JPH0798775B2 - クロロゲン酸分離回収法 - Google Patents
クロロゲン酸分離回収法Info
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- JPH0798775B2 JPH0798775B2 JP62501107A JP50110787A JPH0798775B2 JP H0798775 B2 JPH0798775 B2 JP H0798775B2 JP 62501107 A JP62501107 A JP 62501107A JP 50110787 A JP50110787 A JP 50110787A JP H0798775 B2 JPH0798775 B2 JP H0798775B2
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- extract
- acid
- separation
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
- C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
- C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
- C07C69/732—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids of unsaturated hydroxy carboxylic acids
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
- A23F5/00—Coffee; Coffee substitutes; Preparations thereof
- A23F5/02—Treating green coffee; Preparations produced thereby
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
- C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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- C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
- C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C67/56—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
- C07C69/74—Esters of carboxylic acids having an esterified carboxyl group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
- C07C69/757—Esters of carboxylic acids having an esterified carboxyl group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
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- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 本発明は、適当な植物原料の抽出とその抽出物の処理に
よって，クロロゲン酸を分離回収する簡単な方法に関す
る。
よって，クロロゲン酸を分離回収する簡単な方法に関す
る。
K.Gorter,Liebigs Ann.358,327−348（1908）,K.Freude
nberg,Ber.53,232−239（1920），ならびにW.Plcker
およびW.Keilholz,Z.Lebensmittelunters.u.Forsch.66,
200−238（1933）が，すでにクロロゲン酸回収法につい
て述べている。従来公知のどの方法でも，第１段階は，
カリウム−カフェイン−クロロゲン酸塩錯体の回収であ
る。この錯体は，例えばエタノール／水から数回再結晶
を行うか，あるいは酢酸鉛で沈澱させるなどの様々な方
法で精製し得る。精製した錯体からのカフェインの分離
は，例えばクロロホルムを用いた水溶液の抽出によって
行うことができる。クロロゲン酸は，次いで硫酸の添加
によって沈澱させ，水からの再結晶によってさらに精製
し得る。クロロゲン酸の収率は，未加工のコーヒーの使
用量を基準にすると１％であるが，未加工のコーヒー中
に含まれているクロロゲン酸の量を基準にすると，約20
％の収率である。
nberg,Ber.53,232−239（1920），ならびにW.Plcker
およびW.Keilholz,Z.Lebensmittelunters.u.Forsch.66,
200−238（1933）が，すでにクロロゲン酸回収法につい
て述べている。従来公知のどの方法でも，第１段階は，
カリウム−カフェイン−クロロゲン酸塩錯体の回収であ
る。この錯体は，例えばエタノール／水から数回再結晶
を行うか，あるいは酢酸鉛で沈澱させるなどの様々な方
法で精製し得る。精製した錯体からのカフェインの分離
は，例えばクロロホルムを用いた水溶液の抽出によって
行うことができる。クロロゲン酸は，次いで硫酸の添加
によって沈澱させ，水からの再結晶によってさらに精製
し得る。クロロゲン酸の収率は，未加工のコーヒーの使
用量を基準にすると１％であるが，未加工のコーヒー中
に含まれているクロロゲン酸の量を基準にすると，約20
％の収率である。
他のクロロゲン酸回収法は，従来の方法を改良するか，
あるいは組み合わせたものである。例えば,U.Fiedler,A
rzneimittelforschung 4,41−45（1954）が述べている
のは,Freudenbergの方法と、PlckerおよびKeiholzの
方法とを組み合わせたものである。この方法では、生の
コーヒー豆を乾燥させて粉砕し，次いで，まず石油エー
テルで抽出し，さらに熱湯で抽出する。この抽出は，抽
出液がクロロゲン酸をもはや含有しなくなるまで続け
る。集めた抽出液を蒸発によって濃縮し，酢酸バリウム
で沈澱させる。次いで、濾液を硫酸で厳密に中和する。
その際，同時に過剰のバリウムが除去される。中性の濾
液から，酢酸鉛を使ってクロロゲン酸を錯体として分離
させる。これを熱湯で洗浄し，引続き，熱湯中に懸濁さ
せた後，硫化水素で分解する。濃縮した濾液を冷蔵庫の
中に２〜３日入れておくと，濾液からカリウム−カフェ
イン−クロロゲン酸塩錯体が分離する。この錯体からカ
フェインをクロロホルムで除去し，最後に弱酸性化する
ことにより，遊離クロロゲン酸が得られる。
あるいは組み合わせたものである。例えば,U.Fiedler,A
rzneimittelforschung 4,41−45（1954）が述べている
のは,Freudenbergの方法と、PlckerおよびKeiholzの
方法とを組み合わせたものである。この方法では、生の
コーヒー豆を乾燥させて粉砕し，次いで，まず石油エー
テルで抽出し，さらに熱湯で抽出する。この抽出は，抽
出液がクロロゲン酸をもはや含有しなくなるまで続け
る。集めた抽出液を蒸発によって濃縮し，酢酸バリウム
で沈澱させる。次いで、濾液を硫酸で厳密に中和する。
その際，同時に過剰のバリウムが除去される。中性の濾
液から，酢酸鉛を使ってクロロゲン酸を錯体として分離
させる。これを熱湯で洗浄し，引続き，熱湯中に懸濁さ
せた後，硫化水素で分解する。濃縮した濾液を冷蔵庫の
中に２〜３日入れておくと，濾液からカリウム−カフェ
イン−クロロゲン酸塩錯体が分離する。この錯体からカ
フェインをクロロホルムで除去し，最後に弱酸性化する
ことにより，遊離クロロゲン酸が得られる。
Chemical Abstracts 73,32171E（1970）には，ケイ酸カ
ラムクロマトグラフィーと，クロロホルム−ブタノール
を用いた濃度勾配による溶離によって，クロロゲン酸異
性体を溶離する方法が述べられている。Chemical Abstr
acts 89,88927D（1978）には,Dowex 44,Amberlite IRA
410またはIRA 47,およびDowex 11と同様，生のコーヒー
豆の水性抽出液から陰イオン交換体によってクロロゲン
酸を抽出する方法が述べられている。
ラムクロマトグラフィーと，クロロホルム−ブタノール
を用いた濃度勾配による溶離によって，クロロゲン酸異
性体を溶離する方法が述べられている。Chemical Abstr
acts 89,88927D（1978）には,Dowex 44,Amberlite IRA
410またはIRA 47,およびDowex 11と同様，生のコーヒー
豆の水性抽出液から陰イオン交換体によってクロロゲン
酸を抽出する方法が述べられている。
従来公知の方法は非常に煩雑であり，高い収率を期待で
きないことは明らかである。従って，市場で入手し得る
クロロゲン酸は，非常に高価格である。その上，市場に
出回っているのは,3−クロロゲン酸または異性体混合物
だけであり,4−クロロゲン酸または５−クロロゲン酸を
経済的に回収する有用な方法は，これまで知られていな
い。ここに言う３−クロロゲン酸とは,3−カフェオイル
−キナ酸のことであり，以下，この意味において使用す
る。同じく，ここでは異性体のことを４−クロロゲン酸
または５−クロロゲン酸と呼ぶ。
きないことは明らかである。従って，市場で入手し得る
クロロゲン酸は，非常に高価格である。その上，市場に
出回っているのは,3−クロロゲン酸または異性体混合物
だけであり,4−クロロゲン酸または５−クロロゲン酸を
経済的に回収する有用な方法は，これまで知られていな
い。ここに言う３−クロロゲン酸とは,3−カフェオイル
−キナ酸のことであり，以下，この意味において使用す
る。同じく，ここでは異性体のことを４−クロロゲン酸
または５−クロロゲン酸と呼ぶ。
本発明の基礎をなす主題は，毒物学的に危険性のない補
助的な化学薬品を必要とせずに遊離クロロゲン酸または
その塩を分離回収する簡単な方法を開発することであ
る。さらに，該方法は，必要に応じて３つの異性体への
分離を可能にするものである。
助的な化学薬品を必要とせずに遊離クロロゲン酸または
その塩を分離回収する簡単な方法を開発することであ
る。さらに，該方法は，必要に応じて３つの異性体への
分離を可能にするものである。
本発明の目的は，適当な（すなわち，十分な量のクロロ
ゲン酸を含有する）植物原料の抽出とその抽出物の処理
によってクロロゲン酸を分離回収する方法であって，架
橋された修飾多糖類，特に架橋デキストランからなるモ
レキュラーシーブを用いたゲル濾過クロマトグラフィー
によってクロロゲン酸を抽出物から分離させ，クロロゲ
ン酸および／またはクロロゲン酸を含まない抽出物を回
収することを特徴とするものである。
ゲン酸を含有する）植物原料の抽出とその抽出物の処理
によってクロロゲン酸を分離回収する方法であって，架
橋された修飾多糖類，特に架橋デキストランからなるモ
レキュラーシーブを用いたゲル濾過クロマトグラフィー
によってクロロゲン酸を抽出物から分離させ，クロロゲ
ン酸および／またはクロロゲン酸を含まない抽出物を回
収することを特徴とするものである。
架橋された修飾多糖類を用いた濾過クロマトグラフィー
は，通常，物質混合物を分子の大きさに応じて分離させ
るのに役立つ。すなわち，分子は，その大きい方から順
に溶出液中に現れる。従って，クロロゲン酸を含有する
植物抽出液をこのように分離させた場合，クロロゲン酸
は溶離スペクトルのほぼ中心に，同等または類似の分子
量を有する一連の物質と共に出現すると予想し得る。と
ころが，意外なことに，クロロゲン酸は，特にデキスト
ランゲルからなるモレキュラーシーブにおいて，その分
子量に見合った挙動を示さないことがわかった。本発明
によれば，架橋された修飾多糖類，特にデキストラン
は，クロロゲン酸に対して選択的な保持能を示すことが
確認された。すなわち，クロロゲン酸は，その分子の大
きさから予想されるよりはるかに長い時間保持されるの
である。
は，通常，物質混合物を分子の大きさに応じて分離させ
るのに役立つ。すなわち，分子は，その大きい方から順
に溶出液中に現れる。従って，クロロゲン酸を含有する
植物抽出液をこのように分離させた場合，クロロゲン酸
は溶離スペクトルのほぼ中心に，同等または類似の分子
量を有する一連の物質と共に出現すると予想し得る。と
ころが，意外なことに，クロロゲン酸は，特にデキスト
ランゲルからなるモレキュラーシーブにおいて，その分
子量に見合った挙動を示さないことがわかった。本発明
によれば，架橋された修飾多糖類，特にデキストラン
は，クロロゲン酸に対して選択的な保持能を示すことが
確認された。すなわち，クロロゲン酸は，その分子の大
きさから予想されるよりはるかに長い時間保持されるの
である。
意外にも，植物抽出物中に含まれ，クロロゲン酸より大
きな分子量を有する物質およびクロロゲン酸より小さな
分子量を有する物質の大部分は，広範囲の画分として分
離カラムから溶出し，クロロゲン酸が選択的に保持され
る。クロロゲン酸は，さらに溶出することによって，比
較的純粋にかつ明確に分離された画分として得られる。
分離に適した物質は，例えば商品名セファデックスとい
う架橋デキストランゲルである。本発明によれば，さら
に，使用するるデキストランの架橋の度合の高いものを
選択すると分離性が良くなる。つまり，与えられたカラ
ム長において，より高い架橋度を有するデキストランゲ
ルを用いると，より低い架橋度のゲルを用いるときより
もよりシャープな分離が達成される。ゲルの架橋度は，
そのゲルの膨潤性の指標として役に立つ。架橋度が高く
なると膨潤性が悪くなる。従って，例えば,100mlの膨潤
したゲルを生成させるにはセファデックス G25の乾燥
物を25g必要とする。他方，同時のゲル容量を得るに
は，より架橋度の高いセファデックス G10の場合には4
0gを必要とする。分離に適当な温度は約10〜80℃の範囲
であり，通常の方法においては室温は好適である。分離
には，通常，植物抽出物水性溶液が用いられる。従って
溶離媒質は最終的には水であり得る。しかし，水と，例
えばアルコールとでなる混合物もまた用いられ得る。溶
媒混合物を選択することにより，そのつど所望の溶媒系
の極性が確保される。
きな分子量を有する物質およびクロロゲン酸より小さな
分子量を有する物質の大部分は，広範囲の画分として分
離カラムから溶出し，クロロゲン酸が選択的に保持され
る。クロロゲン酸は，さらに溶出することによって，比
較的純粋にかつ明確に分離された画分として得られる。
分離に適した物質は，例えば商品名セファデックスとい
う架橋デキストランゲルである。本発明によれば，さら
に，使用するるデキストランの架橋の度合の高いものを
選択すると分離性が良くなる。つまり，与えられたカラ
ム長において，より高い架橋度を有するデキストランゲ
ルを用いると，より低い架橋度のゲルを用いるときより
もよりシャープな分離が達成される。ゲルの架橋度は，
そのゲルの膨潤性の指標として役に立つ。架橋度が高く
なると膨潤性が悪くなる。従って，例えば,100mlの膨潤
したゲルを生成させるにはセファデックス G25の乾燥
物を25g必要とする。他方，同時のゲル容量を得るに
は，より架橋度の高いセファデックス G10の場合には4
0gを必要とする。分離に適当な温度は約10〜80℃の範囲
であり，通常の方法においては室温は好適である。分離
には，通常，植物抽出物水性溶液が用いられる。従って
溶離媒質は最終的には水であり得る。しかし，水と，例
えばアルコールとでなる混合物もまた用いられ得る。溶
媒混合物を選択することにより，そのつど所望の溶媒系
の極性が確保される。
本発明によれば，「クロロゲン酸」とは遊離の酸および
その塩を包含する。直物抽出物の水溶液のpH値を測定す
ると，クロロゲン酸は大部分が塩の形態で存在するらし
い。コケモモの葉の水抽出物のpH値は約3.8,そして，未
加工のコーヒーの抽出物のそれは約5.5の値となる。
その塩を包含する。直物抽出物の水溶液のpH値を測定す
ると，クロロゲン酸は大部分が塩の形態で存在するらし
い。コケモモの葉の水抽出物のpH値は約3.8,そして，未
加工のコーヒーの抽出物のそれは約5.5の値となる。
本発明の方法により実質的に遊離のクロロゲン酸が調製
されるので対応する抽出物のpH値は低くなるはずであ
る。植物抽出物のpH値を約２から2.8としたときに，遊
離のクロロゲン酸が架橋デキストランにより容易にかつ
比較的純粋な形で分離されることがわかった。従って，
酸を加えてpH値を降下させるか否かは重要なことではな
い。塩酸および硫酸のような鉱酸が特に有用であること
が証明された。荷電の程度を決定するときに，酸の添加
なしに必要な酸性のpH値に調整することが有利である。
これは，陽イオン交換体により抽出液を処理することに
より達成される。
されるので対応する抽出物のpH値は低くなるはずであ
る。植物抽出物のpH値を約２から2.8としたときに，遊
離のクロロゲン酸が架橋デキストランにより容易にかつ
比較的純粋な形で分離されることがわかった。従って，
酸を加えてpH値を降下させるか否かは重要なことではな
い。塩酸および硫酸のような鉱酸が特に有用であること
が証明された。荷電の程度を決定するときに，酸の添加
なしに必要な酸性のpH値に調整することが有利である。
これは，陽イオン交換体により抽出液を処理することに
より達成される。
特に良好な分離が達成されるのは，架橋度の異なる少な
くとも２種のデキストランゲルを使用し，第１のゲルの
溶出液のクロロゲン酸含有部分を引続き２のゲルに加え
た場合である。その場合，最初の分離には，架橋度の低
いゲルを使用する。膨潤度が低く，架橋度がより高いデ
キストランマトリクス（例えばセファデックス G15）
は，本発明によれば，架橋度のより高くないタイプ（例
えばセファデックス G25）よりも溶離能にすぐれてい
る。もちろん，これが実際的な適用に際して決定的に重
要であるというわけではない。例えば，粘度の高い溶液
の分離には流動性にすぐれたゲルが要求され，これに
は，低い架橋度のデキストラン（例えばセファデックス
G25粗粒子）が好適である。
くとも２種のデキストランゲルを使用し，第１のゲルの
溶出液のクロロゲン酸含有部分を引続き２のゲルに加え
た場合である。その場合，最初の分離には，架橋度の低
いゲルを使用する。膨潤度が低く，架橋度がより高いデ
キストランマトリクス（例えばセファデックス G15）
は，本発明によれば，架橋度のより高くないタイプ（例
えばセファデックス G25）よりも溶離能にすぐれてい
る。もちろん，これが実際的な適用に際して決定的に重
要であるというわけではない。例えば，粘度の高い溶液
の分離には流動性にすぐれたゲルが要求され，これに
は，低い架橋度のデキストラン（例えばセファデックス
G25粗粒子）が好適である。
さらに，本発明による方法では，上記実施態様に述べた
ように，つまりpH2程度の場合でも充分な長さの分子ふ
るいカラムを使用すれば，クロロゲン酸の異性体が分離
される。この場合には，溶出液中に５−クロロゲン酸,4
−クロロゲン酸そして３−クロロゲン酸は順次現れ，分
離捕集できる。このようにして，個々の異性体のほぼ純
粋な調製物が得られる。
ように，つまりpH2程度の場合でも充分な長さの分子ふ
るいカラムを使用すれば，クロロゲン酸の異性体が分離
される。この場合には，溶出液中に５−クロロゲン酸,4
−クロロゲン酸そして３−クロロゲン酸は順次現れ，分
離捕集できる。このようにして，個々の異性体のほぼ純
粋な調製物が得られる。
本発明による方法でクロロゲン酸を塩の形で分離して得
ようとするときは，植物の水抽出液を自然のままのpH値
で使用することができる。これは，クロロゲン酸塩が遊
離した抽出物をそのままの形で食品分野に使用できる利
点を持つ。
ようとするときは，植物の水抽出液を自然のままのpH値
で使用することができる。これは，クロロゲン酸塩が遊
離した抽出物をそのままの形で食品分野に使用できる利
点を持つ。
もちろん，本発明のこのような実質態様の場合，達成さ
れる分離効率は，酸性化した抽出物から遊離クロロゲン
酸を分離回収する場合より低い。従って，本発明のこの
ような実施態様では，架橋度の高いゲルを用いて選択性
を高めることが重大な意味を持つことになる。
れる分離効率は，酸性化した抽出物から遊離クロロゲン
酸を分離回収する場合より低い。従って，本発明のこの
ような実施態様では，架橋度の高いゲルを用いて選択性
を高めることが重大な意味を持つことになる。
第１図（ａ）〜（ｃ）に示すように，ある与られたカラ
ムの長さにおける選択性は，分離すべき植物抽出液のpH
値の関数であり，そして，用いるデキストランゲルの架
橋度の関数である。カフェインを除去したコーヒー豆抽
出物を酸性化せずに自然のままのpH値5.6で使ってクロ
ロゲン酸を分離させ，そして，セファデックス G25,G1
5およびG10をpH2.5に酸性化し，クロロゲン酸を分離さ
せた。ここで，架橋度は,G25（第１図（ａ））が最も小
さく,G10（第１図（ｃ））が最も高い。これ以外は同一
の条件で行った。ここで，ゲル容量は150ml,流速は150m
l/h,そして温度は25℃である。溶離液を電気電動検出器
でチェックした。乾燥物濃度20g/100mlの抽出物を20mg
ずつカラムに入れた。第１図（ａ）に示すように,pH2.5
の場合，架橋度の低いセファデックス G25ですでにク
ロロゲン酸のはっきりした分離が認められるが，他方,p
H5.6の場合はピークが大きく重なり合う。さらに架橋度
の高いゲルであるG15を用いると，抽出物を酸性化しな
くても，クロロゲン酸は残余の成分からほぼ完全に分離
する（第１図（ｂ））参照）。セファデックス G10を
用いると，抽出物を酸性化しなくても，個々の異性体が
分離し始めることによりクロロゲン酸のピークの幅広い
ベースができる（第１図（ｃ））。従って,pH値が2.8を
越える場合（通常，植物水性出液を調製する場合はそう
である）は，特に架橋度のより高いゲル，例えばセファ
デックス G15,あるいはさらに架橋度の高いゲルを用い
る。カラムの長さをさらに長くすることにより,pH2.8を
越える植物抽出液からそれぞれ得られたクロロゲン酸
が，きれいに分離できることが明らかである。
ムの長さにおける選択性は，分離すべき植物抽出液のpH
値の関数であり，そして，用いるデキストランゲルの架
橋度の関数である。カフェインを除去したコーヒー豆抽
出物を酸性化せずに自然のままのpH値5.6で使ってクロ
ロゲン酸を分離させ，そして，セファデックス G25,G1
5およびG10をpH2.5に酸性化し，クロロゲン酸を分離さ
せた。ここで，架橋度は,G25（第１図（ａ））が最も小
さく,G10（第１図（ｃ））が最も高い。これ以外は同一
の条件で行った。ここで，ゲル容量は150ml,流速は150m
l/h,そして温度は25℃である。溶離液を電気電動検出器
でチェックした。乾燥物濃度20g/100mlの抽出物を20mg
ずつカラムに入れた。第１図（ａ）に示すように,pH2.5
の場合，架橋度の低いセファデックス G25ですでにク
ロロゲン酸のはっきりした分離が認められるが，他方,p
H5.6の場合はピークが大きく重なり合う。さらに架橋度
の高いゲルであるG15を用いると，抽出物を酸性化しな
くても，クロロゲン酸は残余の成分からほぼ完全に分離
する（第１図（ｂ））参照）。セファデックス G10を
用いると，抽出物を酸性化しなくても，個々の異性体が
分離し始めることによりクロロゲン酸のピークの幅広い
ベースができる（第１図（ｃ））。従って,pH値が2.8を
越える場合（通常，植物水性出液を調製する場合はそう
である）は，特に架橋度のより高いゲル，例えばセファ
デックス G15,あるいはさらに架橋度の高いゲルを用い
る。カラムの長さをさらに長くすることにより,pH2.8を
越える植物抽出液からそれぞれ得られたクロロゲン酸
が，きれいに分離できることが明らかである。
クロロゲン酸およびその異性体は，高速液体クロマトグ
ラフィー（HPLC）によって単一の溶出画分に存在するこ
とが分析され得る。このように，一定のカラム充填剤お
よび与えられたカラム長に対して，どの溶出画分にクロ
ロゲン酸が含まれ，最初に含まれていた不純物質がどの
程度まで分離されたかを確認することができる。クロロ
ゲン酸を含む溶出画分から，前述の常套手段で，特に気
をつけて実施例の方法で凍結乾燥することにより単離
し，固体物質として得られる。不純物を含む画分は，ク
ロロゲン酸を含まない植物抽出物の１つを得るために，
適当な処理を行い得る。
ラフィー（HPLC）によって単一の溶出画分に存在するこ
とが分析され得る。このように，一定のカラム充填剤お
よび与えられたカラム長に対して，どの溶出画分にクロ
ロゲン酸が含まれ，最初に含まれていた不純物質がどの
程度まで分離されたかを確認することができる。クロロ
ゲン酸を含む溶出画分から，前述の常套手段で，特に気
をつけて実施例の方法で凍結乾燥することにより単離
し，固体物質として得られる。不純物を含む画分は，ク
ロロゲン酸を含まない植物抽出物の１つを得るために，
適当な処理を行い得る。
出発物質は，クロロゲン酸を充分な量含有する植物材料
が適している。次の表は，植物材料が含有しているクロ
ロゲン酸量を分析したものであり，この定量分析はHPLC
を用いて行った。
が適している。次の表は，植物材料が含有しているクロ
ロゲン酸量を分析したものであり，この定量分析はHPLC
を用いて行った。
従来公知の方法に対して，本発明によれば一連の長所が
与えられる。この方法は非常に簡便であり，工程が少な
く，高価な装置を必要としない。特に重要であるのは，
植物原料に含有されるクロロゲン酸をほぼ完全に単離
し，回収し得るということである。さらに重要なこと
は，この方法が生のコーヒー豆のようなカフェインを含
有する原料に限定されないことだけでなく，他の安い原
料をも用い得ることである。
与えられる。この方法は非常に簡便であり，工程が少な
く，高価な装置を必要としない。特に重要であるのは，
植物原料に含有されるクロロゲン酸をほぼ完全に単離
し，回収し得るということである。さらに重要なこと
は，この方法が生のコーヒー豆のようなカフェインを含
有する原料に限定されないことだけでなく，他の安い原
料をも用い得ることである。
モレキュラーシーブの分離特性が明らかに非常に長い間
保持されるので，この方法は半ば連続的に実行される可
能性がある。例えば，架橋デキストランをカラムにつめ
た後,100回以上溶出しても一定の再現性を示す。溶出は
そのつど，以下のような構成で行う。
保持されるので，この方法は半ば連続的に実行される可
能性がある。例えば，架橋デキストランをカラムにつめ
た後,100回以上溶出しても一定の再現性を示す。溶出は
そのつど，以下のような構成で行う。
− 抽出液の添加， − 不純物の溶出， − クロロゲン酸の溶出および − 洗浄。
ゲルを洗浄して直ちに次の溶出を行い得る。カラムが汚
染された場合には，充填剤をよく知られた方法で簡単に
洗浄し得る。濾過率を低下させる未知成分は，ゲルを水
中で撹拌することにより，水洗いして除去し得る。強く
保持された色素成分は,0.2％の水酸化ナトリウム液を用
いて，分離特性に影響を及ぼすことなく，ゲルから除去
し得る。本発明を以下の実施例でさらに詳しく説明す
る。
染された場合には，充填剤をよく知られた方法で簡単に
洗浄し得る。濾過率を低下させる未知成分は，ゲルを水
中で撹拌することにより，水洗いして除去し得る。強く
保持された色素成分は,0.2％の水酸化ナトリウム液を用
いて，分離特性に影響を及ぼすことなく，ゲルから除去
し得る。本発明を以下の実施例でさらに詳しく説明す
る。
実施例１ コケモモの葉からの遊離クロロゲン酸の回収 ゲル175mlを調製するために，架橋デキストラン（セフ
ァデックス G25粗）35gを過剰の水で一晩膨潤させた。
こうして得られたゲルをカラムに充填し,2つのアダプタ
の間に固定させた。
ァデックス G25粗）35gを過剰の水で一晩膨潤させた。
こうして得られたゲルをカラムに充填し,2つのアダプタ
の間に固定させた。
コケモモの葉（原産国ソ連）50gを80℃の脱イオン水500
mlで抽出した。希釈した抽出液を濾過し，真空中で25ml
に濃縮した。濃縮液は，クロロゲン酸1.1gおよび他の抽
出成分9.0gを含有した。37％塩酸1.25mlを用いて，抽出
液のpH値を3.8から2.0に変えた。
mlで抽出した。希釈した抽出液を濾過し，真空中で25ml
に濃縮した。濃縮液は，クロロゲン酸1.1gおよび他の抽
出成分9.0gを含有した。37％塩酸1.25mlを用いて，抽出
液のpH値を3.8から2.0に変えた。
溶液を管ポンプで分離カラムに注入し，次いで水を用い
て100ml/hの一定流量でこの溶液を溶出した。フラクシ
ョン・コレクターを使って溶出液を25mlの画分に分別し
た。
て100ml/hの一定流量でこの溶液を溶出した。フラクシ
ョン・コレクターを使って溶出液を25mlの画分に分別し
た。
これらの画分におけるクロロゲン酸含量は,HPLCを用い
て求めた。第２図は，溶出容量に依存するHPLC溶出曲線
を示す。同図から，溶出容量200mlまでの画分にはクロ
ロゲン酸が含有されないことがわかる。
て求めた。第２図は，溶出容量に依存するHPLC溶出曲線
を示す。同図から，溶出容量200mlまでの画分にはクロ
ロゲン酸が含有されないことがわかる。
選択した分離条件下では，クロロゲン酸は溶離容量200
〜425mlの範囲内にある。選びだした画分をひとまとめ
にし，真空中で濃縮し，その後，凍結乾燥させた。得ら
れた乾燥物質を所定の量の水に溶かした後，その中のク
ロロゲン酸含量をHPLCを用いて標準物質量との比較によ
り求めた。
〜425mlの範囲内にある。選びだした画分をひとまとめ
にし，真空中で濃縮し，その後，凍結乾燥させた。得ら
れた乾燥物質を所定の量の水に溶かした後，その中のク
ロロゲン酸含量をHPLCを用いて標準物質量との比較によ
り求めた。
得られた乾燥物質の量と，そこから求めたクロロゲン酸
含量を表２に示す。
含量を表２に示す。
表から，これらの調製物が依然としていろいろな割合で
他の物質に汚染されていることがわかる。これは,HPLC
ピーク図を見てもわかる。
他の物質に汚染されていることがわかる。これは,HPLC
ピーク図を見てもわかる。
クロロゲン酸を含有する乾燥物質を再び25mlの水に溶解
したが，この際pH値は2.3を示した。そして,150mlのゲ
ル（セファデックス G15）で精製した。処理の方法
は，前述の分離法と同じである。第２のカラムでは，ク
ロロゲン酸は溶離容量650〜1150mlの範囲内で得られ
た。ここでも，選びだした画分をひとまとめにし，真空
中で濃縮し，その後，凍結乾燥させた。乾燥調製物にお
いて，前述の通りその純度を調べた。その結果を表３に
示す。
したが，この際pH値は2.3を示した。そして,150mlのゲ
ル（セファデックス G15）で精製した。処理の方法
は，前述の分離法と同じである。第２のカラムでは，ク
ロロゲン酸は溶離容量650〜1150mlの範囲内で得られ
た。ここでも，選びだした画分をひとまとめにし，真空
中で濃縮し，その後，凍結乾燥させた。乾燥調製物にお
いて，前述の通りその純度を調べた。その結果を表３に
示す。
数値から，さらに再結晶処理を加えずとも，すでに94％
を超える純度のクロロゲン酸が得られたことがわかる。
を超える純度のクロロゲン酸が得られたことがわかる。
第３図は，いろいろな溶出容量における乾燥調製物のHP
LC溶出曲線を示す。HPLCピーク図は，こうして得られた
クロロゲン酸調製物の純度を示している。
LC溶出曲線を示す。HPLCピーク図は，こうして得られた
クロロゲン酸調製物の純度を示している。
実施例２ 変形された精製方法 第１の工程と同様の適当な大きさのカラムを用いること
によって，より高い純度が得られる可能性が存在する
が，どのような方法が有用であるかはその場合に応じて
決定される。出発物質のクロロゲン酸含量が決定的であ
る。乾燥抽出物中のクロロゲン酸成分は10％より少ない
ので,2つの分離カラムを用いて操作することが重要であ
る。従って，両方のカラムを通過する間にクロロゲン酸
溶液を濃縮する必要はない。以下のように行うのが有用
である：植物抽出物は，約25％溶液として第１のカラム
（例えば，セファデックス G25粗）に導かれる。最初
に流出する，不純物を含む溶出液は，次第に少なくな
る。クロロゲン酸が第１のカラムの先端に達したら，溶
出液を直接，第２のカラム（例えば，セファデックス
G15）に通す。このような方法では，クロロゲン酸を精
製するために用意された第２のカラムに不純物の主要部
分は装填されない。
によって，より高い純度が得られる可能性が存在する
が，どのような方法が有用であるかはその場合に応じて
決定される。出発物質のクロロゲン酸含量が決定的であ
る。乾燥抽出物中のクロロゲン酸成分は10％より少ない
ので,2つの分離カラムを用いて操作することが重要であ
る。従って，両方のカラムを通過する間にクロロゲン酸
溶液を濃縮する必要はない。以下のように行うのが有用
である：植物抽出物は，約25％溶液として第１のカラム
（例えば，セファデックス G25粗）に導かれる。最初
に流出する，不純物を含む溶出液は，次第に少なくな
る。クロロゲン酸が第１のカラムの先端に達したら，溶
出液を直接，第２のカラム（例えば，セファデックス
G15）に通す。このような方法では，クロロゲン酸を精
製するために用意された第２のカラムに不純物の主要部
分は装填されない。
実施例３ クロロゲン酸−異性体混合物の分離 この実験では,2つの分離カラムが直列に接続された−す
なわち,175mlのセファデックス G25粗を有するカラム
と150mlのセファデックス G15を有するカラム。1.6gの
クロロゲン酸−異性体混合物を40℃の水10mlに溶解さ
せ，この酸性溶液を出発層として管ポンプで分離系に装
填した。溶出には水を用い，流出速度は75ml/hであっ
た。流出した溶出液は,25mlごとに分別し,HPLCを用いて
クロロゲン酸を分析した。
なわち,175mlのセファデックス G25粗を有するカラム
と150mlのセファデックス G15を有するカラム。1.6gの
クロロゲン酸−異性体混合物を40℃の水10mlに溶解さ
せ，この酸性溶液を出発層として管ポンプで分離系に装
填した。溶出には水を用い，流出速度は75ml/hであっ
た。流出した溶出液は,25mlごとに分別し,HPLCを用いて
クロロゲン酸を分析した。
第４図には，溶出容量に依存するクロロゲン酸濃度を示
す。３つのクロロゲン酸−異性体が明瞭に分離されてい
ることがわかる。クロロゲン酸−異性体の距離は，分離
カラムを延長することによって，さらに引き離し得る。
す。３つのクロロゲン酸−異性体が明瞭に分離されてい
ることがわかる。クロロゲン酸−異性体の距離は，分離
カラムを延長することによって，さらに引き離し得る。
実施例４ pH無調整での未加工のコーヒーからのクロロゲン酸塩の
回収 100gの脱カフェインした未加工のコーヒー（原産国コロ
ンビア）を,80℃の脱イオン水300mlで抽出した。得られ
た抽出液は,pH値5.6を示した。次いで，この溶液を50ml
まで濃縮した。抽出液の濃度は,22.5g乾燥物質/100mlで
あった。この溶液20mlを管ポンプを用いて150mlのゲル
（セファデックス G15）を有するカラムに移した。
回収 100gの脱カフェインした未加工のコーヒー（原産国コロ
ンビア）を,80℃の脱イオン水300mlで抽出した。得られ
た抽出液は,pH値5.6を示した。次いで，この溶液を50ml
まで濃縮した。抽出液の濃度は,22.5g乾燥物質/100mlで
あった。この溶液20mlを管ポンプを用いて150mlのゲル
（セファデックス G15）を有するカラムに移した。
このカラムは，水を用いて65℃の温度および300ml/hの
流出速度で溶出した。溶出液は,25mlごとの画分を採集
し，これらの画分のクロロゲン酸含量をHPLCによって測
定した。
流出速度で溶出した。溶出液は,25mlごとの画分を採集
し，これらの画分のクロロゲン酸含量をHPLCによって測
定した。
結果は表４に示す。150mlの溶出容量までの画分はクロ
ロゲン酸を含まないことがわかった。150mlと225mlの間
の溶出容量では,70.7％の純度のクロロゲン酸（主にＫ
塩として）が既に第１回目の通過で得られた。
ロゲン酸を含まないことがわかった。150mlと225mlの間
の溶出容量では,70.7％の純度のクロロゲン酸（主にＫ
塩として）が既に第１回目の通過で得られた。
収率は，装填された乾燥物質のクロロゲン酸含量に関し
て97.9％であった。
て97.9％であった。
フロントページの続き (72)発明者 ルッツ，ヘニング ドイツ連邦共和国 デ−−2083 ハルステ ンベック，ハ−ゲンヴィッシュ ２ア− (72)発明者 バル，ミカエル ドイツ連邦共和国 デ−−2083 ハルステ ンベック，ハ−ゲンヴィッシュ ２チェ− (72)発明者 ヒュ−ベルト，ペ−タ− ドイツ連邦共和国 デ−−2150 ブックス テ ヒュ−デ，ハ−ゼンカンプ 21 (56)参考文献 Ｃｈｅｍ．Ａｂｓｔｒ．，Ｖｏｌ．89 （1977），58408
Claims (3)
- 【請求項１】クロロゲン酸を分離し、回収し、そして精
製する方法であって、 植物原料からクロロゲン酸を抽出する工程； 実質的に遊離したクロロゲン酸を回収するために、植物
の水性抽出液のpH値を２から2.8の範囲に調整する工
程； セファデックスG10、G15、またはG25を用いたゲル濾過
クロマトグラフィーによってクロロゲン酸を不純物から
分離する工程；および 該クロロゲン酸を回収する工程； を包含する、方法。 - 【請求項２】前記ゲル濾過クロマトグラフィーが、セフ
ァデックスG10、G15、およびG25からなる群から選択さ
れる、少なくとも２つの架橋度が異なるゲルを用いて行
われ、第１のゲルがより低い架橋度を有し、該第１のゲ
ルからの抽出液のクロロゲン酸含有溶出画分を第２のゲ
ル上に装填する、請求の範囲第１項に記載の方法。 - 【請求項３】異性体である５−、４−、および３−クロ
ロゲン酸が、異性体を互いに分離し得る長さを有するゲ
ル濾過クロマトグラフィーにより分離される、請求の範
囲第１項または第２項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3603574A DE3603574C1 (de) | 1986-02-06 | 1986-02-06 | Verfahren zur Gewinnung von Chlorogensaeure |
| DE3603574.2 | 1986-02-06 | ||
| PCT/EP1987/000049 WO1987004704A1 (en) | 1986-02-06 | 1987-02-03 | Process for separating and producing chlorogenic acid |
| EP87110394A EP0299107B1 (de) | 1986-02-06 | 1987-07-17 | Verfahren zur Abtrennung und Gewinnung von Dicaffeoyl-chinasäuren |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63502434A JPS63502434A (ja) | 1988-09-14 |
| JPH0798775B2 true JPH0798775B2 (ja) | 1995-10-25 |
Family
ID=39671641
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62501107A Expired - Lifetime JPH0798775B2 (ja) | 1986-02-06 | 1987-02-03 | クロロゲン酸分離回収法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4872987A (ja) |
| EP (2) | EP0258297B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0798775B2 (ja) |
| AT (1) | ATE75720T1 (ja) |
| CA (1) | CA1292014C (ja) |
| DE (2) | DE3603574C1 (ja) |
| WO (1) | WO1987004704A1 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| DE3603574C1 (de) * | 1986-02-06 | 1987-07-23 | Ergo Forschungsgmbh | Verfahren zur Gewinnung von Chlorogensaeure |
| DE3806372A1 (de) * | 1988-02-24 | 1989-08-31 | Code Kaffee Handel | Verfahren zur abtrennung und gewinnung von coffein aus rohkaffee und zur gewinnung von entcoffeiniertem kaffee |
| JPH09143465A (ja) * | 1995-11-21 | 1997-06-03 | Dainippon Ink & Chem Inc | 抗酸化性組成物 |
| US6083921A (en) * | 1998-01-12 | 2000-07-04 | Xu; Kai Jian | Pharmaceutical compositions and method of using same |
| KR20010087593A (ko) * | 2000-03-08 | 2001-09-21 | 김권 | 남성 생식기능 저하 예방 및 치료 효과를 지닌클로로제닉산을 주요 성분으로 하는 약제학적 조성물 |
| US20030003212A1 (en) | 2001-06-13 | 2003-01-02 | Givaudan Sa | Taste modifiers |
| JP2006160721A (ja) * | 2004-11-09 | 2006-06-22 | Kao Corp | 大脳疲労回復剤 |
| CN1300096C (zh) * | 2005-03-22 | 2007-02-14 | 中国药科大学 | 从忍冬属植物叶中提取酚酸化合物的方法 |
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| FR2926955B1 (fr) | 2008-02-01 | 2012-07-20 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede de preparation d'acides dicafeoylquiniques et leur utilisation dans la lutte contre les pucerons |
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| CN101941908A (zh) * | 2010-09-10 | 2011-01-12 | 武汉巨惠绿色产业发展有限公司 | 一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法 |
| KR101182582B1 (ko) * | 2012-04-27 | 2012-09-18 | 주식회사 휴온스 | 활성성분이 증대된 금은화 정제물을 제조하는 제조방법 및 이를 함유한 패혈증 및 패혈성 쇼크의 치료 및 예방용 조성물 |
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| CN104345110B (zh) * | 2013-08-08 | 2017-06-16 | 河北以岭医药研究院有限公司 | 一种中药组合物制剂中七种成分的含量测定方法 |
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| CN105061212B (zh) * | 2015-08-13 | 2018-03-09 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种新绿原酸的制备方法 |
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| CN110903191A (zh) * | 2018-09-17 | 2020-03-24 | 泰州医药城国科化物生物医药科技有限公司 | 一种金银花中提取绿原酸的方法 |
| AU2020273144A1 (en) | 2019-04-06 | 2021-11-04 | Cargill, Incorporated | Methods for making botanical extract composition |
| CN118063319A (zh) * | 2024-04-17 | 2024-05-24 | 诸城市浩天生物科技有限公司 | 一种利用甜叶菊提取液制备高纯绿原酸的方法 |
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