JPH07505480A - 切片標本作製のための標本、特に電子顕微鏡標本を準備する方法および装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 切片標本作製のための標本、特に電子顕微鏡標本を準備する方法および装置本発 明は、特にカプセル内での次の重合包埋のために試料を液体の中に温度するため の方法および装置に関する。特に−１２０°Ｃと＋８０°Ｃの間の温度で行われ る重合包埋は、顕微鏡、特に電子顕微鏡による組織化学的な検査のための次の切 片標本作製用の試料の準備のために役立つ。

今日一般的である標準方法（極性有機媒体内での緩衝されたアルデヒド溶液およ びまたは四酸化オスミウム溶液内における化学的固定、モノマー内での温度、合 成樹脂内ての重合包埋；　Ｈ，Ｓｉ　ｔｔｅ著、ｍｔａ−巳ｘｔｒａ　Ｎｒ、　 １０．　Ｕｍｓｃｈａｕ−出版社Ｂｒｅｉ−ｄｅｎｓｔｅｉｎ有限責任会社、フ ランクフルト　マイン１９８５年参照）の代わりに、生物学的な試料がますます 非常に迅速に凍らせられる（“極低温固定”）。続いて、試料に含まれる氷が約 −８０°Ｃ〜−１２０°Ｃの温度で極性有機液体（例えばメタノールまたはアセ トン）中に凍った試料を温度することによって溶かされ、この媒体と交換され（ “極低温置換”　：これについては特にドイツ連邦共和国特許第２９４４４６４ 号明細書または同第３４２５７４４号明細書あるいは比５ｉｔｔｅ著。

ＺｅｉｓｓＪＩＥＭ　３．２５〜３１．１９８４年あるいはＩ（、Ｓｉ　ｔｔｅ 他著、ＧＥＴ　Ｌａｂｏｒ−Ｍｅｄｉｚｉｎ　１０゜１９９〜２０８．１９８７ 年あるいはＨ，Ｓｉ　ｔｔｅ他著、編集者Ａ、　Ｊ、　Ｖｅｒｋｌｅｉ　ｊおよ びＪ、　Ｌ、　Ｍ、　Ｌｅｕ−ｎｉｓｓｅｎ、“Ｉｍｍｕｎｏ−Ｇｏｌｄ　Ｌａ ｂｅｌｉｎｇ　ｉｎ　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｌｏｇｙ、Ｓｎ”　６４〜９３、特に第１ ［１章“迅速冷凍、冷凍置換および純粋包埋”　、　ＣＲＣ−Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏ ｃａ　Ｒａｔｏｎ、　フロリダ。

米国、　１９８９年：そこで引用された文献参照）、そして最後にモノマー温度 の後で紫外線照射によって開始される重合包埋か低温で行われる。この代替的な ”ＰＬＴ法−（ＰＬＴはＰｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ　Ｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｏｆ　Ｔ ｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　”の頭文字である。

これに関しては低温包埋および特にＥ、　Ｃａｒｌｅｍａ１ｍ他著、Ｊ、　ｊＪ Ｔｍ鏡、オフスフオー）”１２６．１２３〜１４３．１９８２年並びにＢ、　Ｈ ｕｒｎｂｅｌ著および編集者任者入（、λＩｕｅｌｌｅｒ、“生物学的標本作製 の科学”ＳＥＭ社、シカゴ、Ｓｎ、１７５〜１８３．１９８６年；そこで引用さ れた文献参照）は、（例えば緩衝されたアルデヒド中ての）試料の弱い化学的固 定から出発し、添加された極性媒体（例えばメタノール）の濃度を連続的に上昇 させながら、その都度の混合物の氷点に一致する範囲まで試料の温度が連続的に 下げられる。この方法は紫外線による低温包埋によって終了する。この包埋は技 術水準では通常、充分に脱水した試料をモノマー成分内に段階的に移し、続いて 一３００Ｃ〜−７０’Ｃの温度で紫外線照射によって重合することによりて行わ れる。

標準方法による標本作製工程および低い温度で実施される方法は、脱水媒体また は置換媒体の複数回の交換および純粋なモノマー成分への段階的な移行を必要と する。低い温度での作業にとって一般的であるエッペンドルフ小管を使用する場 合には、移行は各々の標本について個別的に行わなければならず、多量の試料の 場合には非常に時間がかかる。特に、低い温度での紫外線照射の前に個々の容器 すへてを気密閉鎖しなければならない。なぜなら、そうしないと、個々の成分が 蒸発し、合成樹脂の完璧な硬化がもはや不可能であるからである。多数の固定溶 液および置換媒体が高い蒸気圧の強い毒（例えば揮発性０ｓ０４）を含み、普通 のモノマー成分が強いアレルゲンを含んでいるので、蒸気の吸入や皮膚接触は重 い病気になるという他の問題がある。

本発明の課題は、特に低い温度の場合にも標準方法によるカプセル包埋を簡単化 し、それによって時間を節約すると共にアレルゲンとの皮膚接触の危険や揮発性 毒素の吸入の危険を最小限に減らすことである。これは特に複数の異なる試料の 同時標本作製について当てはまる。この課題は本発明に従い、試料が先ず最初に 上部開放のカプセル（“多孔カプセル“）に入れられ、この場合カプセルは特に その筒形の壁の下側の３分の１のところに少なくとも一つの貫通孔を備え、この 貫通孔が試料の直径よりも小さくなっており、そしてこの通過孔を経て少なくと も一つの液体が充填され、試料がそれぞれその中に温度され、続いて多孔カプセ ルが同様に特に筒形の壁を有する大径のカプセル（“被覆カプセル”）に挿入さ れ、この場合被覆カプセル内にある液体が少なくとも、多孔カプセルと被覆カプ セルの間の隙間に充填されることによって解決される。

多孔カプセルの孔（特に輪状に配列された孔）はそれぞれ、液体の流入および流 出を許容し、その寸法によって対象物の排出ひいては損失を阻止する。最も簡単 な場合には、この多孔カプセルはピンセットによって、びんまたは小さな容器内 にある異なる媒体内に順次入れられる。この場合、浸漬時に媒体が孔を通って下 側から多孔カプセルに充填される。この媒体は持上げた後で再び流出する。この 段階で、多孔カプセルには重合可能なモノマー成分が充填される。このモノマー の流出を防ぐために、多孔カプセルは後で、少なくとも部分的にモノマーを充填 した“被覆カプセル”に挿入される。この被覆カプセルの内径は多孔カプセルの 外径よりも少しだけ太き（なっている。モノマーは多孔カプセルと被覆カプセル の間の隙間に充填され、その後公知のごとく熱または紫外線照射によって重合可 能である。この場合、紫外線重合のために、紫外線透過性材料、特にポリエチレ ン、ポリプロピレン、アセタール樹脂またはゼラチンからなるカプセルが設けら れている。

本発明は、前記の本発明による方法のほかに、特に本発明による方法を実施する ための特別な装置、すなわち試料を収容するための多孔カプセル、試料を充填可 能な多孔カプセルを収容するだめの被覆カプセル、少なくとも一つの多孔カプセ ルおよびまたは少なくとも一つの被覆カプセルを保持するためのホルダーおよび 収容装置、多孔カプセルおよびまたは被覆カプセルのホルダーのための収容部を 備えた液体浴容器を対象とし、更に、方法を実施するために、次の構成要素、す なわち 少なくとも一つの多孔カプセル 少なくとも一つの被覆カプセル、 少なくとも一つの多孔カプセルのための収容装置、少なくとも一つの被覆カプセ ルのための収容装置、少なくとも一つの多孔カプセルと少なくとも一つの被覆カ プセルを取扱操作するためのホルダーおよび 液体浴容器 の少なくとも二つまたはすべてを備えた、液体中に試料を温置するための装置を 対象としている。

本発明による方法を実施するために、公知種類の市販の道具（例えば前述したピ ンセット）を使用することができる。しかし、試料を保持するために特別な収容 部材、例えば中央に穴のあいたプラグ、このプラグのための保持部材、例えばス リーブ状のホルダーを使用すると有利である。これにより例えば、多数の小さな 試験管に異なる媒体を充填し、多孔カプセル内の試料をそれぞれ所定の時間この ような容器内に入れ、その後ホルダー、プラグおよび多孔カプセル内の試料から なる装置を持上げ、最初の媒体を排出した後次の媒体に移すことが、リスクのな い状態で可能である。方法を実施するための装置の有利な実施形では、複数の多 孔カプセルが一つのホルダー上で複数のプラグに設けられるので、任意の数の試 料と多孔カプセルを、一方の媒体から次の媒体に同時に移すことができる。

本発明による方法を実施するための装置の他の実施形では、少なくとも二つの多 孔カプセルが一つの容器内に所定の幾何学的配置構造で設けられる。容器内にあ るすべての多孔カプセルは、容器の中央の穴に脱水媒体または置換媒体を充填し た後、一つの作業工程で、押しのけ体を入れることによって、多孔カプセルの多 数の孔を通って充填される。この媒体の対流は、押しのけ体を持上げかつ再度性 めることにより、すへての試料について同時に達成される。媒体の交換は、押し のけ体内の通路を経て古い媒体を吸い出すことにより、同様にすべての標本につ いて同時に行われる。新しい媒体はこの押しのけ体内の通路を経て充填される。

モノマー湯面が終了した後で、モノマーを充填した多孔カプセルは再び一つの作 業工程で前述のようにプラグに嵌め込まれる。このプラグは前記容器内の多孔カ プセルの配置と同しようにホルダー上に幾何学的に配置されている。続いて、多 孔カプセルの多数の孔は、多孔カプセルを幾分大きな直径の前述の被覆カプセル 内に挿入することによって、一つの作業工程で閉鎖される。この被覆カプセルに は前もって少なくとも部分的にモノマー成分が充填されている。この場合、被覆 カプセルは他の容器内に、ホルダー上のプラグまたは前記の容器内の多孔カプセ ルと同しように幾何学的に配置されている。モノマーを充填した被覆カプセルは 例えば段付きプラグの第２の段部に嵌め込まれ、段付きプラグの下側の段部上の 多孔カプセルと同様に、この第２の段部にきつい滑り嵌めて付着する。多孔カプ セルの外側表面と被覆カプセルの内側表面の間隔は、次の切片標本作製（これに ついてはＨ，５ｉｔｔｅ　１９８５年、１．ｃ参照）の観点がら、約０．５ｍｍ から最大２ｍｍである。被覆カプセルを嵌め込んだ後で、すへてのカプセルはボ ルダ−と−緒に、マニピュレータによって熱重合のために恒温器に移されるがあ るいは低温包埋のために渦状容器に移される。この渦状容器にはほぼプラグの下 側縁部まて液体（例えばアルコール）が充填される。この液体は発熱重合反応時 に発生する熱の排出を促進する。低温室内での操作のために、前述のマニピュレ ータは熱絶縁性把手を備えている。

本発明による方法およびこの方法を実施するための装置の他の有利な実施形では 、この操作の少なくとも一部が使用者の協力なしに自動装置によって行われる。

例えば、多孔カプセルは前記のように手動で充填可能であり、標本を備えた多孔 カプセルは続いて“組織プロセッサ”　（包埋自動装置）に入れることができる 。

この組織プロセッサは例えば“回転木馬望装置またはドラム型装置′のように（ これについては圧５ｉｔｔｅおよびに、　Ｎｅｕｍａｎｎ著“電子ＩＪＩ微鏡の 方法集“編集者Ｇ。

ＳｃｈｉｍｍｅｌおよびＷ、ＶｏｇｅｌＬ　Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈ ｅ出版有限責任会社、シュトゥノトガルト、分冊比１９８３年、特にＳｎ、　１ ８４〜１９１並びにＡｂｂｎ、　ｌ００ａ、　１０１参照）カプセルをそれぞれ 媒体を入れた容器に連続的に沈める。必要な場合には何度も持ち上げたり沈めた りして対流か発生する。この対流は発生した傾きを低減する。続いて、カプセル を持上げ、最初の媒体を滴下した後、試料を有する、ホルダー上の多孔カプセル を、他の媒体を充填した次の容器に移す。モノマー透浸が終了した後で、すべて の多孔カプセルを一緒に自動的にまたは手動で前述のように被覆カプセルに挿入 し、重合部に供給することができる。技術水準で知られている今までのすべての 装置と異なり、この操作は特別な熟練なしに短い時間で、そしてアレルゲンに皮 膚が接触する危険なしに、あるいは有毒ガスを吸入する危険なしに行うことがで きる。

次に、略図に基ついて、本発明による方法またはその実施に役立つ装置の実施例 を詳しく説明する。

図１８は段付きプラグ上の、標本を備えた個々の多孔カプセルを示す概略断面図 であり、このプラグは把手を備えたマニピュレータ上にあり、多孔カプセルは容 器内にある媒体内に浸漬され、この媒体が充填されている。

図１ｂは図１ａによる装置のための多孔カプセルと被覆カプセルの概略断面図で あり、カプセルと、［１Ｊｌａの段付きプラグに嵌め込んだ時に両カプセルの間 に生しる隙間空間との直径および壁厚の寸法を示している。

図１ｃは穿孔されたホルダー上の簡単なプラグ上にある、フランジ付き縁部を備 えた二つの多孔カプセルを示す概略断面図であり、ホルダーはマニピュレータ上 にあり、この場合多孔カプセルのフランジ付き縁部に被覆カプセルが嵌め込まれ 、多孔カプセルが標本を備え、両カプセルにモノマー成分が充填されている。

図２ａは多孔カプセルを収容するための二つの穴を有する容器の概略平面図（他 の穴は破線で示しである）。

図２ｂは嵌め込んだ多孔カプセルと挿入した押しのけ体を備えた、図２ａの容器 を示す概略断面図である。

図２ｃは被覆カプセルを挿入した、被覆カプセルを収容するための容器を示す概 略断面図である。

図２ｄは液体を充填した、紫外線重合のための渦状容器内で支柱上にある、２個 の二重カプセルを備えた穿孔ホルダーを示す図であり、二重カプセルは標本とモ ノマー成分を含んでいる。

図２のすへての詳細図は、寸法、特に容器内の多孔カプセルと被覆カプセルのた めの穴の間隔り並びに多孔カプセルと被覆カプセルを収容するためのホルダーの プラグの間隔が互いに一致してる。

図１ａは本発明による方法を実施するための装置の簡単な実施形を示している。

この場合、外径へと壁厚Ｗを有する面形の多孔カプセル２は、外径（Ａ−２Ｗ） を有する段付きのプラグ４の下側の段部にきつい滑り嵌めで嵌め込まれ、段付き プラグ４は被覆カプセル３を後で嵌め込むための、直径（Ｂ−２Ｗ）を有する第 ２の段部を備えている。段付きプラグ４は通気および排気のために中央の穴２８ を備え、把手２９を有する簡単なマニピュレータ９′　（例えばスリーブ）に固 定されている。多孔カプセル２はその下側の３分のｌのところに、少なくとも一 つの孔、図示の場合孔の輪を備えている。この孔の直径は試料７の直径よりもは るかに小さい。装置２．　４．　７．　９’、２９は容器３ｏとその中にある媒 体３１（例えば、試料７を化学的に固定するためのアルデヒド溶液）内に浸漬可 能である。この場合、媒体３１が下側から孔６を通ってカプセル２に充填され、 カプセル２内に含まれる空気が段付きプラグ４の穴２８を通って、次にマニピュ レータ９′を通って逃げる。本発明による方法の促進は、両方向矢印の方向に装 置２゜４．７．９’、２９を垂直方向に上下運動させることによって可能である 。この場合、孔の列６を通って流出または流入する液体３１の対流により、試料 ７の表面の濃度が低下する。重合のために、モノマー成分５を少なくとも部分的 に充填した被覆カプセル３が、破線で示すように、プラグ４の第２の段部に嵌め 込まれ、装置１２．　４．　７．　９’、２９は熱重合のために恒温器内に移さ れるかあるいは紫外線重合（これについて図２ｄ参照）のために低温装置に移さ れる。マニピュレータ９’、２９によって取扱操作することにより、対象物７を 多孔カプセル２に入れ、段付きプラグ４に多孔カプセル２を嵌め込んだ後で、皮 膚がアレルゲンに接触する危険が簡単に回避され、かつ通風の下での作業時に有 毒ガスを吸入する危険か簡単に回避される。

図１ｂは図１ａで使用した多孔カプセル２と被覆カプセル３の寸法と相対的な位 置関係を示している。例えば、多孔カプセル２は外径Ａ、壁厚Ｗおよび高さＨｌ を存し、被覆カプセル３は外径Ｂ、壁厚Ｗおよび高さＨ２を有する。段付きプラ グ４のきつい滑り嵌め部は高さ区間Ｃに沿って延びている。多孔カプセル２の外 面と被覆カプセル３の内面との間の隙間はＳである。孔の列６は特に、多孔カプ セル２の半球状下側区間の約半分のところにある。この場合、個々の孔は直径り を存する。

カプセル２，３の外径Ａは塊包埋にとって普通である約４〜１０ｍｍのオーダー である。カプセルの壁厚は０．１〜０．５ｍｍのオーダー、その高さＨｌ、Ｈ２ は約８〜１５ｍｍのオーダーである。例えばホルダー９′に固定された段付きプ ラグ４の段部の高さＣはそれぞれ約２〜４ｍｍである。多孔カプセル２の外側表 面と被覆カプセル３の内側表面の間の隙間Ｓは約０．５〜２ｍｍであり、孔６の 直径は約０．２〜１ｍｍである。

図１ａと異なり、本発明による図１ｃの実施形は、それぞれ少なくとも二つの二 重カプセル２′、３によってそれぞれ一つの作業工程で方法を実施することがで きる。図１ａ、ｌｂと異なり、多孔カプセル２′は段なしの簡単なプラグ４′上 にある。このプラグは例えばねし締めによってホルダー１に固定されている。

ホルダーは紫外線（図２ｂ参照）の通過のための六８を備えている。多孔カプセ ル２′は図１ａに基づいて説明した条件下できつい滑り嵌めてプラグ４′に装着 され、範囲Ｃにフランジ２７を備えている。このフランジには被覆カプセル３か 同様にきつい滑り嵌めて取付は可能である。図１ｃの図示では、カプセル２′。

３には隙間Ｓを含めてモノマー成分５が充填され、それによってモノマー５の重 合の準備がなされている。そのために、ホルダー１はマニピュレータ９によって 運ぶことができる。マニピュレータは例えばねじ締めによってホルダー１に連結 可能である。

本発明による方法の個々の段階の実施並びに装置の本発明によるシステムの他の 構成部品の形成にとって、いろいろな部品の幾何学的な位置関係あるいは図１゜ ２ては特に例示的に示した両プラグ４または４′の平行な軸線の間隔りが重要で ある。図２はこれらの他の構成部品を示している。これらの他の構成部品は、連 続して入れられるいろいろな媒体（例えば最初の固定のためのアルデヒド溶液、 アルデヒドを含まない緩衝剤、第２の固定のための０ｓ０４溶液、０ｓ０４を含 まない緩衝剤、５０％、７５％、９０％および１００％のアセトンによる脱水段 、アセトンとモノマーの間の３：Ｉ、Ｉ：１およびｌ：３の混合、合成樹脂包埋 のための標準方法の際の純粋なモノマーまたは置換媒体、洗浄液、洗浄液とモノ マー成分の間の混合段、極低温置換のための方法の際の純粋なモノマー成分また は固定のための緩衝されたアルデヒド溶液、洗浄液としての緩衝剤、５０％、７ ５％および９０％のメタノールによるメタノール−水−混合、水を含まない純粋 なメタノールの３回の交換、メタノールとモノマー成分との３：ｌ、ｌ川および １．３の混合、ＰＬＴ法の際の純粋なモノマー成分）を交換するためあるいはカ プセル２，３または２′、３に充填するために必要である。

図２ａと図２ｂは多孔カプセル２または２′に充填および収容するための容器１ ０を示している。この容器は多孔カプセル２または２′を差し込むための、直径 （Ａ＋Ｔ）を有する少なくとも２個の穴１１を、中心軸線相互間隔りをおいて備 えている。この穴＋１の直径は公差値Ｔ（例えば０．５〜１ｍｍ）だけ多孔カプ セル２または２′の直径へよりも大きい。この公差値は実験に基づく公知のすべ ての条件下では、多孔カプセル２または２′の容易な差し込みおよび容易な取り 出しを保証する。穴は多孔カプセル２′のフランジ付き縁部２７を挿入するため に、段状に形成可能である。両穴１１の間には、押しのけ体１２を収容するため の大きな穴２４がある。この押しのけ体は同軸の中央穴１３を有する。この中央 穴はマニピュレータ（例えばねじを存する極低温マニピュレータ９）を収容する ための連結部（例えばねじ穴＋４）と、回転防止部材（例えばピン＋５）を備え 、穴２４内て昇降可能である。穴２４、押しのけ体１２および押しのけ体１２の 底の直径は、特に中央に設けられた通路Ｉ３に充填されかつこの通路から排出さ れる媒体が隙間Ｓ′を通って迅速に移動できるように採寸されている。容器ＩＯ は本発明の他の実施形では、上方に突出した縁部１６を備えている。この縁部は 押しのけ体１２の昇降時に媒体が溢れないようにする。

本発明による装置の他の構成部品としであるいは本発明による方法を実施するた めに、図２ｃはホルダー１．　４または１．４′を備えた被覆カプセル３を充填 および収容するための容器１７を示している。この容器の原理的な構造は容器１ ０とほぼ同しである。容器は、被覆カプセル３を収容するための少なくとも二つ の穴１８を備えている。この穴の平行な中心軸線は両プラグ４または４′の中心 軸線の間隔に一致して、例えば互いに間隔りをおいてホルダー１上にある。この 場合、穴１８の直径は、被覆カプセルの外径Ｂが大きいので、（Ｂ十Ｔ）である 。

この場合、Ｔは既に述へたように公差値として理解すべきである。両穴１８の間 には中央の穴２６が設けられている。この中央の穴の容積は少なくとも、被覆カ プセル３を収容するためのすへての穴１８の容積に相当する。容器１０と同様に 、容器１７の縁部Ｉ９は、被覆カプセル３を嵌め込むために多孔カプセル２また は２′を浸漬する際に溢れるモノマー成分が側方から流出しないよう保護するた めに、上方へ突出している。

紫外線による低温重合を方法に従って実施するために、図２ｄに示した本発明に よる装置は更に、中央の支柱２１を備えた渦状容器２０を持っている。この支柱 には、カプセル２．３または２′、３を備えたホルダー１，４またはｌ、４′を 載置または嵌込み可能である。渦状容器２０の内壁は上側から紫外線照射装置に よって入る紫外線を反射する。この反射は、紫外線作用かカプセルシステム２゜ ３または２′、３内で特に下側から達成され、従って先ず最初に物体７の範囲の モノマー５を重合するように行われる。これは方法上の理由から重要である（引 用文献参照）。発熱重合反応時に発生する熱を排出するために、渦状容器２０に は、はぼプラグ４の下側境界まで、しかし高くても被覆カプセル３の上側縁部ま て、液体２２（例えばアルコール）が充填される。

本発明による方法の実施は本発明によるシステムによって非常に簡単である。

最も簡単な場合には、標本７を備えた、プラグ４または４′上の多孔カプセル２ または２′か、ピンセットによっであるいは実質的に把手２９を備えたスリーブ ９′からなるマニピュレータによって、最初の媒体（例えば容器３０内のアルデ ヒド溶液または置換媒体３１）に浸漬される。対流を発生するためあるいは対象 物の表面のグラジェントを小さくするためには、カプセル２または２′を短時間 持上げて再び降ろすだけで充分である。完全に温度した後で、カプセル２または ２′は持上げられ、媒体を排出した後次の媒体に移される。モノマー成分５内で 完全に温度した後で、多孔カプセル２または２′は図１に従って被覆カプセル３ を備え、熱重合または紫外線重合部に供給される。

本発明による実施形では、空のカプセル２または２′が容器１０の開口１１に挿 入され、極低温標本作製の場合には容器と共に冷却装置内で所望の温度（例えば −８０°Ｃ）に冷却される。場合によっては凍った対象物７を入れた後で、容器 １０の中央穴２４内で、多孔カプセル２または２′の充填のために存在または充 填された液状媒体の量が、必要に応じて同様に予備冷却された押しのけ体１２に よって、ゆっくりと上昇する。カプセル２または２′には低温媒体か孔６を通っ て充填される。この低温媒体は押しのけ体の中央通路１３を通って再び吸い出さ れ、新しい媒体と交換可能である。温度の間、カプセル２または２′内の液体の 同期運動は押しのけ体１２を単に昇降させることによって可能である。媒体を複 数回交換した後で、すべてのカプセルの中に純粋なモノマー成分５が存在する。

すべてのカプセル２または２′はホルダー１上にあるプラグ４または４′に嵌め 込まれ、ホルダーで搬送される。容器１７の穴１８内の被覆カプセル３には同様 に予め、低温のモノマー５が充填され、ホルダー１．４または１，４′を有する 充填された多孔カプセル２または２′は孔６のシールのために被覆カプセル３に 挿入される。被覆カプセル３は段付きプラグ４の第２の段部または多孔カプセル ２′のきつい滑り嵌め部に装着される。この多孔カプセル自体はプラグ４′のき つい滑り嵌め部に嵌め込まれている。余剰のモノマーは被覆カプセル３から容器 １７の中央の穴２６に流出する。装着したホルダー１．　４．　２．　３または １，４′、２分、３はマニピュレータ９によって縞状容器２０内の支柱２１上に 移され、図２ｄに基づいて説明したように紫外線重合を行う。次の熱重合のため に、装置はマニピュレータ９によって恒温器に移される。

本発明による方法は、本発明の特色を失うことなく、図１．　２に基づいて例示 的に説明した装置の異なる変形および組み合わせによって実施可能である。特に 実際には、二つの二重カプセル２．３または２′、３の代わりに、はるかに多い カプセルを一つの作業工程で装着することができる。これは図２ａにおいて破線 で示した穴＋１’によって例示的に示しである。カプセルの幾何学的な形状およ びホルダーｌ上または容器１０．１７内でのカプセルの幾何学的な配置構造は重 要ではない。更に、カプセルまたは容器および装置の他の部品をどのような材料 （例えばＰＥ、ＰＰ、塩化ビニール樹脂、ゼラチンまたはアルミニウム、特殊鋼 ）およびとのような方法で（例えば複製、ダイカスト）で作るかは重要ではない 。本発明による二重カプセル構造の重要な利点は方法的には、この原理または装 置は、技術的に知られているあらゆる方法または装置によって、次の切片標本作 製用の生物学的な試料または組織化学並びに生化学的な検査の自動処理のために 使用可能であることに存する。この場合、最初の段階（多孔カプセル２または２ ′への試料の挿入）だけを手動で行えばよい。すべての他の段階では、使用者が 関与することなく、かつアレルゲンに皮膚を触れたり、ガス状有害物質を吸入す る危険なく、そして付加的な時間を必要とせずに、全自動で行うことができる。

Claims (41)

【特許請求の範囲】
1. １．特にカプセル内での次の重合包埋のために、試料を液体中に温置するための 方法において、試料（７）が上部開放のカプセル（“多孔カプセル”２，２′） に入れられ、この場合カプセルは特にその筒形の壁の下側の３分の１のところに 少なくとも一つの貫通孔（６）を備え、この貫通孔が試料（７）の直径よりも小 さくなっており、そしてこの貫通孔（６）を経て少なくとも一つの液体（３１， ５）が充填され、試料（７）がそれぞれその中に温置され、続いて多孔カプセル （２，２′）が同様に特に筒形の壁を有する太径のカプセル（“被覆カプセル” ３）に挿入され、この場合被覆カプセル（３）内にある液体（５）が少なくとも 、多孔カプセル（２，２′）と被覆カプセル（３）の間の隙間（Ｓ）に充填され ることを特徴とする方法。
2. ２．試料（７）を凍らせ、温度を下げて、特に０℃以下で方法を実施することを 特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
3. ３．少なくとも一つの液体（５）が有機であることを特徴とする請求の範囲第１ 項または第２項記載の方法。
4. ４．被覆カプセル（３）が液体と共におよびその中に設けられた、試料（７）を 有する多孔カプセル（２，２′）と共に持上げられ、他の処理段階に供給される ことを特徴とする請求の範囲第１項から第３項までのいずれか一つに記載の方法 。
5. ５．液体（５）が紫外線の作用を受けて重合または硬化可能であり、他の処理段 階が紫外線照射（ＵＶ）であることを特徴とする請求の範囲第４項記載の方法。
6. ６．紫外線（ＵＶ）の大部分が下側から紫外線透過の被覆カプセル（３）と多孔 カプセル（２，２′）に当たることを特徴とする請求の範囲第５項記載の方法。
7. ７．熱を良好に排出するために紫外線照射（ＵＶ）が行われ、被覆カプセル（３ ）が液体浴（２０，２２）、特にアルコール浴に浸漬され、液体浴（２０）の壁 が特に紫外線を反射することを特徴とする請求の範囲第５項または第６項記載の 方法。
8. ８．カプセル内にある液体（５）が熱の作用受けて硬化または重合可能であり、 他の処理段階が熱供給であることを特徴とする請求の範囲第４項記載の方法。
9. ９．同じ種類の複数の多孔カプセル（２，２′）に少なくとも一つの液体（３１ ，５）が一緒に充填されるかあるいはこの液体が一緒に多孔カプセル（２，２′ ）から排出され、多孔カプセル（２．２′）が、同時にすべての多孔カプセル（ ２，２′）に作用してこの多孔カプセルを特に上方から保持するホルダー（１， ４，４′）によって、一緒に被覆カプセル（３）に移され、多孔カプセル（２， ２′）がこのホルダー（１，４，４′）によって被覆カプセル（３）内に挿入さ れ、場合によってこの被覆カプセル（３）と共に他の処理段階に供給可能である ことを特徴とする請求の範囲第１項から第８項までのいずれか一つに記載の方法 。
10. １０．試料（７）を収容する少なくとも一つの多孔カプセル（２，２′）を保持 するための少なくとも一つの穴（１１）を備えている、特に請求の範囲第１項か ら第９項までのいずれか一つに記載の方法を実施するための収容装置（１０）。
11. １１．液体を収容するための少なくとも一つの穴（２４）を備え、この穴が穴（ １１）に挿入された多孔カプセル（２，２′）の貫通孔の下方まで達し、穴（２ ４）が多孔カプセル（２，２′）用の穴（１１）に連通していることを特徴とす る請求の範囲第１０項記載の収容装置。
12. １２．特に筒形の穴（２４）内に、同様に特に筒形の押しのけ体（１２）が垂直 方向に摺動可能に配置されていることを特徴とする請求の範囲第１１項記載の収 容装置。
13. １３．特に約７ｍｍの直径の補充通路（１３）が押しのけ体（１２）に貫通形成 され、穴（２４）の壁側に、液体を通過させる隙間（Ｓ′）が設けられているこ とを特徴とする請求の範囲第１２項記載の収容装置。
14. １４．縁部（１６）が上方へ突出し、それによって押しのけ体（１２，１３）の 下降時に穴（２４）から押しのけられた液体量が収容装置（１０，１６）によっ て収容可能であることを特徴とする請求の範囲第１２項または第１３項記載の収 容装置。
15. １５．穴（２４）が中央に設けられ、多孔カプセル（２，２′）を収容するため の二つ以上の穴（１１）が、周囲に、特に穴（２４）に対して同心的な円周に沿 って設けられていることを特徴とする請求の範囲第１１項から第１４項までのい ずれか一つに記載の収容装置。
16. １６．多孔カプセル（２，２′）のための特に筒形の穴（１１）が互いに平行で あることを特徴とする請求の範囲第１０項から第１５項までのいずれか一つに記 載の収容装置。
17. １７．試料（７）を入れた多孔カプセル（２，２′）を収容するための被覆カプ セル（３）を保持するための少なくとも一つの穴（１８）を備えている、特に請 求の範囲第１項から第９項までのいずれか一つに記載の方法を実施するための収 容装置（１０）。
18. １８．収容装置が特に中央の穴（２６）を備え、この穴の容積が被覆カプセル（ ３）を収容するためのすべての穴（１８）の容積に一致しているかあるいはそれ 以上であり、収容装置が被覆カプセル（３）を収容するための個々の穴（１８） の縁部を越えて上方へ突出する外側縁部（１９）を備え、この外側縁部が多孔カ プセル（２，２′）の挿入時に被覆カプセル（３）から外方への液体の流出を阻 止し、押しのけられた液体（５）が中央の穴（２６）に向けられることを特徴と する請求の範囲第１７項記載の収容装置。
19. １９．多孔カプセル（２，２′）として形成され上側が開放した、試料（７）を 収容するための、特に請求の範囲第１項から第９項までのいずれか一つに記載の 方法を実施するためのカプセル。
20. ２０．多孔カプセルか特に筒形の壁を備え、この壁の下側の３分の１のところに 、少なくとも一つの貫通孔（６）が設けられ、この貫通孔の直径が試料（７）の 直径よりも小さいことを特徴とする請求の範囲第１９項記載の多孔カプセル。
21. ２１．多孔カプセルがその上側の縁部の範囲に、特に筒形の外面から突出する拡 大リング（２７）を備え、この拡大リングが特にカプセル壁と一体に形成されて いることを特徴とする請求の範囲第１９項または第２０項記載の多孔カプセル。
22. ２２．多孔カプセルが紫外線透過性合成樹脂、特にＰＥ，ＰＰまたは塩化ビニー ル樹脂からなっていることを特徴とする請求の範囲第１９項から第２１項までの いずれか一つに記載の多孔カプセル。
23. ２３．被覆カプセル（３）として形成され上側が開放した、試料（７）を充填可 能な多孔カプセル（２，２′）を収容するための、特に請求の範囲第１項から第 ９項までのいずれか一つに記載の方法を実施するためのカプセル。
24. ２４．被覆カプセルが上側に筒形の壁区間を備えていることを特徴とする請求の 範囲第２３項記載の被覆カプセル。
25. ２５．被覆カプセルが紫外線透過性合成樹脂、特にＰＥ，ＰＰまたは塩化ビニー ル樹脂からなっていることを特徴とする請求の範囲第２３項または第２４項記載 の被覆カプセル。
26. ２６．被覆カプセルがゼラチンからなっていることを特徴とする請求の範囲第２ ３項または第２４項記載の被覆カプセル。
27. ２７．請求の範囲第１９項から第２１項までのいずれか一つに記載の少なくとも 一つの多孔カプセル（２，２′）を保持するためおよびまたは請求の範囲第２３ 項から第２６項までのいずれか一つに記載の少なくとも一つの被覆カプセル（３ ）を保持するためのホルダー（１，４，４′，９′）。
28. ２８．ホルダーが同時に複数の多孔カプセル（２）または被覆カプセル（３）を 保持可能であることを特徴とする請求の範囲第２７項記載のホルダー。
29. ２９．同じホルダー（１，４′）が多孔カプセル（２′）だけと、多孔カプセル （２，２′）と共に被覆カプセル（３）を保持可能であることを特徴とする請求 の範囲第２７項記載のホルダー。
30. ３０．ホルダーが一定の配置構造で配置され一平面から突出する少なくとも一つ 、特に複数のプラグ（４，４′）を備え、このプラグがきつい滑り嵌めで多孔カ プセル（２，２′）または被覆カプセル（３）に挿入可能であり、このカプセル の上側を閉鎖し、そして上側から摩擦的に保持することを特徴とする請求の範囲 第２７項から第２９項までのいずれか一つに記載のホルダー。
31. ３１．プラグ（４）を備えたホルダー（１）がカプセル（２，３）を取扱操作す るために役立ち、このプラグが段状に形成され、小径（Ａ−２Ｗ）のプラグ下側 区間が嵌め合い部を備え、それによって多孔カプセル（２）がきつい滑り嵌めで このプラグ下側区間に嵌め込み可能であり、プラグの大径部（Ｂ−２Ｗ）が大径 の被覆カプセル（３）に一致し、この被覆カプセル（３）が段付きプラグ（４） の第２の区間に同様にきつい滑り嵌めで嵌め込み可能であることを特徴とする請 求の範囲第３０項記載のホルダー。
32. ３２．熱絶縁するマニピュレータ（９）がホルダーに固定連結可能であるかまた は連結されていることを特徴とする請求の範囲第２７項から第３１項までのいず れか一つに記載のホルダー。
33. ３３．ホルダーがプラグ（４，４′）の装着部とマニピュレータ（９）用の装着 部の間に、紫外線を通過させるための穴（８）を備えていることを特徴とする請 求の範囲第２７項から第３２項までのいずれか一つに記載のホルダー。
34. ３４．段付きプラグ（４）または単純なプラグ（４′）が特に同心の中央の穴（ ２８）を備えていることを特徴とする請求の範囲第２７項から第３３項までのい ずれか一つに記載のホルダー。
35. ３５．請求の範囲第２７項から第３３項までのいずれか一つに記載のホルダー（ １，４，４′）用の収容部を備えた液体浴容器（２０）。
36. ３６．容器内壁が紫外線を反射し、この場合反射率が特に５０％であることを特 徴とする請求の範囲第３５項記載の液体浴容器（２０）。
37. ３７．液体浴容器が、充填された多孔カプセル（２．２′，５，７）と被覆カプ セル（３，５）を有するホルダー（１，４，４′）を載置または嵌め込むための 中央の支柱（２１）を備えた鍋状の容器（２０）であり、特に筒形の鍋状容器（ ２０）の上側縁部が少なくとも被覆カプセル（３）の上側縁部の高さ位置にある ことを特徴とする請求の範囲第３５項または第３６項記載の液体浴容器（２０） 。
38. ３８．特に次に行われるカプセル（２，２′，３）内での重合包埋のために液体 （３１，５）内に試料を温置するため、特に請求の範囲第１項から第９項までの いずれか一つに記載の方法を実施するための装置であって、次の構成部品、すな わち 請求の範囲第１９項から第２２項までのいずれか一つに記載の少なくとも一つの 多孔カプセル（２，２′）、 請求の範囲第２３項から第２６項までのいずれか一つに記載の少なくとも一つの 被覆カプセル（３）、 請求の範囲第１０項から第１６項までのいずれか一つに記載の少なくとも一つの 多孔カプセル（２，２′）のための収容装置（１０）、請求の範囲第１７項から 第１８項までのいずれか一つに記載の少なくとも一つの被覆カプセル（３）のた めの収容装置（１７）、請求の範囲第２７項から第３３項までのいずれか一つに 記載の少なくとも一つの多孔カプセル（２，２′）と少なくとも一つの被覆カプ セル（３）を操作するためのホルダー（１，４，４′，９′）、および請求の範 囲第３４項から第３６項までのいずれか一つに記載の液体浴容器（２０，２１） の少なくとも二つ、特にそのすべてを備えている装置。
39. ３９．多孔カプセル（２．２′）の外径（Ａ）と被覆カプセル（３）の内径（Ｂ −２Ｗ）の間に少なくとも０．１ｍｍ〜２ｍｍの隙間（Ｓ）が形成されるように 、多孔カプセル（２，２′）と被覆カプセル（３）が採寸されていることを特徴 とする請求の範囲第３８項記載の装置。
40. ４０．複数の多孔カプセル（２，２′）と被覆カプセル（３）の収容部が設けら れ、多孔カプセル（２，２′）を収容するためのまたは被覆カプセル（３）を収 容するための、収容装置（１０，１７）の穴（１１，１８）と、多孔カプセル（ ２，２′）と被覆カプセル（３）をホルダー（１，４，４′）に嵌め込むための プラグ（４，４′）が、それぞれ同じ空間的配置態様で、例えば円周に沿って等 しい間隔をおいてあるいは個々の装置部品（１０，１７，１，４，４′）の中心 軸線から等しい間隔（Ｄ／２）をおいて設けられていることを特徴とする請求の 範囲第３８項または第３９項記載の装置。
41. ４１．モータ、液圧装置、持上げ磁石または送り磁石によって運転される装置あ るいは自動的に作動するその他の装置が、対象物（７）を備えた多孔カプセル（ ２，２′）を、媒体（３１）から次の媒体へ移送し、およびまたは次の紫外線重 合（２０，２１，２２）または熱重合のために、多孔カプセル（２，２′）を備 えたプラグ（４，４′）に被覆カプセル（３）を嵌め込むことを特徴とする請求 の範囲第３８項から第４０項までのいずれか一つに記載の装置。