JPH1036275A - 抗酸化性組成物およびその製造方法 - Google Patents
抗酸化性組成物およびその製造方法Info
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Abstract
物の提供ならびに当該抗酸化性組成物の製造方法の提
供。 【解決手段】 1)牡蠣肉の熱水分画に終濃度40(W
/W)%以上になるようにエタノールを加えることによ
って得た上清(第1工程)を2)固形分含量30〜45
(W/W)%に濃縮する工程(第2工程)に付した後、
3)終濃度55〜70(W/W)%になるようにエタノ
ールを加え、沈澱物を回収すること(第3工程)を特徴
とする抗酸化性組成物の製造方法。
Description
ら得られる抗酸化性組成物およびその製造方法に関す
る。
性を持つ活性酸素と呼ばれるスーパーオキシドアニオン
ラジカルを生成する。これは、過酸化水素やヒドロキシ
ラジカルに変換され、人体に様々な酸化的障害を引き起
こす。そのために老化やガンの発生をはじめとする様々
な疾病が引き起こされるのではないかと考えられてい
る。このような酸化的障害に対する生体の防御作用とし
てスーパーオキシドジスムターゼ(SOD)などの抗酸
化酵素や生体内の抗酸化物質の重要性が認識されてい
る。また、食品として摂取される抗酸化物質も、酸化的
障害の防止の面で大きな役割を果たしているのではない
かと注目されている。
タウリン、グリコーゲン、蛋白質、その他有用な物質が
多量に含まれている。本発明者らは従来牡蠣肉の成分に
ついて種々研究を重ね、牡蠣肉中に存在する抗酸化性組
成物を高純度に得ることに成功した。
熱水抽出物から得られる抗酸化性組成物を提供すること
である。本発明の他の目的は当該抗酸化性組成物の製造
方法を提供することである。
に鑑み鋭意研究を重ねた結果、アルコール分画における
アルコール濃度の調整ならびに固形分含量の調整によ
り、優れた抗酸化性組成物を得ることができることを見
出し本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は下
記の通りである。 (1)1)牡蠣肉の熱水分画に終濃度40(W/W)%
以上になるようにエタノールを加えることによって得た
上清(第1工程)を2)固形分含量30〜45(W/
W)%に濃縮する工程(第2工程)に付した後、3)終
濃度55〜70(W/W)%になるようにエタノールを
加え、沈澱物を回収すること(第3工程)を特徴とする
抗酸化性組成物の製造方法。 (2)工程3)に付す前に、pHを3以下に調整するこ
とを特徴とする上記(1)記載の抗酸化性組成物の製造
方法。 (3)下記条件から選ばれる少なくとも1つの条件を満
足する上記(1)または(2)記載の抗酸化性組成物の
製造方法。 第1工程におけるエタノール終濃度が40〜50(W
/W)%である。 第2工程における固形分含量が35〜40(W/W)
%である。 第3工程におけるエタノール終濃度が60(W/W)
%程度である。 (4)以下の特性を有する抗酸化性組成物。 i)分子量1000〜5000のものを多く含有する画分
である ii)UV吸収スペクトル:(図1参照) λmax (水溶液):267.5nm、198nm iii)ニンヒドリン反応:陽性 iv)主成分:低分子ペプチド v)溶解性:水溶性 vi)色:濃褐色。 (5)上記(1)〜(3)のいずれかに記載の方法にて
調製される上記(4)記載の抗酸化性組成物。
次のようにして調製される。即ち、牡蠣肉に熱水を加
え、沈澱物を除去した上清画分を得ることによって行わ
れる。本発明の原料となる牡蠣肉は当該抗酸化活性を保
持している限りはその形状は特に限定されず、生、凍結
状態はもとより、牡蠣肉を乾燥し粉末状に製したものも
用いることができる。熱水分画における熱水温度は、通
常50〜90℃、好ましくは70〜80℃程度であり、
抽出時間は、通常2〜3時間である。
4〜5(W/W)%程度であるから、濃縮によって当該
固形分含量を20〜40(W/W)%とすることが好ま
しい。この濃縮率が上記の範囲外であると、蛋白質、糖
質等の沈澱が効率よく行われない。
る、即ち疎水性と親水性の割合を変化させることにより
沈澱を生じさせることが知られている。本発明の第1工
程において、熱水分画で得た上清を終濃度40(W/
W)%以上、好ましくは40〜50(W/W)%程度の
エタノール分画に付す。エタノール終濃度が40(W/
W)%未満の場合は、抗酸化活性には余分な高分子量の
蛋白質や糖質が十分に除去されない。さらに、得られる
上清および沈澱の抗酸化活性に差が見られない。終濃度
が50(W/W)%を超える場合は、エタノール分画に
よる効果が飽和される。分画処理時間は、通常、1〜2
4時間、好ましくは5〜12時間である。
含量を変えることにより、分子間結合力が変化する。分
子間結合力が強すぎても弱すぎても沈澱しにくくなる。
固形分含量が低くなると、イオン強度も低くなり分子間
結合力が低下するため沈澱する量が少なくなる。本発明
の第2工程においては、上記のエタノール分画に付して
得られた上清を、固形分含量30〜45(W/W)%、
好ましくは35〜40(W/W)%になるまで濃縮す
る。固形分含量が30(W/W)%未満の場合、沈澱量
が少なく、沈澱の抗酸化活性も低い。固形分含量が45
(W/W)%よりも多い場合、抗酸化活性には余分な不
純物も沈澱するため沈澱物の抗酸化活性の比活性は低下
する。濃縮は、例えば、加熱濃縮、膜濃縮、冷凍濃縮な
どによって、特に好適には減圧加熱濃縮によって行われ
る。さらに固形分含量は例えばブリックス計(例えばア
タゴ社製手持屈折計等)を用いてブリックス(糖度)と
して求めることができる。
下、好ましくはpH3程度に調整する。当該pH調整
は、通常酸(例えば、塩酸、クエン酸など)を添加する
ことによって行われる。蛋白質、ペプチドは等電点のp
Hにおいて最も沈澱し易くなり、pHが3よりも高い場
合、得られる沈澱量が少ない。
濃度が55〜70(W/W)%、好ましくは60(W/
W)%程度となるように添加し、遠心分離し、沈澱物を
回収する。当該沈澱物は高濃度に抗酸化性組成物を含有
し、抗酸化作用を示す。エタノール終濃度が55(W/
W)%未満では抗酸化性組成物の収率が低く、得られる
沈澱と上清において抗酸化活性に差がない。70(W/
W)%よりも濃い場合では沈澱物の量は多くなるが混在
する余分な成分も同様に沈澱するため抗酸化活性の比活
性が低下する。
酸化活性の他には、以下のような特性を有する。 i)分子量1000〜5000のものを多く含有する画分
である ii)UV吸収スペクトル: λmax (水溶液):267.5nm、198nm iii)ニンヒドリン反応:陽性 iv)主成分:低分子ペプチド v)溶解性:水溶性 vi)色:濃褐色。
公知の方法が用いられる。すなわち、分子量はアルコー
ル分画に付した場合の、沈澱形成の有無という挙動によ
り推定される。UV吸収スペクトルは通常使用される吸
光度計を用いて測定することが可能である。水に対する
溶解性ならびに色の観察は、日本薬局方に規定される方
法に準じて観察される。さらに、主成分を確認する方法
としては、通常用いられている、各成分に特異的な呈色
反応や定性反応あるいは定量反応を利用することができ
る。ニンヒドリン反応は蛋白質、ポリペプチドやアミノ
酸の存在を確認することができ、又ペプチドの存在は高
速液体クロマトグラフ法により確認し得る。
び実験例を述べることによって更に詳細に本発明を説明
するが、本発明はこれによって何ら限定されるものでは
ない。
〜3時間熱水抽出し、1500rpm(日立製作所)、
10分間遠心分離に付す。その上清を加熱濃縮にて固形
分含量が20〜40(W/W)%になるまで濃縮する。
得られた濃縮液にエタノールを終濃度が40(W/W)
%になるように加え、12時間静置後、3000rpm
(日立製作所)、10分間遠心分離し上清を回収する
(第1工程)。さらにその上清を50℃でロータリーエ
バポレーターを用いて減圧加熱濃縮にて固形分含量が3
7(W/W)%になるまで濃縮する(第2工程)。得ら
れた上清に0.1Mの塩酸を加えてpHを3に調整す
る。固形分含量およびpHを調整した当該溶液にエタノ
ールを終濃度が60(W/W)%になるように加え、1
2時間静置した後、3000rpm(日立製作所)、1
0分間遠心分離し、沈澱物を抗酸化性組成物として回収
した(第3工程)。得られた沈澱物の特性を調べた。
アルコール分画に付して得られる上清をさらに60(W
/W)%のアルコール分画に付した後に得られた沈澱物
であることから分子量1000〜5000のものを多く
含む画分であると推定される。 ii)得られた沈澱物の少量を水に溶かし、そのUV吸収
スペクトルをUV2400 PC(島津製作所製)を用
いて測定した。結果を図1に示す。結果、吸収ピークは
267.5nmおよび198nmにあった。 iii)得られた沈澱物の少量を水に溶かし、ニンヒドリン
試薬(0.2gニンヒドリンを水10mlに溶解したも
の)を添加し、加熱冷却すると、青紫色(陽性)を呈し
た。 iv)以下の条件で高速液体クロマトグラフ法を用いて分
析したところ、ピークが検出され、ペプチドの存在を確
認した。 条件: カラム:Shodex Asahipak ODP−5
0 6E 溶出液:0.1M過塩素酸ナトリウム+0.1%リン酸
ナトリウム緩衝液(pH2)/アセトニトリル=90/
10 0.1M過塩素酸ナトリウム+0.1%リン酸ナトリウ
ム緩衝液(pH2)/アセトニトリル=60/40 の60分間のリニアグラジエント(linear gr
adient) 流速:1.0ml/分 検出器:SPD−10A(島津製作所製) カラム温度:30℃ v)水への溶解性は常温で、色は白紙上において確認し
た。結果、水に対して可溶であり、又色は濃褐色であっ
た。以上の結果より前述の抗酸化性組成物の特性と一致
していた。
W)%になるように濃縮する点以外は実施例1と同じ操
作を繰り返し、沈澱物を得た。得られた沈澱は上述の抗
酸化性組成物の特性と同一の特性を有していた。
調整して得られる溶液にエタノールを終濃度が70(W
/W)%になるように加える点以外は実施例1と同じ操
作を繰り返し、沈澱物を得た。得られた沈澱は上述の抗
酸化性組成物と同一の特性を有していた。
タノールを加えない点以外は実施例1と同じ操作を繰り
返し、沈澱物を得た。
(W/W)%になるように濃縮する点以外は実施例1と
同じ操作を繰り返し、沈澱物を得た。
調整して得られる溶液にエタノールを終濃度が80(W
/W)%になるように加える点以外は実施例1と同じ操
作を繰り返し、沈澱物を得た。
の牡蠣肉熱水抽出物あたりに得られる沈澱物の量および
その沈澱の抗酸化活性を調べた。本実験例においては抗
酸化活性の測定は、活性酸素(スーパーオキシドアニオ
ン)の消去活性を測定することにより行なった。活性酸
素消去活性の測定は、ESRスピントラップ法にて行な
った。ESRスピントラップ法とは、非常に不安定なラ
ジカルをトラップ剤と反応させて、比較的安定なラジカ
ルとして検出する方法である。本実験例では、活性酸素
をキサンチン−キサンチンオキシダーゼ系により生成さ
せ、スピントラップ剤としてDMPO(5,5−ジメチ
ル−1−ピローレン−1−オキシド)を用いて測定し
た。生成させた活性酸素を50%消去するのに要する試
料の量(IC50)を活性酸素の消去活性、即ち抗酸化活
性とした。結果を表1に示す。
化性組成物が効率よく、高い収率で得られる。
図である。
Claims (5)
- 【請求項1】 1)牡蠣肉の熱水分画に終濃度40(W
/W)%以上になるようにエタノールを加えることによ
って得た上清(第1工程)を2)固形分含量30〜45
(W/W)%に濃縮する工程(第2工程)に付した後、
3)終濃度55〜70(W/W)%になるようにエタノ
ールを加え、沈澱物を回収すること(第3工程)を特徴
とする抗酸化性組成物の製造方法。 - 【請求項2】 工程3)に付す前に、pHを3以下に調
整することを特徴とする請求項1記載の抗酸化性組成物
の製造方法。 - 【請求項3】 下記条件から選ばれる少なくとも1つの
条件を満足する請求項1または2記載の抗酸化性組成物
の製造方法。 第1工程におけるエタノール終濃度が40〜50(W
/W)%である。 第2工程における固形分含量が35〜40(W/W)
%である。 第3工程におけるエタノール終濃度が60(W/W)
%程度である。 - 【請求項4】 以下の特性を有する抗酸化性組成物。 i)分子量1000〜5000のものを多く含有する画分
である ii)UV吸収スペクトル:(図1参照) λmax (水溶液):267.5nm、198nm iii)ニンヒドリン反応:陽性 iv)主成分:低分子ペプチド v)溶解性:水溶性 vi)色:濃褐色。 - 【請求項5】 請求項1〜3のいずれかに記載の方法に
て調製される請求項4記載の抗酸化性組成物。
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