JPH07203844A - 乳化性及び熱安定性に優れた乳清蛋白質分解物の製造 法、並びに該乳清蛋白質分解物を使用した抗アレルギ ー性調製乳 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 少なくとも３０％（重量）の純度の乳清蛋白
質を５％（重量）以上２０％（重量）以下の濃度で水に
溶解し、溶液のｐＨを７．５以上１０．０以下に調整
し、バシラス・サチリス(Bacillus subtilus) 由来のエ
ンド型プロテアーゼ、トリプシン及びパパインの３種類
の酵素を包含する酵素により加水分解することを特徴と
する抗乳清蛋白質血清を用いたエライザ(ELISA:Enzyme
linked immunosolbent assay) 抑制試験法により測定し
た抗原残存活性が１０^-4以下であり、乳化性及び熱安定
性に優れた乳清蛋白質加水分解物の製造法、及び該乳清
蛋白質加水分解物を蛋白源とする抗アレルギー性調製
乳。 【効果】 抗原残存活性が著しく低下された抗アレルギ
ー性調製乳製造用の乳清蛋白質分解物及び抗アレルギー
性調製乳が得られ、熱安定性及び乳化性が極めて良好な
抗アレルギー性調製乳製造用の乳清蛋白質分解物並びに
抗アレルギー性調製乳が得られる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗原性が低く、食餌ア
レルギーの予防及び治療に有効であり、乳化性及び熱安
定性に優れた風味の良い乳清蛋白質分解物の製造法及び
該乳清蛋白質分解物を使用した抗アレルギー性調製乳に
関する。

【０００２】本明細書において百分率の表示は、特に断
りのない限り重量による値であり、蛋白質は、窒素量に
６．３８を乗じた値である。

【０００３】

【従来の技術】乳児における食餌アレルギーの発生頻度
は近年増加する傾向にあり、小児保健上重要な問題とな
っている。一般的に食餌アレルギーの予防及び治療には
蛋白質の抗原性を低下させた抗アレルギー性調製乳が使
用されており、窒素源としては蛋白質を加水分解して抗
原性を低減させた分解物、特に乳蛋白質であるカゼイン
又は乳清蛋白質の分解物を単独又は混合して使用されて
いる。

【０００４】調製乳の脂肪の吸収を良好にするために
は、調製乳中の脂肪が乳化されていることが望ましいこ
とはいうまでもない。しかしながら、一般的に窒素源と
してエライザ抑制試験での抗原残存活性が１０^-4以下で
ある乳蛋白質分解物を使用して脂肪を含有する通常の調
製乳を製造する場合、蛋白質分解物の乳化力が分解して
いない蛋白質よりも低いために、脂肪球が完全に分散し
た乳化状態を維持することは困難であり、通常の均質機
（例えば均質バルブを通過させるホモジナイザー）で乳
化を行っても、容易に脂肪球が凝集して脂肪分離状態を
呈し、液の上層部に脂肪が分離する現象が発生する。

【０００５】乳化状態が不良であって脂肪の分離した調
製乳は、液の上層部と下層部とで風味及び組成が異なる
ため、大量に哺乳瓶に分注する病産院では各瓶の物性が
変化する可能性があり、極めて不都合であった。更に、
栄養成分の必要量を摂取するためには全量を摂取しなけ
ればならず、外観、風味及び吸収が不良のために、脂肪
の分離する乳化状態の不良な調製乳は商品として不適当
である。

【０００６】従って、現在市販されている抗アレルギー
性調製乳は、乳化の点で様々の工夫がなされている。日
本で調製乳に添加が許可されている乳化剤は、レシチ
ン、モノグリセライド、ポリグリセライドであるが、抗
原残存活性が１０^-4以下である抗アレルギー性調製乳の
場合、栄養学的に意義のあるレシチンのみで十分な乳化
を保持することは困難であり、モノグリセライド、ポリ
グリセライドが使用される場合が多い。又、蛋白質分解
物の抗原残存活性を１０^-3程度に抑制し、レシチンのみ
で乳化状態を保持した製品も市販されているが、この場
合、最も重要である抗アレルギー性の機能が犠牲となる
ために望ましくない。

【０００７】乳化状態の改善のため、クエン酸モノグリ
セライド、ステアリン酸モノグリセライド等の有機酸モ
ノグリセライドが使用される場合もあるが、乳児用製品
に不必要な物質を添加することは、望ましくない。又、
澱粉等（好ましくはタピオカ澱粉）を配合して乳化性を
改良する製造方法も市販されているが、この場合、成分
を人乳組成に近似させることが不可能となる。

【０００８】更に、病産院においては、大量に乳児用調
製乳を調製するため、調製乳を殺菌又は滅菌する操作が
採用されている。この操作は、調製乳にとって極めて過
酷なものであり、乳化の破壊のみならず、凝固物、沈澱
の生成等著しく調製乳の品質を低下させる。従来知られ
ている抗アレルギー性調製乳においては、このような過
酷な条件下での取扱いについて一切考慮されておらず、
その改善についても何ら報告されていない。

【０００９】一方、乳蛋白質を酵素分解して低抗原性の
分解物を製造する方法については、従来種々の方法が開
示されている。例えば、乳清蛋白質をバシラス・サチリ
ス(Bacillus subtilus) 由来のエンド型プロテアーゼと
トリプシン、キモトリプシンの酵素で加水分解し、抗原
残存活性が１０^-4以下であるオリゴペプチドを製造する
方法（特開平４−２４８９５９号公報）、乳清蛋白質を
熱変性させながら耐熱性の酵素で分解し、抗原残存活性
が１０^-4以下であるオリゴペプチドを製造する方法（特
開平４−１１２７５３号公報）等が開示されている。し
かしながら、これらの方法では、ペプチドの抗原性、風
味等が言及されているのみであり、該ペプチドを用いて
製造した調製乳の乳化状態及び熱安定性については何等
記載されていない。

【００１０】又、α−ラクトアルブミン含量を低減した
乳清蛋白質を酵素分解することにより、乳化性の良い低
抗原性のペプチドを製造する方法（特開平４−３２０６
５０号公報）も知られているが、この方法ではα−ラク
トアルブミンを低減する操作が繁雑であり、更に、酵素
の種類が乳化及び熱安定性に及ぼす影響及び該ペプチド
を利用した調製乳の乳化安定性についても何ら記載され
ていない。

【００１１】低抗原性の蛋白質分解物を用いて低アレル
ギ−性食品を製造する方法に関しても種々の方法が知ら
れている。例えば、牛乳を強い蛋白分解作用を持つ酵素
を使用して分解し、パシイブ・キュタネアス・アナフイ
ラキシス(Passive cutaneousanaphylaxis)反応を陰性な
らしめることを特徴とする液状乳製品及び粉乳の製造方
法（特公昭４５−３１９１２号公報）、乳清蛋白質の部
分加水分解物及び該加水分解物を含有する低アレルギ−
性滋養特別食用乳製品（特公平１−１８２７４５号公
報）が開示されている。しかしながら、これらの発明に
は、それらの製品の乳化安定性及び熱安定性について
は、何ら記載されていない。

【００１２】本発明者らは、先に抗原性の低いオリゴペ
プチド及びその製造法（特開平４−２４８９５９号公
報）及び抗アレルギー性調製乳（特開平４−３６５４４
４号公報）を発明して特許出願した。

【００１３】

【発明が解決しようとする課題】前記従来技術におい
て、抗原性が低く、食餌アレルギーの予防及び治療に有
効であり、風味及び栄養学的に優れた抗原残存活性が１
０^-4以下である抗アレルギー性調製乳の乳化性に関して
は、乳化剤及びその組合わせが主として検討されている
だけであり、窒素源である乳蛋白質分解物の乳化性及び
熱安定性を使用酵素の面から検討して調製乳の乳化性を
改善しようとする試みはなされておらず、抗原残存活性
が１０^-4以下であり、乳化性及び熱安定性のよい調製乳
も知られていない。

【００１４】従って、抗原残存活性が１０^-4以下であ
り、優れた乳化性及び熱安定性を有し、風味の良好な抗
アレルギー性調製乳が待望されていた。

【００１５】本発明者等は、前記の特許出願後、更に乳
化性及び熱安定性に優れた乳蛋白質分解物の製造条件、
及び該分解物を利用した調製乳の乳化性及び熱安定性に
ついて鋭意検討を行った結果、乳清蛋白質をバシラス・
サチリス由来のエンド型プロテアーゼ、トリプシン及び
パパインの３種類の酵素を包含する酵素を用いて加水分
解することにより、抗原残存活性が１０^-4以下であり乳
化性に優れた風味の良い乳清蛋白質分解物が得られるこ
と、及び窒素源として該乳清蛋白質分解物４０〜１００
％、抗カゼイン血清を用いたエライザ抑制試験法により
測定した抗原残存活性が１０^-4以下であるカゼイン加水
分解物６０〜０％を配合することにより、乳化性及び熱
安定性に優れた抗アレルギー性調製乳が製造できること
を見出し、本発明を完成した。

【００１６】本発明の目的は、抗原性が低く食餌アレル
ギーの予防及び治療に有効であり乳化性及び熱安定性に
優れた風味の良い乳清蛋白質分解物を製造する方法を提
供することである。

【００１７】本発明の他の目的は、該乳清蛋白質分解物
を使用し、抗原性が低く、食餌アレルギーの予防及び治
療に有効であり、かつ乳化性及び熱安定性に優れた風味
の良い抗アレルギー性調製乳を提供することである。

【００１８】

【課題を解決するための手段】前記課題を解決する本発
明の第１の発明は、少なくとも３０％（重量）の純度の
乳清蛋白質を５％（重量）以上２０％（重量）以下の濃
度で水に溶解し、溶液のｐＨを７．５以上１０．０以下
に調整し、バシラス・サチリス(Bacillus subtilus) 由
来のエンド型プロテアーゼ、トリプシン及びパパインの
３種類の酵素を包含する酵素により加水分解することを
特徴とする乳化性及び熱安定性に優れた乳清蛋白質加水
分解物の製造法、である。

【００１９】前記課題を解決する本発明の第２の発明
は、少なくとも３０％（重量）の純度の乳清蛋白質を５
％（重量）以上２０％（重量）以下の濃度で水に溶解
し、溶液のｐＨを７．５以上１０．０以下に調整し、バ
シラス・サチリス(Bacillus subtilus) 由来のエンド型
プロテアーゼ、トリプシン及びパパインの３種類の酵素
を包含する酵素により加水分解して得られ、抗乳清蛋白
質血清を用いたエライザ(ELISA:Enzyme linked immunos
olbent assay) 抑制試験法により測定した抗原残存活性
が１０^-4以下である乳清蛋白質加水分解物４０〜１００
％（重量）及び少なくとも８０％（重量）の純度のカゼ
インを加水分解して得られ、抗カゼイン血清を用いたエ
ライザ抑制試験法により測定した抗原残存活性（以下カ
ゼインの抗原残存活性と記載する）が１０^-4以下である
カゼイン加水分解物６０〜０％（重量）との混合物から
なる窒素源の蛋白質当量１０〜１５部当たり、脂肪１５
〜４０部、並びに炭水化物７０〜４０部の組成からなる
乳化性及び熱安定性に優れた抗アレルギー性調製乳、で
ある。

【００２０】次に本発明について詳述する。

【００２１】本発明の方法に使用する乳清蛋白質は、市
販品であっても良く、又、ホエーから常法（例えば、ウ
ルトラフィルトレーション、イオン交換法等）により分
離精製した乳清蛋白質濃縮物、乳清蛋白質単離物、又は
これらの乳清蛋白質及びホエー等（例えば、ホエー粉
末、脱塩ホエー粉末等）を混合し、乳清蛋白質の純度を
少なくとも３０％以上に調整した混合物であってもよ
い。乳清蛋白質の純度が３０％未満の場合、乳清蛋白質
分解物中に占める乳糖の割合が高くなり、これを一成分
とした調製乳の乳糖含量が必要以上に高くなり過ぎるた
めに望ましくない。

【００２２】乳清蛋白質を５％以上２０％以下、望まし
くは１０％以上１５％の濃度で水又は精製水に溶解し、
溶液のｐＨを７．５以上１０．０以下に調整する。溶解
濃度が５％未満の場合、製造上の効率が悪く、２０％を
超える場合は、分解効率の低下、加熱処理時の焦付き、
冷却時の粘度上昇等が生じるために望ましくない。又、
本発明で使用する酵素の至適ｐＨは中性から弱アルカリ
性にあるために、分解前のｐＨは７．５以上１０．０以
下に調整するのが望ましい。さらに分解前処理工程とし
て、ｐＨ調整前若しくは後、又はその両方で加熱処理、
イオン交換処理等を適宜実施することもできる。

【００２３】ｐＨ調整後、バシラス・サチリス(Bacillu
s subtilus) 由来のエンド型プロテアーゼ、トリプシン
及びパパインの３種類の酵素を包含する酵素の組合わせ
により、乳清蛋白質の抗原残存活性を１０^-4以下に酵素
分解する。酵素は食品衛生上無害な市販品であればよ
く、バシラス・サチリス(Bacillus subtilus) 由来のエ
ンド型プロテアーゼとしてはプロテアーゼＮアマノ（天
野製薬社製）、ビオプラーゼ（長瀬産業社製）、ニュー
トラーゼ（ノボノルディスク社製）等を例示することが
でき、トリプシンとしてはＰＴＮ６．０Ｓ（ノボノルデ
ィスク社製）、パパインとしてはパパインＷ−４０（天
野製薬製）、精製パパイン（アサヒビール社製）等を例
示することができる。

【００２４】本発明における乳清蛋白質あたりの酵素の
添加量は活性単位により規定され、トリプシンはＵＳＰ
単位（アメリカ薬局法に基づく単位。ザ・ユナイテッド
・ステーツ・ファーマコピア・ザ・ナショナル・フォー
ミュラリー［The United States Pharmaccopeia The Na
tional Formulary) 、第３０７ページ及び第１４３１ペ
ージ、ユナイテッド・ステーツ・ファーマコピアル・コ
ンベンション・インコーポレーテッド(United States P
harmacopeial Convention,Inc.) 、１９９０年］によ
り、１，０００〜３０，０００ＵＳＰ単位、望ましくは
２，０００〜２０，０００ＵＳＰ単位であり、バシラス
・サチリス由来のエンドペプチダーゼについては、ＰＵ
Ｎ単位［ミルクカゼイン（例えばハマーシュタイン(Hem
mersten)。メルク社製）に酵素を作用させた場合に、３
０℃で１分間に１μｇのチロシンに相当するアリルアミ
ン酸のフォリン試薬での呈色反応を示す酵素活性度が１
単位として規定される］により、２５０〜３，０００Ｐ
ＵＮ単位、望ましくは５００〜２，０００ＰＵＮ単位で
あり、パパインについては、５００〜６，０００ＰＵＮ
単位、望ましくは１，０００〜５，０００ＰＵＮ単位で
ある。これら３種類の酵素が所定量添加されていれば、
これら以外のエンド又はエキソ型のプロテアーゼを３０
０ＰＵＮ単位以下、望ましくは２００ＰＵＮ単位以下、
の範囲で更に添加することもできる。

【００２５】前記乳清蛋白質溶液に、乳清蛋白質の量に
より所定量の酵素を添加し、前記酵素の至適温度である
３０〜６０℃、望ましくは４０〜５５℃、の温度で２〜
２４時間、望ましくは５〜１２時間、加水分解する。前
記酵素は同時、又は適宜の間隔で添加することもでき、
固定化酵素を使用することもできる。又、酵素の至適ｐ
Ｈを維持するため、分解中に溶液のｐＨを適宜調整する
こともできる。

【００２６】この分解物を調製乳の原料として使用する
場合、分解液のｐＨは中性付近であることが望ましい。
従って、分解後の溶液のｐＨが７．０±０．５の範囲に
あればそのまま、この範囲外であれば適宜７．０±０．
５に調整する。

【００２７】バッチ処理により分解した場合には常法に
より分解液を加熱し、酵素を失活させる。加熱温度と保
持時間は使用した酵素の熱安定性を配慮し、十分に失活
できる条件を適宜設定することができる。加熱処理後、
常法により冷却し、そのまま、又は必要に応じて濃縮
し、乾燥し、粉末製品を得ることもできる。このように
して得られた乳清蛋白質分解物は、優れた乳化性及び熱
安定性を有し、抗原残存活性は１０^-4以下である。

【００２８】次に本発明の第２の発明である抗アレルギ
ー性調製乳の製造について記載する。本発明の調製乳に
使用するカゼイン分解物の原料カゼインとしては、純度
が少なくとも８０％であり、常法により分離された乳酸
カゼイン、塩酸カゼイン等の酸カゼイン、ナトリウム・
カゼイネイト、カリウム・カゼイネイト等のカゼイネイ
ト、又はこれらの任意の混合物を使用することができ
る。原料カゼインを５％以上１５％以下、望ましくは１
０％以上１３％以下、の濃度で水に分散し、水酸化ナト
リウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム等の溶解塩を添
加し、溶液のｐＨを６．６以上１０以下に調整して溶解
する。濃度が５％未満の場合は製造上の効率が悪く、
又、１５％を超える場合には粘度が上昇して製造が困難
となるために、それぞれ望ましくない。

【００２９】溶液のｐＨが６．６未満では酸カゼインを
溶解することが困難であり、ｐＨが１０．０を超えるほ
ど溶解塩を添加した場合は、カゼイン分解物のミネラル
量が過剰となるため、それぞれ望ましくない。

【００３０】使用する酵素は至適ｐＨが中性からアルカ
リ性であり、食品衛生上無害な市販品であり、パンクレ
アチン、トリプシン、キモトリプシン等の動物由来の酵
素、パパイン、ブロメライン等の植物由来の酵素、細
菌、黴等の微生物由来の酵素、を例示し得る。又、風味
改良の目的で乳酸菌菌体又は菌体抽出物を添加すること
もできる。

【００３１】前記カゼイン溶液のｐＨを調整し、カゼイ
ン溶液のカゼイン量により所定量の酵素を添加し、前記
酵素の至適温度である３０〜６０℃、望ましくは４０〜
５５℃、の温度で２〜２４時間、望ましくは５〜１２時
間加水分解する。添加する酵素の種類、組合わせ及び活
性単位は、抗原残存活性が１０^-4以下の範囲で適宜決定
することができる。前記酵素は同時、又は適宜の間隔で
添加することもでき、又、固定化酵素を使用することも
できる。

【００３２】次いで、バッチ処理により分解した場合に
は常法により加熱処理又は限外濾過し、酵素を失活又は
除去する。加熱温度と保持時間は使用した酵素の熱安定
性を配慮し、十分に失活できる条件を適宜設定すること
ができる。加熱処理後、常法により冷却し、セライト濾
過、精密濾過、限外濾過、遠心分離等の工程により沈殿
を除去し、さらに必要に応じて樹脂吸着、活性炭濾過等
の工程で精製することもできる。このようにして得られ
た抗原残存活性が１０^-4以下のカゼイン分解物はそのま
ま、又は濃縮し、乾燥し、本発明の抗アレルギー性調製
乳の原料とすることができる。

【００３３】抗アレルギー性調製乳は、液状、粉状のい
ずれでも良いが、特に望ましい粉末製品の製造法の態様
を例示すれば次のとおりである。

【００３４】前記のようにして製造した乳清蛋白質分解
物とカゼイン分解物との比率（乳清蛋白質分解物／カゼ
イン分解物）が１００／０〜４０／６０であって、最終
製品の全固形分中に占める蛋白質当量が１０〜１５％の
割合にそれぞれの加水分解物を計量し、水に５〜１５％
の濃度で溶解し、所定量のミネラル類を加えて４０〜６
５℃に加熱し、更に蛋白質当量１０〜１５部当り脂肪を
１５〜４０部、デキストリン及び乳糖を主体とする糖類
４０〜７０部、及び所定量のビタミン類を添加して混合
し、高圧均質機により乳化し、常法により加熱殺菌し、
濃縮し、噴霧乾燥し、抗アレルギー性調製粉乳を得るこ
とができる。

【００３５】液状の抗アレルギー性調製乳についても、
粉末製品と同様に製造し得る。ただし最終製品の濃度が
５〜４０％の液状物となるため、腐敗防止の点から１２
０℃以上、望ましくは１３０℃以上、の温度で加熱殺菌
を行う必要がある。

【００３６】以上のようにして得られた本発明の抗アレ
ルギー性調製乳は、後述する試験から明らかなように、
乳化性と熱安定性に優れ、風味が良好であり、抗原性が
低下しているためにアレルギーの予防及び治療に有効で
あり、更に、アミノ酸バランス、蛋白質効率においても
優れた性質を有している。

【００３７】次に試験例を示して本発明を詳述する。 試験例１ この試験は、抗原性が１０^-4以下であり、乳化性、熱安
定性に優れた乳清蛋白質分解物を得るための酵素の組合
わせを調べるために行なった。

【００３８】（１）試料の調製 市販の乳清蛋白質濃縮物（以下ＷＰＣと記載することが
ある。ミライ社製）を５％の濃度で水に溶解し、水酸化
ナトリウムを添加して溶液のｐＨを９．０に調整し、の
ち蛋白質１ｇ当たり５，０００単位の酵素を添加し、５
０℃で５時間分解し、分解後にｐＨを７．０に調整し、
次いで８５℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、冷却
して試料とした。

【００３９】添加する酵素が１種類の場合は該酵素を
５，０００単位、２種類の場合はそれぞれ２，５００単
位、３種類の場合はそれぞれ１，６６７単位とした。
又、酵素としては、パパイン（天野製薬社製）、ブロメ
ライン（天野製薬社製）、プロテアーゼＮ［バシラス・
サチリス（Bacillus subtilis)由来。天野製薬社製］、
プロテアーゼＡ［アスペルギルス・オリゼ（Aspergillu
s oryzae）由来。天野製薬社製］、ビオプラーゼ［バシ
ラス・サチリス（Bacillus subtilis)由来。長瀬産業社
製］、トリプシン（ノボ社製）、アルカラーゼ［バシラ
ス・リチェニホルミス（Bacillus licheniformis）由
来。ノボ社製］、アクチナーゼ［ストレプトマイセス・
グリセウス（Streptomyces griseus）由来。科研ファル
マ社製］、ＰＤ酵素［ペニシリウム・デュポンチ（Peni
cillium duponti)由来。盛進製薬社製］を使用した。

【００４０】（２）試験方法 １）沈殿生成量の測定 試料を１，０００Ｇで１０分間遠心し、生じる沈殿量
（容量／容量）を測定した。

【００４１】２）熱安定性試験 試料を２％濃度に希釈して試験管に分注し、オートクレ
ーブを使用して１２０℃で１０分間処理し、１，０００
Ｇで１０分間遠心し、生じる沈殿量（容量／容量）を測
定した。

【００４２】３）抗原残存活性の測定 エライザ試験法（日本小児アレルギー学会誌、第１巻、
第３６ページ、１９８７年）により次のようにして測定
した。９６穴プレート（ヌンク社製）に乳清蛋白質をコ
ーティングし、洗浄し、ウサギ抗乳清蛋白質血清と試料
の混合液をプレートの穴に供給して反応させ、洗浄後、
アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体
（ツァイメド・ラボラトリー社製）を反応させ、のち洗
浄し、ｐ−ニトロフェニルリン酸ナトリウムを添加し、
３０分後に５規定水酸化ナトリウムを添加して反応を停
止させ、反応生成物をマイクロプレートリーダーで測定
した。

【００４３】４）乳化性試験 試料１，０００ｍｌに植物脂肪（ヤシ油、パーム油の混
合物。太陽油脂社製）１００ｇを添加し、均質バルブを
通過させるホモジナイザーを用いて１２０ｋｇｆ／ｃｍ
² の圧力で乳化し、得られた乳化液中の脂肪球の直径を
顕微鏡で測定して乳化性の指標とした。更に、乳化液を
１００℃で瞬間加熱し、のち脂肪層分離の有無を肉眼で
観察し、乳化の安定性を試験した。

【００４４】（３）試験結果 この試験の結果は表１に示すとおりである。表１から明
らかなように、加熱失活時に沈殿を生成せず、抗原性が
１０^-4以下であり、熱安定性、乳化性に優れた乳清蛋白
質分解物を得るための酵素の組合わせは、トリプシン、
パパイン及びバシラス・サチリス由来のエンド型プロテ
アーゼ（ビオプラーゼ及びプロテアーゼＮ）の３種の酵
素が必須であることが判明した。又、表１には記載して
いないが、この試験ではトリプシン、パパイン及びバシ
ラス・サチリス由来のエンド型プロテアーゼの組合わせ
以外の酵素の組合わせでは、前記全ての条件を満たすこ
とができなかった。尚、その他の酵素の組合わせについ
ても同様に試験を行ったが、前記全ての条件を満たす酵
素の組合わせは認められなかった。

【００４５】

【表１】 試験例２ この試験は試験例１で決定した酵素の組合わせにおける
酵素の量を調べるために行なった。

【００４６】（１）試料の調製 試験例１と同一の方法によりＷＰＣを溶解し、トリプシ
ン、パパイン及びビオプラーゼ［バシラス・サチリス
（Bacillus subtilis)由来］の添加量を表２に示すとお
りに変更して添加し、試験例１と同一の方法により分解
物を製造して試料とした。

【００４７】（２）試験方法 試験例１と同一の方法により、沈殿生成量、熱安定性、
抗原残存活性及び乳化性を試験した。

【００４８】（３）試験結果 この試験の結果は表２に示すとおりである。表２から明
らかなように、加熱失活時に沈殿を生成せず、抗原性が
１０^-4以下であり、熱安定性、乳化性に優れた乳清蛋白
質分解物を得るためのトリプシン、パパイン及びビオプ
ラーゼの酵素量の範囲は、蛋白質１ｇ当たりの添加下限
量は、パパインが１，０００単位であり、かつトリプシ
ンが２，０００単位の場合、ビオプラーゼが２５０単位
以上、望ましくは５００単位以上、ビオプラーゼが５０
０単位であり、かつトリプシンが２，０００単位の場
合、パパインが５００単位以上、望ましくは１，０００
単位以上、ビオプラーゼが５００単位であり、かつパパ
インが１，０００単位の場合、トリプシンが１，０００
単位以上、望ましくは２，０００単位以上、であること
が判明した。

【００４９】又、蛋白質１ｇ当たりの添加上限量は、パ
パインが５，０００単位であり、かつトリプシンが２
０，０００単位の場合、ビオプラーゼが３，０００単位
以下、望ましくは２，０００単位以下、ビオプラーゼが
２，０００単位であり、かつトリプシンが２０，０００
単位の場合、パパインが６，０００単位以下、望ましく
は５，０００単位以下、ビオプラーゼが２，０００単位
であり、かつパパインが５，０００単位の場合、トリプ
シンが３０，０００単位以下、望ましくは２０，０００
単位以下、であることが判明した。

【００５０】従って、本発明の方法においては、乳清蛋
白質１ｇ当たりトリプシンが１，０００単位以上３０，
０００単位以下、望ましくは２，０００単位以上２０，
０００単位以下、パパインが５００単位以上６，０００
単位以下、望ましくは１，０００単位以上５，０００単
位以下、バシラス・サチリス由来のエンド型プロテアー
ゼが２５０単位以上３，０００単位以下、望ましくは５
００単位以上２，０００単位以下の範囲で添加すれば良
いことが判明した。

【００５１】

【表２】 試験例３ この試験は試験例１及び試験例２で決定した酵素の組合
わせ及び量に加えて、これら以外の酵素を添加する場合
の酵素の添加量を調べるために行なった。

【００５２】（１）試料の調製 試験例１と同一の方法によりＷＰＣを溶解し、トリプシ
ン（ノボ社製）２０，０００単位、パパイン（天野製薬
製）５，０００単位、ビオプラーゼ（長瀬産業社製）
２，０００単位に添加し、更にプロテアーゼＡ［アスペ
ルギルス・オリゼ（Aspergillus oryzae）由来。天野製
薬製］、ブロメライン（天野製薬製）を添加し、５０℃
で５時間分解し、次いで８５℃で１０分間加熱して酵素
を失活させ、のち冷却して試料とした。

【００５３】（２）試験方法 試験例１と同一の方法により、沈殿生成量、熱安定性、
抗原残存活性、及び乳化性を試験した。

【００５４】（３）試験結果 この試験の結果は表３に示すとおりである。表３から明
らかなように、トリプシン、パパイン及びビオプラーゼ
の所定量に加えて、それ以外の酵素を添加する場合、該
酵素の添加量を３００単位以下、望ましくは２００単位
以下、に調整すれば、熱安定性、乳化性が維持できるこ
とが明らかとなった。尚、その他の酵素についても同様
に試験を行ったが、ほぼ同様な結果が得られた。

【００５５】次に実施例を記載して本発明を更に詳述す
るが、本発明は以下の実施例により限定されるものでは
ない。

【００５６】

【実施例】

実施例１ 市販のＷＰＣ（蛋白質含量７６％。ミライ社製）１ｋｇ
を９ｋｇの精製水に溶解し、プレート型殺菌装置で７５
℃で１５秒間殺菌し、のち水酸化ナトリウムを添加して
溶液のｐＨを９．０に調整し、蛋白質１ｇ当たりビオプ
ラーゼ（長瀬産業社製）５００ＰＵＮ単位、トリプシン
（ノボ社製）５，０００ＵＳＰ単位及びパパイン（天野
製薬社製）１，０００ＰＵＮ単位の割合で添加し、５０
℃で５時間分解した。分解終了後の分解液のｐＨが７．
０であったので、そのまま９０℃で２０分間加熱して酵
素を失活させた。次いで常法により濃縮し、乾燥し、粉
末状の乳清蛋白質分解物約１ｋｇ得た。

【００５７】得られた乳清蛋白質分解物の抗原残存活性
を試験例１と同一の方法により試験した結果、１０^-4で
あり、熱安定性及び乳化性ともに良好であった。

【００５８】実施例２ 市販のＷＰＣ（蛋白質含量８５％。デンマークプロテイ
ン社製）３ｋｇを１７ｋｇの精製水に溶解し、プレート
型殺菌装置で７５℃で１５秒間殺菌し、のち水酸化カリ
ウムを添加して溶液のｐＨを８．０に調整し、蛋白質１
ｇ当たりビオプラーゼ（長瀬産業社製）１，０００ＰＵ
Ｎ単位、トリプシン（ノボ社製）１０，０００ＵＳＰ単
位、パパイン（天野製薬社製）２，０００ＰＵＮ単位及
びプロテアーゼＡアマノ（天野製薬社製）２００ＰＵＮ
単位の割合で添加し、５０℃で１２時間分解した。分解
後の分解液のｐＨが６．４であったので、水酸化ナトリ
ウムを添加してｐＨを７．３に調整し、のちプレート型
殺菌装置を用いて８５℃で５分間、１３０℃で２秒間加
熱して酵素を失活させ、次いで常法により濃縮し、乾燥
し、粉末状の乳清蛋白質分解物約３ｋｇ得た。

【００５９】得られた乳清蛋白質分解物の抗原残存活性
を試験例１と同一の方法により試験した結果、１０^-5で
あり、熱安定性及び乳化性とも良好であった。

【００６０】実施例３ 市販のＷＰＣ（蛋白質含量７６％。ミライ社製）１．５
ｋｇを８．５ｋｇの精製水に溶解し、カリウム型陽イオ
ン交換樹脂（ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ。三菱化成社製）
１ｌに通液し、凍結乾燥し、イオン交換ＷＰＣ粉末約
１．４ｋｇを調製した。得られたイオン交換ＷＰＣ粉末
１ｋｇ及び脱塩ホエー粉末（蛋白質含量１４％。ドモ社
製）１ｋｇを精製水１３ｋｇに溶解し、８０℃で１０分
間殺菌し、のち炭酸カリウムを添加してｐＨを７．５に
調整し、蛋白質１ｇ当たりプロテアーゼＮアマノ（天野
製薬社製）５００ＰＵＮ単位の割合で添加し、４５℃で
１時間分解し、次いでトリプシン（ノボ社製）１０，０
００ＵＳＰ単位を添加し、更に２時間分解した。得られ
た分解液のｐＨが６．５であったので、水酸化カリウム
を添加してｐＨを７．５に調整し、次いでパパイン（天
野製薬社製）４，０００ＰＵＮ単位を添加し、更に５５
℃で３時間分解した。分解後の分解液のｐＨが６．８で
あったので、ｐＨを調整せずに、プレート型殺菌装置を
用いて８５℃で５分間、１３０℃で２秒間加熱し、酵素
を失活させた。次いで常法により濃縮し、液状の乳清蛋
白質分解物約１５ｋｇ得た。

【００６１】得られた乳清蛋白質分解物の抗原残存活性
を試験例１と同一の方法により試験した結果、１０^-5で
あり、熱安定性及び乳化性とも良好であった。

【００６２】実施例４ 市販の乳酸カゼイン（純度８５％。ニュージーランドデ
イリーボード製）１ｋｇを１９ｋｇの精製水に分散し、
水酸化カリウムを添加してｐＨを７．０に調整し、８０
℃で１０分間加熱して完全に溶解した。溶液の温度を５
０℃に冷却し、更に水酸化ナトリウムを添加してｐＨを
１０．０に調整し、蛋白質１ｇ当たりプロテアーゼＮア
マノ（天野製薬社製）１，５００ＰＵＮ単位、ビオプラ
ーゼ（長瀬産業社製）５００ＰＵＮ単位及びトリプシン
（ノボ社製）３，０００ＵＳＰ単位の割合で添加し、５
０℃で１２時間分解し、のち８０℃で３０分間加熱して
酵素を失活させた。次いでハイフロスーパーセル（マン
ビル社製）を用いてセライト濾過して沈殿を除去し、常
法により濃縮し、乾燥し、粉末状のカゼイン分解物約８
００ｇ得た。得られたカゼイン分解物の抗原残存活性を
試験例１と同一の方法により試験した結果、１０^-5であ
った。

【００６３】得られたカゼイン分解物０．４８ｋｇと、
実施例１と同一の方法で得られた乳清蛋白質分解物１．
２ｋｇとを１０ｋｇの精製水に溶解し、２５０ｇの精製
水に溶解した所定量のミネラル類を添加し、６０℃に加
熱して植物性脂肪（太陽油脂社製）２．５ｋｇを添加
し、更に２０％の濃度で水に溶解したマルツデキストリ
ン（昭和産業社製）１．０ｋｇと乳糖（ドモ社製）４．
２ｋｇとの混合液を添加し、次いで所定量のビタミン類
を混合し、この混合液を高圧均質機ーで乳化し、常法に
より殺菌し、濃縮し、噴霧乾燥し、粉末状の抗アレルギ
ー性調製乳約９ｋｇ得た。

【００６４】得られた抗アレルギー性調製乳の抗原残存
活性を試験例１と同一の方法により試験した結果、１０
^-5であり、熱安定性及び乳化性とも良好であり、蛋白質
当量に対する乳清蛋白質分解物の割合は７０％、カゼイ
ン分解物の割合は３０％であり、常法により測定した一
般成分組成は次のとおりであった。

【００６５】 蛋白質 １４．５（％） 脂肪 ２６．５ 炭水化物 ５３．５ （うち乳糖 ４５．０） 灰分 ２．５ 水分 ３．０

【００６６】実施例５ 市販のナトリウム・カゼイネイト（純度９０％。ユニー
レ社製）を１ｋｇを９ｋｇの精製水に溶解し、プレート
型殺菌装置で７５℃で１５秒間加熱し、のち水酸化ナト
リウムを添加して溶液のｐＨを８．５に調整し、蛋白質
１ｇ当たりプロテアーゼＮアマノ（天野製薬社製）２，
０００ＰＵＮ単位、トリプシン（ノボ社製）５，０００
ＵＳＰ単位及び乳酸菌破砕物（森永乳業社製）５ｍｇの
割合で添加し、５０℃で１２時間分解し、４℃に冷却
し、分画分子量３，０００の限外濾過膜（旭化成社製）
で限外濾過し、透過液をプレート型殺菌装置を用いて８
５℃で５分間、１３０℃で２秒間加熱し、のち常法によ
り濃縮し、乾燥し、粉末状のカゼイン分解物約７００ｇ
得た。得られたカゼイン分解物の抗原残存活性につい
て、抗乳清蛋白質血清を抗カゼイン血清に変更したこと
を除き、試験例１と同一の方法により試験した結果、１
０^-6であった。

【００６７】得られたカゼイン分解物０．５ｋｇと、実
施例２と同一の方法で得られた乳清蛋白質分解物１．０
ｋｇとを５０ｋｇの精製水に溶解し、１ｋｇの精製水に
溶解した所定量のミネラル類を添加し、６０℃に加熱し
て植物性脂肪（太陽油脂社製）２．５ｋｇを添加し、マ
ルツデキストリン（昭和産業社製）０．５ｋｇと乳糖
（ドモ社製）４．５ｋｇとを精製水５０ｋｇに溶解した
混合液を添加し、次いで所定量のビタミン類を混合し、
この混合液を高圧均質機で乳化し、プレート殺菌装置で
１４０℃で３秒間殺菌し、２００ｍｌずつ無菌的に充填
し、液状の抗アレルギー性調製乳５００個を得た。

【００６８】得られた抗アレルギー性調製乳の抗原残存
活性を試験例１と同一の方法により試験した結果、１０
^-5.5であり、熱安定性及び乳化性とも良好であり、蛋白
質当量に対する乳清蛋白質分解物の割合は６５％、カゼ
イン分解物の割合は３５％であり、常法により測定した
一般成分組成は次のとおりであった。

【００６９】 蛋白質 １．０５（％） 脂肪 ２．５ 炭水化物 ４．７ （うち乳糖 ４．０） 灰分 ０．３ 水分 ８２．０

【００７０】実施例６ 市販の乳酸カゼイン（純度８５％。ニュージーランドデ
イリーボード製）を１ｋｇを９ｋｇの精製水に分散し、
水酸化ナトリウムを添加してｐＨを７．０に調整し、８
０℃で１０分間加熱して完全に溶解した。溶液の温度を
５０℃に冷却し、蛋白質１ｇ当たりパンクレアチン（天
野製薬社製）３，０００ＰＵＮ単位、プロテアーゼＡア
マノ（天野製薬社製）１００ＰＵＮ単位、乳酸菌破砕物
（森永乳業社製）５ｍｇの割合で添加し、５０℃で２０
時間分解し、のち９５℃で１０分間加熱して酵素を失活
させた。次いで４℃に冷却し、活性炭（商品名「白
鷺」。武田薬品工業社製）５０ｇを添加して１２時間静
置し、スタンダードスーパーセル（マンビル社製）を用
いてセライト濾過し、沈殿及び活性炭を除去し、常法に
より濃縮し、乾燥し粉末状のカゼイン分解物約７００ｇ
を得た。得られたカゼイン分解物の抗原残存活性につい
て、抗乳清蛋白質血清を抗カゼイン血清に変更したこと
を除き、試験例１と同一の方法により試験した結果、１
０^-4であった。

【００７１】得られたカゼイン分解物０．６５ｋｇと、
実施例１と同一の方法で得られた乳清蛋白質分解物１．
０ｋｇとを２０ｋｇの精製水に溶解し、１ｋｇの精製水
に溶解した所定量のミネラル類を添加し、６０℃に加熱
して植物性脂肪（太陽油脂社製）２．５ｋｇを添加し、
さらに２０％の濃度で溶解したマルツデキストリン（昭
和産業社製）１．０ｋｇと乳糖（ドモ社製）４．２ｋｇ
との混合液を添加し、次いで所定量のビタミン類を混合
し、この混合液を高圧均質機で乳化し、常法により殺菌
し、濃縮し、噴霧乾燥し、粉末状の抗アレルギー性調製
乳を約９ｋｇ得た。

【００７２】得られた抗アレルギー性調製乳の抗原残存
活性を試験例１と同一の方法により試験した結果、１０
^-4.5であり、熱安定性及び乳化性とも良好であり、蛋白
質当量に対する乳清蛋白質分解物の割合は６０％、カゼ
イン分解物の割合は４０％であり、常法により測定した
一般成分組成は次のとおりであった。

【００７３】 蛋白質 １３．５（％） 脂肪 ２６．５ 炭水化物 ５５．５ （うち乳糖 ４５．０） 灰分 ２．５ 水分 ２．０

【００７４】

【発明の効果】本発明によって奏せられる効果は、次の
とおりである。 １）抗原残存活性が著しく低下された抗アレルギー性調
製乳製造用の乳清蛋白質分解物が得られる。 ２）熱安定性及び乳化性が極めて良好な抗アレルギー性
調製乳製造用の乳清蛋白質分解物が得られる。 ３）抗原残存活性が著しく低下された抗アレルギー性調
製乳が得られる。 ４）熱安定性及び乳化性が極めて良好な抗アレルギー性
調製乳が得られる。

【表３】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ２３Ｊ 3/34 // Ａ６１Ｋ 38/17 ＡＢＦ 38/00 (72)発明者 川口 靖 神奈川県横浜市旭区南希望が丘118 森永 希望が丘寮 (72)発明者 赤染 陽子 神奈川県相模原市相武台２−22−５−504 (72)発明者 越智 浩 神奈川県横浜市旭区南希望が丘118 森永 希望が丘寮 (72)発明者 北川 重文 神奈川県相模原市南台５−19−５ ドーミ ー小田急相模原312

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくとも３０％（重量）の純度の乳清
   蛋白質を５％（重量）以上２０％（重量）以下の濃度で
   水に溶解し、溶液のｐＨを７．５以上１０．０以下に調
   整し、バシラス・サチリス(Bacillus subtilus) 由来の
   エンド型プロテアーゼ、トリプシン及びパパインの３種
   類の酵素を包含する酵素により加水分解することを特徴
   とする抗乳清蛋白質血清を用いたエライザ(ELISA:Enzym
   e linked immunosolbent assay) 抑制試験法により測定
   した抗原残存活性が１０^-4以下であり、乳化性及び熱安
   定性に優れた乳清蛋白質加水分解物の製造法。
2. 【請求項２】 少なくとも３０％（重量）の純度の乳清
   蛋白質を５％（重量）以上２０％（重量）以下の濃度で
   水に溶解し、溶液のｐＨを７．５以上１０．０以下に調
   整し、バシラス・サチリス(Bacillus subtilus) 由来の
   エンド型プロテアーゼ、トリプシン及びパパインの３種
   類の酵素を包含する酵素により加水分解して得られ、抗
   乳清蛋白質血清を用いたエライザ(ELISA:Enzyme linked
   immunosolbent assay) 抑制試験法により測定した抗原
   残存活性が１０^-4以下である乳清蛋白質加水分解物４０
   〜１００％（重量）及び少なくとも８０％（重量）の純
   度のカゼインを加水分解して得られ、抗カゼイン血清を
   用いたエライザ抑制試験法により測定した抗原残存活性
   が１０^-4以下であるカゼイン加水分解物６０〜０％（重
   量）との混合物からなる窒素源の蛋白質１０〜１５部当
   たり、脂肪１５〜４０部、並びに炭水化物７０〜４０部
   の組成からなる乳化性及び熱安定性に優れた抗アレルギ
   ー性調製乳。