JPH07222590A - アルテロモナス ハネダイ のルシフェラーゼ遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 発光細菌Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｈａｎｅ
ｄａｉルシフェラーゼ遺伝子を提供すること。 【構成】 配列の長さ２１２４の塩基配列を有するＤＮ
Ａからなるルシフェラーゼ遺伝子。この遺伝子は３５４
個のアミノ酸からなる分子量３９，９４３のαサブユニ
ット蛋白質と３２７個のアミノ酸からなる分子量３６，
８９５のβサブユニット蛋白質をコードしている。この
遺伝子を含有する組換えベクター、このベクターを含む
細菌。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は発光細菌アルテロモナス
ハネダイのルシフェラーゼ遺伝子、酵素蛋白、該遺伝
子を含む組換えベクター、および該組換えベクターを含
有する細菌に関する。

【０００２】

【従来の技術】発光細菌ルシフェラーゼは、還元型フラ
ビンモノヌクレオチド（以下ＦＭＮＨ₂ という）と長鎖
脂肪族アルデヒドを酸化し、酸化型フラビンモノヌクレ
オチド（以下ＦＭＮという）と長鎖脂肪族カルボン酸を
生成する反応を触媒する。この際、青緑色の光を発す
る。細菌ルシフェラーゼはαサブユニットとβサブユニ
ットからなるヘテロダイマーで、αとβのそれぞれのサ
ブユニットはｌｕｘＡ及びｌｕｘＢ遺伝子にコードされ
ている。本酵素は生体外で長鎖アルデヒドと還元型ＦＭ
Ｎの共存により発光反応を触媒する。還元型ＦＭＮは空
気中で即時に自動酸化されるため、一般的にはＦＭＮ還
元酵素を反応系に共存させ、ルシフェラーゼと共役反応
させて、連続発光させることが多い。長鎖アルデヒドと
してはデカナールが一般的に用いられる。このように細
菌ルシフェラーゼは生体外でたやすく発光反応を行なえ
る為、診断検査薬などの標識酵素として有用である。以
上のように、細菌ルシフェラーゼは発光反応を触媒する
為高感度検出に有用で、その遺伝子の取得により、大量
に本酵素を調製することが出来る。

【０００３】細菌ルシフェラーゼはｌｕｘ遺伝子のｌｕ
ｘＡとｌｕｘＢにコードされている。今までに、数多く
の発光細菌のルシフェラーゼ遺伝子が単離され、その１
次構造が明らかにされている。〔Ｂａｌｄｗｉｎ，Ｔ．
Ｏ．，Ｔ．Ｂｅｒｅｎｄｓ，Ｔ．Ａ．Ｂｕｎｃｈ，Ｔ．
Ｆ．Ｈｏｌｚｍａｎ，Ｓ．Ｋ．Ｒａｕｓｃｈ，Ｌ．Ｓｈ
ａｍａｎｓｋｙ，Ｍ．Ｌ．Ｔｒｅａｔ，ａｎｄ Ｍ．
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ｎ，Ｔ．Ｏ．Ｂａｌｄｗｉｎ，Ｋ．Ｈ．Ｎｅａｌｓｏ
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ｉ，Ｊ．Ａ．，Ｍ．Ｂｏｙｌａｎ，Ｒ．Ｒ．Ｓｏｌｙ，
Ａ．Ｆ．Ｇｒａｈａｍ，ａｎｄ Ｅ．Ａ．Ｍｅｉｇｈｅ
ｍ．１９８８．ジャーナル オブ バイオロジカルケミ
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０８−１４３１４；Ｓｚｉｔｔｎｅｒ，Ｒ．，ａｎｄ
Ｅ．Ｍｅｉｇｈｅｎ．１９９０．ジャーナル オブ バ
イオロジカルケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．）２６５：１６５８１−１６５８７．〕 しかしながら、アルテロモナス ハネダイのルシフェラ
ーゼ遺伝子に関しては報告されていない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、鋭意研
究の結果、発光細菌Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｈａｎｅ
ｄａｉ（ＡＴＣＣ３３２２４）からルシフェラーゼ遺伝
子を単離し、その一次構造を明らかにすることに成功
し、また該遺伝子を大量に発現する大腸菌を作出するこ
とに成功し、本発明を完成するに至った。すなわち、本
発明の目的は上述の技術的事情にかんがみ、発光細菌Ａ
ｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｈａｎｅｄａｉのルシフェラー
ゼ遺伝子および酵素を提供することであり、さらに該遺
伝子を含む組換えベクター、および該組換えベクターを
含む細菌を提供することである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、つぎの（１）
〜（１１）の構成を有する。 （１）配列番号１で表される塩基配列を含む、ルシフェ
ラーゼ・アルファ・サブユニットの遺伝子。 （２）配列番号２で表される塩基配列を含む、ルシフェ
ラーゼ・ベータ・サブユニットの遺伝子。 （３）配列番号３で表される塩基配列を含む前記第
（１）項記載のルシフェラーゼ・アルファ・サブユニッ
トの遺伝子。 （４）配列番号４で表される塩基配列を含む請求項２記
載のルシフェラーゼ・ベータ・サブユニットの遺伝子。 （５）塩基配列が配列番号５で表されるルシフェラーゼ
遺伝子。 （６）配列番号６で表されるアミノ酸配列を有するルシ
フェラーゼ・アルファ・サブユニット。 （７）配列番号７で表されるアミノ酸配列を有するルシ
フェラーゼ・べータ・サブユニット。 （８）塩基配列が配列番号１および配列番号２で表され
るＤＮＡを含有する組換えベクター。 （９）配列番号３および配列番号４で表される塩基配列
を有する遺伝子がプラスミドベクターへ挿入された前記
（８）項記載の組換えベクター。 （１０）配列番号１および配列番号２で表される塩基配
列を有するＤＮＡを含む組換えベクターを含有する細
菌。 （１１）塩基配列が配列番号１および配列番号２で表さ
れるＤＮＡを含む組換えベクターで修飾されてなる細菌
を培養することからなる配列番号６および配列番号７で
表されるアミノ酸配列を含む酵素の製法。

【０００６】本発明の構成と効果につき以下に詳述す
る。本発明の酵素遺伝子は、配列番号１と配列番号２で
表わされる配列に、それぞれ長さ１０６５と９８４のヌ
クレオチド鎖を含むのが特徴である。好ましく示す配列
としては、配列番号３および配列番号４で表わされるヌ
クレオチド鎖を含む。具体的には塩基配列が配列番号５
で表わされ、配列の長さが２１２４のＤＮＡを示す。

【０００７】配列の種類はゲノムＤＮＡであり、発光細
菌Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｈａｎｅｄａｉ（ＡＴＣＣ
３３２２４）から単離されるものである。その配列の特
徴は配列番号５の塩基番号３８から１０９９までの領域
に、３５４個のアミノ酸から成る分子量３９，９４３の
ルシフェラーゼαサブユニットと配列番号５の塩基番号
１１４１から２１２１までの領域に、３２７個のアミノ
酸から成る分子量３６，８９５のルシフェラーゼβサブ
ユニットをコードしていることである。本発明の酵素遺
伝子産物は、細菌ルシフェラーゼに由来する発光活性を
有し、たとえば、還元型ＦＭＮとデカナールを酸化する
発光反応を触媒する活性を有するものである。本発明の
酵素は、配列番号１，２，３，４および５の塩基配列か
ら予測される配列番号６および７で表されるアミノ酸配
列を有する蛋白質である。その蛋白質は３５４個のアミ
ノ酸からなる分子量３９，９４３のルシフェラーゼαサ
ブユニットと３２７個のアミノ酸からなる分子量３６，
８９５のルシフェラーゼβサブユニットとからなり、発
光細菌中で発光活性を有する。

【０００８】本発明の組換えベクターは、塩基配列が配
列番号１および２で表されるＤＮＡを含有する。すなわ
ち、本発明の組換えベクターは、配列番号１および２で
表される塩基配列を有するＤＮＡと、機能的同等物を含
む。「機能的同等物」とは適当な宿主による発光細菌の
ルシフェラーゼ発光活性を有する酵素の産生において、
実質的に同じ結果を得るために実質的に同じ方法で使用
できるＤＮＡ断片のことである。すなわち、塩基配列が
異なっても、同一のアミノ酸配列を有する蛋白をコード
しえるＤＮＡ断片や若干の塩基配列の相違に伴う若干の
アミノ酸配列の違いがあるもののルシフェラーゼ発光活
性を有する蛋白をコードしえるＤＮＡ断片のことを意味
する。具体的には配列番号１および２の塩基配列や部位
特異的変異導入された配列番号１および２に由来する塩
基配列を示すことになる。たとえば、該塩基配列を含有
するＤＮＡ断片を挿入したプラスミドベクターなどであ
る。このベクターとしては、ｐＵＣ（Ｃ．Ｙａｎｉｓｃ
ｈ−Ｐｅｒｒｏｎ，Ｊ．Ｖｉｅｉｒａ ＆ Ｊ．Ｍｅｓ
ｓｉｎｇ，ジーン（Ｇｅｎｅ），３３，１１０−１１５
〔１９８５〕）などが使用できる。

【０００９】図３はルシフェラーゼ発現ベクターの構築
工程を示す。すなわち、ルシフェラーゼ遺伝子を有する
プラスミドｐＡＨ１８からインサートＤＮＡの一部に相
当する約３ｋｂのＸｂａＩ／ＥｃｏＲＩ断片をｐＵＣ１
３のＸｂａＩ／ＥｃｏＲＩ切断部位に挿入し、発現ベク
ターｐＡＬＦ１を作製した。結果的にｐＡＬＦ１は大腸
菌のラクトースオペロンの１ａｃプロモーターの支配下
にルシフェラーゼ遺伝子が配置されており、ルシフェラ
ーゼが発現されるようになっている。本発明の細菌は、
配列番号１および２で表される塩基配列を含有する組換
えベクターＤＮＡを含む。本発明の細菌の特徴はルシフ
ェラーゼ発光活性を有する蛋白質を生産することであ
る。本発明の酵素の製法は、塩基配列が配列番号１およ
び２で表されるＤＮＡを含む組換えベクター（発現ベク
ター）で修飾された細菌を培養し、配列番号６および７
で表されるアミノ酸配列を含む蛋白質を製造することで
ある。細菌としては、大腸菌など、培地としてはＬＢ培
地などをあげることができる。以下、実施例にて本発明
で重要な遺伝子の単離とその同定に関する手順をのべ
る。

【００１０】

【実施例】

実施例１Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｈａｎｅｄａｉのｌｕｘＡ遺
伝子の単離 発光細菌Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｈａｎｅｄａｉ（Ａ
ＴＣＣ３３２２４）をＰｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
培地で２６℃、一晩振とう培養した。１００００ｒｐｍ
で遠心分離し集菌した後、トリス塩酸・ＥＤＴＡ緩衝液
（以下、ＴＥ緩衝液という）に菌体を懸濁した。３７℃
で１時間リゾチーム処理した後、ドデシル硫酸ナトリウ
ム（以下ＳＤＳと略す）を添加して５０℃で３時間プロ
テネースＫ処理をした。その後、フェノール処理を３回
行い、エタノール沈殿し、乾燥した後、ＴＥ緩衝液に溶
解し再度プロテネースＫ処理した。その後フェノール処
理３回後エタノール沈殿しゲノムＤＮＡを回収した。

【００１１】今までに明らかにされているルシフェラー
ゼαサブユニットのアミノ酸配列で保存されている領域
に対応する図１に示す合成オリゴヌクレオチド・プライ
マーＬＵＸ１とＬＵＸ２を用いてＡ．ｈａｎｅｄａｉゲ
ノムＤＮＡを鋳型にしてＰＣＲ法〔Ｓａｉｋｉ，Ｒ．
Ｋ．，Ｄ．Ｈ．Ｇｅｌｆａｎｄ，Ｓ．Ｓｔｏｆｆｅｌ，
Ｓ．Ｊ．Ｓｃｈａｒｆ，Ｒ．Ｈｉｇｕｃｈｉ，Ｇ．Ｔ．
Ｈｏｒｎ，Ｋ．Ｂ．Ｍｕｌｌｉｓ ａｎｄ Ｈ．Ａ．Ｅ
ｒｌｉｃ（１９８８）サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）
２３９ ４８７〕によりｌｕｘＡ遺伝子を増幅し、その
ＤＮＡ断片をｐＵＣ８プラスミドＤＮＡ〔Ｈａｎｎａ，
Ｚ．，Ｆｒｅｇｅａｕ，Ｃ．，Ｐｒｅｆｏｎｔａｉｎ
ｅ，Ｇ．，Ｂｒｏｕｓｓｅａｕ，Ｒ．（１９８４）ジー
ン（Ｇｅｎｅ），３０ ２４７〕のＨｉｎｃＩＩ切断部
位に挿入した。

【００１２】塩基配列の決定 〔Ｈａｔｔｏｒｉ，Ｍ．＆ Ｓａｋａｋｉ，Ｙ．（１９
８６）アナリティカルバイオケミストリー（Ａｎａｌ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．）１５２ ２３２〕からＡ．ｈａｎｅ
ｄａｉのｌｕｘＡ遺伝子であることを確認した。このプ
ラスミドＤＮＡからｌｕｘＡ遺伝子部分のＤＮＡ断片を
ＰｓｔＩ／ＥｃｏＲＩで切り出し、完全鎖長ルシフェラ
ーゼ遺伝子（ｌｕｘＡ及びｌｕｘＢ）のスクリーニング
のプローブＤＮＡとして用いた。プローブＤＮＡの³²Ｐ
標識はランダム・プライミング法〔Ｆｅｉｎｂｅｒｇ，
Ａ．＆ Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ．Ｂ．（１９８３）アナ
リティカル バイオケミストリー（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．）１３２ ６〕で行った。

【００１３】実施例２ 発光細菌遺伝子のラムダ・ファージライブラリーの作製 上記のゲノムＤＮＡの５０μｇに１０単位の制限酵素Ｓ
ａｕ３ＡＩを３７℃で作用させた。反応時間５，１０，
２０，３０，４５，６０，９０，１２０分で一部分取
し、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を加えること
により反応を停止した。それぞれの一部をアガロースゲ
ル電気泳動にかけゲノムＤＮＡの部分分解の度合を確認
した。各時間ごとの反応液を１本にまとめエタノール沈
殿回収した。それを少量のＴＥ緩衝液に溶解後、アガロ
ースゲル電気泳動にかけ９〜２３キロベース（ｋｂ）の
画分を電気溶出操作で回収した。９〜２３Ｋｂ画分を含
むアガロースゲルから前記９〜２３Ｋｂ画分のＤＮＡを
透析チューブ内に電気泳動的に溶出し、フェノール処理
３回後エタノールで沈殿した。それを約２００ｎｇ／μ
ｌになるようにＴＥ緩衝液に溶解した。制限酵素Ｂａｍ
ＨＩであらかじめ切断してアルカリフォスファターゼ
（ＤＮＡの５′末端の脱リン酸化を触媒する酵素）で処
理されたＥＭＢＬ３ファージＤＮＡに、前記９〜２３Ｋ
ｂ画分のＤＮＡをＴ４ＤＮＡリガーゼ（ＤＮＡ鎖どうし
または、ＤＮＡとＲＮＡの３′ＯＨと５′Ｐ末端をホス
ホジエステル結合でつなぐ酵素）を用いて１６℃で一晩
連結反応した。連結反応液をパッケージング抽出液と混
合し、２２℃で２時間反応して組換えファージを得た。
このファージを遺伝子ライブラリーとした。

【００１４】実施例３ 完全長鎖のルシフェラーゼ遺伝子の単離 実施例２で作製の遺伝子ライブラリーのタイター測定
後、プレート当り１万個のファージがプラークを形成す
るようにまき、３７℃で一晩培養した。４℃に２時間放
置後、それぞれのプレートに対して、ナイロンメンブレ
ン・フィルターで２枚づつファージをトランスファーし
た。

【００１５】フィルターを変性し、中和後、紫外線照射
した。そして、バイブリダイゼーション液｛２０ｍｌの
６×ＳＥＴ緩衝液〔２０×ＳＥＴ緩衝液：３ＭのＮａＣ
ｌ，０．６Ｍのトリスー塩酸（ｐＨ８．０）、０．０４
ＭのＥＤＴＡ〕、１０×Ｄｅｎｈａｒｄｔ′ｓ液（牛血
清アルブミン、ポリビニルピロリドン、Ｆｉｃｏｌｌの
各０．２W/V％溶液）、０．１W/V％ＳＤＳ、サケ精子Ｄ
ＮＡ（熱変性したもの５０μｇ／ｍｌ）｝に入れ、６８
℃で１時間保温した。さらに液を入れ替えて１時間保温
後、³²Ｐ標識したＡ．ｈａｎｅｄａｉのｌｕｘＡのプロ
ーブを加え６５℃で一晩ハイブリダイゼーションした。
溶液を捨てフィルターを２×ＳＥＴ緩衝液で洗浄後、
０．２×ＳＥＴ緩衝液６５℃で２０分間振とうした。こ
の操作を２回繰り返した後、風乾しオートラジオグラフ
ィーにかけた。フィルターと現像したＸ線フィルムを重
ねインクマーカーの位置をフィルム上に写し取った。

【００１６】一枚のプレートからできた二枚のフィルム
上でシグナルが重なると同定されたファージ（クロー
ン）を約１０００個の組換えファージから１個得た。こ
のクローンをλＡＨ１８と名付けた。このインサートＤ
ＮＡをｐＵＣ１３プラスミドのＳａＩＩ部位に挿入し、
ｐＡＨ１８を得た。このプラスミドＤＮＡを鋳型とし
て、ＰＣＲクローンの塩基配列を基に調製した合成オリ
ゴヌクレオチドプライマー（２０ｍｅｒ）を用いて、ジ
デオキシ法〔Ｈａｔｔｏｒｉ，Ｍ．＆ Ｓａｋａｋｉ，
Ｙ．（１９８６）アナリティカル バイオケミストリー
（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）１５２ ２３２〕で塩
基配列を決定した。

【００１７】また、新たにその塩基配列を基に合成プラ
イマーを作製し、ジデオキシ法で塩基配列を決定した。
図２にその制限マップを示した。決定された塩基配列で
表される遺伝子は、配列番号５に示される通りで、２１
２４ｂｐの長さで、ｌｕｘＡ遺伝子及びｌｕｘＢ遺伝子
に対応し、塩基番号３８〜１０９９までは３５４個のア
ミノ酸から成る分子量３９，９４３のルシフェラーゼの
サブユニットを、塩基番号１１４１〜２１２１までは３
２７個のアミノ酸から成る分子量３６，８９５のルシフ
ェラーゼβサブユニットをそれぞれコードすると考えら
れた。

【００１８】実施例４ ルシフェラーゼ遺伝子の発現ベクターの構築とその形質
転換株の調製（図３参照） 組換えプラスミドｐＡＨ１８のＤＮＡをＸｂａＩ及びＥ
ｃｏＲＩで消化し、３Ｋｂの断片を回収し、プラスミド
ｐＵＣ１３のＸｂａＩ／ＥｃｏＲＩ部位にＴ４ＤＮＡリ
ガーゼで連結反応した。その連結反応液の一部を大腸菌
Ｄ１２１０株に形質転換した。該形質転換株からプラス
ミドＤＮＡを調製し、インサートＤＮＡが３Ｋｂのもの
を選択した。そのプラスミドをｐＡＬＦ１と名付けた。
ｐＡＬＦ１はラクトースオペロン（ｌａｃ）のプロモー
ターの支配下にルシフェラーゼ遺伝子を配置した形とな
っており、ルシフェラーゼを発現するように構築されて
いる。

【００１９】実施例５ ルシフェラーゼの調製とその活性測定 この形質転換株の一晩培養液０．２５ｍｌをアンピシリ
ンを含有したＬＢ液体（１０ｍｌ）培地に植菌し、３７
℃で２時間振とう培養後、最終濃度が１ｍＭになるよう
にイソプロピル−β−Ｄ（−）−チオガラクトピラノシ
ド（ＩＰＴＧと略す）を添加し、さらに３時間培養し
た。ＩＰＴＧ誘導処理した培養液３．０ｍｌを１０００
０ｒｐｍで遠心分離し上清を除く。菌体を５０ｍＭリン
酸カリウム・１ｍＭジチオスレイトール緩衝液０．７５
ｍｌに懸濁し超音波破砕した。１２０００ｒｐｍ、４℃
で３０分間遠心分離し、その上清を細胞抽出液とした。

【００２０】その細胞抽出液に対して、発光活性を調べ
た。ルシフェラーゼ発光の確認は、１ｍＭ ＦＭＮ２５
μｌ、細胞抽出液１０μｌを含む全量５００μｌの５０
ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．０、２５℃に１０ｍｇ／ｍｌ
のＮａ₂ Ｓ₂ Ｏ₄ 溶液１０μｌを加えて還元状態とし、
これに５００μｌの空気飽和のデカナール溶液を急速に
加えて、暗室にて内眼で発光することを確認した。デカ
ナール溶液は、純デカナール１０μｌを０．５W/V％Ｂ
ＳＡ，０．０５W/V％トリトンＸ−１００を含む１００
ｍｌの５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に加えて調
製した。また、この液体培養菌体に純デカナールを加
え、培養容器を振とうすると発光が認められた。以上の
結果からｐＡＦＬ１のインサートＤＮＡであるこの遺伝
子がルシフェラーゼ遺伝子であることが確認された。

【００２１】

【発明の効果】本発明の酵素遺伝子は、発光細菌Ａ．ｈ
ａｎｅｄａｉのルシフェラーゼの遺伝子として初めて単
離されたものである。適当な宿主、例えば大腸菌を宿主
とすることにより、その大腸菌から大量に該酵素蛋白を
調製することができる。その発現ベクターを適当な宿主
たとえば、大腸菌に導入することにより、発光細菌のル
シフェラーゼを大量に発現する生物あるいは微生物を作
出することができ、さらにその遺伝子導入生物から抽出
することにより該還元酵素を大量に調製することができ
る。該還元酵素は上述した機能から、多くの測定法に応
用でき、たとえば診断薬や検査薬として有用である。

【００２２】

【配列表】

【００２３】配列番号：１ 配列の長さ：１０６５ 配列の型：核酸 鎖の数：１ トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 起源 生物名：Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｈａｎｅｄａｉ 株名：ＡＴＣＣ３３２２４ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 特徴を決定した方法：Ｅ

【００２４】 配列 1 ATG AAJ TTK GGL AAK ATM TGR TTK QRS TAK CAJ CCL CCL GGL GAJ ACL 48 1 Met Lys Phe Gly Asn Ile Cys Phe Ser Tyr Gln Pro Pro Gly Glu Thr 16 49 CAK AAJ CAJ GTL ATG GAR WGZ TTK ATM WGZ XTY GGL GTL GCL QRS GAJ 96 17 His Lys Gln Val Met Asp Arg Phe Ile Arg Leu Gly Val Ala Ser Glu 32 97 GAJ XTY GGL TTK GAK ACL TAK TGG ACL XTY GAJ CAK CAK TTK ACL GAJ 144 33 Glu Leu Gly Phe Asp Thr Tyr Trp Thr Leu Glu His His Phe Thr Glu 48 145 TTK GGL XTY ACL GGL AAK XTY TTK GTL GCL GCL GCL AAK XTY XTY GGL 192 49 Phe Gly Leu Thr Gly Asn Leu Phe Val Ala Ala Ala Asn Leu Leu Gly 64 193 WGZ ACL AAJ ACL XTY CAJ GTL GGL ACL ATG GGL GTL GTL XTY CCL ACL 240 65 Arg Thr Lys Thr Leu Gln Val Gly Thr Met Gly Val Val Leu Pro Thr 80 241 GCL CAK CCL GTL WGZ CAJ XTY GAJ GAK GTL XTY XTY XTY GAK CAJ ATG 288 81 Ala His Pro Val Arg Gln Leu Glu Asp Val Leu Leu Leu Asp Gln Met 96 289 QRS AAJ GGL WGZ TTK AAK TTK GGL GTL GTL WGZ GGL XTY TAK CAK AAJ 336 97 Ser Lys Gly Arg Phe Asn Phe Gly Val Val Arg Gly Leu Tyr His Lys 112 337 GAK TTK WGZ GTL TTK GGL GTL AAK ATG GAJ GAK QRS WGZ GGL ATM ACL 384 113 Asp Phe Arg Val Phe Gly Val Asn Met Gly Asp Ser Arg Gly Ile Thr 128 385 CAJ QRS TTK CAK ACL ATG ATM ATM GAK GGL GTL AAJ ACL GGL WGZ ATM 432 129 Gln Ser Phe His Thr Met Ile Ile Asp Gly Val Lys Thr Gly Arg Ile 144 433 QRS QRS GAK GGL GAJ CAK ATM GAJ TTK CCL GAJ GTL GAJ GTL TAK CCL 480 145 Ser Ser Asp Gly Glu His Ile Glu Phe Pro Glu Val Glu Val Tyr Pro 160 481 ACL GCL TAK QRS AAJ GAJ XTY CCL ACL TGK ATG ACL GCL GAJ QRS GCL 528 161 Thr Ala Tyr Ser Lys Glu Leu Pro Thr Cys Met Thr Ala Glu Ser Ala 176 529 QRS ACL ACL GAJ TGG XTY GCL GAJ WGZ GGL XTY CCL ATG GTL XTY QRS 576 177 Ser Thr Thr Glu Trp Leu Ala Glu Arg Gly Leu Pro Met Val Leu Ser 192 577 TGG ATM ATM GGL ACL AAK GAJ AAJ AAJ GCL CAJ ATG GAJ XTY TAK AAK 624 193 Trp Ile Ile Gly Thr Asn Glu Lys Lys Ala Gln Met Glu Leu Tyr Asn 208 625 GAJ ATM GCL ATM GAJ CAK GGL CAK GAK ATM ACL AAJ ATM GAK CAK TGK 672 209 Glu Ile Ala Ile Glu His Gly His Asp Ile Thr Lys Ile Asp His Cys 224 673 ATG ACL TTK ATM TGK QRS GTL GAK AAK GAK QRS AAK AAJ GCL WGZ GAK 720 225 Met Thr Phe Ile Cys Ser Val Asp Asn Asp Ser Asn Lys Ala Arg Asp 240 721 GTL TGK WGZ GCL TTK XTY GCL AAK TGG TAK GAK QRS TAK GTL AAK GCL 768 241 Val Cys Arg Ala Phe Leu Ala Asn Trp Tyr Asp Ser Tyr Val Asn Ala 256 769 ACL AAK ATM TTK AAK GAK QRS AAK CAJ ACL WGZ GGL TAK GAK TAK CAK 816 257 Thr Asn Ile Phe Asn Asp Ser Asn Gln Thr Arg Gly Tyr Asp Tyr His 272 817 AAJ GGL CAJ TGG WGZ GAK TTK GTL XTY AAJ GGL CAK ACL AAK QRS AAK 864 273 Lys Gly Gln Trp Arg Asp Phe Val Leu Lys Gly His Thr Asn Ser Asn 288 865 WGZ WGZ GTL GAK TAK QRS AAK GAJ ATM AAK CCL GTL GGL ACL CCL GAJ 912 289 Arg Arg Val Asp Tyr Ser Asn Glu Ile Asn Pro Val Gly Thr Pro Glu 304 913 GAJ TGK ATM QRS ATM ATM CAJ WGZ GAK ATM GAK GCL ACL GGL ATM ACL 960 305 Glu Cys Ile Ser Ile Ile Gln Arg Asp Ile Asp Ala Thr Gly Ile Thr 320 961 AAK ATM ACL TGK GGL TTK GAJ GCL AAK GGL QRS GAJ GAJ GAJ ATM GTL1008 321 Asn Ile Thr Cys Gly Phe Glu Ala Asn Gly Ser Glu Glu Glu Ile Val 336 1009 GCL QRS ATG ATM WGZ TTK ATG ACL CAJ GTL GCL CCL TTK XTY AAJ GAK1056 337 Ala Ser Met Gly Arg Phe Met Thr Gln Val Ala Pro Phe Leu Lys Asp 352 1057 CCL QRS ^*** 353 Pro Ser （ただし、塩基の３文字連鎖は、左側に５′末端を、右
側に３′末端を表わしている。この文字はヌクレオチド
配列を形成するプリン又はピリミジン塩基を表わす。ま
た、 Ａ：アデニン、 Ｇ：グアニン、 Ｃ：シトシン、 Ｊ：ＡもしくはＧ、 Ｋ：ＴもしくはＣ、 Ｌ：Ａ，Ｔ，ＣもしくはＧ、 Ｍ：Ａ，ＣもしくはＴ、 Ｔ：チミン、 Ｘ：ＹがＡもしくはＧの場合はＴまたはＣ、或いはＹが
ＣもしくはＴの場合はＣ、 Ｙ：ＸがＣの場合はＡ，Ｇ，ＣまたはＴ、或いはＸがＴ
の場合はＡまたはＧ、 Ｗ：ＺがＣもしくはＴの場合はＣまたはＡ、或いはＺが
ＣもしくはＴの場合はＣ、 Ｚ：ＷがＧの場合はＡ，Ｇ，ＣまたはＴ、或いはＷがＡ
の場合はＡまたはＧ、 ＧＲ：ＳがＡ，Ｇ，ＣまたはＴの場合はＴＣ、＊＊＊は
ＴＡＡ，ＴＡＧもしくはＴＧＡを表す。）

【００２５】配列番号：２ 配列の長さ：９８４ 配列の型：核酸 鎖の数：１ トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 起源 生物名：Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｈａｎｅｄａｉ 株名：ＡＴＣＣ３３２２４ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 特徴を決定した方法：Ｅ

【００２６】 配列 1 ATG AAJ TTK GGL XTY TTK TTK XTY AAK TTK CAJ XTY GAK GGL ATG ACL 48 1 Met Lys Phe Gly Leu Phe Phe Leu Asn Phe Gln Leu Asp Gly Met Thr 16 49 QRS GAJ AAK ACL XTY GAK AAK ATG GTL QRS ATG GTL QRS XTY GTL GAK 96 17 Ser Glu Asn Thr Leu Asp Asn Met Val Ser Met Val Ser Leu Val Asp 32 97 GCL GAK GAJ TAK CAK TTK GAK ACL GTL XTY ATM TAK GAJ CAK CAK TTK 144 33 Ala Asp Glu Tyr His Phe Asp Thr Val Leu Ile Tyr Glu His His Phe 48 145 QRS AAJ QRS GGL ATM ATM GCL QRS CCL ATM ACL GCL GCL GGL TTK XTY 192 49 Ser Lys Ser Gly Ile Ile Ala Ser Pro Ile Thr Ala Ala Gly Phe Leu 64 193 XTY GGL XTY ACL AAK WGZ XTY CAK ATM GGL QRS XTY AAK CAJ GTL ATM 240 65 Leu Gly Leu Thr Asn Arg Leu His Ile Gly Ser Leu Asn Gln Val Ile 80 241 ACL ACL CAK CAK CCL GTL WGZ GTL GCL GAJ GAJ QRS QRS XTY XTY GAK 288 81 Thr Thr His His Pro Val Arg Val Ala Glu Glu Ser Ser Leu Leu Asp 96 289 CAJ ATG QRS GAJ GGL WGZ TTK ATM XTY GGL TTK QRS AAK QRS GAJ AAK 336 97 Gln Met Ser Glu Gly Arg Phe Ile Leu Gly Phe Ser Asn Ser Glu Asn 112 337 GAK TTK GAJ ATG GAK TTK TTK AAJ WGZ AAK XTY GCL QRS WGZ CAJ CAJ 384 113 Asp Phe Glu Met Asp Phe Phe Lys Arg Asn Leu Ala Ser Arg Gln Gln 128 385 CAJ TTK GAJ GCL TGK TAK GAK ATM ATM AAK GAJ GCL XTY ACL ACL GGL 432 129 Gln Phe Glu Ala Cys Tyr Asp Ile Ile Asn Glu Ala Leu Thr Thr Gly 144 433 TAK TGK CAK CCL CAJ AAK GAK TTK TAK GAK TTK CCL AAJ GTL QRS ATM 480 145 Tyr Cys His Pro Gln Asn Asp Phe Tyr Asp Phe Pro Lys Val Ser Ile 160 481 AAK CCL CAK TGK TTK QRS AAJ AAK GGL CCL AAJ CAJ TAK GTL GTL GCL 528 161 Asn Pro His Cys Phe Ser Lys Asn Gly Pro Lys Gln Tyr Val Val Ala 176 529 ACL QRS AAJ QRS GTL GTL GAJ TGG GCL GCL AAJ AAK GCL XTY QRS XTY 576 177 Thr Ser Lys Ser Val Val Glu Trp Ala Ala Lys Asn Ala Leu Ser Leu 192 577 ACL TTK AAJ TGG GAK GAK QRS XTY GCL GAK AAJ GAJ QRS TAK GCL ATG 624 193 Thr Phe Lys Trp Asp Asp Ser Leu Ala Asp Lys Glu Ser Tyr Ala Met 208 625 XTY TAK AAK GAJ ATM GCL ATG WGZ TAK GGL ATM GAK ATM QRS AAK GTL 672 209 Leu Tyr Asn Glu Ile Ala Met Arg Tyr Gly Ile Asp Ile Ser Asn Val 224 673 GAJ CAK CAJ XTY ACL GTL ATM GTL AAK XTY AAK GCL GAK GGL GAK XTY 720 225 Glu His Gln Leu Thr Val Ile Val Asn Leu Asn Ala Asp Gly Asp Leu 240 721 GCL WGZ GAK GAJ GCL AAJ GGL TAK XTY AAJ AAK TAK ATM GTL GAJ ACL 768 241 Ala Arg Asp Glu Ala Lys Gly Tyr Leu Lys Asn Tyr Ile Val Glu Thr 256 769 TAK CCL GAK ATM GAK CAK GTL GCL AAJ ATM AAK QRS ATM ATM GCL GAJ 816 257 Tyr Pro Asp Ile Asp His Val Ala Lys Ile Asn Ser Ile Ile Ala Glu 272 817 AAK GCL ATM GGL ACL GAR GCL GAJ TAK TAK GAK CAJ ATM AAJ XTY GCL 864 273 Asn Ala Ile Gly Thr Asp Ala Glu Tyr Tyr Asp Gln Ile Lys Leu Ala 288 865 GTL GAJ AAJ ACL GGL GTL AAJ AAJ ATM XTY XTY QRS TTK GAJ QRS ATG 912 289 Val Glu Lys Thr Gly Val Lys Lys Ile Leu Leu Ser Phe Glu Ser Met 304 913 AAJ GAK QRS AAK GAK GTL AAJ AAK ATM ATM AAK ATG GCL AAK GAK AAJ 960 305 Lys Asp Ser Asn Asp Val Lys Asn Ile Ile Asn Met Ala Asn Asp Lys 320 961 ATM QRS AAJ AAK ATM AAJ GCL ^*** 321 Ile Ser Lys Asn Ile Lys Ala （ただし、塩基の３文字連鎖は、左側に５′末端を、右
側に３′末端を表わしている。この文字はヌクレオチド
配列を形成するプリン又はピリミジン塩基を表わす。ま
た、 Ａ：アデニン、 Ｇ：グアニン、 Ｃ：シトシン、 Ｊ：ＡもしくはＧ、 Ｋ：ＴもしくはＣ、 Ｌ：Ａ，Ｔ，ＣもしくはＧ、 Ｍ：Ａ，ＣもしくはＴ、 Ｔ：チミン、 Ｘ：ＹがＡもしくはＧの場合はＴまたはＣ、或いはＹが
ＣもしくはＴの場合はＣ、 Ｙ：ＸがＣの場合はＡ，Ｇ，ＣまたはＴ、或いはＸがＴ
の場合はＡまたはＧ、 Ｗ：ＺがＣもしくはＴの場合はＣまたはＡ、或いはＺが
ＣもしくはＴの場合はＣ、 Ｚ：ＷがＧの場合はＡ，Ｇ，ＣまたはＴ、或いはＷがＡ
の場合はＡまたはＧ、 ＧＲ：ＳがＡ，Ｇ，ＣまたはＴの場合はＴＣ、＊＊＊は
ＴＡＡ，ＴＡＧもしくはＴＧＡを表す。）

【００２７】配列番号：３ 配列の長さ：１０６５ 配列の型：核酸 鎖の数：１ トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 起源 生物名：Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｈａｎｅｄａｉ 株名：ＡＴＣＣ３３２２４ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 特徴を決定した方法：Ｅ

【００２８】 配列 1 ATG AAG TTC GGA AAT ATT TGT TTT TCA TAT CAA CCG CCT GGT GAG ACT 48 1 Met Lys Phe Gly Asn Ile Cys Phe Ser Tyr Gln Pro Pro Gly Glu Thr 16 49 CAT AAA CAG GTA ATG GAT CGT TTT ATT CGA CTT GGC GTT GCT TCG GAA 96 17 His Lys Gln Val Met Asp Arg Phe Ile Arg Leu Gly Val Ala Ser Glu 32 97 GAA CTT GGC TTT GAT ACA TAC TGG ACT CTG GAG CAC CAT TTT ACT GAG 144 33 Glu Leu Gly Phe Asp Thr Tyr Trp Thr Leu Glu His His Phe Thr Glu 48 145 TTC GGT CTT ACT GGT AAC CTT TTT GTT GCT GCA GCA AAT CTA CTT GGC 192 49 Phe Gly Leu Thr Gly Asn Leu Phe Val Ala Ala Ala Asn Leu Leu Gly 64 193 CGA ACT AAA ACA CTG CAA GTT GGG ACG ATG GGG GTT GTA CTC CCT ACA 240 65 Arg Thr Lys Thr Leu Gln Val Gly Thr Met Gly Val Val Leu Pro Thr 80 241 GCT CAT CCA GTT CGA CAA CTA GAA GAT GTA TTG TTA TTG GAT CAA ATG 288 81 Ala His Pro Val Arg Gln Leu Glu Asp Val Leu Leu Leu Asp Gln Met 96 289 TCT AAA GGT CGT TTT AAT TTT GGC GTT GTT CGA GGT TTA TAC CAT AAA 336 97 Ser Lys Gly Arg Phe Asn Phe Gly Val Val Arg Gly Leu Tyr His Lys 112 337 GAT TTC AGG GTA TTT GGC GTC AAT ATG GAA GAC TCA CGC GGG ATA ACT 384 113 Asp Phe Arg Val Phe Gly Val Asn Met Gly Asp Ser Arg Gly Ile Thr 128 385 CAA AGC TTC CAT ACC ATG ATC ATT GAT GGC GTA AAA ACG GGA CGT ATA 432 129 Gln Ser Phe His Thr Met Ile Ile Asp Gly Val Lys Thr Gly Arg Ile 144 433 AGC TCA GAT GGG GAA CAT ATA GAG TTC CCA GAA GTT GAG GTA TAT CCA 480 145 Ser Ser Asp Gly Glu His Ile Glu Phe Pro Glu Val Glu Val Tyr Pro 160 481 ACA GCT TAT TCA AAG GAG CTC CCA ACG TGT ATG ACA GCG GAG TCA GCT 528 161 Thr Ala Tyr Ser Lys Glu Leu Pro Thr Cys Met Thr Ala Glu Ser Ala 176 529 AGC ACA ACG GAG TGG TTA GCT GAG CGG GGA TTG CCA ATG GTG CTT AGC 576 177 Ser Thr Thr Glu Trp Leu Ala Glu Arg Gly Leu Pro Met Val Leu Ser 192 577 TGG ATA ATT GGA ACC AAC GAG AAA AAA GCG CAA ATG GAA CTT TAT AAT 624 193 Trp Ile Ile Gly Thr Asn Glu Lys Lys Ala Gln Met Glu Leu Tyr Asn 208 625 GAA ATT GCG ATA GAG CAT GGT CAT GAT ATT ACT AAG ATT GAT CAT TGT 672 209 Glu Ile Ala Ile Glu His Gly His Asp Ile Thr Lys Ile Asp His Cys 224 673 ATG ACA TTT ATA TGC TCA GTG GAT AAT GAT AGT AAT AAG GCA CGT GAT 720 225 Met Thr Phe Ile Cys Ser Val Asp Asn Asp Ser Asn Lys Ala Arg Asp 240 721 GTA TGC CGT GCT TTT CTT GCT AAT TGG TAT GAC TCT TAT GTT AAT GCT 768 241 Val Cys Arg Ala Phe Leu Ala Asn Trp Tyr Asp Ser Tyr Val Asn Ala 256 769 ACC AAC ATA TTC AAT GAT AGC AAC CAA ACT CGT GGC TAT GAC TAT CAC 816 257 Thr Asn Ile Phe Asn Asp Ser Asn Gln Thr Arg Gly Tyr Asp Tyr His 272 817 AAA GGT CAG TGG AGA GAT TTT GTA CTA AAA GGT CAT ACA AAT AGC AAC 864 273 Lys Gly Gln Trp Arg Asp Phe Val Leu Lys Gly His Thr Asn Ser Asn 288 865 AGA CGT GTT GAT TAC AGT AAT GAA ATT AAC CCT GTA GGC ACA CCT GAA 912 289 Arg Arg Val Asp Tyr Ser Asn Glu Ile Asn Pro Val Gly Thr Pro Glu 304 913 GAA TGT ATT TCA ATT ATT CAA CGT GAC ATT GAT GCG ACC GGT ATT ACT 960 305 Glu Cys Ile Ser Ile Ile Gln Arg Asp Ile Asp Ala Thr Gly Ile Thr 320 961 AAT ATC ACC TGT GGG TTT GAA GCA AAT GGT AGT GAA GAG GAA ATA GTG1008 321 Asn Ile Thr Cys Gly Phe Glu Ala Asn Gly Ser Glu Glu Glu Ile Val 336 1009 GCT TCT ATG GGA CGG TTT ATG ACA CAA GTG GCT CCT TTT TTG AAA GAC1056 337 Ala Ser Met Gly Arg Phe Met Thr Gln Val Ala Pro Phe Leu Lys Asp 352 1057 CCT AGC TAG 353 Pro Ser ^***

【００２９】配列番号：４ 配列の長さ：９８４ 配列の型：核酸 鎖の数：１ トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 起源 生物名：Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｈａｎｅｄａｉ 株名：ＡＴＣＣ３３２２４ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 特徴を決定した方法：Ｅ

【００３０】 配列 1 ATG AAA TTT GGA TTG TTT TTC CTC AAC TTT CAG CTA GAT GGT ATG ACT 48 1 Met Lys Phe Gly Leu Phe Phe Leu Asn Phe Gln Leu Asp Gly Met Thr 16 49 TCA GAA AAC ACT TTA GAT AAT ATG GTG AGC ATG GTG TCT CTT GTT GAT 96 17 Ser Glu Asn Thr Leu Asp Asn Met Val Ser Met Val Ser Leu Val Asp 32 97 GCT GAT GAA TAT CAT TTT GAT ACA GTA CTC ATA TAC GAA CAT CAT TTT 144 33 Ala Asp Glu Tyr His Phe Asp Thr Val Leu Ile Tyr Glu His His Phe 48 145 TCT AAA AGT GGC ATT ATA GCT TCA CCT ATT ACA GCG GCT GGT TTT TTA 192 49 Ser Lys Ser Gly Ile Ile Ala Ser Pro Ile Thr Ala Ala Gly Phe Leu 64 193 CTT GGA TTG ACT AAT AGG CTG CAT ATT GGC TCT TTA AAT CAA GTT ATT 240 65 Leu Gly Leu Thr Asn Arg Leu His Ile Gly Ser Leu Asn Gln Val Ile 80 241 ACA ACT CAC CAT CCA GTA CGT GTT GCC GAG GAA TCA AGT TTA TTA GAC 288 81 Thr Thr His His Pro Val Arg Val Ala Glu Glu Ser Ser Leu Leu Asp 96 289 CAG ATG TCT GAA GGT CGT TTC ATT CTG GGA TTC AGC AAT AGT GAA AAC 336 97 Gln Met Ser Glu Gly Arg Phe Ile Leu Gly Phe Ser Asn Ser Glu Asn 112 337 GAC TTT GAA ATG GAT TTC TTT AAA CGT AAT TTA GCA TCT CGG CAA CAG 384 113 Asp Phe Glu Met Asp Phe Phe Lys Arg Asn Leu Ala Ser Arg Gln Gln 128 385 CAA TTT GAA GCT TGT TAT GAC ATC ATT AAT GAG GCG TTG ACG ACT GGA 432 129 Gln Phe Glu Ala Cys Tyr Asp Ile Ile Asn Glu Ala Leu Thr Thr Gly 144 433 TAT TGC CAC CCT CAA AAT GAT TTT TAC GAT TTC CCT AAA GTG TCA ATA 480 145 Tyr Cys His Pro Gln Asn Asp Phe Tyr Asp Phe Pro Lys Val Ser Ile 160 481 AAC CCA CAT TGT TTT AGT AAA AAT GGG CCT AAG CAG TAT GTA GTA GCA 528 161 Asn Pro His Cys Phe Ser Lys Asn Gly Pro Lys Gln Tyr Val Val Ala 176 529 ACA AGT AAA AGT GTC GTT GAA TGG GCC GCT AAA AAT GCA TTG TCT CTG 576 177 Thr Ser Lys Ser Val Val Glu Trp Ala Ala Lys Asn Ala Leu Ser Leu 192 577 ACG TTT AAA TGG GAT GAT AGT CTT GCA GAT AAA GAA AGT TAT GCA ATG 624 193 Thr Phe Lys Trp Asp Asp Ser Leu Ala Asp Lys Glu Ser Tyr Ala Met 208 625 CTT TAT AAT GAA ATT GCG ATG CGT TAT GGT ATT GAC ATT TCA AAT GTA 672 209 Leu Tyr Asn Glu Ile Ala Met Arg Tyr Gly Ile Asp Ile Ser Asn Val 224 673 GAG CAC CAA CTT ACA GTC ATT GTC AAT TTG AAT GCT GAT GGT GAT TTA 720 225 Glu His Gln Leu Thr Val Ile Val Asn Leu Asn Ala Asp Gly Asp Leu 240 721 GCT CGC GAT GAA GCT AAG GGG TAC TTG AAA AAC TAT ATT GTT GAA ACA 768 241 Ala Arg Asp Glu Ala Lys Gly Tyr Leu Lys Asn Tyr Ile Val Glu Thr 256 769 TAT CCA GAC ATC GAT CAT GTG GCT AAA ATA AAT TCA ATC ATT GCA GAG 816 257 Tyr Pro Asp Ile Asp His Val Ala Lys Ile Asn Ser Ile Ile Ala Glu 272 817 AAC GCG ATT GGT ACT GAT GCC GAG TAT TAT GAC CAA ATT AAA CTA GCA 864 273 Asn Ala Ile Gly Thr Asp Ala Glu Tyr Tyr Asp Gln Ile Lys Leu Ala 288 865 GTT GAA AAA ACA GGA GTT AAA AAA ATT CTG TTA TCA TTT GAA TCC ATG 912 289 Val Glu Lys Thr Gly Val Lys Lys Ile Leu Leu Ser Phe Glu Ser Met 304 913 AAG GAT TCA AAT GAT GTT AAA AAT ATT ATT AAT ATG GCA AAT GAC AAA 960 305 Lys Asp Ser Asn Asp Val Lys Asn Ile Ile Asn Met Ala Asn Asp Lys 320 961 ATA TCT AAA AAT ATT AAG GCA TAG 321 Ile Ser Lys Asn Ile Lys Ala ^***

【００３１】配列番号：５ 配列の長さ：２１２４ 配列の型：核酸 鎖の数：１ トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 起源 生物名：Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｈａｎｅｄａｉ 株名：ＡＴＣＣ３３２２４ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：３８−１１０２，１１４１−２１２４ 特徴を決定した方法：Ｅ

【００３２】 配列 10 20 30 40 50 5'-TAGTCTATCC CGGTTATATA AAATAAAGGA AATAATTATG AAGTTCGGAA 60 70 80 90 100 ATATTTGTTT TTCATATCAA CCGCCTGGTG AGACTCATAA ACAGGTAATG 110 120 130 140 150 GATCGTTTTA TTCGACTTGG CGTTGCTTCG GAAGAACTTG GCTTTGATAC 160 170 180 190 200 ATACTGGACT CTGGAGCACC ATTTTACTGA GTTCGGTCTT ACTGGTAACC 210 220 230 240 250 TTTTTGTTGC TGCAGCAAAT CTACTTGGCC GAACTAAAAC ACTGCAAGTT 260 270 280 290 300 GGGACGATGG GGGTTGTACT CCCTACAGCT CATCCAGTTC GACAACTAGA 310 320 330 340 350 AGATGTATTG TTATTGGATC AAATGTCTAA AGGTCGTTTT AATTTTGGCG 360 370 380 390 400 TTGTTCGAGG TTTATACCAT AAAGATTTCA GGGTATTTGG CGTCAATATG 410 420 430 440 450 GAAGACTCAC GCGGGATAAC TCAAAGCTTC CATACCATGA TCATTGATGG 460 470 480 490 500 CGTAAAAACG GGACGTATAA GCTCAGATGG GGAACATATA GAGTTCCCAG 510 520 530 540 550 AAGTTGAGGT ATATCCAACA GCTTATTCAA AGGAGCTCCC AACGTGTATG 560 570 580 590 600 ACAGCGGAGT CAGCTAGCAC AACGGAGTGG TTAGCTGAGC GGGGATTGCC 610 620 630 640 650 AATGGTGCTT AGCTGGATAA TTGGAACCAA CGAGAAAAAA GCGCAAATGG 660 670 680 690 700 AACTTTATAA TGAAATTGCG ATAGAGCATG GTCATGATAT TACTAAGATT 710 720 730 740 750 GATCATTGTA TGACATTTAT ATGCTCAGTG GATAATGATA GTAATAAGGC 760 770 780 790 800 ACGTGATGTA TGCCGTGCTT TTCTTGCTAA TTGGTATGAC TCTTATGTTA 810 820 830 840 850 ATGCTACCAA CATATTCAAT GATAGCAACC AAACTCGTGG CTATGACTAT 860 870 880 890 900 CACAAAGGTC AGTGGAGAGA TTTTGTACTA AAAGGTCATA CAAATAGCAA 910 920 930 940 950 CAGACGTGTT GATTACAGTA ATGAAATTAA CCCTGTAGGC ACACCTGAAG 960 970 980 990 1000 AATGTATTTC AATTATTCAA CGTGACATTG ATGCGACCGG TATTACTAAT 1010 1020 1030 1040 1050 ATCACCTGTG GGTTTGAAGC AAATGGTAGT GAAGAGGAAA TAGTGGCTTC 1060 1070 1080 1090 1100 TATGGGACGG TTTATGACAC AAGTGGCTCC TTTTTTGAAA GACCCTAGCT 1110 1120 1130 1140 1150 AGTCATTAAT ACATTTAATT AAATATAGTA AGGAAATATT ATGAAATTTG 1160 1170 1180 1190 1200 GATTGTTTTT CCTCAACTTT CAGCTAGATG GTATGACTTC AGAAAACACT 1210 1220 1230 1240 1250 TTAGATAATA TGGTGAGCAT GGTGTCTCTT GTTGATGCTG ATGAATATCA 1260 1270 1280 1290 1300 TTTTGATACA GTACTCATAT ACGAACATCA TTTTTCTAAA AGTGGCATTA 1310 1320 1330 1340 1350 TAGCTTCACC TATTACAGCG GCTGGTTTTT TACTTGGATT GACTAATAGG 1360 1370 1380 1390 1400 CTGCATATTG GCTCTTTAAA TCAAGTTATT ACAACTCACC ATCCAGTACG 1410 1420 1430 1440 1450 TGTTGCCGAG GAATCAAGTT TATTAGACCA GATGTCTGAA GGTCGTTTCA 1460 1470 1480 1490 1500 TTCTGGGATT CAGCAATAGT GAAAACGACT TTGAAATGGA TTTCTTTAAA 1510 1520 1530 1540 1550 CGTAATTTAG CATCTCGGCA ACAGCAATTT GAAGCTTGTT ATGACATCAT 1560 1570 1580 1590 1600 TAATGAGGCG TTGACGACTG GATATTGCCA CCCTCAAAAT GATTTTTACG 1610 1620 1630 1640 1650 ATTTCCCTAA AGTGTCAATA AACCCACATT GTTTTAGTAA AAATGGGCCT 1660 1670 1680 1690 1700 AAGCAGTATG TAGTAGCAAC AAGTAAAAGT GTCGTTGAAT GGGCCGCTAA 1710 1720 1730 1740 1750 AAATGCATTG TCTCTGACGT TTAAATGGGA TGATAGTCTT GCAGATAAAG 1760 1770 1780 1790 1800 AAAGTTATGC AATGCTTTAT AATGAAATTG CGATGCGTTA TGGTATTGAC 1810 1820 1830 1840 1850 ATTTCAAATG TAGAGCACCA ACTTACAGTC ATTGTCAATT TGAATGCTGA 1860 1870 1880 1890 1900 TGGTGATTTA GCTCGCGATG AAGCTAAGGG GTACTTGAAA AACTATATTG 1910 1920 1930 1940 1950 TTGAAACATA TCCAGACATC GATCATGTGG CTAAAATAAA TTCAATCATT 1960 1970 1980 1990 2000 GCAGAGAACG CGATTGGTAC TGATGCCGAG TATTATGACC AAATTAAACT 2010 2020 2030 2040 2050 AGCAGTTGAA AAAACAGGAG TTAAAAAAAT TCTGTTATCA TTTGAATCCA 2060 2070 2080 2090 2100 TGAAGGATTC AAATGATGTT AAAAATATTA TTAATATGGC AAATGACAAA 2110 2120 2130 2140 2150 ATATCTAAAA ATATTAAGGC ATAG-3'

【００３３】配列番号：６ 配列の長さ：３５４ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：タンパク質

【００３４】 配列 10 N- Met Lys Phe Gly Asn Ile Cys Phe Ser Tyr Gln Pro Pro Gly Glu Thr 20 30 His Lys Gln Val Met Asp Arg Phe Ile Arg Leu Gly Val Ala Ser Glu 40 Glu Leu Gly Phe Asp Thr Tyr Trp Thr Leu Glu His His Phr Thr Glu 50 60 Phe Gly Leu Thr Gly Asn Leu Phe Val Ala Ala Ala Asn Leu Leu Gly 70 80 Arg Thr Lys Thr Leu Gln Val Gly Thr Met Gly Val Val Leu Pro Thr 90 Ala His Pro Val Arg Gln Leu Glu Asp Val Leu Leu Leu Asp Gln Met 100 110 Ser Lys Gly Arg Phe Asn Phe Gly Val Val Arg Gly Leu Tyr His Lys 120 Asp Phe Arg Val Phe Gly Val Asn Met Glu Asp Ser Arg Gly Ile Thr 130 140 Gln Ser Phe His Thr Met Ile Ile Asp Gly Val Lys Thr Gly Arg Ile 150 160 Ser Ser Asp Gly Glu His Ile Glu Phe Pro Glu Val Glu Val Tyr Pro 170 Thr Ala Tyr Ser Lys Glu Leu Pro Thr Cys Met Thr Ala Glu Ser Ala 180 190 Ser Thr Thr Glu Trp Leu Ala Glu Arg Gly Leu Pro Met Val Leu Ser 200 Trp Ile Ile Gly Thr Asn Glu Lys Lys Ala Gln Met Glu Leu Tyr Asn 210 220 Glu Ile Ala Ile Glu His Gly His Asp Ile Thr Lys Ile Asp His Cys 230 240 Met Thr Phe Ile Cys Ser Val Asp Asn Asp Ser Asn Lys Ala Arg Asp 250 Val Cys Arg Ala Phe Leu Ala Asn Trp Tyr Asp Ser Tyr Val Asn Ala 260 270 Thr Asn Ile Phe Asn Asp Ser Asn Gln Thr Arg Gly Tyr Asp Tyr His 280 Lys Gly Gln Trp Arg Asp Phe Val Leu Lys Gly His Thr Asn Ser Asn 290 300 Arg Arg Val Asp Tyr Ser Asn Glu Ile Asn Pro Val Gly Thr Pro Glu 310 320 Glu Cys Ile Ser Ile Ile Gln Arg Asp Ile Asp Ala Thr Gly Ile Thr 330 Asn Ile Thr Cys Gly Phe Glu Ala Asn Gly Ser Glu Glu Glu Ile Val 340 350 Ala Ser Met Gly Arg Phe Met Thr Gln Val Ala Pro Phe Leu Lys Asp Pro Ser ^*** -C

【００３５】配列番号：７ 配列の長さ：３２７ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：タンパク質

【００３６】 配列 10 N- Met Lys Phe Gly Leu Phe Phe Leu Asn Phe Gln Leu Asp Gly Met Thr 20 30 Ser Glu Asn Thr Leu Asp Asn Met Val Ser Met Val Ser Leu Val Asp 40 Ala Asp Glu Tyr His Phe Asp Thr Val Leu Ile Tyr Glu His His Phe 50 60 Ser Lys Ser Gly Ile Ile Ala Ser Pro Ile Thr Ala Ala Gly Phe Leu 70 80 Leu Gly Leu Thr Asn Arg Leu His Ile Gly Ser Leu Asn Gln Val Ile 90 Thr Thr His His Pro Val Arg Val Ala Glu Glu Ser Ser Leu Leu Asp 100 110 Gln Met Ser Glu Gly Arg Phe Ile Leu Gly Phe Ser Asn Ser Glu Asn 120 Asp Phe Glu Met Asp Phe Phe Lys Arg Asn Leu Ala Ser Arg Gln Gln 130 140 Gln Phe Glu Ala Cys Tyr Asp Ile Ile Asn Glu Ala Leu Thr Thr Gly 150 160 Tyr Cys His Pro Gln Asn Asp Phe Tyr Asp Phe Pro Lys Val Ser Ile 170 Asn Pro His Cys Phe Ser Lys Asn Gly Pro Lys Gln Tyr Val Val Ala 180 190 Thr Ser Lys Ser Val Val Glu Trp Ala Ala Lys Asn Ala Leu Ser Leu 200 Thr Phe Lys Trp Asp Asp Ser Leu Ala Asp Lys Glu Ser Tyr Ala Met 210 220 Leu Tyr Asn Glu Ile Ala Met Arg Tyr Gly Ile Asp Ile Ser Asn Val 230 240 Glu His Gln Leu Thr Val Ile Val Asn Leu Asn Ala Asp Gly Asp Leu 250 Ala Arg Asp Glu Ala Lys Gly Tyr Leu Lys Asn Tyr Ile Val Glu Thr 260 270 Tyr Pro Asp Ile Asp His Val Ala Lys Ile Asn Ser Ile Ile Ala Glu 280 Asn Ala Ile Gly Thr Asp Ala Glu Tyr Tyr Asp Gln Ile Lys Leu Ala 290 300 Val Glu Lys Thr Gly Val Lys Lys Ile Leu Leu Ser Phe Glu Ser Met 310 320 Lys Asp Ser Asn Asp Val Lys Asn Ile Ile Asn Met Ala Asn Asp Lys Ile Ser Lys Asn Ile Lys Ala ^*** -C

【図面の簡単な説明】

【図１】細菌ルシフェラーゼαサブユニットの保存され
たアミノ酸配列と合成オリゴヌクレオチド・プライマ
ー。

【図２】本発明の酵素遺伝子の制限酵素地図を示す。矢
印で示したところが、酵素の構造遺伝子部分に相当す
る。 Ｂ ＢａｍＨＩ Ｘ ＸｂａＩ Ｈ ＨｉｎｄIII Ｓ ＳａｌＩ ｌｕｘＡ ルシフェラーゼαサブユニット遺伝子 ｌｕｘＢ ルシフェラーゼβサブユニット遺伝子 矢印の方向は、転写の方向を示す。

【図３】本発明に係る発光細菌のルシフェラーゼ遺伝子
を含有する本発明の発現ベクターｐＡＬＦ１の構築工程
を示す。矢印はルシフェラーゼ遺伝子のコーディング領
域である。ボックスは大腸菌のラクトースオペロンのプ
ロモーター部分を示す。 ｌｕｘＡ ルシフェラーゼαサブユニット遺伝子 ｌｕｘＢ ルシフェラーゼβサブユニット遺伝子 ｌａｃＰ ラクトースオペロンのプロモーター 矢印の方向は、転写の方向を示す。

【符号の説明】 ｌａｃＰ ラクトースオペロンのプロモーター ｐＵＣ１３ プラスミド・ベクター ｐＡＨ１８ 組換えベクター ｐＡＬＦ１ 発現ベクター ＢａｍＨＩ 制限酵素 ＸｂａＩ 制限酵素 ＨｉｎｄIII 制限酵素 ＥｃｏＲＩ 制限酵素 ＳａｌＩ 制限酵素

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 9/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） Ｃ１２Ｒ 1:01）

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号１で表される塩基配列を含む、
   ルシフェラーゼ アルファ サブユニットの遺伝子。 【配列表１】
2. 【請求項２】 配列番号２で表される塩基配列を含む、
   ルシフェラーゼ ベータ サブユニットの遺伝子。 【配列表２】
3. 【請求項３】 配列番号３で表される塩基配列を含む請
   求項１記載のルシフェラーゼ アルファ サブユニット
   の遺伝子。 【配列表３】
4. 【請求項４】 配列番号４で表される塩基配列を含む請
   求項２記載のルシフェラーゼ ベータ サブユニットの
   遺伝子。 【配列表４】
5. 【請求項５】 塩基配列が配列番号５で表されるルシフ
   ェラーゼ遺伝子。 【配列表５】
6. 【請求項６】 配列番号６で表されるアミノ酸配列を有
   するルシフェラーゼアルファ サブユニット。 【配列表６】
7. 【請求項７】 配列番号７で表されるアミノ酸配列を有
   するルシフェラーゼベータ サブユニット。 【配列表７】
8. 【請求項８】 塩基配列が配列番号１および配列番号２
   で表されるＤＮＡを有する組換えベクター。
9. 【請求項９】 配列番号３および配列番号４で表される
   塩基配列を有する遺伝子がプラスミドベクターへ挿入さ
   れた請求項８記載の組換えベクター。
10. 【請求項１０】 配列番号１および配列番号２で表され
    る塩基配列を有するＤＮＡを含む組換えベクターを含有
    する細菌。
11. 【請求項１１】 塩基配列が配列番号１および配列番号
    ２で表されるＤＮＡを含む組換えベクターで修飾されて
    なる細菌を培養することからなる配列番号６および配列
    番号７で表されるアミノ酸配列を含む酵素の製法。