JPH07507768A - Ａｃｔｈ含有マイクロスフェアの制御放出 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 ＡＣＴ■含有マイクロスフェアの制御放出発明の背景 本発明は、一般に、ＡＣＴＩ（の制御された放出のためのポリマーマイクロスフ ェアに関する。

副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）は、下垂体罰葉腺によって分ｌ必されるポリ ペプチドである。ポリペプチドは、３９アミノ酸を含み、そして約４５００ダル トンの分子量を有する。ＡＣＴ）Ｉは、哺乳動物、特にブタの下垂体から抽出さ れ、臨床に用いられる。ＡＣＴＨの活性は、下垂体切除ラットのＵＳＰアッセイ によって定義される。

ＡＣＴＨは、副腎皮質ホルモンを合成および分泌させるために副腎皮質を刺激す る。ここで、副腎皮質ホルモンとしては、フルチゾル、コルチコステロン、数種 の弱いアンドロゲンステロイド、および非常に限られた量のアルドステロンが挙 げられる。正常な環境下では、ＡＣＴＨの内因的な放出は、視床下部によって分 泌されるコルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ）によって刺激される。ＡＣＴＩ（ を外因的に投与すると、内因的なＡＣＴＨによって通学生じる薬理学的効果の全 てが生じる。

ＡＣＴＨは、その抗炎症特性および免疫抑制特性が利用される。

特に、以下に示す場合に対して用いられている：１）多発性硬化症の急性悪化、 ２）慢性関節リウマチおよび乾１性関節炎などのリウマチ性疾患の急性悪化、３ 　）　ＩＩＩ瘍性天性大腸炎性エピソード（ｅｐ　１ｓｏｄｅｓ）、４）点頭け いれん、および５）全身性エリテマトーデスの急性発症。現在は、臨床目的のた めに、ＡＣＴＨは、注射用フルチフトロピン（Ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｎ）” 、（部分的加水分解ゼラチン含有）注射用貯蔵型（ｒｅｐｏｓ　１ｔｏｒｙ）フ ルチコトロビン律およびコルチコトロピンＴＭ水酸化亜鉛懸濁液として利用され る。

フルチコトロビン注射は、ＩＭまたはＳＱ注射後直ちに吸収される。ここで、コ ルチフトロピン水酸化亜鉛懸濁液の注射後、または貯蔵型コルチコトロピンの注 射後、薬剤は、４−１０時間の範囲にわたり吸収され、血漿レベルは２４時間後 ベースラインに戻る。

ＡＣＴＨは、一般に、１日に１回または２回、７−２１日間まで投与され、ＩＶ またはＩＭまたはＳＱ注射をしばしば必要とする。ＡＣＴＨｉＪ剤を制御放出す る利点としては、注射回数が減ることにより、患者のコンプライアンスおよび受 容性が増加したこと、血液レベルの山および谷の変化をなくすことにより、治療 効果が増大したこと、および山および谷を減少することにより薬物の全投与量を 低下し得ることが挙げられる。

化合物の血液レベルを制御する１つの手段は、ポリマー分解および／または薬剤 拡散の機能として化合物を放出するポリマーマトリックスの形態で化合物を投与 することである。

種々の生分解性および非生分解性ポリマーが、このような適用に対して使用され ており、それは、ポリエステル（例えば、ラクチド−グリコリドコポリマー、ポ リ無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリオルトエステル、およびエチレ ンビニルアセテートポリマー）を包含する。一般に、放出は、好適なポリマー、 カプセル化条件、および薬剤の負荷（ｌｏａｄｉｎｇ）および賦形剤を選択する ことにより制御される。

これらのポリマー系の例が、Ｌａｎｇｅｔに対する米国特許第４゜８９１．２２ ５号およびＬａｎｇｅｒに対する第４．９０６．４７４号（ポリ無水物）、Ｆｏ ｌｋｍａｎらに対する第４．３９１．７９７号（エチレンビニルアセテートポリ マー）、Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎに対する第４．７６７、６２８号（ポリラクチド 、ラクチド−グリコール酸（ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ　ａｃｉｄ）コポリマー）、お よびＴｉｃｅらに対する第４．５３０，８４０号（ポリラクチド、ポリグリフリ ド、およびそのコポリマー）に記載されている。

しかし、所望の速度で、そして所望の期間にわたり放出を制御することは困難で ある。さらに、薬剤をカプセル化するのに用いる条件では、送達される薬剤が分 解してはならなｔｌし、薬剤を不活性化または結合させるために、薬剤がポリマ ーマトリックスと反応してもいけない。臨床的状況にお（１て重要なので、送達 手段は、コスト面で有利であり、保存に対して安定であり、そしてｍ１方法を用 いて投与可能でなければならない。

それ故、本発明の目的は、活性または材料の損失がｉｔとんど無い、ＡＣＴＨを 含有するマイクロスフェアの製造方法、およびそれにより得られるＡＣＴＨ含有 マイクロスフェアを提供することである。

本発明がさらに目的とすることは、制御された様式にお０て放出し得る活性ＡＣ ＴＨを含有する広い範囲のポリマーから形成されるマイクロスフェアの製造方法 、およびこのような□方法によって作り出されるマイクロスフェアを提供するこ とである。

発明の要旨 ＡＣＴＨポリマー制御放出系を記載しており、ここで、ＡＣＴＨは、良好な生物 学的活性を保持し、そして投与後は長い期間にわたって放出される。好ましい実 施態様では、ＡＣＴＩ（ポリマーマイクロスフェアは、非常に冷たい温度を用い てポリマー−ＡＣＴＨ混合物を凍結し、生物学的活性および材料が非常に高度に 保持されたポリマーマイクロスフェアへと作られる。ポリマー（好ましくはポリ （ラクチド））は、粉末化したＡＣＴＨと共に、塩化メチレンなどの溶媒に溶解 される。ポリマー／ＡＣＴＨ混合物は、ポリマー／活性試剤溶液または懸濁液の 凝固点より低い温度で、エタノールのような凍結非溶媒（窒素のような液化ガス で覆われている）を含む容器中へと噴霧される。噴霧した粒子は、冷液化ガスと 接触すると、マイクロスフェア中で凍結し、次いで凍結非溶媒層上まで沈み込む 。次いで、凍結非溶媒を溶かす。非溶媒は溶けるが、マイクロスフェアは依然と して凍結しており、そして液体非溶媒中へ沈み込む。マイクロスフェア中の溶媒 もまた溶け、そして非溶媒中へゆっくりと抽出されることにより、ＡＣＴＨを含 有する硬化したマイクロスフェアが得られる。

マイクロスフェアを、インビトロまたはインビボで試験すると、１日〜３カ月の 期間にわたって、生物学的に活性なＡＣＴＨの放出が維持される。ポリマー分解 調節剤、増孔剤（ｐａｒｅｆｏｒｍｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）、およびＡＣＴＨ安定 剤を含有させることにより、放出を改変し得る。

図面の簡単な説明 図１は、６．５％ＡＣＴＨ含有の５％Ｌ−ＰＬＡマイクロスフェアからの、経時 （日数）のＡＣＴＨ放出（累積放出パーセント）のグラフである。

図２は、１０％ＡＣＴＨ／ＣａＣＯ３含有の２０％ＤＬ−ＰＬＡマイクロスフェ アからの、経時（日数）のＡＣＴ）ｌ放出（累積放出パーセント）のグラフであ る。

図３は、４．９％ＡＣＴ）ｌ含有の２０％Ｐ１．ＧＡマイクロスフェアからの、 経時（日数）のＡＣＴ）ｌ放出（累積放出パーセント）のグラフである。

図４は、１５％ＡＣＴ）ｌ含有の７．５％Ｌ−ＰＬＡマイクロスフェアからの、 経時（日数）のＡＣＴＨ放出（累積放出パーセント）のグラフである。

図５は、Ｌ−ＰＬＡマイクロスフェアからの、ＡＣＴＨの経時（日数）の累積放 出パーセントのグラフである。

図６は、マイクロカプセル化ＡＣＴＨ（黒四角）、または溶液性ＡＣＴＩ（（白 丸）のいずれかを投与したラットにおける、経時（日数）のコルチコステロン濃 度（ｎｇ＃＋１）のグラフである。

発明の詳細な説明 ＡＣＴ）ｌ含有マイクロスフェアは、生体適合性ポリマーマイクロスフェアにＡ ＣＴＨを５０％Ｗ／Ｖまで取り込ませて作られる。ここで、ＡＣＴＨ含有マイク ロスフェアは、少なくとも２４時間の期間にわたり、１力月〜２カ月の期間まで ＡＣＴＨの制御放出が維持されることを特徴とする。好ましい実施態様では、ポ リマーは生分解性であり、最も好ましくは加水分解による。マイクロスフェアは １８０ミクロン未満の直径を有し、最も好ましくは７０ミクロン未満であり、そ して皮下注射または箱内注射（２３−ゲージ針による注射に適切な大きさは直径 １８０μｍ未満である）による投与が適切である。そして、マイクロスフェアは ０．０１重量％〜約５０重量％のＡＣＴＨを含有する。

本明細書中で用いる「マイクロスフェア」は、特に注釈しない限りは、隅々まで ＡＣＴＨが分散したポリマーから形成される固体スフェア、およびマイクロ微粒 子およびマイクロカプセルを意味して用いられる。具体的には、マイクロ微粒子 は、形が不揃いなポリマーまたはポリマー−薬剤粒子を記載する場合にあてはま る。マイクロカプセルは、球形のポリマーデバイスであり、それは非−ポリマー のコアまたは外殻とは異なるポリマーのコアを有する。

本明細書中で用いる、ＡＣＴＨの「維持された」または「長い」放出は、連続ま たは不連続、直線的または非直線的であり得る。これは、１種またはそれ以上の タイプのポリマー組成物、薬剤負荷、賦形剤または分解増強剤の選択、または他 の調節物を用いることで達成され得、これらは、所望の効果を得るために、単独 で、または組み合わせて、あるいは順次投与される。

ＡＣＴＨは、注射用コルチコトロピン”（Ｐａｒｋｅ　Ｄａｖｉｓ、　Ｒｏｒｅ ｒ２５−４０ユニツト／ｆｆ１ｌ）、注射用貯蔵型フルチコトロピンＴＭ（部分 的に加水分解されたゼラチン含有、Ｒｏｒｅｒ、　４０−８０ユニツト／１１） 、およびフルチコトロピンＴＭ水酸化亜鉛懸濁液（Ｏｒｇａｎｏｎ。

４０ユニツト／１）の形態で用いられる。それは、Ｄｉｏｓｙｎｔｈ、　Ｃｈｉ ｃａｇｏ、ＩＬから入手される凍結乾燥形態で用いられる。

マイクロスフェアへのＡＣＴＨの取り込み方法種々の公知技術により、活性試剤 がポリマーマイクロスフェアに取り込まれ得る。

４三Ａと二藝−燥 スプレー乾燥において、ポリマーおよびＡＣＴＨをポリマー用の溶媒中で共にａ 合し、次いで、溶液をスプレーすることにより溶媒を蒸発させ、活性試剤含有ポ リマー小滴をあとに形成させる。スプレー乾燥は、Ｋ、　Ｍａｓｔｅｒｓによっ てＩ”　５ｐｒａｙ　Ｄｒｙｉｎｇ　ＨａｎｄｂｏｏｋＪ　（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌ ｅｙ　＆　５ｏｎｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　１９８４＞中に；およびＰａｔｒｉ ｃｋ　Ｂ、　ＤｅａｓｙによってｒＭｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ　ａ ｎｄＲｅｌａｔｅｄ　Ｄｒｕｇ　ＰｒｏｃｅｓｓｅｓＪ　（Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅ ｋｋｅｒ、Ｉｎｃ、、　ＮｅＷＹｏｒｋ　１９８４）中に詳細に検討されており 、それらの教示するところは、本明細書中に援用されている。スプレー乾燥は好 ましいものではない。なぜならそれは、工程中において発生する熱により活性が 幾分失われ、そして容器（ｃｈａｍｂｅｒ）の側面の広い表面積にポリマーが付 着することによりかなりの量の材料が損失し得るからである。

１蓮旦ｌ又 溶媒蒸発技術が、マイクロスフェア形成に用いられ得る。

これらの技術は、溶解または分散した活性試剤のいずれかを含む有機溶媒中にポ リマーを溶解することを包含する。次いで、ポリマー／活性試剤溶液を、通常水 性である攪拌中の連続相へ添加する。乳化剤は、水中油滴型のエマルジョンを安 定させるために水相に含まれている。次いで、有機溶媒を、数時間またはそれ以 上の時間にわたり蒸発させ、それによってコア材料の周囲にポリマーが沈積する 。溶媒は、米国特許第３．７３７．３３７号および米国特許第３．５２３．９０ ６号、または米国特許第３，６９１，０９０号に記載のように（減圧下で）、あ るいは米国特許第３．８９１．５７０号に示されるように加熱することにより、 一段階工程でマイクロスフェアから除去され得る。二段階工程の技術は、米国特 許第４．３８９．３３０号に記載されている。凍結乾燥もまた、５ａｔｏらによ って「制御された薬剤送達のための多孔性生分解性マイクロスフェア。■、処理 条件および溶媒除去技術の評価Ｊ　、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅ ａｒｃｈ　５．２１−３０　（１９８８）ｉこ報告されているように、マイクロ スフェアから溶媒を除去するのに用いられている。これらの方法の技術は本明細 書中に援用されている。

溶媒の蒸発は相当に合理的であるが、好ましいものではない。なぜならそれは、 水相中に薬剤が失われるので、取り込まれた材料の量が、理論値より通常は低い からであり、このことは、Ｂｅｎ１Ｌａらによって、「薬剤負荷したポリ（ｄ、 　Ｉ−ラクチド）マイクロスフェアの特徴づけＪ　、Ｊ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｓｃ ｉ、　７３．１７２１−１７２４　（１９８４）に報告されている。

框盆皇 相分離技術もまた、マイクロスフェア形成に用いられ得る。

これらの技術は、油中水、惰型エマルジョンまたは水中油滴型エマルジョンの形 成を包含する。ポリマーは、温度、ｐＨ、イオン強度の変化、または沈澱剤の添 加によって、連続相から活性試剤上へと凝集する。例えば、米国特許第４．６７ ５．８００号は、活性タンパク質含有うクチドーグリコール酸コボソマーマイク ロスフェアの形成を記載している。まずタンパク質を、油中水ａ梨エマルジョン の水相に溶解させるか、またはポリマー相中に固体として分散させる。次いで、 ／リコーン浦のようなポリマーに対する非溶媒を添加することにより、水性小滴 または薬剤粒子の周囲にポリマーを凝集させる。最高の相分離技術を用いて得ら れる最終生成物は、マイクロカプセルの形態をしている。マイクロカプセルは、 ポリマー膜カプセルで囲まれたコア材料を含む。しかし、これらのデバイスから の活性試剤の放出速度を制御するのは困難であり得るので、マイクロカプセルは ＡＣＴＨを送達するための好ましい実施態様ではない。

これらの相分離技術により、活性試剤含有マイクロスフェアが形成されるが、活 性試剤は、溶媒抽出工程の間にしばしば損失される。さらに、スプレー乾燥を行 うと、その工程中に生物学的活性タンパク質が変性し得る。

１裏東−溶１コ１■ 所望の特性を有するＡＣＴ）！マイクロスフェアを生成する好ましい方法が、Ｇ ｏｍｂｏｔｚらに対する米国特許第５．０１９．４００号に記載されており、そ の教示は、本明細書中に援用されている。

マイクロスフェアを生成する系には、２つの主要な実施態様がある：それは、液 化ガス−凍結非溶媒系の組合せ、および凍結非溶媒系である。

溶液中でカプセル化されるポリマーおよび試剤は、超音波デバイスを用いて液化 ガス中へ噴霧される。噴霧した粒子は、液化ガス（液体窒素）に接触すると凍結 し、凍結スフーアを形成する。これらは凍結非溶媒（エタノール）の表面まで沈 む。

液体ガスを蒸発させ、そして非溶媒が溶解するにつれて、スフェアは非溶媒の中 へ沈み始める。スフェア中の溶媒が、非溶媒中へ抽出されることにより、カプセ ル化された試剤を含有するマイクロスフェアが形成される。ヘキサンなどの他の 非溶媒が、ある種のポリマーからの溶媒抽出速度を増加させるだめに、非溶媒（ エタノール）に加えられる。例えば、スフェアがポリラクチド−グリコリドコポ リマーから形成される場合に適切である。

液化ガスは、液体アルゴン（−１８５，６℃）、液体窒素（−１９５，８℃）、 液体酸素（−１８２，９℃）、または噴霧した粒子を直ちに凍結させて凍結スフ ェアを生成する他のいかなるガスでもあり得る。

酸素は、爆発性であり、タンパク質の酸化の原因となり得るので、好ましくない 。

一方、非溶媒の温度がポリマー／活性試剤溶液の凝固温度より低い場合は、ポリ マー用の冷非溶媒が、液化ガス−凍結非溶媒の組合せの代わりになり得る。

両方の実施態様において、ポリマー／活性試剤が、冷液体に接触すると直ちに凍 結し、次いでゆっくり溶解し、そしてポリマー溶媒がマイクロスフェアから抽出 されることが重要である。

溶解速度は、溶媒および非溶媒の選び方に依存する。ポリマー用非溶媒より高い 融点を有するポリマー溶媒を選択することが重要であり、そうすると非溶媒が最 初に溶解し、凍結マイクロスフェアは、液体中に沈みながら、後になって溶解す る。ポリマーマイクロスフェア製作のために、冷液体非溶媒系を用いると、マイ クロスフェアは直ちに非溶媒中に沈む。

マイクロスフェア中の溶媒が溶解すると、それは非溶媒中へ抽出される。ポリマ ーの溶媒およびポリマーの非溶媒は、マイクロスフェアから溶媒を抽出するため に混和性でなければならない。表１は、この方法に用いられ得る数種のポリマー 表１：　ポリマーおよび好適な溶媒および非溶媒系（溶媒および非溶媒の融点℃ を共に示す）アセトン　エチルエーテル （−９５，４）　（−１１６，３＞ 塩化メチレン　イソペンクン （−９５，１）　（−１３０） ポリマー／活性試剤／溶媒混合物は、液化ガスまたは冷非溶媒のいずれかの冷液 体中へとスプレー分離され得る。それには、小さな粒子を形成するのに用いられ 得る種々のデバイスが使用され、デバイスとしてはソニックノズル、圧力ノズル 、空気ノズルおよびロータリー（ｒｏｔａｒｙ）噴霧機が挙げられる。

広い範囲の大きさのマイクロスフェアが、液層の大きさを変化させることにより （例えば、ノズルの直径を変更することにより）作製され得る。非常に大きなス フェアを所望する場合は、スフェアは、／リングを通して直接冷液体中へ押し出 され得る。ポリマー溶液のインヘレント粘度を増加させてもまた、マイクロスフ ェアの大きさが増大し得る。この方法によって生産されるスフェアの大きさは、 直径が１０００ミクロンより大きいもの〜５ミクロンの範囲であり得る。注入し 得るマイクロスフェアの好ましい大きさの範囲は、直径３０〜１８０ミクロンで ある。この技術によって作製されるマイクロスフェアは、球形である。

ポリマーマトリックスの選択 マイクロスフェアを形成するのに用いられ得るポリマーとしては、生体侵食性の ポリマー（例えば、ポリ（ラクチド）、ラクチドーグリコリドフポリマー、ポリ （カプロラクトン）、ボＩＪカルボネート、ポリアミド、ポリ無水物、ポリアミ ノ酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリシアノアクリレート、および 分解性ポリウレタン）、および非侵食性ボ１ツマ−（例えば、ポリアクリレート 、エチレン−ビニルアセテートポリマーおよび他のアンル置換セルロースアセテ ートおよびそれらの銹導体、非侵食性ポリウレタン、ポリスチレン、ポ１）塩化 ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ヒ゛ニルイミダ／−ル）、りｏｏスルホン化 ポリオリフイン（ｃｈｌｏｒｏｓｕｏｐｈｏｎａｔｅｄ　ｐｏｌｙ。

１ｉｆｉｎｓ）、およびポリエチレンオキシド）が挙げられる。好適な溶媒およ び非溶媒が所望の融点を有するのであれば、はとんどすべてのタイプのポリマー が使用され得る。一般に、ポリマー溶液は、１％ポリマーと３０％ポリマーとの 間、好ましくは５−１０％のポリマーを含有するように調製される。

好ましい実施態様では、ポリ（ラクチド）が用いられる。本明細書中で用いられ るように、この用語は、乳酸またはラクチドのみのポリマー、乳酸およびグリコ ール酸のコポリマー、ラクチドおよびグリコリドのコポリマー、このようなポリ マーおよびコポリマーの混合物、ラセミ体または光学的に純粋な形態のいずれか である乳酸またはラクチドを包含する。分子量が１００．０００までの範囲のポ リラクチドを使用するのが最も望ましい。

これらのポリマー系からのＡＣＴＨの放出は、２つの異なる機構によって生じ得 る。薬剤は、薬剤の溶解によって調剤形に生じる水で満たされたチャネル（ａｑ ｕｅｏｕｓ　ｆｉｌｌｅｄ　ｃｈａｎｎｅｌｓ）から拡散することにより、また は元のマイクロカプセル化段階でポリマー溶媒を除去することによって生じるボ イドにより放出され得る。第２の機構は、ポリマーの分解によって放出が増強さ れることである。時間と共にポリマーは侵食され始め、そしてデバイス中で多孔 度および微細構造が増大する。

これにより、薬剤放出の経路がさらに作り出される。

ポリマーの分解は、バックボーン上のエステル結合が自発的に加水分解すること により生じる。従って、この速度は、ポリマーの水を吸収する特性を変化させる ことにより制御され得る。ポリマーの特性とは、モノマーの比率（グリコリドに 対するラクチド）、Ｄ／Ｌラクチドとは対照的なし一ラクチドを使用すること、 およびポリマーの分子量を包含する。これらの因子によって、最終的に水の浸透 速度を支配する親水性および結晶化度が決定される。親水性の賦形剤（例えば、 塩、炭水化物、および界面活性剤）もまた、水の浸透を増大させるためにデバイ ス内に取り込まれ得、従ってポリマーの侵食が促進される。

ポリマーの特性および調剤形の特性を変化させることにより、これらの放出機構 の各寄与を制御し得、そしてＡＣ刊の放出速度を改変し得る。ゆっくりと侵食さ れるポリマー（例えば、ポリし一ラクチド、またはグリフリド組成が低い高分子 量ラクチド−グリコリドコポリマー）により、拡散が制御されて放出される。グ リコリド組成を増加させ、そして分子量を減少させると、ポリマーの吸水性およ び加水分解が両方とも増大し、そして放出速度に関する侵食要素を付は加える。

放出速度はまた、マイクロスフェア内のＡＣＴＨの負荷を変化させることにより 制御され得る。負荷を増大させると、薬剤の溶解によって形成される相互に結合 したチャネルのネットワークが増大し、そしてマイクロスフェアからの薬剤の放 出が増強される。ＡＣＴ）Ｉ負荷の好ましい範囲は、３〜３０％（育／Ｗ）の範 囲内である。

ポリマーの加水分解は、酸性または塩基性のｐＨで促進される。従って、酸性ま たは塩基性の賦形剤を含有させることが、ポリマーの侵食速度を調節するのに用 いられ得る。賦形剤は、微粒子として添加され得るか、取り込まれたＡＣＴＨと 混合され得るか、またはポリマー内で溶解され得る。

賦形剤はまた、放出の持続性（ｄｕｒａｔｉｏｎ）に依存する効力を維持するた めに、ＡＣＴＨに添加され得る。安定剤としては、炭水化物、アミノ酸、脂肪酸 、および界面活性剤が挙げられ、これらは当業者に公知である。さらに、ＡＣＴ Ｈの溶解性を変化させる賦形剤（例えば、塩、複合化試剤（ｃｏｍｐｌｅｘｉｎ ｇ　ａｇｅｎｔ）くアルブミン、プロタミン））が、マイクロスフェアからのタ ンパク質の放出速度を制御するのに使用され得る。

ＡＣＴＨの放出速度、分解速度、安定性を変化させる添加物ＡＣＴＨの安定剤は 、重量基準でタンパク質に対する比率に基づいている。例として、炭水化物（例 えば、スクロース、ラクトース、マンニトール、デキストラン、およびヘパリン ）、タンパク質（例えば、アルブミンおよびプロタミン）、アミノ酸（例えば、 アルギニン、グリシンおよびトレオニン）、界面活性剤（例えば、Ｔｖｅｅｎ” およびＰｌｕｒｏｎｉｃＴＭ）、塩（例えば、塩化カルシウムおよびリン酸ナト リウム）、および脂質（例えば、脂肪酸、リン脂質、および胆汁酸塩）が挙げら れる。

炭水化物対タンパク質、アミノ酸対タンパク質、タン、ｆり質安定剤対タンパク 質、および塩対タンパク質の比率は、一般に、１１０から４・１であり；界面活 性剤対タンノくり質が、１・１０００からｌ　２０であり；そして脂質対タンパ ク質が、１：２０から４．１である。

分解増強剤は、ポリマー重量に対応した重量に基づいている。それらは、用いる 化合物に依存し、タンパク質相に添加され得、分離相として（すなわち微粒子と して）添加され得るか、またはポリマー相中で共に溶解され得る。あらゆる場合 において、この量は、０６１％（Ｗ／Ｗ、ポリマー）と３０％（ｗ／ｗ、ポリマ ー）との間であるべきである。分解増強剤のタイプとしては、無機塩（例えば、 硫酸アンモニウムおよび塩化アンモニウム）、有機酸く例えば、クエン酸、安息 香酸、ヘノくリン、およびアスコルビン酸）、無機塩基（例えば、炭酸ナトリウ ム、炭酸カリウム、炭酸カル／ラム、炭酸亜鉛、および水酸化亜鉛）、および有 機塩基（例えば、硫酸プロタミン、スペルミン、コリン、エタノールアミン、ジ ェタノールアミン、およびトリエタノールアミン）、ならびに界面活性剤（例え ば、ＴｗｅｅｎＴＭオヨびＰｌｕｒｏｎｉｃＴＭ）が挙げられる。

マトリックスに対して微細構造を与える増孔剤（すなわち、無機塩および糖など の水溶性化合物）を、微粒子として添加する。その範囲は、１％（ｖ／ｖ、ポリ マー）と３０％（ｖ／ｗ、ポリマー）との間にあるべきである。

患者に対するマイクロスフェアの投与 ＡＣＴＨ含有マイクロスフェアの効果的な量が、皮下注射、筋向注射、腹腔的注 射、および皮内注射によって、粘膜に投与することによって（例えば、鼻腔内、 または座薬により）、または、種々の医療状況（例えば、多発性硬化症の急性悪 化、慢性関節リウマチおよび乾酊性関節炎などのリウマチ性疾患の急性悪化、潰 瘍性大腸炎の急性エピソード、全身性エリテマトーデスの急性発症、および魚頭 けいれん）でのＡＣＴＨによる治療に対する公知のパラメーターに基づいて、Ａ ＣＴＨの所望の投与量を提供するインサイチュでの送達によって、患者に投与さ れる。

本発明は、以下の非制限的な実施例によってさらに説明される。

実施例１　：　ＡＣＴＨ含有ポリ（Ｌ−乳酸）マイクロスフェアの調製０、５２ ｇのポリ（し−ラクチド）（Ｒｅｓｏｍｅｒ　ＬｉＯ２，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ 　ｌｎｇｅｌｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎ）を、５．０ｍｌの塩化メチレンに溶解し た。このポリマー溶液に、粒径が２〜１０ミクロンの範囲にある凍結乾燥したブ タＡＣＴＨパウダー（Ｄｉｏｓｙｎｔｈ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）３８ｍｇを添 加した。そして、溶液を１０ａ＋ｌのガス気密７リンジ（ｇａｓ　ｔｉｇｈｔ　 ｓｙｒｉｎｇｅ）に入れた。１００％エタノール２００＋ｗｌを円形のポリプロ ピレン製容器（直径１７ｃｍ、深さ８　ｃｍ）に加えた。この溶液を液体窒素中 で凍結し、そして、液化窒素５００ｍ１で覆った。ポリマータンパク質混合物を 、ンリンジボンプ（２ｍｌ／分）でンリンジから吸い上げ、液体窒素および凍結 エタノールの容器の上部に設置された超音波ノズル（Ｍｏｄｅｌ、　５ｏｎｉｃ ｓ　ａｎｄ　Ｍａｔｅｒｉａｌ、　Ｄａｎｂｕｒｙ、　ＣＴ）へ導いた。＠濁液 をノズルから噴霧して小滴にした。

小満は液化窒素に接触すると凍結し、そしてマイクロスフェアを形成し、凍結エ タノール上まで沈み込んだ。

容器を一８０°Ｃにして液体窒素を蒸発させ、そして時間と共にエタノールを溶 かした。エタノールが溶けると、マイクロスフェアは液体中に徐々に沈み、塩化 メチレンが抽出される。

２４時間後、予め一８０℃に冷却した１００％エタノール２００ｍ１をさらに容 器に加えた。３日後、マイクロスフェアおよびエタノールのスラリーを、１ミク ロンＤｕｒａｐｏｒｅ”膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、　Ｂｅｄｆｏｒｄ、　ＭＡ） を用いて濾過した。次いで、濾過したマイクロスフェアを凍結乾燥した。乾燥し たマイクロスフェアを、０．０１％のアジ化ナトリウムを含有するリン酸緩衝生 理食塩水ｐＨ７゜４に懸濁させ、そしてＡ　ＣＴＨの放出をモニターした。図１ に示すように、ＡＣＴＨの放出は、少なくとも３５日間維持された。

実施例２　：　ＡＣＴＩＩおよび賦形剤含有ポリ（Ｄ／Ｌ−乳酸）マイクロスフ ェアの調製 以下の変更点以外は、実施例１の手法を繰り返した：０．５ｇのポリＤ／Ｌラク チド（Ｒｅｓｏｍｅｒ　Ｒ１０４，Ｂｏｅｈｒｊｎｇｅｒ　Ｉｎｇｅｌｈｅｉｌ 、Ｇｅｒｍａｎｙ）を、２．５ｍｌの塩化メチレンに溶解した。このポリマー溶 液に、凍結乾燥したブタＡＣＴＨ６６ｍｇ、および賦形剤として炭酸カルシウム （Ｓｐｅｃｔｒｕｍ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、　ＣＡ）　６３＋ｎｇを添加した。

図２に示すように、ＡＣＴＨの放出は、少なくとも４５日間維持された。

実施例３　：　ＡＣＴｎ含有Ｄ／Ｌりラクチド−グリコリドコポリマーマイクロ スフェアのＩｌＭ 以下の変更点以外は、実施例１の手法を繰り返した：０．５１ｇのＤ／Ｌラクチ ド−グリコリドコポリマー（５０：　５０）（へ牛すフルオロイソブロバノール （ｈｅｘａｆ　１ｕｏｒｏｉｓｏｐｒｏｐａｎａｎｏｌ）　（Ｂｉｒｍｉｎｇｈ ａｍ　Ｐｏｌｙｍｅｒｓ　Ｉｎｃ、、　Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、　ＡＬ）中で、 ０．１５のインヘレント粘度）を、２．２１１の塩化メチレンに溶解した。この ポリマー溶液に、凍結乾燥したブタＡＣＴＨ２９ｍｇを添加した。図３に示すよ うに、ＡＣＴ）Ｉの放出は、３５日間維持された。

実施例４　：　ＡＣＴＨ含有ポリ（Ｌ−ラクチド）マイクロスフェアの調製 以下の変更点以外は、実施例１の手法を繰り返した：０．６８ｇのポリ（しラク チド）（ＬｉＯ２）を、６８＋＊１の塩化メチレンに溶解した。このポリマー溶 液に、凍結乾燥したブタＡＣＴＨ９（ｌａｇを添加した。図４に示すように、Ａ ＣＴ）ｌの放出は、１０日間維持された。

実施例５：ＡＣＴＨ含有ポリ（Ｌ−ラクチド）マイクロスフェアの調製 以下の変更点以外は、実施例１の手法を繰り返した：０．５ｇのポリ（Ｌ−ラク チド）（クロロホルム中で０．１３のインヘレント粘度＞（Ｂｉｒ＋ｍｉｎｇｈ ａｍ　Ｐｏｌｙｍｅｒｓ　Ｉｎｃ、、Ｂｉｒ＋ｍｉｎｇｈａｍ、ＡＬ）を、　５ ．０ｍｌの塩化メチレンに溶解した。このポリマー溶液に、凍結乾燥したブタＡ ＣＴＨｌ５ｍｇを添加した。４つの分離したノ、ｓｌ・ノチを調製し、そして凍 結乾燥工程後に共にブールした。

図５に示すように、マイクロスフェアのブールした／　ｓｌノチからのＡＣＴＨ の放出は、５日間維持された。塩化メチレンおよびアセトンの混合物中にポリマ ーを溶解することにより、ＡＣＴＨをマイクロスフェアから抽出した。回収した タンノ（り質を、ＡＣＴＨｉ、：ＪｔするＵＳＰアッセイを用（為で、効力（こ つ（Ａで試験した。

出発材料と比較して、効力において有意な変化（まな力）つた。

実施例６：ラットに投与されたマイクロスフェアからのＡＣＴ１１放出のインビ ボにおける薬理学 実施例５で調製したマイクロスフェアの薬理学を、ラット中インビボで試験し、 そして、溶液性ＡＣＴＨの等量を投与した場合の薬理学と比較した。う・、トＡ ＣＴ）！の内生生産を完全に抑制するために、デキづメタシンで抑制したうｙト を用（Ｘた。

血漿中のコルチコステロンのレベルを、投与したＡＣＴＨの生物学的活性の尺度 として経時測定した。

デキサメタシンで抑制してから４日後す＜′（こ、動物（こ、注射用ＡＣＴＨマ イクロスフェアまたは注射用ＡＣＴ）１水溶液を皮下注射した。このとき、コル チコステロンの血漿レベル（よ、ゼロｎｇ／ｍｌ、またはゼロｎｇ／ｍｌ付近で 安定して０ること力く保証されていた。動物をメトキシフルラン（ｍｅｔｈｏｘ ｙｆｌｕｒａｎｅ）で麻酔し、そして注射前、および注射後３日までの選択した 時間（こ、尾の静脈から血液サンプルを採取した。血漿を血液サンプルカ）ら分 離し、ＲＩＡによりフルチコステロンに対してア・ソセイした。

２回のマイクロスフェアＡＣＴＨ実験および３回の溶液性ＡＣＴＨ実験における 、コルチコステロン対時間の曲線の平均を図６１こホす。ここでＡＣＴＩ（の投 与量は、全ての実験１こお（１てすこ（また（１同じであった。

ＡＣＴ）ｌマイクロスフェアを注射した動物は、同じ投与量でＡＣＴｌｌ溶液を 注射した動物の約１．５〜はぼ２借長−１時間、コルチコステロン濃度の高さを 維持した。そして、コルチコステロンの濃度は、溶液を注射した動物よりもマイ クロスフェアを注射した動物の方が、実験の全経過にわたって高０ことを観ｆＡ １１した。

本発明である、マイクロスフェアの製造方法、およびそれらの生成物の変更およ び変化が、前記の発明の詳細な説明より当業者に自明である。このような変更お よび変イしくま、添付の請求の範囲の範囲内にあることを意図して−する。

フロントページの続き （８１）指定回　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ） 、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＭＬ、　ＭＲ， ＳＮ、　ＴＤ、　ＴＧ）、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　ＣＺ、Ｆ Ｉ、　ＨＵ、−ＪＰ、ＫＰ、ＫＲ，ＬＫ、ＭＧ、ＭＮ、ＭＷ、Ｎｏ、ＮＺ、　Ｐ Ｌ、　ＲＯ，ＲＵ、ＳＤ、ＳＫ、　ＵＺ、　ＶＮ。

（７２）発明者　バーンスタイン、ハワードアメリカ合衆国　マサチューセンタ ０２１３９　、ケンブリッジ、センター　ストリート５

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. １．１０００ミクロン未満の直径を有し、０．重量％と５０重量％との間の濃度 で副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）を含有し、そして生理的条件下で一日を越 える期間にわたりＡＣＴＨを放出し、ポリ（ラクチド）、ラクチドーグリコリド コポリマー、ポリ（カプロラクトン）、ポリカルボネート、ポリアミド、ポリ無 水物、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリシアノアクリ レート、分解性ポリウレタン、ポリアタリレート、エチレン−ビニルアセテート のポリマーおよび他のアシル置換セルロースアセテートおよびそれらの誘導体、 多糖、非侵食性ポリウレタン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッイヒビ ニル、ポリ（ビニルイミダゾール）、クロロスルホン化ポリオリフィン、ポリエ チレンオキシド、それらのコポリマーおよび混合物からなる群より選択される生 体適合性ポリマーから形成されるポリマーマイクロスフェアであって、ポリマー およびＡＣＴＨの混合物を液化した不活性ガス中にスプレーすることにより形成 される、ポリマーマイクロスフェア。
2. ２．前記ポリマーがポリラクチドである、請求項１に記載のマイクロスフェア。
3. ３．前記直径が、１８０ミクロン未満である、請求項１に記載のマイクロスフェ ア。
4. ４．ポリマーの侵食速度を調節する賦形剤、ＡＣＴＨの効力を安定化する賦形剤 、およびＡＣＴＨの溶解性を変化させる賦形剤からなる群より選択される賦形剤 をさらに含有する、請求項１に記載のマイクロスフェア。
5. ５．前記侵食速度を調節する試剤が、１％（ｗ／ｗ、ポリマー）と３０％（ｗ／ ｗ、ポリマー）との間の濃度で、微粒子形態でポリマーに添加される増孔剤であ る、請求項４に記載のマイクロスフェア。
6. ６．前記安定剤が、炭水化物、アミノ酸、タンパク質、脂質、塩、脂肪酸、およ び界面活性剤からなる群より選択される、請求項４に記載のマイクロスフェア。
7. ７．ＡＣＴＨの溶解性を変化させる前記賦形剤が、０．１％（ｗ／ｗ、ポリマー ）と３０％（ｗ／ｗ、ポリマー）との間の濃度で存在し、そして、塩、複合化試 用、無機酸、有機酸、無機塩基、有機塩基および界面活性剤からなる群より選択 される、請求項４に記載のマイクロスフェア。
8. ８．０．１％と５０％との間のＡＣＴＨを含有し、そして１８０ミクロン未満の 直径を有する生体適合性ポリマーマイクロスフェアを、ＡＣＴＨでの治療を必要 とする患者に投与することを包含する、ＡＣＴＨの投与方法であって、該マイク ロスフェアが、ポリマーおよびＡＣＴＨの混合物を液化した不活性ガス中にスプ レーすることにより形成され、該ＡＣＴＨが１日を越える期間にわたり放出され る、方法。
9. ９．ポリ（ラクチド）、ラクチドーグリコリドコポリマー、ポリ（カプロラクト ン）、ポリカルボネート、ポリアミド、ポリ無水物、ポリアミノ酸、ポリオルト エステル、ポリアセタール、ポリシアノアクリレート、分解性ポリウレタン、ポ リアクリレート、エチレン−ビニルアセテートのポリマーおよび他のアシル置換 セルロースアセテートおよびそれらの誘導体、多糖、非侵食性ポリウレタン、ポ リスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニルイミダゾール） 、クロロスルホン化ポリオリフィン、ポリエチレンオキシド、およびそれらのコ ポリマーおよび混合物からなる群より選択される生体適合性ポリマーから形成さ れる、請求項８に記載の方法。
10. １０．前記ポリマーがポリラクチドである、請求項９に記載の方法。
11. １１．前記マイクロスフェアの前記直径が、７０ミクロン未満である、請求項８ に記載の方法。
12. １２．前記マイクロスフェアが、筋内注射、皮下注射、腹腔内注射、または皮下 注射によって投与される、請求項８に記載の方法。
13. １３．前記マイクロスフェアが、粘膜に適用することにより投与される、請求項 ８に記載の方法。
14. １４．０．１重量％と５０重量％との間の濃度で副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴ Ｈ）を含有する、ポリ（ラクチド）、ラクチドーグリコリドコポリマー、ポリ（ カプロラクトン）、ポリカルボネート、ポリアミド、ポリ無水物、ポリアミノ酸 、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリシアノアクリレート、分解性ポリ ウレタン、ポリアクリレート、エチレン−ビニルアセテートのポリマーおよび他 のアシル置換セルロースアセテートおよびそれらの誘導体、非侵食性ポリウレタ ン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリフッ化ビニル、ポリ（ビニルイミダゾ ール）、クロロスルホン化ポリオリフィン、ポリエチレンオキシド、およびそれ らのコポリマーおよび混合物からなる群より選択される生体適合性ポリマーから 形成される、１８０ミクロン未満の直径を有するポリマーマイクロスフェアを製 造することを包含する、ＡＣＴＨの制御され維持された投与のためのデバイスの 製造方法であって、以下の工程を包含する、方法：ａ）ポリマー−ＡＣＴＨ花溶 液の小滴を、液化ガスへ噴霧することにより凍結させる工程であって、該液化ガ スは、該噴霧されたポリマー溶液を接触により直ちに凍結するのに効果的な、該 ポリマー溶液の凝固点より低い温度を有し、該ポリマーの凍結液体非溶媒の層を 覆っており、該ポリマーの溶媒が該液体非溶媒と混和性である、工程； ｂ）該ポリマー溶液の凍結小滴中の、該ポリマー溶媒を溶解させる工程；および ｃ）該溶媒を該小滴から液体非溶媒中に抽出し、球形ポリマーマイクロスフェア を形成する工程。
15. １５．前記マイクロスフェアが、ポリマーの侵食速度を調節する賦形剤、ＡＣＴ Ｈの効力を安定化する賦形剤、およびＡＣＴＨの溶解性を変化させる賦形剤から なる群より選択される賦形剤をさらに含有する、請求項１４に記載の方法。
16. １６．前記侵食速度を調節する試剤が、１％（ｗ／ｗ、ポリマー）と３０％（ｗ ／ｗ、ポリマー）との間の濃度で、微粒子形態でポリマーに添加される増孔剤で ある、請求項１５に記載の方法。
17. １７．前記安定剤が、炭水化物、アミノ酸、タンパク質、脂質、塩、脂肪酸、お よび界面活性剤から成る群より選択される、請求項１５に記載の方法。
18. １８．ＡＣＴＨの溶解性を変化させる前記賦形剤が、０．１％（ｗ／ｗ、ポリマ ー）と３０％（ｗ／ｗ、ポリマー）との間の濃度で存在し、そして、塩、複合化 試剤、無機酸、有機酸、無機塩基、有機塩基、および界面活性剤からなる群より 選択される、請求項１５に記載の方法。