JPH07149800A - 新規な可溶性ヒトＦｃ−ガンマーＩＩＩレセプター、それらの製造方法、それらを含む製薬組成物、それらの医薬としての利用及びそれらの診断用途 - Google Patents
新規な可溶性ヒトＦｃ−ガンマーＩＩＩレセプター、それらの製造方法、それらを含む製薬組成物、それらの医薬としての利用及びそれらの診断用途Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 新規な可溶性のヒトＲＦｃγＩＩＩレセプタ
ーを提供すること。 【構成】 下記の配列番号１のアミノ酸配列を有する可
溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩレセプター： （式中、Ｎ末端において、適宜、メチオニンが先行し、
この配列のアナログにおいても同様とする）。
ーを提供すること。 【構成】 下記の配列番号１のアミノ酸配列を有する可
溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩレセプター： （式中、Ｎ末端において、適宜、メチオニンが先行し、
この配列のアナログにおいても同様とする）。
Description
【０００１】本発明は、新規な可溶性ヒトＦｃ−ガンマ
ーＩＩＩレセプター、それらの製造方法、それらを含む
製薬組成物、それらの医薬としての利用及びそれらの診
断用途に関する。
ーＩＩＩレセプター、それらの製造方法、それらを含む
製薬組成物、それらの医薬としての利用及びそれらの診
断用途に関する。
【０００２】ヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃ部
分に対する親和性を有する３つのクラスのＦｃ−ガンマ
ーレセプター（ＦｃγＲ）が記載された。それらは、リ
ガンドに対する親和性、それらの細胞分布及び機能によ
って異なる（J. V. Ravetch等、Annu. Rev. Immunol.,
9, 457, 1991 ）。ＣＤ６４抗原のキャリアーであるク
ラスＩのＦｃ−ガンマーレセプター（ＲＦｃγＩ）は、
単量体ＩｇＧに対する強い親和性を有するレセプターで
ある。ＣＤ３２抗原のキャリアーであるクラスＩＩのＦ
ｃ−ガンマーレセプター（ＲＦｃγＩＩ）及びクラスＩ
ＩＩのＦｃ−ガンマーレセプター（ＲＦｃγＩＩＩ）
（ＣＤ１６抗原のキャリアー）は、免疫複合体中のＩｇ
Ｇに対する弱い親和性を有するレセプターである。
分に対する親和性を有する３つのクラスのＦｃ−ガンマ
ーレセプター（ＦｃγＲ）が記載された。それらは、リ
ガンドに対する親和性、それらの細胞分布及び機能によ
って異なる（J. V. Ravetch等、Annu. Rev. Immunol.,
9, 457, 1991 ）。ＣＤ６４抗原のキャリアーであるク
ラスＩのＦｃ−ガンマーレセプター（ＲＦｃγＩ）は、
単量体ＩｇＧに対する強い親和性を有するレセプターで
ある。ＣＤ３２抗原のキャリアーであるクラスＩＩのＦ
ｃ−ガンマーレセプター（ＲＦｃγＩＩ）及びクラスＩ
ＩＩのＦｃ−ガンマーレセプター（ＲＦｃγＩＩＩ）
（ＣＤ１６抗原のキャリアー）は、免疫複合体中のＩｇ
Ｇに対する弱い親和性を有するレセプターである。
【０００３】異なる構造及び細胞での発現を有するＦｃ
−ガンマーＩＩＩレセプターの２つの型、ＲＦｃガンマ
ーＩＩＩ−１及びＲＦｃガンマーＩＩＩ−２が、それぞ
れ、記載された（J. V. Ravetch 等、 J. Exp. Med., 17
0, 481, 1989）。ＲＦｃγＩＩＩ−１は、グリコシルホ
スファチジルイノシトール（ＧＰＩ）により細胞膜表面
に結合した１本鎖を有するレセプターであり、専ら、免
疫系の最も豊富な細胞型を代表する好中球により発現さ
れている。ＲＦｃγＩＩＩ−１は、複合体化ＩｇＧ１及
びＩｇＧ３に固着するが、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４には固
着しない（T. W. J. Huizinga 等、 J. Immunol., 142,
2359,1989 ）。ＲＦｃγＩＩＩ−１をコードしている遺
伝子の、それぞれＮＡ１及びＮＡ２と呼ばれる２つの対
立遺伝子がクローン化された（P. A. Ory 等、 J. Clin.
Invests., 84, 1688, 1989 ）。ＲＦｃγＩＩＩ−２
は、いわゆるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロフ
ァージ及び単球において、培養下で、発現されている膜
レセプターである（J. C. Edberg等、 J. Immunol., 14
4, 4729, 1990）。
−ガンマーＩＩＩレセプターの２つの型、ＲＦｃガンマ
ーＩＩＩ−１及びＲＦｃガンマーＩＩＩ−２が、それぞ
れ、記載された（J. V. Ravetch 等、 J. Exp. Med., 17
0, 481, 1989）。ＲＦｃγＩＩＩ−１は、グリコシルホ
スファチジルイノシトール（ＧＰＩ）により細胞膜表面
に結合した１本鎖を有するレセプターであり、専ら、免
疫系の最も豊富な細胞型を代表する好中球により発現さ
れている。ＲＦｃγＩＩＩ−１は、複合体化ＩｇＧ１及
びＩｇＧ３に固着するが、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４には固
着しない（T. W. J. Huizinga 等、 J. Immunol., 142,
2359,1989 ）。ＲＦｃγＩＩＩ−１をコードしている遺
伝子の、それぞれＮＡ１及びＮＡ２と呼ばれる２つの対
立遺伝子がクローン化された（P. A. Ory 等、 J. Clin.
Invests., 84, 1688, 1989 ）。ＲＦｃγＩＩＩ−２
は、いわゆるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロフ
ァージ及び単球において、培養下で、発現されている膜
レセプターである（J. C. Edberg等、 J. Immunol., 14
4, 4729, 1990）。
【０００４】Ｆｃ−ガンマーレセプターは、免疫系の反
応の調節において重要な役割を果たす（W. H. Fridman
等、 Immunol. Rev., 125, 49, 1992）。Ｆｃ−ガンマー
レセプターの顕著な特性の１つは、複合体化ＩｇＧに結
合する可溶性型の存在に基づいている。
応の調節において重要な役割を果たす（W. H. Fridman
等、 Immunol. Rev., 125, 49, 1992）。Ｆｃ−ガンマー
レセプターの顕著な特性の１つは、複合体化ＩｇＧに結
合する可溶性型の存在に基づいている。
【０００５】Ｆｃ−ガンマーレセプターは、イン・ビト
ロで、Ｔ細胞培養の上清中に放出され得且つＩｇＧのＦ
ｃ断片に対する特異的親和性を保持しているということ
が示された。これらの可溶性レセプターは、ＩｇＧＢＦ
（免疫グロブリンＧ結合因子）と呼ばれた（W. H. Frid
man 等、 Cell. Immunol., 11, 442, 1974 ）。これらの
可溶性型は又、ヒトの生物学的液体中を循環している。
可溶性ＣＤ１６とも呼ばれるＲＦｃγＩＩＩの可溶性型
は又、末梢血液細胞培養の上清中（W. H. Fridman 等、
Immunol. Rev., 56, 51, 1981 ）並びにヒト血清中（T.
W. J. Huizinga 等、 J. Clin. Invests., 86, 416, 19
90）又は唾液中（C. Teillaud 等、 Journal de Parodon
tologie, 第12巻、 第 1号、 1、 1992 ）にも検出され
る。これらのＲＦＣγＩＩＩレセプターの可溶性型は、
本質的に好中球によって産生される。活性化好中球は、
ＧＰＩ残基による結合したレセプターの蛋白質分解によ
って可溶性ＣＤ１６を放出する（T. W. J. Huizinga
等、 Nature, 333, 667, 1988）。
ロで、Ｔ細胞培養の上清中に放出され得且つＩｇＧのＦ
ｃ断片に対する特異的親和性を保持しているということ
が示された。これらの可溶性レセプターは、ＩｇＧＢＦ
（免疫グロブリンＧ結合因子）と呼ばれた（W. H. Frid
man 等、 Cell. Immunol., 11, 442, 1974 ）。これらの
可溶性型は又、ヒトの生物学的液体中を循環している。
可溶性ＣＤ１６とも呼ばれるＲＦｃγＩＩＩの可溶性型
は又、末梢血液細胞培養の上清中（W. H. Fridman 等、
Immunol. Rev., 56, 51, 1981 ）並びにヒト血清中（T.
W. J. Huizinga 等、 J. Clin. Invests., 86, 416, 19
90）又は唾液中（C. Teillaud 等、 Journal de Parodon
tologie, 第12巻、 第 1号、 1、 1992 ）にも検出され
る。これらのＲＦＣγＩＩＩレセプターの可溶性型は、
本質的に好中球によって産生される。活性化好中球は、
ＧＰＩ残基による結合したレセプターの蛋白質分解によ
って可溶性ＣＤ１６を放出する（T. W. J. Huizinga
等、 Nature, 333, 667, 1988）。
【０００６】ＲＦｃγＩＩＩ−１をコードする遺伝子の
不足している患者において、可溶性ＣＤ１６の量が低下
しており又は未検出のことさえあることが示された（T.
W.J. Huizinga 等、 Blood, 10, 1927, 1990 ）。多発
性骨髄腫を患っている患者は病気の段階に応じて可溶性
ＣＤ１６の量が減少していることも又、認められた（C.
Mathiot等、 J. Clin. Inv., 13, No. 1, 41, 1993）。
不足している患者において、可溶性ＣＤ１６の量が低下
しており又は未検出のことさえあることが示された（T.
W.J. Huizinga 等、 Blood, 10, 1927, 1990 ）。多発
性骨髄腫を患っている患者は病気の段階に応じて可溶性
ＣＤ１６の量が減少していることも又、認められた（C.
Mathiot等、 J. Clin. Inv., 13, No. 1, 41, 1993）。
【０００７】ヒトＲＦｃγＩＩＩレセプターをコードす
るｃＤＮＡのクローンが、G. A. Peltz 等、 Proc. Nat
l. Acad. Sci. USA, 86, 1013, 1989及びD. Simmons等、
Nature, 333, 568, 1988によって単離された。１８８
アミノ酸を有するポリペプチド鎖を含む単一の細胞外ド
メインにより構成されたＲＦｃγＩＩＩレセプターの可
溶性型の調製並びに免疫血小板減少紫斑病の治療におけ
るその利用は、欧州特許出願ＥＰ−Ａ−０３４３９５０
中に記載された。
るｃＤＮＡのクローンが、G. A. Peltz 等、 Proc. Nat
l. Acad. Sci. USA, 86, 1013, 1989及びD. Simmons等、
Nature, 333, 568, 1988によって単離された。１８８
アミノ酸を有するポリペプチド鎖を含む単一の細胞外ド
メインにより構成されたＲＦｃγＩＩＩレセプターの可
溶性型の調製並びに免疫血小板減少紫斑病の治療におけ
るその利用は、欧州特許出願ＥＰ−Ａ−０３４３９５０
中に記載された。
【０００８】本発明は、新規な可溶性のヒトＲＦｃγＩ
ＩＩレセプター（以後、ＲＦｃＩＩＩレセプターと呼
ぶ）に関するが、その予想外の免疫抑制的な生物学的特
性は、特に、自己免疫疾患又は自己免疫症候群、移植物
の拒絶及び悪性リンパ増殖の領域において、医薬として
の利用を可能にする。
ＩＩレセプター（以後、ＲＦｃＩＩＩレセプターと呼
ぶ）に関するが、その予想外の免疫抑制的な生物学的特
性は、特に、自己免疫疾患又は自己免疫症候群、移植物
の拒絶及び悪性リンパ増殖の領域において、医薬として
の利用を可能にする。
【０００９】それ故、本発明の主題は、下記の配列番号
１のアミノ酸配列を有する可溶性のヒトＲＦｃγＩＩＩ
レセプターである：
１のアミノ酸配列を有する可溶性のヒトＲＦｃγＩＩＩ
レセプターである：
【化４】 （式中、Ｎ末端において、適宜、メチオニンが先行し、
この配列のアナログにおいても同様とする）。
この配列のアナログにおいても同様とする）。
【００１０】アナログとは、生成物が、この発明のＲＦ
ｃγＩＩＩレセプターに特徴的なＩｇＧ１及びＩｇＧ３
固着特性を保持する限りは、最後の６アミノ酸が除かれ
た配列を除いては、配列番号１の配列の１８９〜１９４
位のＣ末端部分が、１つ以上のアミノ酸の置換、欠失又
は付加により、改変された配列を含む。
ｃγＩＩＩレセプターに特徴的なＩｇＧ１及びＩｇＧ３
固着特性を保持する限りは、最後の６アミノ酸が除かれ
た配列を除いては、配列番号１の配列の１８９〜１９４
位のＣ末端部分が、１つ以上のアミノ酸の置換、欠失又
は付加により、改変された配列を含む。
【００１１】これらの可溶性ＲＦｃγＩＩＩレセプター
の特性を、公知の方法、例えば、特定のイソタイプのヒ
トＩｇＧ（そのヒトＩｇＧの説明を下記に実験部分中に
与える）を含むアフィニティーカラム上での固定又はＩ
ｇＧから回収した赤血球（ＲＢＣ）とＲＦｃγＩＩＩレ
セプターを発現している細胞との間でのロゼット形成の
阻害（例えば、W. H. Fridman 等、 Meth. Enzymol, 第
116巻、 403、 1986 により記載された方法による）によ
って測定する。この発明のＲＦｃγＩＩＩレセプター
は、ペプチド合成で公知の方法又は遺伝子工学で公知の
方法（この発明のＲＦｃγＩＩＩレセプターをコードす
るＤＮＡ配列の発現ベクターへの挿入、このベクターで
の細胞のトランスホーメーション及び発現した生成物の
単離を含む）による標準蛋白質技術によって調製するこ
とが出来る。
の特性を、公知の方法、例えば、特定のイソタイプのヒ
トＩｇＧ（そのヒトＩｇＧの説明を下記に実験部分中に
与える）を含むアフィニティーカラム上での固定又はＩ
ｇＧから回収した赤血球（ＲＢＣ）とＲＦｃγＩＩＩレ
セプターを発現している細胞との間でのロゼット形成の
阻害（例えば、W. H. Fridman 等、 Meth. Enzymol, 第
116巻、 403、 1986 により記載された方法による）によ
って測定する。この発明のＲＦｃγＩＩＩレセプター
は、ペプチド合成で公知の方法又は遺伝子工学で公知の
方法（この発明のＲＦｃγＩＩＩレセプターをコードす
るＤＮＡ配列の発現ベクターへの挿入、このベクターで
の細胞のトランスホーメーション及び発現した生成物の
単離を含む）による標準蛋白質技術によって調製するこ
とが出来る。
【００１２】この発明の１つの面は、下記の配列番号１
のアミノ酸配列をコードするＤＮＡの宿主細胞内での発
現によって得られる可溶性のヒトＲＦｃγＩＩＩレセプ
ターに関する：
のアミノ酸配列をコードするＤＮＡの宿主細胞内での発
現によって得られる可溶性のヒトＲＦｃγＩＩＩレセプ
ターに関する：
【化５】 （式中、Ｎ末端において、適宜、メチオニンが先行し、
この配列のアナログにおいても同様とする）。
この配列のアナログにおいても同様とする）。
【００１３】ＲＦｃγＩＩＩレセプターが宿主細胞中で
の発現により得られる場合は、これは、公知の遺伝子工
学及び細胞培養法によって達成される。
の発現により得られる場合は、これは、公知の遺伝子工
学及び細胞培養法によって達成される。
【００１４】この発現は、適当なプロモーター配列を先
行させたこの発明のＲＦｃγＩＩＩレセプターをコード
する配列を含む原核生物宿主細胞、例えば大腸菌、又は
真核細胞中で達成することが出来る。
行させたこの発明のＲＦｃγＩＩＩレセプターをコード
する配列を含む原核生物宿主細胞、例えば大腸菌、又は
真核細胞中で達成することが出来る。
【００１５】この発明は、特に、下記式の配列番号１の
アミノ酸配列をコードするＤＮＡの真核宿主細胞内での
発現により得られる可溶性のヒトＲＦｃγＩＩＩレセプ
ターに関する。
アミノ酸配列をコードするＤＮＡの真核宿主細胞内での
発現により得られる可溶性のヒトＲＦｃγＩＩＩレセプ
ターに関する。
【化６】
【００１６】これらの真核宿主細胞は、酵母並びに一層
高等な生物例えば哺乳動物細胞を含む。哺乳動物細胞
は、例えば、マウスＬ細胞等の繊維芽細胞、ＣＨＯ細胞
若しくはＢＨＫ細胞等のハムスター細胞又はサルのＣＯ
Ｓ細胞である。
高等な生物例えば哺乳動物細胞を含む。哺乳動物細胞
は、例えば、マウスＬ細胞等の繊維芽細胞、ＣＨＯ細胞
若しくはＢＨＫ細胞等のハムスター細胞又はサルのＣＯ
Ｓ細胞である。
【００１７】この発明は又、配列番号１のアミノ酸配列
又はそれと類似する配列を有する可溶性ヒトＲＦｃγＩ
ＩＩレセプターをコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ配
列に関係する。この発明は、特に、配列番号１のアミノ
酸配列又はそれに類似する配列を有する可溶性ヒトＲＦ
ｃγＩＩＩレセプターをコードするＤＮＡ配列に関す
る。
又はそれと類似する配列を有する可溶性ヒトＲＦｃγＩ
ＩＩレセプターをコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ配
列に関係する。この発明は、特に、配列番号１のアミノ
酸配列又はそれに類似する配列を有する可溶性ヒトＲＦ
ｃγＩＩＩレセプターをコードするＤＮＡ配列に関す
る。
【００１８】この発明は、特に、本質的に配列番号２の
ヌクレオチド配列により構成されるこの発明のＲＦｃγ
ＩＩＩレセプターをコードするＤＮＡ配列に関する。配
列番号２の配列は、既述のD. Simmons等によりクローン
化が記載され、翻訳の終止コドンを含む配列が有向（di
rected）突然変異誘発法により導入されているｃＤＮＡ
配列から得られる。６７２ヌクレオチドを含む配列番号
２の配列は、ＲＦｃγＩＩＩレセプターのコード領域を
含んでおり、該配列において、演繹されたアミノ酸配列
（以下に与えるが、＋１位から開始する）は１９４アミ
ノ酸を含み且つ１８アミノ酸を有するシグナルペプチド
配列が先行する。
ヌクレオチド配列により構成されるこの発明のＲＦｃγ
ＩＩＩレセプターをコードするＤＮＡ配列に関する。配
列番号２の配列は、既述のD. Simmons等によりクローン
化が記載され、翻訳の終止コドンを含む配列が有向（di
rected）突然変異誘発法により導入されているｃＤＮＡ
配列から得られる。６７２ヌクレオチドを含む配列番号
２の配列は、ＲＦｃγＩＩＩレセプターのコード領域を
含んでおり、該配列において、演繹されたアミノ酸配列
（以下に与えるが、＋１位から開始する）は１９４アミ
ノ酸を含み且つ１８アミノ酸を有するシグナルペプチド
配列が先行する。
【００１９】この発明の可溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩレセ
プターをコードするＤＮＡ配列を含む発現ベクター並び
に上記のベクターの１つでトランスホームした宿主も又
この発明の主題である。この発明は、特に、真核細胞で
ある宿主に関する。
プターをコードするＤＮＡ配列を含む発現ベクター並び
に上記のベクターの１つでトランスホームした宿主も又
この発明の主題である。この発明は、特に、真核細胞で
ある宿主に関する。
【００２０】この発明の他の面は、可溶性ヒトＲＦｃγ
ＩＩＩレセプターの上記のトランスホームした宿主細胞
の１つにおける発現を含む方法及び、特に、宿主細胞が
真核細胞である方法（その例は、後述する）に関する。
ＩＩＩレセプターの上記のトランスホームした宿主細胞
の１つにおける発現を含む方法及び、特に、宿主細胞が
真核細胞である方法（その例は、後述する）に関する。
【００２１】この発明の可溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩレセ
プター又はその免疫原性断片に対するモノクローナル抗
体も又本発明の主題である。これらの抗体は公知の方法
によって製造され、例えば、ＥＬＩＳＡ試験において、
ＲＦｃγＩＩＩレセプターを標準分子として用いて、例
えば、生物学的液体中の可溶性ＦｃγＩＩＩレセプター
の量又はこの発明のＲＦｃγＩＩＩレセプターの投与量
の変化を特徴とする病状の診断に利用することが出来
る。それ故、この発明の主題は又、この発明の１種以上
の抗体を含む診断用組成物でもある。
プター又はその免疫原性断片に対するモノクローナル抗
体も又本発明の主題である。これらの抗体は公知の方法
によって製造され、例えば、ＥＬＩＳＡ試験において、
ＲＦｃγＩＩＩレセプターを標準分子として用いて、例
えば、生物学的液体中の可溶性ＦｃγＩＩＩレセプター
の量又はこの発明のＲＦｃγＩＩＩレセプターの投与量
の変化を特徴とする病状の診断に利用することが出来
る。それ故、この発明の主題は又、この発明の１種以上
の抗体を含む診断用組成物でもある。
【００２２】この発明のＲＦｃγＩＩＩレセプターは、
顕著な免疫抑制性の生物学的特性、特に、抗増殖活性、
免疫グロブリンの産生に対する阻害活性並びに細胞性の
ナチュラルキラー（ＮＫ）型の細胞毒性に対する抵抗活
性（後述の結果に示す）を有する。
顕著な免疫抑制性の生物学的特性、特に、抗増殖活性、
免疫グロブリンの産生に対する阻害活性並びに細胞性の
ナチュラルキラー（ＮＫ）型の細胞毒性に対する抵抗活
性（後述の結果に示す）を有する。
【００２３】これらの特性は、この発明のＲＦｃγＩＩ
Ｉレセプターを、自己免疫疾患、例えば、自己免疫性糖
尿病、リウマチ様多発性関節炎、播種性エリテマトーデ
ス又は多発性硬化症の治療並びに免疫刺激治療（例え
ば、インターロイキン２による治療）から生じる自己免
疫性症候群の治療において有用なものにする。この発明
の生成物は又、悪性のリンパ増殖、特にＢリンパ腫及び
Ｂ骨髄腫の治療或は器官移植後の移植物の拒絶の阻止及
び悪性リンパ増殖の治療においても有用である。
Ｉレセプターを、自己免疫疾患、例えば、自己免疫性糖
尿病、リウマチ様多発性関節炎、播種性エリテマトーデ
ス又は多発性硬化症の治療並びに免疫刺激治療（例え
ば、インターロイキン２による治療）から生じる自己免
疫性症候群の治療において有用なものにする。この発明
の生成物は又、悪性のリンパ増殖、特にＢリンパ腫及び
Ｂ骨髄腫の治療或は器官移植後の移植物の拒絶の阻止及
び悪性リンパ増殖の治療においても有用である。
【００２４】それ故、本発明の主題は、医薬としてのこ
の発明の可溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩレセプターである。
の発明の可溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩレセプターである。
【００２５】この発明は、上記の医薬を活性成分として
含む製薬組成物に及び、特に、細胞増殖、ＮＫ型細胞毒
性又は抗体産生を調節するための製薬組成物に関する。
含む製薬組成物に及び、特に、細胞増殖、ＮＫ型細胞毒
性又は抗体産生を調節するための製薬組成物に関する。
【００２６】この活性成分は、上記の製薬組成物の製造
のために通常の賦形剤に含ませることが出来る。この発
明のこれらの組成物は、非経口、経口又は局所的経路に
より投与することが出来る。下記の実施例は、この発明
を制限することなく説明する。
のために通常の賦形剤に含ませることが出来る。この発
明のこれらの組成物は、非経口、経口又は局所的経路に
より投与することが出来る。下記の実施例は、この発明
を制限することなく説明する。
【００２７】
【実施例】実施例１ ：真核細胞における可溶性ヒトＦｃγＩＩＩレ
セプター（ＲＦｃγＩＩＩ）の産生 ＲＦｃγＩＩＩレセプターを連続的に分泌する真核細胞
を、選択マーカーを有するベクターとＲＦｃγＩＩＩレ
セプターをコードするＤＮＡ配列及び宿主株に適合性の
プロモーターを有する発現ベクターとによるコトランス
フェクションによって得る。これらの生物学的活性を、
単離して均質に精製した生成物について測定する。
セプター（ＲＦｃγＩＩＩ）の産生 ＲＦｃγＩＩＩレセプターを連続的に分泌する真核細胞
を、選択マーカーを有するベクターとＲＦｃγＩＩＩレ
セプターをコードするＤＮＡ配列及び宿主株に適合性の
プロモーターを有する発現ベクターとによるコトランス
フェクションによって得る。これらの生物学的活性を、
単離して均質に精製した生成物について測定する。
【００２８】Ａ − コード配列の構築： ＲＦｃγＩＩＩレセプターをコードするＤＮＡ配列を、
ＰＭＮ中で発現されるＲＦｃγＩＩＩレセプターをコー
ドするｃＤＮＡ（翻訳を終結させるためのＴＡＧコドン
を含む「終止リンカー」と呼ばれるヌクレオチド配列を
導入してある）から得る：D. Simmonsにより記載された
ｐＣＤ１６プラスミッド（既述）は、８９３ｂｐのｃＤ
ＮＡ挿入物を含んでおり、その中には、「終止リンカ
ー」GCGGATCCTAGACTAGTCTAG （配列番号４）が公知の有
向突然変異誘発法により６５２位に導入してある。ｐＣ
Ｄ１６を、連続的に、ＫｐｎＩ制限エンドヌクレアーゼ
により消化し、Ｔ４−ＤＮＡポリメラーゼで処理して突
き出た３’末端を除去し、次いで、ＢａｍＨＩ部位を含
む配列CGCGGATCCGCG（配列番号５）を有するオリゴヌク
レオチドに結合する。得られた断片を、次いで、単一の
ＢａｍＨＩ部位を有するプラスミッド中でクローン化す
る。ＢａｍＨＩ部位の後ろにＴＡＧ終止コドンを創るた
めに、ＳｐｅＩ部位を先ず除去する。ＢａｍＨＩ部位を
制限酵素処理し、次いで、生じた末端を大腸菌のＤＮＡ
ポリメラーゼのクレノー断片を用いて満たす。ＳｐｅＩ
酵素の制限部位を含む「ＳｐｅＩリンカー」CTAGACTAGT
CTAG（配列番号６）配列を挿入する。この配列番号２の
ヌクレオチド配列を有する６７２ｂｐの挿入物が得られ
る。
ＰＭＮ中で発現されるＲＦｃγＩＩＩレセプターをコー
ドするｃＤＮＡ（翻訳を終結させるためのＴＡＧコドン
を含む「終止リンカー」と呼ばれるヌクレオチド配列を
導入してある）から得る：D. Simmonsにより記載された
ｐＣＤ１６プラスミッド（既述）は、８９３ｂｐのｃＤ
ＮＡ挿入物を含んでおり、その中には、「終止リンカ
ー」GCGGATCCTAGACTAGTCTAG （配列番号４）が公知の有
向突然変異誘発法により６５２位に導入してある。ｐＣ
Ｄ１６を、連続的に、ＫｐｎＩ制限エンドヌクレアーゼ
により消化し、Ｔ４−ＤＮＡポリメラーゼで処理して突
き出た３’末端を除去し、次いで、ＢａｍＨＩ部位を含
む配列CGCGGATCCGCG（配列番号５）を有するオリゴヌク
レオチドに結合する。得られた断片を、次いで、単一の
ＢａｍＨＩ部位を有するプラスミッド中でクローン化す
る。ＢａｍＨＩ部位の後ろにＴＡＧ終止コドンを創るた
めに、ＳｐｅＩ部位を先ず除去する。ＢａｍＨＩ部位を
制限酵素処理し、次いで、生じた末端を大腸菌のＤＮＡ
ポリメラーゼのクレノー断片を用いて満たす。ＳｐｅＩ
酵素の制限部位を含む「ＳｐｅＩリンカー」CTAGACTAGT
CTAG（配列番号６）配列を挿入する。この配列番号２の
ヌクレオチド配列を有する６７２ｂｐの挿入物が得られ
る。
【００２９】この挿入物をＣＤＭ８プラスミッド（B. S
eed, Nature, 329, 840, 1987 ）のＢｓｔＩ部位にサブ
クローン化した。Ｘｂａ１制限酵素での消化の後に、単
離した断片を、ｐＫＯ−ｎｅｏプラスミッド（K. Van D
oren等、 J. Virol., 50, 606, 1984）から誘導したｐＫ
Ｃ３プラスミッドのポリリンカー部位に挿入する。その
構造を図１に示す。得られたプラスミッドをｐＫＣ３−
ＲＦｃγＩＩＩと呼ぶ（図１）。
eed, Nature, 329, 840, 1987 ）のＢｓｔＩ部位にサブ
クローン化した。Ｘｂａ１制限酵素での消化の後に、単
離した断片を、ｐＫＯ−ｎｅｏプラスミッド（K. Van D
oren等、 J. Virol., 50, 606, 1984）から誘導したｐＫ
Ｃ３プラスミッドのポリリンカー部位に挿入する。その
構造を図１に示す。得られたプラスミッドをｐＫＣ３−
ＲＦｃγＩＩＩと呼ぶ（図１）。
【００３０】Ｂ − トランスフェクション及びトラン
スホームされた細胞の選択 ｐＫＣ３−ＲＦｃγＩＩＩプラスミッドを、リン酸カル
シウムによる共沈殿法によって、ｐＳＶ２−ｎｅｏプラ
スミッド（K. Van Doren等、 前述）とのコトランスフェ
クションにより、マウスの繊維芽細胞（Ｌ細胞）中に導
入する：直径６０ｍｍのペトリ皿に、１０％ ウシ胎児
血清（ＦＣＳ）（Flow Laboratories ）、１００ＩＵ／
ｍｌ ペニシリン（Gibco BRL ）、１００μｇ／ｍｌ
ストレプトマイシン（Gibco BRL ）、２ｍＭ Ｌ−グル
タミン（Gibco BRL ）を含むＤＭＥＭ培地（Gibco BRL
）中で培養した１０6 のＬ細胞を播種する。７％ＣＯ2
の加熱チャンバー中で３７℃で一晩インキュベートし
た後に、これらの細胞に、１０μｇのｐＫＣ３−ＲＦｃ
γＩＩＩプラスミッドと１００ｎｇのｐＳＶ２−ｎｅｏ
プラスミッドとをコトランスフェクトする。３日間培養
した後に、これらの細胞を、１ｍｇ／ｍｌ Ｇ−４１８
抗生物質（ジェネチシン、Ｇ−４１８硫酸塩、Gibco BR
L ）を含む選択用培地中に置き、次いで、それらを５０
０μｇ／ｍｌのＧ−４１８を含む倍地中に維持する。
スホームされた細胞の選択 ｐＫＣ３−ＲＦｃγＩＩＩプラスミッドを、リン酸カル
シウムによる共沈殿法によって、ｐＳＶ２−ｎｅｏプラ
スミッド（K. Van Doren等、 前述）とのコトランスフェ
クションにより、マウスの繊維芽細胞（Ｌ細胞）中に導
入する：直径６０ｍｍのペトリ皿に、１０％ ウシ胎児
血清（ＦＣＳ）（Flow Laboratories ）、１００ＩＵ／
ｍｌ ペニシリン（Gibco BRL ）、１００μｇ／ｍｌ
ストレプトマイシン（Gibco BRL ）、２ｍＭ Ｌ−グル
タミン（Gibco BRL ）を含むＤＭＥＭ培地（Gibco BRL
）中で培養した１０6 のＬ細胞を播種する。７％ＣＯ2
の加熱チャンバー中で３７℃で一晩インキュベートし
た後に、これらの細胞に、１０μｇのｐＫＣ３−ＲＦｃ
γＩＩＩプラスミッドと１００ｎｇのｐＳＶ２−ｎｅｏ
プラスミッドとをコトランスフェクトする。３日間培養
した後に、これらの細胞を、１ｍｇ／ｍｌ Ｇ−４１８
抗生物質（ジェネチシン、Ｇ−４１８硫酸塩、Gibco BR
L ）を含む選択用培地中に置き、次いで、それらを５０
０μｇ／ｍｌのＧ−４１８を含む倍地中に維持する。
【００３１】選択用倍地中の耐性クローンの全ＲＮＡを
単離し、ドットブロット及びノーザンブロット技術によ
って分析する。ＲＦｃγＩＩＩレセプターの特異的ＲＮ
Ａを、A. P. Feinberg等、 Anal. Biochem 132, 6, 1983
に記載された「ランダムプライマー」法により（アルフ
ァ−32Ｐ）ｄＣＴＰ（３７０ＭＢｑ／ｍｌ）で32Ｐ標識
したｐＫＣ３−ＲＦｃγＩＩＩのＸｂａ１−Ｘｂａ１断
片により構築した特異的プローブを用いて検出する。
単離し、ドットブロット及びノーザンブロット技術によ
って分析する。ＲＦｃγＩＩＩレセプターの特異的ＲＮ
Ａを、A. P. Feinberg等、 Anal. Biochem 132, 6, 1983
に記載された「ランダムプライマー」法により（アルフ
ァ−32Ｐ）ｄＣＴＰ（３７０ＭＢｑ／ｍｌ）で32Ｐ標識
したｐＫＣ３−ＲＦｃγＩＩＩのＸｂａ１−Ｘｂａ１断
片により構築した特異的プローブを用いて検出する。
【００３２】インターロイキン２の存在下で培養したヒ
トリンパ球（ＬＡＫ細胞）のＲＮＡを正の対照として用
い、トランスフェクトしてないＬ細胞を負の対照として
用いる。
トリンパ球（ＬＡＫ細胞）のＲＮＡを正の対照として用
い、トランスフェクトしてないＬ細胞を負の対照として
用いる。
【００３３】図２は、Ｃ４〜Ｃ８と呼ばれる５つの抵抗
性クローンを用いて得られた結果を示している。クロー
ンＣ８（以後、ＩＩＩＣ８と呼ぶ）は、ＲＦｃγＩＩＩ
レセプターをコードするＲＮＡを最も多数含んでおり、
これを以下の研究用に選択する。
性クローンを用いて得られた結果を示している。クロー
ンＣ８（以後、ＩＩＩＣ８と呼ぶ）は、ＲＦｃγＩＩＩ
レセプターをコードするＲＮＡを最も多数含んでおり、
これを以下の研究用に選択する。
【００３４】Ｃ − ＲＦｃγＩＩＩレセプターの産生 ＩＩＩＣ８クローンをAcusyst Junior（Endotronics ）
型のバイオリアクターにて、５％ ＦＣＳを補完したＤ
ＭＥＭ倍地中で培養する。１．１ｍ2 のバイオリアクタ
ーに３×１０8 細胞を播種して、５％ ＦＣＳを含むＤ
ＭＥＭ培地の連続流を１ｍｌ／時の流量で確立する。こ
のブロスを１２〜２２日に採集する。
型のバイオリアクターにて、５％ ＦＣＳを補完したＤ
ＭＥＭ倍地中で培養する。１．１ｍ2 のバイオリアクタ
ーに３×１０8 細胞を播種して、５％ ＦＣＳを含むＤ
ＭＥＭ培地の連続流を１ｍｌ／時の流量で確立する。こ
のブロスを１２〜２２日に採集する。
【００３５】実施例２：ＲＦｃγＩＩＩレセプターの精
製 上記の採集した６０ｍｌのブロスを、１８時間４℃で、
２０ｍＭ トリス−ベース緩衝溶液（ｐＨ７．６）に対
して透析し、次いで、ＢＳＡ−セファロース４Ｂ（Phar
macia ）の０．５ｍｌのカラムを通し及び、H. B. Flei
t 等（Proc. Natl. Acad. Sci. 79, 3275, 1982 ）によ
り記載されたＩｇＧ１ ｋイソタイプの抗ＣＤ１６マウ
ス抗体である３Ｇ８モノクローナル抗体を結合したセフ
ァロース４Ｂ（Pharmacia ）を０．５ｍｌ含み、２０ｍ
Ｍ トリス−ベース緩衝液（ｐＨ７．６）で平衡化され
たカラムにおける４℃での流量１５〜２０ｍｌ／時のク
ロマトグラフィーにかける。溶出物を同じカラムに更に
２回通す。カラムを４０ｍｌの同じ緩衝液で洗い、次い
で、流量３ｍｌ／時で、０．２Ｍ グリシン−ＨＣｌ緩
衝液（ｐＨ２．８）で溶出する。２ｍｌの酸溶出物が得
られるが、それを、２Ｍ トリス−ベース（ｐＨ９）で
中和して以下の分析にかける。
製 上記の採集した６０ｍｌのブロスを、１８時間４℃で、
２０ｍＭ トリス−ベース緩衝溶液（ｐＨ７．６）に対
して透析し、次いで、ＢＳＡ−セファロース４Ｂ（Phar
macia ）の０．５ｍｌのカラムを通し及び、H. B. Flei
t 等（Proc. Natl. Acad. Sci. 79, 3275, 1982 ）によ
り記載されたＩｇＧ１ ｋイソタイプの抗ＣＤ１６マウ
ス抗体である３Ｇ８モノクローナル抗体を結合したセフ
ァロース４Ｂ（Pharmacia ）を０．５ｍｌ含み、２０ｍ
Ｍ トリス−ベース緩衝液（ｐＨ７．６）で平衡化され
たカラムにおける４℃での流量１５〜２０ｍｌ／時のク
ロマトグラフィーにかける。溶出物を同じカラムに更に
２回通す。カラムを４０ｍｌの同じ緩衝液で洗い、次い
で、流量３ｍｌ／時で、０．２Ｍ グリシン−ＨＣｌ緩
衝液（ｐＨ２．８）で溶出する。２ｍｌの酸溶出物が得
られるが、それを、２Ｍ トリス−ベース（ｐＨ９）で
中和して以下の分析にかける。
【００３６】ａ）蛋白質含量 得られた酸溶出物は、Bradfordミクロ分析（Bio-Rad Pr
otein Assay ）により滴定したところ、７２±４５μｇ
の蛋白質を含んでいる。
otein Assay ）により滴定したところ、７２±４５μｇ
の蛋白質を含んでいる。
【００３７】ｂ）ＲＦｃγＩＩＩレセプター含量 ＲＦｃγＩＩＩレセプターを、D. Simmons（既述）によ
り記載されたＩｇＧ２ａイソタイプの抗ＣＤ１６マウス
モノクローナル抗体であってヨウ素１２５で放射性標識
したＢＷ２０９／２モノクローナル抗体を用いて、ニト
ロセルロースフィルター上の直接ブロッティングにより
示す。
り記載されたＩｇＧ２ａイソタイプの抗ＣＤ１６マウス
モノクローナル抗体であってヨウ素１２５で放射性標識
したＢＷ２０９／２モノクローナル抗体を用いて、ニト
ロセルロースフィルター上の直接ブロッティングにより
示す。
【００３８】出発ブロス（Ｄ）、溶出物（ＥＦ）及びア
フィニティーカラムからの酸溶出物（ＥＬ）について同
時に行なった免疫ブロッティングの結果は、アフィニテ
ィークロマトグラフィーのアウトプットが、採集したブ
ロス中に１６〜３０％の初期含量のＲＦｃγＩＩＩレセ
プターが存在するという評価を与える（図３）。
フィニティーカラムからの酸溶出物（ＥＬ）について同
時に行なった免疫ブロッティングの結果は、アフィニテ
ィークロマトグラフィーのアウトプットが、採集したブ
ロス中に１６〜３０％の初期含量のＲＦｃγＩＩＩレセ
プターが存在するという評価を与える（図３）。
【００３９】実施例３：ＲＦｃγＩＩＩレセプターの特
性表示 Ａ − ＩｇＧ固着のイソタイプ特異性 この発明のＲＦｃγＩＩＩレセプターのＩｇＧ固着の特
異性を、ヒトＩｇＧのカラム上のアフィニティークロマ
トグラフィーによって測定する。
性表示 Ａ − ＩｇＧ固着のイソタイプ特異性 この発明のＲＦｃγＩＩＩレセプターのＩｇＧ固着の特
異性を、ヒトＩｇＧのカラム上のアフィニティークロマ
トグラフィーによって測定する。
【００４０】採集して、透析し且つ実施例２で得たＢＳ
Ａ−セファロース４Ｂカラムを通したブロスを、ＩｇＧ
１、ＩｇＧ２−カッパー、ＩｇＧ３−カッパー、ＩｇＧ
４−カッパーのイソタイプの３ｍｇのモノクローナルヒ
トＩｇＧを又はペプシンによりヒトＩｇＧを消化し次い
でプロテインＡ−セファロースＣＬ−４Ｂカラム（Phar
macia ）上で精製することにより調製したポリクローナ
ルＩｇＧのＦ（ａｂ’）2 断片をそれぞれ結合した０．
５ｍｌのセファロース４Ｂを含むカラムにおけるクロマ
トグラフィーにかける。免疫吸着剤の各カラムを２０ｍ
Ｍ トリス−ベース緩衝液（ｐＨ７．６）で洗い、次い
で、０．２Ｍ グリシン−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ２．８）
で溶出する。得られた各酸溶出物をそれぞれ２Ｍ トリ
ス−ベース緩衝液（ｐＨ９）で中和する。
Ａ−セファロース４Ｂカラムを通したブロスを、ＩｇＧ
１、ＩｇＧ２−カッパー、ＩｇＧ３−カッパー、ＩｇＧ
４−カッパーのイソタイプの３ｍｇのモノクローナルヒ
トＩｇＧを又はペプシンによりヒトＩｇＧを消化し次い
でプロテインＡ−セファロースＣＬ−４Ｂカラム（Phar
macia ）上で精製することにより調製したポリクローナ
ルＩｇＧのＦ（ａｂ’）2 断片をそれぞれ結合した０．
５ｍｌのセファロース４Ｂを含むカラムにおけるクロマ
トグラフィーにかける。免疫吸着剤の各カラムを２０ｍ
Ｍ トリス−ベース緩衝液（ｐＨ７．６）で洗い、次い
で、０．２Ｍ グリシン−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ２．８）
で溶出する。得られた各酸溶出物をそれぞれ２Ｍ トリ
ス−ベース緩衝液（ｐＨ９）で中和する。
【００４１】５０μｌの出発材料、各溶出物及び中和し
た対応する各酸溶出物を、それぞれ、実施例２で示した
ように、放射性標識した抗ＣＤ１６ＢＷ２０９／２モノ
クローナル抗体を用いて、直接ブロッティングにより試
験する。
た対応する各酸溶出物を、それぞれ、実施例２で示した
ように、放射性標識した抗ＣＤ１６ＢＷ２０９／２モノ
クローナル抗体を用いて、直接ブロッティングにより試
験する。
【００４２】図４に与えた結果は、固定化ＩｇＧ１及び
ＩｇＧ３の免疫吸着剤に対応する溶出物（ｂ）における
強いスポットを示しているが、他方、ＩｇＧ２、ＩｇＧ
４又はＦ（ａｂ’）2 の免疫吸着剤の溶出物（ｂ）は陰
性であり、溶出物（ａ）は出発材料（Ｓ．ＭＡＴ）のス
ポットより小さい弱いスポットを生じている。これらの
結果は、この発明のＲＦｃγＩＩＩレセプターが不溶化
されたＩｇＧ１及びＩｇＧ３に固着するがＩｇＧ２及び
ＩｇＧ４には有意には固着しないことを示している。
ＩｇＧ３の免疫吸着剤に対応する溶出物（ｂ）における
強いスポットを示しているが、他方、ＩｇＧ２、ＩｇＧ
４又はＦ（ａｂ’）2 の免疫吸着剤の溶出物（ｂ）は陰
性であり、溶出物（ａ）は出発材料（Ｓ．ＭＡＴ）のス
ポットより小さい弱いスポットを生じている。これらの
結果は、この発明のＲＦｃγＩＩＩレセプターが不溶化
されたＩｇＧ１及びＩｇＧ３に固着するがＩｇＧ２及び
ＩｇＧ４には有意には固着しないことを示している。
【００４３】Ｂ − 均質性 上記の精製したＲＦｃγＩＩＩレセプターを、Laemmli
法（Nature, 227, 680, 1970）によって、ミニラブゲル
システム（Mini-Protean II Electrophoresiscell, Bio
-Rad ）中で、１０％ ポリアクリルアミドゲル上での
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動により分析し、その後、オー
トラジオグラフィー又は免疫的検出により表示する。 ａ）ＳＤＳーＰＡＧＥ及びオートラジオグラフィー
法（Nature, 227, 680, 1970）によって、ミニラブゲル
システム（Mini-Protean II Electrophoresiscell, Bio
-Rad ）中で、１０％ ポリアクリルアミドゲル上での
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動により分析し、その後、オー
トラジオグラフィー又は免疫的検出により表示する。 ａ）ＳＤＳーＰＡＧＥ及びオートラジオグラフィー
【００４４】実施例２で得られた免疫ブロッティング陽
性の酸溶出物試料を、ＰＢＳ緩衝液に対して透析し、次
いで、クロラミンＴを用いる方法により放射性ヨウ化ナ
トリウムを用いてヨウ素１２５で放射性標識して用い
る。放射性標識した溶出物を、次いで、適宜、脱グリコ
シル化する：０．１ｍｌの放射性標識した溶出物を、５
０ｍＭ ＥＤＴＡ、１％ トリトンＸ−１００及び１％
２−メルカプトエタノールを含む９倍容の１００ｍＭ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．１）で希釈し、１
００℃に５分間維持し、次いで、１単位のＥＮＤＯ Ｆ
（エンド−β−アセチルグルコサミニダーゼＦ、Boehri
nger Mannheim Biochemica）で、３７℃で１８時間処理
し、次いで、１０％ トリクロロ酢酸で処理する。得ら
れた沈殿を−２０℃アセトンで洗い、１００ｍＭＤＴ
Ｔ、２％ ＳＤＳ、１０％ グリセロール及び０．０１
％ ブロモフェノールブルーを含む８０ｍＭ トリス−
ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ６．８）中で１００℃に加熱する。
性の酸溶出物試料を、ＰＢＳ緩衝液に対して透析し、次
いで、クロラミンＴを用いる方法により放射性ヨウ化ナ
トリウムを用いてヨウ素１２５で放射性標識して用い
る。放射性標識した溶出物を、次いで、適宜、脱グリコ
シル化する：０．１ｍｌの放射性標識した溶出物を、５
０ｍＭ ＥＤＴＡ、１％ トリトンＸ−１００及び１％
２−メルカプトエタノールを含む９倍容の１００ｍＭ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．１）で希釈し、１
００℃に５分間維持し、次いで、１単位のＥＮＤＯ Ｆ
（エンド−β−アセチルグルコサミニダーゼＦ、Boehri
nger Mannheim Biochemica）で、３７℃で１８時間処理
し、次いで、１０％ トリクロロ酢酸で処理する。得ら
れた沈殿を−２０℃アセトンで洗い、１００ｍＭＤＴ
Ｔ、２％ ＳＤＳ、１０％ グリセロール及び０．０１
％ ブロモフェノールブルーを含む８０ｍＭ トリス−
ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ６．８）中で１００℃に加熱する。
【００４５】脱グリコシル化前に放射性標識した試料
（−エンドＦ）は、オートラジオグラフィーにより、見
掛け分子量４８ｋＤａに対応する単一バンドを示すが、
他方、放射性標識してから脱グリコシル化した試料（＋
エンドＦ）は、２６及び３０ｋＤａに２つのバンドを示
す（図５Ａ）。
（−エンドＦ）は、オートラジオグラフィーにより、見
掛け分子量４８ｋＤａに対応する単一バンドを示すが、
他方、放射性標識してから脱グリコシル化した試料（＋
エンドＦ）は、２６及び３０ｋＤａに２つのバンドを示
す（図５Ａ）。
【００４６】ｂ）ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウエスタンブロ
ッティング：実施例２で得られた３０μｌの酸溶出物
を、試料ＳＤＳ緩衝液中で、３分間、沸点まで加熱し、
次いで、周囲温度で４０分間２００ボルトでＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥにかける。ゲルを、１９２ｍＭ グリシン及び２
％ メタノールを含む２５ｍＭトリス−ベース緩衝液
（ｐＨ８．３）で洗い、次いで、トランスファーシステ
ム（Bio-Rad, Mini Trans-Blot Electrophoretic Trans
fer cell）を用いて１時間１００ボルトでニトロセルロ
ース膜（BA-85, 0.45 μm, Schleicher & Schull）上に
トランスファーする。ニトロセルロース膜を、次いで、
４５分間４０℃で１５０ｍＭ ＮａＣｌ及び５％ ＢＳ
Ａを含む１０ｍＭ トリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．
４）（ウエスタン緩衝液、ＷＢと呼ぶ）に浸し、ヨウ素
１２５で標識した抗ＣＤ１６ ＢＷ２０９／２モノクロ
ーナル抗体と１８時間４℃でインキュベートする（ニト
ロセルロース１０ｃｍ2 につき１０Ｓ ｃｐｍ／ｍｌの
濃度）。この膜を、次いで、ＷＢ緩衝液中で２回連続し
て、１回は０．０５％ノニデットＰ４０（Fluka ）を含
むＷＢ緩衝液中で、２回はＷＢ緩衝液中で洗い、次い
で、オートラジオグラフィーのために、−７０℃で一
晩、Kodak X-OMAT Sフィルム（Eastman Kodak ）に露出
させる。
ッティング：実施例２で得られた３０μｌの酸溶出物
を、試料ＳＤＳ緩衝液中で、３分間、沸点まで加熱し、
次いで、周囲温度で４０分間２００ボルトでＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥにかける。ゲルを、１９２ｍＭ グリシン及び２
％ メタノールを含む２５ｍＭトリス−ベース緩衝液
（ｐＨ８．３）で洗い、次いで、トランスファーシステ
ム（Bio-Rad, Mini Trans-Blot Electrophoretic Trans
fer cell）を用いて１時間１００ボルトでニトロセルロ
ース膜（BA-85, 0.45 μm, Schleicher & Schull）上に
トランスファーする。ニトロセルロース膜を、次いで、
４５分間４０℃で１５０ｍＭ ＮａＣｌ及び５％ ＢＳ
Ａを含む１０ｍＭ トリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．
４）（ウエスタン緩衝液、ＷＢと呼ぶ）に浸し、ヨウ素
１２５で標識した抗ＣＤ１６ ＢＷ２０９／２モノクロ
ーナル抗体と１８時間４℃でインキュベートする（ニト
ロセルロース１０ｃｍ2 につき１０Ｓ ｃｐｍ／ｍｌの
濃度）。この膜を、次いで、ＷＢ緩衝液中で２回連続し
て、１回は０．０５％ノニデットＰ４０（Fluka ）を含
むＷＢ緩衝液中で、２回はＷＢ緩衝液中で洗い、次い
で、オートラジオグラフィーのために、−７０℃で一
晩、Kodak X-OMAT Sフィルム（Eastman Kodak ）に露出
させる。
【００４７】トランスフェクトしてないＬ細胞の培養か
ら得た酸溶出物を、対照として、同様に処理する。図５
Ｂに与えた結果は、精製したＲＦｃγＩＩＩ（ライン
１）が見掛け分子量４８ｋＤａを有する糖蛋白質らしい
移動をするが、対照（ライン２）には何も検出されない
ことを示している。
ら得た酸溶出物を、対照として、同様に処理する。図５
Ｂに与えた結果は、精製したＲＦｃγＩＩＩ（ライン
１）が見掛け分子量４８ｋＤａを有する糖蛋白質らしい
移動をするが、対照（ライン２）には何も検出されない
ことを示している。
【００４８】実施例４：ＲＦｃγＩＩＩレセプターの免
疫抑制活性 上記の精製したＲＦｃγＩＩＩレセプターは、下記を阻
害する能力を測定することによりイン・ビトロで活性化
細胞において評価される免疫抑制活性を示す： − 刺激したリンパ球の増殖； − リンパ球による抗体産生； − ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞の細胞毒性。
疫抑制活性 上記の精製したＲＦｃγＩＩＩレセプターは、下記を阻
害する能力を測定することによりイン・ビトロで活性化
細胞において評価される免疫抑制活性を示す： − 刺激したリンパ球の増殖； − リンパ球による抗体産生； − ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞の細胞毒性。
【００４９】Ａ − ヨウシュヤマゴボウマイトジェン
（ＰＷＭ）により刺激したＰＢＭＣの増殖の阻害 健康なドナーの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコ
ール−イソパク（Ficoll-Isopaque ）密度勾配を用いる
分離により調製する。解凍したＰＢＭＣを９６ウェルの
プレート（Falcon 3072 ）中で、３７℃で７％ＣＯ2 の
湿った空気中で培養する。ＰＢＭＣを、１０％ ウシ胎
児血清（ＦＣＳ）（Flow Laboratories）、１００ＩＵ
／ｍｌ ペニシリン、１００μｇ ｍＭ／ｍｌ ストレ
プトマイシン、１％ Ｌ−グルタミン、１％ 非必須ア
ミノ酸（Gibco ）及び０．０５Ｍ／ｌ ２−メルカプト
エタノール（Gibco ）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地
（Gibco ）中で２×１０6 細胞／ｍｌに調節する。
（ＰＷＭ）により刺激したＰＢＭＣの増殖の阻害 健康なドナーの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコ
ール−イソパク（Ficoll-Isopaque ）密度勾配を用いる
分離により調製する。解凍したＰＢＭＣを９６ウェルの
プレート（Falcon 3072 ）中で、３７℃で７％ＣＯ2 の
湿った空気中で培養する。ＰＢＭＣを、１０％ ウシ胎
児血清（ＦＣＳ）（Flow Laboratories）、１００ＩＵ
／ｍｌ ペニシリン、１００μｇ ｍＭ／ｍｌ ストレ
プトマイシン、１％ Ｌ−グルタミン、１％ 非必須ア
ミノ酸（Gibco ）及び０．０５Ｍ／ｌ ２−メルカプト
エタノール（Gibco ）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地
（Gibco ）中で２×１０6 細胞／ｍｌに調節する。
【００５０】２×１０5 細胞を９６ウェルプレート中に
分配し、ＰＷＭ（IBF ）を濃度０．１μｇ／ｍｌで含む
（刺激した対照）か又は含まない（刺激しない対照）最
終容積２００μｌの培地にて及び種々の投与量の実施例
２で精製したＲＦｃγＩＩＩの存在下で又はＰＢＳ緩衝
液（対照）の存在下で６日間培養する。各培養の３コピ
ーを作成する。ＰＢＭＣの増殖を培養６日目に、１μＣ
ｉのトリチウム化チミジン（Amersham）の取り込みによ
って測定する。７％ＣＯ2 の存在下での３７℃６時間の
インキュベーションの後に、取り込まれた放射能の量を
ベータカウンター（Pharmacia ）で測定する。
分配し、ＰＷＭ（IBF ）を濃度０．１μｇ／ｍｌで含む
（刺激した対照）か又は含まない（刺激しない対照）最
終容積２００μｌの培地にて及び種々の投与量の実施例
２で精製したＲＦｃγＩＩＩの存在下で又はＰＢＳ緩衝
液（対照）の存在下で６日間培養する。各培養の３コピ
ーを作成する。ＰＢＭＣの増殖を培養６日目に、１μＣ
ｉのトリチウム化チミジン（Amersham）の取り込みによ
って測定する。７％ＣＯ2 の存在下での３７℃６時間の
インキュベーションの後に、取り込まれた放射能の量を
ベータカウンター（Pharmacia ）で測定する。
【００５１】増殖の阻害パーセンテージを、刺激した対
照に対比して計算する。２つの別々の実験で得られた結
果を下記の表に与える：
照に対比して計算する。２つの別々の実験で得られた結
果を下記の表に与える：
【表１】 表１ ＰＷＭ ＲＦｃγＩＩＩの投与量 チミジンの取り込み 阻害％ μｇ／ｍｌ ｃｐｍ 第１実験 − − １５３ ／ ＋ − ３８３９３ ／ ＋ ０．０１２ ３７６００ ０ ＋ １．５ ２２５５８ ４１ ＋ ６．２ ４３７６ ８９ 第２実験 − − ５４２ ／ ＋ − ４０７９８ ／ ＋ ０．０１２ ４３４１０ ０ ＋ １．５ ３２２０７ ２１ ＋ ６．２ ６２ １００ ＲＦｃγＩＩＩの投与量６．２μｇ／ｍｌにて、ＰＷＭ
で刺激したＰＢＭＣの増殖活性が完全に阻害される。
で刺激したＰＢＭＣの増殖活性が完全に阻害される。
【００５２】Ｂ − ＰＷＭで刺激したＰＢＭＣによる
抗体産生の阻害 細胞培養を、前述のようにして、３コピー作成した。Ｉ
ｇＧ及びＩｇＭの産生を、６日目に上清において、Ｉｇ
Ｇ又はＩｇＭに特異的なＥＬＩＳＡ試験を用いて、E. T
hibaut等、 J. Immunol. Meth., 104, 15, 1987に記載さ
れた方法によって測定する。
抗体産生の阻害 細胞培養を、前述のようにして、３コピー作成した。Ｉ
ｇＧ及びＩｇＭの産生を、６日目に上清において、Ｉｇ
Ｇ又はＩｇＭに特異的なＥＬＩＳＡ試験を用いて、E. T
hibaut等、 J. Immunol. Meth., 104, 15, 1987に記載さ
れた方法によって測定する。
【００５３】抗体産生の阻害パーセンテージを、刺激し
た対照に対比して計算する。２つの実験で得られた結果
を下記の表に与える：
た対照に対比して計算する。２つの実験で得られた結果
を下記の表に与える：
【表２】 表２ ＰＷＭ ＲＦｃγＩＩＩ ＩｇＭ 阻害％ ＩｇＧ 阻害％ の投与量 ｎｇ／ｍｌ ｎｇ／ｍｌ μｇ／ｍｌ 第１実験 − − １００ ／ １８ ／ ＋ − ５８２ ／ １９２ ／ ＋ ０．０１２ ４９２ １５ １００ ５９ ＋ １．５ ６４ ８９ １０ ９５ ＋ ６．２ ０ １００ １２ ９５ 第２実験 − − １７０ ／ ２０ ／ ＋ − ２８７ ／ １５６ ／ ＋ ０．０１２ １９０ ３４ ７８ ５０ ＋ １．５ ０ １００ ０ １００ ＋ ６．２ ０ １００ ０ １００ ＲＦｃγＩＩＩの投与量１．５μｇ／ｍｌにて、ＰＷＭ
で刺激したＰＢＭＣによるＩｇＧ又はＩｇＭの産生は完
全に阻害される。
で刺激したＰＢＭＣによるＩｇＧ又はＩｇＭの産生は完
全に阻害される。
【００５４】Ｃ − ＮＫ型細胞毒性の阻害 この研究を、インキュベートされたヒトの循環単核細胞
について又はＩＬ２の非存在下で行ない、その細胞毒性
効果を、ＮＫ細胞に感受性の赤白血病細胞系統であるＫ
５６２腫瘍標的細胞に対して、Ｃｒ５１の放出を４時間
測定することによって測定する。
について又はＩＬ２の非存在下で行ない、その細胞毒性
効果を、ＮＫ細胞に感受性の赤白血病細胞系統であるＫ
５６２腫瘍標的細胞に対して、Ｃｒ５１の放出を４時間
測定することによって測定する。
【００５５】健康なドナーの末梢血単核細胞（ＰＢＬ）
を、フィコール−イソパク勾配を用いて調製し、洗い且
つ１０％ ＦＣＳ、１％ Ｌ−グルタミン、１００ＩＵ
／ｍｌ ペニシリン及び１００μｇ／ｍｌ ストレプト
マイシンを補完したＲＰＭＩ１６４０培地（Gibco ）
（１０％ ＦＣＳ ＲＰＭＩと呼ぶ）中の１０×１０6
細胞／ｍｌに調節する。
を、フィコール−イソパク勾配を用いて調製し、洗い且
つ１０％ ＦＣＳ、１％ Ｌ−グルタミン、１００ＩＵ
／ｍｌ ペニシリン及び１００μｇ／ｍｌ ストレプト
マイシンを補完したＲＰＭＩ１６４０培地（Gibco ）
（１０％ ＦＣＳ ＲＰＭＩと呼ぶ）中の１０×１０6
細胞／ｍｌに調節する。
【００５６】ＬＡＫ細胞を、ＰＢＬを７％ＣＯ2 を含む
湿った空気の下で１０００μ／ｍｌのＩＬ２の存在下で
３７℃で３日間培養することにより得る。
湿った空気の下で１０００μ／ｍｌのＩＬ２の存在下で
３７℃で３日間培養することにより得る。
【００５７】ＰＢＬ又はＬＡＫエフェクター細胞を１０
×１０6 細胞／ｍｌの濃度で、種々の投与量の実施例２
で精製したＲＦｃγＩＩＩレセプターの存在下で、１０
％ＦＣＳ ＲＰＭＩ培地中で３７℃で２時間インキュベ
ートする。次いで、これらの細胞を洗浄し及び５×１０
6 細胞／ｍｌで同培地に再懸濁する。
×１０6 細胞／ｍｌの濃度で、種々の投与量の実施例２
で精製したＲＦｃγＩＩＩレセプターの存在下で、１０
％ＦＣＳ ＲＰＭＩ培地中で３７℃で２時間インキュベ
ートする。次いで、これらの細胞を洗浄し及び５×１０
6 細胞／ｍｌで同培地に再懸濁する。
【００５８】１００μｌのＰＢＬ又はＬＡＫエフェクタ
ー細胞（５×１０6 〜７×１０4 細胞を含む）を１００
μｌの標的細胞（５×１０4 細胞）と、９６ウェルのＶ
型プレート中で、３７℃で４時間インキュベートする。
２０００ｒｐｍで５分間の遠心分離の後に、１００μｌ
の上清を取り出し、その放射能を測定する。
ー細胞（５×１０6 〜７×１０4 細胞を含む）を１００
μｌの標的細胞（５×１０4 細胞）と、９６ウェルのＶ
型プレート中で、３７℃で４時間インキュベートする。
２０００ｒｐｍで５分間の遠心分離の後に、１００μｌ
の上清を取り出し、その放射能を測定する。
【００５９】その結果を標的細胞の溶解のパーセンテー
ジとして表示する。図６Ａ及び６Ｂは、それぞれ、エフ
ェクター／標的の相対的濃度の関数としての、精製した
ＲＦｃγＩＩＩレセプターの種々の投与量におけるＬＡ
Ｋ細胞及びＰＢＬ細胞による溶解の阻害を示している。
ジとして表示する。図６Ａ及び６Ｂは、それぞれ、エフ
ェクター／標的の相対的濃度の関数としての、精製した
ＲＦｃγＩＩＩレセプターの種々の投与量におけるＬＡ
Ｋ細胞及びＰＢＬ細胞による溶解の阻害を示している。
【００６０】配列表 (1) 一般的情報： (i) 出願人： (A) 名称：ルセル−ユクラフ (B) 通り：ブルバール・デ・ザンバリッド３５ (C) 町：パリ (E) 国籍：フランス (F) 郵便番号：７５００７ (H) テレファックス：（３３）１．４９．９１．４６．
１０ (A) 名称：ゼネラル・ホスピタル・コーポレーション (B) 通り：フルーツ・ストリート (C) 町：ボストン (D) 州：マサチューセッツ (E) 国籍：米国 (F) 郵便番号：０２１１４ (ii)発明の名称：新規な可溶性ヒトＦｃ−ガンマーＩＩ
Ｉレセプター、それらの製造方法、それらを含む製薬組
成物、それらの医薬としての利用及びそれらの診断用途 (iii) 配列の数：６ (iv)コンピューター読み取り可能形式： (A) 媒体型：フロッピーディスク (B) コンピューター：ＩＢＭ ＰＣ 互換機 (C) オペレーティングシステム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ−
ＤＯＳ (D) ソフトウェア：PatentIn Release #1.0, Version #
1.25 (EPO)and WORDPERFECT 5.1 for correction infor
mations 2 (ii)
１０ (A) 名称：ゼネラル・ホスピタル・コーポレーション (B) 通り：フルーツ・ストリート (C) 町：ボストン (D) 州：マサチューセッツ (E) 国籍：米国 (F) 郵便番号：０２１１４ (ii)発明の名称：新規な可溶性ヒトＦｃ−ガンマーＩＩ
Ｉレセプター、それらの製造方法、それらを含む製薬組
成物、それらの医薬としての利用及びそれらの診断用途 (iii) 配列の数：６ (iv)コンピューター読み取り可能形式： (A) 媒体型：フロッピーディスク (B) コンピューター：ＩＢＭ ＰＣ 互換機 (C) オペレーティングシステム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ−
ＤＯＳ (D) ソフトウェア：PatentIn Release #1.0, Version #
1.25 (EPO)and WORDPERFECT 5.1 for correction infor
mations 2 (ii)
【００６１】(2) 配列番号１の情報： (i) 配列の特性： (A) 長さ：１９４アミノ酸 (B) 型：アミノ酸 (C) 鎖の数：１本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (ii)分子の種類：蛋白質 (vi)起源： (A) 生物名：ヒト (xi)配列（配列番号１）：
【化７】
【００６２】(2) 配列番号２の情報： (i) 配列の特性： (A) 長さ：６７２塩基対 (B) 型：核酸 (C) 鎖の数：１本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (ii)分子の種類：ｃＤＮＡ (vi)起源： (A) 生物名：ヒト (ix)特徴: (A) NAME/KEY：コード配列（ＣＤＳ） (B) 存在位置：３４．．６６９ (ix)特徴: (A) NAME/KEY：成熟ペプチド（mat peptide ） (B) 存在位置：８８．．６６９ (ix)特徴: (A) NAME/KEY：シグナルペプチド（sig peptide ） (B) 存在位置：３４．．８７ (x) 公開情報： (A) 著者：シモンズ、デイヴィッド シード、ブライアン (B) 表題：ナチュラルキラー細胞のＦｃガンマーレセプ
ターはリン脂質結合膜蛋白質である (C) 誌名：Nature (D) 巻：３３３ (F) 頁：５６８−５７０ (G) 日付：１９８８年６月９日 (K) 配列番号２の関係残基：１−６５０ (xi)配列（配列番号２）：
ターはリン脂質結合膜蛋白質である (C) 誌名：Nature (D) 巻：３３３ (F) 頁：５６８−５７０ (G) 日付：１９８８年６月９日 (K) 配列番号２の関係残基：１−６５０ (xi)配列（配列番号２）：
【化８】
【００６３】(2) 配列番号３の情報： (i) 配列の特性： (A) 長さ：２１２アミノ酸 (B) 型：アミノ酸 (D) トポロジー：直鎖状 (ii)分子の種類：蛋白質 (xi)配列（配列番号３）：
【化９】
【００６４】(2) 配列番号４の情報： (i) 配列の特性： (A) 長さ：２１塩基対 (B) 型：核酸 (C) 鎖の数：１本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (ii)分子の種類：オリゴヌクレオチド (ix)特徴: (A) NAME/KEY：misc feature (B) 存在位置：１．．２１ (D) 他の情報：／注＝「終止リンカー」 (xi)配列（配列番号４）： GCGGATCCTA GACTAGTCTA G 21
【００６５】(2) 配列番号５の情報： (i) 配列の特性： (A) 長さ：１２塩基対 (B) 型：核酸 (C) 鎖の数：１本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (ii)分子の種類：オリゴヌクレオチド (ix)特徴: (A) NAME/KEY：misc feature (B) 存在位置：１．．１２ (D) 他の情報：／注＝「ＢａｍＨＩ部位を含むオリゴヌ
クレオチド」 (xi)配列（配列番号５）： CGCGGATCCG CG 12
クレオチド」 (xi)配列（配列番号５）： CGCGGATCCG CG 12
【００６６】(2) 配列番号６の情報： (i) 配列の特性： (A) 長さ：１４塩基対 (B) 型：核酸 (C) 鎖の数：１本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (ii)分子の種類：オリゴヌクレオチド (ix)特徴: (A) NAME/KEY：misc feature (B) 存在位置：１．．１４ (D) 他の情報：／注＝「ＳｐｅＩリンカー」 (xi)配列（配列番号６）： CTAGACTAGT CTAG 14
【図１】プラスミッドｐＫＣ３−ＲＦｃγＩＩＩを示す
図である。
図である。
【図２】Ｃ４〜Ｃ８と呼ばれる５つの抵抗性クローンを
用いて得られた結果を示す図である。
用いて得られた結果を示す図である。
【図３】出発ブロス（Ｄ）、溶出物（ＥＦ）及びアフィ
ニティーカラムからの酸溶出物（ＥＬ）について同時に
行なった免疫ブロッティングの結果を示す図である。
ニティーカラムからの酸溶出物（ＥＬ）について同時に
行なった免疫ブロッティングの結果を示す図である。
【図４】出発材料、各溶出物及び中和した対応する各酸
溶出物を、それぞれ、実施例２で示したように、放射性
標識した抗ＣＤ１６ＢＷ２０９／２モノクローナル抗体
を用いて、直接ブロッティングにより試験した結果を示
す図である。
溶出物を、それぞれ、実施例２で示したように、放射性
標識した抗ＣＤ１６ＢＷ２０９／２モノクローナル抗体
を用いて、直接ブロッティングにより試験した結果を示
す図である。
【図５】ＳＤＳ−ＰＡＧＥのオートラジオグラフィー及
びウエスタンブロットの結果を示す図である。
びウエスタンブロットの結果を示す図である。
【図６】エフェクター／標的の相対的濃度の関数として
の、精製したＲＦｃγＩＩＩレセプターの種々の投与量
におけるＬＡＫ細胞及びＰＢＬ細胞による溶解の阻害を
示すグラフである。
の、精製したＲＦｃγＩＩＩレセプターの種々の投与量
におけるＬＡＫ細胞及びＰＢＬ細胞による溶解の阻害を
示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 16/28 8318−4Ｈ Ｃ１２Ｎ 5/10 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 9282−4Ｂ 21/08 9161−4Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 33/574 Ｚ 33/577 Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） 7729−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ 9281−4Ｂ 15/00 ＺＮＡ Ａ (Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 アレジャンドロ・アルッフォ アメリカ合衆国ワシントン州エドモンズ、 スプルース・ストリート1012 (72)発明者 ウルフ・イー・フリドマン フランス国パリ、リュ・ベルトレ、27 (72)発明者 カトリーヌ・ソート フランス国パリ、リュ・ベルトレ、27 (72)発明者 ブライアン・シード アメリカ合衆国マサチューセッツ州ボスト ン、ジョイ・ストリート47エイ (72)発明者 クリストフ・テロー フランス国パリ、ブルバール・ド・ロピタ ル、117 (72)発明者 ジャンリュク・テロー フランス国パリ、リュ・トゥールヌフォー ル、24ビス
Claims (18)
- 【請求項１】 下記の配列番号１のアミノ酸配列を有す
る可溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩレセプター： 【化１】 （式中、Ｎ末端において、適宜、メチオニンが先行し、
この配列のアナログにおいても同様とする）。 - 【請求項２】 下記の配列番号１のアミノ酸配列をコー
ドするＤＮＡの宿主細胞内での発現により得られる可溶
性ヒトＲＦｃγＩＩＩレセプター： 【化２】 （式中、Ｎ末端において、適宜、メチオニンが先行し、
この配列のアナログにおいても同様とする）。 - 【請求項３】 下記の配列番号１のアミノ酸配列をコー
ドするＤＮＡの真核宿主細胞内での発現により得られる
可溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩレセプター： 【化３】 。 - 【請求項４】 請求項１の可溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩレ
セプターをコードするＤＮＡ配列を含むＤＮＡ配列。 - 【請求項５】 請求項１の可溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩレ
セプターをコードするＤＮＡ配列。 - 【請求項６】 本質的に配列番号２のヌクレオチド配列
により構成される、請求項５に記載のＤＮＡ配列。 - 【請求項７】 請求項１の可溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩレ
セプターをコードするＤＮＡ配列を含む発現ベクター。 - 【請求項８】 請求項７のベクターによりトランスホー
ムした宿主。 - 【請求項９】 真核細胞である請求項８に記載の宿主。
- 【請求項１０】 請求項１の可溶性ヒトＲＦｃＩＩＩレ
セプターをコードするＤＮＡによってトランスホームし
た宿主細胞内での可溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩレセプター
の発現を含む方法。 - 【請求項１１】 宿主細胞が真核細胞である、請求項１
０に記載の方法。 - 【請求項１２】 請求項１の可溶性ヒトＲＦｃγＩＩＩ
レセプター又はその免疫源性断片に対するモノクローナ
ル抗体。 - 【請求項１３】 １種以上の請求項１２の抗体を含む診
断用組成物。 - 【請求項１４】 医薬としての、請求項１に記載の可溶
性ヒトＲＦｃγＩＩＩレセプター。 - 【請求項１５】 請求項１４の医薬を活性成分として含
む製薬組成物。 - 【請求項１６】 細胞増殖を調節するための、請求項１
５に記載の製薬組成物。 - 【請求項１７】 ＮＫ型細胞毒性を調節するための、請
求項１５に記載の製薬組成物。 - 【請求項１８】 抗体産生を調節するための、請求項１
５に記載の製薬組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR93-02675 | 1993-03-09 | ||
| FR9302675A FR2702481B1 (fr) | 1993-03-09 | 1993-03-09 | Nouveaux récepteurs Fc-gamma III humains solubles, leur procédé de préparation, les compositions pharmaceutiques les contenant, leur application comme médicaments et leur application diagnostique. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07149800A true JPH07149800A (ja) | 1995-06-13 |
Family
ID=9444767
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6064415A Withdrawn JPH07149800A (ja) | 1993-03-09 | 1994-03-09 | 新規な可溶性ヒトＦｃ−ガンマーＩＩＩレセプター、それらの製造方法、それらを含む製薬組成物、それらの医薬としての利用及びそれらの診断用途 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0614978A1 (ja) |
| JP (1) | JPH07149800A (ja) |
| CA (1) | CA2118558A1 (ja) |
| FR (1) | FR2702481B1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002531086A (ja) * | 1998-12-03 | 2002-09-24 | マックス−プランク−ゲゼルシャフト ツール フォーデルング デル ヴィッセンシャフテン エー．ヴェー． | 組換え可溶性Ｆｃ受容体 |
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|---|---|---|---|---|
| US6030773A (en) * | 1992-07-08 | 2000-02-29 | Agnello; Vincent | Chemiluminescent assay for DSDNA antibodies |
| US5858981A (en) | 1993-09-30 | 1999-01-12 | University Of Pennsylvania | Method of inhibiting phagocytosis |
| IL111105A (en) * | 1993-09-30 | 2009-05-04 | Univ Pennsylvania | Use of a molecule capable of inhibiting the expression of syk kinase to prepare a pharmaceutical composition for inhibiting phagocytosis |
| US6444789B1 (en) * | 1995-05-03 | 2002-09-03 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | CD16-II variants |
| FR2739560B1 (fr) * | 1995-10-09 | 1997-11-21 | Roussel Uclaf | Utilisation d'un polypeptide ayant l'activite du cd16 humain soluble dans le traitement de l'infection par le virus vih |
| PT951481E (pt) * | 1997-06-05 | 2005-04-29 | Mpb Meltec Patent Und Beteilig | Utilizacao de substancias com accao imunomoduladora para o tratamento da esclerose lateral amiotrofica |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2611913B1 (fr) * | 1987-02-24 | 1994-04-15 | Khayat David | Procede de dosage des recepteurs fc gamma solubles seriques, coffret de dosage correspondant et applications |
| WO1989011490A1 (en) * | 1988-05-27 | 1989-11-30 | Schering Biotech Corporation | HUMAN Fcgamma RECEPTOR III |
| FR2655269B1 (fr) * | 1989-12-01 | 1994-02-11 | Curie Universite Pierre Marie | Proteines empechant l'interaction entre un fragment fc d'une immunoglobuline et son recepteur et utilisation en therapeutique, notamment dans le traitement des affections liees aux virus hiv. |
-
1993
- 1993-03-09 FR FR9302675A patent/FR2702481B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-03-08 CA CA002118558A patent/CA2118558A1/fr not_active Abandoned
- 1994-03-08 EP EP94400492A patent/EP0614978A1/fr not_active Withdrawn
- 1994-03-09 JP JP6064415A patent/JPH07149800A/ja not_active Withdrawn
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| JP4914535B2 (ja) * | 1998-12-03 | 2012-04-11 | マックス−プランク−ゲゼルシャフト ツール フォーデルング デル ヴィッセンシャフテン エー．ヴェー． | 組換え可溶性Ｆｃ受容体 |
| JP2012188456A (ja) * | 1998-12-03 | 2012-10-04 | Max-Planck-Ges Zur Foerderung Der Wissenschaften Ev | 組換え可溶性Ｆｃ受容体 |
| US8666680B2 (en) | 1998-12-03 | 2014-03-04 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Recombinant soluble FC receptors |
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