｐ
Ｈは、４０℃、６０分間反応で、約７．０であった。本
酵素の温度安定性は、酵素溶液（５０ｍＭリン酸緩衝液
を含む、ｐＨ７．０）を各温度に６０分間保持し、水冷
した後、残存する酵素活性を測定することにより求め
た。また、ｐＨ安定性は、本酵素を各ｐＨの５０ｍＭ緩
衝液中で２５℃、１６時間保持した後、ｐＨを７に調整
し、残存する酵素活性を測定することにより求めた。そ
れぞれの結果を図３（温度安定性）、図４（ｐＨ安定
性）に示した。本酵素の温度安定性は４０℃付近まで安
定であり、ｐＨ安定性は約６乃至９であった。
【００６２】
【実験４ 非還元性糖質の調製】基質として、グルコー
ス、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオー
ス、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、又はマ
ルトヘプタオースの２０％水溶液を調製し、それぞれに
実験２で得られた精製酵素を基質固形物グラム当たり２
単位の割合で加え、４０℃、ｐＨ７．０で４８時間作用
させた後、脱塩し、和光純薬工業株式会社製『ワコービ
ーズ ＷＢ−Ｔ−３３０』を用いた高速液体クロマトグ
ラフィーで反応生成物を分析した。高速液体クロマトグ
ラフィーは、室温下で行い、溶離液として水を流速０．
５ｍｌ／分で流し、示差屈折計、東ソー株式会社製『Ｒ
Ｉ−８０１２』で分析した。その結果を表２に示す。
【００６３】
【表２】
【００６４】表２の結果から明らかなように、反応物中
には残存するそれぞれの基質と新たに生成したそれぞれ
の糖質ＰＩ、ＰＩＩ、ＰＩＩＩ、ＰＩＶ、ＰＶからな
り、それ以外の糖質はほとんど検出されない。それぞれ
の生成率はグルコース重合度３のＰＩが比較的低いもの
の、グルコース重合度４以上のＰＩＩ、ＰＩＩＩ、ＰＩ
Ｖ、ＰＶは８５％以上の高い生成率であることが判明し
た。なお、グルコース、マルトースからは、新たな糖質
を生成しないことが判明した。
【００６５】それぞれの反応物から新たに生成した糖質
を精製するため、脱色、脱塩、濃縮後、ナトリウム型強
酸性カチオン交換樹脂、東京有機化学工業株式会社製
『ＸＴ−１０１６』（架橋度４％）を用いたカラム分画
を行った。樹脂を内径２．０ｃｍ、長さ１ｍのジャケッ
ト付ステンレス製カラム３本に充填し、直列につなぎ、
カラム内温度を５５℃に維持しつつ、反応糖液を樹脂に
対して５ｖ／ｖ％加え、これに５５℃の温水をＳＶ０．
１３で流して分画し、新たに生成した糖質含量９７％以
上の高純度画分を採取した。得られた高純度画分を真空
乾燥し、それぞれ高純度糖質標品を調製した。基質原料
に対する収率は、固形物換算で、それぞれＰＩで約９
％、ＰＩＩで約６５％、ＰＩＩＩで約８２％、ＰＩＶで
約８０％、ＰＶで約７７％であった。その純度は、それ
ぞれＰＩで９７．５％、ＰＩＩで９８．６％、ＰＩＩＩ
で９９．５％、ＰＩＶで９８．４％、ＰＶで９８．４％
であった。
【００６６】またこれらの新たに生成した高純度糖質標
品の還元力をソモギー・ネルソン法で測定し、ＤＥで表
した。結果は表３にまとめた。
【００６７】
【表３】
【００６８】表３の結果から明らかなように、いずれの
標品にも僅かな還元力しか認めらなかった。その僅かな
還元力は、その標品中に微量に混入、残存している基質
由来の還元性マルトオリゴ糖に起因するものと推定さ
れ、新たに生成した糖質はいずれも実質的に非還元性で
あると判断される。
【００６９】
【実験５ メイラード反応】実験４において調製した糖
質標品、ＰＩ、ＰＩＩ、ＰＩＩＩ、ＰＩＶ、又はＰＶの
１０％とグリシン１％と、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７．０）とを含む溶液を１００℃で９０分間保ち、冷却
後、この溶液の４８０ｎｍ、１ｃｍセルにおける吸光度
を測定した。対照として、それぞれの原料であるマルト
トリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオー
ス、マルトヘキサオース、又はマルトヘプタオースを用
いて、同様に、処理し、４８０ｎｍにおける吸光度を測
定した。それらの結果を表４に示す。
【００７０】
【表４】
【００７１】表４の結果から明らかなように、新たに生
成した非還元性糖質標品、ＰＩ、ＰＩＩ、ＰＩＩＩ、Ｐ
ＩＶ、ＰＶのいずれもメイラード反応による着色度は極
めて低く、それぞれ原料の基質であるマルトオリゴ糖の
着色度の僅かに３乃至６％程度であり、本発明の新規酵
素によって生成する非還元性糖質はメイラード反応をほ
とんど示さない糖質であることが判明した。
【００７２】
【実験６ グルコアミラーゼによる酵素分解】実験４に
おいて調製した非還元性糖質標品、ＰＩ、ＰＩＩ、ＰＩ
ＩＩ、ＰＩＶ又は、ＰＶのそれぞれ５０ｍｇを、５０ｍ
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）１ｍｌに溶解し、１単位の
グルコアミラーゼ（生化学工業株式会社製）を加え、４
０℃で６時間保ち、酵素分解した後、高速液体クロマト
グラフィーで分解物を分析したところ、いずれの標品か
らも分解物としてグルコースとトレハロースのみが検出
された。検出されたグルコース含量、トレハロース含
量、その組成モル比の結果を表５に示す。
【００７３】
【表５】
【００７４】表５の結果から明らかなように、グルコア
ミラーゼにより、非還元性糖質ＰＩはグルコース１分子
とトレハロース１分子に分解され、非還元性糖質ＰＩＩ
はグルコース２分子とトレハロース１分子に分解され、
非還元性糖質ＰＩＩＩはグルコース３分子とトレハロー
ス１分子に分解され、非還元性糖質ＰＩＶはグルコース
４分子とトレハロース１分子に分解され、非還元性糖質
ＰＶはグルコース５分子とトレハロース１分子に分解さ
れることが判明した。
【００７５】また、グルコアミラーゼの反応特性を考慮
すると、これら非還元性糖質の構造はトレハロース分子
にグルコース分子がα−１，４−結合、もしくはα−
１，６−結合で結合した糖質で、それぞれ、ＰＩはトレ
ハロース１分子にグルコース１分子が結合したグルコー
ス重合度３の非還元性糖質で、ＰＩＩはトレハロース１
分子にグルコース２分子が結合したグルコース重合度４
の非還元性糖質で、ＰＩＩＩはトレハロース１分子にグ
ルコース３分子が結合したグルコース重合度５の非還元
性糖質で、ＰＩＶはトレハロース１分子にグルコース４
分子が結合したグルコース重合度６の非還元性糖質で、
ＰＶはトレハロース１分子にグルコース５分子が結合し
たグルコース重合度７の非還元性糖質であると判断され
る。なお、同様に、非還元性糖質標品、ＰＩ、ＰＩＩ、
ＰＩＩＩ、ＰＩＶ、又はＰＶにβ−アミラーゼを作用さ
せたところ、非還元性糖質ＰＩ、ＰＩＩは分解されず、
ＰＩＩＩはマルトースの１分子とＰＩの１分子に分解さ
れ、ＰＩＶはマルトースの１分子とＰＩＩの１分子に分
解され、ＰＶはマルトースの２分子とＰＩの１分子に分
解されることが判明した。
【００７６】以上の結果から、本発明の非還元性糖質生
成酵素による反応は、基質の低分子化及び高分子化を伴
わない、換言すれば、グルコース重合度の変化を伴わな
い、分子内変換反応と判断され、また、この非還元性糖
質生成酵素によって生成した非還元性糖質、ＰＩ、ＰＩ
Ｉ、ＰＩＩＩ、ＰＩＶ及びＰＶは、それぞれ、α−グル
コシルトレハロース、α−マルトシルトレハロース、α
−マルトトリオシルトレハロース、α−マルトテトラオ
シルトレハロース及びα−マルトペンタオシルトレハロ
ースで示されるα−グリコシルトレハロース（Ｇn−
Ｔ：但し、 Ｇはグルコース残基を意味し、ｎは１以上
の整数を意味し、Ｔはα，α−トレハロースを意味す
る。）であると判断される。
【００７７】
【実験７ 各種の酵素による分解】実験４において調製
した非還元性糖質標品、ＰＩ、ＰＩＩ、ＰＩＩＩ、ＰＩ
Ｖ、又はＰＶのそれぞれを基質として、ブタすい臓由来
α−アミラーゼ（シグマ社販売）、コメ由来α−グルコ
シダーゼ（同社販売）、又はラット小腸アセトン粉末酵
素（同社販売）のそれぞれに作用させた後、分解物の糖
組成を高速液体クロマトグラフィーで分析した。α−ア
ミラーゼの反応は、それぞれの基質１０ｍｇを、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．９）１ｍｌに溶解し、これ
に、酵素活性１単位加え、３７℃で１８時間保って行っ
た。α−グルコシダーゼの反応は、５０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ４．０）を用いた以外、α−アミラーゼの場合と
同様の条件で行った。ラット小腸アセトン粉末酵素の場
合も、５０ｍＭマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）を用い
た以外、α−アミラーゼの場合と同様の条件で行った。
α−アミラーゼによる分解物の糖組成を以下の表６に、
α−グルコシダーゼ及びラット小腸アセトン粉末酵素に
よる分解物の糖組成を以下の表７、表８に示す。
【００７８】
【表６】
【００７９】
【表７】
【００８０】
【表８】
【００８１】表６の結果から明らかなように、糖質標
品、ＰＩ及びＰＩＩは、α−アミラーゼによりほとんど
分解されないものの、糖質標品、ＰＩＩＩ、ＰＩＶ、及
びＰＶはα−アミラーゼにより低分子のオリゴ糖、Ｐ
Ｉ、ＰＩＩ、マルトトリオース、マルトース及びグルコ
ースにまで分解されることが判明した。
【００８２】また、表７、表８の結果から明らかなよう
に、糖質標品、ＰＩ、ＰＩＩ、ＰＩＩＩ、ＰＩＶ、ＰＶ
いずれもα−グルコシダーゼ及びラット小腸アセトン粉
末酵素により、実験６のグルコアミラーゼの場合と同様
に、グルコースとトレハロースにまで分解されることが
判明した。
【００８３】また、同様にα−グルコシダーゼ及びラッ
ト小腸アセトン粉末酵素によって分解されたそれぞれの
反応物に、更に、１単位のブタ腎臓由来トレハラーゼ
（シグマ社販売）を加え、ｐＨ５．７、３７℃で１８時
間作用させ、高速液体クロマトグラフィー法で糖組成を
分析したところ、糖質標品、ＰＩ、ＰＩＩ、ＰＩＩＩ、
ＰＩＶ、ＰＶいずれの場合も、α−グルコシダーゼ及び
ラット小腸アセトン粉末酵素により生成したトレハロー
スはトレハラーゼによりグルコースにまで分解すること
が判明した。
【００８４】上述のように、 （１） 非還元性糖質生成酵素は、グルコース重合度３
以上から選ばれる１種又は２種以上の還元性澱粉部分分
解物から、そのグルコース重合度を変化することなく、
α−グリコシルトレハロースを生成している。 （２） 非還元性糖質ＰＶは、α−アミラーゼにより、
主に非還元性糖質ＰＩＩとマルトトリオースを生じ、非
還元性糖質ＰＩＩは、グルコアミラーゼにより、トレハ
ロース１分子とグルコース２分子を生じている。 これらの結果から、本発明の非還元性糖質生成酵素は、
還元性澱粉部分分解物の還元性末端を非還元性のトレハ
ロース構造に分子内変換する全く新しい作用機作の酵素
であると判断される。
【００８５】
【実験８ 急性毒性】７週齢のｄｄ系マウスを使用し
て、実験４において調製した非還元性糖質標品、ＰＩ、
ＰＩＩ、ＰＩＩＩ、ＰＩＶ、及びＰＶを経口投与して急
性毒性試験を行った。その結果、これら非還元性糖質は
いずれも低毒性の物質で、投与可能な最大投与量におい
ても死亡例は認められなかった。従って、正確な値とは
いえないが、それらのＬＤ50値は、いずれも５０ｇ／ｋ
ｇ以上であった。
【００８６】
【実験９ アルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６か
らの非還元性糖質生成酵素の生産】リゾビウム・スピー
シーズ Ｍ−１１（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１３０）に代え
て、アルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６（ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−４３１６）を用いた以外は、実験１と同様に
ファーメンターで約７２時間培養した。培養液の非還元
性糖質生成酵素の酵素活性は、約１．２単位／ｍｌであ
った。実験１と同様にして菌体懸濁液と培養液上清の酵
素活性を測定したところ、それぞれ約０．５単位／ｍｌ
及び約０．７単位／ｍｌであった。
【００８７】
【実験１０ 酵素の精製】実験９の方法で得られた培養
液約１８ｌを用いて、実験２と同様に精製した。精製の
各工程結果は表９にまとめた。
【００８８】
【表９】
【００８９】表９の工程で、ゲル濾過溶出液として得ら
れた精製酵素標品を、実験２の場合と同様に電気泳動法
で純度を検定したところ、蛋白バンドは単一であること
が示され、得られた酵素標品は電気泳動的に単一な純度
の高い標品であった。
【００９０】
【実験１１ 酵素の性質】実験１０で得られた精製酵素
標品を、実験３の場合と同様に、ＳＤＳ−ポリアクリル
アミドゲル電気泳動法で分子量を測定したところ、約７
６，０００乃至８６，０００ダルトンであった。また、
本精製酵素標品の等電点を実験３の場合と同様に等電点
電気泳動法で求めたところ、ｐＩ約３．６乃至４．６で
あった。また、本酵素活性に対する温度の影響、ｐＨの
影響、及び本酵素の温度安定性、ｐＨ安定性について、
実験３の場合と同様にして求めた。結果は、温度の影響
を図５に、ｐＨの影響を図６に、温度安定性を図７に、
ｐＨ安定性を図８に示した。
【００９１】図から明らかなように酵素の至適温度は４
０℃付近、至適ｐＨは約６．５乃至７．０である。温度
安定性は４０℃付近までであり、ｐＨ安定性は約６．０
乃至９．５である。
【００９２】
【実験１２ 非還元性糖質の調製】実験１０で得られた
精製酵素標品を用いて、実験４及び実験６の方法に従っ
て、非還元性糖質の調製とその構造確認の実験を行った
ところ、リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１由来の非
還元性糖質生成酵素の場合と同様に、グルコース重合度
３以上から選ばれる１種又は２種以上の還元性澱粉部分
分解物からα−グリコシルトレハロースを生成すること
が判明した。
【００９３】
【実験１３ 公知微生物からの非還元性糖質生成酵素の
生産とその性質】公知微生物のうち、本発明の非還元性
糖質生成酵素産生能の確認された表１０に示す特定の微
生物を、マイコバクテリウム・スメグマチス（Ｍｙｃｏ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）ＡＴＣＣ１
９４２０の場合に３７℃で培養した以外は、実験１の場
合と同様にファーメンターで２７℃で７２時間培養し
た。それぞれの培養液約１８ｌを用いて、実験２の場合
と同様に、培養液を破砕装置にかけ、その上清を硫安塩
析、透析し、更にイオン交換カラムにかけ、部分精製酵
素標品を得、その性質を調べた。結果を表１０にまとめ
た。
【００９４】
【表１０】
【００９５】また、これら公知菌由来の部分精製酵素を
用いて、実験１２の方法に従って、非還元性糖質の調製
とその構造確認を行ったところ、いずれの酵素もリゾビ
ウム・スピーシーズ Ｍ−１１由来の非還元性糖質生成
酵素の場合と同様に、グルコース重合度３以上から選ば
れる１種又は２種以上の還元性澱粉部分分解物からα−
グリコシルトレハロースを生成することが判明した。
【００９６】次に、新規微生物リゾビウム・スピーシー
ズ Ｍ−１１及びアルスロバクター・スピーシーズ Ｑ
３６からのトレハロース遊離酵素について説明し、次い
で、公知微生物からのトレハロース遊離酵素について説
明する。
【００９７】
【実験１４ リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１から
のトレハロース遊離酵素の生産】澱粉部分分解物、松谷
化学工業株式会社製『パインデックス＃４』２．０ｗ／
ｖ％、ペプトン０．５ｗ／ｖ％、酵母エキス０．１ｗ／
ｖ％、リン酸二ナトリウム０．１ｗ／ｖ％、リン酸一カ
リウム０．１ｗ／ｖ％及び水からなる液体培地をｐＨ
７．０に調整した。５００ｍｌ容三角フラスコにこの培
地を約１００ｍｌずつ入れ、オートクレーブで１２０℃
で２０分間滅菌し、冷却して、リゾビウム・スピーシー
ズ Ｍ−１１（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１３０）を接種し、
２７℃、１３０ｒｐｍで２４時間培養したものを種培養
液とした。
【００９８】容量３０ｌのファーメンターに種培養の場
合と同組成の培地約２０ｌを入れて殺菌、冷却して温度
２７℃とした後、種培養液１ｗ／ｖを接種し、温度２７
℃、ｐＨは６．０乃至８．０に保ちつつ、約７２時間通
気撹拌培養した。
【００９９】培養液の非還元性糖質生成酵素の酵素活性
は約１．５単位／ｍｌで、本発明のトレハロース遊離酵
素の酵素活性は約２単位／ｍｌであった。培養液の一部
を採り遠心分離して菌体と培養液上清とに分離し、更に
菌体を５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で元の培養
液と同じ液量の懸濁液とした後、菌体懸濁液と培養上清
との酵素活性を測定したところ、菌体懸濁液には、非還
元性糖質生成酵素の酵素活性が約０．６単位／ｍｌ、ト
レハロース遊離酵素の酵素活性が約０．８単位／ｍｌ認
められ、培養上清には、非還元性糖質生成酵素の酵素活
性が約０．９単位／ｍｌ、トレハロース遊離酵素の酵素
活性が約１．２単位／ｍｌ認められた。
【０１００】
【実験１５ 酵素の精製】実験１４の方法で得られた培
養液約１８ｌを超高圧菌体破砕装置『ミニラボ』で処理
し、含まれる菌体を破砕した。処理液を遠心分離（１
０，０００ｒｐｍ、３０分間）することにより、約１６
ｌの遠心上清液を得た。その液に飽和度０．２になるよ
うに硫安を加え溶解させ、４℃、１時間放置した後、遠
心分離（１０，０００ｒｐｍ、３０分間）することによ
り上清を回収した。
【０１０１】更に、その液に硫安を飽和度０．６になる
ように溶解させ、４℃、２４時間放置した後、遠心分離
して硫安塩析物を回収した。得られた硫安塩析物を１０
ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に溶解させた後、同じ
緩衝液に対して２４時間透析し、遠心分離し、不溶物を
除いた。その透析液（３６０ｍｌ）を２回に分けて、
『ＤＥＡＥ−トヨパール』を用いたイオン交換カラムク
ロマトグラフィー（ゲル量３００ｍｌ）を行った。
【０１０２】本発明のトレハロース遊離酵素、非還元性
糖質生成酵素とも『ＤＥＡＥ−トヨパール』に吸着し、
食塩を含む同緩衝液でカラムから異なる食塩濃度におい
てそれぞれ溶出した。『ＤＥＡＥ−トヨパール』からの
溶出パターンを図９に示す。非還元性糖質生成酵素は食
塩濃度約０．２Ｍで、トレハロース遊離酵素は食塩濃度
約０．３Ｍで溶出し、それぞれの酵素活性画分を回収
し、以下、両酵素を別々に精製した。
【０１０３】非還元性糖質生成酵素活性画分を２Ｍ硫安
を含む同緩衝液に対して透析し、その透析液を遠心分離
し不溶物を除き、得られる上清を『ブチルトヨパール
６５０』を用いた疎水カラムクロマトグラフィー（ゲル
量３００ｍｌ）を行った。吸着した本酵素を２Ｍから０
Ｍ硫安のリニアグラジエントでカラムより溶出させ、酵
素活性画分を回収した。続いて、『トヨパール ＨＷ−
５５』を用いたゲル濾過クロマトグラフィー（ゲル量３
００ｍｌ）を行い、非還元性糖質生成酵素活性画分を回
収した。
【０１０４】トレハロース遊離酵素の精製は、『ＤＥＡ
Ｅ−トヨパール』から溶出したトレハロース遊離酵素活
性画分を用いて、上記の非還元性糖質生成酵素の精製方
法と同様に、２Ｍ硫安を含む緩衝液に対して透析し、次
いで疎水カラムクロマトグラフィー、ゲル瀘過クロマト
グラフィーを行った。
【０１０５】精製の各工程における酵素活性量、比活
性、収率を、非還元性糖質生成酵素の場合は表１１に、
本発明のトレハロース遊離酵素の場合は表１２に示す。
【０１０６】
【表１１】
【０１０７】
【表１２】
【０１０８】表１１及び表１２の工程でそれぞれゲル瀘
過溶出液として得られた、精製非還元性糖質生成酵素標
品及び精製トレハロース遊離酵素標品をポリアクリルア
ミドゲル（ゲル濃度７．５％）を用いる電気泳動法で純
度を検定したところ、蛋白バンドは単一であることが示
され、得られた酵素標品は電気泳動的に単一な純度の高
い標品であった。
【０１０９】
【実験１６ トレハロース遊離酵素の性質】実験１５の
方法で得られた精製トレハロース遊離酵素標品をＳＤＳ
−ポリアクリルアミドゲル（ゲル濃度１０％）を用いる
電気泳動法に供し、同時に泳動した分子量マーカー（日
本バイオ・ラッド・ラボラトリーズ株式会社製）と比較
して本酵素の分子量を測定したところ、分子量約５８，
０００乃至６８，０００ダルトンであった。
【０１１０】精製酵素標品をポリアクリルアミドゲルを
用いる等電点電気泳動法に供し、泳動後、ゲルのｐＨを
測定して本酵素の等電点を求めたところ、等電点は約
３．３乃至４．３であった。
【０１１１】本酵素活性に対する温度の影響、ｐＨの影
響を活性測定方法に準じて調べた。結果を図１０（温度
の影響）、図１１（ｐＨの影響）に示した。酵素の至適
温度は、ｐＨ７．０、３０分間反応で、４５℃付近、至
適ｐＨは、４０℃、３０分間反応で、約６．０乃至７．
５であった。本酵素の温度安定性は、酵素溶液（５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液を含む、ｐＨ７．０）を各温度に６０分
間保持し、水冷した後、残存する酵素活性を測定するこ
とにより求めた。また、ｐＨ安定性は、本酵素を各ｐＨ
の５０ｍＭ緩衝液中で２５℃、１６時間保持した後、ｐ
Ｈを７に調整し、残存する酵素活性を測定することによ
り求めた。それぞれの結果を図１２（温度安定性）、図
１３（ｐＨ安定性）に示した。本酵素の熱安定性は約４
０℃付近までであり、ｐＨ安定性は約５乃至１０であっ
た。
【０１１２】
【実験１７ α−グリコシルトレハロースからのトレハ
ロースの調製】基質として用いるα−グリコシルトレハ
ロースは、特願平５−３４９２１６号明細書に記載する
方法に従って調製した。即ち、マルトトリオース、マル
トテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオ
ース及びマルトヘプタオースから選ばれる還元性澱粉部
分分解物の２０％水溶液に実験１５の方法で得られた精
製非還元性糖質生成酵素標品を基質固形物グラム当りそ
れぞれ２単位の割合で加え、４０℃、ｐＨ７．０で４８
時間作用させた後、常法に従って、加熱失活、瀘過、脱
色、脱塩、濃縮し、ナトリウム型強酸性カチオン交換樹
脂『ＸＴ−１０１６』を用いたイオン交換カラムクロマ
トグラフィーを行った。樹脂を内径２．０ｃｍ、長さ１
ｍのジャケット付ステンレス製カラム３本に充填し、直
列につなぎ、カラム内温度を５５℃に維持しつつ、反応
糖液を樹脂に対して５ｖ／ｖ％加え、これに５５℃の温
水をＳＶ０．１３で流して分画し、末端にトレハロース
構造を有するグルコース重合度が３以上の非還元性糖質
の高純度標品を調製した。得られた高純度標品のうち、
グルコシルトレハロース標品の純度は９７．６％で、マ
ルトシルトレハロース標品の純度は９８．６％で、マル
トトリオシルトレハロース標品の純度は９９．６％で、
マルトテトラオシルトレハロース標品の純度は９８．３
％で、マルトペンタオシルトレハロース標品の純度は９
８．１％であった。
【０１１３】上記５種の非還元性糖質（α−グリコシル
トレハロース）の２０％水溶液を調製し、それぞれに実
験１５で得られた精製トレハロース遊離酵素を基質固形
物グラム当り２単位の割合で加え、４０℃、ｐＨ７．０
で４８時間作用させた後、脱塩し、『ワコービーズ Ｗ
Ｂ−Ｔ−３３０』を用いた高速液体クロマトグラフィー
で反応生成物を分析した。対照として、マルトトリオー
ス、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルト
ヘキサオース、マルトヘプタオースに精製トレハロース
遊離酵素を同様に作用させ、高速液体クロマトグラフィ
ーで分析した。それらの結果を表１３に示す。
【０１１４】
【表１３】
【０１１５】表１３の結果から明らかなように、 （１） トレハロース遊離酵素は、α−グリコシルトレ
ハロースのトレハロース部分とグリコシル部分との間の
結合を特異的に加水分解し、トレハロースとグルコース
重合度が１以上の還元性糖質とを生成する。 （２） マルトオリゴ糖は、トレハロース遊離酵素によ
って全く作用をうけない。 これらの結果から、本発明のトレハロース遊離酵素は、
α−グリコシルトレハロースのトレハロース部分とその
他のグリコシル部分との間の結合を極めて特異的に加水
分解し、トレハロースを遊離する全く新しい作用機構の
酵素であると判断される。
【０１１６】次いで、それぞれの反応物からトレハロー
スを精製するため、脱色、脱塩、濃縮し、ナトリウム型
強酸性カチオン交換樹脂『ＸＴ−１０１６』を用いたカ
ラム分画を行い、トレハロース含量９７％以上の高純度
画分を採取した。得られた高純度画分を濃縮して濃度約
６５％にし、２５℃で２日間放置して含水トレハロース
結晶を晶出させ、分蜜し、真空乾燥して、トレハロース
含量９９％以上の高純度標品を調製した。原料基質に対
するそれぞれの収率は、固形物換算で、グルコシルトレ
ハロースから９．５％、マルトシルトレハロースから１
４．９％、マルトトリオシルトレハロースから１６．０
％、マルトテトラオシルトレハロースから１８．５％、
マルトペンタオシルトレハロースから１７．７％であっ
た。得られたそれぞれの高純度トレハロース標品用い
て、市販の試薬トレハロース（和光純薬工業株式会社販
売）を標準品として、融点、融解熱、比旋光度、赤外線
吸収スペクトル、粉末Ｘ線回折パターン及びブタ腎臓由
来トレハラーゼ（シグマ社製）での分解性について比較
したところ、調製したすべての高純度トレハロース標品
は、融点９７．０±０．５℃、融解熱５７．８±１．２
ＫＪ／ｍｏｌｅ、比旋光度＋１８２±１．１°で、試薬
トレハロースの実測値とよく一致し、また、赤外線吸収
スペクトル及び粉末Ｘ線回折パターンについても、試薬
トレハロースのスペクトル又はパターンとよく一致し
た。更に、ブタ腎臓由来トレハラーゼ（シグマ社製）に
よって、高純度トレハロース標品は試薬トレハロースと
同様にグルコースに分解された。以上の結果から明らか
なように、α−グリコシルトレハロースに本発明のトレ
ハロース遊離酵素を作用させ生成した糖質はトレハロー
スであると確認された。
【０１１７】
【実験１８ 還元性澱粉部分分解物からのトレハロース
の調製】５％ワキシーコーンスターチ懸濁液を加熱糊化
させた後、ｐＨ４．５、温度５０℃に調整し、これにイ
ソアミラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を澱粉
グラム当り４，０００単位の割合になるように加え、２
０時間反応させた。その反応液をオートクレーブ（１２
０℃、１０分間）し、次いで６０℃に冷却し、これを東
ソー株式会社製『トヨパール ＨＷ−５０Ｓ』を用いた
ゲル瀘過クロマトグラフィー（ゲル量７５０ｍｌ）でグ
ルコース重合度３５乃至１０の還元性澱粉部分分解物を
調製した。
【０１１８】得られた還元性澱粉部分分解物、又はグル
コース重合度３のマルトトリオースを、１０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）で１％濃度に調整し、これに実験
１５の方法で調製した精製非還元性糖質生成酵素標品及
び精製トレハロース遊離酵素標品をそれぞれ基質固形物
グラム当り４単位の割合で加え、４０℃で２４時間作用
させた後、一部を採り、脱塩し、高速液体クロマトグラ
フィーで反応生成物を分析した。
【０１１９】残りの反応液は、更に、５０℃、ｐＨ４．
５に調整した後、グルコアミラーゼ（生化学工業株式会
社製）を基質固形物グラム当り５０単位の割合で加え、
２４時間作用させ、同様に脱塩し、高速液体クロマトグ
ラフィーで反応生成物を分析した。それらの結果を表１
４に示す。
【０１２０】
【表１４】
【０１２１】表１４に示すように、非還元性糖質生成酵
素及びトレハロース遊離酵素を作用させた後のトレハロ
ース生成率は、グルコース重合度３のマルトトリオース
では４．２％と低い値であったが、グルコース重合度１
０乃至３４．１の澱粉部分分解物では６６．１乃至８
０．８％の高い値が得られた。また、原料の還元性澱粉
部分分解物のグルコース重合度が高い程、得られるトレ
ハロース純度が高いことも判明した。更に、該両酵素を
作用させた反応液にグルコアミラーゼを作用させ、残存
するグルコース重合度が３以上のα−グリコシルトレハ
ロースをトレハロースとグルコースとに分解することに
より、生成するトレハロース純度がより高まることも判
明した。
【０１２２】
【実験１９ メイラード反応】実験１７の方法で得られ
た高純度トレハロース標品（純度９９．５％）の１０％
とグリシン１％と、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．
０）とを含む溶液を１００℃で９０分間保ち、冷却後、
この溶液の４８０ｎｍ、１ｃｍセルにおける吸光度を測
定した。対照として、グルコース、マルトースを用い
て、同様に処理し、４８０ｎｍにおける吸光度を測定し
た。結果を表１５に示す。
【０１２３】
【表１５】
【０１２４】表１５の結果から明らかなように、トレハ
ロース標品は、メイラード反応による着色度は僅かであ
り、グルコースやマルトースの着色度の僅か０．４乃至
０．６％程度であり、本発明のトレハロース標品はメイ
ラード反応をほとんど示さない糖質であることが判明し
た。従って、本糖質は、アミノ酸と混合しても、アミノ
酸を損なうことが少ない糖質である。
【０１２５】
【実験２０ 生体内での利用試験】厚治等が、『臨床栄
養』、第４１巻、第２号、第２００乃至２０８頁（１９
７２年）で報告している方法に準じて、実験１７の方法
で得られた高純度トレハロース標品（純度９９．５％）
３０ｇを２０ｗ／ｖ％水溶液とし、これをボランティア
６名（健康な２６才、２７才、２８才、２９才、３０
才、３１才の男性）にそれぞれ経口投与し、経時的に採
血して、血糖値及びインスリン値を測定した。対照とし
ては、グルコースを用いた。その結果、トレハロース
は、グルコースの場合と同様の挙動を示し、血糖値、イ
ンスリン値ともに、投与後、約０．５乃至１時間で最大
値を示した。トレハロースは、容易に消化吸収、代謝、
利用されて、エネルギー源になることが判明した。
【０１２６】
【実験２１ 急性毒性試験】マウスを使用して、実験１
７の方法で得られた高純度トレハロース標品（純度９
９．５％）を経口投与して急性毒性試験を行った。その
結果、トレハロースは低毒性の物質で、投与可能な最大
投与量においても死亡例は認められなかった。従って、
正確な値とはいえないが、そのＬＤ５０値は、５０ｇ／
ｋｇ以上であった。
【０１２７】
【実験２２ アルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６
からのトレハロース遊離酵素の生産】リゾビウム・スピ
ーシーズ Ｍ−１１（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１３０）に代
えて、アルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−４３１６）を用いた以外は、実験１４と同
様に、ファーメンターで約７２時間培養した。培養液の
非還元性糖質生成酵素の酵素活性は約１．３単位／ｍｌ
で、本発明のトレハロース遊離酵素の酵素活性は約１．
８単位／ｍｌであった。実験１４と同様にして菌体懸濁
液と培養上清との酵素活性を測定したところ、菌体懸濁
液には、非還元性糖質生成酵素の酵素活性が約０．５単
位／ｍｌ、トレハロース遊離酵素の酵素活性が約０．５
単位／ｍｌ認められ、培養上清には、非還元性糖質生成
酵素の酵素活性が約０．８単位／ｍｌ、トレハロース遊
離酵素の酵素活性が約１．３単位／ｍｌ認められた。
【０１２８】
【実験２３ 酵素の精製】実験２２の方法で得られた培
養液約１８ｌを用いて、実験１５と同様の方法で精製し
た。精製の各工程結果は非還元性糖質生成酵素の場合は
表１６に、トレハロース遊離酵素の場合は表１７にまと
めた。
【０１２９】
【表１６】
【０１３０】
【表１７】
【０１３１】表１６及び表１７の工程で、それぞれゲル
瀘過溶出液として得られた精製非還元性糖質生成酵素及
び精製トレハロース遊離酵素を、実験１５の場合と同様
に電気泳動法で純度を検定したところ、蛋白バンドは単
一であることが示され、得られた両精製酵素は電気泳動
的に単一な純度の高い標品であった。
【０１３２】
【実験２４ 酵素の性質】実験２３の方法で得られた精
製トレハロース遊離酵素を、実験１６の場合と同様にＳ
ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法で分子量を測
定したところ、約５７，０００乃至６７，０００ダルト
ンであった。また、本酵素の等電点を実験３の場合と同
様に等電点電気泳動法で求めたところ、等電点は３．６
乃至４．６であった。また、本酵素活性に対する温度の
影響、ｐＨの影響、及び本酵素の温度安定性、ｐＨ安定
性について、実験１６の場合と同様にして求めた。結果
は、温度の影響を図１４に、ｐＨの影響を図１５に、温
度安定性を図１６に、ｐＨ安定性を図１７に示した。
【０１３３】図から明らかなように酵素の至適温度は４
５℃付近、至適ｐＨは約６．０乃至７．５である。温度
安定性は４５℃付近までであり、ｐＨ安定性は約５．０
乃至１０．０である。
【０１３４】
【実験２５ α−グリコシルトレハロースからのトレハ
ロースの調製】実験２３の方法で得られた精製酵素を用
いて、実験１７の方法に従って、グルコース重合度が３
以上のα−グリコシルトレハロースからのトレハロース
の調製の実験を行ったところ、リゾビウム・スピーシー
ズ Ｍ−１１由来のトレハロース遊離酵素の場合と同様
に、α−グリコシルトレハロースからトレハロースを遊
離することが判明した。
【０１３５】
【実験２６ 公知微生物からのトレハロース遊離酵素の
生産とその性質】公知微生物のうち、本発明のトレハロ
ース遊離酵素産生能の確認されたブレビバクテリウム・
ヘロボルムＡＴＣＣ１１８２２及びミクロコッカス・ロ
ゼウスＡＴＣＣ１８６を、実験１４の場合と同様にファ
ーメンターで２７℃で７２時間培養した。それぞれの培
養液約１８ｌを用いて、実験１５の場合と同様に、培養
液を破砕装置で処理し、その遠心上清を回収し、続い
て、硫安塩析、透析、イオン交換カラムクロマトグラフ
ィーし、得られた部分精製酵素標品の性質を調べた。こ
れらの結果を、前述のリゾビウム・スピーシーズ Ｍ−
１１及びアルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６の場
合とともに表１８にまとめた。
【０１３６】
【表１８】
【０１３７】また、これらの公知微生物由来の部分精製
酵素を用いて、実験２５の方法に従って、グルコース重
合度が３以上のα−グリコシルトレハロースからのトレ
ハロースの調製の実験を行ったところ、リゾビウム・ス
ピーシーズ Ｍ−１１由来のトレハロース遊離酵素の場
合と同様に、α−グリコシルトレハロースからトレハロ
ースを遊離することが判明した。
【０１３８】
【実験２７ トレハロース高含有糖質を製造するための
澱粉の液化程度と使用酵素の影響】澱粉からトレハロー
ス高含有糖質を製造するために、澱粉の液化程度と使用
する酵素の組合わせの影響を調べた。濃度２０％のとう
もろこし澱粉乳に炭酸カルシウムを０．１％加えてｐＨ
６．５に調整した後、これにα−アミラーゼ、ノボ社販
売『ターマミール』を澱粉当たり０．１乃至２．０％を
加え、９５℃で１５分間反応させ、１２０℃にオートク
レーブして１０分間保って、ＤＥ２．５乃至２０．５の
液化溶液とし、これを急冷したものに実験２の方法で調
製した精製非還元性糖質生成酵素を澱粉グラム当たり５
単位及び実験１５の方法で調製した精製トレハロース遊
離酵素を澱粉グラム当たり１０単位加え、更に澱粉枝切
酵素イソアミラーゼ（株式会社林原生物化学研究所販
売）を澱粉グラム当たり５００単位及び／又はシクロマ
ルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（株式
会社林原生物化学研究所販売）を澱粉グラム当たり５単
位加えてｐＨ６．０、４５℃で２４時間反応させた。本
反応液を９５℃、１０分間加熱した後、冷却し、次い
で、グルコアミラーゼを澱粉グラム当たり１０単位加え
てｐＨ５．０で１０時間反応させた。本反応液を高速液
体クロマトグラフィーで分析し、糖質中のトレハロース
含量（％）を求めた。対照として、澱粉液化溶液に非還
元性糖質生成酵素及びトレハロース遊離酵素だけを同様
に作用させ、同様に、グルコアミラーゼを作用させて、
高速液体クロマトグラフィーで分析した。結果は、表１
９に示す。
【０１３９】
【表１９】
【０１４０】表１９の結果から明かなように、澱粉から
トレハロース高含有糖質を製造するには、その液化の程
度は比較的低いものが適しており、望ましくは、ＤＥ１
５未満、更に望ましくはＤＥ１０未満が好適であること
が判明した。また、それに使用する酵素は、非還元性糖
質生成酵素及びトレハロース遊離酵素だけを作用させる
よりも、非還元性糖質生成酵素及びトレハロース遊離酵
素を澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキストリン
・グルカノトランスフェラーゼとともに作用させた方
が、澱粉からのトレハロース収量を約２乃至４倍にも向
上することとなり、澱粉からトレハロースを工業的に大
量生産する上で、極めて有利であることが判明した。
【０１４１】以下、本発明の非還元性糖質、それを含む
低還元性糖質及びトレハロースの製造方法を実施例Ａ
で、非還元性糖質、それを含む低還元性糖質及び／又は
トレハロースを含有せしめた組成物を実施例Ｂで示す。
【０１４２】
【実施例Ａ−１】馬鈴薯澱粉を濃度約２０％の澱粉乳と
し、これに蓚酸を０．３％加えてオートクレーブし、冷
却し、炭酸カルシウムでｐＨ６．５に中和して、ＤＥ約
１２の液化溶液を得た。本液化溶液に実験２の方法で得
た精製非還元性糖質生成酵素を澱粉グラム当たり２単位
及びイソアミラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）
澱粉グラム当たり３００単位加え、温度４５℃で２４時
間反応させた、本反応液を９５℃に加熱して酵素を失活
させた後、冷却し、濾過して得られる濾液を、常法に従
って、活性炭で脱色し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂
により脱塩して精製し、更に濃縮して濃度約７０％のシ
ラップを固形物当たり約９０％の収率で得た。本品は、
α−グリコシルトレハロースを含むＤＥ約８の低還元性
糖質で、温和で上品な甘味、比較的低粘度、適度な保湿
性を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定剤、
賦形剤などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各
種組成物に有利に利用できる。
【０１４３】
【実施例Ａ−２】タピオカ澱粉を濃度約２５％澱粉乳と
し、これにα−アミラーゼ、ナガセ生化学工業株式会社
製『ネオスピターゼ』を澱粉グラム当たり０．２％加
え、８５乃至９０℃で約２０分間反応させ、次いで１２
０℃にオートクレーブし、急冷してＤＥ約４の液化溶液
を得、これに実験９の方法で得た精製非還元性糖質生成
酵素を澱粉グラム当たり５単位、プルラナーゼ（株式会
社林原生物化学研究所販売）を澱粉グラム当たり１００
単位及びマルトテトラオース生成アミーラーゼ（株式会
社林原生物化学研究所製）を澱粉グラム当たり５単位加
え、ｐＨ６．５、温度４０℃で３６時間反応させた。本
反応液を、実施例Ａ−１と同様に、加熱して酵素を失活
させた後、精製し、濃度約６０％に濃縮した。本濃縮液
を原糖液とし、非還元性糖質の含量を高めるため、ナト
リウム型強酸性カチオン交換樹脂『ＸＴ−１０１６』を
用いたカラムクロマトグラフィーを行った。樹脂を内径
５．４ｃｍのジャケット付きステンレス製カラム４本に
充填し、直列につなぎ樹脂層長全長２０ｍとした。カラ
ム内温度を５５℃に維持しつつ、糖液を樹脂に対して５
ｖ／ｖ％加え、これに５５℃の温水をＳＶ０．２で流し
て分画し、非還元性糖質高含有のグルコース重合度４乃
至６の画分を採取した。更に、精製、濃縮し、真空乾燥
し、粉砕して、非還元性糖質高含有粉末を固形物当たり
約６３％の収率で得た。本品は、α−グリコシルトレハ
ロースを含むＤＥ５．４の低還元性糖質で、温和で上品
な甘味、比較的低粘度、適度な保湿性を有し、甘味料、
呈味改良剤、品質改良剤、安定剤、賦形剤などとして、
各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利
用できる。
【０１４４】
【実施例Ａ−３】とうもろこし澱粉を濃度約３０％の澱
粉乳とし、これに炭酸カルシウム０．１％加え、ｐＨ
６．５に調整し、α−アミラーゼ、ノボ社製『ターマミ
ール６０Ｌ』を澱粉グラム当たり０．３％加え、９５℃
で１５分間反応させ、次いで１２０℃にオートクレーブ
し、急冷してＤＥ約４の液化溶液を得、これに実験２の
方法で得た精製非還元性糖質生成酵素を澱粉グラム当た
り４単位、イソアミラーゼを澱粉グラム当たり３００単
位及びシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフ
ェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所販売）を澱粉グ
ラム当たり５単位加え、ｐＨ６．３、温度４５℃で４８
時間反応させた。本反応液を９５℃で１０分間保った
後、冷却し、これにβ−アミラーゼを澱粉グラム当たり
１０単位加えてｐＨ５．５、温度５５℃で１６時間反応
させた。本反応液を、加熱して酵素を失活させた後、常
法に従って、脱色、脱塩して精製し、濃縮して濃度約７
０％のシラップを固形物当たり約９０％の収率で得た。
本品は、α−グリコシルトレハロース及びα−グリコシ
ル α−グリコシドなどの非還元性糖質を含む低還元性
糖質で、温和で上品な甘味、比較的低粘度、適度な保湿
性を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定剤、
賦形剤などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各
種組成物に有利に利用できる。
【０１４５】
【実施例Ａ−４】実施例Ａ−３の方法で得たシラップを
濃度約５５％にして原糖液とし、非還元性糖質の含量を
高めるため、実施例Ａ−２の方法に準じて塩型強酸性カ
チオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを行
って、非還元性糖質高含有のグルコース重合度３乃至６
の画分を採取し、精製、濃縮し、噴霧乾燥して、非還元
性糖質高含有粉末を固形物当たり３８％の収率で得た。
本品は、本品は、α−グリコシルトレハロース及びα−
グリコシル α−グリコシドなどの非還元性糖質を多量
含むＤＥ８の低還元性糖質で、温和で上品な甘味、比較
的低粘度、適度な保湿性を有し、甘味料、呈味改良剤、
品質改良剤、安定剤、賦形剤などとして、各種飲食物、
化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。
【０１４６】
【実施例Ａ−５】とうもろこし澱粉を濃度約３０％の澱
粉乳とし、これに実施例Ａ−３の方法に準じて、α−ア
ミラーゼを作用させてＤＥ４の液化溶液を得、次いで、
実験２の方法で得た精製非還元性糖質生成酵素を澱粉グ
ラム当たり５単位、実験１５記載の精製トレハロース遊
離酵素を澱粉グラム当たり１０単位及びイソアミラーゼ
を澱粉グラム当たり５００単位加え、ｐＨ６．０、温度
４０℃で４８時間反応させた。本反応液には、糖組成で
トレハロースを７６．３％含有していた。本反応液を加
熱して酵素を失活させた後、常法に従って、脱色、脱塩
して精製し、濃縮して濃度約８５％にして助晶機にと
り、撹拌しつつ徐冷して助晶し、これをプラスチック製
バットに取り出し、室温で２日間放置し、晶出熟成させ
てブロックを調製した。次いで、本ブロックを切削機に
て粉砕してトレハロース含水結晶粉末を、原料の澱粉に
対して固形物当たり９２％の収率で得た。本品は、実質
的に吸湿性を示さず、取扱いが容易であり、甘味料、呈
味改良剤、品質改良剤、安定剤、賦形剤などとして、各
種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用
できる。
【０１４７】
【実施例Ａ−６】タピオカ澱粉を濃度約３０％の澱粉乳
とし、これに実施例Ａ−２の方法に準じて、α−アミラ
ーゼを作用させてＤＥ５の液化溶液を得、次いで、実験
１０の方法で得た精製非還元性糖質生成酵素を澱粉グラ
ム当たり３単位、実験２３の方法で得た精製トレハロー
ス遊離酵素を澱粉グラム当たり５単位及びプルラナーゼ
を２００単位及びシクロマルトデキストリン・グルカノ
トランスフェラーゼを澱粉グラム当たり３単位加え、ｐ
Ｈ６．０、温度４５℃で４８時間反応させた。本反応液
には、固形物当たりトレハロースを８４．７％含有して
いた。本反応液を加熱失活し、常法に従って、脱色、脱
塩して精製し、濃縮しながら連続晶析させ、得られるマ
スキットをバスケット型遠心分離機で分蜜し、結晶を少
量の水でスプレーし洗浄して高純度のトレハロース含水
結晶を固形物当たり約５５％の収率で得た。本品は、極
めて純度の高いトレハロース含水結晶であって、各種飲
食物、化粧品、医薬品など各種組成物、更には、工業試
薬、化学原料などに有利に利用できる。
【０１４８】
【実施例Ａ−７】実施例Ａ−６の方法で得た加熱失活し
た反応液に、グルコアミラーゼを基質グラム当たり１０
単位加え、ｐＨ５．０、温度５０℃で１０時間反応させ
た。本反応液を加熱失活し、常法に従って、脱色、脱塩
して精製し、濃度約７０％に濃縮した後、助晶機にとり
撹拌しつつ徐冷して助晶し、晶出率約４０％のマスキッ
トを得た。本マスキットを乾燥塔上のノズルより１５０
ｋｇ／ｃｍ2の高圧にて噴霧し、同時に乾燥塔の上部よ
り８５℃の熱風を送風し、底部に設けた移送金網コンベ
ア上に結晶粉末を補集した。コンベアの下より４５℃の
温風を送りつつ、該粉末を乾燥塔外に徐々に移動させ
て、取り出した。この結晶粉末を熟成塔に充填して温風
を送りつつ１０時間熟成させ、結晶化と乾燥を完了し、
トレハロース含水結晶粉末を、原料の澱粉に対して、固
形物当たり約８７％の収率で得た。本品は、実質的に吸
湿性を示さず、取扱いが容易であり、甘味料、呈味改良
剤、品質改良剤、安定剤、賦形剤などとして、各種飲食
物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用でき
る。
【０１４９】
【実施例Ａ−８】リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１
（ＦＥＲＭ ＢＰ−４１３０）の変異株を実験１の方法
に準じて、ファーメンターで約７０時間培養した。培養
後、ＳＦ膜を用いて除菌瀘過し、約１００ｌの培養瀘液
を回収し、更に、その瀘液をＵＦ膜濃縮し、非還元性糖
質生成酵素（約４１０単位／ｍｌ）とトレハロース遊離
酵素（約４９０単位／ｍｌ）とを含む濃縮酵素液約５ｌ
を回収した。とうもろこし澱粉を濃度約３３％の澱粉乳
とし、これに実施例Ａ−３の方法に準じて、α−アミラ
ーゼを作用させてＤＥ約４の液化溶液を得、次いで、前
記方法で調製した非還元性糖質精製酵素とトレハロース
遊離酵素とを含む濃縮液を澱粉グラム当たり０．０２ｍ
ｌ、イソアミラーゼを澱粉グラム当たり５００単位及び
シクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラー
ゼを澱粉グラム当たり５単位加え、ｐＨ６．２、温度４
０℃で４８時間反応させた。本反応液を加熱失活し、次
いで、グルコアミラーゼを基質グラム当たり１０単位加
え、ｐＨ５．０、温度５０℃で１０時間反応させた。本
反応液には、固形物当たりトレハロースを８５．６％含
有していた。本反応液を加熱失活し、常法に従って、脱
色、脱塩して精製し、濃縮しながら連続晶析させ、得ら
れるマスキットをバスケット型遠心分離機で分蜜し、結
晶を少量の水でスプレーし洗浄して高純度のトレハロー
ス含水結晶を固形物当たり６４％の収率で得た。本品
は、極めて純度の高いトレハロース含水結晶であって、
各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物、更には、
工業試薬、化学原料などに有利に利用できる。
【０１５０】
【実施例Ａ−９】実施例Ａ−８の方法で得た反応液を加
熱失活し、常法に従って、脱色、脱塩して精製し、濃縮
して濃度５５％のシラップを得た。本糖液を原糖液と
し、トレハロース含量を高めるため、カルシウム型強酸
性カチオン交換樹脂、ダウケミカル社製『ダウエックス
９９』（架橋度６％）を用いて、実施例Ａ−２と同様に
カラムクロマトグラフィーにかけ、トレハロース高含有
画分を採取した。本高含有画分は、固形物当たりトレハ
ロースを９７％含有していた。本高含有画分を、常法に
従って、脱色、脱塩精製し、次いで蒸発釜にとり、減圧
下で煮詰め、水分約３．０％のシラップとした。次いで
助晶機に移し、これに種晶として無水結晶トレハロース
をシラップ固形物当たり１％加え、１２０℃で撹拌助晶
し、次いで、アルミ製バットに取り出し、１００℃で６
時間晶出熟成させてブロックを調製した。次いで、本ブ
ロックを切削機にて粉砕し、流動乾燥して水分約０．３
％の無水結晶トレハロース粉末を、原料のトレハロース
高含有糖液に対して、固形物当たり約７５％の収率で得
た。本品は、食品、化粧品、医薬品、その原材料、又は
加工中間物などの含水物の脱水剤としてのみならず、上
品な甘味を有する白色粉末甘味料としても、各種飲食
物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用でき
る。
【０１５１】
【実施例Ｂ−１ 甘味料】実施例Ａ−７の方法で得たト
レハロース含水結晶粉末１重量部に、α−グリコシルス
テビオシド、東洋精糖株式会社販売『αＧスイート』
０．０１重量部及びＬ−アスパルチル−Ｌ−フェニルア
ラニンメチルエステル、味の素株式会社販売『アスパル
テーム』０．０１重量部を均一に混合し、顆粒成型機に
かけて、顆粒状甘味料を得た。本品は、甘味の質が優
れ、蔗糖の約２倍の甘味度を有し、甘味度当たりカロリ
ーは、蔗糖の約１／２に低下している。本甘味料は、そ
れに配合した高甘味度甘味物の分解もなく、安定性に優
れており、低カロリー甘味料として、カロリー摂取を制
限している肥満者、糖尿病者などのための低カロリー飲
食物などに対する甘味付けに好適である。また、本甘味
料は、虫歯誘発菌による酸の生成が少なく、不溶性グル
カンの生成も少ないことより、虫歯を抑制する飲食物な
どに対する甘味付けにも好適である。
【０１５２】
【実施例Ｂ−２ ハードキャンディー】濃度５５％蔗糖
溶液１００重量部に実施例Ａ−１の方法で得た非還元性
糖質含有シラップ３０重量部を加熱混合し、次いで減圧
下で水分２％未満になるまで加熱濃縮し、これにクエン
酸１重量部及び適量のレモン香料と着色料とを混和し、
常法に従って成型し、製品を得た。本品は、歯切れ、呈
味良好で、蔗糖の晶出、変形も起こらない高品質のハー
ドキャンディーである。
【０１５３】
【実施例Ｂ−３ チョコレート】カカオペースト４０重
量部、カカオバター１０重量部、蔗糖３０重量部、実施
例Ａ−８の方法で得た高純度トレハロース含水結晶２０
重量部を混合してレファイナーに通して粒度を下げた
後、コンチェに入れて５０℃で２昼夜練り上げる。この
間に、レシチン０．５重量部を加え充分に混和分散させ
た。次いで、温度調節機で３１℃に調節し、バターの固
まる直前に型に流し込み、振動機でアワ抜きを行い、１
０℃の冷却トンネルを２０分間くぐらせて固化させた。
これを型抜きして包装し製品を得た。本品は、吸湿性が
なく、色、光沢共によく、内部組織も良好で、口中でな
めらかに溶け、上品な甘味とまろやかな風味を有する。
【０１５４】
【実施例Ｂ−４ チューインガム】ガムベース３重量部
を柔らかくなる程度に加熱溶融し、これに蔗糖４重量部
及び実施例Ａ−５の方法で得たトレハロース含水結晶粉
末３重量部とを加え、更に適量の香料と着色料とを混合
し、常法に従って、ロールにより練り合わせ、成形、包
装して製品を得た。本品は、テクスチャー、風味とも良
好なチューインガムである。
【０１５５】
【実施例Ｂ−５ 加糖練乳】原乳１００重量部に実施例
Ａ−３の方法で得た非還元性糖質含有シラップ３重量部
及び蔗糖１重量部を溶解し、プレートヒーターで加熱殺
菌し、次いで濃度７０％に濃縮し、無菌状態で缶詰して
製品を得た。本品は、温和な甘味で、風味もよく、乳幼
児食品、フルーツ、コーヒー、ココア、紅茶などの調味
用に有利に利用できる。
【０１５６】
【実施例Ｂ−６ 乳酸菌飲料】脱脂粉乳１７５重量部、
実施例Ａ−２の方法で得た非還元性糖質高含有粉末８０
重量部及び特開平４−２８１７９５号公報で開示されて
いるラクトスクロース高含有粉末５０重量部を水１，２
００重量部に溶解し、６５℃で３０分間殺菌し、４０℃
に冷却後、これに、常法に従って、乳酸菌のスターター
を３０重量部植菌し、３７℃で８時間培養して乳酸菌飲
料を得た。本品は、風味良好な乳酸菌飲料である。ま
た、本品は、オリゴ糖を含有し、乳酸菌を安定に保持す
るだけでなく、ビフィズス菌増殖促進作用をも有する。
【０１５７】
【実施例Ｂ−７ 粉末ジュース】噴霧乾燥により製造し
たオレンジ果汁粉末３３重量部に対して、実施例Ａ−６
の方法で得た高純度トレハロース含水結晶５０重量部、
蔗糖１０重量部、無水クエン酸０．６５重量部、リンゴ
酸０．１重量部、Ｌ−アスコルビン酸０．１重量部、ク
エン酸ソーダ０．１重量部、プルラン０．５重量部、粉
末香料適量をよく混合撹拌し、粉砕し微粉末にしてこれ
を流動層造粒機に仕込み、排風温度４０℃とし、これ
に、実施例Ａ−６の方法で得たトレハロース高含有反応
液の精製濃縮シラップをバインダーとしてスプレーし、
３０分間造粒し、計量、包装して製品を得た。本品は、
果汁含有率約３０％の粉末ジュースである。また、本品
は異味、異臭がなく、長期に安定であった。
【０１５８】
【実施例Ｂ−８ カスタードクリーム】コーンスターチ
１００重量部、実施例Ａ−１の方法で得た非還元性糖質
含有シラップ１００重量部、マルトース８０重量部、蔗
糖２０重量部及び食塩１重量部を充分に混合し、鶏卵２
８０重量部を加えて撹拌し、これに沸騰した牛乳１，０
００重量部を徐々に加え、更に、これを火にかけて撹拌
を続け、コーンスターチが完全に糊化して全体が半透明
になった時に火を止め、これを冷却して適量のバニラ香
料を加え、計量、充填、包装して製品を得た。本品は、
なめらかな光沢を有し、温和な甘味で美味である。
【０１５９】
【実施例Ｂ−９ ういろうの素】米粉９０重量部に、コ
ーンスターチ２０重量部、蔗糖４０重量部、実施例Ａ−
５の方法で得たトレハロース含水結晶粉末８０重量部及
びプルラン４重量部を均一に混合してういろうの素を製
造した。ういろうの素と適量の抹茶と水とを混練し、こ
れを容器に入れて６０分間蒸し上げて抹茶ういろうを製
造した。本品は、照り、口当りも良好で、風味も良い。
また、澱粉の老化も抑制され、日持ちも良い。
【０１６０】
【実施例Ｂ−１０ あん】原料あずき１０重量部に、常
法に従って、水を加えて煮沸し、渋切り、あく抜きし
て、水溶性夾雑物を除去して、あずきつぶあん約２１重
量部を得た。この生あんに、蔗糖１４重量部、実施例Ａ
−３の方法で得た非還元性糖質含有シラップ５重量部及
び水４重量部を加えて煮沸し、これに少量のサラダオイ
ルを加えてつぶあんをこわさないように練り上げ、製品
のあんを約３５重量部得た。本品は、色焼けもなく、舌
ざわりもよく、風味良好で、あんパン、まんじゅう、だ
んご、もなか、氷菓などのあん材料として好適である。
【０１６１】
【実施例Ｂ−１１ パン】小麦粉１００重量部、イース
ト２重量部、砂糖５重量部、実施例Ａ−４の方法で得た
非還元性糖質含有粉末１重量部及び無機フード０．１重
量部を、常法に従って、水でこね、中種を２６℃で２時
間発酵させ、その後３０分間熟成し、焼き上げた。本品
は、色相、すだちともに良好で適度な弾力、温和な甘味
を有する高品質のパンである。
【０１６２】
【実施例Ｂ−１２ ハム】豚もも肉１，０００重量部に
食塩１５重量部及び硝酸カリウム３重量部を均一にすり
込んで、冷室に１昼夜堆積する。これを水５００重量
部、食塩１００重量部、硝酸カリウム３重量部、実施例
Ａ−４の方法で得た非還元性糖質含有粉末４０重量部及
び香辛料からなる塩漬液に冷室で７日間漬け込み、次い
で、常法に従い、冷水で洗浄し、ひもで巻き締め、燻煙
し、クッキングし、冷却包装して製品を得た。本品は、
色合いもよく、風味良好な高品質のハムである。
【０１６３】
【実施例Ｂ−１３ 粉末ペプチド】濃度４０％食品用大
豆ペプチド溶液、不二製油株式会社製『ハイニュート
Ｓ』１重量部に、実施例Ａ−６の方法で得た高純度トレ
ハロース含水結晶２重量部を混合し、プラスチック製バ
ットに入れ、５０℃で減圧乾燥し、粉砕して粉末ペプチ
ドを得た。本品は、風味良好で、プレミックス、冷菓な
どの製菓用材料としてのみならず、経口流動食、経管流
動食などの離乳食、治療用栄養剤などとしても有利に利
用できる。
【０１６４】
【実施例Ｂ−１４ 粉末味噌】赤味噌１重量部に実施例
Ａ−９の方法で得た無水結晶トレハロース粉末３重量部
を混合し、多数の半球状凹部を設けた金属板に流し込
み、これを室温下で一夜静置して固化し、離型して１個
当り約４ｇの固形味噌を得、これを粉砕機にかけて粉末
味噌を得た。本品は、即席ラーメン、即席吸物などの調
味料として有利に利用できる。また、固形味噌は、固形
調味料としてだけでなく味噌菓子などとしても利用でき
る。
【０１６５】
【実施例Ｂ−１５ 粉末卵黄】生卵から調製した卵黄を
プレート式加熱殺菌機で６０乃至６４℃で殺菌し、得ら
れる液状卵黄１重量部に対して、実施例Ａ−９の方法で
得た無水結晶トレハロース粉末４重量部の割合で混合し
た後バットに移し、一夜放置して、トレハロース含水結
晶に変換させてブロックを調製した。本ブロックを切削
機にかけて粉末化し、粉末卵黄を得た。本品は、プレミ
ックス、冷菓、乳化剤などの製菓用材料としてのみなら
ず、経口流動食、経管流動食などの離乳食、治療用栄養
剤などとしても有利に利用できる。また、美肌剤、育毛
剤などとしても有利に利用できる。
【０１６６】
【実施例Ｂ−１６ 化粧用クリーム】モノステアリン酸
ポリオキシエチレングリコール２重量部、自己乳化型モ
ノステアリン酸グリセリン５重量部、実施例Ａ−２の方
法で得た非還元性糖質高含有粉末２重量部、α−グリコ
シル ルチン１重量部、流動パラフィン１重量部、トリ
オクタン酸グリセリル１０重量部及び防腐剤の適量を、
常法に従って加熱溶解し、これにＬ−乳酸２重量部、
１，３−ブチレングリコール５重量部及び精製水６６重
量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、更に香料の
適量を加えて撹拌混合しクリームを製造した。本品は、
抗酸化性を有し、安定性が高く、高品質の日焼け止め、
美肌剤、色白剤などとして有利に利用できる。
【０１６７】
【実施例Ｂ−１７ ヘアリンス】実施例Ａ−６の方法で
製造したトレハロース１重量部、α−グルコシル−Ｌ−
アスコルビン酸（株式会社林原生物化学研究所製造）２
重量部、酵素処理ルチン、東洋精糖株式会社製『αＧル
チン』２重量部、塩化ジステアリルメチルアンモニウム
２重量部、セタノール２重量部、シリコンオイル２重量
部及びポリオキシエチレンオレイルアルコールエーテル
１重量部及び適量の香料を加熱溶解し、これに１，３−
ブチレングリコール３重量部、精製水８９重量部及び適
量の防腐剤からなる混合物を撹拌しながら加え、冷却し
た後、放置してヘアリンスを得た。本品は、α−グルコ
シル−Ｌ−アスコルビン酸と酵素処理ルチンとを配合し
たヘアリンスであり、ヒト及び動物の発育毛促進やフ
ケ、カユミ、抜毛の治療、予防に有利に使用することが
できる。
【０１６８】
【実施例Ｂ−１８ 乳液】次の処方にしたがい、常法に
より乳液を製造した。 POE(20)POP(2)セチルアルコールエーテル １重量部 シリコーンＫＦ９６(20CS)（信越化学） ２重量部 流動パラフィン ３重量部 プロピレングリコール ５重量部 グリセリン １重量部 実施例Ａ−７で得られたトレハロース １重量部 エチルアルコール １５重量部 カルボキシビニルポリマー ０．３重量部 ヒドロキシプロピルセルロース ０．１重量部 ２−アミノメチルプロパノール ０．１重量部 POEヒマシ油 ０．１重量部 α−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸 １重量部 赤色１０６号 ０．０００１重量部 防腐剤 適量 香料 ０．１重量部 蒸留水 ７０重量部 本品はα−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸を含む乳液
であり、美白効果、安定性、香料の保留効果に優れてい
た。
【０１６９】
【実施例Ｂ−１９ 化粧水】次の処方にしたがい、常法
により化粧水を製造した。 ソルビトール ２重量部 実施例Ａ−８で得られたトレハロース ０．５重量部 プラセンタリキッド ０．５重量部 α−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸 ０．５重量部 ジメチルステアリルアミンオキシド ０．０５重量部 ラウリル硫酸ナトリウム ０．０１重量部 エチルアルコール ２０重量部 防腐剤 適量 香料 適量 蒸留水 ７５重量部 本品はα−グルコシル−Ｌ−アスコルビン酸を含む化粧
水であり、美白効果、安定性、安全性に優れていた。
【０１７０】
【実施例Ｂ−２０ 粉末薬用人参エキス】薬用人参エキ
ス０．５重量部に実施例Ａ−９の方法で得た無水結晶ト
レハロース粉末１．５重量部を混捏した後、バットに移
し、２日間放置してトレハロース含水結晶に変換させブ
ロックを調製した。本ブロックを切削機にかけて粉末化
し、分級して粉末薬用人参エキスを得た。本品を適量の
ビタミンＢ１及びビタミンＢ２粉末とともに顆粒成型機
にかけ、ビタミン含有顆粒状薬用人参エキスとした。本
品は、疲労回復剤、強壮、強精剤などとして有利に利用
できる。また、育毛剤などとしても利用できる。
【０１７１】
【実施例Ｂ−２１ 固体製剤】ヒト天然型インターフェ
ロン−α標品（株式会社林原生物化学研究所製）を、常
法に従って、固定化抗ヒトインターフェロン−α抗体カ
ラムにかけ、該標品に含まれるヒト天然型インターフェ
ロン−αを吸着させ、安定剤であるウシ血清アルブミン
を素通りさせて除去し、次いで、ｐＨを変化させて、ヒ
ト天然型インターフェロン−αを実施例Ａ−６の方法で
得た高純度トレハロース含水結晶を５％含有する生理食
塩水を用いて溶出した。本液を精密濾過し、約２０倍量
の無水結晶マルトース粉末、株式会社林原商事販売『フ
ァイントース』に加えて脱水、粉末化し、これを打錠機
にて打錠し、１錠（約２００ｍｇ）当たりヒト天然型イ
ンターフェロン−αを約１５０単位含有する錠剤を得
た。本品は、舌下錠などとして、一日当たり、大人１乃
至１０錠程度が経口的に投与され、ウイルス性疾患、ア
レルギー性疾患、リューマチ、糖尿病、悪性腫瘍などの
治療に有利に利用できる。とりわけ、近年、患者数の急
増しているエイズ、肝炎などの治療剤として有利に利用
できる。本品は、本発明の非還元性糖質と無水結晶マル
トースが共に安定剤として作用し、室温で放置してもそ
の活性を長期間よく維持する。
【０１７２】
【実施例Ｂ−２２ 糖衣錠】重量１５０ｍｇの素錠を芯
剤とし、これに実施例Ａ−８の方法で得た高純度トレハ
ロース含水結晶４０重量部、プルラン（平均分子量２０
万）２重量部、水３０重量部、タルク２５重量部及び酸
化チタン３重量部からなる下掛け液を用いて錠剤重量が
約２３０ｍｇになるまで糖衣し、次いで、同じトレハロ
ース含水結晶粉末６５重量部、プルラン１重量部及び水
３４重量部からなる上掛け液を用いて、糖衣し、更に、
ロウ液で艶出しして光沢の在る外観の優れた糖衣錠を得
た。本品は、耐衝撃性にも優れており、高品質を長期間
維持する。
【０１７３】
【実施例Ｂ−２３ 練歯磨】 配合 第２リン酸カルシウム ４５．０重量部 プルラン ２．９５重量部 ラウリル硫酸ナトリウム １．５重量部 グリセリン ２０．０重量部 ポリオキシエチレンソルビタンラウレート ０．５重量部 防腐剤 ０．０５重量部 実施例Ａ−５の方法で得たトレハロース含水結晶粉末 １２．０重量部 マルチトール ５．０重量部 水 １３．０重量部 上記の材料を常法に従って混合し、練歯磨を得た。本品
は、適度の甘味を有しており、特に子供用練歯磨として
好適である。
【０１７４】
【実施例Ｂ−２４ 流動食用固体製剤】実施例Ａ−７の
方法で製造したトレハロース含水結晶粉末５００重量
部、粉末卵黄２７０重量部、脱脂粉乳２０９重量部、塩
化ナトリウム４．４重量部、塩化カリウム１．８重量
部、硫酸マグネシウム４重量部、チアミン０．０１重量
部、アスコルビン酸ナトリウム０．１重量部、ビタミン
Ｅアセテート０．６重量部及びニコチン酸アミド０．０
４重量部からなる配合物を調製し、この配合物２５グラ
ムずつ防湿性ラミネート小袋に充填し、ヒートシールし
て製品を得た。本品は、１袋分を約１５０乃至３００ｍ
ｌの水に溶解して流動食とし、経口的、又は鼻腔、胃、
腸などへ経管的使用方法により利用され、生体へのエネ
ルギー補給用に有利に利用できる。
【０１７５】
【実施例Ｂ−２５ 輸液剤】実施例Ａ−８の方法で製造
した高純度トレハロース含水結晶を水に濃度約１０ｗ／
ｖ％に溶解し、次いで、常法に従って、精密濾過してパ
イロジェンフリーとし、プラスチック製ボトルに無菌的
に充填し施栓して製品を得た。本品は、経日変化もなく
安定な輸液剤で、静脈内、腹腔内などに投与するのに好
適である。本品は濃度１０ｗ／ｖ％で血液と等張で、グ
ルコースの場合の２倍濃度でエネルギー補給できる。
【０１７６】
【実施例Ｂ−２６ 輸液剤】実施例Ａ−８の方法で製造
した高純度トレハロース含水結晶と下記の組成のアミノ
酸配合物とがそれぞれ５ｗ／ｖ％、３０ｗ／ｖ％になる
ように水に混合溶解し、次いで実施例Ｂ−２５と同様に
精製してパイロジェンフリーとし、更に、プラスチック
製バックに充填し施栓して製品を得た。 アミノ酸配合物の組成（ｍｇ／１００ｍｌ） Ｌ−イソロイシン １８０ Ｌ−ロイシン ４１０ Ｌ−リジン塩酸塩 ６２０ Ｌ−メチオニン ２４０ Ｌ−フェニルアラニン ２９０ Ｌ−スレオニン １８０ Ｌ−トリプトファン ６０ Ｌ−バリン ２００ Ｌ−アルギニン塩酸塩 ２７０ Ｌ−ヒスチジン塩酸塩 １３０ グリシン ３４０ 本品は、糖質とアミノ酸との複合輸液剤にもかかわら
ず、トレハロースが還元性を示さないため、経日変化も
なく安定な輸液剤で、静脈内、腹腔内などへ投与するの
に好適である。本品は、生体へのエネルギー補給のみな
らず、アミノ酸補給のためにも有利に利用できる。
【０１７７】
【実施例Ｂ−２７ 外傷治療用膏薬】実施例Ａ−５の方
法で製造したトレハロース含水結晶粉末２００重量部及
びマルトース３００重量部に、ヨウ素３重量部を溶解し
たメタノール５０重量部を加え混合し、更に１０ｗ／ｖ
％プルラン水溶液２００重量部を加えて混合し、適度の
延び、付着性を示す外傷治療用膏薬を得た。本品は、ヨ
ウ素による殺菌作用のみならず、トレハロースによる細
胞へのエネルギー補給剤としても作用することから、治
癒期間が短縮され、創面もきれいに治る。
【０１７８】
【発明の効果】上記から明らかなように、澱粉からα−
グリコシルトレハロース及びα−グリコシル α−グリ
コシドなどのトレハロース構造を有する非還元性糖質、
又は、これを含む低還元性糖質を製造するに際し、澱粉
を液化した溶液に、非還元性糖質生成酵素を澱粉枝切酵
素及び／又はシクロマルトデキストリン・グルカノトラ
ンスフェラーゼとともに作用させることにより、澱粉か
らの非還元性糖質の収量を高め、比較的低分子、低粘度
で取扱い容易な低還元性糖質となり、その工業的生産を
容易にする。また、澱粉からトレハロースを製造するに
際し、澱粉を液化した溶液に、非還元性糖質生成酵素及
びトレハロース遊離酵素を澱粉枝切酵素及び／又はシク
ロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼと
ともに作用させることにより、澱粉からのトレハロース
収量を著しく高め、その工業的実施を容易にする。この
ようにして得られるα−グリコシルトレハロース、α−
グリコシル α−グリコシド及びトレハロースなどの非
還元性糖質又はこれを含む低還元性糖質は、安定性に優
れ、良質で上品な甘味を有している。また、経口摂取に
より消化吸収され、カロリー源となる。とりわけ、トレ
ハロースは非経口的にも使用され、よく代謝利用され
る。従って、本発明の非還元性糖質、又は、これを含む
低還元性糖質は、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安
定剤、賦形剤などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品
など各種組成物に有利に利用できる。
【０１７９】本発明の確立は、安価で無限の資源である
澱粉から、従来望むべくして容易に得られなかった非還
元性糖質、又は、これを含む糖質を工業的に大量かつ安
価に提供できる全く新しい道を拓くこととなり、それが
与える影響は、食品、化粧品、医薬品業界は言うに及ば
ず、農水畜産業、化学工業にも及びこれら産業界に与え
る工業的意義は計り知れないものがある。
【図面の簡単な説明】
【図１】リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１由来の非
還元性糖質生成酵素の活性に及ぼす温度の影響を示す図
である。
【図２】リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１由来の非
還元性糖質生成酵素の活性に及ぼすｐＨの影響を示す図
である。
【図３】リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１由来の非
還元性糖質生成酵素の温度安定性を示す図である。
【図４】リゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１１由来の非
還元性糖質生成酵素のｐＨ安定性を示す図である。
【図５】アルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６由来
の非還元性糖質生成酵素の活性に及ぼす温度の影響を示
す図である。
【図６】アルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６由来
の非還元性糖質生成酵素の活性に及ぼすｐＨの影響を示
す図である。
【図７】アルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６由来
の非還元性糖質生成酵素の温度安定性を示す図である。
【図８】アルスロバクター・スピーシーズ Ｑ３６由来
の非還元性糖質生成酵素のｐＨ安定性を示す図である。
【図９】ＤＥＡＥ−トヨパールからの本発明のトレハロ
ース遊離酵素と非還元性糖質生成酵素の溶出パターンを
示す図である。
【図１０】本発明のリゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１
１由来のトレハロース遊離酵素の酵素活性に及ぼす温度
の影響を示す図である。
【図１１】本発明のリゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１
１由来のトレハロース遊離酵素の酵素活性に及ぼすｐＨ
の影響を示す図である。
【図１２】本発明のリゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１
１由来のトレハロース遊離酵素の安定性に及ぼす温度の
影響を示す図である。
【図１３】本発明のリゾビウム・スピーシーズ Ｍ−１
１由来のトレハロース遊離酵素の安定性に及ぼすｐＨの
影響を示す図である。
【図１４】本発明のアルスロバクター・スピーシーズ
Ｑ３６由来のトレハロース遊離酵素の酵素活性に及ぼす
温度の影響を示す図である。
【図１５】本発明のアルスロバクター・スピーシーズ
Ｑ３６由来のトレハロース遊離酵素の酵素活性に及ぼす
ｐＨの影響を示す図である。
【図１６】本発明のアルスロバクター・スピーシーズ
Ｑ３６由来のトレハロース遊離酵素の安定性に及ぼす温
度の影響を示す図である。
【図１７】本発明のアルスロバクター・スピーシーズ
Ｑ３６由来のトレハロース遊離酵素の安定性に及ぼすｐ
Ｈの影響を示す図である。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 19/18 7432−4Ｂ // Ａ２３Ｌ 1/307

Claims (14)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 澱粉を液化した溶液に、非還元性糖質生
    成酵素を澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキスト
    リン・グルカノトランスフェラーゼとともに作用させる
    か、又は非還元性糖質生成酵素及びトレハロース遊離酵
    素を澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキストリン
    ・グルカノトランスフェラーゼとともに作用させ、得ら
    れる非還元性糖質、又は、これを含む低還元性糖質。
  2. 【請求項２】 澱粉を液化した溶液が、濃度１０ｗ／ｗ
    ％以上の澱粉をＤＥ１５未満に液化した溶液である請求
    項１記載の非還元性糖質、又は、これを含む低還元性糖
    質。
  3. 【請求項３】 澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデ
    キストリン・グルカノトランスフェラーゼをグルコース
    重合度３以上のオリゴ糖を生成するアミラーゼとともに
    作用させる請求項１又は２記載の非還元性糖質、又は、
    これを含む低還元性糖質。
  4. 【請求項４】 非還元性糖質が、分子の末端にトレハロ
    ース構造を有する非還元性糖質、分子の内部にトレハロ
    ース構造を有する非還元性糖質及びトレハロースから選
    ばれる１種又は２種以上の糖質である請求項１、２又は
    ３記載の非還元性糖質、又は、これを含む低還元性糖
    質。
  5. 【請求項５】 トレハロースが、含水結晶又は無水結晶
    である請求項４記載の非還元性糖質、又は、これを含む
    低還元性糖質。
  6. 【請求項６】 澱粉を液化した溶液に、非還元性糖質生
    成酵素を澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキスト
    リン・グルカノトランスフェラーゼとともに作用させる
    か、又は非還元性糖質生成酵素及びトレハロース遊離酵
    素を澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキストリン
    ・グルカノトランスフェラーゼとともに作用させて非還
    元性糖質を生成せしめ、これを採取することを特徴とす
    る非還元性糖質、又は、これを含む低還元性糖質の製造
    方法。
  7. 【請求項７】 澱粉を液化した溶液が、濃度１０ｗ／ｗ
    ％以上の澱粉乳を酸又は酵素でＤＥ１５未満に液化した
    溶液である請求項６記載の非還元性糖質、又は、これを
    含む低還元性糖質の製造方法。
  8. 【請求項８】 澱粉を液化した溶液に、非還元性糖質生
    成酵素を澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキスト
    リン・グルカノトランスフェラーゼとともに作用させる
    か、又は非還元性糖質生成酵素及びトレハロース遊離酵
    素を澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキストリン
    ・グルカノトランスフェラーゼとともに作用させ、更に
    必要に応じて、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼ又は
    α−グルコシダーゼを作用させて非還元性糖質及び夾雑
    糖質含有溶液とし、これをカラムクロマトグラフィーに
    かけ、得られる含量を向上させた非還元性糖質を採取す
    ることを特徴とする非還元性糖質、又は、これを含む低
    還元性糖質の製造方法。
  9. 【請求項９】 カラムクロマトグラフィーが、塩型強酸
    性カチオン交換樹脂を用いるクロマトグラフィーである
    請求項８記載の非還元性糖質、又は、これを含む低還元
    性糖質の製造方法。
  10. 【請求項１０】 澱粉を液化した溶液に、非還元性糖質
    生成酵素、又は、非還元性糖質生成酵素及びトレハロー
    ス遊離酵素を作用させて非還元性糖質を製造するに際
    し、澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキストリン
    ・グルカノトランスフェラーゼをともに作用させて非還
    元性糖質を製造することを特徴とする非還元性糖質の増
    収方法。
  11. 【請求項１１】 澱粉を液化した溶液に、非還元性糖質
    生成酵素を澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキス
    トリン・グルカノトランスフェラーゼとともに作用させ
    るか、又は非還元性糖質生成酵素及びトレハロース遊離
    酵素を澱粉枝切酵素及び／又はシクロマルトデキストリ
    ン・グルカノトランスフェラーゼとともに作用させ、得
    られる非還元性糖質、又は、これを含む低還元性糖質を
    含有せしめた組成物。
  12. 【請求項１２】 得られる非還元性糖質が、カラムクロ
    マトグラフィーにかけて含量を向上させた非還元性糖質
    である請求項１１記載の非還元性糖質、又は、これを含
    む低還元性糖質を含有せしめた組成物。
  13. 【請求項１３】 非還元性糖質が、トレハロースの含水
    結晶又は無水結晶である請求項１１又は１２記載の組成
    物。
  14. 【請求項１４】 組成物が、飲食物、化粧品又は医薬品
    である請求項１１、１２又は１３記載の組成物。
JP11658395A 1994-06-02 1995-04-19 非還元性糖質とその製造方法並びに用途 Expired - Fee Related JP3793590B2 (ja)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP11658395A JP3793590B2 (ja) 1994-06-27 1995-04-19 非還元性糖質とその製造方法並びに用途
IL11403195A IL114031A0 (en) 1994-06-27 1995-06-07 Non-reducing saccharide and its preparation and use
TW084105765A TW426736B (en) 1994-06-27 1995-06-07 Non-reducing saccharide and its production and use
EP95304439A EP0691407B1 (en) 1994-06-27 1995-06-23 Non-reducing saccharide and its production and use
DE69528019T DE69528019T9 (de) 1994-06-27 1995-06-23 Nicht reduzierendes Saccharid, seine Herstellung und seine Verwendung
CA002152563A CA2152563C (en) 1994-06-27 1995-06-23 Non-reducing saccharide and its production and use
ES95304439T ES2182869T3 (es) 1994-06-27 1995-06-23 Sacarido no reductor y su uso.
KR1019950017442A KR100362688B1 (ko) 1994-06-27 1995-06-26 비환원성당질과그제조방법및용도
US08/495,030 US5919668A (en) 1994-06-02 1995-06-27 Non-reducing saccharide and its production and use

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP16581594 1994-06-27
JP6-165815 1994-06-27
JP11658395A JP3793590B2 (ja) 1994-06-27 1995-04-19 非還元性糖質とその製造方法並びに用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH0873504A true JPH0873504A (ja) 1996-03-19
JP3793590B2 JP3793590B2 (ja) 2006-07-05

Family

ID=26454888

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP11658395A Expired - Fee Related JP3793590B2 (ja) 1994-06-02 1995-04-19 非還元性糖質とその製造方法並びに用途

Country Status (9)

Country Link
US (1) US5919668A (ja)
EP (1) EP0691407B1 (ja)
JP (1) JP3793590B2 (ja)
KR (1) KR100362688B1 (ja)
CA (1) CA2152563C (ja)
DE (1) DE69528019T9 (ja)
ES (1) ES2182869T3 (ja)
IL (1) IL114031A0 (ja)
TW (1) TW426736B (ja)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004071472A1 (ja) * 2003-02-13 2004-08-26 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo α,α−トレハロースの糖質誘導体を含有することを特徴とする皮膚外用剤
JP2005013227A (ja) * 2003-06-06 2005-01-20 Hayashibara Biochem Lab Inc 加工品の品質保持方法
JPWO2004056216A1 (ja) * 2002-12-19 2006-04-20 株式会社林原生物化学研究所 組成物における水分の変動を抑制する方法とその用途
JP2006526418A (ja) * 2003-06-05 2006-11-24 カーギル，インコーポレイティド トレハロースとタンパク質との飲料用添加混合物
US7186535B1 (en) 1998-09-11 2007-03-06 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Non-reducing saccharide-forming enzyme, trehalose-releasing enzyme, and process for producing saccharides using the enzymes
JPWO2005096830A1 (ja) * 2004-04-02 2008-02-21 不二製油株式会社 餅種食品の製造法
WO2013042587A1 (ja) 2011-09-21 2013-03-28 株式会社林原 α，α－トレハロース二含水結晶含有粉末の製造方法
JP2014054209A (ja) * 2012-09-12 2014-03-27 Hayashibara Co Ltd α，α−トレハロース二含水結晶含有粉末の製造方法
WO2021039833A1 (ja) 2019-08-29 2021-03-04 国立大学法人愛媛大学 培養組織の製造方法、及び外用剤

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2682495A (en) * 1994-06-15 1996-01-05 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Novel transferase and amylase, process for producing the enzymes,use thereof, and gene coding for the same
EP0693558B1 (en) * 1994-07-19 2002-12-04 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Trehalose and its production and use
CA2245708C (en) * 1996-02-09 2008-01-22 Bruce Joseph Roser Solid formulations containing trehalose
US6673380B2 (en) * 1998-11-17 2004-01-06 Mcneil-Ppc, Inc. Fortified confectionery delivery systems and methods of preparation thereof
JP4295840B2 (ja) * 1997-12-09 2009-07-15 株式会社林原生物化学研究所 血行改善剤
DE19909214A1 (de) 1999-03-03 2000-09-07 Basf Ag Wasserabsorbierende, schaumförmige, vernetzte Polymerisate mit verbesserter Verteilungswirkung, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
JP4132767B2 (ja) * 2001-07-19 2008-08-13 株式会社林原生物化学研究所 プルラン含有粉末とその製造方法並びに用途
WO2004054525A1 (en) * 2002-12-13 2004-07-01 Unilever Plc Hair treatment compositions
US8231925B2 (en) 2004-08-20 2012-07-31 Cargill, Incorporated Ingredient systems comprising trehalose, food products containing trehalose, and methods of making same
CA2577657C (en) 2004-08-20 2013-03-19 Cargill, Incorporated Ingredient systems comprising trehalose, food products containing trehalose, and methods of making same
BR112015023484A2 (pt) 2013-03-15 2017-07-18 Cargill Inc composição de carboidrato, produto e processso para preparar uma composição de carboidrato
CN103173398B (zh) * 2013-04-03 2014-07-16 苏州大学 一株短小杆菌以及由其发酵制备海藻糖的方法
EP3244743B1 (en) * 2015-01-16 2019-10-23 Novozymes A/S Method to improve sliceability of baked goods
JP6853192B2 (ja) 2016-01-20 2021-03-31 株式会社林原 α，α−トレハロース二含水結晶含有粉末とその製造方法並びに用途
CN112111538B (zh) * 2020-09-21 2022-05-10 江南大学 一种可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖及其制备方法
CN114886108A (zh) * 2022-05-11 2022-08-12 广州城市职业学院 一种咸味沙拉调味粉及其制备方法与应用

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS50154485A (ja) 1974-05-31 1975-12-12
JPS5823799A (ja) 1981-08-03 1983-02-12 株式会社林原生物化学研究所 高純度マルト−スの製造方法
JPS5872598A (ja) * 1981-10-26 1983-04-30 Hayashibara Biochem Lab Inc 高純度イソマルト−スの製造方法
JPS58216695A (ja) * 1982-06-07 1983-12-16 Otsuka Shokuhin Kogyo Kk トレハロ−スの製造方法
US4762857A (en) * 1986-05-30 1988-08-09 E. I. Du Pont De Nemours And Company Trehalose as stabilizer and tableting excipient
US4839164A (en) * 1987-02-24 1989-06-13 Estee Lauder, Inc. Trehalose containing cosmetic composition and method of using it
GB8715238D0 (en) * 1987-06-29 1987-08-05 Quadrant Bioresources Ltd Food process
JP3134229B2 (ja) 1990-03-08 2001-02-13 株式会社林原生物化学研究所 ラクトスクロース高含有粉末の製造方法とその粉末の用途
FI904124A (fi) * 1990-08-20 1992-02-21 Alko Ab Oy Oligosackaridblandning och foerfarande foer dess framstaellning.
FI905402A (fi) * 1990-11-01 1992-05-02 Alko Ab Oy Oligosackaridblandning och foerfarande foer dess efterbehandling.
ES2136115T3 (es) * 1992-12-28 1999-11-16 Hayashibara Biochem Lab Enzima formadora de sacaridos no reductores, y su preparacion y usos.
JP3559585B2 (ja) * 1993-06-03 2004-09-02 株式会社林原生物化学研究所 トレハロース遊離酵素とその製造方法並びに用途
JP3557277B2 (ja) * 1994-06-25 2004-08-25 株式会社林原生物化学研究所 耐熱性トレハロース遊離酵素とその製造方法並びに用途
AU695080B2 (en) * 1994-06-24 1998-08-06 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Thermostable non-reducing saccharide-forming enzyme, its production and uses

Cited By (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7186535B1 (en) 1998-09-11 2007-03-06 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Non-reducing saccharide-forming enzyme, trehalose-releasing enzyme, and process for producing saccharides using the enzymes
US7575900B2 (en) 1998-09-11 2009-08-18 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Non-reducing saccharide-forming enzyme, trehalose-releasing enzyme, and process for producing saccharides using the enzymes
US7582463B2 (en) 1998-09-11 2009-09-01 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Non-reducing saccharide-forming enzyme, trehalose-releasing enzyme, and process for producing saccharides using the enzymes
JPWO2004056216A1 (ja) * 2002-12-19 2006-04-20 株式会社林原生物化学研究所 組成物における水分の変動を抑制する方法とその用途
JP4536002B2 (ja) * 2002-12-19 2010-09-01 株式会社林原生物化学研究所 組成物における水分の変動を抑制する方法とその用途
WO2004071472A1 (ja) * 2003-02-13 2004-08-26 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo α,α−トレハロースの糖質誘導体を含有することを特徴とする皮膚外用剤
JP4904811B2 (ja) * 2003-02-13 2012-03-28 株式会社林原生物化学研究所 α，α−トレハロースの糖質誘導体を含有することを特徴とする皮膚外用剤
EP3143983A1 (en) 2003-02-13 2017-03-22 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo External dermatological formulation comprising saccharide derivative of alpha, alpha-trehalose
JP2006526418A (ja) * 2003-06-05 2006-11-24 カーギル，インコーポレイティド トレハロースとタンパク質との飲料用添加混合物
JP2005013227A (ja) * 2003-06-06 2005-01-20 Hayashibara Biochem Lab Inc 加工品の品質保持方法
JPWO2005096830A1 (ja) * 2004-04-02 2008-02-21 不二製油株式会社 餅種食品の製造法
JP2015172079A (ja) * 2011-09-21 2015-10-01 株式会社林原 α，α−トレハロース二含水結晶含有粉末の製造方法
KR20170103988A (ko) 2011-09-21 2017-09-13 가부시기가이샤하야시바라 α,α-트레할로스 이수화물 결정 함유 분말의 제조방법
JP2015110615A (ja) * 2011-09-21 2015-06-18 株式会社林原 α，α−トレハロース二含水結晶含有粉末の製造方法
KR20200140392A (ko) 2011-09-21 2020-12-15 가부시기가이샤하야시바라 α,α-트레할로스 이수화물 결정 함유 분말의 제조방법
AU2012310757B2 (en) * 2011-09-21 2016-05-12 Hayashibara Co., Ltd. Production method for powder containing crystalline alpha, alpha-trehalose dihydrate
WO2013042587A1 (ja) 2011-09-21 2013-03-28 株式会社林原 α，α－トレハロース二含水結晶含有粉末の製造方法
JP2017063791A (ja) * 2011-09-21 2017-04-06 株式会社林原 α，α−トレハロース二含水結晶含有粉末の製造方法
US9657045B2 (en) 2011-09-21 2017-05-23 Hayashibara Co., Ltd. Process for producing a particulate composition comprising crystalline trehalose dihydrate
US9738674B2 (en) 2011-09-21 2017-08-22 Hayashibara Co., Ltd. Process for producing a particulate composition comprising crystalline trehalose dihydrate
JP2015025012A (ja) * 2011-09-21 2015-02-05 株式会社林原 α，α−トレハロース二含水結晶含有粉末の製造方法
US9938311B2 (en) 2011-09-21 2018-04-10 Hayashibara Co., Ltd. Process for producing a particulate composition comprising crystalline alpha, alpha-trehalose di-hydrate
JP2018057385A (ja) * 2011-09-21 2018-04-12 株式会社林原 α，α−トレハロース二含水結晶含有粉末の製造方法
EP3404110A1 (en) 2011-09-21 2018-11-21 Hayashibara Co., Ltd. Particulate composition comprising crystalline alpha, alpha-trehalose dihydrate
KR20190006604A (ko) 2011-09-21 2019-01-18 가부시기가이샤하야시바라 α,α-트레할로스 이수화물 결정 함유 분말의 제조방법
US10196416B2 (en) 2011-09-21 2019-02-05 Hayashibara Co., Ltd. Process for producing a particulate composition comprising crystalline alpha, alpha-trehalose di-hydrate
US10301342B2 (en) 2011-09-21 2019-05-28 Hayashibara Co., Ltd. Process for producing a particulate composition comprising crystalline α,α-trehalose di-hydrate
JP2014054209A (ja) * 2012-09-12 2014-03-27 Hayashibara Co Ltd α，α−トレハロース二含水結晶含有粉末の製造方法
WO2021039833A1 (ja) 2019-08-29 2021-03-04 国立大学法人愛媛大学 培養組織の製造方法、及び外用剤

Also Published As

Publication number Publication date
CA2152563A1 (en) 1995-12-28
KR960000912A (ko) 1996-01-25
KR100362688B1 (ko) 2003-05-09
EP0691407B1 (en) 2002-09-04
IL114031A0 (en) 1995-10-31
DE69528019D1 (de) 2002-10-10
DE69528019T2 (de) 2003-05-22
US5919668A (en) 1999-07-06
ES2182869T3 (es) 2003-03-16
TW426736B (en) 2001-03-21
DE69528019T9 (de) 2004-09-09
JP3793590B2 (ja) 2006-07-05
EP0691407A1 (en) 1996-01-10
CA2152563C (en) 2008-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100394149B1 (ko) 트레할로오스와그제조방법및용도
JP3559585B2 (ja) トレハロース遊離酵素とその製造方法並びに用途
JP4249055B2 (ja) 非還元性糖質生成酵素とその製造方法並びに用途
JP3633648B2 (ja) マルトース・トレハロース変換酵素とその製造方法並びに用途
JP3182679B2 (ja) 非還元性オリゴ糖とその製造方法並びに用途
JP3793590B2 (ja) 非還元性糖質とその製造方法並びに用途
JP3557277B2 (ja) 耐熱性トレハロース遊離酵素とその製造方法並びに用途
KR100362689B1 (ko) 환원성이감소된당질조성물과그제조방법및용도
KR100391375B1 (ko) 내열성 비환원성 당질 생성 효소와 그 제조방법 및 용도
JP3662972B2 (ja) 非還元性糖質とその製造方法並びに用途
JP3557287B2 (ja) 耐熱性非還元性糖質生成酵素とその製造方法並びに用途
JP4070250B2 (ja) 還元性を低減させた糖質とその製造方法並びに用途
JP3616166B2 (ja) トレハロースとその製造方法並びに用途
JP5240480B2 (ja) トレハロース遊離酵素とその製造方法並びに用途
JP3963491B2 (ja) 結晶マルトシルグルコシドとその製造方法並びに用途
US5908767A (en) Non-reducing saccharide and its production and use
JP3725148B2 (ja) マルトース・トレハロース変換酵素とその製造方法並びに用途

Legal Events

Date Code Title Description
A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20040817

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20041012

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20041207

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20050329

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20050519

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20060404

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20060410

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130414

Year of fee payment: 7

S111 Request for change of ownership or part of ownership

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130414

Year of fee payment: 7

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150414

Year of fee payment: 9

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees