JP2021502805A - 改良された遺伝子改変/突然変異型細菌ルシフェラーゼ - Google Patents
改良された遺伝子改変/突然変異型細菌ルシフェラーゼ Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021502805A JP2021502805A JP2020522895A JP2020522895A JP2021502805A JP 2021502805 A JP2021502805 A JP 2021502805A JP 2020522895 A JP2020522895 A JP 2020522895A JP 2020522895 A JP2020522895 A JP 2020522895A JP 2021502805 A JP2021502805 A JP 2021502805A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- genetically modified
- seq
- amino acid
- bacterial luciferase
- luciferase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0069—Oxidoreductases (1.) acting on single donors with incorporation of molecular oxygen, i.e. oxygenases (1.13)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/14—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with reduced flavin or flavoprotein as one donor, and incorporation of one atom of oxygen (1.14.14)
- C12Y114/14003—Alkanal monooxygenase FMN (1.14.14.3), i.e. bacterial-luciferase
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
本開示は、広範には、バイオレポーター/レポーターアッセイ分野に関する。この分野において、本発明は、改良された発光レポーター系アッセイに関する。特に本発明は、野生型又は親酵素と比較して、発光量がより高く、及び/又はシグナルの減衰速度がより遅い、改良された遺伝子改変細菌ルシフェラーゼに関する。発光レポーター系アッセイにこうした改良された遺伝子改変細菌ルシフェラーゼを使用すると、その検出感度が向上することにより、発光レポーター系アッセイが改善されることになる。したがって、改良された遺伝子改変細菌ルシフェラーゼにより、より効率的且つより高感度のバイオレポーター/レポーターアッセイを行うことが可能になる。更に本発明は、遺伝子改変細菌ルシフェラーゼを使用するための方法及び遺伝子改変細菌ルシフェラーゼを使用するレポーターアッセイも提供する。
バイオレポーター/レポーターアッセイ分野において、生物発光の使用は非常に意義が高く且つ重要である。生物発光は化学発光(chemiluminscence)の一形態であり、生物による光の産生及び放出である。生物発光における主要な化学反応には、発光色素であるルシフェリン基質及び酵素であるルシフェラーゼが関与している。この酵素、即ちルシフェラーゼは、ルシフェリン基質の酸化を触媒する。あらゆるルシフェラーゼが発光反応を触媒するが、ルシフェリン基質の構造は多岐に亘る(Thorne, et al., Chem. Biol. 17(6):646−657 (2010)参照)。生物発光は生物学及び医学の両方に幅広く利用されている。特に、生物発光する生物が多くの研究分野の対象とされている。ルシフェラーゼ系は、遺伝子工学においてレポーター遺伝子として幅広く利用されており、それぞれ蛍光により異なる色を生成し、生物医学的研究においては、生物発光イメージングが用いられている。この種の用途の例として、ホタルルシフェラーゼ遺伝子を、形質転換タバコ植物体の研究、生物発光により支援される細胞破壊(bioluminescent activated destruction)を用いた実験的がん治療及び光遺伝学における使用が挙げられる。したがって生物発光は、学術研究から産業に至るまで幅広く使用されている、一般に活用されている検出技術である。実際、2010年のPubChemデータベースに掲載されている2,000近いアッセイのうち、約21%が生物発光であり、53%が蛍光である(Thorne, et al., Chem. Biol. 17(6):646−657 (2010)参照)。
本明細書においては、野生型又は対照ルシフェラーゼよりも、発光量が増加しており、及び/又はシグナルの減衰速度が遅く/低下していることを含む、向上した活性を有する、遺伝子改変されたルシフェラーゼを提供する。ルシフェラーゼを基礎とする発光レポーター系アッセイは生物学及び医学に広く使用されていることから、このような向上した活性を有する遺伝子改変されたルシフェラーゼを用いることにより、発光レポーター系アッセイの感度を向上させることができる。
本発明は、野生型又は遺伝子改変されていない細菌ルシフェラーゼと比較して向上した活性を示す、遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼに関する。細菌又は他の供給源由来のものを含む、従来のルシフェラーゼ酵素は、バイオレポーター/レポーターアッセイ分野に幅広く利用されている。生物発光には、酵素であるルシフェラーゼがルシフェリン等の基質を酸化することが関与している。多くの異なる生物由来の多くの異なるルシフェラーゼ酵素が存在するのと同様に、ルシフェリン基質も多岐に亘る。本発明の遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼは、野生型又は遺伝子改変されていない細菌ルシフェラーゼと比較して、発光量が増加しており、及び/又は減衰速度がより遅い。これらの遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼは、生物学及び医学に広く利用されている発光レポーター系アッセイのみならず、光に基づくレポート(light−based reporting)を用いる分野、特に、ルシフェリン基質を利用する分野にも採用することができる。
本開示の実施形態は、遺伝子改変/突然変異細菌ルシフェラーゼの製造品又はキットを更に提供する。製造品は、遺伝子改変/突然変異細菌ルシフェラーゼを、好適な包装材料と一緒に含むことができる。更に、キットは、DNAの固定、ハイブリダイゼーション、検出、定量化に必要な、適切に包装された試薬及び材料、例えば、固体担体、緩衝剤、酵素及び基準DNAも含むことができる。
アリイビブリオ・フィシェリ(A. fischeri)由来の細菌ルシフェラーゼ(luxAB)は、SN比が低く、発現が良好であり、検出が簡素であることから、レポーター系によく使用される。この計画は、発光シグナルの生成が向上したluxAB変異体を見出すための指向性進化計画である。発光量が改良された微生物は、レポーター系にluxABを使用するアッセイの総合感度を向上することになる。
ランダムな突然変異誘発及びランダムなluxAライブラリのスクリーニングにより、RLUの高いC170R突然変異(即ち、クローン1652−H03)を得た。170番目の位置をアルギニンとするよりも優れたアミノ酸置換が存在するかどうかを確認するために、170番目の位置のNNKライブラリを構築し、野生型陽性対照を含む3つの96well培養/保存プレート(culture storage plate)にアレイを作成した。全ての培養プレートを発現させ、発光活性を測定した。
発光活性の差が、発現に起因するものなのか、或いは光を発生する反応のキネティクスに起因するものなのかを判別するために、発現培養液からluxABを定量化するための方法を発展させた。より高い最大RLUを示したクローン1624−D02及び野生型luxABのフラスコ培養液を自己誘導培地(auto−induction media)で一晩増殖させた。培養液の活性を測定したところ、図3に示すように、クローン1624−D02は野生型と比較して最大RLUが約20%高かった。次いで両方の培養物を遠心分離にて採取し、再懸濁させ、音波処理により溶解させた。粗溶解液を、stain−freeポリアクリルアミドゲルに、精製アリイビブリオ・フィシェリ(A. fischeri)luxAB(Roche Ref. # 10−476−498−001)と一緒に添加した。図4Aに示すように、幾つかの異なる添加量の粗溶解液において、α−サブユニット及びβ−サブユニットの両方に対応する明確なバンドが視認された。更に、精製luxABの検量線に規格化することによって定量化することにより、図4Aに示すように、クローン1624−D02が野生型luxAB(レーン8〜9)と比較して過剰発現していなかったことが示された。luxAB発現プラスミドを含まないE.coli BL21細胞を負の対照として泳動させた。予想した通り、図4Aに示すように、BL21粗溶解液においてはluxAもluxBも検出されなかった(レーン10〜11)。図4Bに検量線を示す。
追加のluxA単一変異体を上に述べたように作製し、発光シグナルを発生する能力に関し野生型と比較する試験を更に実施した。特に、N102K突然変異を有する変異体(「1631−D11」と表示)、N264D突然変異を有する変異体(「1636−G04」と表示)又はN286D突然変異を有する変異体(「1635−F07」と表示)を作出し、試験を行った。上で述べたように発光を試験した。図5は、N102K変異体(「1631−D11」と表示)の発光活性を示すものであり、図6は、N264D変異体(「1636−G04」と表示)の発光活性を示すものであり、図7は、N286D変異体(「1635−F07」と表示)の発光活性を示すものである。これらの単一luxA変異体はそれぞれ、野生型と比較して発光が向上していることが分かる(図5〜7参照)。
Claims (12)
- 対照細菌ルシフェラーゼと比較して向上した活性を有する遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼであって、前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼのLuxAサブユニットは、前記対照細菌ルシフェラーゼのLuxAサブユニットに対し少なくとも80%同一であるアミノ酸配列を含み、前記対照細菌ルシフェラーゼの前記LuxAサブユニットは、配列番号2で示されるアミノ酸配列を有する、遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼ。
- 前記アミノ酸配列は、配列番号2の11、22、102、130、166、168、170、172、218、224、236、261、264、286、308、309又は334番目に相当する位置に少なくとも1のアミノ酸置換を含む、請求項1に記載の遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼ。
- 前記向上した活性は、前記対照細菌ルシフェラーゼと比較した場合の、発光量の増加及び/又はシグナル減衰速度の低下である、請求項1〜2のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼ。
- (a)前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の170番目に相当する前記アミノ酸はR、W若しくはKであり;
(b)前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の102番目に相当する前記アミノ酸はKであり;
(c)前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の264番目に相当する前記アミノ酸はDであり;
(d)前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の286番目に相当する前記アミノ酸はDであり;
(e)前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の22番目に相当する前記アミノ酸はHであり;又は
(f)前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の166番目に相当する前記アミノ酸はYである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼ。 - 前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の170番目に相当する前記アミノ酸はRである、請求項4に記載の遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼ。
- (a)前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の168番目に相当する前記アミノ酸はRであり、且つ前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の309番目に相当する前記アミノ酸はTであり;
(b)前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の218番目に相当する前記アミノ酸はVであり、且つ前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の224番目に相当する前記アミノ酸はRであり;
(c)前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の172番目に相当する前記アミノ酸はIであり、且つ前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の236番目に相当する前記アミノ酸はRであり;
(d)前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の286番目に相当する前記アミノ酸はDであり、且つ前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の308番目に相当する前記アミノ酸はDであり;
(e)前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の11番目に相当する前記アミノ酸はLであり、且つ前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の261番目に相当する前記アミノ酸はDであり;又は
(f)前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の130番目に相当する前記アミノ酸はIであり、且つ前記遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼの配列番号2の224番目に相当する前記アミノ酸はRである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼ。 - 前記アミノ酸配列は、前記対照細菌ルシフェラーゼの前記LuxAサブユニットに対し少なくとも90%同一である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼ。
- 請求項1〜7のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細菌ルシフェラーゼをコードする組換え核酸。
- 前記LuxAサブユニットをコードする核酸配列は、配列番号1及び/又は配列番号1のヌクレオチド1〜1065に対し少なくとも80%同一である、請求項8に記載の組換え核酸。
- 前記LuxAサブユニットをコードする核酸配列は、配列番号1及び/又は配列番号1のヌクレオチド1〜1065に対し少なくとも90%同一である、請求項9に記載の組換え核酸。
- 請求項8〜10のいずれか一項に記載の組換え核酸を含む発現ベクター。
- 請求項11に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762576814P | 2017-10-25 | 2017-10-25 | |
US62/576,814 | 2017-10-25 | ||
PCT/EP2018/079234 WO2019081620A1 (en) | 2017-10-25 | 2018-10-25 | IMPROVED MODIFIED / MUTANT BACTERIAL LUCIFERASES |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021502805A true JP2021502805A (ja) | 2021-02-04 |
JP7269925B2 JP7269925B2 (ja) | 2023-05-09 |
Family
ID=64049219
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020522895A Active JP7269925B2 (ja) | 2017-10-25 | 2018-10-25 | 改良された遺伝子改変/突然変異型細菌ルシフェラーゼ |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11788068B2 (ja) |
EP (1) | EP3701014A1 (ja) |
JP (1) | JP7269925B2 (ja) |
CN (1) | CN111315875B (ja) |
WO (1) | WO2019081620A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023196992A1 (en) * | 2022-04-07 | 2023-10-12 | The Penn State Research Foundation | Harnessing gut microbes for glycan detection and quantification |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07222590A (ja) * | 1994-02-08 | 1995-08-22 | Chisso Corp | アルテロモナス ハネダイ のルシフェラーゼ遺伝子 |
JP2009207447A (ja) * | 2008-03-05 | 2009-09-17 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 変異型ルシフェラーゼ |
WO2013052915A2 (en) * | 2011-10-05 | 2013-04-11 | Genelux Corporation | Method for detecting replication or colonization of a biological therapeutic |
JP2016082975A (ja) * | 2014-10-27 | 2016-05-19 | 国立大学法人 鹿児島大学 | 安定性が増加したウミシイタケ(Renillareniformis)由来ルシフェラーゼ変異体 |
Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4458066A (en) | 1980-02-29 | 1984-07-03 | University Patents, Inc. | Process for preparing polynucleotides |
US4666848A (en) | 1984-08-31 | 1987-05-19 | Cetus Corporation | Polypeptide expression using a portable temperature sensitive control cassette with a positive retroregulatory element |
US5079352A (en) | 1986-08-22 | 1992-01-07 | Cetus Corporation | Purified thermostable enzyme |
US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
FR2736065B1 (fr) * | 1995-06-29 | 1997-09-19 | Commissariat Energie Atomique | Phosphatases alcalines bacteriennes modifiees et leurs applications. |
GB9925161D0 (en) | 1999-10-26 | 1999-12-22 | Secr Defence | Novel enzyme |
AU2003301883A1 (en) * | 2002-10-30 | 2004-06-07 | University Of Tennessee Research Foundation | Modified luciferase nucleic acids and methods of use |
EP1945662A2 (en) * | 2005-11-10 | 2008-07-23 | Receptor Biologix, Inc. | Methods for production of receptor and ligand isoforms |
CN101473031A (zh) * | 2006-04-03 | 2009-07-01 | 普罗美加公司 | 变换和非变换的萤光素酶生物传感器 |
WO2010119721A1 (ja) | 2009-04-17 | 2010-10-21 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 超高輝度で安定な人工生物発光酵素 |
DK2990478T3 (en) | 2009-05-01 | 2017-05-15 | Promega Corp | SYNTHETIC OPLOPHORUS LUCIFERASES WITH IMPROVED LIGHT EMISSION |
CN103160528B (zh) | 2013-03-07 | 2014-06-11 | 西北农林科技大学 | 增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB及其应用 |
CN104178463B (zh) * | 2013-04-27 | 2017-06-20 | 西北农林科技大学 | 一种制备增强型单体细菌荧光素酶luxAB的方法 |
EP3191600A1 (en) | 2014-09-11 | 2017-07-19 | Promega Corporation | Luciferase sequences utilizing infrared-emitting substrates to produce enhanced luminescence |
WO2016051517A1 (ja) | 2014-09-30 | 2016-04-07 | オリンパス株式会社 | オレンジ色の発光を示すルシフェラーゼ |
CN104845986B (zh) * | 2014-11-17 | 2017-11-07 | 中国海洋大学 | 一种鳆发光杆菌荧光素酶、编码该酶的基因及其应用 |
-
2018
- 2018-10-25 US US16/758,372 patent/US11788068B2/en active Active
- 2018-10-25 CN CN201880068793.7A patent/CN111315875B/zh active Active
- 2018-10-25 JP JP2020522895A patent/JP7269925B2/ja active Active
- 2018-10-25 EP EP18795486.2A patent/EP3701014A1/en active Pending
- 2018-10-25 WO PCT/EP2018/079234 patent/WO2019081620A1/en unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07222590A (ja) * | 1994-02-08 | 1995-08-22 | Chisso Corp | アルテロモナス ハネダイ のルシフェラーゼ遺伝子 |
JP2009207447A (ja) * | 2008-03-05 | 2009-09-17 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 変異型ルシフェラーゼ |
WO2013052915A2 (en) * | 2011-10-05 | 2013-04-11 | Genelux Corporation | Method for detecting replication or colonization of a biological therapeutic |
JP2016082975A (ja) * | 2014-10-27 | 2016-05-19 | 国立大学法人 鹿児島大学 | 安定性が増加したウミシイタケ(Renillareniformis)由来ルシフェラーゼ変異体 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
"LLM class flavin-dependent oxidoreductase", GENPEPT, vol. WP_096619747, JPN6022042441, 9 October 2017 (2017-10-09), ISSN: 0004893226 * |
BOYU CUI ET AL.: "Engineering an enhanced, thermostable, monomeric bacterial luciferase gene as a reporter in plant pr", PLOS ONE, vol. 9, JPN6022042440, 2014, pages 107885, ISSN: 0004893227 * |
D R FORAN ET AL.: "Nucleotide sequence of the LuxA and LuxB genes of the bioluminescent marine bacterium Vibrio fischer", NUCLEIC ACIDS RESEARCH, vol. 16, JPN6022042442, 1988, pages 777, ISSN: 0004893225 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP7269925B2 (ja) | 2023-05-09 |
CN111315875B (zh) | 2024-02-20 |
EP3701014A1 (en) | 2020-09-02 |
US20200339964A1 (en) | 2020-10-29 |
US11788068B2 (en) | 2023-10-17 |
WO2019081620A1 (en) | 2019-05-02 |
CN111315875A (zh) | 2020-06-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Patterson et al. | Codon optimization of bacterial luciferase (lux) for expression in mammalian cells | |
CN110325641B (zh) | 基于无机多磷酸盐的能量再生的无细胞表达系统 | |
CN109971834B (zh) | 一种常温核酸扩增反应 | |
US20210324353A1 (en) | Recombinant kod polymerase | |
CN113061591B (zh) | 一种新型萤火虫萤光素酶突变体、其制备方法和应用 | |
CN110468153B (zh) | 一种远红光调控的基于CRISPR/Cas9系统的基因组转录装置、构建方法及应用 | |
CN111073871B (zh) | 热稳定性提高的dna聚合酶突变体及其构建方法和应用 | |
RU2111250C1 (ru) | ФРАГМЕНТ ДНК, КОДИРУЮЩИЙ ГЕН тРНК ЦИС (ААА) И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ | |
JP2021502805A (ja) | 改良された遺伝子改変/突然変異型細菌ルシフェラーゼ | |
CN116555204B (zh) | 一种性能提升的突变荧光素酶及其应用 | |
WO2021231483A1 (en) | Thermostable terminal deoxynucleotidyl transferase | |
CN112175980B (zh) | 通过定点突变提高聚合酶大片段活性的方法及应用 | |
Brown et al. | Positive selection at high temperature reduces gene transcription in the bacteriophage ϕX174 | |
JP2022500046A (ja) | 改善されたストランド置換能力を有する変異体dnaポリメラーゼ | |
WO2021093434A1 (zh) | 改造的Klenow片段及应用 | |
US20230066152A1 (en) | Methods to characterize enzymes for genome engineering | |
WO2002061098A2 (en) | Promoters from cyanobacteria allowing high expression levels | |
WO2023098036A1 (zh) | Taq酶突变体、其制备方法和应用 | |
CN109943549A (zh) | 一种超高速扩增型Taq DNA聚合酶 | |
US20240026345A1 (en) | Parallel single-cell reporter assays and compositions | |
WO2023098035A1 (zh) | Taq酶突变体及其制备方法和用途 | |
CN115873812A (zh) | 适用于哺乳动物细胞表达系统的高活性和高热稳定性荧光素酶突变体 | |
CN112251423B (zh) | 一种m-mlv逆转录酶体及其应用 | |
CN112011524B (zh) | 5-氨基乙酰丙酸合成酶突变体及其宿主细胞和应用 | |
EP1776468A1 (en) | Method of assaying fad synthetase |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20211014 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20220921 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20221011 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230111 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230404 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230424 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7269925 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |