JPH0739392A - 無機リン測定用液状試薬組成物 - Google Patents
無機リン測定用液状試薬組成物Info
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- JPH0739392A JPH0739392A JP19038793A JP19038793A JPH0739392A JP H0739392 A JPH0739392 A JP H0739392A JP 19038793 A JP19038793 A JP 19038793A JP 19038793 A JP19038793 A JP 19038793A JP H0739392 A JPH0739392 A JP H0739392A
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- reagent
- inosine
- reagent solution
- inorganic phosphorus
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 検体中の干渉物質、内因性キサンチン、ヒポ
キサンチン、イノシン等の影響を受けず、長期保存にお
いても試薬性能を保つことができ、自動分析装置への適
合性に優れた無機リン測定用液状試薬組成物を提供す
る。 【構成】 第１試液にキサンチンオキシダーゼを含有
し、プリンヌクレオシドホスホリラーゼを含有せず、第
２試液にキサンチンオキシダーゼ、プリヌクレオシドホ
スホリラーゼ、イノシンおよびカタラーゼを含み、第１
試液および／または第２試液にペルオキシダーゼ、色原
体およびカップラーを含む。
キサンチン、イノシン等の影響を受けず、長期保存にお
いても試薬性能を保つことができ、自動分析装置への適
合性に優れた無機リン測定用液状試薬組成物を提供す
る。 【構成】 第１試液にキサンチンオキシダーゼを含有
し、プリンヌクレオシドホスホリラーゼを含有せず、第
２試液にキサンチンオキシダーゼ、プリヌクレオシドホ
スホリラーゼ、イノシンおよびカタラーゼを含み、第１
試液および／または第２試液にペルオキシダーゼ、色原
体およびカップラーを含む。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は検体、特に血液及び尿中
の無機リン測定用液状試薬組成物および無機リン測定法
に関するものである。
の無機リン測定用液状試薬組成物および無機リン測定法
に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来、血液及び尿中の無機リンの測定法
としてはモリブデン酸法が用いられてきた。しかし、こ
の方法は操作が煩雑で、特異性が低く、機器の腐食や着
色など、種々の問題があった。これらの問題を回避する
ために近年、酵素法による無機リンの測定法が開発さ
れ、精密性、簡便性の優位性から汎用されている。主な
酵素法としては、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ−
キサンチンオキシダーゼを使用する系等が知られてい
る。
としてはモリブデン酸法が用いられてきた。しかし、こ
の方法は操作が煩雑で、特異性が低く、機器の腐食や着
色など、種々の問題があった。これらの問題を回避する
ために近年、酵素法による無機リンの測定法が開発さ
れ、精密性、簡便性の優位性から汎用されている。主な
酵素法としては、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ−
キサンチンオキシダーゼを使用する系等が知られてい
る。
【０００３】一方、最近、酵素法の体外診断薬では、原
料である酵素の安定化、耐熱性酵素のスクリーニング、
蛋白工学的手法による酵素性質の改変等により従来、凍
結乾燥物として流通されていたものが安定性、純度等の
向上により試薬安定性が向上し、液状のままで流通され
るようになってきている。しかし、原料の安定性、純度
の問題は未だ解決されたとは言えず、原料を厳選し、試
薬安定性のよい原料の組み合せを鋭意検討することによ
り製品化しているのが現状である。
料である酵素の安定化、耐熱性酵素のスクリーニング、
蛋白工学的手法による酵素性質の改変等により従来、凍
結乾燥物として流通されていたものが安定性、純度等の
向上により試薬安定性が向上し、液状のままで流通され
るようになってきている。しかし、原料の安定性、純度
の問題は未だ解決されたとは言えず、原料を厳選し、試
薬安定性のよい原料の組み合せを鋭意検討することによ
り製品化しているのが現状である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】無機リンの測定におい
ても例外ではなく、検体中の干渉物質、例えばアスコル
ビン酸または検体中の内因性キサンチン、ヒポキサンチ
ンまたは内因性イノシンの影響を受けず、長期保存安定
性、自動分析装置への適合性に優れた液状試薬組成物の
開発が進んでいる。従来公知であった無機リン測定用試
薬は下記組成を有する。アスコルビン酸オキシダーゼ、
キサンチンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼおよび色原
体を含む第１試液とキサンチンオキシダーゼ、４−アミ
ノアンチピリン、イノシンおよびプリンヌクレオシドホ
スホリラーゼを含む第２試液からなる。この試薬では長
期保存中に試薬ブランクが上がるという問題点を有す
る。
ても例外ではなく、検体中の干渉物質、例えばアスコル
ビン酸または検体中の内因性キサンチン、ヒポキサンチ
ンまたは内因性イノシンの影響を受けず、長期保存安定
性、自動分析装置への適合性に優れた液状試薬組成物の
開発が進んでいる。従来公知であった無機リン測定用試
薬は下記組成を有する。アスコルビン酸オキシダーゼ、
キサンチンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼおよび色原
体を含む第１試液とキサンチンオキシダーゼ、４−アミ
ノアンチピリン、イノシンおよびプリンヌクレオシドホ
スホリラーゼを含む第２試液からなる。この試薬では長
期保存中に試薬ブランクが上がるという問題点を有す
る。
【０００５】上記問題点を解決するためには、アスコル
ビン酸オキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、プリン
ヌクレオドホスホリラーゼおよび色原体を含む第１試液
とキサンチンオキシダーゼ、４−アミノアンチピリン、
イノシンおよびペルオキシダーゼを含む第２試液からな
る無機リン測定用試薬が知られている。ところが、この
ような２試薬系の場合、プリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼを第１試液に含有されると無機リンが不要に消費さ
れ、負の影響を受ける。したがって、長期保存中に試薬
ブランクが上がるという問題点と検体中のイノシンの影
響を受けるという問題点を同時に解決させることが困難
であった。そこで、上記２つの問題点をともに解決し、
しかも試薬の劣化がなく、長期保存後でも検体中の干渉
物質、内因性キサンチン、ヒポキサンチン、イノシンな
どの影響受けず、無機リンを正確に測定することができ
る液状試薬組成物が望まれている。
ビン酸オキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、プリン
ヌクレオドホスホリラーゼおよび色原体を含む第１試液
とキサンチンオキシダーゼ、４−アミノアンチピリン、
イノシンおよびペルオキシダーゼを含む第２試液からな
る無機リン測定用試薬が知られている。ところが、この
ような２試薬系の場合、プリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼを第１試液に含有されると無機リンが不要に消費さ
れ、負の影響を受ける。したがって、長期保存中に試薬
ブランクが上がるという問題点と検体中のイノシンの影
響を受けるという問題点を同時に解決させることが困難
であった。そこで、上記２つの問題点をともに解決し、
しかも試薬の劣化がなく、長期保存後でも検体中の干渉
物質、内因性キサンチン、ヒポキサンチン、イノシンな
どの影響受けず、無機リンを正確に測定することができ
る液状試薬組成物が望まれている。
【０００６】本発明の目的は、上記現状に鑑み、通常の
使用に便利で、検体中の干渉物質、内因性キサンチン、
ヒポキサンチン、イノシンの影響を受けず、長期保存に
おいても試薬性能を保つことができ、自動分析装置への
適合性に優れた無機リン測定用液状試薬組成物を提供す
ることである。
使用に便利で、検体中の干渉物質、内因性キサンチン、
ヒポキサンチン、イノシンの影響を受けず、長期保存に
おいても試薬性能を保つことができ、自動分析装置への
適合性に優れた無機リン測定用液状試薬組成物を提供す
ることである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成するために、鋭意検討したところ、プリンヌクレ
オシドホスホリラーゼ、キサンチンオキシダーゼ、イノ
シンを主要組成とし、生成する過酸化水素を過酸化水素
の分解能を有する物質の存在下、色原体及びカップラー
と反応させ、光学的吸光度を測定することにより無機リ
ンを検出する２試液からなる液状試薬組成物において、
プリンヌクレオシドホスホリラーゼを第２試液のみに添
加し、キサンチンオキシダーゼを第１、第２試液の両方
に添加し、またイノシンを第２試液に含有させ、さらに
第２試液中にカタラーゼを含有することにより、検体中
の干渉物質、内因性キサンチン、ヒポキサンチン、イノ
シンの影響を受けず、長期保存においても試薬性能を保
ち、自動分析装置に適合し、無機リンが正確に測定され
ることを見いだし、本発明を完成した。
を達成するために、鋭意検討したところ、プリンヌクレ
オシドホスホリラーゼ、キサンチンオキシダーゼ、イノ
シンを主要組成とし、生成する過酸化水素を過酸化水素
の分解能を有する物質の存在下、色原体及びカップラー
と反応させ、光学的吸光度を測定することにより無機リ
ンを検出する２試液からなる液状試薬組成物において、
プリンヌクレオシドホスホリラーゼを第２試液のみに添
加し、キサンチンオキシダーゼを第１、第２試液の両方
に添加し、またイノシンを第２試液に含有させ、さらに
第２試液中にカタラーゼを含有することにより、検体中
の干渉物質、内因性キサンチン、ヒポキサンチン、イノ
シンの影響を受けず、長期保存においても試薬性能を保
ち、自動分析装置に適合し、無機リンが正確に測定され
ることを見いだし、本発明を完成した。
【０００８】すなわち、本発明は第１試液はキサンチン
オキシダーゼを含有し、プリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼを含有せず、第２試液はキサンチンオキシダーゼ、
プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、イノシンおよびカ
タラーゼを含有し、第１試液および／または第２試液は
ペルオキシダーゼ、色原体およびカップラーを含有する
ことを特徴とする無機リン測定用液状試薬組成物であ
る。
オキシダーゼを含有し、プリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼを含有せず、第２試液はキサンチンオキシダーゼ、
プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、イノシンおよびカ
タラーゼを含有し、第１試液および／または第２試液は
ペルオキシダーゼ、色原体およびカップラーを含有する
ことを特徴とする無機リン測定用液状試薬組成物であ
る。
【０００９】また本発明は検体にキサンチンオキダーゼ
を含有する上記第１試液を添加して、検体中の内因性キ
サンチンおよびヒポキサンチンの消去を行い、次いでキ
サンチンオキシダーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼ、イノシンおよびカタラーゼを含有する上記第２試
液を添加した後、生成する過酸化水素をペルオキシダー
ゼの存在下、色原体及びカップラーを反応させ、発生し
た光学的吸光度を測定することを特徴とする無機リン測
定法である。
を含有する上記第１試液を添加して、検体中の内因性キ
サンチンおよびヒポキサンチンの消去を行い、次いでキ
サンチンオキシダーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼ、イノシンおよびカタラーゼを含有する上記第２試
液を添加した後、生成する過酸化水素をペルオキシダー
ゼの存在下、色原体及びカップラーを反応させ、発生し
た光学的吸光度を測定することを特徴とする無機リン測
定法である。
【００１０】本発明に使用するプリンヌクレオシドホス
ホリラーゼ〔ＥＣ２．４．２．１〕とは無機リンおよび
イノシンに作用して、ヒポキサンチン及びリボース−１
−リン酸を生成する酵素であって、その起源は特に限定
されない。動物臓器由来、例えばHuman erythrocytes,
Calf spleen 等が挙げられる。微生物、例えばEnteroba
cter cloacae, Bacillus cerus由来のものが挙げられ
る。
ホリラーゼ〔ＥＣ２．４．２．１〕とは無機リンおよび
イノシンに作用して、ヒポキサンチン及びリボース−１
−リン酸を生成する酵素であって、その起源は特に限定
されない。動物臓器由来、例えばHuman erythrocytes,
Calf spleen 等が挙げられる。微生物、例えばEnteroba
cter cloacae, Bacillus cerus由来のものが挙げられ
る。
【００１１】本発明に使用するキサンチンオキシダーゼ
〔ＥＣ１．１．３．２２〕とは、内因性キサンチンまた
はヒポキサンチンに酸素の存在下に作用して、尿酸およ
び過酸化水素を生成する酵素であって、その起源は特に
限定されない。ミルク由来のものや微生物、例えばArth
robacter luteus由来のものが挙げられる。
〔ＥＣ１．１．３．２２〕とは、内因性キサンチンまた
はヒポキサンチンに酸素の存在下に作用して、尿酸およ
び過酸化水素を生成する酵素であって、その起源は特に
限定されない。ミルク由来のものや微生物、例えばArth
robacter luteus由来のものが挙げられる。
【００１２】本発明に使用する色原体とは、過酸化水素
および過酸化水素の分解能を有する物質の存在下、下記
カップラーと反応して発色する物質であり、例えばＮ−
エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−ｍ−アニシジ
ン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチルフェニル）−Ｎ’−
サクシニルエチレンジアミン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−
ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキ
シアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−
スルホプロピル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−（２−ヒドロ
キシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニ
リン等のアニリン誘導体等が挙げられる。
および過酸化水素の分解能を有する物質の存在下、下記
カップラーと反応して発色する物質であり、例えばＮ−
エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−ｍ−アニシジ
ン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチルフェニル）−Ｎ’−
サクシニルエチレンジアミン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−
ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキ
シアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−
スルホプロピル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−（２−ヒドロ
キシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニ
リン等のアニリン誘導体等が挙げられる。
【００１３】本発明に使用するカップラーとは過酸化水
素および過酸化水素の分解能を有する物質の存在下、上
記色原体と結合して発色する物質であり、例えば４−ア
ミノアンチピリン、３−メチル−２−ベンゾチアゾリン
ヒドラジン等が挙げられる。
素および過酸化水素の分解能を有する物質の存在下、上
記色原体と結合して発色する物質であり、例えば４−ア
ミノアンチピリン、３−メチル−２−ベンゾチアゾリン
ヒドラジン等が挙げられる。
【００１４】本発明に使用する過酸化水素の分解能を有
する物質としては、例えばペルオキシダーゼ、カタラー
ゼ等が挙げられる。
する物質としては、例えばペルオキシダーゼ、カタラー
ゼ等が挙げられる。
【００１５】検体中の干渉物質、例えばアスコルビン酸
を消去するために、アスコルビン酸オキシダーゼを第１
試薬に含有させることが好ましい。
を消去するために、アスコルビン酸オキシダーゼを第１
試薬に含有させることが好ましい。
【００１６】本発明の試薬としては、具体的な一例とし
てキサンチンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼおよび色
原体を含む第１試液およびキサンチンオキシダーゼ、カ
ップラー、イノシン、プリンヌクレオシドホスホリラー
ゼおよびカタラーゼを含む第２試液からなる無機リン測
定用液状試薬組成物がある。本発明の第１試液には必要
によりアスコルビン酸オキシダーゼを含むが、プリンヌ
クレオシドホスホリラーゼを含まない。
てキサンチンオキシダーゼ、ペルオキシダーゼおよび色
原体を含む第１試液およびキサンチンオキシダーゼ、カ
ップラー、イノシン、プリンヌクレオシドホスホリラー
ゼおよびカタラーゼを含む第２試液からなる無機リン測
定用液状試薬組成物がある。本発明の第１試液には必要
によりアスコルビン酸オキシダーゼを含むが、プリンヌ
クレオシドホスホリラーゼを含まない。
【００１７】本発明の第２試液はキサンチンオキシダー
ゼ、カップラー、イノシン、プリンヌクレオチドホスホ
リラーゼおよびカタラーゼを含む。
ゼ、カップラー、イノシン、プリンヌクレオチドホスホ
リラーゼおよびカタラーゼを含む。
【００１８】第１試液および第２試液には前記成分に加
えて、緩衝剤および必要により界面活性剤、安定化剤、
防腐剤、妨害物質除去のための試薬を含む。緩衝剤とし
ては通常のものが使用され、第１試液および第２試液の
ｐＨを５〜１１に調製するものが好ましい。
えて、緩衝剤および必要により界面活性剤、安定化剤、
防腐剤、妨害物質除去のための試薬を含む。緩衝剤とし
ては通常のものが使用され、第１試液および第２試液の
ｐＨを５〜１１に調製するものが好ましい。
【００１９】本発明に使用するプリンヌクレオシドホス
ホリラーゼの酵素濃度は第２試液中において０．２〜５
Ｕ／ｍｌの範囲で好適に用いられる。キサンチンオキシ
ダーゼの酵素濃度は第１試液中において０．５〜２０Ｕ
／ｍｌ、第２試液中において０．０１〜５Ｕ／ｍｌの範
囲で好適に用いられる。本発明に使用する色原体の濃度
は、最終反応液中で１×１０-6〜１×１０-2Ｍの範囲で
好適に用いられる。本発明に使用するカップラーの濃度
は最終反応液中で１×１０-7〜１×１０-2Ｍの範囲で好
適に用いられる。本発明に使用するカタラーゼの濃度は
０．１〜１０Ｕ／ｍｌの範囲で好適に用いられる。また
ペルオキシダーゼの濃度は測定に適した濃度であれば、
特に限定するものではない。
ホリラーゼの酵素濃度は第２試液中において０．２〜５
Ｕ／ｍｌの範囲で好適に用いられる。キサンチンオキシ
ダーゼの酵素濃度は第１試液中において０．５〜２０Ｕ
／ｍｌ、第２試液中において０．０１〜５Ｕ／ｍｌの範
囲で好適に用いられる。本発明に使用する色原体の濃度
は、最終反応液中で１×１０-6〜１×１０-2Ｍの範囲で
好適に用いられる。本発明に使用するカップラーの濃度
は最終反応液中で１×１０-7〜１×１０-2Ｍの範囲で好
適に用いられる。本発明に使用するカタラーゼの濃度は
０．１〜１０Ｕ／ｍｌの範囲で好適に用いられる。また
ペルオキシダーゼの濃度は測定に適した濃度であれば、
特に限定するものではない。
【００２０】本発明の２液からなる液状試薬組成物を使
用して検体中の無機リンを測定するには、下記反応を実
施するものである。
用して検体中の無機リンを測定するには、下記反応を実
施するものである。
【００２１】（第１段の反応） 内因性キサンチン又はヒポキサンチンの消去
【化１】
【００２２】
【化２】
【００２３】内因性アスコルビン酸の消去
【化３】
【００２４】（第２段の反応） 無機リンの測定
【化４】
【００２５】
【化５】
【００２６】
【化６】
【００２７】本発明ではプリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼを第２試液にのみに含有させることにより、イノシ
ンの存在する検体を測定する際、第１試液で無機リンの
不要な消費をなくし測定値の誤差を軽減し、また第２試
液にイノシン、キサンチンオキシダーゼおよびカタラー
ゼを含有することにより、試薬ブランクの上がりを防ぐ
ことが可能となる。また試薬成分中には有機リンが存在
し、これらはホスファターゼ作用または自然分解により
長期保存中に無機リンとなる場合がある。この現象によ
り、試薬の長期保存中に試薬ブランクが上がり、試薬性
能を損なうことになる。またキサンチンオキシダーゼは
イノシンとの共存により長期保存安定性を著しく損な
う。この現象により、第１試液にイノシン、キサンチン
オキシダーゼを存在させると、キサンチン、ヒポキサン
チンの消去能を失うことになり、試薬性能を損なう。そ
こで第２試液中にプリンヌクレオシドホスホリラーゼ、
イノシン、キサンチンオキシダーゼ、過酸化水素を分解
する物質を有することにより、長期保存安定性に優れ、
検体中の干渉物質、内因性キサンチン、ヒポキサンチ
ン、イノシンの影響を受けない、精密性、簡便性に優れ
た無機リン測定用試薬組成物を完成することができた。
ーゼを第２試液にのみに含有させることにより、イノシ
ンの存在する検体を測定する際、第１試液で無機リンの
不要な消費をなくし測定値の誤差を軽減し、また第２試
液にイノシン、キサンチンオキシダーゼおよびカタラー
ゼを含有することにより、試薬ブランクの上がりを防ぐ
ことが可能となる。また試薬成分中には有機リンが存在
し、これらはホスファターゼ作用または自然分解により
長期保存中に無機リンとなる場合がある。この現象によ
り、試薬の長期保存中に試薬ブランクが上がり、試薬性
能を損なうことになる。またキサンチンオキシダーゼは
イノシンとの共存により長期保存安定性を著しく損な
う。この現象により、第１試液にイノシン、キサンチン
オキシダーゼを存在させると、キサンチン、ヒポキサン
チンの消去能を失うことになり、試薬性能を損なう。そ
こで第２試液中にプリンヌクレオシドホスホリラーゼ、
イノシン、キサンチンオキシダーゼ、過酸化水素を分解
する物質を有することにより、長期保存安定性に優れ、
検体中の干渉物質、内因性キサンチン、ヒポキサンチ
ン、イノシンの影響を受けない、精密性、簡便性に優れ
た無機リン測定用試薬組成物を完成することができた。
【００２８】次に発明を実施例により詳細に説明する。 実施例１ 下記組成を有する試薬Ａ〜Ｅの調製し、調製直後に４℃
〜１０℃にて、７ヶ月および１３ヶ月保存した。保存後
の各々の試薬を用いて下記方法により被検体中の無機リ
ンの濃度を測定した。 試薬Ａ 第１試液 グッド緩衝液（ｐＨ６．８） ５０ｍＭ アスコルビン酸オキシダーゼ ２Ｕ／ｍｌ キサンチンオキシダーゼ ５Ｕ／ｍｌ ペルオキシダーゼ １０Ｕ／ｍｌ Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−ｍ−アニシジン ２ｍＭ 第２試液 グッド緩衝液（ｐＨ６．８） ５０ｍＭ キサンチンオキシダーゼ ２Ｕ／ｍｌ ４−アミノアンチピリン １ｍＭ イノシン ３７ｍＭ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ １Ｕ／ｍｌ カタラーゼ １００００Ｕ／ｍｌ
〜１０℃にて、７ヶ月および１３ヶ月保存した。保存後
の各々の試薬を用いて下記方法により被検体中の無機リ
ンの濃度を測定した。 試薬Ａ 第１試液 グッド緩衝液（ｐＨ６．８） ５０ｍＭ アスコルビン酸オキシダーゼ ２Ｕ／ｍｌ キサンチンオキシダーゼ ５Ｕ／ｍｌ ペルオキシダーゼ １０Ｕ／ｍｌ Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−ｍ−アニシジン ２ｍＭ 第２試液 グッド緩衝液（ｐＨ６．８） ５０ｍＭ キサンチンオキシダーゼ ２Ｕ／ｍｌ ４−アミノアンチピリン １ｍＭ イノシン ３７ｍＭ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ １Ｕ／ｍｌ カタラーゼ １００００Ｕ／ｍｌ
【００２９】 試薬Ｂ（比較例) 第１試液 グッド緩衝液（ｐＨ６．８） ５０ｍＭ アスコルビン酸オキシダーゼ ２Ｕ／ｍｌ キサンチンオキシダーゼ ５Ｕ／ｍｌ ペルオキシダーゼ １０Ｕ／ｍｌ Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−ｍ−アニシジン ２ｍＭ イノシン ２４．７ｍＭ 第２試液 グッド緩衝液（ｐＨ６．８） ５０ｍＭ キサンチンオキシダーゼ ２Ｕ／ｍｌ ４−アミノアンチピリン １ｍＭ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ １Ｕ／ｍｌ カタラーゼ １０Ｕ／ｍｌ
【００３０】 試薬Ｃ（比較例） 第１試液 グッド緩衝液（ｐＨ６．８） ５０ｍＭ アスコルビン酸オキシダーゼ ２Ｕ／ｍｌ キサンチンオキシダーゼ ５Ｕ／ｍｌ ペルオキシダーゼ １０Ｕ／ｍｌ Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−ｍ−アニシジン ２ｍＭ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ ０．６７Ｕ／ｍｌ 第２試液 グッド緩衝液（ｐＨ６．８） ５０ｍＭ キサンチンオキシダーゼ ２Ｕ／ｍｌ ４−アミノアンチピリン １ｍＭ イノシン ３７ｍＭ カタラーゼ １０Ｕ／ｍｌ
【００３１】 試薬Ｄ（比較例） 第１試液 グッド緩衝液（ｐＨ６．８） ５０ｍＭ アスコルビン酸オキシダーゼ ２Ｕ／ｍｌ キサンチンオキシダーゼ ５Ｕ／ｍｌ ペルオキシダーゼ １０Ｕ／ｍｌ Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−ｍ−アニシジン ２ｍＭ 第２試液 グッド緩衝液（ｐＨ６．８） ５０ｍＭ キサンチンオキシダーゼ ２Ｕ／ｍｌ ４−アミノアンチピリン １ｍＭ イノシン ３７ｍＭ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ １Ｕ／ｍｌ
【００３２】 試薬Ｅ（比較例） 第１試液 グッド緩衝液（ｐＨ６．８） ５０ｍＭ アスコルビン酸オキシダーゼ ２Ｕ／ｍｌ キサンチンオキシダーゼ ５Ｕ／ｍｌ ペルオキシダーゼ １０Ｕ／ｍｌ Ｎ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−ｍ−アニシジン ２ｍＭ 第２試液 グッド緩衝液（ｐＨ６．８） ５０ｍＭ ４−アミノアンチピリン １ｍＭ イノシン ３７ｍＭ プリンヌクレオシドホスホリラーゼ １Ｕ／ｍｌ カタラーゼ １００００Ｕ／ｍｌ
【００３３】測定方法 蒸留水、スタンダード（無機リン５．０ｍｇ／ｄｌ含
有）を検体とし、各々３０μｌを採取し、これに第１試
液を２．６ｍｌ加え、３７℃にて５分間反応させた後、
第２試液を１．３ｍｌ加え３７℃にて５分間反応させ、
４−アミノアンチピリンとＮ−エチル−Ｎ−（３−スル
ホプロピル）−ｍ−アニシジンとの発色体を波長６００
ｎｍで測定した。結果を表１および図１に示す。
有）を検体とし、各々３０μｌを採取し、これに第１試
液を２．６ｍｌ加え、３７℃にて５分間反応させた後、
第２試液を１．３ｍｌ加え３７℃にて５分間反応させ、
４−アミノアンチピリンとＮ−エチル−Ｎ−（３−スル
ホプロピル）−ｍ−アニシジンとの発色体を波長６００
ｎｍで測定した。結果を表１および図１に示す。
【００３４】
【表１】
【００３５】実施例２ 実施例１の試薬Ａ〜Ｅを用い、検体として１）正常血清
にイノシンを０、６、１２、１８、２４、３０ｍｇ／ｄ
ｌとなるように加えたもの、２）正常血清にヒポキサン
チンを０、６、１２、１８、２４、３０ｍｇ／ｄｌとな
るように加えたものを用い、実施例１の測定方法により
測定した。その結果を表２、３および図２、３に示す。
にイノシンを０、６、１２、１８、２４、３０ｍｇ／ｄ
ｌとなるように加えたもの、２）正常血清にヒポキサン
チンを０、６、１２、１８、２４、３０ｍｇ／ｄｌとな
るように加えたものを用い、実施例１の測定方法により
測定した。その結果を表２、３および図２、３に示す。
【００３６】
【表２】
【００３７】
【表３】
【００３８】以上の結果より、試薬Ａは試薬Ｄ，Ｅと比
較して試薬ブランクが低く、長期保存後においても試薬
ブランクの上がりが少ない。また試薬Ａは試薬Ｂ，Ｃと
比較して、検体中のヒポキサンチン、イノシンの影響を
受けず優れていることがわかる。
較して試薬ブランクが低く、長期保存後においても試薬
ブランクの上がりが少ない。また試薬Ａは試薬Ｂ，Ｃと
比較して、検体中のヒポキサンチン、イノシンの影響を
受けず優れていることがわかる。
【００３９】
【発明の効果】本発明の試薬組成物を使用することによ
り、検体中の干渉物質、内因性キサンチン、ヒポキサン
チン、イノシンの影響を受けず、無機リンを短時間に正
確かつ簡単に定量することができ、また本発明の試薬組
成物は液体の状態で長期間保存が可能になった。
り、検体中の干渉物質、内因性キサンチン、ヒポキサン
チン、イノシンの影響を受けず、無機リンを短時間に正
確かつ簡単に定量することができ、また本発明の試薬組
成物は液体の状態で長期間保存が可能になった。
【図１】長期保存における試薬ブランクの変化を示す図
である。
である。
【図２】測定値に対するイノシン濃度の影響を示す図で
ある。
ある。
【図３】測定値に対するヒポキサンチン濃度の影響を示
す図である。
す図である。
Claims (3)
- 【請求項１】 第１試液はキサンチンオキシダーゼを含
有し、プリンヌクレオシドホスホリラーゼを含有せず、
第２試液はキサンチンオキシダーゼ、プリンヌクレオシ
ドホスホリラーゼ、イノシンおよびカタラーゼを含有
し、第１試液および／または第２試液はペルオキシダー
ゼ、色原体およびカップラーを含有することを特徴とす
る無機リン測定用液状試薬組成物。 - 【請求項２】 キサンチンオキシダーゼ、ペルオキシダ
ーゼおよび色原体を含む第１試液およびキサンチンオキ
シダーゼ、カップラー、プリンヌクレオシドホスホリラ
ーゼおよびカタラーゼ、イノシンを含む第２試液からな
る請求項１記載の無機リン測定用液状試薬組成物。 - 【請求項３】 検体に請求項１に記載される第１試液を
添加して、検体中の内因性キサンチンおよびヒポキサン
チンの消去を行い、次いで請求項１に記載される第２試
液を添加した後、生成する過酸化水素をペルオキシダー
ゼの存在下、色原体及びカップラーを反応させ、発生し
た光学的吸光度を測定することを特徴とする無機リン測
定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19038793A JP3522307B2 (ja) | 1993-07-30 | 1993-07-30 | 無機リン測定用液状試薬組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19038793A JP3522307B2 (ja) | 1993-07-30 | 1993-07-30 | 無機リン測定用液状試薬組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0739392A true JPH0739392A (ja) | 1995-02-10 |
| JP3522307B2 JP3522307B2 (ja) | 2004-04-26 |
Family
ID=16257324
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19038793A Expired - Lifetime JP3522307B2 (ja) | 1993-07-30 | 1993-07-30 | 無機リン測定用液状試薬組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3522307B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7895976B2 (en) | 2004-06-10 | 2011-03-01 | Uni-Charm Corporation | Animal litter |
-
1993
- 1993-07-30 JP JP19038793A patent/JP3522307B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7895976B2 (en) | 2004-06-10 | 2011-03-01 | Uni-Charm Corporation | Animal litter |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3522307B2 (ja) | 2004-04-26 |
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