JPH0755111B2 - シクラメンの不定芽の増殖方法 - Google Patents
シクラメンの不定芽の増殖方法Info
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- JPH0755111B2 JPH0755111B2 JP3132163A JP13216391A JPH0755111B2 JP H0755111 B2 JPH0755111 B2 JP H0755111B2 JP 3132163 A JP3132163 A JP 3132163A JP 13216391 A JP13216391 A JP 13216391A JP H0755111 B2 JPH0755111 B2 JP H0755111B2
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- cyclamen
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- adventitious
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はシクラメンの不定芽を、
ジベレリン、オーキシン類およびサイトカイニン類を含
む液体培地で通気培養することにより、不定芽を効率よ
く増殖させる培養方法に関する。
ジベレリン、オーキシン類およびサイトカイニン類を含
む液体培地で通気培養することにより、不定芽を効率よ
く増殖させる培養方法に関する。
【０００２】
【従来技術】シクラメンはこれまで種子繁殖の方法によ
り種子を採種し、播種、育苗の手段によって栽培されて
いる。この従来方法では、種子の生産過程でシクラメン
の個体間で交配を行うため、花色や花形などの重要な形
質が固定化されず、親株と同じものが安定して得られな
いという品質上の問題がある。
り種子を採種し、播種、育苗の手段によって栽培されて
いる。この従来方法では、種子の生産過程でシクラメン
の個体間で交配を行うため、花色や花形などの重要な形
質が固定化されず、親株と同じものが安定して得られな
いという品質上の問題がある。
【０００３】このような問題を解決するためにこれまで
固形培地を用い、シクラメンの組織を培養して不定芽を
分化、生育させ、幼苗を形成させる方法がいくつか知ら
れている。例えば、シクラメンの塊茎様器官を分割し
て、これをベンジルアデニン（以下「ＢＡ」という）と
ナフタレン酢酸（以下「ＮＡＡ」という）を含むムラシ
ゲ・スクーグの固形培地（以下「ＭＳ培地」という）に
移植し、不定芽を形成させること（特開昭６３−２２６
２１５号公報、園芸学会講演要旨集、第５９巻、別冊
１、第５３０〜５３１頁、１９９０年）、シクラメンの
組織から塊茎の形成にＮＡＡなどのオーキシン類が有効
であること（特開平２−９２２２１号公報）が知られて
いる。
固形培地を用い、シクラメンの組織を培養して不定芽を
分化、生育させ、幼苗を形成させる方法がいくつか知ら
れている。例えば、シクラメンの塊茎様器官を分割し
て、これをベンジルアデニン（以下「ＢＡ」という）と
ナフタレン酢酸（以下「ＮＡＡ」という）を含むムラシ
ゲ・スクーグの固形培地（以下「ＭＳ培地」という）に
移植し、不定芽を形成させること（特開昭６３−２２６
２１５号公報、園芸学会講演要旨集、第５９巻、別冊
１、第５３０〜５３１頁、１９９０年）、シクラメンの
組織から塊茎の形成にＮＡＡなどのオーキシン類が有効
であること（特開平２−９２２２１号公報）が知られて
いる。
【０００４】また、薬用ニンジンの不定芽を有するカル
スから不定芽を摘出し、これをジベレリン単独またはジ
ベレリンとサイトカイニンとオーキシンを含有する固形
培地で苗条を得る方法（特開平１−２３５５１８号公
報）、豆科、アブラナ科作物のカルス細胞をジベレリン
単独、またはこれにオーキシンとサイトカイニンを併用
して培養することにより発芽が促進されること（特開昭
６３−２４５６６８号公報）なども知られている。しか
し、これら公知のシクラメンの組織培養方法は固形培地
に適しているものであり、ジベレリン、サイトカイニン
類およびオーキシン類を含有する液体培地でシクラメン
の不定芽を効率よく増殖しうる方法は知られていない。
スから不定芽を摘出し、これをジベレリン単独またはジ
ベレリンとサイトカイニンとオーキシンを含有する固形
培地で苗条を得る方法（特開平１−２３５５１８号公
報）、豆科、アブラナ科作物のカルス細胞をジベレリン
単独、またはこれにオーキシンとサイトカイニンを併用
して培養することにより発芽が促進されること（特開昭
６３−２４５６６８号公報）なども知られている。しか
し、これら公知のシクラメンの組織培養方法は固形培地
に適しているものであり、ジベレリン、サイトカイニン
類およびオーキシン類を含有する液体培地でシクラメン
の不定芽を効率よく増殖しうる方法は知られていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】同一形質のシクラメン
の幼苗を大量生産するためには、シクラメンの組織片を
組織培養して不定芽を分化させる過程、分化させた不定
芽を効率よく増殖させて不定芽数を増加させる過程、不
定芽を良好に生育させ幼苗を形成させる過程を順に経る
方法が最適であると考えられる。しかしながら、前記し
たシクラメン、薬用ニンジン、豆科、アブラナ科作物の
組織培養方法における固形培地を用いてシクラメンの不
定芽を培養しても後記試験例に示したごとく不定芽数が
少ない。また前記シクラメンの組織培養の固形培地と同
組成の液体培地を用いると不定芽が奇形となるなど、シ
クラメンの不定芽の効率的な増殖方法としては必ずしも
満足すべき方法ではない。
の幼苗を大量生産するためには、シクラメンの組織片を
組織培養して不定芽を分化させる過程、分化させた不定
芽を効率よく増殖させて不定芽数を増加させる過程、不
定芽を良好に生育させ幼苗を形成させる過程を順に経る
方法が最適であると考えられる。しかしながら、前記し
たシクラメン、薬用ニンジン、豆科、アブラナ科作物の
組織培養方法における固形培地を用いてシクラメンの不
定芽を培養しても後記試験例に示したごとく不定芽数が
少ない。また前記シクラメンの組織培養の固形培地と同
組成の液体培地を用いると不定芽が奇形となるなど、シ
クラメンの不定芽の効率的な増殖方法としては必ずしも
満足すべき方法ではない。
【０００６】したがって、シクラメンの幼苗を大量生産
する手段として効率の高いシクラメンの不定芽の増殖方
法の開発が要望されている。
する手段として効率の高いシクラメンの不定芽の増殖方
法の開発が要望されている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、上記した
課題の解決のため鋭意研究した。その結果、本発明者等
はシクラメンの組織片から分化した不定芽を、植物ホル
モンとしてジベレリン、オーキシン類およびサイトカイ
ニン類を含む液体培地中で通気培養することによりシク
ラメンの幼苗を大量生産する手段として不定芽を効率よ
く増殖させる方法をみいだした。
課題の解決のため鋭意研究した。その結果、本発明者等
はシクラメンの組織片から分化した不定芽を、植物ホル
モンとしてジベレリン、オーキシン類およびサイトカイ
ニン類を含む液体培地中で通気培養することによりシク
ラメンの幼苗を大量生産する手段として不定芽を効率よ
く増殖させる方法をみいだした。
【０００８】したがって、本発明の要旨とするところ
は、シクラメンの不定芽を、ジベレリン、オーキシン類
およびサイトカイニン類を含む液体培地で通気培養する
ことを特徴とするシクラメンの不定芽の増殖方法にあ
る。
は、シクラメンの不定芽を、ジベレリン、オーキシン類
およびサイトカイニン類を含む液体培地で通気培養する
ことを特徴とするシクラメンの不定芽の増殖方法にあ
る。
【０００９】以下に本発明の方法を詳細に説明する。
【００１０】本発明に用いる不定芽は次のようにして得
られたものを用いればよい。
られたものを用いればよい。
【００１１】まず、シクラメンの植物体、例えば葉身、
葉柄、茎頂、塊茎、葯基部、花茎などから組織片を採取
し、これを７０％のエタノール溶液に１０秒間、次いで
有効塩素約１％の次亜塩素酸ナトリウム溶液に２０分間
浸漬し、殺菌処理する。次いで、この組織片を取り出
し、その表面に付着した次亜塩素酸ナトリウムを滅菌水
で３回洗浄後、これを無菌条件下で組織片を１cm角の切
片とする。これをＭＳ培地組織の全無機成分を３分の１
に希釈した培地にα−ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）を０.
１mg／ｌ、ベンジルアデニン（ＢＡ）を１.０mg／ｌ、
シュークロースを３０ｇ／ｌ加え、ｐＨ５.８とし、ゲ
ルライトを３ｇ／ｌ加えた固形培地に先の葉片を置床
し、２０℃の温度条件で暗所で５０日間培養し、葉の周
辺からカルスを形成させ、さらにカルス上に不定芽を分
化させ、各種組織の不定芽を得た。これらの不定芽を本
発明の材料として用いた。
葉柄、茎頂、塊茎、葯基部、花茎などから組織片を採取
し、これを７０％のエタノール溶液に１０秒間、次いで
有効塩素約１％の次亜塩素酸ナトリウム溶液に２０分間
浸漬し、殺菌処理する。次いで、この組織片を取り出
し、その表面に付着した次亜塩素酸ナトリウムを滅菌水
で３回洗浄後、これを無菌条件下で組織片を１cm角の切
片とする。これをＭＳ培地組織の全無機成分を３分の１
に希釈した培地にα−ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）を０.
１mg／ｌ、ベンジルアデニン（ＢＡ）を１.０mg／ｌ、
シュークロースを３０ｇ／ｌ加え、ｐＨ５.８とし、ゲ
ルライトを３ｇ／ｌ加えた固形培地に先の葉片を置床
し、２０℃の温度条件で暗所で５０日間培養し、葉の周
辺からカルスを形成させ、さらにカルス上に不定芽を分
化させ、各種組織の不定芽を得た。これらの不定芽を本
発明の材料として用いた。
【００１２】本発明の不定芽の増殖に用いられる培地と
しては、例えばＭＳ培地、ガンボルグのＢ５培地、ホワ
イト培地、ニッチ−ニッチ培地、Ｎ６培地などの植物組
織培養用の培地があげられる。これらの公知の培地組成
に関しては、例えば、竹内、古谷著の「新植物組織培
養」第３８６頁〜第３９１頁（１９７９年）朝倉書店発
行に記載されている。これらの培地の無機成分をそのま
まか、もしくは３分の１または２分の１に希釈したもの
を用いればよいが、特にＭＳ培地を用いて調製された培
地が好ましい。さらにこれらの培地に、必要に応じてビ
タミン類、アミノ酸類、植物ホルモン類、抗生物質、そ
の他の添加剤を添加することができる。
しては、例えばＭＳ培地、ガンボルグのＢ５培地、ホワ
イト培地、ニッチ−ニッチ培地、Ｎ６培地などの植物組
織培養用の培地があげられる。これらの公知の培地組成
に関しては、例えば、竹内、古谷著の「新植物組織培
養」第３８６頁〜第３９１頁（１９７９年）朝倉書店発
行に記載されている。これらの培地の無機成分をそのま
まか、もしくは３分の１または２分の１に希釈したもの
を用いればよいが、特にＭＳ培地を用いて調製された培
地が好ましい。さらにこれらの培地に、必要に応じてビ
タミン類、アミノ酸類、植物ホルモン類、抗生物質、そ
の他の添加剤を添加することができる。
【００１３】本発明に用いられる液体培地に添加する炭
素源としては、シュークロース、グルコースなどの糖類
が挙げられる。シュークロースを２０ｇ／ｌ〜９０ｇ／
ｌ、好ましくは３０ｇ／ｌ〜６０ｇ／ｌの濃度で使用さ
れるのがよい。
素源としては、シュークロース、グルコースなどの糖類
が挙げられる。シュークロースを２０ｇ／ｌ〜９０ｇ／
ｌ、好ましくは３０ｇ／ｌ〜６０ｇ／ｌの濃度で使用さ
れるのがよい。
【００１４】また培地のｐＨは５.６〜５.８に調整され
使用される。
使用される。
【００１５】本発明に用いられるジベレリンはＧＡ1、
ＧＡ3、ＧＡ7などの構造類縁体が知られており、本発明
ではこれらの何れを用いてもよいが、とくにＧＡ3が適
している。
ＧＡ3、ＧＡ7などの構造類縁体が知られており、本発明
ではこれらの何れを用いてもよいが、とくにＧＡ3が適
している。
【００１６】ジベレリンは液体培地に添加して使用さ
れ、その濃度は０.１mg／ｌ〜１０mg／ｌ、好ましくは
１mg／ｌ〜５mg／ｌである。
れ、その濃度は０.１mg／ｌ〜１０mg／ｌ、好ましくは
１mg／ｌ〜５mg／ｌである。
【００１７】またジベレリンと併用して添加するオーキ
シン類としては、インドール酢酸（ＩＡＡ）、α−ナフ
タレン酢酸（ＮＡＡ）、インドール酪酸（ＩＢＡ）、
２,４−ジクロロフェノキシ酢酸（２,４−Ｄ）などが挙
げられ、好ましくはＮＡＡを０.０１mg／ｌ〜０.５mg／
ｌの濃度、好ましくは０.０２mg／ｌで添加し、サイト
カイニン類としては、ベンジルアデニン（ＢＡ）、カイ
ネチン、ゼアチンなどが挙げられ、好ましくはＢＡを
０.１mg／ｌ〜５mg／ｌの濃度、好ましくは０.２mg／ｌ
で添加して用いる。
シン類としては、インドール酢酸（ＩＡＡ）、α−ナフ
タレン酢酸（ＮＡＡ）、インドール酪酸（ＩＢＡ）、
２,４−ジクロロフェノキシ酢酸（２,４−Ｄ）などが挙
げられ、好ましくはＮＡＡを０.０１mg／ｌ〜０.５mg／
ｌの濃度、好ましくは０.０２mg／ｌで添加し、サイト
カイニン類としては、ベンジルアデニン（ＢＡ）、カイ
ネチン、ゼアチンなどが挙げられ、好ましくはＢＡを
０.１mg／ｌ〜５mg／ｌの濃度、好ましくは０.２mg／ｌ
で添加して用いる。
【００１８】本発明を適用できるシクラメンはシクラメ
ン属の植物であり、品種としてビクトリア、バーバー
ク、ピュアホワイト、パステル、ミニシクラメンなどが
挙げられるが、これらの品種に限定されるものではな
い。
ン属の植物であり、品種としてビクトリア、バーバー
ク、ピュアホワイト、パステル、ミニシクラメンなどが
挙げられるが、これらの品種に限定されるものではな
い。
【００１９】本発明におけるシクラメン属の不定芽の培
養では、液体培地中に酸素を含有する気体を無菌フィル
ターを通して吹き込めばよい。この場合の酸素を含有す
る気体とは、空気を単独、酸素ガスを単独、または酸
素、二酸化炭素、窒素、空気などのうちの２種類以上を
混合してなる気体を用いることができる。これらの気体
中の酸素含有量は５％〜１００％、好ましくは２０％〜
９０％である。液体培地中への上記した気体の通気量と
しては５０ml／ｌ・min以上５００ml／ｌ・min以下、好
ましくは１００ml／ｌ・min以上３００ml／ｌ・min以下
が不定芽の増殖培養に適している。
養では、液体培地中に酸素を含有する気体を無菌フィル
ターを通して吹き込めばよい。この場合の酸素を含有す
る気体とは、空気を単独、酸素ガスを単独、または酸
素、二酸化炭素、窒素、空気などのうちの２種類以上を
混合してなる気体を用いることができる。これらの気体
中の酸素含有量は５％〜１００％、好ましくは２０％〜
９０％である。液体培地中への上記した気体の通気量と
しては５０ml／ｌ・min以上５００ml／ｌ・min以下、好
ましくは１００ml／ｌ・min以上３００ml／ｌ・min以下
が不定芽の増殖培養に適している。
【００２０】本発明のシクラメン属の不定芽の増殖培養
では暗所で培養することが好ましい。
では暗所で培養することが好ましい。
【００２１】前記した培地のうち、ＭＳ培地を用いたシ
クラメンの不定芽の増殖方法について説明する。
クラメンの不定芽の増殖方法について説明する。
【００２２】まずＭＳ培地組成の全無機成分濃度を３分
の１に希釈した培地にシュークロースを３０ｇ／ｌ、Ｎ
ＡＡを０.０２mg／ｌ、ＢＡを０.２mg／ｌを加えてｐＨ
５.８とし、オートクレーブで滅菌後、ＧＡ3を１mg／ｌ
加えた液体培地を調製した。
の１に希釈した培地にシュークロースを３０ｇ／ｌ、Ｎ
ＡＡを０.０２mg／ｌ、ＢＡを０.２mg／ｌを加えてｐＨ
５.８とし、オートクレーブで滅菌後、ＧＡ3を１mg／ｌ
加えた液体培地を調製した。
【００２３】これを１ｌ容のガラス容器に５００ml入
れ、前記により得たカルス部分を含む不定芽を移植し
た。これを２０℃の恒温室内で２０〜４０日、好ましく
は３０日間培養するとカルス上に新たな不定芽を増殖し
た。
れ、前記により得たカルス部分を含む不定芽を移植し
た。これを２０℃の恒温室内で２０〜４０日、好ましく
は３０日間培養するとカルス上に新たな不定芽を増殖し
た。
【００２４】以下に本発明の実施例を示す。
【００２５】
【実施例】シクラメン（品種：ビクトリア）の葉身を採
取し、これを７０％のエタノール溶液に１０秒間、次い
で有効塩素１％の次亜塩素酸ナトリウム溶液に２０分間
浸漬し、殺菌処理する。次いでこの組織片を取り出し、
その表面に付着した次亜塩素酸ナトリウムを滅菌水で３
回洗浄後、これを無菌条件下で組織片を１cm角の切片と
する。これをＭＳ培地の全無機成分を３分の１に希釈し
た培地にＮＡＡを０.１mg／ｌ、ＢＡを１.０mg／ｌ、シ
ュークロースを３０ｇ／ｌを加えてｐＨ５.８とし、ゲ
ルライトを３ｇ／ｌ加えた固形培地上に置床し、２０℃
の温度条件で暗所で５０日間培養した。そして葉の周辺
からカルスを形成させ、さらにカルス上に不定芽を分化
させた。
取し、これを７０％のエタノール溶液に１０秒間、次い
で有効塩素１％の次亜塩素酸ナトリウム溶液に２０分間
浸漬し、殺菌処理する。次いでこの組織片を取り出し、
その表面に付着した次亜塩素酸ナトリウムを滅菌水で３
回洗浄後、これを無菌条件下で組織片を１cm角の切片と
する。これをＭＳ培地の全無機成分を３分の１に希釈し
た培地にＮＡＡを０.１mg／ｌ、ＢＡを１.０mg／ｌ、シ
ュークロースを３０ｇ／ｌを加えてｐＨ５.８とし、ゲ
ルライトを３ｇ／ｌ加えた固形培地上に置床し、２０℃
の温度条件で暗所で５０日間培養した。そして葉の周辺
からカルスを形成させ、さらにカルス上に不定芽を分化
させた。
【００２６】このようにして得た不定芽をカルスと共に
取り出し、メスを用いて４等分に切断し、カルス部分を
含む不定芽片を作製した。
取り出し、メスを用いて４等分に切断し、カルス部分を
含む不定芽片を作製した。
【００２７】ＭＳ培地組成の全無機成分を３分の１に希
釈した培地にＮＡＡを０.０２mg／ｌ、ＢＡを０.２mg／
ｌを添加し、さらにジベレリン（ＧＡ3）をそれぞれ０.
１、１.０、５.０、１０.０mg／ｌ添加し、これにシュ
ークロースを３０ｇ／ｌ加え、ｐＨ５.８としてオート
クレーブで無菌処理した。このようにして得た液体培地
をガラス製の５００mlの大きさの容器に入れ、これに前
記により得た４個の不定芽片を加えて２０℃、暗所で無
菌フィルターで空気を通気量１００ml／ｌ・minで通気
しながら、３０日間培養した。培養後１個の不定芽片か
ら新しく増殖した不定芽数の平均値を表１に示した。
釈した培地にＮＡＡを０.０２mg／ｌ、ＢＡを０.２mg／
ｌを添加し、さらにジベレリン（ＧＡ3）をそれぞれ０.
１、１.０、５.０、１０.０mg／ｌ添加し、これにシュ
ークロースを３０ｇ／ｌ加え、ｐＨ５.８としてオート
クレーブで無菌処理した。このようにして得た液体培地
をガラス製の５００mlの大きさの容器に入れ、これに前
記により得た４個の不定芽片を加えて２０℃、暗所で無
菌フィルターで空気を通気量１００ml／ｌ・minで通気
しながら、３０日間培養した。培養後１個の不定芽片か
ら新しく増殖した不定芽数の平均値を表１に示した。
【００２８】比較例１ 培地にジベレリンを添加しない以外は上記実施例と同様
にして培養した。結果を表１に示した。
にして培養した。結果を表１に示した。
【００２９】比較例２ 空気を通気しないこと以外は上記実施例と同様にして培
養した。結果を表１に示した。
養した。結果を表１に示した。
【００３０】比較例３ 培地にゲルライト３ｇ／ｌを加えて固形培地とし、通気
しないこと以外は上記実施例と同様にして培養した。結
果を表１に示した。
しないこと以外は上記実施例と同様にして培養した。結
果を表１に示した。
【００３１】比較例４ 培地にゲルライト３ｇ／ｌを加えて固形培地とし通気せ
ず、ジベレリンを添加しないこと以外は上記実施例と同
様にして培養した。結果を表１に示した。
ず、ジベレリンを添加しないこと以外は上記実施例と同
様にして培養した。結果を表１に示した。
【００３２】
【表１】
【００３３】
【発明の効果】本発明によれば、シクラメン属植物の不
定芽を液体培地中で効率よく大量に増殖することができ
る。したがってこの方法はシクラメン属植物の種苗を大
量、かつ効率的に増殖する手段として有用である。
定芽を液体培地中で効率よく大量に増殖することができ
る。したがってこの方法はシクラメン属植物の種苗を大
量、かつ効率的に増殖する手段として有用である。
Claims (1)
- 【請求項１】 シクラメンの不定芽を、ジベレリン、オ
ーキシン類およびサイトカイニン類を含む液体培地で通
気培養することを特徴とする、シクラメンの不定芽の増
殖方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3132163A JPH0755111B2 (ja) | 1991-05-09 | 1991-05-09 | シクラメンの不定芽の増殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3132163A JPH0755111B2 (ja) | 1991-05-09 | 1991-05-09 | シクラメンの不定芽の増殖方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04335838A JPH04335838A (ja) | 1992-11-24 |
| JPH0755111B2 true JPH0755111B2 (ja) | 1995-06-14 |
Family
ID=15074842
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3132163A Expired - Lifetime JPH0755111B2 (ja) | 1991-05-09 | 1991-05-09 | シクラメンの不定芽の増殖方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0755111B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104012408B (zh) * | 2014-06-09 | 2016-03-02 | 赵兰 | 一种猕猴桃的增殖继代培养基 |
| CN105340745A (zh) * | 2015-11-20 | 2016-02-24 | 湖北大学 | 仙客来植株愈伤组织和芽的培养基及培养方法 |
-
1991
- 1991-05-09 JP JP3132163A patent/JPH0755111B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04335838A (ja) | 1992-11-24 |
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