JPH0822861B2

JPH0822861B2 - 多環性キサントン系化合物

Info

Publication number: JPH0822861B2
Application number: JP1996887A
Authority: JP
Inventors: 親生西野; 孝次小林; 幹雄菊地; 治行大岸; 隆三川; 淳一大矢; 茂佐藤; 耕一郎平山
Original assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Priority date: 1987-01-30
Filing date: 1987-01-30
Publication date: 1996-03-06
Anticipated expiration: 2011-03-06
Also published as: JPS63188683A

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は新規な多環性キサントン（polycyclic xanth
on）系化合物に関するものである。

（発明の構成）従来、多環性キサントン系化合物としては、例えば、
ストレプトマイセス属菌の生産するCervinomycin（JAC
S,108,6088（1986））およびLysolipin（Helvetica Chi
mica Acta,60,178（1977）、Arch Microbiol.,106,175
（1975））、アクチノマイセス属菌の生産するAlbofung
in（Bioorg.Khim.,4,1418（1978）、Tetrahedron Let
t.,1972,1751）等が知られている。

本発明者らは、各種の微生物を探索し、それらが生産
する生理活性物質について種々検討したところ、アクチ
ノプラネス（Actinoplanes）属菌が生産する多環性キサ
ントン系化合物が新規でしかも良好な制癌活性を有する
ことを見い出し、本発明を完成するに至つた。

即ち、本発明の要旨は、下記一般式〔Ｉ〕（式中、Ｘ及びＹは、水素原子、ハロゲン原子またはア
ミノ基を表わす。）で表わされる多環性キサントン系化合物に存する。

以下、本発明を詳細に説明する。本発明の多環性キサ
ントン系化合物は前記一般式〔Ｉ〕で表わされるが、式
中、Ｘが水素原子またはハロゲン原子を表わし、Ｙが水
素原子またはアミノ基を表わす化合物が好適である。

本発明の多環性キサントン系化合物は、アクチノプラ
ネス属に属する菌株であつて、具体的には、例えば、ア
クチノプラネスエスピー R-304（Actinoplanes sp.R
-304）を培養することによつて得られる。

このアクチノプラネスエスピー R-304は微工研菌
寄第9132号（FERM P-9132）として寄託されている。

上記アクチノプラネスエスピー R-304の形態学的
特徴、各種培地上の性状及び生理的、生化学際性質は以
下に示す通りである。

1.形態的特徴胞子嚢形成培地としてキチン培地を用い、２〜３週間
平板培養した。胞子の鞭毛は胞子嚢を滅菌水に30分〜１
時間懸濁させ、胞子の遊泳を確認すると共に細菌鞭毛染
色法によつて染色した。胞子嚢の直径は７〜16.7μｍ、
球形〜不規則な亜球形を示す。胞子は1.0〜1.2μｍ、球
形、鞭毛を有する。

2.各種培地上の生育状態（各培地、30℃、21日後の特徴）イースト・麦芽寒天培地（ISP No.2）上の特性生育良好、にぶい橙色〜褐色、可溶性色素なし、胞子
嚢を形成する。

オートミール寒天培地（ISP No.3）上の特性生育良好、暗黄色〜黄褐色、可溶性色素なし、胞子嚢
を形成する。

スターチ・無機塩寒天培地（ISP No.4）上の特性生育良好、橙黄色〜黄土色、可溶性色素なし、胞子嚢
を形成する。

グリセリン・アスパラギン寒天培地（ISP No.5）上の
特性生育良好、黄褐色、可溶性色素なし、胞子嚢を形成し
ない。

ペプトン・イースト・鉄寒天培地（ISP No.6）上の特
性生育良好、暗褐色、可溶性色素を生産する、胞子嚢を
形成しない。

チロシン寒天培地（ISP No.7）上の特性生育良好、黄褐色〜暗褐色、可溶性色素なし、胞子嚢
を形成しない。

3.生理的性質（１）生育温度範囲：イースト・麦芽寒天培地におい
て、20〜37℃の温度範囲で生育し、30〜37℃で良好に生
育する。10℃、45℃では生育せず。

（２）ゼラチンの液化：陽性（３）スターチの加水分解：陽性（４）硝酸塩の還元：陽性（５）脱脂乳のペプトン化：陽性脱脂乳の凝固：陽性（６）メラニン様色素の生成：陽性（ペプトン・イースト・鉄寒天培地上） 4.炭素源の資化性（PridhammとGottliebの基礎培地）利用性記号＋：利用する、（＋）：利用する可能性あ
り、（−）：疑わしい、−：利用しない。

グルコース；＋、アラビノース；＋、シユクロース；
＋、キシロース；＋、ｉ−イノシトール；＋、Ｄ−マン
ニトール；＋、Ｄ−フラクトース；＋、ラムノース；
＋、ラフイノース；−、セルロース；− 5.細胞壁組成ベツカー（Becker）らの方法〔Appl.Microbiol.13:23
6（1965）〕により分析した結果、本菌株の細胞壁組成
の主要成分はmeso−ジアミノピメリン酸、キシロース、
アラビノースを含有する細胞壁タイプIID型であること
が判明した。

6.細胞壁のアシル型：グリコリル型以上の諸性質より本菌株はBergey′s Manual第８版
（1974）p.708に記載されているアクチノプラネス（Act
inoplanes）属に属する放線菌と考えるのが妥当であ
る。従つて、本発明者らは本菌株をActinoplanes sp.R-
304と同定した。

本発明で使用するActinoplanes属に属する菌株は、他
の放線菌と同様に、その性質が変化しやすく、例えば、
紫外線やＸ線、ニトロソグアニジン等の薬品等により変
異し得るが、これら変異株であつても本発明の多環性キ
サントン化合物を生産する性質を失わない限り、本発明
で使用することができる。

本菌株の培養は、通常の放線菌が利用し得る栄養物を
含有する培地で培養することができる。炭素源として
は、グルコース、水あめ、グリセロール、デキストリ
ン、シユークロース、澱粉、糖蜜、動・植物油等が使用
できる。また、窒素源としては、大豆粉、小麦はい芽、
コーンステイープリカー、綿実かす、肉エキス、ペプト
ン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム、尿素等が使用できる。その他、必要に応じてナトリ
ウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コバル
ト、塩素、燐酸、硫酸、或いは、他のイオンを生成し得
る無機塩類等公知の種々の添加剤を添加することができ
る。

培養は、好気的条件下での培養法、特に、深部培養法
が好適である。培養温度は、通常20〜37℃、好ましく
は、26〜30℃の範囲から選ばれる。

本発明の多環性キサントン化合物の生産は、培地や培
養温度等によつて異なるが、振とう培養及びタンク培養
とも通常２〜10日間の培養でその蓄積が最高に達する。

かくして得られた培養液から、常法に従い、溶媒抽
出、カラムクロマトグラフイー、分取薄層クロマトグラ
フイー等により処理して単離・精製することができる。

本発明のキサントン系化合物を制癌剤として用いる場
合、静脈内注射、皮下注射、経口カプセル等の方法で投
与され、投与量は、成人に対し、水溶剤（注射）では、
0.01〜1mg/kg体重、経口剤では、0.1〜10mg/kg体重の範
囲である。注射、点滴用製剤とするときは、単位投与量
アンプルあるいは添加防腐剤と共に多投与量容器中に提
供される。この製剤は、懸濁液、溶液、油性又は水性ビ
ヒクル中の乳液のような形態であつてよく、グルコー
ス、ゼラチンのような懸濁液、レシチン、リノール酸の
ような安定化剤、アーモンド油、ココナツト油のような
非水性ビヒクル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルのよう
な防腐剤を含んでいてもよい。

本発明のキサントン系化合物を含む制癌剤を経口投与
製剤とするには、カプセルのような腸管からの吸収に好
適な形態で提供されることが好ましい。カプセルでは、
ゼラチンのような結合剤、乳糖のような賦形剤、ステア
リン酸マグネシウムのような安定剤、馬鈴著澱粉のよう
な崩壊剤を含有させることができる。また、シクロデキ
ストリンのような包接剤による包接化合物とし、更に該
包接化合物をアクリル酸メチル・メタアクリル酸共重合
体のような腸溶性皮膜形成物質を用いて皮膜を施すこと
ができる。製剤化の方法は、注射、点滴用製剤、経口投
与用製剤のいずれの場合においても常法でよい。

（発明の効果）本発明のキサントン系化合物は、後述するように癌細
胞に対し、その増殖抑制作用を有するので、制癌剤とし
ての効果が期待され、また、一部の真菌、細菌に対して
も増殖抑制作用を有するので抗菌剤として農薬や飼料添
加剤等への適用が期待される。

（実施例）以下本発明を実施例により更に詳細に説明するが本発
明はその要旨を越えない限り以下の実施例によつて限定
されるものではない。

〔アクチノプラネスエスピーR-304の培養〕水あめ4.0％、大豆油0.3％、大豆粉2.0％、綿実かす
1.0％、サングレイン0.5％、CaCO₃0.3％、FeSO₄.7H₂O0.
001％、CoCl₂.6H₂O0.0001％及びNiCl₂・6H₂O0.0001％を
含有する種培地（pH7.0）を40mlずつ200mlの三角フラス
コ10本に分注して、121℃、20分間高圧滅菌した。

次いで、Actinoplanes sp.R-304株を１白金耳ずつ植
菌し、26℃で４日間、210回転にて振とう培養した。

得られた種培養物200mlを上記種培地と同一組成の培
地15lを含む30l容のタンク２基に夫々移植し、27℃で６
日間通気攪拌培養（通気量100％、210回転／分）した。

得られた培養物30lをフイルタープレスでろ過してろ
液（培養ブロス）27lを得た。

〔多環性キサントン系化合物の精製・単離〕

アクチノプラネスエスピー R-304の培養ブロス27l
に濃塩酸を加えてpH2に調整した後、酢酸エチル3lを用
い５回抽出し、抽出液に硫酸マグネシウムを加えて乾燥
後、減圧下濃縮して褐色油状残渣10.31gを得た。

本残渣を酢酸エチル500mlに溶解し、飽和重曹水100ml
で３回抽出し、分液して酢酸エチル層を採取し、硫酸マ
グネシウムを用いて乾燥した後、減圧下濃縮して褐色油
状物質1444mgを得た。

得られた褐色油状物質1444mgをシリカゲル（メルク社
製Silicagel60）70gを充填したカラムクロマトグラフイ
ーに対し、0.1％酢酸を含む種々の混合比のCHCl₃-CH₃OH
系展開溶媒（混合比99.5:0.5、99:1、98:2、96:4、90:1
0）各300mlを用いて、この順序で順次溶出し15mlまで分
画した。

27〜45の画分を混合し減圧濃縮して得られた382mgの
褐色油状物を、カラムとしてUnisil Q C8（ガスクロ工
業社製、10.7×250mm、粒径５μｍ）を用いた分取高速
液体クロマトグラフイー（溶離液:55％アセトニトリ
ル、流速:5ml/mm、検出器:RI検出器）に付し、保持時間
9.8分前後に現われるピーク相当部を集め、減圧濃縮し
て化合物R-304-Gを主成分とする黄色固形物100.2mgを得
た。

本物質を展開溶媒としてCHCl₃-CH₃OH（96:4）を用い
て分取薄層クロマトグラフイー（Pre-coated TLC plate
s Silicagel 60 F-254、メルク社製）に付し、R-304-G
（95.2mg）を得た。ついで46〜62の画分を混合し減圧濃
縮して得た393mgの褐色状油物をカラムとしてUnisil Q
C8（ガスクロ工業社製、10.7×250mm、粒径５μｍ）を
用いた分取高速液体クロマトグラフイー（溶離液:50％
アセトニトリル、流速:5ml/mm、検出器:RI検出器）に対
し、保持時間8.5分、9.5分、12.8分及び16.3分付近のピ
ーク相当部を集め、減圧濃縮して化合物R-304-K、Ｊ、
Ｈ及びＧを主成分とする黄色固形物を各々21.3mg、9.3m
g、73.2mg及び15.5mgずつ得た。各残渣は各々展開溶媒
としてCHCl₃-CH₃OH（96:4）を用いて上記同様、分取薄
層クロマトグラフイーに付し、各々、精製されたR-304-
K（17.5mg）、Ｊ（8.5mg）、Ｈ（62.7mg）及びＧ（12.1
mg）を得た。

なお、上記の単離精製操作は全て室温で実施した。

かくして得られた各物質の各種理化学的性質を表１に
示した。

また、これらの物質の¹H-NMR及び¹³C-NMRのデータ
は、夫々、表２及び表３に示す通りであり、以上の結果
からこれらの物質は、一般式〔Ｉ〕におけるＸ及びＹが
下記の構造を示すことが分つた。

参考例１各種腫瘍細胞増殖抑制試験試料物質R-304-Gをジメチルスルホオキシドに溶解
し、これを５％仔牛血清を加えたRPMI-1640培地で所定
濃度に希釈し、96穴のマイクロプレートに100μl/穴で
分注した。

これに１×10⁵個/mlに調製した各種腫瘍細胞の浮遊液
を100μl/穴加え、炭酸ガス雰囲気下37℃で４日間搭養
した。

培養後、浮遊性細胞、即ち、P-388、YAC-1、Rajiにつ
いては0.5％トリパンブルー液を50μl/穴加え顕微鏡下
で生細胞を数えた。また、付着性細胞、即ち、Hela、L-
929-（１）、CHO、VERO、KB、HLC、PLC、KN細胞につい
ては、ゲンチアナバイオレツト染色液でマイクロプレー
トの底に付着した腫瘍細胞を染色し、水で過剰の染色液
を洗浄後、染色された細胞の色素をエタノール（100μl
/穴）で溶出し、その濃度を分光光度計で測定した。

細胞数と染色された色素の量は比例するので、上記で
測定した試料の各濃度に対する色素濃度を、浮遊性細胞
の場合は、生細胞数をプロツトし、このグラフから対照
（試料物質がない場合）における腫瘍細胞の数（100％
とする）の50％に相当する試料物質の濃度をED₅₀として
求めた。その結果を表４に示した。

また、対照薬としてマイトマイシンＣ（商品名；協和
醗酵社製）、アドリアマイシン（商品名；協和醗酵社
製）を用い、その結果も併記した。

参考例２参考例１において、試料物質として表５に示した化合
物を使用し、腫瘍細胞としてHelaを使用して、同様にし
てED₅₀を求めた。その結果を表５に示した。

参考例3 R-304-Gの抗菌及び抗真菌作用抗菌作用については以下の方法で試験を行つた。すな
わち、試料物質R-304-Gを少量のジメチルスルホキシド
に溶解し、滅菌した蒸留水で希釈し、シヤーレに滅菌し
た感受性デイスク培地（日水製薬株式会社製）で試料物
質の希釈系列を作つた。被検菌はハートインフユージヨ
ブロス培地（日水製薬株式会社製）で18〜20時間、37℃
で培養した菌液を滅菌生理食塩水で100倍に希釈したも
のをシヤーレの寒天上に１白金耳塗布した。

次いで、37℃で18〜20時間培養後、寒天上の菌の生育
の有無を肉眼で観察し、菌の生育の見られない最小希釈
濃度を最小阻止濃度（MIC）とし、その結果を表６に示
した。又、抗真菌作用はサブロー寒天培地を用い抗菌試
験と同様な方法で試料物質の希釈系列を作つた。被験菌
は各々の菌のスラントに、0.2％トウイーン80（Tween8
0）を含んだ滅菌生理食塩水を3ml加え白金耳で胞子の懸
濁液を作成し、滅菌生理食塩水で希釈し、OD₅₆₀で0.02
となる様に調製した菌液を１白金耳寒天上に塗布した。
これを27℃で５〜７日間培養後、寒天上の菌の生育の有
無を肉眼で観察し、菌の生育の見られない最小希釈濃度
を最小阻止濃度（MIC）とし、その結果を表６に示し
た。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:045） (72)発明者三川隆神奈川県横浜市緑区鴨志田町1000番地三菱化成工業株式会社総合研究所内 (72)発明者大矢淳一神奈川県横浜市緑区鴨志田町1000番地三菱化成工業株式会社総合研究所内 (72)発明者佐藤茂神奈川県横浜市緑区鴨志田町1000番地三菱化成工業株式会社総合研究所内 (72)発明者平山耕一郎神奈川県横浜市緑区鴨志田町1000番地三菱化成工業株式会社総合研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記一般式〔Ｉ〕（式中、Ｘ及びＹは、水素原子、ハロゲン原子またはア
ミノ基を表わす。）で表わされる多環性キサントン系化合物。
【請求項２】一般式〔Ｉ〕において、Ｘが水素原子また
はハロゲン原子を表わし、Ｙが水素原子またはアミノ基
を表わす特許請求の範囲第１項記載の多環性キサントン
系化合物。