JPH0795957B2 - ２−ケト−ｌ−グロン酸の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、ビタミンＣ（Ｌ−アスコルビン酸）の合成前
駆体として有用な２−ケト−Ｌ−グロン酸の製造法に関
する。

従来の技術 ビタミンＣ合成前駆体として有用な２−ケト−Ｌ−グロ
ン酸は、ライヒシュタイン法〔ヘルベチカ・キミカ・ア
クタ（Helvetica Chimica Acta）第17巻311頁（193
4）〕によって工業的に生産されてきた。しかし、この
方法は工程数が多く、全体としての収率の向上が期待で
きないため、もっと有効な生産方法を見いだすことが必
要になってきた。

ライヒシュタイン法に代わる方法として、微生物によ
り、グルコースから５−ケト−グルコン酸を生成し、こ
れを化学的または微生物によりイドン酸とし、更にこれ
を微生物的に酸化して２−ケト−Ｌ−グロン酸に導く方
法（米国特許第2,421,611号）やグルコースから微生物
により2,5−ジケト−Ｄ−グルコン酸を生成し、化学的
または、微生物により２−ケト−Ｌ−グロン酸に還元す
る方法（特公昭39−14493号、特公昭53−25033号、特公
昭56−15877号、特公昭59−35920号〕が検討されてき
た。しかしこれらの方法に用いられる化学的還元工程
は、立体特異的でなく、前者ではＤ−グルコン酸を、後
者では、２−ケト−Ｄ−グルコン酸を副生し収率の低下
をきたす。またこの工程を微生物により行う場合は、還
元エネルギー源として余分の炭素源を供給せねばならな
い。

また、Ｌ−ソルボースを出発原料として２−ケト−Ｌ−
グロン酸を製造する方法がしられており、この場合は、
酸化工程のみで、還元工程を含まずに製造できる。この
方法の例として今までに、グルコノバクター（Gluconob
acter）属、シュードモナス属、セラチア（Serratia）
属、アクロモバクター（Achromobacter）属、アルカリ
ゲネス（Alcaligenes）属の細菌を用いた方法が知られ
ている〔バイオテクノロジー・アンド・バイオエンジニ
アリング（Biotechnology and Bioengineering）第14
巻799頁（1972）、特公昭41−159号、特公昭41−160
号、米国特許3,043,749号、特公昭49−39838号、中国微
生物学報，第20巻第246頁（1980）および第21巻第185頁
（1981）、ソ連特許第526,660号参照〕。しかしこれま
でに公表されている菌株によるＬ−ソルボースからの２
−ケト−Ｌ−グロン酸の生成収率は極めて低く、到底工
業的に利用し得るものではなかった。

発明が解決しようとする問題点 本発明者らは、Ｌ−ソルボースから高収率で２−ケト−
Ｌ−グロン酸を生成する微生物株を得るため、日本国内
で採取した土壌試料から多数の菌株を分離し、検索した
結果、従来の知見を遥かに上回る収率（消費糖当り約80
％）を示す細菌、分離菌株番号526−21,526−22及び526
−42の３菌株を見いだした。これら３菌株について鋭意
研究を行い、今までに知られていないシュードモナス属
の新菌種であることを見いだし、本発明を完成した。

問題点を解決するための手段 即ち、本発明は、シュードモナス・ソルボソキシダンス
に属し、Ｌ−ソルボースを２−ケト−Ｌ−グロン酸に酸
化する能力を有する微生物、またはその処理物を、Ｌ−
ソルボースと接触させて、２−ケト−Ｌ−グロン酸を生
成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする２−
ケト−Ｌ−グロン酸の製造法を提供するものである。本
発明では、極鞭毛を２本以上有する運動性桿菌で、グリ
セロールからジハイドロオキシアセトンを生成せず、イ
ソプレンユニット数10のユビキノンを有し、生育にチア
ミン、リボフラビン、およびパントテン酸を必須に要求
するシュードモナス属の新菌種であるシュードモナス・
ソルボソキシダンスを用いることができる。

本発明者らが見いだした３菌株の分類学的性状は、次の
通りである。

（ａ）形態 （１）桿菌。0.3〜0.5×0.7〜1.4μｍ。

（２）多形性は認められない。

（３）運動性があり、２本以上の極鞭毛有する。

（４）胞子を形成しない。

（５）グラム陰性。

（６）非抗酸性。

（ｂ）生育の状態 （１）肉汁寒天平板培養：生育中程度。円形、全縁、平
滑、乳白色の集落を形成する。

（２）肉汁寒天斜面培養：生育中程度。糸状、平滑、乳
白色。

（３）肉汁液体培養：生育中程度。沈澱を生じる。

（４）肉汁ゼラチン穿刺培養：上部のみ生育するが、ゼ
ラチンを液化しない。

（５）リトマスミルク：酸性化するが、凝固、分解は認
められない。

（ｃ）生理学的性質 （１）硝酸塩の還元は微弱。

（２）脱窒反応陰性。

（３）メチルレッド（MR）テストは弱陽性。

（４）フォーゲス・プロスカウエル（VP）テストは弱陽
性。

（５）インドールを生成しない。

（６）硫化水素を生成しない。

（７）デンプンの加水分解は陰性。

（８）クエン酸の利用性は陰性。

（９）アンモニウム塩を窒素源として利用できる。

（10）色素の生成は認められない。

（11）ウレアーゼ陽性。

（12）オキシダーゼ陽性。

（13）カタラーゼ陽性。

（14）15〜36℃で生育し、至適生育温度は30℃付近。pH
5.5〜8.7で生育し、至適生育pHは6.0〜7.5。

（15）好気的。

（16）ヒュー・ライフソンのOFテストは酸化的。

（17）Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコ
ース、Ｄ−マンノース、Ｄ−フラクトース、Ｄ−ガラク
トース、麦芽糖、しょ糖、乳糖、トレハロースから微弱
に酸を生成するが、ガスは生成しない。Ｄ−ソルビッ
ト、Ｄ−マンニット、イノシット、グリセリン、デンプ
ンから酸、ガスを生成しない。

（ｄ）その他の性質 （１）DNAのグアニンとシトシン含量は約67モル％であ
る。

（２）イソプレンユニット数10のユビキノンを有する。

（３）グリセロールからジハイドロオキシアセトンを生
成しない。

（４）生育にチアミン、リボフラビン、パントテン酸を
必須に要求し、ビチオン、カザミノ酸により生育を促進
される。

以上の分類学的性状を、バージーズ・マニュアル・オブ
・システマティック・バクテリオロジー（Bergey′ｓ
Manual of Systematic Bacte−riology）第１巻（19
84年）に照合してみると、これら菌株はいずれも、グラ
ム陰性、極鞭毛を有する運動性桿菌で、好気性、オキシ
ダーゼ陽性であることから、シュードモナス属の細菌種
と考えるのが妥当である。生育にビタミン、アミノ酸を
要求すること、DNAのグアニンとシトシンの含量が67モ
ル％であることから、この属のセクションIVに分類され
る。また、イソプレンユニット数10のユビキノンを有す
ることから、このセクションのシュードモナス ディミ
ニュータ（Pseudomonas diminuta）及びシュードモナス
ベシキュラリス（Pseudomonas vesicularis）に近縁な
種と考えられる。しかしながら、鞭毛の着生数、糖の資
化性等で、前記２菌種と異なり、シュードモナス属の既
知種の中に該当するものを見いだすことができず、この
属の新菌種と判断した。そこでこれら３菌株をシュード
モナス・ソルボソキシダンス（Pseudomonas sorbosoxid
ans）と命名し、昭和61年（1986年）４月11日に財団法
人発酵研究所（IFO）に、また昭和61年（1986年）４月2
6日に通商産業省工業技術院微生物工業技術研究（FRI）
に寄託した。これらの３菌株は、その後、昭和62年４月
３日にブダペスト条約の下FRIに寄託した。３菌株の分
離番号と菌株保存機関の受託番号は次の通りである。

分離菌株番号 FRI受託番号 IFO受託番号 526−21 FERM P−8750 IFO14501 （FERM BP−1334） 526−22 FERM P−8751 IFO14502 （FERM BP−1335） 526−42 FERM P−8752 IFO14503 （FERM BP−1336） 本発明に用いられる菌株は上記した３菌株は勿論のこ
と、３菌株を紫外線やＸ線を照射したり、Ｎ−メチル−
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ニトロソグア
ニジン）、メチルメタンスルホン酸、ナイトロジェンマ
スタードの様な変異誘起剤で処理して得られる変異株も
有利に用いられる。

その例としてシュードモナス・ソルボソキシダンス526
−21からニトロソグアニジン処理によって誘導されたSB
−15株を挙げることが出来る。SB−15株はＬ−ソルボー
スから２−ケト−Ｌ−グロン酸生成能が増強されている
他は、親株である526−21株と同じ分類学的性質を示し
た。

また、該SB−15株は、昭和62年４月23日にIFOに受託番
号IFO 14604として、昭和62年５月１日にFRIに受託番
号FERM BP−1356とそれぞれ寄託された。

本発明の方法は、前記菌株のいずれかを、Ｌ−ソルボー
スを含有する培地で培養してもよく、またＬ−ソルボー
スに前記菌株の菌体処理物を作用させてもよい。

本発明で用いられる「菌体処理物」とは、前記の菌株の
いずれかを培養して得られる培養物の洗浄菌体、アセト
ンパウダー、ポリアクリルアミドゲルまたは、Ｋ−カラ
ギーナン包括固定菌体等をいう。

原料のＬ−ソルボースは、培養当初から、使用する全量
を培地に加えてもよいし、何回かに分けるかまたは、連
続的に培養液に加えてもよい。

Ｌ−ソルボースと前記細菌とを接触させて行う反応で
は、Ｌ−ソルボースの濃度は、培地に対して３〜30％
（W/V）、好ましくは、５〜25％（W/V）である。

Ｌ−ソルボースと菌体処理物とを接触させる方法として
は、例えば、菌体処理物にＬ−ソルボース、２−（Ｎ−
モルフォリノ）エタンスルホン酸（MES）緩衝液（0.5
M、pH6.5）およびCaCO₃を加え、水で希釈して三角フラ
スコ中で振盪させる方法が挙げられる。

Ｌ−ソルボースと前記菌体処理物を接触させて行う反応
のＬ−ソルボースの濃度は0.1〜10％（W/V）、好ましく
は0.3〜３％（W/V）であり、菌体処理物の量は、処理前
の乾燥菌体として１〜30mg/ml、好ましくは３〜20mg/ml
である。反応液のpHは、5.5〜7.5に調整され、反応温度
は約20〜40℃、反応時間は、約１〜100時間である。

前記細菌株の培養に用いられる培地は、これらが利用し
得る栄養源を含むものであれば、液状でも固体状態でも
よいが、大量のものを得るときには、液体地養を用いる
のが好ましい。該培地には、通常微生物の培養に用いら
れる炭素源、窒素源、無機塩類、有機酸塩及び微量栄養
素が用いられる。炭素源としては、原料であるＬ−ソル
ボースを使用できるが、補助炭素源として、例えばグル
コース、グリセリン、ショ糖、乳糖、麦芽糖、糖蜜等が
使用される。窒素源としては、例えばアンモニウム塩、
コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、乾燥酵母、綿実粕、尿素等の無機及び有機の窒素含
有物が挙げられる。また、無機塩類としては、カリウ
ム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、マン
ガン、コバルト、亜鉛、銅及び燐酸の塩類が用いられ
る。微量栄養素としては、前記細菌株の生育必須或は促
進因子である、ビチオン、チアミン、リボフラビン、パ
ントテン酸及びアミノ酸類、またはこれらを含有する天
然物として適宜加えられる。

培養の手段は、静置培養でも、振盪培養或は通気攪拌培
養法等の手段を用いてもよいが、大量の処理は、いわゆ
る深部通気攪拌培養によるのが望ましい。

培養条件は、使用する菌株、培地の組成、その他によっ
ても異なり、要するに目的物が最も効率よく生産される
様に、個々の場合に応じて選択すればよい。例えば、培
養は25〜35℃において行うのがよく、培地のpHは５〜９
程度が望ましい。以上の様な条件下で、10〜120時間培
養することにより、２−ケト−Ｌ−グロン酸が最高濃度
に蓄積される。なお、この場合、目的物の生成に伴って
pHが低下するのが一般的であるので、適当な塩基性物
質、例えば苛性ソーダ、苛性カリ、アンモニア等を添加
して、常に微生物の２−ケト−Ｌ−グロン酸生成に最も
適したpHに保持するのもよく、また培地中に適当な緩衝
剤を添加して、最適なpHが保持される様にするのもよ
い。

この様にして、培養液中、または反応液中に生成、蓄積
された２−ケト−Ｌ−グロン酸は、その性状を利用した
それ自体公知の手段で分離、精製することができる。２
−ケト−Ｌ−グロン酸は遊離の酸として分離してもよ
く、またはナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモ
ニウム等の塩として分離してもよい。

分離の方法としては、目的に反しない限り、いかなるも
のでもよい。例えば、必要に応じて反応生成物から濾
過、遠心沈澱、或は活性炭処理等を行って菌体を除去し
た後、この溶液をそのまま濃縮し、析出する結晶を濾取
し、更に再結晶させて目的物を取り出す方法、溶媒抽出
法、クロマトグラフィー法、塩析法等を単独または、適
宜組み合せて、或は反復して利用することもできる。

２−ケト−Ｌ−グロン酸が遊離型で得られる場合は、こ
れを適宜の方法によって、例えばナトリウム、カリウ
ム、カルシウム、アンモニウム等の塩にしてもよく、ま
た塩として得られる場合は、これを適宜の方法によって
遊離型或は他の塩に変えてもよい。

本発明によって得られる目的物が、２−ケト−Ｌ−グロ
ン酸であることは、例えば元素分析、融点、施光度、赤
外線スペクトル等の物理化学的諸性質の測定によって同
定された。

反応液、培養液中に生成した２−ケト−Ｌ−グロン酸の
定量は、スルホン化ポリスチレンゲル充填カラム（島津
製作所製、SCR−101Hカラム、7.9mm×30cm）を用いる高
速液体クロマトグラフィー法（移動相:pH2.2の希硫酸、
流量:0.5ml/min、検出器：示差屈折計）で行い、標準品
としては、２−ケト−Ｌ−グロン酸ナトリウム１水塩の
結晶を使用した。また、２−ケト−Ｌ−グロン酸の検出
は、薄層クロマトグラフィー法で行った。セルロースプ
レート（メルク社製）にサンプルをスポットし、フェノ
ール：水：ギ酸（75:25:5）の溶媒で室温下３時間展開
後、プレートを乾燥し発色させると、２−ケト−Ｌ−グ
ロン酸は、硝酸銀試薬では黒褐色の、Ｏ−フェニレンジ
アミン試薬では黄色の、アニリンフタル酸試薬では桃色
のスポットをRf値0.3付近に与えることにより検出され
た。

実施例 以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明する。
尚、培地の％は、重量／要量％を示す。

実施例１ グルコース２％、ポリペプトン（大五栄養化学社製）１
％、酵母エキス0.2％、NaCl0.5％、寒天1.5％（pH7.2）
から成る試験管斜面培地上に28℃２日間培養したシュー
ドモナス ソルボソキシダンス526−21（IFO 14501,FE
RM Ｐ−8750）の菌体１白金耳をグルコース２％、ポリ
ペプトン１％、乾燥酵母0.5％、CaCO₃2％から成る培地2
0mlを200ml容の三角フラスコに分注して、121℃15分間
滅菌したものに接種し、28℃、２日間振盪（200rpm）培
養して、種培養液を得た。この種培養液2mlを、蒸気滅
菌した。ポリペプトン１％、カザミノ酸0.2％、乾燥酵
母0.5％（NH₄）₂SO₄0.5％、Na₂S₂O₃・5H₂O0.05％、KH₂P
O₄0.03％、MgSO₄・7H₂O0.05％、FeSO₄・7H₂O0.1％、MnS
O₄・nH₂O0.0005％、チアミン塩酸塩0.0005％、CaCO₃6
％、濾過除菌したＬ−ソルボース15％から成る発酵培地
25mlを200ml容の三角フラスコ（滅菌済）に分注したも
のに接種して、28℃、３日間振盪培養した。得られた発
酵液を高速液体クロマトグラフィーにより分析したとこ
ろ、54.9mg/mlの２−ケト−Ｌ−グロン酸（使用糖当り
モル収率34.0％）を含んでいた。

この発酵液1000mlを遠心沈澱して、菌体等の残渣を除去
して得た上澄約980mlをアンバーライトIR120（ローム・
アンド・ハース社製、H⁺型、500ml）カラムに通し、つ
いで約300mlの脱イオン水で洗浄した。この通過液と洗
浄液を合せて、苛性ソーダでpH6.5に調整した後、50℃
で約50ml迄減圧下で濃縮した。この濃縮液を５℃に24時
間放置することにより生じた無色柱状の結晶を濾取し、
少量の冷メタノールで洗浄後、室温、減圧下に五酸化燐
上で乾燥して38.5gの２−ケト−Ｌ−グロン酸モノナト
リウム１水塩を得た。得られた結晶の分析値は、融点:1
47〜155℃、元素分析値（C₆H₉O₇Na・H₂O）：理論値（C;
30.78％,H;4.74％）、測定値（C;30.84％,H;4.89％）、
比旋光度：▲［α］²⁴ _D▼−23.3゜（Ｃ＝1.0、水）で、
高速液体クロマトグラフィーの保持時間と薄層クロマト
グラフィーのRf値と試薬により発色した色調は、標準品
のそれらと一致した。

実施例２ 前記実施例１と同じ方法で、シュードモナスソルボソキ
シダンス526−22（IFO 14502,FERM Ｐ−8751）の種培
養液を得た。この種培養液2mlを、前記実施例１で用い
た発酵培地の成分の中でNa₂S₂O₃・5H₂Oを0.1％に変えた
培地25mlを200ml容三角フラスコに分注したものに接種
して、30℃、５日間振盪培養した。得られた発酵液中に
は、72.9mg/mlの２−ケト−Ｌ−グロン酸が含まれてい
た。（使用糖当りモル収率45.1％） 実施例３ 前記実施例１と同じ斜面培地に28℃、２日間生育させた
シュードモナス ソルボソキシダンス526−42（IFO 14
503,FERM Ｐ−8752）の菌体１白金耳を、グルコース２
％、酵母エキス0.3％、コーンスチープリカー0.3％、カ
ゼイン0.5％、CaCO₃2％から成る種培地20mlを200ml容三
角フラスコに分注して、121℃15分間蒸気滅菌したもの
に接種し、28℃にて１日振盪培養して種培養液を得た。
この種培養液2mlをコーンスターチプリカー２％、Na₂S₂
O₃・5H₂O 0.05％、FeSO₄・7H₂O 0.1％、（NH₄）₂SO₄
0.3％、FMN 0.0001％、ビチオン0.00005％、CaCO₃9
％から成る培地20mlを分注した200ml容マイヤーに分注
し蒸気滅菌したものに接種し、濾過除菌した40％Ｌ−ソ
ルボース液を、接種直後に3ml、16時間後に2ml、24時間
後に3ml、40時間後に2ml、48時間後に3ml添加しながら3
0℃、３日間振盪培養した。この様にして得られた発酵
液を高速液体クロマトグラフィーにより分析したとこ
ろ、85.4mg/mlの２−ケト−Ｌ−グロン酸（使用糖当り
モル収率50.3％；消費糖当りモル収率86.0％）が含まれ
ていた。

実施例４ 実施例１で得られたシュードモナス ソルボソキシダン
ス526−21（IFO 14501,FERM Ｐ−8750）の発酵液1000
mlから遠心沈澱して得た沈澱物を約100mlの冷生理食塩
水（0.85％）に懸濁し、1000rpm5分間遠心して、主にCa
CO₃から成る沈澱物を除き、上澄を更に9000rpm10分間遠
心沈澱して、洗浄菌体を得た。これを35mlの冷生理食塩
水に懸濁したもの8mlに、Ｌ−ソルボース600mg、２−
（Ｎ−モルフォリノ）エタンスルホン酸（MES）緩衝液
（pH6.5,0.5M）1mlとCaCO₃360mgを加え、水で総量20ml
とし、200ml容三角フラスコ中で30℃、24時間振盪しな
がら反応させた。この様にして得られた反応液中には、
21.5mg/mlの２−ケト−Ｌ−グロン酸（使用糖当りモル
収率66.5％）が生成していた。

実施例５ シュードモナス・ソルボソキシダンス526−21株をＤ−
ソルビット2.5％、ペプトン１％、酵母エキス１％、炭
酸カルシウム0.2％、寒天２％からなる斜面培地に30
℃、３日間培養した。この菌体１白金耳をペプトン0.5
％、酵母エキス0.5％、NaCl0.2％（pH7.0）からなるPY
培地5mlを含む試験管に植菌し、28℃、16時間振盪培養
した。

得られた培養液2mlに、1mgのニトロソグアニジンを溶解
したPY培地1mlを加え、28℃で30分間保温して変異剤処
理した。この処理液を170分間遠心分離（5000rpm）して
菌体を集め、これを10mlの新鮮なPY培地に懸濁し遠沈分
離（5000rpm、10分間）して、洗浄菌体を得た。次にこ
れを5mlのPY培地に懸濁し、28℃で３時間振盪培養し
た。得られた培養液をPY培地で適当に希釈後、その0.1m
lをＬ−ソルボース10％と寒天２％を加えたPY培地を含
むプレート（直径9cm）に撒き、28℃で７日間培養し
た。生じたコロニー359個を各々上記斜面培地に移植し2
8℃、３日間培養した。

各々の斜面培地の菌体１白金耳をＬ−ソルボース10％、
コーンスチープリカー２％、乾燥酵母0.3％、Na₂S₂O₃・
5H₂O0.02％、FeSO₄・7H₂O0.1％、硫安0.3％、ペプトン
0.2％、CaCO₃4％（pH6.6）からなる培地3mlを含む試験
管に植菌し、30℃で５日間振盪培養した。

得られたこれらの培養液を12000rpmで５分間遠心分離し
培養液上清を得る。この上清を希硫酸（0.3N）で５培に
希釈後再度遠心分離（12000rpm、５分間）して希釈上清
を得た。これらの希釈上清１μをセルロースプレート
（メルク社製・米国）にスポットし、フェノール：水：
ギ酸（75:25:5）の溶媒系で室温で３時間展開した。こ
のプレートを風乾後、硝酸銀試薬で発色させた。Rf値3.
0付近（２−ケト−Ｌ−グロン酸に相当）に最も大きな
黒褐色のスポットを与えた株をSB−15株（IFO−14604,F
ERM BP−1356）として選択した。

実施例６ 実施例５で得たシュードモナス・ソルボソキシダンスSB
−15株をＤ−ソルビット2.5％、ペプトン１％、酵母エ
キス１％、炭酸カルシウム0.2％、寒天２％（pH7.0）か
らなる斜面培地に30℃、３日間培養した。

この菌体１白金耳を、グルコース２％、ペプトン１％、
酵母エキス１％、炭酸カルシウム２％（pH6.8）から成
る培地20mlを200ml容の三角フラスコに接種し、30℃、
２日間振盪培養（200rpm）培養して、第１種培養液を得
た。

第１種培養液1.5mlを上記と同じ培地を含む同じフラス
コに移植し、30℃で２日間振盪培養し、第２種培養を得
た。

得られた第２種培養液2mlを蒸気滅菌した。乾燥酵母0.5
％、コーンスチープリカー２％、FeSO₄・7H₂O0.1％、Na
₂S₂O₃・5H₂O0.05％、炭酸カルシウム４％、別滅菌した
Ｌ−ソルボース10％からなる醗酵培地25mlを200ml容の
三角フラスコ（滅菌済）に分注したものに移植して30℃
で３日間振盪培養した。得られた醗酵液を高速液体クロ
マトグラフィーにより分析したところ、82.0mg/mlの２
−ケト−Ｌ−グロン酸を含んでいた。

なお、この時、同じ方法で培養した親株526−21株の２
−ケト−Ｌ−グロン酸生成量は47.1mg/ml（使用糖当り
モル収率76.1％）であった。

実施例７ シュードモナス・ソルボソキシダンスSB−15株を醗酵培
地中のＬ−ソルボースとCaCO₃濃度をそれぞれ13％と６
％にした以外は、実施例６と同じ方法で培養した。

得られた醗酵液を高速液体クロマトグラフィーにより分
析したところ、84.0mg/mlの２−ケト−Ｌ−グロン酸を
含んでいた。なお、この時、同じ方法で培養した親株52
6−21株の２−ケト−Ｌ−グロン酸蓄積量は63.8mg/ml
（使用糖当りモル収率60.0％）であった。

発明の効果 本発明によれば、シュードモナス ソルボソキシダンス
を用いることにより、Ｌ−ソルボースから２−ケト−Ｌ
−グロン酸を収率よく製造することができる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】シュードモナス ソルボソキシダンス（Ps
   eudomonas sorbosoxidans）に属し、Ｌ−ソルボースを
   ２−ケト−Ｌ−グロン酸に酸化する能力を有する微生
   物、またはその処理物を、Ｌ−ソルボースと接触させ
   て、２−ケト−Ｌ−グロン酸を生成蓄積せしめ、これを
   採取することを特徴とする２−ケト−Ｌ−グロン酸の製
   造法。